一種借助輻照輔助酶解技術(shù)提高玉米肽抗氧化活性的方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于玉米蛋白綜合利用開發(fā)抗氧化活性肽的【技術(shù)領(lǐng)域】，公開了一種借助輻照輔助酶解技術(shù)提高玉米肽抗氧化活性的方法，重點(diǎn)解決了以玉米蛋白粉為原料，以水解度作為酶解效果的衡量指標(biāo)，以DPPH清除率為抗氧化活性的衡量指標(biāo)，借助單因素和響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方法，設(shè)計(jì)了一種借助輻照輔助酶解技術(shù)提高玉米肽抗氧化活性的方法，能夠?qū)崿F(xiàn)在酶解的3h內(nèi)，水解度可由水解度由42.13%提高至48.23%以上，玉米抗氧化肽粉的DPPH清除率由70.16%提高至78.65%以上。本發(fā)明旨為促進(jìn)玉米蛋白粉的綜合利用開展抗氧化活性肽系列化產(chǎn)品與其產(chǎn)業(yè)化示范研究提供一定的前期技術(shù)基礎(chǔ)。
【專利說明】一種借助輻照輔助酶解技術(shù)提高玉米肽抗氧化活性的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于玉米蛋白綜合利用開發(fā)抗氧化活性肽的【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種借助輻照輔助酶解技術(shù)提高玉米肽抗氧化活性的方法，能夠?qū)崿F(xiàn)在酶解的3h內(nèi)，水解度可由水解度由42.13%提高至48.23%以上，玉米抗氧化肽粉的DPPH清除率由70.16%提高至78.65%以上。
【背景技術(shù)】[0002]目前，玉米蛋白活性肽是當(dāng)今食源性活性肽研究的熱點(diǎn)問題之一。玉米蛋白粉為玉米精深加工主要副產(chǎn)物，其組成復(fù)雜、口感粗糙、水溶性差、具有特殊的臭味和色澤，因而目前常被作為玉米蛋白飼料或者當(dāng)廢棄物排掉，在食品工業(yè)中的應(yīng)用較少。但是作為優(yōu)質(zhì)蛋白資源，如何能夠最大限度的實(shí)現(xiàn)酶解獲取活性顯著的目標(biāo)肽是國內(nèi)外諸多研究學(xué)者的關(guān)注焦點(diǎn)問題。因而，本專利擬解決的一種借助輻照輔助酶解技術(shù)，實(shí)現(xiàn)了提高玉米蛋白水解度的同時(shí)，也提高了酶解物玉米抗氧化肽粉的DPPH清除率，為后期玉米蛋白抗氧化活性肽的產(chǎn)品研發(fā)與其產(chǎn)業(yè)轉(zhuǎn)化提供了一種技術(shù)途徑。
[0003]快中子電子束輻照技術(shù)本被廣泛應(yīng)用于食品的殺菌保藏，而應(yīng)用于提高蛋白粉的水解度以及提高活性肽的抗氧化性實(shí)屬國內(nèi)首例。經(jīng)過快中子電子束照射后，玉米蛋白粉內(nèi)部結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，從而使得蛋白質(zhì)之間的鏈接得以更容易的被切斷，從而提高玉米蛋白粉的水解度，釋放出更多的活性肽分子，進(jìn)一步提高肽液的抗氧化性。玉米蛋白粉的原料特性符合此項(xiàng)技術(shù)對原料的基本要求，所以快中子電子束處理玉米蛋白粉是可行的。本專利是在大量試驗(yàn)研究的基礎(chǔ)上，優(yōu)化獲得利用快中子電子書輻照技術(shù)提高玉米蛋白粉酶解效果以及提高玉米肽抗氧化活性的最佳工藝參數(shù)，從而獲得科學(xué)度高、可行性強(qiáng)的工藝流程。因而，本發(fā)明是借助快中子電子束輻照處理玉米蛋白粉輔助酶解以提高抗氧化性實(shí)屬首例。
[0004]本發(fā)明選用水解度作為玉米肽的酶解效果的衡量指標(biāo)，選擇DPPH清除率作為玉米肽抗氧化活性的衡量指標(biāo)，測試方法方便實(shí)用，結(jié)果可信度較高。目前pH-stat法是使用最為廣泛的蛋白質(zhì)水解度測定方法，其計(jì)算公式如下所示:
[0005]
【權(quán)利要求】
1.一種借助輻照輔助酶解技術(shù)提高玉米肽抗氧化活性的方法，其特征在于，以蛋白質(zhì)含量45%~60%、顆粒細(xì)度150~200目的玉米蛋白粉為原料，經(jīng)快中子電子束輻照、堿性蛋白酶可控酶解、滅酶和離心、超濾、噴霧干燥過程，使被輻照處理后的玉米蛋白粉在適宜的蛋白酶作用下酶解3h，水解度由42.13%提高至48.23%以上，玉米抗氧化肽粉的DPPH清除率由70.16%提高至78.65%以上； O所述的快中子電子束輻照過程，是以蛋白質(zhì)含量45%~60%、顆粒細(xì)度150~200目的玉米蛋白粉為原料，按照每袋100~500g的重量分裝保存于自封袋中，置于速度為2~20m/h的輸送帶上，輸送進(jìn)入快中子電子束輻照室循環(huán)照射，使物料吸收的輻照劑量為5K~140K，獲得玉米蛋白輻照粉； 2)所述的堿性蛋白酶可控酶解過程，是以蛋白質(zhì)含量45%~60%的玉米蛋白輻照粉為底物，按照重量比用20~50°C水配制底物濃度為2%~7%的蛋白溶液體系；再用磁力攪拌器處理蛋白溶液體系，攪拌溫度控制在50~65°C,攪拌時(shí)間為5~IOmin ;而后再置于85~95°C的水浴鍋中加熱變性10~35min，冷卻后至胃蛋白酶的適宜酶解溫度為45~65°C，調(diào)節(jié)pH值為7.5~10.5，按[E]/[S]為6%~12%加入胃蛋白酶，用IM的NaOH控制肽液的pH值變化在±0.04內(nèi)，控制酶解時(shí)間為3h，收集酶解液置于85~95°C的水浴鍋中加熱滅酶5~15min后計(jì)算酶解過程的水解度為48.23%以上； 3)所述的滅酶和離心過程，是將酶解液進(jìn)行離心處理，離心溫度為2~10°C、轉(zhuǎn)速為6000~12000 X g，離心時(shí)間為5~30min，收集上清液并將pH值調(diào)節(jié)至7后4°C冷藏備用； 4)所述的超濾過程，是將4°C保藏的上清液升溫至10~25°C后進(jìn)行超濾處理，采用清潔的超濾膜的分子量截留值為3k~IOkDa,超濾流速為6~15mL/min、超濾壓力為0.1~0.2MPa，收集超濾膜下液，冷藏備用； 5)所述的噴霧干燥過程，是調(diào)節(jié)進(jìn)風(fēng)溫度為150~200°C，超濾膜下液的進(jìn)樣速度為30~60mL/min,離心霧化器轉(zhuǎn)速為15000~25000r/min,獲得玉米抗氧化肽粉，測定其DPPH清除率為78.65%以上。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種借助輻照輔助酶解技術(shù)提高玉米肽抗氧化活性的方法，其特征在于，堿性蛋白酶可控酶解過程中所需用水選擇純凈水、去離子水、滲透水和蒸餾水中的任意一種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1 所述的一種借助輻照輔助酶解技術(shù)提高玉米肽抗氧化活性的方法，其特征在于，所述的分子量截留值為3k~IOk Da超濾膜，使用之前需要經(jīng)35~50°C熱水沖洗I~2次，再經(jīng)35~50°C的0.05~0.lmol/L的NaOH溶液沖洗I~2次，最后再用10~25°C的水進(jìn)行沖洗I~2次。
【文檔編號】C07K1/34GK103898185SQ201410155319
【公開日】2014年7月2日 申請日期:2014年4月17日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月17日
【發(fā)明者】張鳴鏑, 邢杰, 林松毅, 王可, 劉靜波 申請人:吉林大學(xué)