茄子花青素合成相關(guān)基因及其編碼蛋白的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種生物【技術(shù)領(lǐng)域】的茄子花青素合成相關(guān)基因及其編碼蛋白，所述基因?yàn)镾mTTG1基因、或SmGL3基因、或SmTT8基因；所述SmTTG1基因編碼的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示；所述SmGL3基因編碼的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.4所示；所述SmTT8基因編碼的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.6所示。利用本發(fā)明的茄子SmTTG1,SmGL3,SmTT8基因，可篩選出受其調(diào)控的與花青素合成密切相關(guān)的下游基因，以及與其相互作用的其他轉(zhuǎn)錄因子基因，從而探究茄子花青素合成路徑調(diào)控機(jī)制。利用茄子SmTTG1,SmGL3,SmTT8基因也可以通過(guò)對(duì)基因進(jìn)行位點(diǎn)突變，改變茄子中的基因序列，從而對(duì)茄子果實(shí)性狀進(jìn)行改變，達(dá)到提高其觀賞價(jià)值和產(chǎn)量，實(shí)現(xiàn)更高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。
【專利說(shuō)明】茄子花青素合成相關(guān)基因及其編碼蛋白

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種茄子花青素合成相關(guān)基因及其編碼蛋 白。

【背景技術(shù)】
[0002] 花青素是一類重要的水溶性天然植物色素，屬于類黃酮物質(zhì)，廣泛存在于植物表 皮細(xì)胞的液泡中、呈現(xiàn)橙色、紅色至藍(lán)色?；ㄇ嗨馗鶕?jù)其基本結(jié)構(gòu)分類很多，其中以矢車菊 色素、天竺葵色素以及花翠素這三種最為普通。花青素是迄今為止所發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)效的自由 基清除劑，具有抗氧化衰老、預(yù)防心血管疾病、抗腫瘤、抗突變、調(diào)節(jié)免疫活性功能；此外，花 青素還是一種安全、無(wú)毒的天然食用色素?；ㄇ嗨卦趫@藝、食品、保健品等方面具有廣泛的 應(yīng)用，對(duì)人類健康具有巨大的潛在價(jià)值，因此花青素一直是研究的熱點(diǎn)領(lǐng)域。
[0003] 植物中的花青素生物合成由兩類基因的共同控制，一類是結(jié)構(gòu)基因，編碼花青素 苷生物合成途徑中的關(guān)鍵酶；另一類是調(diào)控基因，調(diào)控花青素苷生物合成基因的表達(dá)強(qiáng)度 和模式，并且控制花青素苷在時(shí)空表達(dá)的變化。目前已分離和鑒定了三類花青素合成的轉(zhuǎn) 錄因子：R2R3-MYB蛋白、MYC家族的bHLH蛋白和WD40蛋白。這些轉(zhuǎn)錄因子通過(guò)與結(jié)構(gòu)基 因啟動(dòng)子中相應(yīng)的順式作用元件結(jié)合，從而調(diào)節(jié)花色素苷生物合成途徑中基因的表達(dá)。在 這個(gè)過(guò)程中一般是由MYB轉(zhuǎn)錄因子、bHLH轉(zhuǎn)錄因子和WD40轉(zhuǎn)錄因子構(gòu)成一個(gè)蛋白復(fù)合體 (簡(jiǎn)稱MBW蛋白復(fù)合體），直接調(diào)控結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄的。
[0004] 目前，已經(jīng)從擬南芥、矮牽牛、紫蘇、玉米、葡萄、金魚(yú)草、蘋(píng)果等植物中分離克隆了 大量與花青素生物合成代謝相關(guān)的結(jié)構(gòu)基因和調(diào)控基因，但是在這方面對(duì)茄子的研究鮮少 有報(bào)道。本研究中分離克隆了茄子花青素合成相關(guān)的WD40轉(zhuǎn)錄因子基因 SmTTGl，bHLH轉(zhuǎn) 錄因子基因 SmGL3和SmTT8,研究了它們?cè)谇炎硬煌M織的表達(dá)特異性，并且利用酵母雙雜 交系統(tǒng)，檢測(cè)這幾個(gè)翻譯的蛋白與MYB轉(zhuǎn)錄因子基因 SmMYB形成的蛋白兩兩之間的互作情 況，為進(jìn)一步探究茄子花青素生物合成調(diào)控機(jī)制提供基礎(chǔ)。經(jīng)對(duì)現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)的檢索，尚未 發(fā)現(xiàn)與本發(fā)明相同或者相似的技術(shù)主題。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種茄子花青素合成相關(guān)基因及其 編碼蛋白。本發(fā)明針對(duì)目前對(duì)茄子研究基礎(chǔ)薄弱的現(xiàn)狀，克隆出茄子花青素合成相關(guān)轉(zhuǎn)錄 因子SmTTGl，SmGL3, SmTT8的基因序列，進(jìn)而可通過(guò)對(duì)該基因表達(dá)的調(diào)控及干擾等操作，提 商爺子的品質(zhì)。
[0006] 本發(fā)明是通過(guò)以下的技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的，本發(fā)明涉及一種茄子花青素合成相關(guān)基 因，所述基因?yàn)镾mTTGl基因、或SmGL3基因、或SmTT8基因；
[0007] 所述SmTTGl基因編碼的氨基酸序列如SEQ ID N0. 2所示；
[0008] 所述SmGL3基因編碼的氨基酸序列如SEQ ID NO. 4所示；
[0009] 所述SmTT8基因編碼的氨基酸序列如SEQ ID NO. 6所示。
[0010] 優(yōu)選地，所述SmTTGl基因的序列如SEQ ID NO. 1所示。
[0011] 優(yōu)選地，所述SmGL3基因的序列如SEQ ID NO. 3所示。
[0012] 優(yōu)選地，所述SmTT8基因的序列如SEQ ID NO. 5所示。
[0013] 本發(fā)明根據(jù)Genebank數(shù)據(jù)庫(kù)，運(yùn)用生物信息學(xué)手段，通過(guò)同源序列比較設(shè)計(jì)出簡(jiǎn) 并引物，用分子克隆的方法，克隆出紫色茄子中SmTTGl，SmGL3, SmTT8基因；經(jīng)過(guò)序列分析， 確定是茄子的相關(guān)基因；組織表達(dá)分析發(fā)現(xiàn)，SmTTGl，SmGL3和SmTT8基因各組織熒光半定 量檢測(cè)值，結(jié)果顯示，三個(gè)基因在根、莖、也、花、果皮、果肉中均有表達(dá)，但在不同組織中表 達(dá)量不同。SmTTGl基因在葉片中表達(dá)水平最高，顯著高于其他各組織；在其他組織中表達(dá) 量相當(dāng)，無(wú)顯著性差異。SmGL3基因在莖中表達(dá)量最高顯著高于其他各組織，其次是花和果 肉，在根和葉中表達(dá)量很低。SmTT8在果皮中的表達(dá)量最高，在莖中也有顯著表達(dá)，在根、葉、 花、果肉中表達(dá)量低，且無(wú)顯著性差異。
[0014] 本發(fā)明具有如下有益效果：本發(fā)明的SmTTGl, SmGL3, SmTT8都是轉(zhuǎn)錄因子基因?yàn)?茄子花青素合成的關(guān)鍵調(diào)控基因，該基因通過(guò)結(jié)合順式元件調(diào)節(jié)下游基因的表達(dá)，從而調(diào) 控花青素合成。利用本發(fā)明的茄子SmTTGl，SmGL3, SmTT8基因，可篩選出受其調(diào)控的與花青 素合成密切相關(guān)的下游基因，以及與其相互作用的其他轉(zhuǎn)錄因子基因，從而探究茄子花青 素合成路徑調(diào)控機(jī)制。利用茄子SmTTGl, SmGL3, SmTT8基因也可以通過(guò)對(duì)基因進(jìn)行位點(diǎn)突 變，改變茄子中的基因序列，從而對(duì)茄子果實(shí)性狀進(jìn)行改變，達(dá)到提高其觀賞價(jià)值和產(chǎn)量， 實(shí)現(xiàn)更高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0015] 通過(guò)閱讀參照以下附圖對(duì)非限制性實(shí)施例所作的詳細(xì)描述，本發(fā)明的其它特征、 目的和優(yōu)點(diǎn)將會(huì)變得更明顯：
[0016] 圖1為本發(fā)明的SmTTGl，SmGL3, SmTT8基因的cDNA瓊脂糖凝膠電泳圖；
[0017] 圖2為本發(fā)明基因 SmTTGl組織表達(dá)分析圖；
[0018] 圖3為本發(fā)明基因 SmGL3組織表達(dá)分析圖；
[0019] 圖4為本發(fā)明基因 SmTT8組織表達(dá)分析圖；
[0020] 圖5為本發(fā)明SmTTGl, SmGL3, SmTT8與SmMYB蛋白之間的酵母雙雜交驗(yàn)證圖。

【具體實(shí)施方式】
[0021] 下面結(jié)合具體的實(shí)施例和附圖，進(jìn)一步闡述本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】。應(yīng)理解，這些 實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下例實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí) 驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，例如Sambrook等（1989)編著的分子克隆克隆實(shí)驗(yàn)手冊(cè)（New York:Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議 的條件。
[0022] 本發(fā)明涉及的RNA提取、PCR純化、質(zhì)?；厥盏仍噭┖型ㄟ^(guò)公開(kāi)市售的商業(yè)渠道獲 得，夠買于生工生物（上海）股份有限公司，大腸桿菌（Escherichia coli)菌株DH-5ci由 本實(shí)驗(yàn)室保存，Taq DNA聚合酶、限制性核酸內(nèi)切酶、AMV反轉(zhuǎn)錄酶、凝膠回收試劑盒及合成 引物購(gòu)自生工生物公司，PrimeSTAR? Max DNA高保真酶、pMD19-T載體、RACE擴(kuò)增試劑盒購(gòu) 自大連寶生物公司（TaKaRa)。
[0023] 圖1為本發(fā)明的SmTTGl，SmGL3, SmTT8基因的cDNA瓊脂糖凝膠電泳圖；SmTTGl基 因片段（A)、SmGL3基因片段、⑶SmTT8基因片段（C)和SmMYB基因片段（D);圖2為本發(fā) 明基因 SmTTGl組織表達(dá)分析圖；圖3為本發(fā)明基因 SmGL3組織表達(dá)分析圖；圖4為本發(fā)明 基因 SmTT8組織表達(dá)分析圖；圖5為本發(fā)明SmTTGl, SmGL3, SmTT8與SmMYB蛋白之間的酵母 雙雜交驗(yàn)證圖。
[0024] 實(shí)施例1、茄子花青素合成相關(guān)SmTTGl, SmGL3, SmTT8的克降及纟目織表汰特件分析
[0025] 本實(shí)施例涉及茄子花青素合成相關(guān)SmTTGl，SmGL3, SmTT8的克隆及組織表達(dá)特性 分析，包括如下步驟：
[0026] 步驟一，茄子花青素合成相關(guān)SmTTGl, SmGL3, SmTT8基因的克隆
[0027] 1、茄子實(shí)驗(yàn)材料取材
[0028] 本實(shí)驗(yàn)所用的植物材料為本課題組保存的茄子優(yōu)良種質(zhì)資源YZ14(邵文婷， 劉楊，韓洪強(qiáng)2013.茄子花青素合成相關(guān)基因 SmMYB的克隆與功能研究.園藝學(xué)報(bào) 40 (3) : 467 - 478)，YZ14表型為無(wú)刺，紫莖，紫花，紫色果實(shí)。實(shí)驗(yàn)材料栽培于上海市閔行區(qū) 浦江鎮(zhèn)航天育種基地的人工塑料大棚中。在自然條件下育苗，生長(zhǎng)并結(jié)實(shí)。取紫茄的根、紫 色莖、紫色葉片、紫色花瓣、紫色果實(shí)。
[0029] 2、TRIzol法提取商品成熟期紫色果皮中的總RNA ;
[0030] (1)稱取0. 5g紫長(zhǎng)茄的商品成熟期紫色果皮，用液氮速凍后，迅速研磨成細(xì)粉，分 裝于1. 5ml的eppendorf離心管中；
[0031] (2)加入1ml TRIzol，用力搖動(dòng)使混合均勻，25°C，放置5min ;
[0032] (3)每管加 0· 2ml 氯仿，用力振蕩 15sec,室溫放置 2min_3min, 4°C，12, 000g,離 心 15min ;
[0033] (4)將上清液600ul吸入1. 5ml的新eppendorf離心管中，加與上清等體積異丙 醇，顛倒混勻，_2〇°C冰箱中放置30min ;
[0034] (5)4°C，12, 000g，離心 15min，棄上清，收集 RNA 沉淀，加 lml75% (V/V)乙醇洗滌 沉淀1-2次，洗滌具體為：加 lml75% (V/V)乙醇，4°C離心，12000g，10min-15min，棄上清， 收集RNA沉淀；
[0035] (6)沉淀 25°C下干燥 15min_20min，溶于 30 μ 1-50 μ 1 的 RNase-free water 中；
[0036] (7)用甲醛變性膠電泳鑒定總RNA質(zhì)量，然后在分光光度計(jì)上測(cè)定RNA含量。
[0037] 3、SmTTGl, SmGL3, SmTT8基因 cDNA全長(zhǎng)的克隆與SmMYB基因的擴(kuò)增
[0038] 根據(jù)擬南芥中與花青素合成相關(guān)的基因 TTG1，GL3, TT8的序列信息，在NCBI中進(jìn) 行BLAST比對(duì)后，挑選其中與茄子親緣關(guān)系近的植物的同源蛋白序列，并獲得其相應(yīng)的編 碼序列（CDS)，針對(duì)兩端的保守區(qū)設(shè)計(jì)能夠擴(kuò)增出全長(zhǎng)的簡(jiǎn)并引物（表7)并以茄子cDNA 為模板，采用LA酶擴(kuò)增中間序列，產(chǎn)物純化后連接到T載體上，經(jīng)多次測(cè)序，得到完整的編 碼序列。參照邵文婷等設(shè)計(jì)特異引物（表1)，擴(kuò)增得到SmMYB編碼序列。PCR反應(yīng)條件為： 94°C 4min ;94°C 30s, 55°C 45s, 72°C lmin (或 2min), 32 個(gè)循環(huán)；72°C 8min。
[0039] 將測(cè)序得到的核苷酸序列用NCBI的BLASTn方法與Genbank中已登陸的TTG1，GL3 和TT8基因序列進(jìn)行比對(duì)，結(jié)果表明SmTTGl與馬鈴薯TTG1基因序列同源性達(dá)到94%，番茄 TTG1基因同源性為92%，SmGL3與馬鈴薯GL3基因序列同源性達(dá)到94%，番茄GL3基因同 源性為93%，SmTT8與馬鈴薯GL3基因序列同源性達(dá)到85%，番茄GL3基因同源性為83%。 特異引物擴(kuò)增得到的片段大小與SmMYB的大小一致。
[0040] 表1茄子和馬鈴薯TTG1基因核苷酸的序列比對(duì)
[0041] eggplant ATGGATAATTCAAGTCAAGAATCGCATCTTCGATCTGAAAATTCCGTTACATATGACTCC 60 potato ATGGAGAATTCAAGTCAAGAATCGCATCTCCGGTCTGAAAATTCCGTTACATATGACTCC 60 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * eggplant TCTTATCCTATCTATGCCATGGCTGTTTCCTCCTTCCCTTCTTCCGTCCCGAGTCGCCGC 120
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[0043] eggplant TGGTCTGCTGCACAACGTGATTGGATTGCGATTGCGTTTTCTAACAAGTTGCAGCTGCTT 1020 potato TGGTCTGCTGCACAACGTGATTGGATTGCCATTGCGTTTTCTAACAAGTTGCAGCTGCTT 1020 ι^? ?|ν ι^? eggplant AAAGTATAA 1029 potato AAAGTATAA 1029
[0044] potato :馬鈴薯TTG1基因核苷酸序列（NCBI登錄號(hào)為XM_006347458)
[0045] eggplant :爺子TTG1基因核苷酸序列
[0046] 表2茄子和馬鈴薯TTG1基因編碼的氨基酸序列比對(duì)
[0047] eggplant MDNSSQESHLRSENSVTYDSSYPIYAMAVSSFPSSVPSRRRRIAVGSFIEEFNNRVDILC 60 potato MENSSQESHLRSENSVTYDSSYPIYAMAFSSFTSSIPSRRRRLAVGSFIEEFNNRVDILS 60 氺氺木氺氺氺氺氺氺氺木氺氺氺氺氺氺氺木氺氺氺氺氺氺氺* 氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺木氺氺氺氺氺氺氺木氺氺氺氺氺氺氺 eggplant FDEDTLTLKPVPNLSFEHPYPPTKLMFHPNPSASLKSKDILASSGDYLRLWEVGDTSIEP 120 potato FDEDTLTLKPVPNLSFEHPYPPTKLMFHPNPSASLKTNDILASSGDYLRLWDVRETSIEP 120 氺*氺氺氺氺氺氺氺*氺氺氺氺氺氺氺*氺氺氺氺氺氺氺*氺氺氺氺氺氺氺*氺氺 氺氺氺*氺氺氺氺氺氺氺*氺氺 氺氺5^氺氺 eggplant LFTLSNNKTSEYCAPLTSFDWNEVEPRRIGTSSIDTTCTIWDVEKGAVETQLIAHDKEVY 180 potato LFTLSNNKTSEYCAPLTSFDWNEVEPRRIGTSSIDTTCTIWDVEKGVVETQLIAHDKEVY 180 氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺 eggplant DIAffGEAGVFASVSADGSVRIFDLRDKEHSTIIYESPKPDTPLLRLAffNKQDLRYMATIL 240 potato DIAffGEAGVFASVSADGSVRIFDLRDKEHSTIIYESPKPDTPLLRLAffNKQDLRYMATIL 240 eggplant MDSNKVVILDIRSPAMPVAELERHQASVNAIAWAPQSCRHICSAGDDGQALIWELPTVAG 300 potato MDNNKIVILDIRSPAMPVAELERHQASVNAIAWAPQSCRHICSAGDDGQALIWELPTVAG 300 氺* 氺氺氺氺氺*氺氺氺氺氺氺氺*氺氺氺氺氺氺氺*氺氺氺氺氺氺氺*氺氺氺氺氺氺氺*氺氺氺氺氺氺氺*氺氺氺氺氺氺氺*氺氺 eggplant PNGIDPMSMYSAGAEINQIQWSAAQRDIIAIAFSNKLQLLKV 342 potato PNGIDPMSMYSAGAEINQIQWSAAQRDflAIAFSNKLQLLKV 342 氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺
[0048] potato :馬鈴薯TTG1基因編碼氨基酸序列（NCBI登錄號(hào)XP_006347519)
[0049] eggplant :爺子TTG1基因編碼氨基酸序列
[0050] 表3茄子和馬鈴薯GL3基因核苷酸的序列比對(duì)
[0051] eggplant ATGGCTATGGGACACCAAGACCAAGATGGAGTCCCAGATAACTTGAGAAAGCAGCTTGCT 60 potato ATGGCTATGGGACATCAAGATCAAGATGGAGTCCCAGGCAACTTGAGAAAGCAACTTGCT 60 eggplant CTTGCTGTTAGAGGCATTCAATGGAGCTATGCTATCTTTTGGTCAATTCCATTTACAGAA 120 potato CTTGCTGTTAGAGGCATTCAATGGAGCTATGCAATCTTCTGGTCAACTCCAGTTACACAA 120 氺氺氺氺氺氺氺*氺氺氺氺氺氺氺*氺氺氺氺氺氺氺*氺氺氺氺氺氺氺* 氺氺氺氺氺 *氺氺氺氺氺氺*氺氺氺氺氺氺;^氺氺氺 eggplant CCAGGCGTGTTGAAATGGAGTGATGGGTACTATAATGGGGATATCAAGACCAGGAAGACT 180 potato CCAGGGGTGTTGAAATGGATTGATGGGTACTATAATGGGGATATCAAGACCAGGAAGACT 180
[0052] eggplant CTTCAGGCAGGGGAAGTTAATGAAAACCAGCTGGGGCTGCAGAGAACTGAGCAATTGAM 240 potato GTTCAGGCGGGGGAAGTTAATGAAGACCAGCTGGGGTTGCAGAGAACTGAGCAATTGAAA 240 eggplant GAACTTTATAGTTCCCTCTTAACAGGTGy\Ay\GTGAAGACG/\CATACAACQ\CAGGCCAAA 300 potato GAACTTTATAGTTCCCTCTTAACAGGTGAAAGTGAAGAAGACCTACAGCCACAGGCCAAA 300 eggplant AGGCCGTCGGCTTCATTATCTCCGGAGGATCTCACTGATACAGACxTGGTATTTCTTAGTA 360 potato AGGCCGTCGGCCTCATTATCTCCAGAAGATCTCACTGATACAGAGTGGTATTTCCTAGTA 360 eggplant TGCATGTCATTCGTCTTCAGTGTTGGCCAAGGGTTGCCAGGGAAGACCTTCGTAACAAAT 420 potato TGCATGTCATTTGTCTTCGATGTTGGCCAAGGGTTGCCAGGGAAGACCTTAGCAACAAAT 420 *}|〇|<氺^:氺>jo|<5j<氺氺氺氺氺氺水冰 冰承氺>|ο}<--?氺氺 eggplant GAAACAATCTGGCTTTGCAACGCTCACCAAGCCGAGAGTAGAGTCTTCTCTCGTTCTTTG 480 potato GAAACAGTCTGGCTATGCAACGCTCACCAAGCCGAGAGTAGAGTCTTTTCTCGTTCTTTG 480 eggplant CTAGCAAAGAGTGCATCTATCCAGACTGTTGTATGCTTTCCCTATTTAGGAGGCGTTATT 540 potato CTAGCAAAGAGTGCATCTATCCAGACTGTTGTATGCTTTCCCTATTTAGGAGGCGTAATT 540 * 本* * * * 本傘 * * 木承木傘氺:ij< >|<本 * * 木 >J?J< ^ojoji 木 * * * 氺氺 $ :^ojoj? * 木本 ** >{< 木:|ο|〇-- 木木 * 傘 * sj< * 申* eggplant GAGCTAGGAGTCACCGAGCTTGTCATAGAAGATCCCAACCTCATTCAGCAAATAAAAAAT 600 potato GAGCTGGGAGTCACCGAGCTTGTCACGGAAGATCCTAACCTCATTCAGCAAATAAy\AAAT 600 *本冰* * >J?J<氺承承本木* * * * *容本木* * $ * **木$ *氺木*本* *傘$ * * *木*-本* *傘木本冰*承* eggplant TATTTTCTAGTGGTTGATCACTCCATTATTTCGAAGAAGCCTAATTATGTCTCCAATGAT 660 potato TCCTTTCTAGAGGTTGATCACTCCGTTATTTCGAAGAGGCCTAATTATGTCTCCAACGAT 660 氺 氺本氺氺氺氺氺本氺氺傘*氺氺氺氺氺氺氺*氺氺氺氺氺氺氺氺本氺氺氺氺氺氺氺氺氺傘本本氺氺氺sj<本氺氺本:氺氺氺氺 eggplant GCAAAATATGACACAAATGTCGTTTTCCAAAAGCCTGATCATAATGCACTTGGAAGTGAT 720 potato GCAAAAAATGACACGAATATCGTTAGCCAAAAGCCTGATCATAATGCACTTGAAAATGAT 720 氺?|<氺氺氺氺氺氺氺氺本本氺氺本本氺氺水本本 氺氺氺氺氺氺氺氺步:傘;氺氺氺氺氺氺氺氺本本本氺氺氺傘本氺氺氺氺氺氺 eggplant GCTTATCCAGTTGAAAACAACTACAGTTCACCTCATGATAGTTCAAATGGTTTTGTTGCC 780 potato GCTTATCCAGTTGAAA-----TA-AATTCACCTCATGATAGTTCAAATGGTTTTGTCGCC 774 eggplant AATCAAGAGGCAGAAGATTCATTGATGGTGGTAGACGTTATTGGGGAAACTTCACMGCT 8 potato AATCAAGAGGCAGAAGATTCACTGATGGTGGTAGACGGTATTGGGGAAACTTCACAAGCT 834 eggplant CAAAGCTGGAAGTTCATGGATGATAATATGAGTAATGAAGCGAATAATTCTTTCAATTCC 900 potato CAAAGCTGGAGGTTCATGGATGATAATATGAGTAATGGTGCGAATAATTCCTTGAATTCC 894 eggplant AGTGACTGCATCTCTCAAAACAATGCAAATTGTGAAAAGTTGTCCCCTCTTTCGAGTGGA 960 potato AGTGACTGCATCTCTCAAAACAATGCMATTGTGAAAAGTTGTCCCCTCTTTCGAGTGGA 954 eggplant GAGAAGGMACTAAGTTTCGTCTACTAGACCGGCAAGAGAATGATCAGAAGAAACCGCAT 1020 potato GAGAAGGMACTAAGCCTTGCCCACTAGACCATCAAGAGAACGATCAGAAGAAACCGCAT 1014 本中;承本本* $ 承本本氺本本本承* 冷:本本:氺本本*>!<氺本氺本*啦斗本本承$
[0053] eggplant CTTTTAGATCACCAAAGAGATGATGCTCAATATCMGCTGTCCTTTCTATCCTTCTAAAG 1080 potato CTTTTAGATCACCAAAGAGATGATGCTCAATATCMGCTGTCCTTTCTACTCTTCTAAAG 1074 eggplant AGT'lt.lOACCAAl'TMCTTTGGGACCACATl'Tl'AGAAATAl'TMCAAAAAGTCAACTl'Tl' 1140 potato AGTTCTGACCAATTMCTTTGGGACCACATTTTAGTAATATGMTAMAAGTCAAGTTrr 1134 eggplant GTTGGTTGGAAGAACGATATTCAGATGCCGCGATTAGGAACTGCACAAAAACTATTGAAG 1200 potato GCTGGTTGGAAGACCGATATTCAGATGCCGAGATTTGGAACTGCACAAAAACTATTGAAG 1194 eggplant AAAGTACTTCTTGAAGTTCCTAGAATGCATGGTGGTGTTGTACATCAATTCAGCAGAGAA 1260 potato AAGGTACTTCTTGAAGTACCTAGAATGCATGCTGGTGTTATACATAAATTCAGCAGAGAA 1254 eggplant AATGGTAAAAAGAACAGCCTTTGGAGACCAGAAGTTGATGACATTGATAGGAACTGTGTT 1320 potato AATGGTAAAAAGAACAGCCTTTGGAGACCAGAAGTTGATGACATTGATAGAAACCACGTT 1314 eggplant Al'Tl'CAGAGAGAAGGCGAAGAGAAAAGAl'AAAl'GAGAGATTTATGCAl'CTTGCTTCCATT 1380 potato ATTTCAGAGAGAAGGCGAAGAGAAAAGATAAATGAGAGATTTATGCATCTTGCATCGATG 1374 eggplant CTGCCAACTGGTAGCAAGGTTGACAAAATATCACTACTCGATGAGACAATAGAACACATG 1440 potato CTGCCGACTAGTAGCAAGGTTGACAAAATATCATTACTCGATGAGACAATAGAATACATG 1434 eggplant AAAGAGCTTGAAAGGAGAGTTCAAGAGCTGGAGGCTAGATCAGCAAGACGATCAAATGAT 1500 potato AAAGAGCTTGAAAGGAGAGTTCAAGAGCTGGAGGCCAGATCAGCAAGACGATCAAATGAT 1494 eggplant ACTGCAGAGCAGACATCTGATAATTGTGGCACTAGCAAATTCMTGACATCAGGGGATCA 1560 potato ACTGCAGAGCAGACATCTGATAATTGTGGCACTAGCAAATTCAATGACATCAGGGGATCA 1554
[0054] eggplant CTACCGAACAAACGGAAGGCATGTGATATGGATGAGATGGAACCTGAAAGCTGCAATGGA 1620 potato CTACTGAACAAAAGAAAGGCATGTGATATGGATGAAATGGAACCTGAAAGCTGCAATGGA 1614 eggplant TTATTGAAACGTAGTTCAGCTGATMTATTGTCATCAATATGATCGATAAGGAAGTCTCG 1680 potato TTACTGMACGTAGTTCAGCTGATAGTATTGTCATCAATATGATCGATAAGGAAGTCTCG 1674 * 氺 * * sji * * * 氺 * 氺 * sji * * * 氺 * 氺 * sji * * * * 氺 * sji * * * 氺 * 氺 * sji * * * 氺 * 氺 * sji * * * 氺 * 氺 * sji * * * 氺 * 木 eggplant ATCAAGATGAGTTGTCTTTGGAGCGAGAGCTTGTTGCTTAAAATTATGGAGGCGCTGACT 1740 potato ATCAAGATGAGTTGTCTTTGGAGCGAGAGCTTGTTGCTTAAAATTATGGAGGCACTGACT 1734 eggplant GACCTACAAATGGATTGCCATACAGTTCAGTCTTCCAACATTGATGGGATTCTATTCATT 1800 potato GACCTACATATGGATTGCCATACAGTTCAGTCTTCCAACATTGATGGGATTCTATCCATT 1794 * 氺 * 氺 * sji * * * 氺 * sji * * * 氺 * 氺 * sji * * * 氺 * 氺 * sji * * * 氺 * 氺 * sji * * * 氺 * 氺 * sji * * * 氺 * 氺 * sji * * 氺 * 木 eggplant GCTATTGAATGCAAGTCGAGTAGATCGAAAACAGTAGCAGTTGGAACAATTAGAGAAGCA 1860 potato GCTATTGAATCCAAGTCAACTGGATCGAAAACAGTAGCAGTCGGAACAATTAGAGAAGCA 1854 eggplant CTTCAGAGAGCAGTTTGGAAATCTTGA 1887 potato CTTCAGAGAGTAGTTTGGAAATCTTGA 1881 氺氺*氺氺氺氺氺*氺氺氺氺氺氺*氺*氺氺氺氺氺*氺*
[0055] potato :馬鈴薯GL3基因核苷酸序列（NCBI登錄號(hào)為XM_006343915)
[0056] eggplant :爺子GL3基因核苷酸序列
[0057] 表4茄子和馬鈴薯GL3基因編碼的氨基酸序列比對(duì)
[0058] eggplant MAMGHQDQDGVPDNLRKQLALAVRGIQWSYAIFWSIPFTEPGVLKWSDGYYNGDIKTRKT 60 potato MAMGHQDQDGVPGNLRKQLALAVRGIQWSYAIFWSTPVTQPGVLKflDGYYNGDTKTRKT 60 氺氺*氺氺氺* 氺氺*氺氺*氺氺*氺氺氺 * >jc 氺*氺氺*氺氺氺* eggplant VQAGEVNENQLGLQRTEQLKELYSSLLTGESEDDIQPQAKRPSASLSPEDLTDTEWYFLV 120 potato VQAGEVNEDQLGLQRTEQLKELYSSLLTGESEEDLQPQAKRPSASLSPEDLTDTEWYFLV 120 eggplant CMSFVFSVGQGLPGKTFVTNETIWLCNAHQAESRVFSRSLLAKSASIQTVVCFPYLGGVI 180 potato CMSFVFDVGQGLPGKTLATNETVWLCNAHQAESRVFSRSLLAKSASIQTVVCFPYLGGVI 180 氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺 氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺 eggplant ELGVTELVIEDPNLIQQIKNYFLVVDHSIISKKPNYVSNDAKTOTNVVFQKPDHNALGSD 240 potato ELGVTELVTEDPNLIQQIKNSFLEVDHSVISKRPNYVSNDAKNDTNIVSQKPDHNALEND 240
[0059] 樂(lè)! 樂(lè)! 樂(lè)！ 樂(lè)！ 樂(lè)! 樂(lè)! 樂(lè)! !^C eggplant AYPVENNYSSPHDSSNGFVANQEAEDSLMVVDVIGETSQAQSWKFMDDNMSNEANNSFNS 300 potato AYPVEINSP-HDSSNGFVANQEAEDSLMVVDGIGETSQAQSWRFMDDNMSNGANNSLNS 298 ?|χ ^Ji ^|c^|c^|c^|c^|c?Jc^> eggplant SDCISQNNANCEKLSPLSSGEKETKFRLLDRQENDQKKPHLLDHQRDDAQYQAVLSILLK 360 potato SDCISQNNANCEKLSPLSSGEKETKPCPLDHQENDQKKPHLLDHQRDDAQYQAVLSTLLK 358 ι^? eggplant SSDQLTLGPHFRNINKKSTFVGWKNDIQMPRLGTAQKLLKKVLLEVPRMHGGVVHQFSRE 420 potato SSDQLTLGPHFSNMNKKSSFAGWKTDIQMPRFGTAQKLLKKVLLEVPRMHAGVIHKFSRE 418 eggplant NGKKNSLWRPEVDDIDRNCVISERRRREKINERFMHLASILPTGSKVDKISLLDETIEHM 480 potato NGKKNSLWRPEVDDIDRNHVISERRRREKINERFMHLASMLPTSSKVDKISLLDETIEYM 478 氺氺氺木本木氺木氺氺氺木本木氺木氺氺木本木氺木氺氺氺木本木氺木氺氺氺木本木氺氺氺氺本木氺木氺氺氺木本木氺木氺氺 $ eggplant KELERRVQELEARSARRSNDTAEQTSDNCGTSKFNDIRGSLPNKRKACDMDEMEPESCNG 540 potato KELERRYQELEARSARRSNDTAEQTSDNCGTSKFNDIRGSLLNKRKACDMDEMEPESCNG 538 ι^? eggplant LLKRSSADNIVINMIDKEVSIKMSCLWSESLLLKIMEALTDLQMDCHTVQSSNIDGILFI 600 potato LLKRSSADSIVINMIDKEVSIKMSCLWSESLLLKIMEALTDLHMDCHTVQSSNIDGILSI 598 氺$氺氺氺氺氺氺 *氺氺氺氺氺氺氺$氺氺氺氺氺氺氺$氺氺氺氺氺氺氺$氺氺氺氺氺氺氺$ 氺氺氺氺氺氺$氺氺氺氺氺氺氺$ 氺 eggplant AIECKSSRSKTVAVGTIREALQRAVWKS 628 potato AIESKSTGSKTVAVGTIREALQRVVWKS 626 氺氺氺本木 氺氺氺木本木氺木氺氺氺木本木氺氺氺氺$
[0060] potato :馬鈴薯GL3基因編碼氨基酸序列（NCBI登錄號(hào)NP_001275132)
[0061] eggplant :爺子GL3基因編碼氨基酸序列
[0062] 表5茄子和馬鈴薯TT8基因核苷酸的序列比對(duì)
[0063] eggplant ATGGAGATTATACAGCCTAATAGCCTGCAGCTACAAACCATGTTGCGGGATTCCGTCCAG 60 potato ATGGAGATTATACAGCCTAATAGCCTGCAGTTACAAAACATGTTGCAGAATTCCGTCCAG 60 氺氺氺*氺冷：本*氺氺氺*氺冷：本*氺氺氺*氺冷：本*氺氺氺*氺* $氺氺氺*氺氺^:氺氺氺*氺* $ 氺氺*氺冷：本*氺氺氺* eggplant TCGATTAAATGGACGTATAGTCTTTTCTGGCAATTTTGTCCAAAACAAGGGGTGTTAGTG 120 potato TCGGTTAAATGGACTTATAGTCTTTTTTGGCAATTTTGTCCAAAACAAGGGGTGTTAGTG 120 eggplant TGGAGAGATGGATATTACAATGGGGCTATAAAGACTAGAAAGACTGTGCAGCCAATAGAA 180 potato TGGAGAGATGGATATTATAATGGAGCTATAAAGACAAGGAAAACTGTGCAGCCAATGGAA 180 ijc?|x?|x?|x ^|x^|x^|x eggplant GTTACTGCTGAAGAAGCTTCTCTTCATAGAAGCCAACAACTTAAAGAACTTTATGAATCA 240 potato GTTACTGCTGAAGAAGCTTCTCTTCATAGAAGCCAACAACTTAGAGAACTTTGTGATTCA 240 氺氺氺*氺冷：本*氺氺氺*氺冷：本*氺氺氺*氺冷：本*氺氺氺*氺冷：本*氺氺氺*氺冷：本*氺氺氺氺冷：本*氺氺氺* 冷：本* 氺氺* eggplant CTTTCTGCCGGAGACTCAAATCAGCCGTCCAGAAGGCCGTCGGCTGCCTTGTCACCGGAG 300 potato CTTTCTGCCGGCGACTCAAATCCGCCGGCGAGAAGGCCGTCCGCAGCCTTGTCGCCAGAG 300 氺$5|<木氺木氺氺氺$氺氺木氺氺氺$5|<木氺木氺氺^:氺氺氺氺氺$5|<木氺木氺氺氺氺木木氺氺氺$5|<木氺氺氺 $5|<木 eggplant GACTTGACGGAATCCGAATGGTTTTATCTCATGTGTGTTTCTTTCTCTTTTCCTCCACCC 360 potato GATTTGACGGAATCCGAGTGGTTTTATCTCATGTGTGTTTCTTTCTCTTTTCCTCCACCT 360
[0064] 氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺求氺氺氺氺氺氺氺氺本氺氺氺氺氺氺氺本氺氺氺氺氺沴氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺:氺氺氺氺氺:氺氺氺氺氺 eggplant ATTGGATTACCAGGGAAGGCTTATTCAAAGAAACATCACATATGGATAGTGGGCGCAAAC 420 potato TTTGGATTACCAGGCAAGGCTTATTCAAAGAAACATCACATATGCATAATGGGTGCAAAT 420 氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺:氺氺氺氺氺氺氺氺水氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺本氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺;氺氺氺氺氺氺氺 eggplant GAGGTTGACAGTAAAGTCTTCTGTAGAGCTATTCTTGCAAAGAGTGCCCGCATACAGACT 480 potato GAGGTTGATAGCAAAGTCTTCTGTAGAGCTATTCTTGCTAAGAGTGCCCGCATACAGACT 480 ^ 5? !r|c eggplant GTCGTTTGTATTCCTCTATTGGACGGTGTAGTGGAACTGGGAACTACAGAAAGGGTTGAA 540 potato GTCGTTTGTATTCCTCTCTTGGACGGTGTAGTGGAACTGGGAACTACAGAAAGGGTTCAA 540 eggplant GAAGACATTGGATTCATACATCATATAAAAAGCTTCTTCACTGACxCAACCAC--------592 potato GAAGACATTGGATTCATACATCATGTMAAAGCTTCTTCAATGAGCAACAACAAGCTCAG 600 eggplant -CACCTAAGCCAGCTTTATCTGAGCACTCTACCTCCAATCCCACCGCCTTCTCGGAGCCA 651 potato CCACCAAAGCCAGCTTTATCTGAGCACTCCACTTCGGATCCCGCTGCCTTTTCGGAGCCA 660 eggplant TGTTTTTACTCCGGCAGTACTCCGTCATCCATTGATATTTGCCCAG---------ACGGT 702 potato CATTTTTACTCCAGCAATACTCCGTCATCCGCTGGTATTTGTCCAGCGGATCAAGACGGT 720 eggplant AGAACTGCTAGAGAAGAAGAAAATGAGGACGAGGACGAGGAAGAAGATGA-------------752 potato AGAATTGCTGGAGAAGAAGAAAATGAGGATGAGGATGAGGACGAGGATGAGGATGACGM 780 eggplant ------------TGATGAAGCTGAATTAGGCTCGAATGGTATAGCAGTTCAAAGTGGGCxTTGGG 804 potato GAAGAAAATGATGAAGTTGAATTAGACTCGGATGGTATAGCAATTCAAAGTGTTGCTGGG 840 氺氺氺氺氺氺氺ijc氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺：氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺:氺氺氺 eggplant TCGGCT---------------GAGGCTAGTGAGCTCATGCAGCTTGATATGTCTGAAGCT 849 potato GCGGCTAATCCTATAGCGGCTGAGGCTAGTGAGCTCATGCAGCTTGATATGTCTGAAACT 900 eggplant ATACGGCTTGGCTCCCCGGATGATGGCTCTAATAATATGGACTCTGATTTTCATTTGGTT 909 potato ATACGGCTCGGCTCGCCGGATGATGGGTCTAATAATATGGATACTGATTTATATTTGGAT 960 eggplant GGGGTTAGCCAAGCTGGAAATACAGCTGAAl'CTTTCAAAGCTGAGACTGCAATTAGTTGG 969 potato GGTATTAGCCAAGCTGGAAATACGGCTGACTCTTTCAAAGCTGAGACTGCAATTAGTTGG 1020 eggplant GCTAACTTCCAAGACCTTCAACATGTACCAGGTGTCCCTATTTATGATAAATTATCACAA 1029 potato GCl'AACTl'CCAAGACCTl'CAACAT'rTAACAGGl'GTCCCTAGl'TA'rGATGAATTATCACAA 1080 eggplant GAAGATAACCATTAl'TCCCAAACAGTATCAGCCGTTCTGGAACACCTCTCAAACACMGC 1089 potato GAAGATGCACATTATTCTCAAACAGTTTCAGCTGTACTTGAACACCTCTCAAACACAAGT 1140 氺氺氺氺氺氺 氺氺氺氺氺氺球氺本本本氺氺本氺氺氺氺本本氺氺氺尜氺氺氺氺氺氺:氺氺氺尜氺氺氺氺本氺氺氺本本氺
[0065] eggplant --------- ACTACCGTAATGGGCTGTATTTCTCATGACTCAGCCCAATCC 1131 potato TCCAAATTTGCCTCTTCTACTACCATACTGGGCTCTATTTCTCCTGATTCAGCCCAATCC 1200 eggplant GCCTTCACATCATGGCCTACCAT'nOCAGCCCAAATCiXTCtX---------GCCACGAT 1182 potato GCTTTCACATTATGGCCCATCATTTGTAGCCCAAATCCCTCCCACTGCCATCGCCAAGAC 1260 氺氺本水氺氺氺氺氺氺jfc本氺氺氺本 5氺氺*氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺5K氺木氺氺氺 氺氺氺氺氺氺 eggplant AATGGCGGGGGCAGCCGG CAGTGGCTGCTCAAAAGCATACTCTTCACTGTC 1233 potato GGCGGCGACGGCAGTGGGACCAGCTCCCAGTGGCTGCTCAAAAGCATACTATTCACTGTC 1320 eggplant CCATTTCTCCACAATAATAAATTACACCAATCAACTGAAGCTGAATCTCCAAAGTTG 1290 potato CCATTTCTCCACACTACTAAAAAATTACACCAATTACCAGAAGCTCTTTCTCCAAAGTCG 1380 eggplant CGTGAGATGGCGGTCGACTCATCGGCCACCGCTTCTCMTTCCAGAAAG-------- 1339 potato CGAGACGCTGCGGCCGATTCTTCAGCCGCAGCGTCTCGGTTCGGCAAAGGATGTACGATA 1440 eggplant -------------AGCAAGAAGAGCCGAGCGGGAATCATGTClTAGCX^AACGACX^rCGT 1386 potato AATAGTAGTACACAACAAGAAGAGACGAATGGGAACCATGTACTAGCGGAACGACGTCGT 1500 eggplant AGAGAGAAGCTGAACGAGCGTTTTATAATTTTAAGGTCTTTAGTCCCGTTCGTTACGAAA 1446 potato AGAGAGAAGCTGAATGAGCGTTT'rAri'ATTTTAAGGTCai'AGTACCGTTCGTTACGAAA 1560 eggplant ATGGATAAAGCATCGATACTTGGTGATACCATAGAGTATGTGAAGCAGTTACGTAAGAAA 1506 potato ATGGATAAAGCATCGATACTTGGTGATACAATAGAGTATGTGAAGCAGTTACGTAAGAAA 1620 eggplant GTTCACGATCTTGAAGCGCGTGCTCGTCACACACAGGCCATCACAGATGCAGATGAAAAC 1566 potato GTTCAGGATCTTGAAGCGCGTGATCGTCACGCGGAAACCACAAAAAATGCAGATGAAAAG 1680
[0066] eggplant AGTGGTACAGCAACAGTGAAGGGG---------------AAGAGGAGAATG--------- 1602 potato AGTGGTACAGCAACAGTGAAGGCGTTTTCGGGGAAGGATAAGAGGAGAATGAAGAGTGCG 1740 eggplant ―-GAGGAAAGTACTGGCGGAGGGGC---------------------------GGATGAG 1632 potato GTGGAGGGAAGTATAGGCGGAGCACCAACAAAGATCACCGCGTCTCCACCTATGGATGAG 1800 氺氺氺* 氺氺氺氺氺 氺氺氺氺氺氺氺 氺 氺氺氺氺氺氺氺 eggplant GAGGTTTTGCAAGTACAAGTTTCGATTATCGAGAACGATGCACTGGTGGAGCTCCGGTGT 1692 potato GAAGTTTTGCAAGTGGAAGTCTCAATCATCGAAAACGATGCACTGGTGGAGCTCCGGTGT 1860 eggplant CCGTACAAAGAAGGGTTGTTGTTAGATATAATGCAAATGCTAAGGGAACTCAAAGTTGAA 1752 potato CCGTACAAAGAAGGGTTGTTGTTAGATGTAATGCAAATGCTAAGGGAACTAAAAGTGGAA 1920 *氺氺冰:氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺 eggplant GTTGTAGCCATCCAGTCATCTCTTAATACCGGCATCTTAGTGGCTGAGTTAAGAGCCAAG 1812 potato GTTGTAGCAATCCAATCATCTCTTAATACTGGCCTCTTATTGGCTGAGTTAAGAGCTAAG 1980 eggplant GTAAAAGAAAATATATATGGAAGGAAAGCAAGCATTTTGGAAGTGAAAAAGTCAATACAT 1872 potato GTAAAAGAAGATATATATGGAAGGAAAGCAAGCATTTTGGAAGTGAAAAAGTCAATACAT 2040 eggplant CAGATAATCCCTAGAGTTAATTAA 1896 potato CAGATAATCCCTAGAGCTAATTAA 2064 木氺氺>j< * $氺$木氺氺>j< * $氺$ 氺氺>j< * $氺$
[0067] potato :馬鈴薯TT8基因核苷酸序列（NCBI登錄號(hào)為NM_001288169)
[0068] eggplant :爺子TT8基因核苷酸序
[0069] 表6茄子和馬鈴薯ΤΤ8基因編碼的氨基酸序列比對(duì)
[0070] eggplant MEIIQPNSLQLQTMLRDSVQSIKffTYSLFWQFCPKQGVLVWRDGYYNGAIKTRKTVQPIE 60 potato MEIIQPNSLQLQNMLQNSVQSVKWTYSLFffQFCPKQGVLVWRDGYYNGAIKTRKTYQPME 60 氺氺氺氺氺氺氺*氺氺氺氺氺氺 氺氺氺>}< 氺*氺*氺氺氺氺氺*氺*氺氺氺氺氺*氺*氺氺氺氺氺*氺*氺氺氺氺氺*氺* 氺 eggplant VTAEEASLHRSQQLKELYESLSAGDSNQPSRRPSAALSPEDLTESEWFYLMCVSFSFPPP 120 potato VTAEEASLHRSQQLRELCDSLSAGDSNPPARRPSAALSPEDLTESEWFYLMCVSFSFPPP 120 氺氺氺氺氺氺木氺氺氺氺氺氺氺氺氺 木氺氺木氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺木氺氺氺氺氺氺氺木氺氺氺氺氺氺氺木氺氺氺氺木 eggplant IGLPGKAYSKKHHIWIVGANEVDSKVFCRAILAKSARIQTYVCIPLLDGVVELGTTERVE 180
[0071] potato FGLPGKAYSKKHHIWIMGANEVDSKVFCRAILAKSARIQTVVCIPLLDGVVELGTTERVQ 180 eggplant EDIGFIHHIKSFFTEQPPP--KPALSEHSTSNPTAFSEPCFYSGSTPSSIDICPDGRT- 236 potato EDIGFIHHVKSFFNEQQQAQPPKPALSEHSTSDPAAFSEPHFYSSNTPSSAGICPADQDG 240 eggplant -AREEENEDEDEEED------DDEAELGSNGIAVQSGVGSAE-----ASELMQLDMSEA 283 potato RIAGEEENEDEDEDEDEDDEEENDEVELDSDGIAIQSVAGAANPIAAEASELMQLDMSET 300 eggplant IRLGSPDDGSNNMDSDFHLYGVSQAGNTAESFKAETAISWANFQDLQHVPGVPIYDKLSQ 343 potato IRLGSPDDGSNNMDTDLYLDGISQAGNTADSFKAETAISWANFQDLQHLTGVPSYDELSQ 360 ^|xi<|> ?|> ?|x?|x?|^?|>?{>?|x?|^?|>?{><|^?|> eggplant EDNHYSQTVSAYLEHLSNTSTTVMGCI------SHDSAQSAFTSWPTICSPNPSRHDNGG 397 potato EDAHYSQTVSAVLEHLSNTSSKFASSTTILGSISPDSAQSAFTLWPIICSPNPSHCHRQD 420 eggplant GSRQ------WLLKSILFTVPFLHNNKL-HQSTEAESPKLREMAVDSSATASQFQKEQEE 450 potato GGDGSGTSSQWLLKSILFTVPFLHTTKKLHQLPEALSPKSRDAAADSSAAASRFGKGCTI 480 木 氺木木jji氺本木jjc木木木jji氺氺 木 ** 水木木木氺木 木氺本木木木木氺 eggplant PSGN--------HVLAERRRREKLNERFIILRSLVPFVTKMDKASILGDTIEYVKQLRKK 502 potato NSSTQQEETNGNHVLAERRRREKLNERFIILRSLVPFVTKMDKASILGDTIEYVKQLRKK 540 ?|χ ?|^ ?|> ?{> ?|χ ?|^ ?|> ?{> ?|χ ?|^ ?|> ?{> ?|χ ?|^ ?|> ?{> ?|χ ?|^ ?|> ?{> ?|χ ?|^ ?|> ?{> eggplant VHDLEARARHTQAITDADENSGTATVK-GKRRMEESTGGG----------------ADE 544 potato VQDLEARDRHAETTKNADEKSGTATVKAFSGKDKRRMKSAVEGSIGGAPTKITASPPMDE 600 ^|c eggplant EVLQVQVSIIENDALVELRCPYKEGLLLDIMQMLRELKVEVVAIQSSLNTGILYAELRAK 604 potato EVLQVEVSIIENDALYELRCPYKEGLLLDVMQMLRELKVEVVAIQSSLNTGLLLAELRAK 660 eggplant VKENIYGRKASILEVKKSIHQIIPRVN 631 potato VKEDIYGRKASILEVKKSIHQIIPRAN 687 ^|c ^|c
[0072] potato :馬鈴薯TT8基因編碼氨基酸序列（NCBI登錄號(hào)NP_001275098)
[0073] eggplant :爺子TT8基因編碼氨基酸序列
[0074] 步驟二，茄子SmTTGl，SmGL3, SmTT8基因組織表達(dá)分析；
[0075] 分別取等量已進(jìn)行濃度和質(zhì)量檢測(cè)的茄子的根、莖、葉、花、果皮和果肉，RNA反轉(zhuǎn) 錄成cDNA后稀釋成引物工作的最佳倍數(shù)，按照Takara試劑盒SYBK?> Premix Ex TagTM(Tli RnaseHPlus)步驟進(jìn)行熒光半定量PCR反應(yīng)。以茄子Actin作為內(nèi)參，設(shè)計(jì)特異引物 SmAction-F和SmAction-R (附表1)，對(duì)茄子各器官進(jìn)行熒光半定量PCR檢測(cè)。利用Funglyn 公司FTC-3000型熒光定量PCR儀進(jìn)行反應(yīng)，程序如下：
[0076] Running Parameters: Stage: 1 Total Cycles: 1
[0077] Stepl 94.0°C for 30. Os Stage: 2 Total Cycles: 40 Stepl 94.0°C for 8. Os Step2 6Q. 0°C for 34.0s
[0078] 熒光定量PCR設(shè)置在stage2的st印2進(jìn)行信號(hào)采集。定量PCR的方法采用相對(duì) 定量法，通過(guò)與內(nèi)參基因 ACTIN的Ct值之差計(jì)算基因表達(dá)差異，即2_Δ 法定量。定量PCR 弓丨物序列見(jiàn)表7。結(jié)果顯示，三個(gè)基因在根、莖、也、花、果皮、果肉中均有表達(dá)，但在不同組織 中表達(dá)量不同。SmTTGl基因在葉片中表達(dá)水平最高，顯著高于其他各組織；在其他組織中 表達(dá)量相當(dāng)，無(wú)顯著性差異。SmGL3基因在莖中表達(dá)量最高顯著高于其他各組織，其次是花 和果肉，在根和葉中表達(dá)量很低。SmTT8在果皮中的表達(dá)量最高，在莖中也有顯著表達(dá)，在 根、葉、花、果肉中表達(dá)量低，且無(wú)顯著性差異。
[0079] 表7定量PCR引物序列
[0080]

【權(quán)利要求】
1. 一種茄子花青素合成相關(guān)基因，其特征在于，所述基因?yàn)镾mTTGl基因、或SmGL3基 因、或SmTT8基因； 所述SmTTGl基因編碼的氨基酸序列如SEQ ID NO. 2所示； 所述SmGL3基因編碼的氨基酸序列如SEQ ID NO. 4所示； 所述SmTT8基因編碼的氨基酸序列如SEQ ID NO. 6所示。
2. 如權(quán)利要求1所述的茄子花青素合成相關(guān)基因，其特征在于，所述SmTTGl基因的序 列如SEQ ID NO. 1所示。
3. 如權(quán)利要求1所述的茄子花青素合成相關(guān)基因，其特征在于，所述SmGL3基因的序列 如 SEQ ID NO. 3 所示。
4. 如權(quán)利要求1所述的茄子花青素合成相關(guān)基因，其特征在于，所述SmTT8基因的序列 如 SEQ ID NO. 5 所示。
【文檔編號(hào)】C07K14/415GK104059926SQ201410289033
【公開(kāi)日】2014年9月24日 申請(qǐng)日期:2014年6月24日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月24日
【發(fā)明者】陳火英, 劉新宇, 張國(guó)剛, 葛海燕, 韓洪強(qiáng), 周騰夏, 高莉潔, 蔣明敏 申請(qǐng)人:上海交通大學(xué)