雌二醇半抗原、抗原、抗體及其制備方法與應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明一種雌二醇半抗原，雌二醇半抗原具有如下結(jié)構(gòu)式：以及抗原、抗體及其制備方法和應(yīng)用，現(xiàn)有的雌二醇檢測(cè)技術(shù)以儀器法居多，而儀器法操作繁復(fù)，前處理復(fù)雜，成本高；本發(fā)明提供了雌二醇半抗原、抗原及其制備方法與應(yīng)用；通過延長(zhǎng)雌二醇特征基團(tuán)的手臂制備半抗原，進(jìn)而制備抗原，免疫動(dòng)物獲得特異性抗體；該抗體可以特異性識(shí)別雌二醇；延長(zhǎng)半抗原的特征基團(tuán)手臂長(zhǎng)度，增大了與載體蛋白的距離，減小空間位阻，有利于刺激動(dòng)物免疫應(yīng)答產(chǎn)生特異性更強(qiáng)、靈敏度更高的抗體；本發(fā)明提供的雌二醇特異抗體對(duì)雌二醇的抑制率高達(dá)91％。
【專利說明】雌二醇半抗原、抗原、抗體及其制備方法與應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及半抗原、抗原和抗體的制備方法，尤其涉及雌二醇半抗原、抗原、抗體 及其制備方法與應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 雌二醇（17i3-Estradi〇l)是天然雌激素的重要成分，因其可以明顯促進(jìn)動(dòng)物生 長(zhǎng)及提高畜禽瘦肉比，而被應(yīng)用于畜禽業(yè)生產(chǎn)中，雌二醇在動(dòng)物體內(nèi)的半衰期比較長(zhǎng)，可以 在畜禽肝臟肌肉和腎臟中蓄積，通過食物鏈進(jìn)入人體，對(duì)人體正常的內(nèi)分泌系統(tǒng)產(chǎn)生干擾， 引起兒童性早熟及男性兒童乳腺發(fā)育呈女性化等問題。許多國(guó)家已經(jīng)規(guī)定了雌二醇及其衍 生物的最高殘留限量，例如：美國(guó)農(nóng)業(yè)部食品安全檢驗(yàn)署1991年公布，在家禽的可食用部 分雌二醇棕櫚酸的最高殘留限量為0.002mg/kg;韓國(guó)獸藥殘留限量規(guī)定牛肉中苯甲酸雌 二醇最高限量是〇. 〇〇〇12mg/kg ;2010年我國(guó)農(nóng)業(yè)部第235號(hào)公告規(guī)定，雌二醇允許作治療 用，但不得在動(dòng)物性食品中檢出。因此，食品中雌二醇檢測(cè)不容忽視。
[0003] 目前國(guó)內(nèi)外檢測(cè)雌二醇的常用方法主要集中在儀器方法如高效液相色譜-質(zhì)譜 聯(lián)用等方法，這些方法樣品預(yù)處理要求高、步驟復(fù)雜、操作需專業(yè)人員、檢測(cè)費(fèi)用高、所依 賴儀器昂貴復(fù)雜、費(fèi)時(shí)費(fèi)力，很難適應(yīng)多種不同場(chǎng)合的快速檢測(cè)需要，在應(yīng)用上不能廣泛推 廣。
[0004] 基于抗原-抗體特異性結(jié)合的免疫分析法具有樣品前處理簡(jiǎn)便、操作簡(jiǎn)單、快速、 靈敏、高通量等特點(diǎn)，被譽(yù)為是21世紀(jì)最具競(jìng)爭(zhēng)和挑戰(zhàn)的快速檢測(cè)技術(shù)，在食品安全領(lǐng)域 具有廣闊的應(yīng)用前景。但是，對(duì)于免疫分析法而言，抗體是決定整個(gè)方法性能的重要基礎(chǔ)， 而抗體的效果很大程度上取決于引起相應(yīng)動(dòng)物發(fā)生免疫反應(yīng)的抗原結(jié)構(gòu)。由于雌二醇屬于 淄體化合物，極可能存在載體決定簇競(jìng)爭(zhēng)性干擾、免疫耐受性及內(nèi)分泌系統(tǒng)的干擾，制備其 抗體常常較困難。
[0005] 有鑒于上述現(xiàn)有的雌二醇半抗原、抗原、抗體及其制備方法存在的缺陷，本發(fā)明人 基于從事此類產(chǎn)品設(shè)計(jì)制造多年豐富的實(shí)務(wù)經(jīng)驗(yàn)及專業(yè)知識(shí)，并配合學(xué)理的運(yùn)用，積極加 以研究創(chuàng)新，以期創(chuàng)設(shè)一種新型雌二醇半抗原、抗原、抗體及其制備方法與應(yīng)用，使其更具 有實(shí)用性。經(jīng)過不斷的研究、設(shè)計(jì)，并經(jīng)反復(fù)試作樣品及改進(jìn)后，終于創(chuàng)設(shè)出確具實(shí)用價(jià)值 的本發(fā)明。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的主要目的在于，克服現(xiàn)有的雌二醇半抗原、抗原及抗體制備方法存在的 缺陷，而提供一種新型雌二醇半抗原、抗原、抗體及其制備方法，提高抗體效價(jià)和靈敏度，并 且可重復(fù)性高，從而更加適于實(shí)用，且具有產(chǎn)業(yè)上的利用價(jià)值。
[0007] 本發(fā)明的目的及解決其技術(shù)問題是采用以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的。依據(jù)本發(fā)明提出 的一種雌二醇半抗原，所述雌二醇半抗原具有如下結(jié)構(gòu)式：
[0008]

【權(quán)利要求】
1. 一種雌二醇半抗原，其特征在于，所述雌二醇半抗原具有如下結(jié)構(gòu)式：
2. -種雌二醇抗原，其特征在于，所述雌二醇抗原具有如下結(jié)構(gòu)式：
式中：R為載體蛋白。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的雌二醇抗原，其特征在于，所述載體蛋白為匙孔血藍(lán)蛋白、牛 血清蛋白或卵清蛋白。
4. 權(quán)利要求1所述的雌二醇半抗原的制備方法，其特征在于，所述制備方法操作步驟 為：將雌二醇與戊二酸酐在催化劑的作用下反應(yīng)得到產(chǎn)物，通過乙醚萃取純化上述產(chǎn)物，得 到所述雌二醇半抗原。
5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的雌二醇抗原的制備方法，其特征在于：所述制備方法包括如 下步驟： 1) 制備雌二醇半抗原的N，N-二甲基甲酰胺溶液； 2) 在上述溶液中加入N，N-二環(huán)己基碳酰亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺； 3) 攪拌，靜置； 4) 離心后得上清液； 5) 將所述上清液加入載體蛋白的磷酸鹽緩沖液中； 6) 反應(yīng)后離心，取上清夜，用生理鹽水透析，得到目標(biāo)產(chǎn)物。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的雌二醇抗原的制備方法，其特征在于：所述載體蛋白為匙孔 血藍(lán)蛋白、牛血清蛋白或卵清蛋白。
7. -種雌二醇抗體，其特征在于，所述抗體通過將所述抗原與免疫佐劑乳化后刺激動(dòng) 物機(jī)體免疫應(yīng)答獲得。
8. 將權(quán)利要求1所述的雌二醇半抗原用于檢測(cè)食品中的雌二醇。
9. 將權(quán)利要求2或3所述的雌二醇抗原用于檢測(cè)食品中的雌二醇。
10. 將權(quán)利要求7所述的雌二醇抗體用于檢測(cè)食品中的雌二醇。
【文檔編號(hào)】C07K14/77GK104059119SQ201410253502
【公開日】2014年9月24日 申請(qǐng)日期:2014年6月10日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月10日
【發(fā)明者】高海崗, 陸建榮, 顧菲菲, 張?jiān)路? 馬光焰, 施妮莎, 許國(guó)平 申請(qǐng)人:高海崗