從杉皮中提取紫杉醇的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及從杉皮中提取紫杉醇的方法。屬生物【技術(shù)領(lǐng)域】。本發(fā)明以普通植物杉樹之皮為原料，采用“水提石沉法”提取分離紫杉醇。僅以乙醇為溶劑，以自創(chuàng)的“YCXY-1號”除雜劑除雜，可有效去除脂類、類脂類及葉綠素等雜質(zhì)，既保證了產(chǎn)品無有毒有害溶劑殘留，提高了安全性，又簡化了操作程序，降低了生產(chǎn)成本，有利于紫杉醇的富集和純化，已具備批量生產(chǎn)高純度紫杉醇的技術(shù)條件。本發(fā)明采用復(fù)合酶制劑（也可不用）對原料進行預(yù)處理,原料用乙醇提取，所得浸膏加“YCXY-1號”除雜劑除雜。經(jīng)酶解處理的原料用乙醇提取，所得浸膏加“YCXY-1號”除雜劑除雜，可進一步除去脂類、黃酮類等雜質(zhì)。提取物以乙醇溶解，調(diào)控其pH達到一定值，用活性炭等脫色劑進行脫色處理,經(jīng)凝析分離、純化精制、烘干得無色針狀結(jié)晶紫杉醇,其純度可達95%以上。
【專利說明】從杉皮中提取紫杉醇的方法
[0001]所屬【技術(shù)領(lǐng)域】:
本發(fā)明屬生物【技術(shù)領(lǐng)域】。
[0002]【背景技術(shù)】:
紫杉醇是存在于天然植物甜菊葉中的五環(huán)三萜類化合物，具有廣泛的生物活性，且毒性極小，副作用少，成為當(dāng)前國內(nèi)外研究開發(fā)的熱點。
[0003]本發(fā)明以甜菊葉為原料，采用“水提石沉法”提取分離紫杉醇。即以乙醇為溶劑，不加用其它有機溶劑，以自創(chuàng)的“YCXY-1號”除雜劑除雜，能有效去除脂類、類脂類及葉綠素等雜質(zhì)，既保證了產(chǎn)品無有毒有害溶劑殘留，提高了安全性，又簡化了操作程序，降低了生產(chǎn)成本，有利于紫杉醇的富集和純化，已具備批量生產(chǎn)高純度紫杉醇的技術(shù)條件。
[0004]本發(fā)明采用復(fù)合酶制劑(也可不用)對原料進行預(yù)處理，一方面促使紫杉醇與植物細胞壁脫離，從而加速紫杉醇的充分釋放；另一方面能將一些脂類、類脂類等雜質(zhì)水解轉(zhuǎn)化為小分子水溶性物質(zhì)，以利除去。經(jīng)酶解處理的原料用乙醇提取，所得浸膏加“YCXY-1號”除雜劑除雜，可進一步除去脂類、黃酮類等雜質(zhì)。提取物以乙醇溶解，調(diào)控其pH達到一定值，用活性炭等脫色劑進行脫色處理，經(jīng)凝析分離、純化精制、烘干得無色針狀結(jié)晶紫杉醇，其純度可達95 %以上。
[0005]發(fā)明目的:
本發(fā)明的目的是要提供一種從植物原料中提取紫杉醇的方法，擺脫柱層析法的技術(shù)束縛，克服其需使用氯仿、正丁醇等有毒有害溶劑、工藝復(fù)雜、溶劑消耗大、成本高、安全性差、難以實現(xiàn)批量生產(chǎn)等諸多缺點，實現(xiàn)紫杉醇的快速、安全、高純、批量生產(chǎn)。
[0006]技術(shù)方案:
將干燥的藥用植物體粉碎成一定粗細的提取原料，用溫水濕潤后，加入適量酶(或復(fù)合酶)制劑，在室溫下進行酶解處理1-2天后，再加7-10倍量熱水浸提1-3小時，過濾得提取液；重復(fù)2次。將提取液濃縮至1:1體積，得浸膏。經(jīng)水沉降洗滌后，加“YCXY-1號”除雜劑處理2-3次，過濾，調(diào)節(jié)pH值，加脫色劑煮沸脫色20-120分鐘，過濾，經(jīng)凝析分離、純化精制、烘干得紫杉醇。
[0007]有關(guān)效果:依照本發(fā)明的技術(shù)方案生產(chǎn)的紫杉醇，其純度達95.0 %以上。
[0008]發(fā)明的優(yōu)點及效果:
①創(chuàng)用生物酶制劑水解植物細胞壁，促使紫杉醇脫離，加速其釋放，提高了紫杉醇的得率，加酶組紫杉醇得率明顯高于未加酶組(p〈0.01)。
[0009]②發(fā)明了“水提石沉法”生產(chǎn)高純度紫杉醇的新工藝。僅以純水為溶劑，在國內(nèi)率先突破了從天然藥物中規(guī)?；a(chǎn)紫杉醇的技術(shù)難題。
[0010]③創(chuàng)用“YCXY-1號”高效除雜劑技術(shù)，不僅簡化了操作工序，降低了生產(chǎn)成本，而且顯著提高了分離效果和產(chǎn)品的安全性，實現(xiàn)了紫杉醇的有效分離，產(chǎn)品純度達95.0 %以上，為工業(yè)生產(chǎn)紫杉醇創(chuàng)造了技術(shù)條件。
【權(quán)利要求】
1.從杉皮中提取紫杉醇的方法。
2.按如下工藝步驟進行: 1)將植物原料進行預(yù)發(fā)酵處理；制得發(fā)酵物； 2)發(fā)酵物用乙醇作溶劑進行提取，過濾得提取液，連續(xù)2次，濃縮至1:1得浸膏； 3)浸膏用水加“YCXY-1號”除雜劑進行除雜處理，過濾，重復(fù)3次。
3.然后加入脫色劑活性炭進行脫色處理，得提取物粗品； 將提取物粗品經(jīng)凝析，純化、烘干處理制得紫杉醇。
4.依據(jù)權(quán)利要求1所述的從杉皮原料中提取紫杉醇的方法，其特征是按如下工藝步驟進行: 1)在植物原料中加入適量溫水以濕潤原料，再加原料重量1-10%的復(fù)合酶制劑，于室溫下預(yù)發(fā)酵處理24-48小時，過濾去除酶解液得提取物； 2)將提取物用50-100°C，為提取物重量7-10倍的乙醇進行提取，過濾得提取液，再回收乙醇得浸膏； 3)將浸膏加入濃度 為1-10%的一價或二價的金屬氫氧化物和/或它們的混合溶液，作除雜劑進行除雜處理；經(jīng)除雜處理后的溶液過濾，沉淀；沉淀物再用熱水溶解形成溶解液，調(diào)整溶解液的PH為9-12，然后加入脫色劑活性炭或白陶土或硅藻土進行脫色處理，時間20-120分鐘，在除雜和脫色處理過程中控制溶液溫度在室溫至沸騰下進行，最后過濾，得濾液提取物粗品； 4)將濾液提取物粗品的pH調(diào)至2-5之間后進行結(jié)晶，凝析分離，純化，精制，烘干制得紫杉醇。
5.依據(jù)權(quán)利要求2所述的從植物原料中提取紫杉醇的方法，其特征是步驟I)所述的復(fù)合酶制劑為固體或液體纖維素酶和/或與其它酶的混合物，其用量為所述植物原料重量的1-5 %。
6.依據(jù)權(quán)利要求1或2所述的從植物原料中提取紫杉醇的方法，其特征是:步驟3)所述除雜劑為濃度為2-8 %的氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化?丐和/或它們的混合溶液。
7.依據(jù)權(quán)利要求1或2所述的從植物原料中提取紫杉醇的方法，其特征是所述脫色劑為粉末或顆粒狀的活性炭或白陶土或硅藻土 ；其用量為每升脫色溶液1-10克脫色劑；時間30-100 分鐘。
8.依據(jù)權(quán)利要求1或2所述的植物原料中提取紫杉醇的方法，其特征是步驟2)所述提取物用50 °C至沸騰的乙醇作溶劑提取2-3次，每次1-2小時。
9.依據(jù)權(quán)利要求1或2所述的從植物原料中提取紫杉醇的方法，其特征是步驟3)浸膏用“YCXY-1號”除雜劑除雜2-3次。
10.依據(jù)權(quán)利要求1或2所述的從植物原料中提取紫杉醇的方法，其特征是所用植物原料先經(jīng)干燥粉碎后，再用溫水濕潤加復(fù)合酶制劑處理后進行提取。
11.依據(jù)權(quán)利要求1或2所述的從植物原料中提取紫杉醇的方法，其特征是所述的植物原料為杉皮。
12.依據(jù)權(quán)利要求1或2所述的從植物原料中提取紫杉醇的方法，其特征是所述的純水為飲用自來水、礦泉水或蒸餾水。
【文檔編號】C07D305/14GK104072447SQ201410349685
【公開日】2014年10月1日 申請日期:2014年7月22日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月22日
【發(fā)明者】李開泉, 曾曉敏 申請人:李開泉, 曾曉敏