一種山油柑堿的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種山油柑堿的制備方法，其制備方法是：（1）取山油柑根粗粉，70-95%的乙醇溶液連續(xù)逆流超聲提取，得到提取液；（2）將提取液濃縮，再經(jīng)氧化鋁柱層析；（3）制備型液相色譜分離；（4）氯仿-丙酮重結(jié)晶，得到高純度的山油柑堿結(jié)晶產(chǎn)品。本發(fā)明方法簡(jiǎn)單、得率高，可得到高純度產(chǎn)品，具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和學(xué)術(shù)價(jià)值。
【專利說(shuō)明】一種山油柑堿的制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于天然植物提取領(lǐng)域，具體涉及一種山油柑堿的制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002]山油柑堿(Acronyci ne),分子式C2tlH19NO3,分子量321.36,難溶于水,可溶于乙醇、氯仿等有機(jī)溶劑。
[0003]山油柑堿是從蕓香科植物山油柑Acronychia pedunculata (L.)Miq.根中提取分離的一種生物堿類化合物。實(shí)驗(yàn)研究表明，山油柑堿具有能抑制細(xì)胞的有絲分裂和降低吉田腹水瘤細(xì)胞分裂指數(shù)。能影響癌細(xì)胞核酸的生成，顯著降低L615小鼠脾中RNA的含量，而對(duì)正常動(dòng)物組織中RNA和DNA的含量無(wú)顯著影響?？箘?dòng)物癌譜較廣，在17種瘤譜中，對(duì)其中12種瘤譜有顯著抑制作用，對(duì)目前臨床使用的化療藥物不敏感的髓性白血病C-1498，漿細(xì)胞骨髓瘤X_5563(接近人體腫瘤)和Shingi癌-115均有抑制作用。
[0004]目前，國(guó)內(nèi)尚未見山油柑堿的提取純化方法方面的報(bào)道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種山油柑堿的制備方法，該方法操作簡(jiǎn)單、得率高、安全環(huán)保，可快速大量分離高純度山油柑堿。
[0006]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下:
(1)提取:取山油柑根粉碎成粗粉，用5-10倍量70-95%的乙醇溶液，25-55°C下進(jìn)行連續(xù)逆流超聲提取20-100min，得到乙醇提取液；
(2)氧化鋁柱層析:上述提取液濃縮至浸膏，加氧化鋁拌勻、干燥后裝柱，用氯仿-丙酮混合溶液洗脫，薄層檢測(cè)，收集山油柑堿流分，濃縮；
(3)制備型液相色譜分離:上述濃縮液采用制備型液相色譜分離，紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)，收集山油柑堿組分，將洗脫液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，得山油柑堿粗晶；
(4)重結(jié)晶:將山油柑堿粗晶用氯仿-丙酮重結(jié)晶，冷凍干燥得到高純度山油柑堿晶體。
[0007]步驟(1)所述超聲頻率為50-80KHZ。
[0008]步驟(2)所述氧化鋁為80-120目，氯仿-丙酮體積比為1:1，用量為柱體積的4_7倍。
[0009]步驟(3)所述制備型液相色譜的流動(dòng)相為乙腈-0.15%乙二胺水溶液，體積比為32:68，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為228nm。
[0010]步驟(4)所述氯仿-丙酮的體積比為2-3:1。
[0011]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于:1)操作簡(jiǎn)單、耗時(shí)短，易于產(chǎn)業(yè)化放大；2)提取、柱層析、制備液相分離等步驟中的溶劑用量少，并可回收再利用；3)具有較高的經(jīng)濟(jì)效益和學(xué)術(shù)價(jià)值，本發(fā)明所得產(chǎn)品純度高，可為山油柑堿的進(jìn)一步開發(fā)提供藥理原料和實(shí)踐支持。

【具體實(shí)施方式】
[0012]下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步說(shuō)明:
實(shí)施例1:
取山油柑根1kg，粉碎成粗粉，從連續(xù)逆流超聲提取設(shè)備頭部進(jìn)料口進(jìn)料，從連續(xù)逆流超聲提取設(shè)備尾部溶劑加入口加入10倍95%乙醇溶液，55°C下進(jìn)行連續(xù)逆流超聲提取20min，超聲頻率為80KHz，得到提取液，提取液減壓回收試劑得浸膏，向浸膏中加氧化鋁(120目)拌勻、干燥后裝柱，用7倍柱體積的氯仿-丙酮(1:1)混合溶液洗脫，薄層檢測(cè)，收集山油柑堿流分，濃縮得濃縮液。將濃縮液加入甲醇至剛好溶解，溶解后的溶液經(jīng)0.45 μ m微濾膜過(guò)濾，得到樣品溶液取濾液進(jìn)樣，以乙腈-0.15%乙二胺水溶液為流動(dòng)相，體積比為32:68，色譜柱以C8鍵合相為填料，粒徑為10 μ m，柱長(zhǎng)為15cm、直徑為4cm，六通閥進(jìn)樣，進(jìn)樣體積為25ml,控制流速為50ml/min,紫外在線檢測(cè),檢測(cè)波長(zhǎng)為228nm,收集目標(biāo)成分,減壓回收試劑得山油柑堿粗晶，用氯仿-丙酮(2.5:1)重結(jié)晶，冷凍干燥得到高純度山油柑堿晶體，經(jīng)HPLC檢測(cè)，純度96.5%。
[0013]實(shí)施例2:
取山油柑根1kg，粉碎成粗粉，從連續(xù)逆流超聲提取設(shè)備頭部進(jìn)料口進(jìn)料，從連續(xù)逆流超聲提取設(shè)備尾部溶劑加入口加入10倍80%乙醇溶液，45°C下進(jìn)行連續(xù)逆流超聲提取10min,超聲頻率為60KHz，得到提取液，提取液減壓回收試劑得浸膏，加氧化鋁(80目)拌勻、干燥后裝柱，用4倍柱體積的氯仿-丙酮(1:1)混合溶液洗脫，薄層檢測(cè)，收集山油柑堿流分，濃縮得濃縮液。將濃縮液加入甲醇至剛好溶解，溶解后的溶液經(jīng)0.45 μ m微濾膜過(guò)濾，得到樣品溶液取濾液進(jìn)樣，以乙腈-0.15%乙二胺水溶液為流動(dòng)相，體積比為32:68,色譜柱以C8鍵合相為填料，粒徑為10 μ m，柱長(zhǎng)為10cm、直徑為1cm，六通閥進(jìn)樣，進(jìn)樣體積為5ml，控制流速為10ml/min，紫外在線檢測(cè)，檢測(cè)波長(zhǎng)為228nm，收集目標(biāo)成分，減壓回收試劑得山油柑堿粗晶，用氯仿-丙酮(3:1)重結(jié)晶，冷凍干燥得到高純度山油柑堿晶體，經(jīng)HPLC檢測(cè)，純度97.8%。
[0014]實(shí)施例3:
取山油柑根10kg，粉碎成粗粉，從連續(xù)逆流超聲提取設(shè)備頭部進(jìn)料口進(jìn)料，從連續(xù)逆流超聲提取設(shè)備尾部溶劑加入口加入6倍70%乙醇溶液，35°C下進(jìn)行連續(xù)逆流超聲提取50min，超聲頻率為50KHz，得到提取液，提取液減壓回收試劑得浸膏，加氧化鋁(100目)拌勻、干燥后裝柱，用6倍柱體積的氯仿-丙酮(1:1)混合溶液洗脫，薄層檢測(cè)，收集山油柑堿流分，濃縮得濃縮液。將濃縮液加入甲醇至剛好溶解，溶解后的溶液經(jīng)0.45 μ m微濾膜過(guò)濾，得到樣品溶液取濾液進(jìn)樣，以乙腈-0.15%乙二胺水溶液為流動(dòng)相，體積比為32:68,色譜柱以C8鍵合相為填料，粒徑為10 μ m，柱長(zhǎng)為25cm、直徑為4cm，六通閥進(jìn)樣，進(jìn)樣體積為20ml，控制流速為20ml/min，紫外在線檢測(cè)，檢測(cè)波長(zhǎng)為228nm，收集目標(biāo)成分，減壓回收試劑得山油柑堿粗晶，用氯仿-丙酮(2:1)重結(jié)晶，冷凍干燥得到高純度山油柑堿晶體，經(jīng)HPLC檢測(cè)，純度98.5%。
[0015]實(shí)施例4:
取山油柑根10kg，粉碎成粗粉，從連續(xù)逆流超聲提取設(shè)備頭部進(jìn)料口進(jìn)料，從連續(xù)逆流超聲提取設(shè)備尾部溶劑加入口加入5倍80%乙醇溶液，25°C下進(jìn)行連續(xù)逆流超聲提取SOmin,超聲頻率為60KHz，得到提取液，提取液減壓回收試劑得浸膏，加氧化鋁(100目)拌勻、干燥后裝柱，用7倍柱體積的氯仿-丙酮(1:1)混合溶液洗脫，薄層檢測(cè)，收集山油柑堿流分，濃縮得濃縮液。將濃縮液加入甲醇至剛好溶解，溶解后的溶液經(jīng)0.45 μ m微濾膜過(guò)濾，得到樣品溶液取濾液進(jìn)樣，以乙腈-0.15%乙二胺水溶液為流動(dòng)相，體積比為32:68，色譜柱以C8鍵合相為填料，粒徑為10 μ m，柱長(zhǎng)為50cm、直徑為5cm，六通閥進(jìn)樣，進(jìn)樣體積為50ml，控制流速為150ml/min，紫外在線檢測(cè)，檢測(cè)波長(zhǎng)為228nm，收集目標(biāo)成分，減壓回收試劑得山油柑堿粗晶 ，用氯仿-丙酮(2:1)重結(jié)晶，冷凍干燥得到高純度山油柑堿晶體，經(jīng)HPLC檢測(cè)，純度97.2%。
【權(quán)利要求】
1.一種山油柑堿的制備方法，其特征在于它包括以下步驟: (1)提取:取山油柑根粉碎成粗粉，用5-10倍量70-95%的乙醇溶液，25-55°C下進(jìn)行連續(xù)逆流超聲提取20-100min，得到乙醇提取液； (2)氧化鋁柱層析:上述提取液濃縮至浸膏，加氧化鋁拌勻、干燥后裝柱，用氯仿-丙酮混合溶液洗脫，薄層檢測(cè)，收集山油柑堿流分，濃縮； (3)制備型液相色譜分離:上述濃縮液采用制備型液相色譜分離，紫外檢測(cè)器在線監(jiān)測(cè)，收集山油柑堿組分，將洗脫液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，得山油柑堿粗晶； (4)重結(jié)晶:將山油柑堿粗晶用氯仿-丙酮重結(jié)晶，冷凍干燥得到高純度山油柑堿晶體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的山油柑 堿的制備方法，其特征在于步驟(1)所述超聲頻率為50-80KHz。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的山油柑堿的制備方法，其特征在于步驟(2)所述氧化鋁為80-120目，氯仿-丙酮體積比為1:1，用量為柱體積的4-7倍。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的山油柑堿的制備方法，其特征在于步驟(3)所述制備型液相色譜的流動(dòng)相為乙腈-0.15%乙二胺水溶液，體積比為32:68，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為228nm。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的山油柑堿的制備方法，其特征在于步驟(4)所述氯仿-丙酮的體積比為2-3:1。
【文檔編號(hào)】C07D491/052GK104072502SQ201410266313
【公開日】2014年10月1日 申請(qǐng)日期:2014年6月16日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月16日
【發(fā)明者】劉東鋒, 楊成東 申請(qǐng)人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司