一種氫氯噻嗪半抗原和完全抗原及其制備方法
【專利摘要】一種氫氯噻嗪半抗原和完全抗原及其制備方法，屬于生物化工【技術(shù)領(lǐng)域】。本發(fā)明將氫氯噻嗪溶解于甲醇，加入碳酸鉀后，與6-溴已酸乙酯反應(yīng)，萃取分離得氫氯噻嗪半抗原。將氫氯噻嗪半抗原上的羧基與載體蛋白上的氨基進行偶聯(lián)，得到氫氯噻嗪完全抗原。實驗結(jié)果表明，用本發(fā)明的氫氯噻嗪完全抗原免疫動物得到的抗血清效價可達81000，檢測限為0.01ng/mL，半抑制濃度0.1ng/mL。產(chǎn)生的抗體特異性高、靈敏度高。本發(fā)明的抗原或抗體具有廣闊的應(yīng)用前景。
【專利說明】-種氨氯唾睫半抗原和完全抗原及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種氨氯喔嗦半抗原和完全抗原及其制備方法，屬于生物化工技術(shù)領(lǐng) 域。

【背景技術(shù)】
[0002] 氨氯喔嗦為利尿藥、抗高血壓藥，其結(jié)構(gòu)如化學(xué)式I所示。主要適用于也原性水 腫、肝原性水腫和腎性水腫；如腎病綜合征、急性腎小球腎炎、慢性腎功能衰竭W及腎上腺 皮質(zhì)激素與雌激素過多引起的水腫；高血壓；尿崩癥。在降壓類藥物、保健食品中非法添加 氨氯喔嗦，造成化學(xué)藥品的用法用量無法控制，容易造成藥物濫用帶來的不良反應(yīng)，甚至造 成藥害，國家明令禁止在中成藥和保健食品中添加化學(xué)成分。患者在不知情的情況下服用， 也會影響醫(yī)生正確指導(dǎo)患者用藥。
[0003]

【權(quán)利要求】
1. 一種氫氯噻嗪半抗原，其特征在于結(jié)構(gòu)簡式如下：
2. 用權(quán)利要求1所述氫氯噻嗪半抗原制備的完全抗原，其特征在于：將氫氯噻嗪半抗 原化合物與載體蛋白偶聯(lián)后得到氫氯噻嗪完全抗原； 所述載體蛋白為牛血清白蛋白BSA、匙孔血藍蛋白KLH、血藍蛋白LPH、雞卵清白蛋白OVA或人血清白蛋白HAS中的一種。
3. 權(quán)利要求1所述氫氯噻嗪半抗原的制備方法，其特征在于步驟為：取氫氯噻嗪 0· 24mmol，溶解于20mL二甲基甲酰胺DMF中，加入碳酸鉀0· 48mmol，混勻，再加入6-溴已酸 乙酯0. 48mmol，60°C回流反應(yīng)12h，再加入20mL超純水和20mL乙酸乙酯，分離有機相；用旋 轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去乙酸乙酯，得氫氯噻嗪半抗原。
4. 權(quán)利要求2所述氫氯噻嗪完全抗原的制備方法，其特征在于步驟為： (1) 氫氯噻嗪半抗原的活化：將氫氯噻嗪半抗原用DMF溶解，加入NHS、EDC，其中氫氯噻 嗪半抗原：NHS:EDC的摩爾比為1 : 1.5 : 1.5,在4°C下攪拌反應(yīng)6h，再在室溫下反應(yīng) 12h； (2) 載體蛋白的溶解：取載體蛋白，其中氫氯噻嗪半抗原：載體蛋白的摩爾比為80 : 1，用0.IMpH9. 6碳酸鹽緩沖液溶解，其中溶解后的載體蛋白濃度大于3mg/mL，且碳酸鹽緩 沖液與DMF的體積比例為5 : 1 ; (3) 氫氯噻嗪完全抗原的制備：將步驟（1)所得活化的氫氯噻嗪半抗原溶液慢速滴加 到步驟（2)所得載體蛋白溶液中；室溫下反應(yīng)24h，用PBS緩沖液透析2天，期間換水4次， 即得到氫氯噻嗪完全抗原。
5. 權(quán)利要求2所述氫氯噻嗪完全抗原的另一種制備方法，其特征在于步驟為： (1) 氫氯噻嗪半抗原的活化：將氫氯噻嗪半抗原用DMF溶解，(TC預(yù)冷30min，(TC下加 入三正丁胺和氯甲酸異丁酯，其中氫氯噻嗪半抗原：三正丁胺：氯甲酸異丁酯的摩爾比為 1 : 2 : 2,在(TC攪拌反應(yīng)Ih; (2) 載體蛋白的溶解：取載體蛋白，其中氫氯噻嗪半抗原：載體蛋白的摩爾比80 : 1， 用0.IMpH7. 4磷酸鹽緩沖液溶解，(TC預(yù)冷30min，其中溶解后的載體蛋白濃度大于3mg/ mL； (3) 氫氯噻嗪完全抗原的制備：在0°C條件下，將步驟（1)所得活化的氫氯噻嗪半抗原 溶液在〇°C條件下慢速滴加到步驟（2)所得載體蛋白溶液中，(TC條件下反應(yīng)lh，然后室溫 下反應(yīng)24h;用PBS緩沖液透析2天，期間換水4次，即得到氫氯噻嗪完全抗原。
6. 權(quán)利要求2所述氫氯噻嗪完全抗原的應(yīng)用，其特征在于：將氫氯噻嗪完全抗原免疫 動物得到多克隆抗體和/或單克隆抗體，用于檢測氫氯噻嗪。
【文檔編號】C07K14/765GK104447619SQ201410573669
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年10月24日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月24日
【發(fā)明者】匡華, 彭雙, 胥傳來, 徐麗廣, 馬偉, 劉麗強, 宋珊珊, 吳曉玲 申請人:江南大學(xué)