一種葒草苷和異葒草苷的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種分離制備碳苷黃酮類異構體的方法，特別涉及一種利用動態(tài)軸向壓縮柱大規(guī)模分離制備葒草苷和異葒草苷的一種方法，該異構體由竹葉中提取獲得。此方法解決了采用傳統(tǒng)的分離制備碳苷黃酮類異構體所存在的成本高、收率低、生產周期長等問題。包括以下步驟：1）竹葉提取粗品溶解于水中，超聲處理，濾膜過濾，取濾液待用；2）使用制備液相色譜系統(tǒng)對過濾后的粗品進行分離純化；3）將對應譜帶洗脫液中的溶劑蒸干，即可得到色譜純?yōu)?8.5%的葒草苷和異葒草苷單體。本發(fā)明所述的分離純化方法適合于工業(yè)化分離制備碳苷黃酮類異構體。
【專利說明】一種葒草苷和異葒草苷的制備方法

【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及了一種碳苷黃酮類異構體的大規(guī)模分離制備方法，具體涉及一種葒草苷和異葒草苷的分離制備方法。

【背景技術】
[0002]葒草苷及其異構體異葒草苷，屬于黃酮苷類化合物，易溶于水、乙醇，難溶于苯、氯仿、乙醚等有機溶劑，是竹葉黃酮的主要成分。具有明顯的抗?jié)?、解痙、抗菌、抗炎、降血月旨、鎮(zhèn)痛和雌性激素等生物活性和生理活性作用。而竹葉在我國具有悠久的藥用歷史，是一味著名的清熱解毒良藥。竹葉提取物的功能因子主要是黃酮苷，竹葉黃酮具有多方面的生物活性，如抗脂質過氧化、抗衰老、清除自由基、阻斷亞硝基化、降低血脂及血膽固醇、抗菌消炎、抗病毒、增強免疫功能、抑制移植性腫瘤在宿主體內的生長等方面的作用。竹葉黃酮以其巨大的資源優(yōu)勢及良好的藥理活性已成為一種非常有前途的天然藥物，是具有廣闊開發(fā)前景的新型藥用資源。葒草苷和異葒草苷現(xiàn)有的提取工藝多是微波提取、大孔樹脂分離、開放ODS柱色譜、微孔濾膜分離等，方法操作繁瑣，分離效果差，回收率低。而現(xiàn)有文獻中對從竹葉中提取分離葒草苷和異葒草苷的研究也較少，也沒有文獻具體研究葒草苷和異葒草苷相關的大規(guī)模的分離制備方法。


【發(fā)明內容】

[0003]本發(fā)明的目的在于提供一種大規(guī)模分離制備葒草苷和異葒草苷的方法，其技術思路是根據(jù)反相高效液相色譜法的原理，利用動態(tài)軸向壓縮柱大規(guī)模分離制備葒草苷和異葒草苷，解決目前在純化葒草苷和異葒草苷的過程中所存在的時間長及純度不高等技術問題，操作簡單，產品含量高，可重復性好，該方法包括以下步驟:
a.將竹葉提取粗品溶于水后進行超聲并過濾，一般將竹葉提取粗品配制成飽和溶液，具體實施時，可根據(jù)實際溶解效果進行調整；
b.取配制好的溶液，用填充好固定相填料的動態(tài)軸向壓縮柱進行分離，分別收集葒草苷和異葒草苷對應譜帶的餾分；
c.將步驟b中收集的對應譜帶洗脫液中的溶劑蒸干，即可得到色譜純?yōu)?8.5%以上的葒草苷和異葒草苷單體。
[0004]本發(fā)明的有益效果是可直接采用粗提的竹葉提取粗品來制備，不需要大量的前處理，簡單、易控制，工藝技術簡化，使用的流動相也是反相高效液相色譜中常用的試劑，適用于大規(guī)模制備。高效液相色譜測定中，純度高于98.5%，完全可用于藥物和功能性食品的開發(fā)。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0005]圖1是竹葉提取粗品的液相色譜法測定圖譜。
[0006]圖2是葒草苷單體液相色譜法測定圖譜。
[0007]圖3是異葒草苷單體液相色譜法測定圖譜。
[0008]圖4是分離純化葒草苷和異葒草苷的制備譜圖。

【具體實施方式】
[0009]實施例1
1.取Ig竹葉提取物粗品溶于水，配制成飽和溶液，超聲處理，過濾除去固體顆粒，收集濾液待用。
[0010]2.將步驟I的濾液泵入動態(tài)軸向壓縮柱制備色譜系統(tǒng)，柱填充尺寸為Φ 50 X 250mm,填料為十八烷基硅烷鍵合硅膠的反相硅膠，粒徑為30um，上樣量lg，O到40分鐘，乙腈/水的體積比由20:80到40:60，紫外可見光度檢測器的檢測波長為330nm，收集保留時間在16?19min異葒草苷的餾分，2(T23min葒草苷的餾分，當葒草苷和異葒草苷洗脫完畢后，流動相切換成高比例乙腈，將后端雜質沖出，一個分離周期結束。冷凍干燥后，HPLC檢測分析純度分別為98.9%和99.1%。
[0011]實施例2
1.取2g竹葉提取物粗品溶于水，配制成飽和溶液，超聲處理，過濾除去固體顆粒，收集濾液待用。
[0012]2.將步驟I的濾液泵入動態(tài)軸向壓縮柱制備色譜系統(tǒng)，柱填充尺寸為Φ 50 X 250mm,填料為十八烷基硅烷鍵合硅膠的反相硅膠，粒徑為45um，上樣量2g，O到40分鐘，乙腈/水的體積比由25:75到50:50，紫外可見光度檢測器的檢測波長為330nm，收集保留時間在15?20min異葒草苷的餾分，24min葒草苷的餾分，當葒草苷和異葒草苷洗脫完畢后，流動相切換成高比例乙腈，將后端雜質沖出，一個分離周期結束。冷凍干燥后，HPLC檢測分析純度分別為98.6%和98.7%。
[0013]實施例3
1.取1g竹葉提取物粗品溶于水，配制成飽和溶液，超聲處理，過濾除去固體顆粒，收集濾液待用。
[0014]2.將步驟I的濾液泵入動態(tài)軸向壓縮柱制備色譜系統(tǒng)，柱填充尺寸為Φ 150 X 250mm,填料為十八烷基硅烷鍵合硅膠的反相硅膠，粒徑為70um，上樣量10g，O到40分鐘，乙腈/水的體積比由20:80到50:50，紫外可見光度檢測器的檢測波長為330nm，收集保留時間在16?21min異葒草苷的餾分，22?25min葒草苷的餾分，當葒草苷和異葒草苷洗脫完畢后，流動相切換成高比例乙腈，將后端雜質沖出，一個分離周期結束。冷凍干燥后，HPLC檢測分析純度分別為98.5%和98.7%。
【權利要求】
1.一種分離制備葒草苷和異葒草苷的方法，其特征在于包括以下步驟: (1)將竹葉提取粗品溶于水后超聲處理，濾膜過濾，取濾液待用； (2)使用制備液相色譜系統(tǒng)對過濾后的粗品進行分離制備:通過動態(tài)軸向壓縮柱，流動相為乙腈和水的混合溶液，梯度洗脫分離，紫外檢測器對樣品進行檢測，分段收集目的峰值的餾分； (3)將收集到的餾分進行減壓旋蒸濃縮、冷凍干燥，得到棕色粉末狀產品，經檢測純度達98.5%以上。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種分離制備葒草苷和異葒草苷的方法，其特征是:所述的竹葉提取粗品為水提取或有機溶劑沉淀后所得。
3.根據(jù)權利要求1所述的一種分離制備葒草苷和異葒草苷的方法，其特征是:所述色譜系統(tǒng)的動態(tài)軸向壓縮柱內填充固定相為十八烷基硅烷鍵合硅膠的反相硅膠，其粒度范圍
10 μ m^75 μ m。
4.根據(jù)權利要求1所述的一種分離制備葒草苷和異葒草苷的方法，其特征是:動態(tài)軸向壓縮柱的填充內徑范圍為5(T200mm。
5.根據(jù)權利要求1所述的一種分離制備葒草苷和異葒草苷的方法，其特征是:流動相中乙腈與水的體積比(V/V)范圍為20:80?50:50。
【文檔編號】C07D407/04GK104370895SQ201410416858
【公開日】2015年2月25日 申請日期:2014年8月22日 優(yōu)先權日:2014年8月22日
【發(fā)明者】張宇, 張大兵, 李勝迎 申請人:江蘇漢邦科技有限公司