一種泥蚶半乳糖凝集素Tg-GAL及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明的目的在于提供一種半乳糖凝集素Tg-GAL及其應(yīng)用，其氨基酸序列為SEQ?ID?NO：1；本發(fā)明表達的泥蚶半乳糖凝集素(Tg-GAL)融合蛋白具有廣譜的殺菌活力，特別是對水產(chǎn)動物致病菌弧菌類有較強的殺菌效果，這為研制新型的具有抗微生物活性的藥物和在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)上作為替代抗菌素的新型病害預(yù)防治療制劑奠定了基礎(chǔ)。與傳統(tǒng)從天然資源提取半乳糖凝集素的方法相比。本發(fā)明的制備方法使半乳糖凝集素大批量、無毒性，使低成本的規(guī)模化生產(chǎn)成為可能，為海洋養(yǎng)殖貝類飼料添加劑和細菌性疾病疫苗的研制提供了一種新的途徑。
【專利說明】
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于功能基因篩選【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種半乳糖凝集素 Tg-GAL及其應(yīng) 用。 -種泥蚶半乳糖凝集素 Tg-GAL及其應(yīng)用

【背景技術(shù)】
[0002] 半乳糖凝集素（galectin)是凝集素超級家族中的一個家族，廣泛分布于各種動 物體內(nèi)。目前以從哺乳動物中克隆并命名的成員有14個，他們共同具有高度保守的由大約 135個氨基酸組成的糖識別結(jié)構(gòu)域（CRD)，對β半乳糖苷有特殊的親和力，在細胞黏附、細 胞凋亡、炎癥反應(yīng)、腫瘤轉(zhuǎn)移等許多生理和病理過程中發(fā)揮重要的作用。在無脊椎動物中半 乳糖凝集素相關(guān)研究還比較少，初步發(fā)現(xiàn)其在無脊椎動物血液中具有多種生物活性，可以 選擇凝集各種細胞，是一種重要的模式識別受體，是免疫防御的重要體液因子之一。
[0003] 起初，對凝集素的研究工作主要集中在凝集素的外源作用，如促進細胞有絲分裂 和凝集惡性細胞的能力等。之后逐漸開展凝集素在機體內(nèi)的生理功能研究，如細胞與細胞 間的黏附，受體介導(dǎo)的胞飲，細菌感染宿主以及宿主巨噬細胞清除入侵的細菌，寄生蟲感染 宿主時的誘導(dǎo)宿主外周淋巴細胞凋亡及免疫保護現(xiàn)象等。鑒于凝集素具有的多種生理生化 作用，日益受到廣大科研工作者的關(guān)注。但研究表明，凝集素在不同種之間存在明顯的功能 上的差異，且貝類凝集素的研究剛剛起步。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種半乳糖凝集素 Tg-GAL及其應(yīng)用，即一種來自于泥蚶 的半乳糖凝集素（Tg-GAL)，從而彌補現(xiàn)有技術(shù)的不足。
[0005] 本發(fā)明首先提供一種泥蚶半乳糖凝集素 Tg-GAL，其氨基酸序列為SEQ ID N0 :1 ;
[0006] 本發(fā)明還提供用于編碼上述的半乳糖凝集素的基因，其核苷酸的序列為SEQ ID NO :2。
[0007] 本發(fā)明還提供用于表達上述的半乳糖凝集素的重組質(zhì)粒。
[0008] 本發(fā)明的泥蚶半乳糖凝集素用于制備飼料添加劑和細菌性疾病疫苗。
[0009] 本發(fā)明表達的泥蚶半乳糖凝集素（Tg-GAL)融合蛋白具有廣譜的殺菌活力，特別 是對水產(chǎn)動物致病菌弧菌類有較強的殺菌效果，這為研制新型的具有抗微生物活性的藥物 和在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)上作為替代抗菌素的新型病害預(yù)防治療制劑奠定了基礎(chǔ)。與傳統(tǒng)從天然資 源提取半乳糖凝集素的方法相比。本發(fā)明的制備方法使半乳糖凝集素大批量、無毒性，使低 成本的規(guī)?；a(chǎn)成為可能，為海洋養(yǎng)殖貝類飼料添加劑和細菌性疾病疫苗的研制提供了 一種新的途徑。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0010] 圖1 :本發(fā)明的凝集素基因與與泥紺galectinl (tandem-repeat)序列相似性比對 圖。

【具體實施方式】
[0011] 1.泥蚶血細胞RNA的提取和反轉(zhuǎn)
[0012] 取鮮活的泥蚶，用針管抽取泥蚶血竇中的血液，取1ml血液放入離心管中，3500轉(zhuǎn) /秒離心一分鐘，去上清，保留血細胞，用Trizol試劑抽提RNA。用紫外分光光度計檢測 A280、A260的相對吸收值，同時采用電泳檢查RNA完整性。用M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶試劑盒反轉(zhuǎn) RNA，得到cDNA第一條鏈。
[0013] 2.泥蚶半乳糖凝集素（Tg-GAL)含0RF的cDNA的亞克隆和驗證
[0014] 依據(jù)Tg-GAL基因成熟肽cDNA序列設(shè)計引物
[0015] Tg-GAL-0RF-F5' TTGTTAAAATAGAGACAAGATG3'
[0016] Tg-GAL-0RF-R5' TAAAACAAAAGATTTTCAGAAG3'
[0017] 以獲得編碼該基因成熟肽的基因片段。PCR反應(yīng)程序：94°C變性4min，1個循環(huán)； 94°C變性50s，55°C退火50s，72°C延伸lmin，35個循環(huán)；72°C延伸10min，l個循環(huán)；4°C保 溫。，把擴增出的片度連入pGEM-T vector (Promega, USA)，并測序獲得本發(fā)明篩選到的泥紺 半乳糖凝集素 Tg-GAL基因的核苷酸序列為SEQ ID N0:2,其mRNA序列為SEQ ID N0:3;翻 譯出的氨基酸序列為SEQ ID NO :1。與泥紺galectinl (tandem-repeat)序列相似性只有 27. 1% (圖1)，因此本發(fā)明克隆得到的半乳糖凝集素是一種新型的凝集素基因。
[0018] 3.泥蚶半乳糖凝集素（Tg-GAL)重組質(zhì)粒構(gòu)建
[0019] 本發(fā)明中采用的重組載體為Novagen公司的pET原核表達系統(tǒng)載體pET_30b，也可 以選用其它的原核表達載體，該載體能夠使目標(biāo)序列與硫氧還蛋白（Trx-Tag)融合，通常 能夠增加重組蛋白中可溶性蛋白比例。
[0020] 重組子構(gòu)建步驟如下：
[0021] 1)使用5'末端和3'末端分別添加了 Xhol和Hind III特定酶切位點的基因特異 性引物 Tg-GAL-EF(5' CTAAGCTTATGGCTTCTGTTGTT3'）和 Tg-GAL-ER(5' ATCTCGAGAAAAGATTTT CAGAAG3'）擴增目的基因。
[0022] 2)將擴增片段純化回收，與pGEM-T載體連接，構(gòu)建亞克隆。
[0023] 3)轉(zhuǎn)化ToplO感受態(tài)細胞后篩選陽性克隆，提取質(zhì)粒。
[0024] 4)使用限制性內(nèi)切酶酶切亞克隆質(zhì)粒，對酶切產(chǎn)生的目的片段純化回收。
[0025] 5)回收目的片段與同樣雙酶切的表達載體連接，完成載體的構(gòu)建。
[0026] 6)選取3個重組子送出測序，確認(rèn)閱讀框正確和堿基序列正確。
[0027] 4.載體轉(zhuǎn)化和表達
[0028] 1)將經(jīng)過測序鑒定正確的陽性克隆轉(zhuǎn)入含有氨芐青霉素（100 μ g/ml)的LB液體 培養(yǎng)基中，200r/min，37°C培養(yǎng)過夜。
[0029] 2)利用 EZ Spin Column Plasmid Mini_Preps44Kit 提取質(zhì)粒，在紫外分光光度計 上測定其濃度，并將質(zhì)粒稀釋至l〇ng/μ 1。
[0030] 3)取1 μ 1稀釋后的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化200 μ 1表達宿主菌BL21 (DE3)pLysS感受態(tài)細胞。
[0031] 4)將轉(zhuǎn)化產(chǎn)物接入10ml LB培養(yǎng)基中（含100 μ g/ml氨芐青霉素，34 μ g/ml氯霉 素），200r/min，37°C培養(yǎng)過夜。
[0032] 5)第二天將培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接入300ml同樣的培養(yǎng)基中，200r/min，37°C培養(yǎng)l_3h，中間 每隔20分鐘檢測濃度一次，當(dāng)0D600達到0. 5-0. 6時，加入終濃度為ImM的IPTG繼續(xù)培養(yǎng) 4h。
[0033] 6) 4°C，5000rpm，離心lOmin離心收集菌體沉淀。提取的適當(dāng)菌體加入100 μ 1PBS 緩沖液后l〇〇°C沸水中煮lOmin后離心，取上清，進行15%的SDS-PAGE分離膠電泳分析， Coomassie brilliant blue R-250染色后用凝膠成像系統(tǒng)拍攝并記錄結(jié)果。剩余菌體 于-20°C凍存?zhèn)溆谩?br> [0034] 5.重組蛋白的純化
[0035] 本發(fā)明采用的蛋白純化Kit為Τ0Υ0Β0公司MagExtractor His-Tag NPK-700。該 純化Kit利用了組氨酸側(cè)鏈上的咪唑基與金屬離子（Ni2+)等的螯合的特性，可以使基因重 組技術(shù)制備的His-Tag融合重組蛋白的純化效率大大提高。其中添加的磁珠是與鎳螯合的 瓊脂磁珠，與His-Tag的選擇性結(jié)合能力非常出色，能夠從菌體破碎液中直接純化His-Tag 融合蛋白。變性狀態(tài)下重組蛋白的純化步驟如下：
[0036] 1)在洗凈吸附液中加入尿素，使尿素濃度達到8M，并用1M HC1調(diào)解pH為8. 0。
[0037] 2)菌體加入變性吸附洗凈液后，加入5M NaCl，使終濃度達到3M。
[0038] 3)于冰浴中超聲波破碎。
[0039] 4) 12000rpm 離心 lmin，回收上清。
[0040] 5)上清中加入磁珠，室溫震蕩10?30min (強度大）。
[0041] 6)稍離心分離磁珠，棄去上清。
[0042] 7)加入變性吸附洗凈液。
[0043] 8)使用震蕩器攪拌10s。
[0044] 9)稍離心分離磁珠。
[0045] 10)加入變性溶出液，室溫下使用微型試管混勻器攪拌1?10min(強度大）。
[0046] 11)瞬間高速分離。
[0047] 12)回收上清液。
[0048] 6.重組蛋白的復(fù)性
[0049] 分離純化后的重組蛋白，依次在含有81、611、4]?、31、21、1]\1和01尿素的5〇11111'1^ 緩沖液（PH8.0)中透析各4h(4°C)，將裂解液中的鹽酸胍替換出來。利用SDS-PAGE法鑒定 透析后所獲得的純化樣品的純度。
[0050] 7. SDS 電泳和 Western Blotting 鑒定
[0051] 進行4 %?20 % SDS-PAGE梯度分離膠電泳分析，上樣6 μ g Tg-GAL純化蛋白， Coomassie brilliant blue R-250染色后用凝膠成像系統(tǒng)拍攝并記錄結(jié)果重組蛋白的濃 度測定。在蛋白相對分子質(zhì)量約45. 9KDa處有明顯特異性蛋白條帶，與預(yù)期大小一致，而空 載體菌和未誘導(dǎo)菌均無此特異性表達條帶。用His抗體進行重組蛋白的Western Blotting 鑒定，將SDS-PAGE分離后電轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上，將膜置于30g/L的脫脂奶粉溶液中與 4°C封閉過夜。然后滴加 Tg-GAL抗His抗體于37°C反應(yīng)2h，最后用DAB顯色試劑盒顯色。 表達的目的蛋白經(jīng)Western blotting驗證能被His抗體識別，檢測的His標(biāo)簽融合蛋白 Tg-GAL 純度 >78 %，濃度為 3. 26mg/ml。
[0052] 8重組半乳糖凝集素抗菌活性檢測
[0053] 采用Bradford法對重組蛋白的含量進行測定。分別以副溶血弧菌、哈氏弧菌、鰻 弧菌、金黃色葡萄球菌和大腸桿菌為供試菌種，進行瓊脂孔擴散抑菌試驗。抑菌試驗結(jié)果表 明，重組Tg-GAL具有顯著的抗陰性性菌活性，其對供試的海洋生物致病菌副溶血弧菌、哈 氏弧菌、鰻弧菌表現(xiàn)出明顯的抑制作用，最低抑制濃度（MIC)結(jié)果為2. 45-6. 25X10_3mg/mL 之間，抑菌效果好于貝類體外重組抗菌肽。
[0054] 9以2齡泥蚶為實驗對象，分四組，每組放置50個健康泥蚶，在餌料中分別添加 100mg/kg，200mg/kg, 500mg/kg的重組半乳糖凝集素及不添加的對照組，投喂24小時后，用 半致死濃度副溶血弧菌浸泡感染實驗，研究表明：未投喂含半乳糖凝集素的泥蚶60小時后 只有20 %的存活率，而投喂含半乳糖凝集素的各組顯示推遲死亡的現(xiàn)象，且半乳糖凝集素 濃度越高，存活率越高，投喂免疫500mg/kg的感染79. 0小時后，仍然有58%的存活率。同 時做了對照試驗，發(fā)現(xiàn)添加非泥蚶來源的C型凝集素 （Genebank N〇:DQ209290 ;AB308130) 的泥蚶存活率只有34%，因此本發(fā)明的乳糖凝集素對提高泥蚶抗菌免疫的效果更好，這可 能與該凝集素是從泥蚶中分離出的，更適應(yīng)于泥蚶免疫系統(tǒng)的緣故。
[0001] 序列表 SEQUENCE LISTING <110>浙江萬里學(xué)院 <120〉一種泥蚶半乳糖凝集素 Tg-GAL及其應(yīng)用 <160> 3 <170> Patentln version 3.5 <210> 1 <211> 555 <212> PRT <213> galectin amino acid sequence <400> 1 Met Ser Tyr Gin lie Ser Arg lie Tyr Thr Pro Val Ser Tyr Tyr ile 1 5 10 15 Pro Asri Gly Leu His Pro Gly Lys His lie lie Leu Arg Gly Arg Val 20 25 30 ThrTrp Trp Thr Glu Ala Phe Ala lie Asn Leu Gin Giu Gly Pro Gin 35 40 45 Pro Gly Asp Gly Ser lie Ala Phe His Phe Asn Pro Arg Pro Ser Glu 50 55 60 Gly Val Cys Val Arg Asn His Cys Asp Gly Asp Trp Gly Gly Glu Glu 65 70 75 80 Arg Asp Gin Pro Asn Phe Pro Phe Asp Asp Gly Arg Ser Phe Leu Leu 85 90 95 Arg ile Glu Val Thr Asp Ser Glu Phe Arg Thr Tyr Val His Gly Arg 100 105 110
[0002] Pro Tyr He Asp Phe Ser His Arg Leu Asp Leu Ser Ser Val His Tyr 115 120 125 Leu Tyr Leu Thr Asp Gly Ala Glu Tyr Tyr Asp lie Thr Phe Gin Asp ISO 135 140 Arg Tyr Ser Leu Pro Tyr Arg Thr Glu lie Pro Asn Gly Met Gin Val 145 150 155 160 Gly Lys Ala Val Arg lie Thr Gly Ala Ala Gin Asp Asn Asp Gly Phe 165 170 175 Ser lie Asn Phe Gly Cys Asp Cys Glu Asn Glu Thr Cys Ala Phe His 180 185 190 Phe Asn Pro Arg Pro Asn Glu Gly Val Val lie Arg Asn Ala Asn Leu 195 200 205 Gly Gly Trp Gly Glu Glu Glu Arg Asp Tyr Asp Ala Glu Phe Pro Phe 210 215 220 Ser Pro Gly Asn Phe Phe Asp Ala Leu Phe Val Cys Thr Glu Asp Gin 225 230 235 240 Tyr Cys Val Tyr lie Asn Glu Lys Tyr Phe Ala Asn Phe Asn His Arg 245 250 255 Cys Gly lie Ser Asp Val Ser His Phe His Val Gin Gly Asn Met Asp 260 265 270 lie Arg Asn Val Glu Tyr Tyr Glu Pro Met Glu Asp Asp Phe Val Lys 275 280 285
[0003] Pro lie Pro Ser Gly Leu Glu Lys Gly Asp Val Leu Leu Phe Arg Gly 290 295 300 Phe Met Lys Pro Gly Gly Asp Thr Phe Ser lie Asn Leu Met Asn Gly 305 BIO 315 320 Thr Asp tie Gly Ser Asp lie Ala Phe His Leu Asn Pro Arg Val Gly 325 330 335 Glu Gly Gin Val Val Met Asn Cys Cys Met Asp Gly Gly Trp Gly Glu 340 345 350 Glu Glu Arg Glu Asp Leu Pro Ser Val Leu Thr Asp Arg lie Pro Phe 355 360 365 Glu Val Lys lie Val Thr Lys Arg Asn Lys Phe Lys Val Tyr Val Asn 370 375 380 Gly Lys Lys Tyr Met Lys Phe Arg Ala Arg Gly Asn Val Glu Asp lie 385 390 395 400 Lys Gly Val Asn Val Lys Gly Asp Ala Phe lie Tyr Gin Thr Lys Leu 405 410 415 Leu Arg Lys Leu Asp Lys Pro Val Trp Glu Arg lie Pro Gly Asn Phe 420 425 430 Arg Glu Gly Gly Trp Val Val Val Ser Gly lie Pro Lys Lys Glu Ser 435 440 445 Gly Gly Phe Ala lie Asn Phe Arg Cys Ala Asp Asp Asp Asp Ser Asp 450 455 460
[0004] lie Ala Phe His Phe Asn Pro Arg Leu Asn Glu Gly Asp Thr Val Arg 465 470 475 480 Asn Ala Cys Val Gly Gly Gly Trp Gin Asp Glu Glu Arg Asp Gin Pro 485 490 495 Cys Phe Pro Phe Glu Glu Lys Asp Thr Phe Glu Val Ala lie Asn Ala 500 505 510 Trp Pro Asp Lys Phe lie Thr Tyr Val Asn Gly Lys His Tyr lie Asp 515 520 525 Phe Asn His Arg Leu Pro Val Asp Ser Val Cys His lie Gin Leu Thr 530 535 540 Gly Asp Ala Asp Phe Phe Glu Pro Glu Phe Phe 545 550 555 <210> 2 <211> 1991 <212> DNA <213> galectin gene sequence <400> 2 acatggggga tatataagtt gtaatatctg agcacacacc cctaccagat aacaggacag 60 gactgggcct acgacgacgc cgaggaggaa acttccacat tgctgtacag tttaacaagt 120 tgttaaaata gagacaagat gtcctatcaa attagcagaa tttacacccc tgtctcctat 180 tacatcccaa acggactcca cccaggaaaa cacataatcc tcagagggag agttacatgg 240 tggacagaag catttgctat taatttacaa gagggaccac agcctggaga tggatctatt 300 gccttccatt ttaatcctcg tcctagtgaa ggtgtatgtg tccgtaatca ctgtgatggc 360 gactggggag gtgaagaacg tgaccaacca aatttcccat ttgatgatgg aagaagtttc 420
[0005] ttactacgta ttgaagtgac tgatagtgaa tttagaacat atgtccatgg aagaccatac 480 aiagatttct cccatagact ggaccttagt agtgtccatt atctgtactt gactgatgga 540 gcagaatact atgacatcac attccaggac agatatagtc tgccatacag aacagaaatt 600 cctaatggta tgcaggtggg taaagctgtc cgtatcactg gtgctgctca ggacaacgat 660 ggattcagca ttaactttgg ctgtgactgt gagaatgaga cctgtgcctt ccatttcaat 720 ccccgtccta atgagggagt tgtaatcaga aatgctaatt taggaggctg gggtgaagaa 780 gaacgggatt atgatgccga gtttccattt tccccaggaa atttctttga tgccttgttt 840 gtctgtactg aagaccagta ttgtgtttac atcaatgaga agtattttgc caattttaac 900 catcgttgtg gtatatcaga tgtcagccac ttccatgtac agggtaacat ggatatcaga 960 aatgtggagt attatgaacc aatggaagat gactttgtaa aacctatccc atcaggctta 1020 gagaaaggtg atgttcttct gtttagagga ttcatgaaac ctggcggaga cacgttttca 1080 atcaatctga tgaatggtac tgatatagga tcagacattg ccttccatct caacccccgt 1140 gttggggagg gacaggttgt taigaactgt tgtatggatg gaggatgggg tgaagaggaa 1200 agagaagatc ttccctcagt cctcactgac agaataccat ttgaggtcaa gattgtaacc 1260 aagagaaaca agttcaaggt ctatgtcaat ggaaaaaaat acatgaagtt ccgtgccagg 1320 gggaatgtag aggacatcaa aggtgtgaat gtiaaaggag atgcttttat ataccagacg 1380 aaactactca gaaaactgga taaaccagtc tgggaaagaa ttccaggaaa tttccgtgaa 1440 ggtggatggg ttgtcgtttc aggaattcca aaaaaagaat ctggaggttt tgccatcaat 1500 ttccgctgtg ctgatgatga tgacagtgac attgctttcc attttaaccc acgtcttaat 1560 gaaggtgaca ctgtgcgtaa tgcatgtgta ggtggtggat ggcaggatga agaaagggat 1620 caaccttgct tcccatttga agaaaaagac acatttgaag tagccatcaa tgcctggcct 1680 gataaattta ttacatatgt taacggtaaa cattacatag atttcaatca cagacttcct 1740
[0006] gtggacagtg tgtgccacat acagctgacg ggagatgctg atttctttga gcctgaattc 1800 ttctgaaaat cttttgtttt atgaatgaac tgctagtgga tagttaattc ctagttgtgt 1860 aactgtattt atataactag caataaaaag agattattgc tttggtgctt gtattgaata 1920 aagacaatca gcgtttctgt gattttgaat aaaatgatca aagattttaa aaaaaaaaaa 1980 aaaaaaaaaa a 1991 <210> 3 <211> 1668 <212> DNA <213> ga lectin mRNA sequence <400> 3 atgtcctatc aaattagcag aatttacacc cctgtctcct attacatccc aaacggactc 60 cacccaggaa aacacataat cctcagaggg agagttacat ggtggacaga agcatttgct 120 attaatttac aagagggacc acagcctgga gatggatcta ttgccttcca ttttaatcct 180 cgtcctagtg aaggtgtatg tgtccgtaat cactgtgatg gcgactgggg aggtgaagaa 240 cgtgaccaac caaatttccc atttgatgat ggaagaagtt tcttactacg tattgaagtg 300 actgatagtg aatttagaac atatgtccat ggaagaccat acatagattt ctcccataga 360 ctggacctta gtagtgtcca ttatctgtac ttgactgatg gagcagaata ctatgacatc 420 acattccagg acagatatag tctgccatac agaacagaaa ttcctaatgg tatgcaggtg 480 ggtaaagctg tccgtatcac tggtgctgct caggacaacg atggattcag cattaacttt 540 ggctgtgact gtgagaatga gacctgtgcc ttccatttca atccccgtcc taatgaggga 600 gttgtaatca gaaatgctaa tttaggaggc tggggtgaag aagaacggga ttatgatgcc 660 gagtttccat tttccccagg aaatttcttt gatgccttgt ttgtctgtac tgaagaccag 720 tattgtgttt acatcaatga gaagtatttt gccaatttta accatcgttg tggtatatca 780
[0007] gatgtcagcc acttccatgt acagggtaac atggatatca gaaatgtgga gtattatgaa 840 ccaatggaag atgactttgt aaaacctatc ccatcaggct tagagaaagg tgatgttctt 900 ctgtttagag gattcatgaa acctggcgga gacacgtttt caatcaatct gatgaatggt 960 actgatatag gatcagacat tgccttccat ctcaaccccc gtgttgggga gggacaggtt 1020 gttatgaact gttgtatgga tggaggatgg ggtgaagagg aaagagaaga tcttccctca 1080 gtcctcactg acagaatacc atttgaggtc aagattgtaa ccaagagaaa caagttcaag 1140 gtctatgtca atggaaaaaa atacatgaag ttccgtgcca gggggaatgt agaggacatc 1200 aaaggtgtga atgttaaagg agatgctttt atataccaga cgaaactact cagaaaactg 1260 gataaaccag tctgggaaag aattccagga aatttccgtg aaggtggatg ggttgtcgtt 1320 tcaggaattc caaaaaaaga atctggaggt tttgccatca atttcxgctg tgctgatgat 1B80 gatgacagtg acattgcttt ccattttaac ccacgtctta atgaaggtga cactgtgcgt 1440 aatgcatgtg taggtggtgg atggcaggat gaagaaaggg atcaaccttg cttcccattt 1500 gaagaaaaag acacatttga agtagccatc aatgcctggc ctgataaatt tattacatat 1560 gttaacggta aacattacat agatttcaat cacagacttc ctgtggacag tgtgtgccac 1620 atacagctga cgggagatgc tgatttcttt gagcctgaat tcttctga 1668
【權(quán)利要求】
1. 一種泥蚶半乳糖凝集素，其特征在于，所述的半乳糖凝集的氨基酸序列為SEQ ID NO :1。
2. -種基因，其特征在于，所述的基因編碼權(quán)利要求1所述的泥蚶半乳糖凝集素。
3. 如權(quán)利要求2所述的基因，其特征在于，所述的基因的核苷酸序列為SEQ ID NO :2。
4. 一種重組質(zhì)粒，其特征在于，所述的重組質(zhì)粒用于表達權(quán)利要求1所述的泥蚶半乳 糖凝集素。
5. 權(quán)利要求1所述的泥蚶半乳糖凝集素在制備飼料添加劑或細菌性疾病疫苗中的應(yīng) 用。
【文檔編號】C07K14/435GK104109195SQ201410345584
【公開日】2014年10月22日 申請日期:2014年7月19日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月19日
【發(fā)明者】包永波, 林志華, 董迎輝 申請人:浙江萬里學(xué)院