萃取結(jié)合大孔樹脂吸附分離提取蘿芙木中利血平的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種超臨界CO2萃取結(jié)合大孔樹脂吸附分離提取蘿芙木中利血平的方法。技術(shù)方案如下：首先將蘿芙木根皮粉碎，粉末置于超臨界萃取釜中，在一定溫度和壓力下進(jìn)行超臨界提取，乙醇為夾帶劑，收集萃取物，用酸性水溶液溶解，上非極性大孔樹脂柱，收集含利血平組分的洗脫液，濃縮成固體后，再加丙酮溶解，加入甲醇結(jié)晶，最后重結(jié)晶得到純品。該方法工藝過程簡單，可操作性強(qiáng)，提取效率高，制備的利血平純度高，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
【專利說明】一種超臨界CO2萃取結(jié)合大孔樹脂吸附分離提取蘿芙木中利血平的方法
[0001]

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002]本發(fā)明屬于藥用活性成分提取分離【技術(shù)領(lǐng)域】，具體地說，涉及蘿芙木中利血平的提取分離方法。

【背景技術(shù)】
[0003]蘿芙木是夾竹桃科蘿芙木屬植物，生長在熱帶和亞熱帶地區(qū)，我國廣東、廣西、云南有生長。蘿芙木的干燥根及莖，具有清風(fēng)熱，降肝火，消腫解毒的功效，可用于治療感冒發(fā)熱、咽喉腫痛及蛇傷、跌打損傷等癥。蘿芙木中含有多種生物堿，已分離出的達(dá)上百種。其中，利血平是具有明確降壓效果的重要原料藥。
[0004]目前已公開的從蘿芙木中提取分離利血平的方法不多，早期采用苯萃取，目前主要是酸水提取法和酸醇提取法。專利CN 101491560 A公開了一種分離重要總生物堿的方法，未涉及分離純化利血平的工藝；專利CN 102627641 A公開了用含酸乙醇提取、非極性大孔樹脂吸附分離、弱酸性陽離子交換樹脂吸附分離、C18反相柱純化、結(jié)晶的工藝來分離純化利血平，工藝復(fù)雜步驟多，產(chǎn)品收率低，吸附劑成本高，不利于工業(yè)化生產(chǎn)；專利CN101475570 A公開了一種冰醋酸甲醇溶液滲濾提取、浸膏用氯仿萃取、再結(jié)晶的工藝分離純化利血平的方法，工藝當(dāng)中過多使用有毒試劑，溶劑易殘留，影響產(chǎn)品品質(zhì)。
[0005]本發(fā)明采用綠色溶劑超臨界CO2高效、快速提取蘿芙木中的利血平，經(jīng)過大孔樹脂吸附富集，結(jié)晶、重結(jié)晶純化，最終得到高純度利血平。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種簡單、操作性強(qiáng)、適合工業(yè)化生產(chǎn)的從蘿芙木中提取分離純化得到高純度積利血平的方法。
[0007]本發(fā)明的技術(shù)方案如下:
一種提取蘿芙木中利血平的方法，包括如下步驟:
1)將蘿芙木根皮粉碎至10目，置于超臨界0)2萃取釜中，萃取釜溫度35~60°C，萃取釜壓力12~40MPa，分離釜I壓力8~15 MPa，分離釜I溫度45~65°C，分離釜II壓力5~8 MPa,分離釜II溫度35~40°C，加入95%(v/v)的乙醇為夾帶劑，萃取時(shí)間為2~4 h，收集萃取釜1、II中萃取物；
2)萃取物用5~20%乙酸(v/v)溶解，過濾后上大孔樹脂柱，先水洗至中性，再用10~20%和30~70%乙醇(v/v)洗脫樹脂柱，收集富含利血平組分的洗脫液；
3)將洗脫液濃縮至浸膏后，用丙酮溶解，加入甲醇，低溫結(jié)晶；粗晶再經(jīng)丙酮-甲醇重結(jié)晶，真空干燥后，得到利血平純品。
[0008]上述制備方法中: 步驟I)中，所述95%乙醇(v/v)的加入量，按每10g生藥5~200ml計(jì)，優(yōu)選10~50mlo
[0009]步驟2)中，所述大孔樹脂為非極性或弱極性樹脂，優(yōu)選型號HZ818、HP-20、SIP1-101、AB-8、HPD100、D101 或 D130。
[0010]步驟2)中，所述大孔樹脂量(L)為蘿芙木根粉(kg)干重的5~15%。
[0011]步驟2)中，洗脫水用量為樹脂柱體積的3~5倍，10-20%乙醇(v/v)的用量為樹脂柱體積的2~5倍，30~70%乙醇(v/v)的用量為樹脂柱體積的3~6倍。
[0012]步驟3)中，所述加入甲醇的量為丙酮溶劑的1.5-4倍(v/v)。
[0013]步驟3)中，所述結(jié)晶與重結(jié)晶的條件為，溫度0~5°C，放置10~20h。
[0014]上述方法中所述的濃縮干燥均為采用現(xiàn)有的制備利血平方法中相同的操作。
[0015]本發(fā)明以蘿芙木為起始原料，采用超臨界CO2提取一大孔樹脂吸附分離純化一結(jié)晶一重結(jié)晶的工藝路線，實(shí)現(xiàn)高純度利血平的制備。本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn):
1、應(yīng)用超臨界CO2提取，避免了大量有毒有機(jī)溶劑的使用，同時(shí)超臨界CO2傳質(zhì)效率高，縮短了生產(chǎn)周期；
2、以大孔樹脂為吸附劑，乙醇水溶液梯度淋洗，成本低，可回收利用；
2、通過結(jié)晶、重結(jié)晶的方式純化產(chǎn)品，能耗小，成本低；
3、工藝過程簡單，可操作性強(qiáng)，適合工業(yè)化生產(chǎn)。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0016]圖1是超臨界CO2萃取結(jié)合大孔樹脂吸附分離提取蘿芙木中利血平的工藝流程圖。

【具體實(shí)施方式】
[0017]實(shí)施例1:
利血平提取物的制備:將200g蘿芙木根皮粉碎，過10目篩后，根粉置于超臨界萃取釜中進(jìn)行超臨界提取，萃取釜溫度60°C，萃取釜壓力35 MPa，分離釜I溫度45°C，分離釜I壓力8 MPa，分離釜II溫度35°C，分離釜II壓力5 MPa，加入95%乙醇40ml為夾帶劑，萃取時(shí)間為2h ；
將從分離釜I和分離釜II得到的萃取物合并后，用10%乙酸(v/v) 50ml溶解，過濾后上HP-20樹脂柱，水洗3個(gè)床層至中性，再用3個(gè)床層體積15%乙醇(v/v)和4個(gè)床層體積50%乙醇(v/v)洗脫，收集50%乙醇(v/v)洗脫液，減壓濃縮至干；
固體用15 ml丙酮溶解，再加入30 ml甲醇，攪拌I h，4°C放置15 h，抽濾得粗晶，粗晶加8 ml丙酮溶解，再加25 ml甲醇，4°C放置20 h，得重結(jié)晶，所得晶體放入45°C烘箱干燥4h得，得利血平0.056g。
[0018]經(jīng)HPLC分析檢測，利血平純度為98.78%。
[0019]實(shí)施例2:
利血平提取物的制備:將200g蘿芙木根皮粉碎，過10目篩后，根粉置于超臨界萃取釜中進(jìn)行超臨界提取，萃取釜溫度60°C，萃取釜壓力35 MPa，分離釜I溫度45°C，分離釜I壓力8 MPa，分離釜II溫度35°C，分離釜II壓力5 MPa，加入95%乙醇40ml為夾帶劑，萃取時(shí)間為2h ； 將從分離釜I和分離釜II得到的萃取物合并后，用10%乙酸(v/v)溶解，過濾后上AB-8樹脂柱，水洗3個(gè)床層至中性，再用3個(gè)床層體積20%乙醇(v/v)和5個(gè)床層體積60%乙醇(v/v)洗脫，收集60%乙醇(v/v)洗脫液，減壓濃縮至干；
固體用12 ml丙酮溶解，再加入35 ml甲醇，攪拌I h，4°C放置15 h，抽濾得粗晶，粗晶加5 ml丙酮溶解，再加20 ml甲醇，4°C放置20 h，得重結(jié)晶，所得晶體放入45°C烘箱干燥4h得，得利血平0.048g。
[0020]經(jīng)HPLC分析檢測，利血平純度為98.35%。
[0021]實(shí)施例3:
利血平提取物的制備:將200g蘿芙木根皮粉碎，過10目篩后，根粉置于超臨界萃取釜中進(jìn)行超臨界提取，萃取釜溫度60°C，萃取釜壓力30 MPa，分離釜I溫度45°C，分離釜I壓力10 MPa，分離釜II溫度35°C，分離釜II壓力5 MPa，加入95%乙醇50ml為夾帶劑，萃取時(shí)間為2h ；
將從分離釜I和分離釜II得到的萃取物合并后，用10%乙酸(v/v)溶解，過濾后上HP-20樹脂柱，水洗3個(gè)床層至中性，再用3個(gè)床層體積15%乙醇(v/v)和4個(gè)床層體積50%乙醇(v/v)洗脫，收集50%乙醇(v/v)洗脫液，減壓濃縮至干；
固體用17 ml丙酮溶解，再加入35 ml甲醇，攪拌I h，4°C放置15 h，抽濾得粗晶，粗晶加10 ml丙酮溶解，再加30 ml甲醇，4°C放置20 h，得重結(jié)晶，所得晶體放入45°C烘箱干燥4h得，得利血平0.076g。
[0022]經(jīng)HPLC分析檢測，利血平純度為97.86%。
[0023]實(shí)施例4:
利血平提取物的制備:將500g蘿芙木根皮粉碎，過10目篩后，根粉置于超臨界萃取釜中進(jìn)行超臨界提取，萃取釜溫度60°C，萃取釜壓力35 MPa，分離釜I溫度45°C，分離釜I壓力8 MPa，分離釜II溫度35°C，分離釜II壓力5 MPa，加入95%乙醇10ml為夾帶劑，萃取時(shí)間為2h ；
將從分離釜I和分離釜II得到的萃取物合并后，用10%乙醇(v/v)溶解，過濾后上HP-20樹脂柱，水洗3個(gè)床層至中性，再用3個(gè)床層體積15%乙醇(v/v)和5個(gè)床層體積50%乙醇(v/v)洗脫，收集50%乙醇(v/v)洗脫液，減壓濃縮至干；
固體用30 ml丙酮溶解，再加入60ml甲醇，攪拌I h，4°C放置15 h，抽濾得粗晶，粗晶加15 ml丙酮溶解，再加35 ml甲醇，4°C放置20 h，得重結(jié)晶，所得晶體放入45°C烘箱干燥4h得，得利血平0.128go
[0024]經(jīng)HPLC分析檢測，利血平純度為97.65%。
[0025]實(shí)施例5:
利血平提取物的制備:將200g蘿芙木根皮粉碎，過10目篩后，根粉置于超臨界萃取釜中進(jìn)行超臨界提取，萃取釜溫度50°C，萃取釜壓力30 MPa，分離釜I溫度45°C，分離釜I壓力10 MPa，分離釜II溫度32°C，分離釜II壓力5 MPa，加入95%乙醇50ml為夾帶劑，萃取時(shí)間為2h ；
將從分離釜I和分離釜II得到的萃取物合并后，用10%乙酸(v/v)60ml溶解，過濾后上HZ818樹脂柱，水洗3個(gè)床層至中性，再用4個(gè)床層體積20%乙醇(v/v)和4個(gè)床層體積60%乙醇(v/v)洗脫，收集60%乙醇(v/v)洗脫液，減壓濃縮至干； 固體用15 ml丙酮溶解，再加入30 ml甲醇，攪拌I h，4°C放置15 h，抽濾得粗晶，粗晶加10 ml丙酮溶解，再加35 ml甲醇，4°C放置20 h，得重結(jié)晶，所得晶體放入45°C烘箱干燥4h得，得利血平0.059g。
[0026]經(jīng)HPLC分析檢測，利血平純度為98.56%。
[0027]實(shí)施例6:
利血平提取物的制備:將200g蘿芙木根皮粉碎，過10目篩后，根粉置于超臨界萃取釜中進(jìn)行超臨界提取，萃取釜溫度50°C，萃取釜壓力35 MPa，分離釜I溫度42°C，分離釜I壓力9 MPa，分離釜II溫度37°C，分離釜II壓力6 MPa，加入95%乙醇70ml為夾帶劑，萃取時(shí)間為2h ；
將從分離釜I和分離釜II得到的萃取物合并后，用10%乙酸(v/v)溶解，過濾后上HPD100樹脂柱，水洗3個(gè)床層至中性，再用4個(gè)床層體積體積20%乙醇(v/v)和5個(gè)柱體積50%乙醇(v/v)洗脫，收集50%乙醇(v/v)洗脫液，減壓濃縮至干；
固體用10 ml丙酮溶解，再加入30 ml甲醇，攪拌I h，4°C放置15 h，抽濾得粗晶，粗晶加5 ml丙酮溶解，再加25 ml甲醇，4°C放置20 h，得重結(jié)晶，所得晶體放入45°C烘箱干燥4h得，得利血平0.043g。
[0028]經(jīng)HPLC分析檢測，利血平純度為97.86%。
[0029]實(shí)施例7:
利血平提取物的制備:將500g蘿芙木根皮粉碎，過10目篩后，根粉置于超臨界萃取釜中進(jìn)行超臨界提取，萃取釜溫度60°C，萃取釜壓力35 MPa，分離釜I溫度50°C，分離釜I壓力10 MPa，分離釜II溫度40°C，分離釜II壓力7 MPa，加入95%乙醇150ml為夾帶劑，萃取時(shí)間為2h ；
將從分離釜I和分離釜II得到的萃取物合并后，用10%乙醇(v/v)溶解，過濾后上DlOl樹脂柱，水洗3個(gè)床層至中性，再用3個(gè)床層體積體積15%乙醇(v/v)和5個(gè)柱體積70%乙醇(v/v)洗脫，收集70%乙醇(v/v)洗脫液，減壓濃縮至干；
固體用35 ml丙酮溶解，再加入75ml甲醇，攪拌I h，4°C放置15 h，抽濾得粗晶，粗晶加15 ml丙酮溶解，再加40 ml甲醇，4°C放置20 h，得重結(jié)晶，所得晶體放入45°C烘箱干燥4h得，得利血平0.139go
[0030]經(jīng)HPLC分析檢測，利血平純度為97.43%。
【權(quán)利要求】
1.一種提取蘿芙木中利血平的方法，其特征在于包括如下步驟: (1)將蘿芙木根皮粉碎至10目，置于超臨界CO2萃取釜中，萃取釜溫度35~60°C，萃取釜壓力12~40MPa，分離釜I壓力8~15 MPa，分離釜I溫度45~65°C，分離釜II壓力5~8 MPa,分離釜II溫度35~40°C，加入95%(v/v)的乙醇為夾帶劑，萃取時(shí)間為2~4 h，收集萃取釜1、II中萃取物； (2)萃取物用5~20%乙酸(v/v)溶解，過濾后上大孔樹脂柱，先水洗至中性，再用10~20%和30~70%乙醇(v/v)洗脫樹脂柱，收集富含利血平組分的洗脫液； (3)將洗脫液濃縮至浸膏后，用丙酮溶解，加入甲醇，低溫結(jié)晶；粗晶再經(jīng)丙酮-甲醇重結(jié)晶，真空干燥后，得到利血平純品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是:步驟(I)中，所述95%乙醇(v/v)的加入量，按每10g生藥5~200ml計(jì)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是:步驟(2)中，所述大孔樹脂為非極性或弱極性樹脂。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征是:步驟(2)中，所述大孔樹脂的型號為HZ818、HP-20、SIP1-101、AB-8、HPD100,DlOl 或 D130。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是:步驟(2)中，所述大孔樹脂量(L)為蘿芙木根粉(kg)干重的5~15%。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是:步驟(2)中，洗脫水用量為樹脂柱體積的3~5倍，10~20%乙醇(v/v)的用量為樹脂柱體積的2~5倍，30~70%乙醇(v/v)的用量為樹脂柱體積的3~6倍。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，步驟(3)中，所述加入甲醇的量為丙酮溶劑的1.5~4倍(v/v)。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是:步驟(3)中，所述結(jié)晶與重結(jié)晶的條件為，溫度 0~5°C，放置 10~20h。
【文檔編號】C07D459/00GK104513236SQ201410834453
【公開日】2015年4月15日 申請日期:2014年12月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月30日
【發(fā)明者】楊麗, 李宇, 段迪, 鐘鳴, 傅玉萍, 袁誠, 李金華 申請人:廣州白云山漢方現(xiàn)代藥業(yè)有限公司