專(zhuān)利名稱：抗酸成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子復(fù)合物及其治療胃腸道遺瘍病的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明與抗酸成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF)復(fù)合物及其用這種復(fù)合物治療哺乳動(dòng)物胃腸道潰瘍病的方法有關(guān)。本發(fā)明亦涉及使用抗酸FGF復(fù)合物處理各種其它FGF藥敏的情況，尤其是遇酸和/或熱不穩(wěn)定的FGF只有相當(dāng)少的治療價(jià)值時(shí)，可以應(yīng)用這種復(fù)合物。
胃腸道潰瘍病，一般為消化性潰瘍，是一種胃腸道上皮細(xì)胞缺損的疾病。這種缺損常由鹽酸和胃蛋白的共同作用產(chǎn)生。消化性潰瘍至少可以侵及粘膜下層，靠近表面的病變多呈糜爛。消化性潰瘍可存在于胃腸道的許多不同區(qū)域，包括胃、十二指腸或食道、麥克爾憩室、外科腸吻合手術(shù)野，少數(shù)潰瘍亦可見(jiàn)于空腸上段。
二十年以前，消化性潰瘍的治療包括臥床休息、軟食、抗酸劑和/或手術(shù)去除病灶區(qū)。最近，H2受體拮抗劑已被用作治療消化性潰瘍。二種最常用的H2受體拮抗劑是雷米替丁和西米替丁，它們都是通過(guò)抑制胃酸分泌來(lái)達(dá)到治療目的。關(guān)于這二種拮抗劑的有效性和副作用已作了廣泛的研究(參考Thomas等人的文章Clinics in Gstroenterology，卷13，2期，501～529頁(yè))。
盡管這些拮抗劑已經(jīng)很廣泛地用作治療并且相對(duì)成功，然而H受體拮抗劑仍對(duì)許多消化性潰瘍療效不佳。例如，20%～30%的十二指腸潰瘍用西米替丁或雷米替丁治療4～6周后仍不能愈合，其原因仍不清楚。而且，用H2受體拮抗劑治療后潰瘍的再發(fā)或復(fù)發(fā)也不少見(jiàn)。
成纖維生長(zhǎng)因子(FGF)已證實(shí)是一種強(qiáng)有力的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，特別是在正在愈合的損傷組織中起新生血管作用。有兩種類(lèi)型的FGF即酸性FGF(aFGF)和堿性FGF(bFGF)。然而aFGF和bFGF對(duì)酸和/或熱是不穩(wěn)定的，因而，在本發(fā)明以前，在酸性和/熱環(huán)境下使用FGF(例如治療消化性潰瘍)一直是不可能的。
根據(jù)本發(fā)明，我們已獲得一種治療患FGF藥敏性疾病的哺乳動(dòng)物的新方法。該方法包括給哺乳動(dòng)物施以一有效劑量的抗酸FGF復(fù)合物或它們?cè)谒幬飳W(xué)上可以接受的鹽類(lèi)。特別是，本發(fā)明提供了一種治療胃腸道潰瘍病的方法，這種方法包括給哺乳動(dòng)物施以有效劑量的抗酸FGF復(fù)合物。尤其是，本發(fā)明提供的方法，可以用來(lái)治療消化性潰瘍及其疾病，尤其適用于那些對(duì)FGF治療敏感、但在酸性環(huán)境中不能使用的情況。
另外，本發(fā)明提供了一種用于治療患FGF藥敏性疾病的哺乳動(dòng)物的藥物，它包括一種抗酸FGF組合物。更具體地說(shuō)，本發(fā)明提供了一種用于哺乳動(dòng)物的胃腸道潰瘍病的治療的藥物，它包括一種抗酸FGF復(fù)合物。而且，本發(fā)明提供了一種藥物的生產(chǎn)方法，該藥物用于患FGF藥敏疾病的哺乳動(dòng)物的治療，該方法包括將有效量的抗酸FGF與一種藥用載體、賦形劑或稀釋劑混合。更具體地說(shuō)，本發(fā)明提供了一種藥物的生產(chǎn)方法，該藥物用于哺乳動(dòng)物的胃腸道疾病的治療，該方法包括將有效量的抗酸FGF與一種藥用載體、賦形劑或稀釋劑混合。
更可取的是在本發(fā)明中抗酸FGF復(fù)合物可與一種或多種下列物質(zhì)結(jié)合或聯(lián)合組成藥物學(xué)上可接受的劑型使用，這些物質(zhì)包括a)穩(wěn)定劑，b)抗分泌劑如H2受體拮抗劑，c)細(xì)胞保護(hù)因子，d)抗酸物質(zhì)。
根據(jù)本發(fā)明，抗酸FGF復(fù)合物用于治療患胃腸道潰瘍病的哺乳動(dòng)物時(shí)，可直接促使?jié)兊耐耆稀Ｅc上述H2受體拮抗劑相比，拮抗劑的最佳效果不及或只接近于最佳抗酸FGF復(fù)合物劑量10%所產(chǎn)生的功效。
本發(fā)明提供了新的復(fù)合物和方法用來(lái)治療和/或予防哺乳動(dòng)物患有的對(duì)FGF有藥敏的疾病。這種方法可用最簡(jiǎn)單的形式給予哺乳動(dòng)物以有效劑量的抗酸FGF復(fù)合物或它們藥學(xué)上可接受的鹽類(lèi)。本發(fā)明也可提供作為某些藥物復(fù)合物，包括抗酸FGF或它的鹽，和一種或多種起穩(wěn)定加強(qiáng)作用或其它改善抗酸FGF治療效能的試劑。這種試劑包括ⅰ)穩(wěn)定劑如葡萄糖胺多糖，包抱肝素，硫酸多糖如硫酸葡聚糖、硫酸環(huán)葡聚糖如Beta-四十硫酸環(huán)糊精和β-1，3-硫酸多糖ⅱ)抗分泌劑如H2受體拮抗劑(如西米替丁、雷米替丁、Famotidine、乙酸Roxatidme M受體拮抗劑(如Pirenzepine)ⅲ)細(xì)胞保護(hù)劑如spizofurone和前列腺素衍生物ⅳ)抗酸劑如氫氧化鋁凝膠、碳酸鈉和sucralfate，這些試劑既可單獨(dú)使用也可成為復(fù)合物的一種組分。
根據(jù)本發(fā)明，胃腸道的各種潰瘍病可通過(guò)給哺乳動(dòng)物以有效劑量的抗酸FGF復(fù)合物來(lái)治療。這些潰瘍病包括節(jié)段性回腸炎、潰瘍性結(jié)腸炎和胃、十二指腸消化性潰瘍。
本發(fā)明中的抗酸FGF復(fù)合物也能用來(lái)治療哺乳動(dòng)物的其它疾病，這些疾病對(duì)FGF的治療敏感，但由于所處酸性環(huán)境而使FGF不能發(fā)揮作用。例如，膀胱癌的治療，常發(fā)生器官組織的潰瘍，這種潰瘍可用抗酸FGF來(lái)治療。包扎的傷口也可產(chǎn)生酸性環(huán)境，抗酸FGF亦可對(duì)其有療效。其它的情況包括有酸性環(huán)境產(chǎn)生和對(duì)FGF治療藥敏的其它情況，此種治療效果對(duì)有經(jīng)驗(yàn)的人來(lái)說(shuō)是顯而易見(jiàn)的。
本發(fā)明中的抗酸FGF復(fù)合物既可以是aFGF也可以是bFGF的復(fù)合物。本發(fā)明中實(shí)際使用的aFGF和bFGF來(lái)源多種，包括來(lái)自哺乳動(dòng)物如人、牛、猴、豬、馬。
本發(fā)明中實(shí)際使用的抗酸FGF復(fù)合物包括ⅰ)自然抗酸的哺乳動(dòng)物FGF如aFGFⅱ)通過(guò)加穩(wěn)定劑穩(wěn)定的自然哺乳動(dòng)物FGFⅲ)抗酸劑改良的抗酸FGFⅳ)改良的FGF進(jìn)一步加穩(wěn)定劑穩(wěn)定。
較理想的抗酸FGF復(fù)合物包括一種改良的FGF如純化的重組人堿性FGF(rhbFGF)蛋白，此種蛋白已經(jīng)發(fā)生了突變(突變蛋白)，已將一個(gè)或多個(gè)存在于成熟蛋白氨基酸殘基25、69、87和92位的四個(gè)半胱氨酸轉(zhuǎn)變成了絲氨酸。通過(guò)分析人bFGF氨基酸組分，發(fā)現(xiàn)N末端的脯氨酸組成第一個(gè)氨基酸。最理想的抗酸FGF是rhbFGF突變蛋白CS23，它的結(jié)構(gòu)已被較詳細(xì)地描述。參見(jiàn)Senoo等，BiochemicalandBiophysiccalResearchCommunications，Vol151，No.2，701～708(1988)，以及U.SSerialNo.161，123，1988年2月18日歸案，相應(yīng)于EP-281，822，A2，其出處已編在這里的參考文獻(xiàn)中。在本發(fā)明實(shí)際應(yīng)用以及在一些參考文獻(xiàn)中描述的突變蛋白包括了那些增加氨基酸和基本氨基酸被刪除或取代的突變蛋白。
雖然沒(méi)有被理論所證實(shí)，但可認(rèn)為中性氨基酸如絲氨酸或丙氨酸取代在FGF中的半胱氨酸殘基可使用FGF對(duì)熱、酸和某些能降解FGF的酶更加穩(wěn)定。這種取代被認(rèn)為是引起了蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和活性的輕微改變，因?yàn)橐粋€(gè)氧原子(絲氨酸)取代了一個(gè)硫原子(半胱氨酸)，故阻止了在突變位點(diǎn)不期望產(chǎn)生分子間二硫鍵的形成。
根據(jù)本發(fā)明，抗酸FGF已證實(shí)在酸性環(huán)境下是高度穩(wěn)定的，特別是與一種或多種下面將詳細(xì)討論的穩(wěn)定劑結(jié)合使用時(shí)更穩(wěn)定。自然的哺乳動(dòng)物FGF和經(jīng)抗酸改良的FGF僅有極低的毒性。
最佳給藥途徑依多種因素包括治療狀況和病人的習(xí)慣而定。如當(dāng)治療由放療或化療引起的膀胱潰瘍損傷時(shí)，抗酸FGF可經(jīng)尿道導(dǎo)管給予。治療胃腸道的潰瘍損傷時(shí)，理想的給藥途徑是經(jīng)口給藥，如通過(guò)片劑、膠囊、錠劑、可嘴嚼的膠糖進(jìn)藥。其它胃腸道疾病的給藥途徑包括直腸灌腸和非胃腸途徑。
藥用抗酸FGF用常規(guī)技術(shù)即可制備。例如片劑和膠囊的制備可使用一些添加劑，如藥物學(xué)上可接受的載體(如乳糖、玉米淀粉、輕度硅酐、微晶體纖維素、蔗糖)、結(jié)合物(如α-淀粉、甲基纖維素、羰甲纖維素、羥丙基纖維素、羥丙甲基纖維素、聚乙烯吡咯啶)、表面活性劑[如Tween80(kuo-Atlas)產(chǎn)品，pluronicF68(AsuhiDenku.Japan);多聚氧乙烯-多聚氧丙烯復(fù)合體)、分解劑(如羰甲纖維素鈣、淀粉、低組分羥丙纖維素)、抗氧化劑(如L-半胱氨酸、亞硫酸鈉、抗壞血酸)、潤(rùn)滑劑(如硬脂酸鎂、滑石)和其它類(lèi)似的物質(zhì)。
直腸用制劑亦可用常規(guī)技術(shù)制備，如使用一種含油基質(zhì)，象一種較高脂肪酸甘油酯。[如自然出產(chǎn)的可可黃油，Witepsols(一種半合成基質(zhì)，聯(lián)邦德國(guó)的DynamiteNobel)]一種中等脂肪酸甘油酯(如Miglyols，DynamiteNobel產(chǎn)品)或一種植物油(如芝麻油、黃豆油、玉米油、棉花籽油、橄欖油)。
當(dāng)復(fù)合物需制成一種注射用水溶劑時(shí)，可根據(jù)常規(guī)方法使用一種溶解劑，象水性溶解劑(例如蒸餾水、生理鹽水、Ringer′s液)或油性溶解劑(如芝麻油、橄欖油)來(lái)制備。若必要，可加入一種或多種添加劑。這樣的添加劑包括助溶劑(如水楊酸鈉、乙酰鈉)、緩沖劑(如檸檬酸鈉、甘油)、等滲性試劑(如葡萄糖、轉(zhuǎn)化糖)、穩(wěn)定劑(如人血清白蛋白、聚乙二醇)、保存劑(如苯甲基乙醇、苯酚)或止痛藥(如氯化芐烷銨、鹽酸普魯卡因)。
當(dāng)把復(fù)合物組成注射用固體制劑時(shí)，用常規(guī)方法也可產(chǎn)生，例如使用一種稀釋劑(如蒸餾水、生理鹽水、葡萄糖)、成形劑[如羰甲纖維素(CMC)、精氨酸鈉]、保存劑(如苯甲苯乙醇、氯化芐烷銨、苯酚)或止痛劑(如葡萄糖、葡萄糖酸鈣、鹽酸普魯卡因)。
與其它藥物試劑如H2阻斷劑相比，抗酸FGF所需的劑量是相當(dāng)小的，并且其劑量視許多因素(包括治療狀況、是單獨(dú)使用或者與穩(wěn)定劑、抗分泌劑、細(xì)胞保護(hù)劑和抗酸劑合用，以及病人攝入的食物數(shù)量)而定。
例如當(dāng)治療成人胃腸道潰瘍病時(shí)，復(fù)合物若口服，其中抗酸FGF蛋白成分的含量一般大約0.1μg～30mg/每天，如含量0.1μg～10mg/每天較可取，更可取的是大約1.0μg～3mg/每天，最好的含量是大約10μg～300μg/每天。10μg～150μg的rhbFGF突變蛋白CS2S或它的鹽類(lèi)可與藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或其它合適的成形劑組成片劑或膠囊供口服使用。這種配方有利于每天服用一到四次即可達(dá)到合適的藥物劑量范圍。
為治療某些較低位置的胃腸道潰瘍?nèi)缦詽兒蜐冃越Y(jié)腸炎，最好在抗酸FGF復(fù)合物外面包上一層腸衣共聚體，如羥丙甲基纖維素酞酸鹽、乙酸纖維素酞酸鹽或一種甲基丙烯酸共聚體以進(jìn)一步阻止抗酸FGF免受酸和消化性酶如胃蛋白酶對(duì)抗酸FGF的破壞。這種有包膜的復(fù)合物進(jìn)入到胃腸道，如消化道、腸道，在那里藥物可發(fā)揮最大效能。
根據(jù)本發(fā)明的另一部分，已經(jīng)證實(shí)某些試劑可進(jìn)一步穩(wěn)定和/或加強(qiáng)抗酸FGF的活性。這些試劑包括抗分泌劑、細(xì)胞保護(hù)劑、抗酸劑和穩(wěn)定劑如葡萄糖胺多糖和一組稱之為硫酸多糖的化合物。正如有經(jīng)驗(yàn)的人所意識(shí)到的那樣，這種穩(wěn)定劑/加強(qiáng)劑與FGF相對(duì)應(yīng)的量可以根據(jù)許多因素的不同而不同，這些藥效包括所用的試劑、病人的狀況和給藥途徑。一般而言，這種穩(wěn)定劑與FGF的重量之比大約在0.1～100之間，較合適的范圍是0.2～20，更合適的范圍大約0.5～4左右。
較好的抗分泌劑是雷米替丁和西米替丁。所用的抗分泌劑的量根據(jù)上述因素的不同而不同。例如，當(dāng)治療消化性潰瘍時(shí)，一種合適的復(fù)合物應(yīng)包括rhbFGFCS23突變蛋白，劑量大約為10～300μg，更可取的劑量是大約100μg，以及抗分泌劑，劑量大約為20～600μg，更可取的劑量大約為200μg。
較好的抗酸劑包括氫氧化鋁凝膠，碳酸氫鈉和Sucralfate?？顾釀┛膳c抗酸FGF聯(lián)合口服，或者組合到抗酸FGF復(fù)合物中成為它的一個(gè)組分?？顾釀┟看沃委煹膭┝恳话闶?.5～5g。
使用細(xì)胞保護(hù)劑的劑量將根據(jù)多種因素包括使用的試劑而定。對(duì)前列腺素衍生物來(lái)說(shuō)，劑量一般是每個(gè)成人為2.5～5μg。若用spizofurone治療時(shí)，每個(gè)成人大約為80mg。
根據(jù)本發(fā)明，可以應(yīng)用的穩(wěn)定劑包括葡萄糖胺多糖如肝素、肝素的片段，硫酸多糖如硫酸葡聚糖、硫酸環(huán)葡聚糖和β-1，3-硫酸多糖。所提及的硫酸多糖應(yīng)有不低于大約3%(w/w)的硫含量，如在12～20%(w/w)之間更好些，在16～20%(w/w)時(shí)最佳。較可取的穩(wěn)定劑是硫酸多糖，特別是硫酸葡聚糖。葡聚糖胺多糖先前已有描述，可參見(jiàn)MoleculurBiologyofthecellGarlund出版公司，紐約，倫敦，1983。本發(fā)明中使用的葡萄糖胺多糖應(yīng)以每個(gè)二糖單位大約0.1～3.0個(gè)硫基團(tuán)，并且它的分子量在1，000～100，000之間，更合適的范圍是2，000～50，000之間才合乎需要。這種葡萄糖胺多糖類(lèi)的例子有肝素、硫酸肝素和硫酸皮膚素。
對(duì)肝素的描述，可參見(jiàn)theMerkIndex，8thed，1983。肝素的分子量大約5，000～40，000不等。
環(huán)葡聚糖是自然的環(huán)狀化合物，由8個(gè)α、7個(gè)β或8個(gè)γ的D-葡萄糖單位經(jīng)α(1～4)鏈聯(lián)接而成。它們有一個(gè)油煎餅形分子結(jié)構(gòu)，這種結(jié)構(gòu)提供了一個(gè)空穴，由此與其內(nèi)合適大小的外來(lái)分子形成包合物。
硫酸環(huán)葡聚糖是一種環(huán)葡聚糖磺化后產(chǎn)生的酯類(lèi)。用已知的方法可進(jìn)行磺化，一種較可取的磺化方法，見(jiàn)下列文件美國(guó)專(zhuān)利號(hào)2，923，704和日本專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)號(hào)36422/1975。
硫酸環(huán)葡聚糖的硫含量正常大約超過(guò)3%(w/w)，更合適的是在12～24%(w/w)的范圍。這種硫酸環(huán)葡聚糖也非常易溶于水。
本發(fā)明中硫酸環(huán)葡聚糖的磺化程度若以硫含量計(jì)，在任何水平上都可超過(guò)12%(w/w)，硫酸環(huán)葡聚糖中的硫含量如為16%～21%(w/w)則十分有利。
α、β和γ硫酸環(huán)葡聚糖鹽，根據(jù)本發(fā)明均可用作FGF蛋白成分的穩(wěn)定劑。β-環(huán)葡聚糖鹽，如β-四十硫酸環(huán)葡聚糖是優(yōu)先選擇的試劑。
本發(fā)明中使用的β-1，3-硫酸多糖是由β-1，3-多糖磺化產(chǎn)生的。β-1，3-多糖是由屬于Alcaligenus或Agrobacterium種的微生物產(chǎn)生的，它有一個(gè)直鏈，能溶于水，具熱成膠性。純化各種多糖的步驟見(jiàn)Ebisu等，JourmalofBacteriologypp1489-1501，1975。
Curdlun，(也稱之為熱成膠性多聚糖，PS，可從日本wakopure化學(xué)工業(yè)有限公司購(gòu)得)，已知是一種不溶于水、熱成膠性、不分枝的直鏈多糖，它有單獨(dú)的β-(1-＞3)鏈，由屬于Alcaligenes或Agrobacterium種的微生物株產(chǎn)生(參見(jiàn)日本專(zhuān)利公布號(hào)7，000/1968，32，073/1973和32，674/1973和英國(guó)專(zhuān)利號(hào)1，352，938)。Curdlun的生產(chǎn)者Alcaligenesfaecalis變異myxogenesNTK-u株，Agrobacteriumradiobacter株和AgrobacteriumraoliobacterU-19株各自在美國(guó)菌種分型培養(yǎng)收集目錄(AmericanTypeCultureCollectionCatalogneofStrainsI.15thedition，1982)中的ATCC-21680，ATCC6466和ATCC-21679各項(xiàng)中列出。
也可使用Curdlun低分子量的水解產(chǎn)物。它的生產(chǎn)方法詳見(jiàn)日本專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)號(hào)83798/1980，或美國(guó)專(zhuān)利號(hào)4，454，315。
β-1，3-多糖可以有一個(gè)低于1000的平均聚合度(DP)。尤其是帶有一個(gè)大約6～300個(gè)DP的部分水解產(chǎn)物被推薦使用，并且優(yōu)先選擇帶有一個(gè)15～200DP左右的部分水解產(chǎn)物。
本發(fā)明中使用的直鏈β-1，3-多糖的硫酸鹽是一種β-1，3-多糖或它們的較低聚合物中的羥基團(tuán)經(jīng)磺化后產(chǎn)生的酯。通常使用一種平均取代度(DS)為0.5～3/單糖單位的酯，并且優(yōu)先選擇使用DS1～2的酯。
直鏈β-1，3-多糖或它的低分子多聚物的磺化可依JournalofBiologicalChemistry239，2980(1964)描述的方法進(jìn)行。β-1，3-硫酸多糖的硫含量正常超過(guò)5%(w/w)，較可取的范圍大約在10～21%(w/w)最佳，并且它十分易溶于水。
優(yōu)先選擇的硫酸多糖的離子是硫酸葡聚糖。本發(fā)明中應(yīng)用的硫酸葡聚糖，其葡聚糖通過(guò)象LeucouostocMesenteroides之類(lèi)微生物作用而從蔗糖中產(chǎn)生。
硫酸葡聚糖是一種部分葡聚糖硫酸酯，它的基本結(jié)構(gòu)是-α(1-＞6)葡萄糖鏈，其硫含量常不低于12%，更可取的范圍大約是16～20%。平均分子量大約1，000～40，000，000不等，更可取的范圍約為3，000～1，000，000，硫酸葡聚糖非常易溶于水。
本發(fā)明中應(yīng)用的硫酸多糖也可以是一種鹽的形式。就鹽類(lèi)而言，任何藥物學(xué)上可接受的離子都可應(yīng)用，例如鈉、鉀、氨、三甲基氨及諸如此類(lèi)的東西。
當(dāng)硫酸多糖加到水基質(zhì)中與FGF蛋白成分接觸時(shí)，首先可加入游離的硫酸多糖，然后加進(jìn)合適量的酸或堿來(lái)調(diào)節(jié)所需的PH值。通過(guò)加入堿，硫酸多糖可在水基質(zhì)中以鹽的形式存在，或者游離硫酸多糖與硫酸多糖鹽以混合物的形式共存。
當(dāng)準(zhǔn)備將本發(fā)明中的FGF蛋白成分在水基質(zhì)中與硫酸多糖接觸時(shí)，推薦的做法是有2或3個(gè)堿基的羧酸存在以使得FGF更穩(wěn)定。二個(gè)堿性羧酸的例子有酒石酸、馬來(lái)酸、蘋(píng)果酸、富馬酸等。三個(gè)堿基羧酸的例子有檸檬酸、異檸檬酸等。
上述提及的羧酸可組成鹽，也可以自然的羧酸加到水基質(zhì)中，再向基質(zhì)中加入合適量的一種堿或酸，將PH調(diào)到所需要求即可。通過(guò)加入堿劑，硫酸多糖在水溶液中以鹽的形式存在，或者以游離硫酸多糖與硫酸多糖鹽的形式共存。
當(dāng)FGF蛋白成分加到水基質(zhì)中與硫酸多糖接觸時(shí)，硫酸多糖與FGF蛋白成分的比例按重量比大約為0.1～100，更可取的服務(wù)是0.2～20，最佳范圍為0.5～4。硫酸多糖在水基質(zhì)中的濃度較可取的范圍為0.0005～5w/v%，更可取的范圍為0.01～1w/v%?？顾酕GF在水基質(zhì)中的濃度較可取的范圍為0.0005～5w/v%，更可取的范圍為0.01～1w/v%。在水基質(zhì)中羧酸的劑量，比如它的濃度較可取的范圍為1mM～1M，更可取的范圍為10mM～500mM。
為將FGF蛋白成分在水溶液中與硫酸多糖接觸，并進(jìn)一步地與羧酸相接觸，這些物質(zhì)在水基質(zhì)中需完全混合才能達(dá)到目的。
就水基質(zhì)而言，應(yīng)優(yōu)先選擇諸如蒸餾水、生理鹽水、葡萄糖溶液、緩沖液如磷酸緩沖液和三羥甲基氨甲烷-HCl緩沖液等溶液。
一種FGF蛋白成分的水溶液，一種硫酸多糖的水溶液，一種羧酸的水溶液可以混合起來(lái)，或這些物質(zhì)以固體形式混合然后溶于水中。這些物質(zhì)的混合可在0°～40℃溫度下操作，較合適的PH為3～10，更可取的PH為5～9?；旌纤璧臅r(shí)間大約為1～30′，獲得的復(fù)合物可冷凍干燥，在此過(guò)程中復(fù)合物可形成并得到回收。
為分離和回收獲得的穩(wěn)定性FGF復(fù)合物，使用Sephadex進(jìn)行凝膠過(guò)濾，使用DEAE或CM-Toyopearl進(jìn)行離子交換層析均為可用的方法。除此之外，穩(wěn)定性FGF復(fù)合物可不經(jīng)分離和回收直接應(yīng)用。
通過(guò)上述方法步驟，可獲得一個(gè)高度穩(wěn)定的FGF復(fù)合物。這種復(fù)合物可安全地用于治療哺乳動(dòng)物，例如人、大白鼠、豚鼠、狗、小鼠及其它動(dòng)物。
隨著提及下列例子，本發(fā)明將進(jìn)一步得到闡述。這些例子將有助于理解本發(fā)明，但并不是意味著它本身僅局限于這些方面。
重組人堿性FGF(rhbFGF)，應(yīng)用于下面5、6、7例子中，它是用EP239，965中的例1，3，6或8所描述的方法生產(chǎn)的。EP237，965的例子使用了一轉(zhuǎn)化株大腸桿菌K12。MM294/PTB669，(FFP14532，F(xiàn)E12MBP1281，CCTCCM87005)。
rhbFGF突變蛋白CS23在下列例子1～3和5～8中應(yīng)用，它是通過(guò)上面提到的BiochemicalandBiophysicalResearchCommunicationsVol151，701～708(1988)及參考例子1，2和美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)系列號(hào)161，123的例子1，67和24所述方法生產(chǎn)。在美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)系列號(hào)101，123中，相應(yīng)于BP281，822A2，使用了一轉(zhuǎn)化菌株大腸桿菌MM294(PTB762)(IFO14613，F(xiàn)ERMBP-1645，CCTCCM88005)。
上面提到的轉(zhuǎn)化株大腸桿菌K12MM2941PTB669和大腸桿菌MM294/PTB762已儲(chǔ)存在日本大阪發(fā)酵研究所(IFO)和日本國(guó)際貿(mào)易和工業(yè)部(FRI)，工業(yè)科技社發(fā)酵研究所。它們的登記號(hào)及儲(chǔ)存日期如下表所示。FRI所頒的證書(shū)最初是由FERMP數(shù)碼注明其登記號(hào)，現(xiàn)提及的證書(shū)已根據(jù)Budapest條約作了轉(zhuǎn)換。轉(zhuǎn)化菌株儲(chǔ)存在研究所(FRI)，登記號(hào)由FERMBP數(shù)碼表示。
轉(zhuǎn)換菌株IFOFRI大腸桿菌K2IFO14532FERMP-8918FERMBP-128MM294/PTB669(August11，1986)(August21，1986)大腸桿菌IFO14613FERMP-9409FERMBP-1645MM294/PTB762(May27，1987)(June11，1987)重組人酸性FGF(rhaFGF)在例6中使用，通過(guò)下面例4提及的方法生產(chǎn)。
實(shí)施例1在下列實(shí)驗(yàn)中，S.S2aboMD(AmericanJournalofpathology第275276頁(yè)1978)所描述的動(dòng)物模型被用作誘導(dǎo)正常大鼠的十二指腸潰瘍。半胱氨酸以每100g體重(BW)25mg的劑量在一天內(nèi)三次經(jīng)口胃內(nèi)灌注，24h后，將近10%的大鼠死于潰瘍穿孔。到第3天，在每只大鼠腹部行小切開(kāi)術(shù)以確定是否存在十二指腸潰瘍。在存活的大鼠中約1～2%的大鼠沒(méi)有發(fā)現(xiàn)十二指腸潰瘍的外在表現(xiàn)，則將其剔除不再進(jìn)行研究。因而，所用進(jìn)行研究的大鼠都患有潰瘍，可隨機(jī)編組以排除誤差。
所有在實(shí)驗(yàn)中使用的大鼠，開(kāi)始的體重接近160克。從治療21天后殺死的回組大鼠中得到下列結(jié)果。所有檢查均在治療后21天處死的同時(shí)進(jìn)行。
組Ⅰ非FGF治療患潰瘍的4個(gè)大鼠不用FGF治療，其潰瘍的發(fā)病率、潰瘍的深度和范圍，在統(tǒng)計(jì)學(xué)上類(lèi)似于以前研究中未治療的50個(gè)大鼠。
平均潰瘍深度＊＝1.625(S.D＝1.302，S.E.M＝0.460)平均潰瘍范圍
＝8.83mm2(S.D＝9.75，S.E.M＝3.45)體重189176177180……X＝182g＊“平均潰瘍深度”這里即指1＝進(jìn)入到上皮一些細(xì)胞的深度2＝在粘膜下層，進(jìn)入肌細(xì)胞3＝穿過(guò)肌層
4＝穿透(即將穿孔)組ⅡrhbFGF突變蛋白CS23、10ng第二組4個(gè)大鼠接受CS23突變蛋白，每100g體重10ng的口服治療，一天二次，這個(gè)劑量每周二次根據(jù)每個(gè)動(dòng)物的體重進(jìn)行調(diào)整。
平均潰瘍深度＝1.00(S.D＝1.1414，S.E.M＝0.7071)平均潰瘍范圍＝3.14mm2體重232212204216……X＝216g組ⅢrhbFGF突變蛋白CS23100ng第三組4個(gè)小鼠接受rhbFGF突變蛋白CS23每100g體重100ng的口服治療，一天二次。這個(gè)劑量每周二次根據(jù)每個(gè)動(dòng)物的體重再進(jìn)行調(diào)整。
平均潰瘍深度＝0.25(S.D＝0.5，S.E.M＝0.25)平均潰瘍范圍＝0.392mm2(除了一只大鼠尚有一處很小的潰瘍未愈合外，所有潰瘍完全愈合)
體重198g205g254g215g……X＝218g組ⅣrhbFGF突變蛋白CS23500ng最后一組5個(gè)大鼠接受rhbFGF突變蛋白CS23每100g體重500ng的口服治療，一天2次，這個(gè)劑量一周二次依每個(gè)動(dòng)物的體重再次進(jìn)行調(diào)整。
平均潰瘍深度＝0.6(S.D＝1.342，S.E.M＝0.6)平均潰瘍范圍＝1.88mm2體重207214295196216……X＝208g從以上資料可以看出，口服抗酸rhbFGF突變蛋白CS23可迅速治愈半胱氨酸誘導(dǎo)的潰瘍病。即使H2阻斷劑的最佳聯(lián)合制劑也只能產(chǎn)生低于或等于10ng rhbFGF突變蛋白CS23組的治療效果。
實(shí)施例2rhbFGF突變蛋白CS23加到含10%小牛血清的DulbeccoMEM培養(yǎng)基中，使得濃度為10μg/ml，再往里加硫酸葡聚糖鹽(購(gòu)自SeikagaguKogyo日本)，使后者最終濃度25μg/ml，在37℃孵化24小時(shí)。硫酸葡聚糖鹽為鈉鹽，其平均分子量各自為5，000;7，500或500，000。所用的對(duì)照組則有同樣的基質(zhì)，不加硫酸葡聚糖鈉鹽。孵化24小時(shí)后保存的活性如表1所示。在對(duì)照組中設(shè)有確定的突變蛋白CS23活性存在，而在實(shí)驗(yàn)組，F(xiàn)GF活性仍保持穩(wěn)定。
表1添加物保留的FGF活性%硫酸葡聚糖鈉93(平均分子量5，000)硫酸葡聚糖鈉100(平均分子量75，000)硫酸葡聚糖鈉100(平均分子量500，000)對(duì)照6從上述資料中可得出硫酸葡聚糖能保護(hù)rhbFGF突變蛋白CS23免受溫度破壞，在治療哺乳動(dòng)物病時(shí)，rhbFGF突變蛋白CS23將會(huì)遇到這樣的溫度。換言之，通過(guò)加入硫酸葡聚糖與FGF在水基質(zhì)中接觸，可獲得一種穩(wěn)定的FGF。這種穩(wěn)定的FGF能制成藥物制劑，這種藥物制劑具有抵抗存在于胃腸道中的熱、酸和酶反應(yīng)的性質(zhì)。
實(shí)施例3制備了一種含下列物質(zhì)的水溶液(PH7.4)0.5mg/ml的rhbFGFCS23，0.23mg/ml的硫酸葡聚糖鈉(平均分子量7500)，以及15mg/ml的檸檬酸鈉。
實(shí)施例4酸性FGF的生產(chǎn)人酸性FGF的生產(chǎn)根據(jù)下述提到的方法進(jìn)行，方法的描述見(jiàn)Biotechnology5966(1987)，JouralofBiologicalChemistry263，16471(1988).ICSCIshortReportVolum8，AdvancesinGeneTeehnology.ProteinEngineeringandproduction，proceedingsofthe1988miamiBio/TechnologyWinterSymposiun，IRLPress，page110。
(Ⅰ)表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建編碼人酸邢FGF的CDNA(

圖1)經(jīng)化學(xué)合成并插入-PUC18的質(zhì)粒中(MethodsinEnzymology，101，20-701983)，組成質(zhì)粒PTB917。質(zhì)粒PTB917用BspMI酶切，其末端用大腸桿菌DNA多聚酶大片段進(jìn)行鈍化。然后DNA用BamHI消化，形成0.45kbDNA片段。作為載體DNA的PET3c(studier，F(xiàn).W等，Journul of nelecular Biology，189 113-130，1986)，帶有T4嗜菌體φ10啟動(dòng)子，應(yīng)用于本實(shí)驗(yàn)。PET3c用NdeI切割，用E.ColiDNA多聚酶I大片段進(jìn)行鈍化。然后，NCOI接臂5′-CCATGG-3′用T4DNA連接酶接到這種DNA上。獲得的質(zhì)粒用NC0I切割，用大腸桿菌DNA多聚酶I大片段鈍化，然后用BamHI酶切除去S10片段，0.45kb Bs PMI-BamHI鈍化末端的片段借助T4DNA連接酶的連接插入到那個(gè)位點(diǎn)，組成質(zhì)粒PTB975(圖2)。
(Ⅱ)haFGFcDNA在大腸桿菌中的表達(dá)大腸桿菌MM294被λ嗜菌體DE3溶源化(studier，supru)。在DE3噬菌體中，已重組了噬菌體RNA聚合酶的基因。然后質(zhì)粒PLYsS被轉(zhuǎn)導(dǎo)到大腸桿菌MM294(DE3)中形成大腸桿菌MM294(DE3)/plysS。質(zhì)粒PTB975可轉(zhuǎn)導(dǎo)到這一菌株中，故而獲得大腸桿菌MM294(DE3)/plysS，PTB975，上述的轉(zhuǎn)化菌株培養(yǎng)在含35μg/ml氨芐青霉素和10μg/ml氯霉素的L-肉湯中，37℃。當(dāng)Klett值達(dá)到大約170時(shí)，異丙β-D-硫半乳糖苷(IPTG)加到培養(yǎng)基中使其終濃度為0.5mM。繼續(xù)培養(yǎng)3小時(shí)。離心，收獲細(xì)胞，PBS洗滌，再收，-20℃保存。
(Ⅲ)haFGF的純化從1升培養(yǎng)肉湯中收集的細(xì)胞再懸于100ml含10mMTris-HCl(PH7.4)10mMEDTA、0.6MNacl，10%蔗糖和0.05mMPMSF的緩沖液中，然后將蛋白溶菌酶加到懸液中使其濃度為0.5mg/ml。冰浴1小時(shí)后，混合物在37℃孵化5分鐘，經(jīng)超聲處理(20秒，2次)，離心(Sorvall，18000rpm，30分，4℃)，得到一上清液。這種上清液與含20mM Tris-HCl(PH7.4)和1mM EDTA的緩沖液在冰水條件下混合，得到的混合物通過(guò)用含20mM Tris-HCl(PH7.4)、1mM EDTA和0.2M Nacl緩沖液平衡后的肝素Sephorose柱(直徑2.5×4cm)。用含20mM Tris-HCl(PH7.4)、1mM EDTA和0.5MNacl的緩沖液150ml洗柱后，蛋白用含20mM Tris-HCl(PH7.4)、1mM EDTA和1.5M Nacl的緩沖液洗脫。洗脫液分段收集，每段6ml。收集用OD280監(jiān)測(cè)所吸水的第二峰，(號(hào)數(shù)8-11，總共24ml)(見(jiàn)圖3)，在這些收集液中加入等量的含20mM Tris-HCl(PH7.4)、1mM EDTA和2M(NH4)2SO422ml，混合物以0.5ml/分的低流速通過(guò)用含20mMTris-HCl(PH7.4)、1mM EDTA和1M(NH4)2SO4平衡后的苯基Sepharose柱(直徑2.5×8cm)，用與平衡液等樣成分的緩沖液洗柱后，用1M到OM的硫酸銨線性梯度濃度進(jìn)行洗脫(流速0.5ml/分，梯度時(shí)間200分，收集號(hào)數(shù)40～55(圖4)的流出液即獲得純化的人酸性FGF。
(Ⅳ)逆相C4高壓液相層析含1.2mg/ml經(jīng)步驟(Ⅲ)純化后的haFGF溶液0.25ml與0.1%的三氯乙醇(TFA)混合，混合物加到逆相C4柱(VYDNA)，USA)上，用一線性梯度為0%～90%的乙酰亞硝酸進(jìn)行洗脫，由于在0.1%TFA存在的情況下進(jìn)行洗脫，故可研究其洗脫方式，流速為1ml/分，梯度時(shí)間6′，結(jié)果見(jiàn)圖5。
(Ⅴ)生物學(xué)活性經(jīng)步驟(Ⅳ)純化的haFGF的生物學(xué)活性用如下方法進(jìn)行測(cè)定Sasadaetal.Mol.coll.Biol.8588～594(1988)，也就是通過(guò)[H]整合到BACB/C3T3細(xì)胞DNA的胸腺嘧啶中來(lái)測(cè)定其活性。當(dāng)標(biāo)本加上后，必要時(shí)肝素溶液(sigma，I級(jí))可與培養(yǎng)基及標(biāo)本一起混合。
實(shí)施例5在下列實(shí)驗(yàn)中，用K.Takagi等人(Jpn.J.pharmacol，19 P418-426，1969)描述的動(dòng)物模型來(lái)誘導(dǎo)正常大鼠的胃、十二指腸或結(jié)腸潰瘍，采用7周齡的雄性Jc Ispragne-Dawley大鼠，體重約250左右。大鼠用乙醚麻醉，行腹部切開(kāi)術(shù)，將直徑為6mm的環(huán)形金屬模分別埋貼在胃前壁、胃竇、胃體的聯(lián)接處漿膜面，幽門(mén)遠(yuǎn)端約7mm的十二指腸壁或回結(jié)腸聯(lián)結(jié)區(qū)遠(yuǎn)端5cm的結(jié)腸表面。冰醋酸(50μl)倒進(jìn)模子中，放置20秒，冰醋酸去除后，處理過(guò)的表面用100μl鹽水沖洗，然后關(guān)腹。FGF復(fù)合物懸于5%阿拉伯膠糖溶液中，每天二次(9am和4pm)口飼，從手術(shù)后的第一天開(kāi)始連續(xù)6天。手術(shù)后第七天動(dòng)物用CO2窒息處死，潰瘍的范圍(mm)和深度(分級(jí)0～3;0無(wú)病變，1粘膜糜爛，2中等潰瘍，3深度潰瘍或穿孔)在配有1mm方格子接目鏡(×10)的解剖顯微鏡下檢測(cè)。根據(jù)產(chǎn)生的潰瘍范圍和深度得出潰瘍指數(shù)。
醋酸加到胃、十二指腸和結(jié)腸的漿膜面產(chǎn)生-環(huán)形潰瘍。如表2～4所示。手術(shù)后7天對(duì)照組中的每個(gè)潰瘍的潰瘍指數(shù)分別為6.7±1.1，5.7±1.1和14.2±1.6，對(duì)照組僅接受由含150μMNacl，50mM檸檬酸緩沖液(PH7.0)組成的介質(zhì)治療;rhbFGF組每天口飼30μg/kg體重的rhbFGF;CS23組每日口飼CS23(rhbFGF突變蛋白CS2330μg/kg體重);CS23-DS組每天口飼各自為30μg和13.8μg/kg體重的CS23和DS(硫酸葡聚糖平均分子量7500)。CS23和CS23-DS可加速胃、十二指腸和結(jié)腸潰瘍的愈合，對(duì)十二指腸潰瘍和結(jié)腸潰瘍的作用有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表2～4)。rhbFGF治療潰瘍的作用要顯著低于CS23CS23-DS的作用。
表2rhbFGF，CS23和CS23-DS對(duì)大鼠醋酸誘導(dǎo)胃潰瘍愈合過(guò)程的影響處理劑量鼠的數(shù)量潰瘍指潰瘍指數(shù)的(ng/kg、口服)數(shù)%改善%對(duì)照86.7±1.1-rhbFGF3085.8±0.913CS233084.3±0.936CS23-DS3083.6±0.946結(jié)果以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤表示表3rhbFGF，CS23，CS23-DS對(duì)大鼠醋酸誘導(dǎo)十二指腸潰瘍愈合過(guò)程的影響處理劑量鼠的潰瘍指數(shù)%潰瘍指數(shù)的(μg/kg口服)數(shù)目改善%對(duì)照85.7±1.1-rhbFGF3085.9±1.4-4CS233082.5±0.5＊56CS23-DS3071.7±0.4＊＊70結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤表示＊P＜0.05＊＊P＜0.01均與對(duì)照組相比(學(xué)生t檢驗(yàn))
表4rhbFGF，CS23，CS23-DS對(duì)大鼠醋酸誘導(dǎo)結(jié)腸潰瘍愈合過(guò)程的影響處理劑量鼠的潰瘍指數(shù)%潰瘍指數(shù)的(μg/kg口服)數(shù)目改善%對(duì)照814.2±1.6-rhbFGF30814.0±1.51CS233088.0±1.9＊44CS23-DS3087.3±2.149結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤表示＊P＜0.05(與對(duì)照組比絞)(學(xué)生T檢驗(yàn))實(shí)施例6在下列實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)局部加N-乙酰順丁烯二酰亞胺(DEM)到結(jié)腸粘膜表面誘導(dǎo)結(jié)腸潰瘍。采用七周齡的雄性JclspragueDawley大鼠，體重250g，用Helaton′s導(dǎo)管在離肛門(mén)6cm處的前部結(jié)腸內(nèi)給大鼠以溶于1%甲基纖維素中的3%的NEM50μl。FGF復(fù)合物溶于含150mM Nacl的50mM檸檬酸緩沖液(PH7.0)或20mM Tris-HCl緩沖液(PH7.0)中，以0.2ml/鼠的體積、用Neluton′s導(dǎo)管給大鼠離肛門(mén)7cm處的結(jié)腸內(nèi)給藥，一天二次(9a.m和4p.m)從NEM誘導(dǎo)產(chǎn)生潰瘍后的當(dāng)天始，連續(xù)10天，NEM處理后第11天將動(dòng)物用CO2窒息處死。潰瘍范圍(mm2)和深度(分級(jí)0～3;0無(wú)病變;2粘膜糜爛，2中等潰瘍;3深度潰瘍或穿孔)用配有1mm方格子接目鏡(×10)的解剖顯微鏡進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)產(chǎn)生的潰瘍深度和廣度得出潰瘍指數(shù)。
在實(shí)驗(yàn)1中，對(duì)照組僅給含150mMNacl的50mM檸檬酸緩沖液(PH7.0)，rhbFGF組每只大鼠給予2μg的rhbFGF;CS23組每只大鼠給CS232μg;CS23-DS組給每只大鼠CS23和DS(平均分子量7500)的混合物，劑量各為2μg和0.92μg。在實(shí)驗(yàn)2中，對(duì)照組僅接受20mMTris-HCl緩沖液(PH7.0)治療，rhbFGF組中的每只大鼠接受用例4方法制備的rhbFGF2μg。
從表5可見(jiàn)，NEM加到結(jié)腸粘膜表面可產(chǎn)生嚴(yán)重的深度潰瘍。NEM給藥后11天，對(duì)照組的潰瘍指數(shù)在實(shí)驗(yàn)1中是231.6±51.1，在實(shí)驗(yàn)2中是191.6±84.5。rhbFGF、CS23、CS23-DS和rhbFGF均可加速結(jié)腸潰瘍的愈合。
表5rhbFGF，CS23，CS23-DS和rhbFGF對(duì)NEM誘導(dǎo)的大鼠結(jié)腸潰瘍愈合過(guò)程的影響處理劑量鼠的潰瘍指數(shù)%潰瘍指數(shù)的(μg/鼠)數(shù)目改善實(shí)驗(yàn)1對(duì)照8231.6±51.1-rhbFGF29167.6±37.328CS2329108.4±26.3＊53CS23-DS2979.4±14.9＊66實(shí)驗(yàn)2對(duì)照10191.6±84.5-rhaFGF2999.4±25.248結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤表示＊與對(duì)照相比P＜0.05(學(xué)生T檢驗(yàn))
實(shí)施例7在下列實(shí)驗(yàn)中，例1描述的動(dòng)物模型用來(lái)誘導(dǎo)正常大鼠的十二指腸潰瘍。雌性大鼠口服25mg/100g體重的半胱氨酸HCl共3劑。3天后患穿透性十二指腸潰瘍(剖腹探查)的大鼠隨機(jī)分成對(duì)照組和治療組，每組6～8只大鼠接受(1)僅僅是介質(zhì)(2)rhbFGF(原始)(原始重組人bFGF)(3)CS23(抗酸突變蛋白rhbFGF突變蛋白CS23)，用管飼法給100ng/100g體重的劑量，一天二次直到第21天進(jìn)行解剖，此時(shí)潰瘍即可測(cè)量，并可進(jìn)行組織切片檢查。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，結(jié)果綜合在表6。
表6治療患潰瘍大鼠潰瘍大小對(duì)照 89% 9.8±4.6mm2rhbFGF(原始) 80% 2.1±1.3mm2(p＝0.073)CS23 33% 1.7±1.1mm2(p＝0.063)
如表6所見(jiàn)的那樣，F(xiàn)GF治療的大鼠組織學(xué)表現(xiàn)為明顯的血管增生，輕度的單核細(xì)胞浸潤(rùn)，潰瘍底部致密肉芽組織增生，愈合的潰瘍完全被上皮細(xì)胞覆蓋，有肥厚的正常胃和十二指腸的粘膜。在僅給予藥物介質(zhì)治療的大鼠體內(nèi)不能發(fā)現(xiàn)這些現(xiàn)象。
實(shí)施例8在下列實(shí)驗(yàn)中，例1和例7描述的動(dòng)物模型用來(lái)誘導(dǎo)正常大鼠的十二指腸潰瘍。雌性大鼠口服25mg/100g體重的半胱氨酸-HCl，共3劑。三天后，患穿透性潰瘍(剖腹探查)的大鼠隨機(jī)分成對(duì)照組和治療組。每組3～4個(gè)大鼠，接受(1)僅有介質(zhì)(2)CS23(抗酸突變蛋白rhbFGF突變蛋白CS23)，100ng/100g體重(3)西米替丁，10mg/100g體重，一天二次管飼，直到第21天解剖，此時(shí)潰瘍可被測(cè)量并可進(jìn)行組織切片檢查。結(jié)果見(jiàn)表7。
表7治療患潰瘍大鼠潰瘍大小對(duì)照 100% 10.6±9.0mm2西米替丁 50% 6.7±2.9mm2CS23 75% 2.8±1.9mm2表7可以看出，與標(biāo)準(zhǔn)的西米替丁治療相比，使用本發(fā)明中的抗酸FGF復(fù)合物治療潰瘍可使?jié)冇忻黠@改善。
對(duì)上面介紹的本發(fā)明具體細(xì)節(jié)的其它改進(jìn)方法，對(duì)技熟者是顯而易見(jiàn)的，這些改進(jìn)將包括在下面的權(quán)利要求中。
權(quán)利要求
1.一種治療患病哺乳動(dòng)物的方法，此種疾病對(duì)FGF藥敏，其方法包括給予哺乳動(dòng)物以一有效劑量的抗酸FGF復(fù)合物。
2.一種治療患胃腸道潰瘍病哺乳動(dòng)物的方法，包括給予哺乳動(dòng)物以有效量的抗酸FGF復(fù)合物。
3.按照權(quán)利要求1或2所述的方法，其中抗酸FGF復(fù)合物可從與穩(wěn)定劑聯(lián)合的天然FGF、抗酸FGF或與穩(wěn)定劑聯(lián)合的抗酸FGF中選取。
4.按照權(quán)利要求3所述的方法，其中抗酸FGF可由rhb FGF突變蛋白CS23組成。
5.按照權(quán)利要求2所述的方法，其中胃腸道潰瘍病包括節(jié)段性回腸炎。
6.按照權(quán)利要求2所述的方法，其中胃腸道潰瘍病包括潰瘍性結(jié)腸炎。
7.按照權(quán)利要求2所述的方法，其中胃腸道潰瘍病包括消化性潰瘍。
8.按照權(quán)利要求7所述的方法，其中消化性潰瘍指十二指腸潰瘍。
9.按照權(quán)利要求7所述的方法，其中消化性潰瘍指胃潰瘍。
10.按照權(quán)利要求3所述的方法，其中哺乳動(dòng)物指人，復(fù)合物經(jīng)口給藥，復(fù)合物中抗酸FGF蛋白成分的含量大約0.1μg～30mg/天。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中抗酸FGF蛋白成分的含量為大約1μg～3mg/天。
12.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中抗酸FGF蛋白含量大約為10μg～300μg/天。
13.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中穩(wěn)定劑可從葡萄糖胺多糖或硫酸多糖類(lèi)中選取。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，硫酸多糖選自硫酸葡聚糖、硫酸環(huán)葡聚糖或β-1，3-硫酸多糖。
15.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中抗酸FGF復(fù)合物包括抗酸劑或與一種抗酸劑聯(lián)合給藥。
16.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中抗酸FGF復(fù)合物包括抗分泌劑或可與其聯(lián)合給藥。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中抗分泌劑可選自西米替丁或雷米替丁。
18.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中抗酸FGF復(fù)合物包括細(xì)胞保護(hù)劑或可與之聯(lián)合給藥。
19.一種由FGF和一種抗分泌劑組成的藥物復(fù)合物。
20.權(quán)利要求19中的藥物復(fù)合物，其FGF是抗酸FGF。
21.權(quán)利要求19中或20中的藥物復(fù)合物，其中的抗分泌劑可選自西米替丁或雷米替丁。
22.一種由一類(lèi)抗酸FGF和葡萄糖胺多糖組成的藥物復(fù)合物。
23.一種由FGF和一種穩(wěn)定劑組成的藥物復(fù)合物。
24.權(quán)利要求23中的藥物復(fù)合物，其中FGF是抗酸FGF。
25.權(quán)利要求23或24中的藥物復(fù)合物，其中穩(wěn)定劑由硫酸多糖組成。
26.權(quán)利要求25的藥物復(fù)合物，其中硫酸多糖選自一組硫酸葡聚糖、硫酸環(huán)葡聚糖或β-1，3-硫酸多糖類(lèi)物質(zhì)。
27.權(quán)利要求23或24中的藥物復(fù)合物，其中穩(wěn)定劑是一種細(xì)胞保護(hù)劑。
28.一種用于治療患有對(duì)FGF藥敏的疾病的哺乳動(dòng)物的藥物，它包括抗酸FGF復(fù)合物。
29.一種治療哺乳動(dòng)物的藥物，該哺乳動(dòng)物患有胃腸道潰瘍病，該藥物包括抗酸FGF復(fù)合物。
30.如權(quán)利要求28或29所述的藥物，其中抗酸FGF復(fù)合物可從與穩(wěn)定劑聯(lián)合的天然FGF、抗酸FGF或與穩(wěn)定劑聯(lián)合的抗酸FGF中選取。
31.如權(quán)利要求30所述的藥物，其中抗酸FGF包括rhb FGF突變蛋白CS23。
32.如權(quán)利要求29所述的藥物，其中胃腸道潰瘍病包括節(jié)段性回腸炎。
33.如權(quán)利要求29所述的藥物，其中胃腸道潰瘍病包括潰瘍性結(jié)腸炎。
34.如權(quán)利要求29所述的藥物，其中胃腸道潰瘍病包括消化性潰瘍。
35.如權(quán)利要求34所述的藥物，其中消化性潰瘍指十二指腸潰瘍。
36.如權(quán)利要求34所述的藥物，其中消化性潰瘍指胃潰瘍。
37.一種用于治療患FGF藥敏疾病哺乳動(dòng)物的藥物的生產(chǎn)方法，它包括將有效量的抗酸FGF與一種藥用載體、賦形劑或稀釋劑混合。
38.一種用于治療患胃腸道潰瘍病的哺乳動(dòng)物的藥物的生產(chǎn)方法，它包括將有效量的抗酸FGF與一種藥用載體、賦形劑或稀釋劑混合。
39.如權(quán)利要求37或38所述的方法，其中抗酸FGF復(fù)合物選自與穩(wěn)定劑結(jié)合的天然FGF、抗酸FGF或與穩(wěn)定劑結(jié)合的抗酸FGF。
40.如權(quán)利要求39所述的方法，其中抗酸FGF包括rhb FGF突變蛋白CS23。
41.如權(quán)利要求39所述的方法，其中胃腸道潰瘍病包括節(jié)段性回腸炎。
42.如權(quán)利要求39所述的方法，其中胃腸道潰瘍病包括潰瘍性結(jié)腸炎。
43.如權(quán)利要求39所述的方法，其中胃腸道潰瘍病包括消化性潰瘍。
44.如權(quán)利要求43所述的方法，其中消化性潰瘍指十二指腸潰瘍。
45.如權(quán)利要求43所述的方法，其中消化性潰瘍指胃潰瘍。
全文摘要
本發(fā)明介紹了藥物復(fù)合物及用一種抗酸成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子復(fù)合物治療速胃腸道潰瘍病的哺乳動(dòng)物的方法。也介紹了抗酸成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子復(fù)合物應(yīng)用于處理各種對(duì)成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子藥敏的情況。
文檔編號(hào)C07K14/50GK1040741SQ89106448
公開(kāi)日1990年3月28日 申請(qǐng)日期1989年8月19日 優(yōu)先權(quán)日1988年8月19日
發(fā)明者姆斯·朱迪·福克曼, 加藤光一 申請(qǐng)人:兒童藥物中心公司, 兒童醫(yī)學(xué)中心