一種滑桃樹(shù)新的分離純化方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及植物有效成分提取【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種滑桃樹(shù)新的分離純化方法。本發(fā)明的技術(shù)方案包括以下步驟：將滑桃樹(shù)種子粉碎，用飽和石灰水浸泡，浸提液濃縮成浸膏，再用乙醇回流提取，減壓回收乙醇，通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂，乙醇溶液洗脫，洗脫液濃縮后通過(guò)氧化鋁柱層析，乙酸乙酯-乙醇混合溶液梯度洗脫，收集目標(biāo)成分，減壓回收試劑，放置沉淀，收集沉淀物用無(wú)水乙醇回流溶解，結(jié)晶，二氯甲烷-丙酮重結(jié)晶得到產(chǎn)品。
【專利說(shuō)明】一種滑桃樹(shù)新的分離純化方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于植物有效成分提取【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種滑桃樹(shù)新的分離純化方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 滑桃樹(shù)新（Trewiasine)，分子式為 C37H52ClN30n，分子量為 750. 29，mp. 173-175°C， 是從大卓戈科（Euphorbiaceae) Isothecium subdiversoforme 滑桃樹(shù) Trewia nudiflora L.種子中分離得到的一種生物堿類活性物質(zhì)。實(shí)驗(yàn)研究表明，滑桃樹(shù)新具有廣泛的生理活 性，2. 5yg/kg時(shí)，對(duì)小鼠艾氏癌的延命率為183%，2. 5?10yg/kg時(shí)，對(duì)P388白血病小鼠 的治愈率為56%-75%。對(duì)多種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腫瘤如：腹水型S180、肝癌、U14及Lewis肺癌等均 有明顯療效。對(duì)4種人體腫瘤細(xì)胞有明顯細(xì)胞毒活性，尤以U937最為敏感，1 μ g/mL時(shí)，抑 制率>90%。
[0003] 目前尚未見(jiàn)滑桃樹(shù)新的提取純化方法方面的報(bào)道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種滑桃樹(shù)新的分離純化方法，該方法能夠提取 分離得到高含量的滑桃樹(shù)新晶體，方法簡(jiǎn)單可行、晶型好。
[0005] 本發(fā)明的分離純化技術(shù)方案如下： 一種滑桃樹(shù)新的分離純化方法，其特征在于包括以下步驟： (1) 提取：將原料藥材粉碎，加入飽和石灰水浸泡4-8小時(shí)，然后用乙醇溶液回流提取， 減壓回收乙醇，得到提取濃縮液； (2) 大孔樹(shù)脂柱層析：將提取濃縮液加水分散，再通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂吸附柱中，柱徑高 比為1:8-1:20,室溫下以30-95%乙醇梯度洗脫，收集滑桃樹(shù)新洗脫液，減壓蒸餾回收乙醇， 得乙醇洗脫液； (3) 氧化鋁柱層析：將乙醇洗脫液加入氧化鋁柱頂端，以乙酸乙酯-乙醇混合溶液梯度 洗脫，收集滑桃樹(shù)新流分，減壓回收試劑至有沉淀析出，放置沉淀； (4) 重結(jié)晶：將步驟（3)所得沉淀物用無(wú)水乙醇回流溶解，過(guò)濾，結(jié)晶，二氯甲烷-丙酮 重結(jié)晶得滑桃樹(shù)新。
[0006] 所述步驟（2)中30-95%乙醇梯度洗脫，先用30-55%乙醇洗脫，再用80-95%乙醇 洗脫，收集80-95%乙醇洗脫液，洗脫流速為1-2. 5BV/h，洗脫用量為3-6BV。
[0007] 所述步驟（3)中氧化鋁柱為中壓柱，氧化鋁為100-300目的中性氧化鋁。
[0008] 所述步驟（3)中乙酸乙酯-乙醇溶液梯度洗脫按乙酸乙酯-乙醇體積比1:0、1:1、 1:3、1:5依次洗脫。
[0009] 所述步驟（4)中二氯甲烷-丙酮體積比為5:1。
[0010] 本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明采用大孔樹(shù)脂和中壓氧化鋁柱層析結(jié)合，分離效果 好，上樣量大，生產(chǎn)周期短；通過(guò)無(wú)水乙醇結(jié)晶，二氯甲烷-丙酮重結(jié)晶，所得產(chǎn)品晶型好； 所用試劑毒性較低，是一種高效、低污染、低耗能的分離純化滑桃樹(shù)新的方法。

【具體實(shí)施方式】
[0011] 下面將結(jié)合【具體實(shí)施方式】進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限 于下列實(shí)施方式。
[0012] 實(shí)施例1 : 將滑桃樹(shù)種子干燥、粉碎，取5kg投入提取罐中，加入5倍量飽和石灰水室溫浸泡5h，然 后加入4倍量75%乙醇加熱回流提取2次，每次2h，合并提取液，提取液減壓回收乙醇，得到 提取濃縮液，加水分散，通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂柱(柱徑高比為1:10)，室溫條件下先用40%乙醇 洗脫，再用85%乙醇洗脫，收集85%乙醇洗脫液，減壓蒸餾回收乙醇，取200-300目的中性氧 化鋁裝柱，將乙醇洗脫濃縮液從頂端注入，加壓條件下將乙酸乙酯-乙醇混合溶液按體積 比1:0、1:1、1: 3、1:5依次注入柱中，收集滑桃樹(shù)新流分，減壓回收試劑至有沉淀析出，放置 沉淀，濾出沉淀，用無(wú)水乙醇回流溶解，結(jié)晶，再以二氯甲烷-丙酮（5:1)重結(jié)晶，干燥得滑 桃樹(shù)新576mg，含量95. 7%。
[0013] 實(shí)施例2: 將滑桃樹(shù)種子干燥、粉碎，取5kg投入提取罐中，加入8倍量飽和石灰水室溫浸泡6h，然 后加入6倍量80%乙醇加熱回流提取3次，每次1. 5h，合并提取液，提取液減壓回收乙醇，得 到提取濃縮液，加水分散，通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂柱(柱徑高比為1:18)，室溫條件下先用50%乙 醇洗脫，再用80%乙醇洗脫，收集85%乙醇洗脫液，減壓蒸餾回收乙醇，取100-200目的中性 氧化鋁裝柱，將乙醇洗脫濃縮液從頂端注入，加壓條件下將乙酸乙酯-乙醇混合溶液按體 積比1:0、1:1、1:3、1:5依次注入柱中，收集滑桃樹(shù)新流分，減壓回收試劑至有沉淀析出，放 置沉淀，濾出沉淀，用無(wú)水乙醇回流溶解，結(jié)晶，再以二氯甲烷-丙酮（5:1)重結(jié)晶，干燥得 滑桃樹(shù)新543mg，含量97. 3%。
[0014] 實(shí)施例3 : 將滑桃樹(shù)種子干燥、粉碎，取5kg投入提取罐中，加入10倍量飽和石灰水室溫浸泡4h， 然后加入3倍量65%乙醇加熱回流提取2次，每次1. 5h，合并提取液，提取液減壓回收乙醇， 得到提取濃縮液，加水分散，通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂柱(柱徑高比為1:20)，室溫條件下先用55% 乙醇洗脫，再用90%乙醇洗脫，收集85%乙醇洗脫液，減壓蒸餾回收乙醇，取100-200目的中 性氧化鋁裝柱，將乙醇洗脫濃縮液從頂端注入，加壓條件下將乙酸乙酯-乙醇混合溶液按 體積比1:0、1:1、1: 3、1:5依次注入柱中，收集滑桃樹(shù)新流分，減壓回收試劑至有沉淀析出， 放置沉淀，濾出沉淀，用無(wú)水乙醇回流溶解，結(jié)晶，再以二氯甲烷-丙酮（5:1)重結(jié)晶，干燥 得滑桃樹(shù)新572mg，含量95. 9%。
[0015] 實(shí)施例4: 將滑桃樹(shù)種子干燥、粉碎，取5kg投入提取罐中，加入6倍量飽和石灰水室溫浸泡8h，然 后加入5倍量70%乙醇加熱回流提取3次，每次2h，合并提取液，提取液減壓回收乙醇，得到 提取濃縮液，加水分散，通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂柱(柱徑高比為1:8)，室溫條件下先用30%乙醇 洗脫，再用95%乙醇洗脫，收集85%乙醇洗脫液，減壓蒸餾回收乙醇，取200-300目的中性氧 化鋁裝柱，將乙醇洗脫濃縮液從頂端注入，加壓條件下將乙酸乙酯-乙醇混合溶液按體積 比1:0、1:1、1: 3、1:5依次注入柱中，收集滑桃樹(shù)新流分，減壓回收試劑至有沉淀析出，放置 沉淀，濾出沉淀，用無(wú)水乙醇回流溶解，結(jié)晶，再以二氯甲烷-丙酮（5:1)重結(jié)晶，干燥得滑 桃樹(shù)新557mg，含量96. 3%。
【權(quán)利要求】
1. 一種滑桃樹(shù)新的分離純化方法，其特征在于包括以下步驟： (1) 提?。簩⒃纤幉姆鬯?，加入飽和石灰水浸泡4-8小時(shí)，然后用乙醇溶液回流提取， 減壓回收乙醇，得到提取濃縮液； (2) 大孔樹(shù)脂柱層析：將提取濃縮液加水分散，再通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂吸附柱中，柱徑高 比為1:8-1:20,室溫下以30-95%乙醇梯度洗脫，收集滑桃樹(shù)新洗脫液，減壓蒸餾回收乙醇， 得乙醇洗脫液； (3) 氧化鋁柱層析：將乙醇洗脫液加入氧化鋁柱頂端，以乙酸乙酯-乙醇混合溶液梯度 洗脫，收集滑桃樹(shù)新流分，減壓回收試劑至有沉淀析出，放置沉淀； (4) 重結(jié)晶：將步驟（3)所得沉淀物用無(wú)水乙醇回流溶解，過(guò)濾，結(jié)晶，二氯甲烷-丙酮 重結(jié)晶得滑桃樹(shù)新。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種滑桃樹(shù)新的分離純化方法，其特征在于：所述步驟（2) 中30-95%乙醇梯度洗脫，先用30-55%乙醇洗脫，再用80-95%乙醇洗脫，收集80-95%乙醇 洗脫液，洗脫流速為1-2. 5BV/h，洗脫用量為3-6BV。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種滑桃樹(shù)新的分離純化方法，其特征在于：所述步驟（3) 中氧化鋁柱為中壓柱，氧化鋁為100-300目的中性氧化鋁。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種滑桃樹(shù)新的分離純化方法，其特征在于：所述步驟（3) 中乙酸乙酯-乙醇溶液梯度洗脫按乙酸乙酯-乙醇體積比1:0、1:1、1:3、1:5依次洗脫。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種滑桃樹(shù)新的分離純化方法，其特征在于：所述步驟（4) 中二氯甲烷-丙酮體積比為5:1。
【文檔編號(hào)】C07D498/18GK104193763SQ201410445588
【公開(kāi)日】2014年12月10日 申請(qǐng)日期:2014年9月4日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月4日
【發(fā)明者】張金芳, 楊存 申請(qǐng)人:南京標(biāo)科生物科技有限公司