一種從紅豆杉枝葉或樹皮中分離純化紫杉醇的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種從紅豆杉枝葉或樹皮中分離純化紫杉醇的方法。所述方法首先將紅豆杉枝葉或樹皮先用甲醇浸泡，超聲提取或回流提取，經(jīng)減壓濃縮得到浸膏；浸膏依次用石油醚和乙酸乙酯進(jìn)行萃取，得到乙酸乙酯浸膏；乙酸乙酯浸膏經(jīng)過堿性氧化鋁柱層析后得到富含紫杉醇的組分，再利用以甲醇-水為體系的部分沉淀法處理，得到紫杉醇粗品，最后以快速制備色譜為分離手段，以甲醇-水為洗脫體系，最終精制得到紫杉醇（純度>98.5%）。本發(fā)明的方法操作簡便、成本低、重復(fù)性好、效率高、所得產(chǎn)品純度高，可用于紫杉醇的規(guī)?；a(chǎn)。
【專利說明】一種從紅豆杉枝葉或樹皮中分離純化紫杉醇的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于天然藥物提取【技術(shù)領(lǐng)域】。更具體地，涉及一種從紅豆杉枝葉或樹皮中 分離純化紫杉醇的方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 南方紅豆杉（Tkras var. Mairei)，又稱美麗紅豆杉，為裸子植物門 (Gymnospermae )、紅豆杉科（Taxaceae )、紅豆衫屬（Taxus )植物。它作為紅豆杉屬植物中 分布最廣泛的一種，主要分布于長江流域、南嶺山脈山區(qū)等地，是我國生產(chǎn)抗癌藥物紫杉醇 (Taxol)的主要樹種。紫杉醇是紅豆杉屬植物特有的次生代謝產(chǎn)物，它是最具抗癌活性的天 然化合物之一，也是目前國際市場上最熱門的新型抗癌藥物。紫杉醇的作用機(jī)理為促進(jìn)微 管蛋白聚合抑制解聚，保持微管蛋白穩(wěn)定，抑制細(xì)胞有絲分裂，主要用于治療肺癌、白血病、 前列腺癌、子宮癌等腫瘤疾病及艾滋病。然而，紫杉醇在紅豆杉屬植物中的含量相當(dāng)?shù)停ㄕ?樹皮干重的〇. 〇1%~〇. 06%左右)，而紅豆杉植物中含有許多與紫杉醇結(jié)構(gòu)相似的其它紫杉烷 (Taxanes)。由于這些紫杉烷類化合物在化學(xué)結(jié)構(gòu)和極性等方面都同紫杉醇極為相似，導(dǎo)致 紫杉醇的分離比較困難，分離純化工藝復(fù)雜。
[0003] 目前紫杉醇的分離純化方法主要有：（1)柱層析法，但操作比較復(fù)雜，效率不高， 而且需要不同填料結(jié)合使用；（2)制備型高效液相色譜法，對設(shè)備和試劑要求高，成本較 高，難以規(guī)模化生產(chǎn)；（3)高速逆流色譜法，需要進(jìn)行大量實(shí)驗(yàn)選擇合適的溶劑系統(tǒng)；（4)超 臨界流體萃取法，設(shè)備成本高，提取得到的化合物純度較低。
[0004] 因此，研究出一套簡單可行的分離純化方案對提高植物中紫杉醇的利用率具有非 常重要的意義。
[0005] 紫杉醇的結(jié)構(gòu)式如下：

【權(quán)利要求】
1. 一種從紅豆杉枝葉或樹皮中分離純化紫杉醇的方法，其特征在于，包括如下步驟：
51. 原料處理：將粉碎的紅豆杉材料過篩，用甲醇浸泡，超聲或回流提取后，經(jīng)減壓濃 縮得到浸膏；浸膏依次用石油醚和乙酸乙酯進(jìn)行萃取，得到乙酸乙酯浸膏；
52. 堿性氧化鋁柱層析：乙酸乙酯浸膏用二氯甲烷溶解后，利用堿性氧化鋁柱層析；以 二氯甲烷-甲醇溶液為洗脫劑，洗脫液經(jīng)減壓濃縮得到富含紫杉醇的組分1 ;
53. 部分沉淀法處理：將組分1以5?10 :1 mg/mL的料液比，用45%?55%的甲醇-水 溶液超聲溶解，過濾，再_20°C?10°C放置沉淀24?72 h后過濾，得到紫杉醇粗品；
54. 快速制備液相色譜分離： S4. 1.色譜柱預(yù)處理：以體積濃度為50%?75%的甲醇-水溶液為洗脫體系溶液平衡 制備型中低壓液相色譜柱； S4. 2.進(jìn)樣：步驟S3獲得的紫杉醇粗品加入體積濃度70%?90%的甲醇-水溶解，得濃 度為100?250 mg · ml/1的樣品溶液，離心，取上清，得到樣品溶液，進(jìn)樣體積為1?5 mL ; S4. 3.洗脫：以體積濃度為50%?75%的甲醇-水溶液為洗脫體系溶液洗脫色譜柱，流 速控制在8?15 mL · mirT1，收集洗脫液； S4. 4.洗脫液經(jīng)減壓濃縮和真空干燥，得到紫杉醇固體。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟S1所述過篩是過24目篩；步驟S1 所述料液比為1 :1〇?20 g/mL ;所述超聲的時間為0. 5?2 h。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟S2的具體操作如下： S2.1.層析用堿性氧化鋁190°C干燥6 h后，置干燥器中放至室溫，用二氯甲烷溶液浸 泡，超聲脫氣5 min，裝柱，平衡； S2. 2.乙酸乙酯浸膏用二氯甲烷溶解至濃度為100?250 mg · ml/1，離心取上清液，得 到樣品溶液； S2. 3.清洗柱后上樣，以甲醇體積濃度為2%?5%的二氯甲烷-甲醇溶液為洗脫劑除去 未被吸附的雜質(zhì)，流速為3?5mL · mirT1，洗脫50 min ; S2. 4.再以甲醇體積濃度為5%?10%的二氯甲烷-甲醇溶液為洗脫劑洗脫色譜柱，流 速為3?5 mLmiiT1，洗脫30 min，收集洗脫液，60°C以下減壓濃縮得到富含紫杉醇的組分 1〇
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟S3所述部分沉淀法處理是將組分1 以8. 9 :1 mg/mL的料液比，用48. 1%的甲醇-水溶液超聲溶解后，過濾，再-20°C放置沉淀 48. 7 h后過濾。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟S4.1.所述制備型中低壓液相色譜 柱為C18鍵合相填料；色譜柱填料平均粒徑為30?6〇Mm ;所述甲醇-水溶液的用量為柱體 積的5?10倍。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟S4. 3.的洗脫過程采用在線雙波長 紫外檢測，自動收集洗脫液，紫外檢測波長為227 nm和254 nm;步驟S4. 4.所述真空干燥 的溫度為30°C?60°C，優(yōu)選溫度為30°C?35°C。
【文檔編號】C07D305/14GK104230858SQ201410388561
【公開日】2014年12月24日 申請日期:2014年8月8日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月8日
【發(fā)明者】徐新軍, 梁智坤, 陶俊妃 申請人:中山大學(xué)