一種利用高速逆流色譜分離純化制備安哥拉苷c、桃葉珊瑚苷和哈巴苷的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種利用高速逆流色譜分離純化制備安哥拉苷C、桃葉珊瑚苷和哈巴苷的方法，將玄參藥材粉碎、乙醇提取后，經(jīng)大孔吸附樹脂富集得到安哥拉苷C粗提物、桃葉珊瑚苷和哈巴苷混合粗提物，安哥拉苷C粗提物進(jìn)行高速逆流色譜分離得到安哥拉苷C粗品，然后通過中低壓制備色譜制得安哥拉苷C；桃葉珊瑚苷和哈巴苷混合粗提物進(jìn)行高速逆流色譜分離得到桃葉珊瑚苷粗品A和哈巴苷粗品，桃葉珊瑚苷粗品A通過中低壓制備色譜結(jié)合制備液相色譜制得桃葉珊瑚苷，哈巴苷粗品通過制備色譜分離制得哈巴苷。本發(fā)明采用采用高速逆流色譜法制備，避免了樣品的損耗，具有分離效果好，溶劑用量少，無污染，高效、快速的特點(diǎn)。
【專利說明】一種利用高速逆流色譜分離純化制備安哥拉苷C、桃葉珊 瑚苷和哈巴苷的方法 (一）

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于天然藥物分離領(lǐng)域，涉及一種分離純化安哥拉苷C、桃葉珊瑚苷和哈巴 苷的方法，尤其涉及一種利用高速逆流色譜分離純化高純度安哥拉苷C、桃葉珊瑚苷和哈巴 苷的方法。 (二）

【背景技術(shù)】
[0002] 玄參為玄參科植物玄參ScrophularianingpoensisHemsl的干燥根。中醫(yī)認(rèn)為 玄參味甘、苦、咸，其性微寒，具有滋陰涼血、瀉火解毒等功效，一般用于熱病煩躁、發(fā)斑、夜 寐不寧，自汗盜汗，喉嚨腫痛等癥，為臨床常用中藥。
[0003] 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)表明，玄參中含萜類、苷類、生物堿等成分，具有抗炎、抗腫瘤、保肝作用。
[0004] 安哥拉苷C分子結(jié)構(gòu)式如下：
[0005]

【權(quán)利要求】
1. 一種利用高速逆流色譜分離純化制備安哥拉苷C、桃葉珊瑚苷和哈巴苷的方法，其 特征在于所述方法包括以下步驟： (1) 將玄參藥材粉碎成粗粉，加入體積分?jǐn)?shù)30%的乙醇溶劑中，加熱至回流提取1-3 次，提取液趁熱過濾，冷卻，濾液減壓除去溶劑，得到乙醇提取物； (2) 將乙醇提取物加入填充有大孔吸附樹脂的色譜柱中，用水和乙醇的混合溶劑梯度 洗脫，分別收集含有安哥拉苷C的洗脫液、含有桃葉珊瑚苷和哈巴苷的洗脫液，減壓回收乙 醇，干燥、分別得到安哥拉苷C粗提物、桃葉珊瑚苷和哈巴苷混合粗提物； ⑶將安哥拉苷C粗提物進(jìn)行高速逆流色譜分離，以體積比為4 :6 :10的正丁醇、乙酸 乙酯、水組成高速逆流溶劑體系，將所述高速逆流溶劑體系混合充分后靜置，按上下兩相分 開，取上相為固定相，下相為流動(dòng)相，將固定相充滿高速逆流色譜儀的多層線圈分離柱，設(shè) 定高速逆流色譜儀，在500?1000r/min轉(zhuǎn)速下，以0. 5?5ml/min的流速注入流動(dòng)相，以 波長(zhǎng)190-380nm的紫外檢測(cè)器檢測(cè)，當(dāng)明顯有流動(dòng)相流出時(shí)，取安哥拉苷C粗提物，用上相、 下相體積比1 :1的混合溶劑溶解后進(jìn)樣，根據(jù)紫外檢測(cè)器光譜圖的峰形收集含安哥拉苷C 的流出液，濃縮、干燥，制得安哥拉苷C粗品； (4) 將安哥拉苷C粗品用中低壓制備色譜進(jìn)行純化，用水、甲醇體積比1 :1的混合溶劑 進(jìn)行等度洗脫，流速35mL/min，根據(jù)波長(zhǎng)210nm的紫外檢測(cè)器的光譜圖的峰形收集含安哥 拉苷C的洗脫液、減壓濃縮，冷凍干燥，制得安哥拉苷C純品； (5) 將桃葉珊瑚苷和哈巴苷混合粗提物進(jìn)行高速逆流色譜分離，以體積比為2:7:8:8 的正丁醇、乙醇、硫酸銨飽和溶液、水組成高速逆流溶劑體系，將所述高速逆流溶劑體系混 合充分后靜置，按上下兩相分開，取下相為固定相，上相為流動(dòng)相，將固定相充滿高速逆流 色譜儀的多層線圈分離柱，設(shè)定高速逆流色譜儀，在500?1000r/min轉(zhuǎn)速下，以0. 5? 5ml/min的流速注入流動(dòng)相，以波長(zhǎng)190-380nm的紫外檢測(cè)器檢測(cè)，當(dāng)明顯有流動(dòng)相流出 時(shí)，取桃葉珊瑚苷和哈巴苷混合粗提物，用上相、下相體積比1 :1的混合溶劑溶解后進(jìn)樣， 定時(shí)收集流出液，用HPLC檢測(cè)，合并相同成分的流出液，分別得到含桃葉珊瑚苷的流出液 和含哈巴苷的流出液，濃縮、干燥，分別制得桃葉珊瑚苷粗品A、哈巴苷粗品； (6) 將桃葉珊瑚苷粗品A通過中低壓制備色譜分離，用水和甲醇的混合溶劑梯度洗脫， 流速35mL/min，波長(zhǎng)210nm的紫外檢測(cè)器檢測(cè)，定時(shí)收集洗脫液，用HPLC檢測(cè)，合并相同成 分的洗脫液，收集得到含桃葉珊瑚苷的洗脫液，濃縮，干燥，制得桃葉珊瑚苷粗品B ; (7) 桃葉珊瑚苷粗品B再通過制備液相色譜進(jìn)行純化，以甲醇、水體積比5:95的混合溶 劑等度洗脫，流速3mL/min，根據(jù)波長(zhǎng)210nm的紫外檢測(cè)器的光譜圖的峰形收集含桃葉珊瑚 苷的洗脫液，濃縮，干燥，制得桃葉珊瑚苷純品； (8) 取步驟（5)得到的哈巴苷粗品，通過制備液相色譜進(jìn)行純化，以甲醇、水體積比 12:88的混合溶劑等度洗脫，流速3mL/min，根據(jù)波長(zhǎng)210nm的紫外檢測(cè)器的光譜圖的峰形 收集含哈巴苷的洗脫液，濃縮，干燥，制得哈巴苷純品。
2. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟（1)中，乙醇溶劑的體積用量以粗粉 的質(zhì)量計(jì)為3?10L/kg，每次回流提取的時(shí)間為30-60min，提取次數(shù)為1-3次。
3. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟（2)中，所述大孔吸附樹脂為非極 性、弱極性或中極性的大孔吸附樹脂。
4. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟（2)中，所述大孔吸附樹脂為D101、 AB-8、DM301大孔吸附樹脂。
5. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟（2)中，所述大孔吸附樹脂為AB-8 大孔吸附樹脂。
6. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟（2)中，所述梯度洗脫的程序?yàn)椋?先用2-6倍柱體積的水洗脫，再用2-6倍柱體積的體積分?jǐn)?shù)10 %乙醇的水溶液洗脫，再 用2-6倍柱體積的體積分?jǐn)?shù)30%乙醇水溶液洗脫，再用2-6倍柱體積的體積分?jǐn)?shù)50%乙醇 水溶液洗脫，再用2-6倍柱體積的體積分?jǐn)?shù)95%乙醇水溶液洗脫。
7. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟（2)中，所述梯度洗脫的程序?yàn)椋?先用5倍柱體積的水洗脫，再用5倍柱體積的體積分?jǐn)?shù)10%乙醇的水溶液洗脫，再用5 倍柱體積的體積分?jǐn)?shù)30%乙醇水溶液洗脫，再用5倍柱體積的體積分?jǐn)?shù)50%乙醇水溶液洗 脫，再用5倍柱體積的體積分?jǐn)?shù)95%乙醇水溶液洗脫。
8. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟（6)中，梯度洗脫的程序是：以甲醇 為流動(dòng)相A，水為流動(dòng)相B，Omin，流動(dòng)相A的體積百分濃度為5 %，設(shè)定0至lOmin，流動(dòng)相A 的體積百分濃度線性上升至10 %，10至35min，流動(dòng)相A的體積百分濃度線性上升至30 %， 35至60min，流動(dòng)相A的體積百分濃度線性上升至50%。
9. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟（3)或步驟（5)中，所述紫外檢測(cè)器 的波長(zhǎng)為210?254nm。
10. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟（3)或步驟（5)中，高速逆流色譜 儀的條件為：800r/min轉(zhuǎn)速，流速1. 5ml/min。
【文檔編號(hào)】C07H1/08GK104327127SQ201410520014
【公開日】2015年2月4日 申請(qǐng)日期:2014年9月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月30日
【發(fā)明者】李行諾, 童勝?gòu)?qiáng), 張文強(qiáng), 錢夏娜, 顏繼忠 申請(qǐng)人:浙江工業(yè)大學(xué)