從山核桃外果皮中分離純化4,8-dht的方法及4,8-dht應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了從山核桃外果皮中分離純化4,8-DHT的方法及4,8-DHT應(yīng)用，通過它激式超聲發(fā)聲超聲提取得到山核桃外果皮提取液，減壓濃縮，然后過X-5大孔樹脂，用水與乙醇的混合溶液進(jìn)行梯度洗脫，收集水與乙醇體積比為4：6的混合液洗脫得到的洗脫液，減壓濃縮得到濃縮液，硅膠柱層析，用石油醚和乙酸乙酯的混合溶劑梯度洗脫，1/2柱體積收集一瓶流份，共收集36瓶流份，合并第10-18瓶流份，減壓濃縮，乙酸乙酯結(jié)晶，得4,8-二羥基-1-四氫萘酮結(jié)晶化合物，該4,8-DHT為1:1外消旋體，雜質(zhì)少，純度為99.5-99.8%，提取率達(dá)到94%以上，該4,8-DHT外消旋體具有抑制植物種子萌發(fā)和幼苗生長的作用。
【專利說明】從山核桃外果皮中分離純化4, 8-DHT的方法及4, 8-DHT應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及4，8-二羥基-1-四氫萘酮提取，具體涉及從山核桃外果皮中分離純化4，8- 二羥基-1-四氫萘酮的方法及4，8-DHT應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002]4，8_ 二輕基-1-四氫萘酮(4，8-DHT),化學(xué)名 4，8-dihydroxy-l-tetralone,無色細(xì)簇針狀結(jié)晶，其中4位與羥基相連的碳為一個(gè)手性碳。4，8-DHT的左旋對映體(-)被稱為reg1lone,右旋對映體(+)被稱為isosclerone。Reg1lone最早是從青核桃中鑒定出的，可用于治療皮膚瘙癢及痛等病癥。Isosclerone最早是從scIerotium中分離鑒定出，后來從一些真菌中也分離出了該化合物，它能引起葡萄灰色斑點(diǎn)病。山核桃外果皮中也含有4，8-DHT，是一個(gè)1:1外消旋體，熔點(diǎn)366-368K，溶于水、乙醇、丙酮及氯仿，[a]2°D=±0° (Cl.3，CH2Cl2)0目前公開了對山核桃外果皮中含有的4，8-DHT的鑒定，如用高效液相色譜法鑒定，一般用甲醇浸泡、回流提取山核桃外果皮提取物，再用色譜柱鑒定，4，8-DHT含量約0.036%左右。但未見從山核桃外果皮中分離純化4，8- 二羥基-1-四氫萘酮報(bào)道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種從山核桃外果皮中分離純化4，8-DHT的方法，該方法雜質(zhì)少，純度高，提取效率高。本發(fā)明還公開了 4，8-DHT在抑制植物種子萌發(fā)和幼苗生長的應(yīng)用。
[0004]本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為:從山核桃外果皮中分離純化4，8-DHT的方法，步驟如下:
(1)將風(fēng)干的山核桃外果皮粉碎，過45-60目篩，得到山核桃外果皮粉末；
(2)將山核桃外果皮粉末裝入超聲萃取釜中并加入蒸餾水，其中山核桃外果皮粉末與蒸餾水的質(zhì)量體積比為1:18-20 (Kg/L)，在超聲發(fā)生方式為:它激式超聲發(fā)聲，徑向振動(dòng)柱狀換能器，超聲波功率為100W，超聲頻率為28kHz，提取方式為間隔2min超聲一次，每次4min，于25°C氣升式攪拌條件下，超聲提取30_45min，過濾，得到山核桃外果皮提取液；
(3)將山核桃外果皮提取液在壓力為450-500Pa的條件下，減壓濃縮至初始體積的1/10，然后過 X-5 大孔樹脂，依次用體積比為 10:0、9:1、8:2、7:3、6:4、5:5、4:6、3:7、2:8、1:9,0:10的水與乙醇的混合溶液進(jìn)行梯度洗脫，每個(gè)梯度洗脫的水與乙醇混合溶液體積為5柱體積，洗脫過程中保持流速為2-3滴/秒，收集水與乙醇體積比為4:6的混合液洗脫得到的洗脫液，在壓力為450-500Pa的條件下，減壓濃縮55_70min，得到濃縮液；
(4)將上述濃縮液上200-300目的硅膠柱層析，依次用體積比為3:1，2:1，1:1的石油醚和乙酸乙酯混合溶劑梯度洗脫，體積比為3:1相的混合溶劑用量為10柱體積，體積比為2:1相的混合溶劑用量為5柱體積，體積比為1:1相的混合溶劑用量為3柱體積，洗脫流速5mL/min,每1/2柱體積收集一瓶流份，共收集36瓶流份，合并第10-18瓶流份，減壓濃縮，用乙酸乙酯結(jié)晶，得4，8- 二羥基-1-四氫萘酮結(jié)晶化合物。
[0005]4，8-DHT在抑制植物種子萌發(fā)和幼苗生長的應(yīng)用。
[0006]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于從山核桃外果皮中分離純化4，8-DHT的方法及4，8-DHT應(yīng)用，通過它激式超聲發(fā)聲超聲提取得到山核桃外果皮提取液，減壓濃縮，然后過X-5大孔樹脂，用水與乙醇的混合溶液進(jìn)行梯度洗脫，收集水與乙醇體積比為4:6的混合液洗脫得到的洗脫液，減壓濃縮得到濃縮液，硅膠柱層析，用石油醚和乙酸乙酯的混合溶劑梯度洗脫，1/2柱體積收集一瓶流份，共收集36瓶流份，合并第10-18瓶流份，減壓濃縮，乙酸乙酯結(jié)晶，得4，8- 二羥基-1-四氫萘酮結(jié)晶化合物，該4，8-DHT為1:1外消旋體，雜質(zhì)少，純度為99.5-99.8%，提取率達(dá)到94%以上，該4，8-DHT外消旋體具有抑制植物種子萌發(fā)和幼苗生長的作用。

【具體實(shí)施方式】
[0007]以下結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)描述。
[0008]實(shí)施例1
從山核桃外果皮中分離純化4，8-DHT的方法，將風(fēng)干的山核桃外果皮粉碎，過45-60目篩，得到山核桃外果皮粉末10g，將山核桃外果皮粉末裝入超聲萃取釜中并加入180-200ml蒸餾水，在超聲發(fā)生方式為:它激式超聲發(fā)聲，徑向振動(dòng)柱狀換能器，超聲波功率為100W，超聲頻率為28kHz，提取方式為間隔2min超聲一次，每次4min，于25 °C氣升式攪拌條件下，超聲提取30-45min，過濾，得到山核桃外果皮提取液；將山核桃外果皮提取液在壓力為450-500Pa的條件下，減壓濃縮至初始體積的1/10，然后過X-5大孔樹脂，依次用體積比為10:0、9:1、8:2、7:3、6:4、5:5、4:6、3:7、2:8、1:9、0:10 的水與乙醇混合溶液進(jìn)行梯度洗脫，每個(gè)梯度洗脫的混合溶液體積為5柱體積，洗脫過程中保持流速為2-3滴/秒，收集水與乙醇體積比為4:6的混合液洗脫得到的洗脫液，在壓力為450-500Pa的條件下，減壓濃縮55-70min,得到濃縮液；將上述濃縮液上200-300目的硅膠柱層析，依次用體積比為3:1，2:1,1:1的石油醚和乙酸乙酯混合溶劑梯度洗脫，體積比為3:1相的混合溶劑用量為10柱體積，體積比為2:1相的混合溶劑用量為5柱體積，體積比為1:1相的混合溶劑用量為3柱體積，洗脫流速5mL/min，1/2柱體積收集一瓶流份，共收集36瓶流份，合并第10-18瓶流份，在壓力為460-480Pa的條件下，減壓濃縮50_70min，加乙酸乙酯重結(jié)晶，得4，8- 二羥基-1-四氫萘酮結(jié)晶化合物0.00342g，提取率達(dá)到94%以上，采用高效液相色譜法測定，該結(jié)晶化合物為純度99.5-99.8%。
[0009]實(shí)施例2
將實(shí)施例1的4，8- 二羥基-1-四氫萘酮配置成0.lmM、0.5mM的處理液作對萵苣、蘿卜、黃瓜、洋蔥、小麥種子萌發(fā)抑制實(shí)驗(yàn)，取測試物種種子各100粒，均勻擺放在鋪有兩層濾紙、大小15X20 cm發(fā)芽盒，加10 ml不同濃度處理液(對照組為去離子水)，每個(gè)處理設(shè)置3個(gè)重復(fù)。培養(yǎng)條件為光周期25°C，12h ;暗周期15°C，12h。種子萌發(fā)以胚根突破種皮為標(biāo)準(zhǔn)，第四天和第七天記錄萵苣種子發(fā)芽數(shù)，第四天和第十天記錄蘿卜種子發(fā)芽數(shù)，第四天和第八天記錄黃瓜種子和小麥種子發(fā)芽數(shù)，第六天和第十二天記錄洋蔥種子發(fā)芽數(shù)。最后結(jié)果:0.1mM 4，8-DHT處理可以降低萵苣種子發(fā)芽數(shù)50%左右、小麥種子發(fā)芽數(shù)10%以上，對其它植物種有降低作用但效應(yīng)不顯著(p〈0.05) ；0.5mM 4，8-DHT處理都可以顯著降低測試上述植物種子發(fā)芽數(shù)，其中萵苣發(fā)芽數(shù)降低90%以上，蘿卜發(fā)芽數(shù)降低60%左右，黃瓜發(fā)芽數(shù)降低10%以上，洋蔥發(fā)芽數(shù)降低80%左右，小麥發(fā)芽數(shù)降低65%左右(p〈0.05)。
[0010] 實(shí)施例3
將實(shí)施例1的4，8- 二羥基-1-四氫萘酮配置成0.lmM、0.5mM的處理液作對萵苣、蘿卜、黃瓜、洋蔥、小麥幼苗生長的抑制實(shí)驗(yàn)，取胚根突破種皮種子各100粒，均勻擺放在鋪有兩層濾紙、大小15 X 20cm發(fā)芽盒，加入10 ml不同濃度處理液(對照組為去離子水)，每個(gè)處理設(shè)置3個(gè)重復(fù)。培養(yǎng)條件為光周期25°C，12h ;暗周期15°C，12h。每隔一天從發(fā)芽盒中隨機(jī)取5粒種子測其胚根、胚芽長度及鮮重，共測6次。0.1mM和0.5 mM 4，8-DHT處理可以顯著降低測試種胚根生長(p〈0.05)。0.1mM 4，8-DHT處理可以抑制萵苣胚芽生長45%左右，蘿卜胚芽生長15%左右，黃瓜胚芽生長16%左右，洋蔥胚芽生長30%左右，小麥胚芽生長10%左右(p〈0.05) ；0.5 mM 4，8-DHT處理可以抑制萵苣胚芽生長85%左右，蘿卜胚芽生長80%左右，黃瓜胚芽生長90%左右，洋蔥胚芽生長70%左右，小麥胚芽生長70%左右(p〈0.05)。
【權(quán)利要求】
1.從山核桃外果皮中分離純化4，8-DHT的方法，其特征在于步驟如下: (1)將風(fēng)干的山核桃外果皮粉碎，過45-60目篩，得到山核桃外果皮粉末； (2)將山核桃外果皮粉末裝入超聲萃取釜中并加入蒸餾水，其中山核桃外果皮粉末與蒸餾水的質(zhì)量體積比為I Kg:18-20L，在超聲發(fā)生方式為:它激式超聲發(fā)聲，徑向振動(dòng)柱狀換能器，超聲波功率為100W，超聲頻率為28kHz，提取方式為間隔2min超聲一次，每次4min，于25°C氣升式攪拌條件下，超聲提取30-45min，過濾，得到山核桃外果皮提取液； (3)將山核桃外果皮提取液在壓力為450-500Pa的條件下，減壓濃縮至初始體積的1/10，然后過 X-5 大孔樹脂，依次用體積比為 10:0、9:1、8:2、7:3、6:4、5:5、4:6、3:7、2:8、1:9,0:10的水與乙醇混合溶液進(jìn)行梯度洗脫，每個(gè)梯度洗脫水與乙醇混合溶液體積為5柱體積，洗脫過程中保持流速為2-3滴/秒，收集水與乙醇體積比為4:6的混合液洗脫得到的洗脫液，在壓力為450-500Pa的條件下，減壓濃縮55_70min，得到濃縮液； (4)將上述濃縮液上200-300目的硅膠柱層析，依次用體積比為3:1，2:1，1:1的石油醚和乙酸乙酯混合溶劑梯度洗脫，體積比為3:1相的混合溶劑用量為10柱體積，體積比為2:1相的混合溶劑用量為5柱體積，體積比為1:1相的混合溶劑用量為3柱體積，洗脫流速5mL/min,每1/2柱體積收集一瓶流份，共收集36瓶流份，合并第10-18瓶流份，減壓濃縮，用乙酸乙酯結(jié)晶，得4，8- 二羥基-1-四氫萘酮結(jié)晶化合物。
2.權(quán)利要求1分離純化的4，8-DHT在抑制植物種子萌發(fā)和幼苗生長的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】C07C49/747GK104292092SQ201410498593
【公開日】2015年1月21日 申請日期:2014年9月26日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月26日
【發(fā)明者】王強(qiáng) 申請人:浙江大學(xué)寧波理工學(xué)院