專(zhuān)利名稱(chēng)：新的取代的替考拉寧的烷基酰胺衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有通式Ⅰ的取代的替考拉寧(Teicoplanin)化合物的烷基酰胺及其藥用加成鹽，
式中R為氫或胺官能團(tuán)的保護(hù)基;
Y為通式-NR1-alk1-〔X-alk2〕p-〔T-alk3〕q-W的化合物，其中R1為氫或(C1-C4)烷基;
alk1、alk2和alk3各為含有2-10個(gè)碳原子的直鏈或支鏈亞烷基;
P為1至50的一個(gè)整數(shù);
q為0至12的一個(gè)整數(shù);
X為-NR2-或氧原子，其中R2為氫、(C1-C4)烷基、alk4NR3R4，其中alk4為含有2-4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈亞烷基，R3為氫或(C1-C4)烷基，R4為氫、(C1-C4)烷基或5-6元環(huán)烷基;或R1和R2一起形成連接兩個(gè)氮原子的(C2-C4)亞烷基，其條件是這種情況下P為1;
T為-NR5-或氧原子，其中R5為氫、(C1-C4)烷基、alk5NR6R7，其中alk5為含有2-4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈亞烷基，R6為氫或(C1-C4)烷基，R7為氫、(C1-C4)烷基或5-6元環(huán)烷基，或R2和R5一起形成連接二個(gè)氮原子的(C2-C4)亞烷基，其條件是在這種情況下p和q均為1;
W為羥基、NR8R9，其中R8為H或(C1-C6)烷基，R9為H、(C1-C6)烷基、5-6元環(huán)烷基、COOR10(其中R10為(C1-C6)酰氧基-(C1-C4)烷基)和N
R11R12R13An
，其中R11、R12和R13各為(C1-C4)烷基，An
為藥用酸衍生的陰離子;其條件是，當(dāng)X同時(shí)為NR2時(shí)，P為1，q為0，而W不為羥基;
A為H或-N〔(C9-C12)脂族?；?β-D-2-脫氧-2-氨基吡喃葡糖基;
B為H或N-乙酰基-β-D-2-脫氧-2-氨基吡喃葡糖基;
M為氫或α-D-吡喃甘露糖基;
其另一條件是，只有當(dāng)A和M同時(shí)為氫時(shí)，B才能為氫。
替考拉寧(Teicoplanin)是早先稱(chēng)為teichomycin的抗菌物質(zhì)的國(guó)際非獨(dú)占名稱(chēng)(INN)，該抗菌物質(zhì)是通過(guò)在含有可吸收碳、氮和無(wú)機(jī)鹽源的培養(yǎng)基中培養(yǎng)菌株(Actinoplanesteichomyceticusnov.sp.ATCC31121)的方法獲得的(見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利4，239，751號(hào))。
根據(jù)上面引用的專(zhuān)利所描述的步驟，含Teichomycin A1、A2和A的抗菌復(fù)合物可按常規(guī)方法通過(guò)用適宜的不溶于水的有機(jī)溶劑萃取，再?gòu)妮腿∪軇┲谐恋淼姆椒ㄗ园l(fā)酵液中收集。然后用交聯(lián)葡萄糖凝膠(Sephadex
)的柱色譜將分離的抗菌復(fù)合物的主要成份Teichomycin A2與其它成份分離。英國(guó)專(zhuān)利2121401號(hào)指出，抗菌Teichomycin A2實(shí)際是五種密切相關(guān)的共同組產(chǎn)的主要組分的混合物。
根據(jù)近來(lái)的結(jié)構(gòu)研究，替考拉寧A2(早先稱(chēng)為T(mén)eichomycin A2)主組分1、2、3、4和5可用上面的通式Ⅰ表示，式中R為氫，Y為羥基，A為-N〔(C10-C11-)脂族?；?β-D-2-脫氧-2-氨基-吡喃葡糖基，M為α-D-吡喃甘露糖基。
更具體地說(shuō)，在替考拉寧A2組分1中，〔(C10-C11)-脂族酰基〕取代基為2-4-癸烯?；?，在替考拉寧A2組分2中所述的取代基為8-甲基壬?；?，在替考拉寧A2組分3中所述的取代基為癸酰基，在替考拉寧A2組分4中所述的取代基為8-甲基癸?；?，在替考拉寧A2組分5中所述的取代基為9-甲基癸?；?。
歐洲專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)306645號(hào)描述了替考拉寧化合物的生產(chǎn)，其中β-D-2-脫氧-2-氨基-吡喃葡糖基的脂肪酰基是6-甲基-辛?；?化合物A或RS3)或正壬基(化合物B或BS4)。
Zanol等人在第十七屆色譜分析國(guó)際討論會(huì)(1988年9月25日至30日在維也納舉行)發(fā)表的題為《替考拉寧的少量組分的高效色譜分離和結(jié)構(gòu)測(cè)定》的論文中描述了其它二種替考拉寧化合物(RS1和RS2)。
所述的化合物的特征在于β-D-2-脫氧-2-氨基吡喃葡糖基的脂族?；謩e是甲基-十一烷?；?RS1)和十二烷?；?RS2)。
所有的糖基如果存在，則通過(guò)O-配糖鍵連接到替考拉寧核上。
另外，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，可將替考拉寧，它的一種純的成分或任意的各種成分以任意比例形成的混合物通過(guò)對(duì)一個(gè)或二個(gè)糖基選擇性水解轉(zhuǎn)化成單一的抗菌產(chǎn)品。他們被稱(chēng)為抗生素L17054和抗菌生素L17046并分別述于歐洲專(zhuān)利119575號(hào)和歐洲專(zhuān)利119574號(hào)。
生產(chǎn)抗生素L17054的優(yōu)選水解條件是采用0.5N鹽酸，反應(yīng)溫度為70至90℃，反應(yīng)時(shí)間通常為15至90分鐘。
抗生素L17054可用通式Ⅰ表示，式中Y為羥基，R和A為氫，B為N-乙酰基-β-D-2-脫氧-2-氨基-吡喃葡糖基，M為α-D-吡喃甘露糖基，其中糖基通過(guò)O-配糖鍵連接到肽核上。
制備抗生素L17046的優(yōu)選水解條件是采用1-3N鹽酸，反應(yīng)溫度為50至90℃，反應(yīng)時(shí)間通常為30至60分鐘。
抗生素L17046可用通式Ⅰ表示，式中Y為羥基，R、A或M為氫原子，B為N-乙酰基-β-D-2-脫氧-2-氨基-吡喃葡糖基，其中糖基通過(guò)O-配糖鍵連接到肽核上。
歐洲專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)301247號(hào)描述了脫甘露糖基替考拉寧衍生物，即通式Ⅰ中A和B不為氫，M為氫且Y為羥基的化合物。
替考拉寧化合物的所有糖基完全選擇裂解得到糖苷配基分子，該分子稱(chēng)為抗生素L17392或脫葡糖替考拉寧，且可用通式Ⅰ表示，式中Y為羥基，R、A、B和M各自為氫。該選擇水解方法在歐洲專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)146053中有述。
歐洲專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)0090578號(hào)公開(kāi)了具有相同結(jié)構(gòu)式的一種物質(zhì)，該物質(zhì)稱(chēng)為抗生素A41030成分B。
該物質(zhì)可用生物方法獲得，該方法包括在合適的介質(zhì)中用菌株費(fèi)吉尼亞鏈霉菌(streptomycesvirginiae)NRRL12525或費(fèi)吉尼亞鏈霉菌NRRL15156進(jìn)行發(fā)酵，然后離析，提純并分離抗生素A41030的組分，抗生素A41030是至少七種成分的抗生素復(fù)合物，包括抗生素A41030成分B。
所有上述化合物，即替考拉寧、替考拉寧A2復(fù)合物、替考拉寧A2組分1、替考拉寧A2組分2、替考拉寧A2組分3、替考拉寧A2組分4、替考拉寧A2組分5、“化合物A或RS3”“化合物B或RS4”、RS1、RS2，抗生素L17054、抗生素L17046、抗生素L17392、歐洲專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)301247號(hào)的脫甘露糖基替考拉寧衍生物和其以任何比例形成的混合物是制備本發(fā)明的取代的烷基酰胺衍生物的適宜原料。
在本說(shuō)明書(shū)中，“替考拉寧化合物”或“替考拉寧原料”是指上述原料中的任意一種，好美國(guó)專(zhuān)利4，239，751所述方法獲得的替考拉寧、其進(jìn)一步提純的任何物質(zhì)、替考拉寧A2復(fù)合物，上述通式Ⅰ中各取代基是下述基團(tuán)的化合物R為氫或N-保護(hù)基，Y為羥基，A為氫或-N〔(C9-C12)脂族?；?β-D-2-脫氧-2-氨基吡喃葡糖基，B為氫或N-乙?；?β-D-2-氨基吡喃葡糖基，M為氫或α-D-吡喃甘露糖基，其條件是只有當(dāng)A和M同時(shí)為氫時(shí)，B才為氫;其鹽或上述物質(zhì)以任意比例形成的混合物。
本文所用的術(shù)語(yǔ)“烷基”，不管是單獨(dú)還是與其它取代基組合，均包括直鏈或支鏈烴基，具體地說(shuō)，“(C1-C6)烷基”表示含1至6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈脂族烴鏈，如甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、丁基、1-甲基丙基、1，1-二甲基乙基、戊基、1-甲基丁基、2-甲基丁基、1-己基、2-己基、3-己基、3，3-二甲基-1-丁基、4-甲基-1-戊基和3-甲基-1-戊基等;“(C1-C4)烷基”表示含1至4個(gè)碳原子的直鏈或直鏈烴鏈，如上面例舉的含1至4個(gè)碳原子的那些烷基。
本文所用的術(shù)語(yǔ)“alk1”、“alk2”、“alk3”表示含2至10個(gè)碳原子的獨(dú)立的直鏈或支鏈亞烷基鏈，例如-CH2-CH2-，-CH2-CH2-CH2-，-CH2-CH2-CH2-CH2-，
-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-，
-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-，-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-，-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-，-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-，-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-，
類(lèi)似地，“alk4”和“alk5”表示含2至4個(gè)碳原子的獨(dú)立的直鏈或支鏈亞烷基鏈，例如上面例舉的含2至4個(gè)碳原子的那些亞烷基。
優(yōu)選的通式Ⅰ的化合物是式中，R為氫或氨基官能團(tuán)的保護(hù)基;
Y為通式-NR1-alk1-〔X-alk2〕p-〔T-alk3〕q-W的化合物及其藥用加成鹽，其中，R1為氫或(C1-C4)烷基，alk1、alk2和alk3各自為含2-4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈亞烷基;
p為1至12的一個(gè)整數(shù);
q為0至12的一個(gè)整數(shù);
X為-NR2-或氧原了，其中，R2為氫、(C1-C4)烷基、alk4NR3R4基，其中alk4為含2至4個(gè)碳原子的直鏈或直鏈亞烷基，R3為氫或(C1-C4)烷基，R4為氫、(C1-C4)烷基或5-6元環(huán)烷基;或R1和R2一起形成連接二個(gè)氮原子的(C2-C4)亞烷基，其條件是在這種情況下p為1T為-NR5-基或氧原子，其中，R5為氫、(C1-C4)烷基、alk5NR6R7基，其中alk5為含2至4個(gè)碳原子的直鏈或直鏈亞烷基，R6為氫或(C1-C4)烷基，R7為氫、(C1-C4)烷基或5-6元環(huán)烷基;或R2和R5一起形成連接二個(gè)氮原子的(C2-C4)亞烷基，其條件是在這種情況下p和q均為1W為羥基、NR8R9，其中R8為H或(C1-C6)烷基，R9為H、(C1-C6)烷基、5-6元環(huán)烷基、CCOR10，其中R10為(C1-C6)酰氧基-(C1-C4)烷基，和N R11R12R13An ，其中R11、R12和R13各自為(C1-C4)烷基和由藥用鹽衍生的陰離子;其條件是當(dāng)X同時(shí)為NR2時(shí)，p為1，q為0，而W不為羥基;
A為H或-N〔(C9-C12)脂族?；?β-D-2-脫氧-2-氨基吡喃葡糖基，B為氫或N-乙?；?β-D-2-脫氧-2-氨基吡喃葡糖基;
M為氫或α-D-吡喃甘露糖基;
其另一條件是只有當(dāng)A和M同時(shí)為氫時(shí)，B才能為氫。
優(yōu)選的是，當(dāng)X和/或T為-NR2-和/或-NR5-時(shí)，alk4和alk5為C2-C4直鏈。
如上所述，P為1至50的一個(gè)整數(shù)，q為0至12的一個(gè)整數(shù)。優(yōu)選的是，當(dāng)X和/或T為-NR2-和/或-NR5-時(shí)，P和q為1至12，而當(dāng)X和T均為氧原子時(shí)，P+q應(yīng)為2至50。
本說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求書(shū)所用的術(shù)語(yǔ)“C5-C6環(huán)烷基”是指被含1至3個(gè)碳原子的低級(jí)烷基(如甲基和乙基)任意取代的環(huán)戊基和環(huán)己基。
優(yōu)選的化合物是通式Ⅰ中X為-NR2-基(R2為氫、(C1-C4)烷基或alk4NR3R4)的那些化合物。
另一組優(yōu)選的化合物是通式Ⅰ中P為1且X為-NR2-(其中R2和R1一起為連接氮原子的(C2-C3)亞烷基)的那些化合物。
在達(dá)種情況下，特別優(yōu)選的是alk1為-CH2-CH2-的那些化合物。
再一組優(yōu)選的化合物是通式Ⅰ中P為1、q為1以及X和T分別為-NR2和-NR5-(其中R2和R5一起為連接氮原子的(C2-C3)亞烷基)的那些化合物。
在這種情況下，特別優(yōu)選的是alk2為-CH2-CH2-的那些化合物。
其它優(yōu)選的化合物是通式Ⅰ中X和T為氧原子，p+q為2至50，W為羥基或NR8R9，其中R8為氫或(C1-C4)烷基，R9為氫、(C1-C4)烷基、環(huán)戊基或環(huán)己基的化合物。
還有一些優(yōu)選的化合物是式中W為NR8R9〔其中R8如上所定義，R9為COOR10，而R10為(C1-C6)酰氧基-(C1-C4)烷基)的那些化合物。
在術(shù)語(yǔ)“(C1-C6)酰氧基-(C1-C4)烷基”中，(C1-C4)烷基是被(C1-C3)直鏈或支鏈烷基任意取代的亞烷基，例如
-COOCH2OCOCH3，
根據(jù)上面所給的總定義，基團(tuán)-NR1-alk1-〔x-alk2〕p-〔T-alk3〕q-W的代表性實(shí)例有-NH(CH2)2-NH(CH2)2-NH2-NH(CH2)2-NH(CH2)3-NH2-NH(CH2)2-NH(CH2)4-NH2-NH(CH2)4-NH(CH2)2-NH2-NH(CH2)3-NH(CH2)4-NH2-NH(CH2)2-NH(CH2)3-NH(CH2)2-NH2-NH(CH2)2-NH(CH2)4-NH(CH2)2-NH2-NH(CH2)3-NH(CH2)4-NH(CH2)3-NH2-NH(CH2)2-NH(CH2)3-NH(CH2)4-NH2-NH(CH2)4-NH(CH2)3-NH(CH2)4-NH2-NH(CH2)3NH(CH2)9-NH(CH2)3NH2-NH(CH2)3NH(CH2)10-NH(CH2)3NH2-NH[(CH2)2NH]2-(CH2)2-NH2-NH[(CH2)3NH]2-(CH2)3-NH2
本發(fā)明的化合物顯示出抗菌活性，可用作抗格蘭氏陽(yáng)性細(xì)蓖的半合成抗菌劑，但對(duì)抗格蘭氏陰性細(xì)菌，具體地說(shuō)對(duì)抗大腸埃希氏菌和綠膿假單胞菌也有特別的活性。
替考拉寧復(fù)合物的各種C63酰胺衍生物、其單一組分和其糖苷配基和假糖苷配基在歐洲專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)218099號(hào)和國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)WO88/06600號(hào)中有所描述。
本發(fā)明的化合物可通過(guò)對(duì)通式Ⅰ(式中Y為OH)的相應(yīng)衍生物(即相應(yīng)的羧酸)進(jìn)行酰胺化的方法來(lái)制備。
用作制備本發(fā)明的化合物的上述原料物質(zhì)既可以是單一的產(chǎn)物，也可以是一種或多種產(chǎn)物的混合物。
因?yàn)橹苽浔景l(fā)明的化合物的所述原料可以以所述二種形式使用，所以獲得的最終產(chǎn)物也是上述通式Ⅰ的單一化合物或二種或多種化合物的混合物?；衔锏倪@些混合物也是發(fā)明的一部分，可用于生物應(yīng)用和用途，或者采用本領(lǐng)域已知步驟被最終分離成其單一組分。適合于從替考拉寧酰胺衍生物的最終產(chǎn)品的混合物中獲得單一組分的分離方法的例子在下列文獻(xiàn)中有所描述歐洲專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)218099號(hào)和國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)WO88/06600號(hào)。
在上述歐洲專(zhuān)利申請(qǐng)和國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)中所述的酰胺化步驟也可用于本發(fā)明化合物的制備。所述步驟包括在縮合劑存在下，在惰性有機(jī)溶劑中將上述羥酸原料與過(guò)量的通式Ⅱ的適宜胺縮合。
式中R1、alk1、alk2、alk3、X、T、p、q和W與上述定義相同。
用于酰胺化反應(yīng)的惰性有機(jī)溶劑是有機(jī)非質(zhì)子溶劑，該溶劑對(duì)反應(yīng)過(guò)程無(wú)不利影響且能至少部分溶解替考拉寧原料。
所述的惰性有機(jī)溶劑的例子有有機(jī)酰胺，烷基醚、二元醇和多元醇的醚、磷酰胺和亞砜、惰性有機(jī)溶劑的優(yōu)選例子有二甲基甲酰胺、二甲氧基乙烷、六甲基磷酰胺、二甲基亞砜和其混合物。
本發(fā)明的縮合劑是適合在有機(jī)化合物，特別是肽的合成中形成酰胺鍵的縮合劑。
縮合劑的典型例子是疊氮磷酸的(C1-C4)烷酯、苯酯或雜環(huán)酯，例如疊氮磷酸二苯酯、疊氮磷酸二乙酯、疊氮磷酸二(4-硝基苯基)酯，二嗎啡酚基疊氮磷酸酯和氯磷酸二苯酯。優(yōu)選的縮合劑是疊氮磷酸二苯酯，即磷酸二苯酯疊氮化物(DPPA)。在這里所述的本發(fā)明的酰胺化方法中，胺反應(yīng)物的摩爾用量通常過(guò)量。
總的來(lái)說(shuō)，當(dāng)胺反應(yīng)物是相當(dāng)便宜的或易獲得的反應(yīng)物時(shí)，其摩爾用量為過(guò)量2至6倍，以3至4倍為優(yōu)選。
為了進(jìn)行酰胺化反應(yīng)，胺必須能與替考拉寧的羧酸官能團(tuán)形成鹽。若胺在選擇的反應(yīng)介質(zhì)中不足以強(qiáng)到形成鹽，則必須往反應(yīng)混合物中加入至少與替考拉寧原料等摩爾量的一種成鹽堿。
當(dāng)胺反應(yīng)物相當(dāng)貴或難以獲得時(shí)，其適宜的方法是使胺反應(yīng)物的摩爾過(guò)量減少，同時(shí)加入一種成鹽堿。
所述的成鹽堿的例子是有機(jī)脂族或雜環(huán)叔胺;如三甲胺，三乙胺，N-甲基吡咯烷或甲基吡啶等。
縮合劑的摩爾用量通常略為過(guò)量，例如為替考拉寧原料化合物的1.2至1.7倍，較好的為1.5倍。
另外，胺反應(yīng)物也可以以相應(yīng)的酸加茂鹽(例如鹽酸鹽)的形式較為方便地加入到反應(yīng)介質(zhì)中。在這種情況下，要使用至少二倍摩爾量，最好過(guò)量2至4倍摩爾量的能使胺從其鹽中游離出的強(qiáng)堿。在這種情況下，適用的堿仍然是如上所例舉的有機(jī)脂族或雜環(huán)叔胺。事實(shí)上，至少在某些情況下，更優(yōu)先選用胺的鹽(其胺可用堿游離出)，尤其是當(dāng)胺的鹽比相應(yīng)的游離胺更穩(wěn)定時(shí)。
反應(yīng)溫度變化很大，取決于具體的原料和反應(yīng)條件。進(jìn)行反應(yīng)的優(yōu)選溫度通常為0至20℃。
反應(yīng)時(shí)間變化很大，取決于其它反應(yīng)參數(shù)?？s合反應(yīng)通常在24-48小時(shí)內(nèi)完成。
在任何情況下，可按本領(lǐng)域已知的方法用薄層色譜法或高效液相色譜法監(jiān)測(cè)反應(yīng)過(guò)程。
基于這些分析結(jié)果，本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員將能夠判斷反應(yīng)過(guò)程，決定何時(shí)中止反應(yīng)并按眾所周知的技術(shù)開(kāi)始處理反應(yīng)物料，所述技術(shù)包括，例如，用溶劑萃取，加入非溶劑進(jìn)行沉淀等，同時(shí)進(jìn)行進(jìn)一步的常規(guī)分離操作和提純，例如柱色譜。
如果胺反應(yīng)物含有選擇的反應(yīng)條件下不呈惰性的其它官能團(tuán)，則所述的官能團(tuán)可用眾所周知的保護(hù)基進(jìn)行合適的保護(hù)。
根據(jù)本發(fā)明的另一優(yōu)選實(shí)施方案，通式Ⅰ中Y為上述定義的基團(tuán)的化合物可通過(guò)將相同通式Ⅰ(式中Y為OH，N15-氨官能團(tuán)最好被保護(hù))的羧酸的“活性酯”與通式Ⅱ的適宜胺反應(yīng)的方法來(lái)制備。
N15-氨基官能團(tuán)可按以下文獻(xiàn)所述的本領(lǐng)域已知的方法進(jìn)行保護(hù)，例如T.W.Greene，“Protective Groups in Organic Synthesis”，John Wiley and Sons，New York，1981和M.Mc.Omie，“Protecting Groups in Organic Chemistry”P(pán)lenum Press，New York，1973。
保護(hù)基團(tuán)在反應(yīng)工藝條件下必須穩(wěn)定，對(duì)酰胺化反應(yīng)不產(chǎn)生不利的影響，并且在反應(yīng)結(jié)束后易于解離和從反應(yīng)介質(zhì)中脫除而不改變新形成的酰胺鍵和化合物如糖組分的總體結(jié)構(gòu)。
用以保護(hù)原料替考拉寧中的N15伯氨基官能團(tuán)的(必要時(shí))胺(Ⅱ)試劑中氨基官能團(tuán)的本發(fā)明方法適用的N-保護(hù)基團(tuán)的代表例是以如下氧羰基為特征的氨基甲酸酯生成劑1，1-二甲基丙炔氧基羰基，叔丁氧基羰基，乙烯氧基羰基，芳氧基羰基，肉桂氧基羰基，芐氧基羰基，對(duì)-硝基芐氧基羰基，3，4-二甲氧基-6-硝基芐氧基羰基，2，4-二氯芐氧基羰基，5-苯并異惡唑甲氧基羰基，9-氨茴酰甲氧基羰基，二苯基甲氧基羰基，異煙堿氧基羰基，2-芐氧基羰基等。
其他適宜的N-保護(hù)試劑是可與待保護(hù)的氨基生成席夫堿的醛或酮或其衍生物。
優(yōu)選的席夫堿生成劑的例子是苯甲醛，尤其優(yōu)選的是2-羥基苯甲醛(水揚(yáng)醛)。
在某些情況下，一種方便的保護(hù)方法是生成亞芐基衍生物，其制備是使胺與苯甲醛在低級(jí)醇如乙醇中并最好在室溫下反應(yīng)。與選擇的替考拉寧原料反應(yīng)完畢后，可按本領(lǐng)域已知方法如催化加氫(使用例如鈀/炭作催化劑)除去亞芐基保護(hù)基。
但是，在上述情況下，應(yīng)注意某些基團(tuán)可通過(guò)催化加氫改性。對(duì)式(Ⅰ)氨基被保護(hù)的衍生物(其中A代表如上定義的基團(tuán)，其?；糠譃?Z)-4-癸烯?；?或其混合物催化加氫的一個(gè)典型后果是癸烯?；衔镏辽俨糠洲D(zhuǎn)化成相應(yīng)的癸烷?；衔?。
正如熟練技術(shù)人員所知，保護(hù)基團(tuán)的具體選擇最終取決于所需具體酰胺衍生物的特性。實(shí)際上，最終化合物的酰胺官能團(tuán)應(yīng)在除去保持基團(tuán)的條件下穩(wěn)定。
由于不同保護(hù)基的脫除條件是公知的，熟練技術(shù)人員能夠選擇適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)基團(tuán)。
“活性酯”的生成反應(yīng)在以下文獻(xiàn)中有概括敘述，F(xiàn)ieser，“ReagentforOrganicSynthesis”，JohnWileyandSonsInc.，第129-130頁(yè)(1967)。
本發(fā)明方法使用的所述活性酯的生成試劑的例子由R.Schwyzer等在Helv.Chim.Acta，1955，38，69-70中敘述并包括ClCH2CN，BrCH2COOC2H5，BrCH(COOC2H5)2，ClCH2COCH3，
屬于該類(lèi)型的一個(gè)優(yōu)選試劑是氯乙腈。在該例中，氯乙腈本身或二甲基甲酰胺(DMF)可作為優(yōu)選的溶劑使用。
一般地講，適宜生成“活性酯”的惰性有機(jī)溶劑是那些對(duì)反應(yīng)過(guò)程不產(chǎn)生不利影響并能夠至少部分地溶解羧酸原料的有機(jī)非質(zhì)子溶劑。
所述惰性有機(jī)溶劑的例子有有機(jī)酰胺類(lèi)，烷基醚類(lèi)，二醇醚和多醇醚類(lèi)，磷酰胺類(lèi)，亞砜類(lèi)和芳族化合物。優(yōu)選的惰性有機(jī)溶劑的例子有二甲基甲酰胺，二甲氧基乙烷，六甲基磷酰胺，二甲基亞砜，苯，甲苯及其混合物。
更優(yōu)選的溶劑選自乙腈，二甲亞砜，二甲基甲酰胺?；钚怎サ纳煞磻?yīng)通常是在不影響反應(yīng)過(guò)程的堿的存在下進(jìn)行，堿的例子有例如三烷基胺如三乙胺，碳酸鉀或碳酸鈉，或碳酸氫鉀或碳酸氫鈉。一般地講，堿對(duì)替考拉寧羧酸原料的摩爾比為2-6，推薦的是，堿以三倍摩爾過(guò)量使用。優(yōu)選的堿是三乙胺。
“活性酯”的生成試劑的使用量比替考拉寧羧酸原料大為過(guò)量。摩爾用量通常過(guò)量5-35倍，最好是過(guò)量約20-30倍。反應(yīng)溫度在10-60℃之間，最好在15-30℃之間。反應(yīng)時(shí)間一般取決于其他具體反應(yīng)參數(shù)，通常為3-48小時(shí)。
在這種情況下，可利用高效液相色譜法(HPLC)或薄層色譜法(TLC)鑒測(cè)反應(yīng)過(guò)程以確定反應(yīng)完成時(shí)間和回收所需中間體的時(shí)間。“活性酯”中間體可在與制備本身相同的反應(yīng)介質(zhì)中直接使用，但是，在通常情況下，可利用非溶劑沉淀法或溶劑萃取法分離中間體，而且不必進(jìn)一步提純，用于下一反應(yīng)步驟。但是若必要，可以利用柱色譜法如快速柱色譜法或反相柱色譜法提純。
然后，所得“活性酯”中間體與摩爾過(guò)量的式Ⅱ胺衍生物在有機(jī)極性溶劑存在下，在5-60℃，最好在10-30℃溫度下反應(yīng)。
在該例中，有機(jī)極性溶劑可以是極性質(zhì)子溶劑或非質(zhì)子溶劑。
優(yōu)選的有機(jī)極性質(zhì)子溶劑的例子有(C2-C4)低級(jí)烷醇如乙醇，正丙醇，異丙醇，正丁醇等，或其混合物，最好以無(wú)水狀態(tài)使用。
優(yōu)選的有機(jī)極性非質(zhì)子溶劑的例子有N，N-二甲基甲酰胺(DMF)，六甲基磷酰胺(HMPA)，或其混合物，1，3-二甲基-3，4，5，6-四氫-2(1H)-嘧啶酮(DMPU)，二甲基亞砜(DMSO)或二甲氧乙烷(DMF)。
“活性酯”與選擇的胺的反應(yīng)在5-60℃，較好在10-30℃，最好在20-35℃溫度下進(jìn)行，“活性酯”中間體與上述定義的胺(Ⅱ)的摩爾比較好為1∶5-1∶30，最好為1∶10-1∶20。反應(yīng)過(guò)程通?？衫帽由V法或高效液相色譜法來(lái)鑒測(cè)。
可以按照普通方法，例如溶劑蒸發(fā)法或加入非溶劑法將在酰胺化反應(yīng)中所得的酰胺衍生物從反應(yīng)溶液中分離出。氨基保護(hù)基團(tuán)通常是在從酰胺化反應(yīng)中分離出的粗產(chǎn)品上脫除的。
國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)WO88/06600號(hào)敘述了從替考拉寧衍生物脫除所述保護(hù)基團(tuán)的方法例。
如果采用催化加氫方法，則該反應(yīng)通常是在稀的強(qiáng)酸(最好為無(wú)水機(jī)酸)水溶液存在下，在與所述稀的強(qiáng)酸水溶液混溶的有機(jī)溶劑中進(jìn)行。然后對(duì)反應(yīng)濾液進(jìn)行后處理以回收式Ⅰ酰胺的無(wú)機(jī)酸加成鹽或相應(yīng)的游離堿。如果氨基保護(hù)基團(tuán)可用稀的無(wú)機(jī)酸脫除(例如保護(hù)基團(tuán)為席夫堿或C1-4烷氧羰基)，則可在不引起糖部分裂解的條件(例如低溫，短的反應(yīng)時(shí)間)下，進(jìn)行上述類(lèi)似方法。
本發(fā)明式Ⅰ化合物的另一個(gè)制備方法包括在酸接受劑存在下，在惰性溶劑中使式Ⅰ中N15保護(hù)的N63酰胺衍生物(其中Y為-NR1alk1XH或NR1-alk1〔X-alk2〕-TH)與式r-〔alk2)10-〔T-alk3〕q-W或式r-〔alk3〕-W試劑反應(yīng)，其中，符號(hào)R1，alk1，alk2，alk3，X和T分別如上所定義，r代表鹵素，甲磺?；蚣妆交酋；Ｔ谠摾?，p最好為1或2，q不為零并最好為1或2，X和T較好代表NH或氧，最好代表氧。按照制備本發(fā)明式Ⅰ化合物的通用方法，制備上述N15保護(hù)的N63酰胺衍生物。
若需要其中W代表-NR8R9-(其中R8如上定義，R9為COOR10，R10為(C1-C6)酰氧基-(C1-C4)烷基)的式Ⅰ化合物，則需要使N15保護(hù)的N63酰胺衍生物(式中W為-NHR8)，而R8如上定義)與碳酸α-酰氧基-烷基對(duì)硝基苯基酯在無(wú)碳酸堿金屬鹽如碳酸鈉的存在下進(jìn)行反應(yīng)。
碳酸α-酰氧基-烷基對(duì)硝基苯基酯可按J.Med.Chem.，31，第318-322(1988)頁(yè)所述方法進(jìn)行制備。
本發(fā)明的某些酰胺如替考拉寧A2復(fù)合物，其單一組分或兩種或多種組分的混合物可用作制備單一抗生素的原料，方法是按歐洲專(zhuān)利119575號(hào)和119574號(hào)所述方法，選擇水解一個(gè)或多個(gè)糖部分。
制備其中A為氫，B為N-乙?；?β-D-2-脫氧-2-氨基吡喃葡萄糖基，M為α-D-吡喃甘露糖基的式Ⅰ化合物的另一個(gè)方法包括按照歐洲專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)146822號(hào)所述方法水解相應(yīng)的式Ⅰ酰胺化合物(其中A為-N-〔(C9-C12)脂族?；?β-D-2-脫氧-2-氨基吡喃葡萄糖基，B為N-乙?；?β-D-2-脫氧-2-氨基吡喃葡萄糖基，M為α-D-吡喃甘露糖基，即，替考拉寧A2復(fù)合物或其單一組分的羧酰胺衍生物)。
該方法包括使上述原料與濃的有機(jī)酸水溶液在室溫下接觸，最好是與濃度為75%-95%的三氟乙酸水溶液在10-50℃溫度下接觸。
式Ⅰ化合物(其中A和M均為氫，B為N-乙酰基-β-D-2-脫氧-2-氨基吡喃葡萄糖基)的另一個(gè)制備方法包括使式Ⅰ化合物(其中A為N〔(C9-C12)脂族?；?β-D-2-脫氧-2-氨基吡喃葡萄糖基，B為N-乙?；?β-D-2-脫氧-2-氨基吡喃葡萄糖基，M為α-D-吡喃甘露糖基)按歐洲專(zhuān)利申請(qǐng)175100所述方法進(jìn)行水解。
該方法包括在室溫下為液態(tài)并選自醚、酮或其混合物的極性非質(zhì)子有機(jī)溶劑存在下，使上述原料與強(qiáng)酸接觸。
在后一種情況下，也可以使用A為氫、B為N-乙?；?β-D-2-脫氧-2-氨基吡喃葡萄糖基、M為α-D-吡喃甘露糖基的式Ⅰ酰胺化合物，該化合物是用濃的三氟乙酸水溶液按上述方法進(jìn)行水解而獲得的。
為了分離酸加成鹽，通過(guò)加入堿溶液如氫氧化鈉水溶液將由裂解氨基保護(hù)基團(tuán)得到的反應(yīng)溶液的PH值調(diào)至4-7，減壓蒸除溶劑后，形成的固體以與強(qiáng)酸(在除去保護(hù)步驟過(guò)程中已加入)的加成鹽的形式分離出。可以利用普通技術(shù)，例如柱色譜法，加非溶劑從溶液沉淀法，高效液相制備色譜法等進(jìn)一步提純?cè)摦a(chǎn)品?？梢詫⑺峒映甥}轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的式Ⅰ游離堿，方法是，將酸加成鹽懸浮于或溶解于溶劑水溶液中，然后將其調(diào)至適當(dāng)?shù)腜H值，隨后形成游離堿。然后利用例如有機(jī)溶劑萃取法回收該產(chǎn)品，或者，通過(guò)加入選擇的酸和如上后處理將該產(chǎn)品轉(zhuǎn)化成另一酸加成鹽。
有時(shí)，在上述操作之后，需要使回收的產(chǎn)品進(jìn)行常規(guī)的脫鹽操作。
例如，可以采用控制多孔聚葡聚糖樹(shù)脂(例如SephadexLH20)柱色譜法或硅烷化硅膠柱色譜法。用水溶液洗脫不需要的鹽之后，用水和極性或非極性有機(jī)溶劑的混合物，例如乙腈/水，從5%-100%乙腈線性梯度或階梯梯度洗脫所需產(chǎn)物，然后通過(guò)蒸發(fā)溶劑或凍干回收產(chǎn)物。
式Ⅰ化合物的游離堿可以轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的酸加成鹽，方法是將游離堿懸浮或溶解于含水的溶劑中并且加入略微過(guò)量的選擇的酸。然后冷凍干燥所形成的懸浮液或溶液，得到所需酸加成鹽。在某些情況下，可不采用冷凍干燥，而加入可與水溶混的非溶劑，通過(guò)沉淀作用回收最終的鹽。
如果最終的鹽不溶于有機(jī)溶劑而其游離堿溶于有機(jī)溶劑，則可以在加入化學(xué)計(jì)量量的或略微過(guò)量的選擇的酸之后，過(guò)濾無(wú)鹽的有機(jī)溶液得到最終的鹽。
式Ⅰ化合物代表性的和適宜的酸加成鹽包括與有機(jī)酸和無(wú)機(jī)酸進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)而生成的酸加成鹽，例如這些酸包括鹽酸，氫溴酸，硫酸，磷酸，乙酸，三氟乙酸，三氯乙酸，琥珀酸，檸檬酸，抗壞血酸，乳酸，馬來(lái)酸，富馬酸，棕櫚酸，膽酸，pamoicacid，粘酸，樟腦酸，戊二酸，乙醇酸，苯二甲酸，酒石酸，月桂酸，硬脂酸，水楊酸，甲磺酸，苯磺酸，山梨酸，苦味酸，苯甲酸，肉桂酸等。
本發(fā)明優(yōu)選的酸加成鹽是藥用酸加成鹽。
術(shù)語(yǔ)“藥用酸加鹽”是指與生物學(xué)定義酸的加成鹽，其制備和配方標(biāo)準(zhǔn)均符合藥典要求。
適宜作“藥用酸加鹽”的酸包括以上列舉的酸。
本發(fā)明化合物的游離堿和其酸加成鹽適宜作抗菌劑，可抗格蘭氏陽(yáng)性和格蘭氏陰性細(xì)菌。
但是，本發(fā)明化合物對(duì)格蘭氏陰性細(xì)菌，尤其是對(duì)綠膿假單胞菌具有異常好的活性。
實(shí)際上，目前在替考拉寧抗生素中這些化合物是對(duì)該屬微生物最有效的衍生物。具有脫糖替考拉寧核的本發(fā)明化合物具有突出的活性，而具有替考拉寧核的本發(fā)明化合物也具有顯著的活性。
使用Difco Todd-Hewitt肉湯(釀膿鏈球菌和肺炎鏈球菌)或Oxoid Iso-Sensitest肉湯(葡萄球菌，糞鏈球菌和格蘭氏陰性微生物)，利用在微量滴定管中的標(biāo)準(zhǔn)兩倍稀釋試驗(yàn)，可以說(shuō)明本發(fā)明化合物的體外抗菌活性。足夠稀釋肉湯培養(yǎng)物以使最終接種物的菌落生長(zhǎng)單位/ml(CFU/ml)約為104。最低抑制濃度(MIC)是在37℃孵育18-24小時(shí)后沒(méi)有觀察到生長(zhǎng)的最低濃度。
本發(fā)明代表化合物的抗菌試驗(yàn)結(jié)果總結(jié)于表Ⅰ。
化合物22，23，25，26，27和29對(duì)某些綠膿假單胞菌的多抵抗臨床隔離物的活性見(jiàn)諸表Ⅱ。
本發(fā)明化合物比替考拉寧和歐洲專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)218099中以及國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)WO/8806600中最接近的化合物具有更高的抗綠膿假單胞菌活性，抗相同微生物的MIC(微克/ml)決不低于32。
從由于所述菌株引起的感染的重要性來(lái)看，本發(fā)明化合物的抗綠膿假單胞菌活性尤其恰如其分。
綠膿假單胞菌臨床感染包括局部感染例如創(chuàng)傷(尤其是燒傷)、泌尿道、呼吸道、腸、眼和耳感染，以及全身性感染(血液，骨或敗血)，全身性感染由抵抗力弱患者的主要局部感染部位引起，導(dǎo)致感染部位向各個(gè)器官轉(zhuǎn)移擴(kuò)展。
對(duì)感染敗血假單胞菌的患者進(jìn)行預(yù)測(cè)是困難的，某些作者報(bào)道死亡率非常高(有時(shí)達(dá)100%)。參見(jiàn)P.H.Clarke和M.H.Richmond的“GeneticsandBiochemistryofPseudomonas”(第二章)，JohnWileyandSons(1975)。
此外，與脫糖替考拉寧和替考拉寧假苷配基不同，本發(fā)明的替考拉寧化合物，就口服而言，比本領(lǐng)域已知的替考拉寧酰胺衍生物具有顯著高的體內(nèi)活性。
用被釀膿鏈球菌C203敗血感染的小鼠作體內(nèi)試驗(yàn)，本發(fā)明代表化合物在體內(nèi)試驗(yàn)中的ED50值(mg/kg)由表Ⅲ給出，其中釀膿鏈球菌C203按V.Arioli等在JournalofAntibiotics29，511，1976所述方法制備。
表Ⅲ
<p>已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，在治療被大腸埃希氏桿菌感染的小鼠時(shí)，通過(guò)靜脈內(nèi)注射(40mg/kg，7/8觀察/待治)和經(jīng)皮下注射(ED50≤38mg/kg)后，化合物50具有顯著的體內(nèi)活性。
根據(jù)上述抗菌活性，本發(fā)明化合物可用作人類(lèi)和獸類(lèi)抗菌藥制劑的活性成分，用來(lái)預(yù)防和治療由易感于所述活性成分的病菌引起和感染疾病。
在上述治療中，可以以單一化合物或以任何比例的混合物形式使用這些化合物。
本發(fā)明化合物可以口服，局部給藥或非腸胃給藥，但最好是非腸胃給藥?；诮o藥途徑，這些化合物可制成各種劑型?？诜苿┛梢允悄z囊，片劑，溶液劑或懸浮劑。如本領(lǐng)域公知，除了活性成分外，膠囊劑和片劑還可以包括常規(guī)賦形劑如稀釋劑例如乳糖，磷酸鈣，山梨醇等;潤(rùn)滑劑例如硬脂酸鎂，滑石，聚乙二醇;粘合劑例如聚乙烯吡咯烷酮，明膠，山梨醇，黃蓍膠，金合歡;增香劑以及適宜的崩解劑和潤(rùn)濕劑。液體制劑通常為水或油溶液或懸浮液，并可包括常規(guī)添加劑如懸浮劑。若用以局部用途，則本發(fā)明化合物也可制成用于皮膚、鼻和喉或支氣管組織的粘液膜的適當(dāng)劑型，也可采用乳油劑，軟膏劑，液體噴霧劑或吸入劑，錠劑或喉涂劑等劑型。
本發(fā)明化合物另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是其在寬的PH值范圍內(nèi)具有顯著高的水溶解性，因此避免了藥用組合物的一般問(wèn)題。
對(duì)于治療眼或耳，制劑可采取液體或半液體形式，在疏水性或親水基劑中配制，例如軟膏劑，乳油劑，洗劑，涂劑或粉劑。
對(duì)于直腸給藥，本發(fā)明化合物可以以結(jié)合常規(guī)載體的栓劑形式給藥，常規(guī)載體例如有可可油，石蠟，鯨蠟或聚乙二醇及其衍生物。
注射組合物可以采用以油或水作載體的懸浮液，溶液或乳液，并且可以包括配制劑如懸浮劑，穩(wěn)定劑和/或分散劑。
另一種作法是，活性成分可采用粉劑形式，使用時(shí)可用適當(dāng)?shù)妮d體如無(wú)菌水重新配制。
活性成分的給藥量取決于諸多因素如待治療對(duì)象的大小和狀態(tài)，給藥途徑和頻率以及涉及的成因劑。
本發(fā)明化合物通常在約0.5-30mg活性成分/kg體重的劑量下是有效的，最好每天分2-4次給藥。組合物最好制成含約20-300mg/單位的劑量單位形式。
以下實(shí)施例說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)施方式，但是不應(yīng)認(rèn)為是限制本發(fā)明的全部范圍。
實(shí)施例-實(shí)驗(yàn)部分在以下實(shí)施例中，原料可以是替考拉寧A2復(fù)合物(TGA)其單一組分或一種或多種所述組分的混合物。
典型的復(fù)合物混合物主要由對(duì)應(yīng)于或Ⅰ的五種組分組成，其中符號(hào)A代表的β-D-2-脫氧-2-氨基吡喃葡萄糖基的脂族?；糠址謩e是Z-(4)-癸烯?；?AC1)8-甲基壬?；?AC2)
癸烯酰基(AC3)8-甲基癸?；?AC4)和9-甲基癸?；?AC5)，B是N-β乙酰基-D-2-脫氧-2-氨基吡喃葡萄糖基(AcGlu)，M是α-D-吡喃甘露糖基(Man)和Y是OH。
該混合物用縮寫(xiě)字TGAC1-5表示。若原料是所述混合物的一個(gè)單一組分，則基于上述氨基吡喃葡萄糖基的具體的脂族?；?，該單一組分用TGAC1，TGAC2，TGAC，TGAC4或TGAC5表示。
若使用一種或多種組分的混合物，則可根據(jù)復(fù)合物的相同系統(tǒng)標(biāo)明。例如，縮寫(xiě)字TGAC2-5表示組分2-5的混合物，而不再存在組分1。當(dāng)催化加氫使成分1雙鍵飽和使其轉(zhuǎn)化成組分3時(shí)，便可獲得該混合物?？s寫(xiě)字TGAC2，3，是指組分2，3的混合物，縮寫(xiě)字TGAC4，5，是指成分4和5的混合物。
抗生素L17392(替考拉寧的糖苷配基)由DTG表示，假糖苷配基L17054和L17046分別由TGA3-1和TGA3-2表示，脫甘露糖基假糖苷配基(歐洲專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)301247號(hào))由DM-TGAC表示。
使用如上定義的縮寫(xiě)字AC1，AC2，AC3，AC4和AC5，符號(hào)A標(biāo)明β-D-2-脫氧-2-氨基吡喃葡萄糖基的特定脂族?；〈?A/AC)，并參考式Ⅰ，來(lái)表示下表中的所得最終產(chǎn)品。若獲得的是一種或多種組分的混合物，則通過(guò)上述相同的正規(guī)系統(tǒng)標(biāo)明。
實(shí)施例1-30當(dāng)需要TGAC2-5混合物的N63-羧酰胺時(shí)，使用下述步驟A.制備N(xiāo)15-芐氧羰基(CBZ)替考拉寧A2復(fù)合物及其單一組分1-5將4.5ml芐基氯甲酸酯的10ml無(wú)水丙酮溶液在室溫下滴加到45g(約24mmol)替考拉寧A2復(fù)合物(或其單一組分1-5)和6ml(約44mmol)三乙胺(TEA)的300ml二甲基甲酰胺(DMF)的攪拌溶液中。約60分鐘后，加600ml乙醚，過(guò)濾收集沉淀(約59g)再溶于2.51丙酮/水(1∶1，V/V)的混合物中。所得溶液在35℃減壓濃縮至體積約1.61，然后用1.61乙醚萃取，乙醚分離后棄掉。
用冰醋酸將水層調(diào)至PH4.8，用1.51正丁醇萃取。分離有機(jī)層，用1.51水(2×750ml)洗滌，然后在45℃減壓濃縮至體積約200ml。加入乙酸乙酯(約800ml)，過(guò)濾收集分離出的固體，用乙醚(約500ml)洗滌，并在室溫下真空干燥過(guò)夜，得到45.7g(約96%)純的標(biāo)題化合物。
B.制備N(xiāo)15CBZ-替考拉寧A2復(fù)合物及其單一組分1-5，氰甲基酯向45g(約22mmol)N15CBZ-替考拉寧A2復(fù)合物(或其單一組分1-5)的450mlDMF攪拌溶液中，室溫下加入5.251(約37mmol)TEA和60ml氰乙腈。20小時(shí)后，將反應(yīng)混合物傾入4.51乙酸乙酯中，過(guò)濾收集沉淀(約50g)，再將其溶于900ml甲醇/水(1∶1，V/V)混合物中。用水醋酸將所得溶液調(diào)至PH5.5，然后加入1.11正丁醇。在35℃減壓蒸除大部分甲醇，得到正丁醇和水混合物(約1.51)，分離有機(jī)層，用500ml水洗滌，在40℃減壓濃縮至體積約200ml。加入800ml乙酸乙酯，過(guò)濾收集分離出的固體，用500ml乙醚洗滌，并在35℃真空干燥過(guò)夜，得到44.2g(約98%)純的標(biāo)題化合物。
C.制備N(xiāo)15CBZ-替考拉寧A2復(fù)合物及其單一組分1-5的N63_羧酰胺16g(約8mmol)N15_CBZ-替考拉寧A2復(fù)合物(或其單一組分1-5)，氰甲基酯和大量過(guò)量(50-100mmol)適當(dāng)胺反應(yīng)物的160mlDMF或DMSO溶液在室溫下攪拌60-120分鐘，然后加入160ml無(wú)水乙醇，繼之1.51乙酸乙酯。過(guò)濾收集分出的固體，用500ml乙醚萃取，然后于空氣中室溫下干燥，得到純度足以用于下步氫化步驟(HPLC滴定一般＞90%)的粉未(產(chǎn)率一般為＞85%)。
D.制備替考拉寧A2復(fù)合物及其單一組分1-5的N63-羧酰胺將上述所得產(chǎn)物(5mmol)溶于500ml甲醇/0.04N鹽酸(7/3，V/V)混合物中，所得溶液在室溫和常壓下在5%Pd/C(5g)存在下氫化。反應(yīng)一結(jié)束(HPLC)，用硅藻土(BDH545)板濾除催化劑。用1NNaOH將透明的濾液調(diào)至pH6.5，加入500ml正丁醇。所得混合物在40℃減壓濃縮至體積約150ml，然后加入350ml乙醚，過(guò)濾收集沉淀。當(dāng)反應(yīng)是用含有相當(dāng)于替考拉寧A2復(fù)合物組分1的衍生物的基質(zhì)進(jìn)行時(shí)，相應(yīng)的最終產(chǎn)物并不含有組分1的羧酰胺，這是因?yàn)樗呀?jīng)幾乎完全轉(zhuǎn)化成組分3的羧酰胺。
E.用反相柱色譜純化產(chǎn)物將上面得到的粗產(chǎn)物(10g)溶于乙腈/水(1∶1，V/V)混合物(300ml)中。加水至形成混濁溶液(加水量不超過(guò)700ml)，將其加到硅烷化硅膠(0.06-0.2分;MerckCo.)柱上端。該硅烷化硅膠是用相同的溶劑混合物(即CHCN和水，其用量比基于為得到混濁溶液所需的加水量)，以沉淀開(kāi)始出現(xiàn)時(shí)制備的。柱以乙腈在水中10%-80%的濃度線性梯度洗脫，(用冰醋酸將乙腈的水溶液事先調(diào)至PH3.2)，以400ml/小時(shí)的速率進(jìn)行15小時(shí)，同時(shí)用HLPC監(jiān)測(cè)以25ml份收集。將含有所需純產(chǎn)物的份合并，加入足量的正丁醇，于45℃減壓下燥后得到混濁的無(wú)水丁醇溶液。加入3倍體積的乙醚，收集分開(kāi)的固體，用乙醚洗滌，室溫下真空干燥過(guò)夜，得到純的目的化合物。
當(dāng)分子中僅有的堿官能團(tuán)是替考拉寧A2復(fù)合物15位上的游離氨基，或當(dāng)以酰胺取代基引入的附加氨基其堿性不足以用乙酸形成酸加成鹽時(shí)，本發(fā)明的化合物(表Ⅳ)以游離堿形式獲得。不然則以乙酸鹽形式回收。
當(dāng)需要這種酸加成鹽時(shí)，根據(jù)下述步驟制備相應(yīng)的鹽酸化物
將1mmol或是游離堿或是乙酸鹽形式的替考拉寧A2復(fù)合物(或其單一組分)的酰胺溶于10mlDMF。將摩爾過(guò)量10%的10NHcl(一個(gè)氨官能團(tuán)需0.11ml鹽酸，兩個(gè)氨基需0.22ml，以此類(lèi)推)在5℃攪拌加入，然后加入40ml乙醚。過(guò)濾收集形成的沉淀，用乙醚洗滌，室溫下真空干燥過(guò)夜(產(chǎn)率＞95%)。
當(dāng)需要替考拉寧A2復(fù)合物(或混合物TGAG1-5)的成分1(TGAC)的N63-羧酰胺時(shí)，采用下述步驟＜A′制備N(xiāo)15-叔丁氧羰基(t-BOC)替考拉寧A2復(fù)合物及其單一成分1-5 10g(約5mmol)替考拉寧A2復(fù)合物及其單一成分1-5，1.2ml(約8.5mmol)三乙胺(TEA)和2.4g(約8mmol)叔丁基-2，4，5-三氯苯基碳酸酯的100ml三甲基甲酰胺(DMF)溶液在室溫下攪拌24小時(shí)。然后將其傾入200ml水中，用1NHcl將所得混濁混合物調(diào)至PH3，然后用600ml正丁醇/乙酸乙酯(3565，V/V)混合物萃取。分離有機(jī)相，用水洗滌(2×100ml)，然后于45℃減壓濃縮至體積約100ml。加入乙酸乙酯(約400ml)，過(guò)濾收集分開(kāi)的沉淀，用乙醚(約200ml)提取，于室溫下真空干燥過(guò)夜，得到10.3g(約98%)純的標(biāo)題化合物。
B′.制備N(xiāo)15-t-BOC-替考拉寧A2復(fù)合物及其單一組分1-5，氰甲基酯基本上如前述步驟B，由t-BOC-替考拉寧A2復(fù)合物得到標(biāo)題化合物。
C′.制備N(xiāo)15-t-BOC-替考拉寧A2復(fù)合物及其單一組分1-5的N63-羧酰胺基本上按前述步驟C，但使用二甲亞砜(DMSO)取代DMF作為溶劑，由N15-t-BOC-替考拉寧A2復(fù)合物得到標(biāo)題化合物，氰甲基酯，產(chǎn)率(一般＞85%)，純度(HPLC滴定＞90%)。
D′.制備替考拉寧A2復(fù)合物或其單一組分的N63羧酰胺將產(chǎn)物(N15t-BOC-替考拉寧A2復(fù)合物或其單一組分的N63羧酰胺)(4mmol)在10℃溶于40ml無(wú)水三氟乙酸(TFA)。一旦形成透明溶液(約2分鐘，在任何情況下，加入TFA后不超過(guò)5分鐘)，便在10℃冷卻下用40ml甲醇稀釋反應(yīng)混合物。加入420ml乙醚，過(guò)濾收集分離的沉淀，用乙醚洗滌(5×200ml)。
將粗產(chǎn)物(5g)溶于乙腈/水(1∶1，V/V)混合物(150ml)，用1NNaOH將溶液PH調(diào)至6并用水稀釋后，按照上面E.所述的色譜提純步驟，可便利地進(jìn)行產(chǎn)物純化。
當(dāng)需要脫葡糖替考拉寧(DTG)的N63-羧酰胺時(shí)，采用下述步驟A″.制備N(xiāo)15-叔丁氧羰基(t-BOC)脫葡糖替考拉寧向45g(約37mmol)抗生素L17392(脫葡糖替考拉寧)的600mlDMF攪拌溶液中，加入19.3g(約65mmol)叔丁基-2，4，5-三氯苯基碳酸酯和10.2ml(約74mmol)TEA。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌24小時(shí)，然后傾入1.51水中。用1N鹽酸將溶液的PH調(diào)至3，然后用31乙酸乙酯/正丁醇(2∶1，V/V)混合物提取。分出有機(jī)層，用11水提取，然后在40℃減壓濃縮至體積約為300ml。加入700ml乙醚，過(guò)濾收集分離的沉淀，用200ml乙醚提取，室溫下真空干燥過(guò)夜，得到44g(92%)純的標(biāo)題化合物。
B″.制備N(xiāo)15-t-BOC-脫葡糖替考拉寧氰甲基酯44g(約33mmol)N15-t-Boc脫葡糖替考拉寧，4.7ml(約34mmol)TEA和44ml氰乙腈的440mlDMF溶液在室溫下攪拌20小時(shí)，然后加入11乙酸乙酯，過(guò)濾收集沉淀。再將其(約46g)重新溶于1.51甲醇/水(1∶2，V/V)混合物，用冰醋酸將溶液調(diào)至PH5.6。
加入21正丁醇后，在30℃減壓蒸除大部分甲醇，分出有機(jī)層，用1l水洗滌，然后在35℃減壓濃縮至最終體積約300ml。加入700ml乙醚，過(guò)濾收集分離的沉淀，用500ml乙醚洗滌，然后在室溫下真空干燥過(guò)夜，得到42.5g(96%)純的標(biāo)題化合物。
C″.制備N(xiāo)15-t_Boc脫葡糖替考拉寧的N63-羧酸胺向14g(約10mmol)N15-t-Boc-脫葡糖替考拉寧和大量過(guò)量(100-150mmol)適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)物胺的200mlDMF攪拌溶液中，在室溫下加入8.9ml(約150mmol)冰醋酸。冰醋酸的摩爾量取決于反應(yīng)物胺的結(jié)構(gòu)。實(shí)際上，當(dāng)胺不含其他堿性官能團(tuán)時(shí)，每毫摩爾胺需要0.5mmol冰醋酸，當(dāng)胺含有一個(gè)附加堿性官能團(tuán)時(shí)，需要1mmol(冰醋酸，當(dāng)胺含有兩個(gè)附加堿性官能團(tuán)時(shí)，需要2mmol冰酯酸。盡管縮合反應(yīng)并不需要有冰醋酸，但有時(shí)為防止在堿性條件下可能出現(xiàn)在C3位分子差向異構(gòu)副反應(yīng)，采用它是適宜的。
此外，酸的存在在絕大數(shù)情況下不影響縮合反應(yīng)速率。
3-6小時(shí)后(除在少數(shù)情況下，反應(yīng)一般在3小時(shí)內(nèi)完成)，加入600ml乙酸乙酯，過(guò)濾收集沉淀，用200ml乙醚洗滌，室溫下真空干燥過(guò)夜，得到其純度足以適于下面脫保護(hù)基步驟的產(chǎn)物(產(chǎn)率＞75%)。
D″.制備脫葡糖替考拉寧的N63-羧酸胺1mmol上述得到的產(chǎn)物(HPLC滴定一般＞85%，含有某些作為主要雜質(zhì)的反應(yīng)物胺的乙酸鹽)的25-30ml無(wú)水三氟乙酸溶液在室溫下攪拌20分鐘，然后在25℃減壓蒸除溶劑。油狀殘余物重新溶解于50ml水/乙腈(6∶4，V/V)混合物中，用水稀釋所得溶液至沉淀開(kāi)始出現(xiàn)。用1N鹽酸將懸浮液調(diào)至PH3.0(如有必要)，所得溶液置于水中含有100g硅烷化硅膠(0.06-0.2分;MerckCo.)的柱的上端。
E″.用反相柱色譜純化產(chǎn)物裝有上述產(chǎn)物的柱用1l水洗脫，然后以線性梯度為10%乙腈水溶液至50%乙腈0.01N鹽酸溶液，用15小時(shí)，速率為200ml/小時(shí)洗脫，同時(shí)以10ml份收集。將含有純產(chǎn)物的份極性化，加入足量的正丁醇，濃縮后得到混濁的無(wú)水丁醇溶液(30-100ml)。加入三倍體積的乙醚，過(guò)濾收集分離的固體，用乙醚洗滌，室溫下真空干燥2-3天得到純的鹽酸鹽形式的脫葡糖替考拉寧的酰胺。
按照上面的色譜提純步驟，但以線性梯度為10%-60%乙腈水溶液洗脫，用加入三氟乙酸來(lái)使洗脫劑PH保持在2.5，可得到相應(yīng)的氟乙酸鹽。
通過(guò)使用適當(dāng)?shù)脑噭㏕GAC，其單一組分，DTG或DMTGAC和式為-NHR1-alk1-〔X-alk2〕p-〔T-alk3〕q-W(Ⅱ)的胺，在前述條件下，可得到表Ⅳ中所示的化合物。
實(shí)施例31制備式Ⅰ化合物31
2g(約1mmol)N15-CBZ-替考拉寧A2復(fù)合物(如上述制備的氰甲基酯)和2ml1，3-二甲基1，3-丙二胺的20mlDMF溶液在室溫下攪拌2小時(shí)，加入20ml無(wú)水乙醇，再加入200ml乙酸乙酯。過(guò)濾收集分離的固體。用50ml乙醚洗滌，室溫下真空干燥過(guò)夜，得到1.95g純的N15-CBZ-替考拉寧A2復(fù)合物，1-甲基-3-(甲氨基)丙基-酰胺。
向1.37g(0.65mmol)上述化合物的100ml無(wú)水甲醇的攪拌溶液中。室溫下加入1g(9.4mmol)無(wú)水碳酸氫鈉和2.5g(10.1mmol)溴化2-溴乙基三甲基銨。反應(yīng)混合物在45℃攪拌3天，然后冷卻至10℃，傾入100ml水中。減壓下于30℃蒸除甲醇，水相用BuOH/EtOAc(1/2，V/V)混合物(300ml)提取。分離有機(jī)相，40℃減壓濃縮至小體積(約20ml)。加入180ml乙醚，收集沉淀的固體(1.12g標(biāo)題化合物的N15-CBZ前體)，在實(shí)施例1所述條件下氫化，得到0.45g的化合物31。
實(shí)施例32制備式Ⅰ化合物32
按照實(shí)施例31所述步驟，使用2gN15-CBZ-脫葡糖替考拉寧(氰甲基酯)，得到化合物32。
實(shí)施例33制備式Ⅰ化合物33(R＝H，A/AC-AC2-5，B＝AcGlu，M＝Man，Y＝-NH(CH2)3NH(CH2)4NHCOOCH(CH3)OCOCH3與Y＝-NH(CH2)4NH(CH2)3NHCOOCH(CH3)OCOCH3的混合物)室溫下，向2g(0.9mmol)化合物5的N-CBZ衍生物(實(shí)施例1制備)的50ml無(wú)水DMF溶液中，加入1.2g(11mmol)無(wú)水碳酸鈉和2.7g(10mmol)α-乙酰氧基-乙基對(duì)硝基苯基碳酸酯。3小時(shí)后，將反應(yīng)混合物傾入500ml乙酸乙酯中，收集沉淀的固體，用100ml乙酸乙酯洗滌，如實(shí)施例1所述進(jìn)行氫化，得到0.57g標(biāo)題化合物33。
實(shí)施例34
制備式Ⅰ化合物34(R＝H，A/AC＝H，B＝H，M＝H，Y＝NH(CH2)3NH(CH2)4NHCOOCH(CH3)OCOCH3與Y＝NH(CH2)4NH(CH2)3NHCOOCH(CH3)OCOCH3的混合物)按照實(shí)施例32所述步驟，使用2g化合物23的N-CBZ衍生物，得到0.6g化合物34。
實(shí)施例35-36制備式Ⅰ化合物35
和式Ⅰ化合物36
向5.3g(約2.5mmol)N15-CBZ-替考拉寧A2的560ml甲醇的懸浮液中，于室溫下加入1-甲基-3-(甲氨基)丙基酰胺(如實(shí)施例31制備)，17ml式分別為為clCH2CH2(OCH2CH2)OH和clCH2CH2OCH2CH2OH的適當(dāng)氯乙氧基-羥乙基試劑和1.86g(13.5mmol)碳酸鉀。45℃攪拌3小時(shí)后，將反應(yīng)混合物冷卻至15℃，用1NHcl將PH調(diào)至6。30℃減壓蒸除甲醇，固體殘余物如實(shí)施例1所述進(jìn)行氫化，得到1.9g化合物35或0.97g化合物36。
實(shí)施例37-41制備TGA3-1酰胺衍生物4g(約2mmol)替考拉寧A2復(fù)合物或其單一組分的適當(dāng)酰胺衍生物(如上所制備并示于下面表Ⅴ)的100ml90%三氟乙酸水溶液在室溫下攪拌2小時(shí)，然后蒸除溶劑，油狀殘余物重新溶于200mlH2O。將PH調(diào)到8后，所得溶液置于于水中含有400g硅烷化硅膠的柱上。如實(shí)施例1所述進(jìn)行色譜提純，得到標(biāo)題化合物。
實(shí)施例42-45制備TAG3-2酰胺衍生物4g(約2mmol)替考拉寧化合物的適當(dāng)酰胺衍生物(如上所制備并示于下面表Ⅵ)的80ml1，2-二甲氧乙烷(DMF)懸浮液在室溫下攪拌2天，同時(shí)鼓入Hcl。然后過(guò)濾收集不溶物。如實(shí)施例1進(jìn)行柱色譜提純，得到標(biāo)題化合物。
實(shí)施例46-55A″′一般步驟(采用疊氮磷酸二苯基酯基)向6mmol替考拉寧A2或其單一組分(或其組分間任何比例的混合物)或N15-叔丁氧羰基(t-BOC)脫葡糖替考拉寧的60ml二甲亞砜(DMSO)的攪拌溶液中，于0℃加入30mmol適當(dāng)?shù)闹虚g體胺(制備方法如下)和10mmol疊氮磷酸二苯基酯(DPPA)。室溫下攪拌過(guò)夜，然后加入240ml乙酸乙酯，收集沉淀的固體，如前述方法E用反相柱色譜提純，得到純的TGAC酰胺或N15-t-BOC-脫葡糖替考拉寧酰胺(BOC-DTG酰胺)。
在BOC-DTG酰胺或在酰胺部分含有BOC保護(hù)基的酰胺情況下，通過(guò)在室溫下將1mmol這類(lèi)化合物溶于30ml無(wú)水三氟乙酸，并以前述相同的步驟(例如制備DTG的N63-羧酰胺的方法D″)，可以脫除BOC保護(hù)基。
B″′制備化合物46-55的中間體胺1.二胺0.0′-雙(2-氨丙基)聚乙二醇1900(JeffamineTMED2001)是從Fluka Chemie AG購(gòu)買(mǎi)的(化合物46的中間體胺)。
2.對(duì)于化合物47-52的中間反應(yīng)物胺，先按如下方法制備共同中間體二-(3-BOC-氨丙基)胺BOC-NH-(CH2)3NH-(CH2)3-NH-BOC將142g2-(叔丁氧基羰基氧亞氨基-2-苯乙腈(BOC-ON，Aldrich-Chemie)的300ml四氫呋喃(THF)溶液在10℃滴加到42ml雙(3-氨基丙基)胺(FlukaChemieAG)的400mlTHF攪拌溶液中。室溫下保持16小時(shí)后，蒸除溶劑，將油狀殘余物溶于11乙酸乙酯，得到的溶液用1NNaOH(200ml)洗滌，然后用水(2×300ml)洗滌，接著用0.01NHcl(2×500ML)提取。將水相用1NNaOH調(diào)至PH8，用500ml正丁醇提取。分離有機(jī)層，用250ml水洗滌，然后濃縮至最終體積約70ml。于6℃靜置過(guò)夜，形成結(jié)晶，過(guò)濾收集，得到純的標(biāo)題化合物，為游離堿形式。
1H-NMR2.93，2.44，1.47(CH2);1.38(N-BOC)6.68(NH)3.N′，N″-二-叔-BOC-三-(3-氨丙基)胺(用于衍生物47-50)室溫下，向45g上述二-叔-BOC中間體三胺的500ml無(wú)水乙醇攪拌溶液中，加入21ml3-溴-丙腈和25g碳酸鉀。反應(yīng)混合物攪抖過(guò)夜，然后過(guò)濾并濃縮至最終體積約100ml，此后用800ml水稀釋。用乙酸乙酯(2×800ml)提取所得溶液(PH8)。分離有機(jī)相，用水(2×200ml)洗滌，然后濃縮至最終體積約100ml。6℃靜置過(guò)夜，過(guò)濾收集分離出的結(jié)晶固體，得到34g二-(3-叔-BOC-氨丙基)氨基-1-丙腈。
1H-NMR2.94，2.63，2.54，2.37，1.47(CH2);1.36(N-BOC);6.73(NH)將上述產(chǎn)物溶于200ml含有8.5gNaOH的乙醇溶液。向溶液中加入4g阮內(nèi)鎳(活性催化劑，Aldrich-chemie)，懸浮液在2.5大氣壓下氫化10小時(shí)。濾除催化劑并蒸除溶劑，將油狀殘余物溶于500ml乙酸乙酯，所得溶液用水洗滌(2×100ml)，然后蒸除溶劑，得到約34g標(biāo)題化合物。
1H-NMR2.93，2.54，2.32，1.49(CH2)，1.41(N-BOC);6.77(NH)4.3-(3-氨丙基(-3-(3，3-二甲基氨基丙基)-氨基-1-丙胺(用于衍生物51)室溫下，向19g3，3-二甲基氨基-1-丙基氯鹽酸鹽的400ml無(wú)水乙醇攪拌溶液中，加入20g二叔-BOC中間體三胺和28g碳酸鉀，接著加入3g碘化鉀。反應(yīng)混合物回流6小時(shí)，然后過(guò)濾，蒸除溶劑。殘余物再溶于400ml水，用600ml乙酸乙酯提取。分離有機(jī)層，用水洗滌(2×200ml)，然后蒸除溶劑，得到油狀殘余物(8.7g)，即標(biāo)題化合物的二叔-BOC衍生物，其純度足以用于下面步驟。
1H-NMR2.91，2.42，2.31，2.16，1.47(CH2)，1.36(N-BOC)，2.09(NCH)室溫下用30ml無(wú)水三氟乙酸處理含上述產(chǎn)物的30ml二氯甲烷溶液，然后蒸除溶劑。將油狀殘余物溶于40ml無(wú)水乙醇，室溫下鼓入無(wú)水Hcl至觀察到產(chǎn)物完全沉淀。過(guò)濾收集，得到3.8g標(biāo)題化合物，為四鹽酸化物。
1H-NMR3.2-2.91(6-CH2);2.13-1.90(3-CH2);2.73(NCH3)對(duì)于與BOC-DTG縮合，使用下述制備的游離堿，即將該四鹽酸化物(10mmol)溶于1NNaOH(40ml)，然后蒸發(fā)該溶液至干。將殘余物懸浮于二氯甲烷(100ml)，濾除不溶物。蒸除溶劑后，油狀殘余物不需進(jìn)一步純化便可直接使用。
5.3-(3-氨丙基-3-(2，2-二乙基氨基乙基)-氨基-1-丙胺(用于衍生物52)采用與上述完全相同的步驟，使用2，2-二乙基氨基-1-乙基氯鹽酸鹽(21g)與二叔-BOC中間體三胺(20g)反應(yīng)，首先得到11g標(biāo)題化合物的二叔-BOC衍生物。以相似的方式用三氟乙酸的二氯甲烷溶液處理，脫除保護(hù)基。如上述得到游離堿(油)，最后得到標(biāo)題化合物(8.2g)。
1H-NMR2.6-2.3(8-CH2);1.42(2-CH2);0.92(2-CH3)這些反應(yīng)過(guò)程和最終多胺的均一性在硅膠60F254預(yù)涂覆板(Merck Co.)上，用含有1%氫氧化銨的二氯甲烷/甲醇(9∶1，V/V)混合物作為流動(dòng)相，進(jìn)行TLC檢查。斑點(diǎn)用碘展開(kāi)。
6.4-(3，3-二甲基氨基丙基)哌嗪(用于衍生物53)向15.8g3，3-二甲基氨基-1-丙基氯的300ml無(wú)水乙醇的攪拌溶液中，加入9ml1-芐基哌嗪和14g碳酸鉀。反應(yīng)混合物回流攪拌6小時(shí)，然后冷卻至室溫過(guò)濾。蒸除溶劑，油狀殘余物溶于300ml水。用二氯甲烷(2×200ml)提取所得溶液。分離有機(jī)相，用200ml水洗滌，然后蒸除溶劑。將油狀殘余物(9g)溶于300ml95%乙醇，加3g10%Pd/C氫化(25℃，1大氣壓)。6小時(shí)內(nèi)約吸收11H。濾除催化劑，將無(wú)水Hcl鼓入透明的濾液。收集分出的固體，用無(wú)水乙醇洗滌，室溫下真空干燥過(guò)夜，得到7g純的標(biāo)題化合物，為三鹽酸化物。
1H-NMR2.79，2.53，2.30(CH2-哌嗪)2.79，2.23，2.15(CH2二甲基氨基丙基);2.10(NCH3)將上述三鹽酸化物(6g)溶于2NNaOH(30ml)，接著用二氯甲烷(170ml)提取并蒸除有機(jī)溶劑，得到游離堿。生成的油狀殘余物不用進(jìn)一步提純便可用于制備化合物53。
7.N，N′-雙(3-氨基丙基)壬烷-1，5-二胺和N，N′-雙(3-氨基丙基)癸烷-1，5-二胺這些衍生物是已知化合物，其制備可按Israel，M.J.，RosenfieldS.S.，Mdest，E.J.，J.Med.Chem.1964，7，710的方法，對(duì)適當(dāng)?shù)摩?，ω-亞烷基二胺進(jìn)行一和二氰乙基化，然后通常在溫和條件下催化還原腈類(lèi)。
下面表Ⅶ示出了根據(jù)A″′步驟制備的化合物(46-55)。
HPLC分析用Varian型儀器進(jìn)行分析，5000LC泵配有20微升環(huán)管注射器(Rheodyne型)在254nmUV監(jiān)測(cè)。
柱預(yù)裝填LichrosorbRP-8(20-30微米)的前置柱HibarLichroCart25-4(Merck)(1.9cm);然后是預(yù)裝填LichrosorbRP-8(10微米)的HibarRT-250-4(Merck)柱。
洗脫劑A，0.2%HCOONH4水溶液;
B，CH3CN流速2ml/分注射20微升洗脫30分鐘內(nèi)B在A中的線性梯度為20-60%。一些代表性化合物的保留時(shí)間示于表Ⅷ。
酸堿滴定產(chǎn)物溶于MCS(甲基溶纖劑)H2O＝4∶1(V/V)，然后將過(guò)量0.01MHcl加入相同溶劑混合物溶液，所得溶液用0.01NNaOH滴定。一些代表性化合物的當(dāng)量示于表Ⅸ。
用四甲基硅烷(TMS)作為內(nèi)標(biāo)(δ＝0.00ppm)在DMSO-D6中在溫度20-30℃記錄500MHZ1H-NMR譜(使用Bruker AM500光譜儀)。表Ⅹ示出了一些代表性化合物最明顯的化學(xué)位移(ppm)。
表Ⅷ本發(fā)明一些代表性化合物的保留時(shí)間(tR)
表Ⅷ(續(xù))
表Ⅸ式Ⅰ一些代表性化合物的產(chǎn)率和當(dāng)量(EW)。
括號(hào)內(nèi)數(shù)值是滴定每分子當(dāng)量的次數(shù)
表Ⅸ(續(xù))
表Ⅹ用四甲基硅烷作內(nèi)標(biāo)，在DMSO-D6中記錄的一些代表性化合物的1H-NMR分布(δ＝0.00ppm)化合物2 3.61,2.95(CH2-側(cè)鏈)；0.83,1.18,1.46,2.02(?；?；4.18-5.62(肽CH);1.89(乙酰氨基葡糖)；6.18-8.45(芳族質(zhì)子和肽NH)化合物4 3.45,2.82,2.63,2.08,1.66(CH2-側(cè)鏈)0.87,1.23,1.45,2.01(?；?；1.88(乙酰氨基葡糖)；4.15-5.71(肽CH)；6.26-8.56(芳族質(zhì)子和)肽NH化合物6 3.52,2.73,2.58,1.91,1.56(CH2-側(cè)鏈)；0.84,1.15,1.46,2.02(?；?；1.82(乙酰葡糖胺);3.42(甘露糖);
4.15-5.69(肽CH);6.29-8.53(芳族質(zhì)子和肽NH)化合物7 3.68,3.12,2.98,2.05(CH2-側(cè)鏈)；0.84,1.16,1.44,2.01(?；?；1.89(乙酰氨葡糖)；3.42(甘露糖)；4.13-5.58(肽CH);6.21-8.53(芳族質(zhì)子和肽NH)
表Ⅹ(續(xù))8 3.68,2.92,1.98(CH2-側(cè)鏈)；0.82,1.251.43,2.01(?；?；1.87(乙酰氨基葡糖)4.17-5.65(肽CH);6.26-8.57(芳族質(zhì)子和肽NH)9 3.48,2.98,1.98(CH2-側(cè)鏈)；0.82,1.12,1.43,2.01(酰基鏈)；1.86(乙酰氨基葡糖)；4.16-5.62(肽CH);6.18-8.58(芳族質(zhì)子和肽NH)11 3.71,2.93,1.98,1.73,(CH2-側(cè)鏈)；0.83,1.231.47,2.02(酰基鏈)；1.89(乙酰氨基葡糖)；4.13-5.58(肽CH);6.21-8.62(芳族質(zhì)子和肽NH)15 3.52,3.13(CH2哌嗪)；3.42-2.07(CH2-側(cè)鏈)；0.83,1.16,1.45,2.02(?；?；1.88(乙酰氨基葡糖)；4.16-5.32(肽CH);
6.18-8.53(芳族質(zhì)子和肽NH)21 3.52,3.04,2.81,(CH2-N);4.15-5.62(肽CH)6.18-8.62(芳族質(zhì)子和肽NH)
表Ⅹ(續(xù))化合物22 3.17,2.93,2.83,1.87,1.80(CH2-側(cè)鏈)；4.15-5.61(肽CH);
6.18-8.53(芳族質(zhì)子和肽NH)″23 3.42,2.98-2.71,1.72,1.61(CH2亞精胺)；4.15-5.63(肽CH),6.19-8.43(芳族質(zhì)子和肽NH)″24 3.38,3.12,2.98(CH2-N),1.89(CH2);
4.17-5.58(肽CH);6.18-8.48(芳族質(zhì)子和NH)″25 3.34,3.08,2.84,1.78(CH2-側(cè)鏈)；4.16-5.58(肽CH);
8.31-8.48(芳族質(zhì)子和肽NH)″26 3.36,2.98,2.87(CH2-N);1.89,1.77(CH2);
4.15-5.62(肽CH);
6.18-8.42(芳族質(zhì)子和肽NH)
表Ⅹ(續(xù))化合物27 3.12,3.03-2.82,1.88,1.81,1.65(CH2-側(cè)鏈)；4.15-5.62(肽CH);6.19-8.41(芳族質(zhì)子和肽NH)″29 3.48,3.12,2.83,2.64(CH2-N);4.18-5.61(肽CH);6.21-8.70(芳族質(zhì)子和肽NH)″30 3.49,3.11,2.95,2.85,1.85(CH2側(cè)鏈)；4.18-5.81(肽CH);6.21-8.56(芳族質(zhì)子和肽NH)″31 3.01N(CH3) 3;2.95,2.21,1.68(CH2-側(cè)鏈)；2.28,2.06,(NCH3);0.83,1.21,1.46(?；?；1.86(乙酰氨基葡糖)，3.48(甘露糖)；4.17-5.82(肽CH);6.14-8.62(芳族質(zhì)子和肽NH)″34 3.03-2.81,1.82,1.62,1.43(CH2-側(cè)鏈)；2.01(CH3-CH),1.23(CH3);4.13-5.62(肽CH);
6.19-8.47(芳族質(zhì)子和肽NH)
表Ⅹ(續(xù))化合物35 5.25(CH2-O),4.51(CH2OH);2.06(NCH3);0.81,1.23,1.45,2.02(酰基鏈)；1.87(乙酰胺基葡糖)；4.12-5.69(肽CH);
6.14-8.48(芳族質(zhì)子和肽NH)″36 5.22(CH2-O);3.72,2.82(CH2-側(cè)鏈)；1.93(NCH3);0.83,1.14,1.43,2.01(酰基鏈)；1.87(乙酰胺基葡糖)；4.18-5.72(肽CH);
6.31-8.45(芳族質(zhì)子和肽NH)″443.68,3.34,2.95,1.99,1.84(亞精胺)；1.87(乙酰胺基葡糖);4.18-5.61(肽CH);
6.19-8.56(芳族質(zhì)子和肽NH)″393.71,3.37,2.98,1.98,1.82(亞精胺)；1.86(乙酰葡糖胺)；3.44(甘露糖)；4.16-5.58(肽CH);6.29-8.54(芳族質(zhì)子和肽NH)
表Ⅹ(續(xù))化合物46 3.41,3.23,3.16,2.94(CH2-側(cè)鏈)；1.12,1.23(CH3-側(cè)鏈)；0.81,1.15,1.46,2.00(?；?，1.86(乙酰葡糖胺)；4.16-5.59(肽CH);6.23-8.01(芳族質(zhì)子和肽NH)″47 3.45,3.09,2.35,1.84(CH2-側(cè)鏈)；0.82,1.14,1.46,2.03(酰基鏈)；1.86(乙酰葡糖胺)4.12-5.62(肽CH)；6.23-8.43(芳族質(zhì)子和肽NH(″50 3.43,3.24,2.85,1.84(CH2-側(cè)鏈)；4.12-5.62(肽CH),6.21-8.51(芳族質(zhì)子和肽NH)″51 3.45,3.39,3.05,2.91,2.12,1.98(CH2-側(cè)鏈)；2.74(NCH3);4.13-5.59(肽CH);
6.18-8.61(芳族質(zhì)子和肽NH).
″52 3.48,3.12,1.89(CH2-側(cè)鏈)；1.18(2CH3-乙基);
4.12-5.61(肽CH);6.20-8.50(芳族質(zhì)子和肽NH)
表Ⅹ(續(xù))化合物53 3.42,3.39,3.30,1.98(CH2-哌嗪，CH2-丙基)；2.75(NCH3);4.05-5.63(肽CH);
6.32-8.52(芳族質(zhì)子和肽NH)″55 3.32,2.98,2.76,1.86,1.52,1.24(CH2-側(cè)鏈);
4.13-5.62(肽CH);
6.31-8.42(芳族質(zhì)子和肽NH).
″543.37,3.34,3.07,2.86,1.75,1.59,1.26(CH2-側(cè)鏈)；4.14-5.61(肽CH)；6.21-8.34(芳族質(zhì)子和肽NH)
權(quán)利要求
1.制備通式I的替考拉寧衍生物和藥用酸加成鹽的方法，
式中，R為氫或胺官能團(tuán)保護(hù)基；Y為通式-WR1-alk1-[X-alk2]p-[T-alk3]q-W的化合物，其中R1為氫或(C1-C4)烷基；alk1、alk2和alk3各自為含2至10個(gè)碳原子的直鏈或支鏈亞烷基；p為1至50的一個(gè)整數(shù)；q為0至12的一個(gè)整數(shù)；X為-NR2-或氧原子，其中R2為氫、(C1-C4)烷基、alk4NR3R4基，其中alk4為含2至4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈亞烷基，R3為氫或(C1-C4)烷基，R4為氫、(C1-C4)烷基或5-6元環(huán)烷基；或R1和R2一起形成連接二個(gè)氮原子的(C2-C4)亞烷基，其條件是這種情況下p為1；T為-NR5-或氧原子，其中R5為氫(C1-C4)烷基、alk5NR6R7基，其中alk5為含2至4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈亞烷基，R6為氫或(C1-C4)烷基，R7為氫(C1-C4)烷基或5-6元環(huán)烷基；或R2和R5一起形成連接二個(gè)氮原子的(C2-C4)亞烷基，其條件是在這種情況下p和q均為1；W為羥基、NR8R9，其中R8為H或(C1-C6)烷基，R9為H、(C1-C6)烷基、5-6元環(huán)烷基、COOR10(其中R10為(C1-C6)酰氧基-(C1-C4)烷基)和N ⊕R11R12R13An
，其中R11、R12和R13各為(C1-C4)烷基，An
為藥用酸衍生的陰離子；其條件是，當(dāng)X同時(shí)為NR2時(shí)，p為1，q為零，而W不為羥基；A為H或-N[(C9-C12)脂族?；鵠-β-D-脫氧-2-氨基吡喃葡糖基，B為H或N-乙?；?β-D-2-脫氧-2-氨基吡喃葡糖基；M為氫或α-D-吡喃甘露糖基；其另一條件是，只有當(dāng)A和M同時(shí)為氫時(shí)，B才能為氫；該方法包括用下列通式Ⅱ的胺(式中R1、alk1、alk2、alk3、X、T、p、q和w如上所定義)對(duì)通式I相應(yīng)的羧酸替考拉寧原料(式中A、B、M如上所定義，Y為OH)進(jìn)行酰胺化。
2.權(quán)利要求1所述的方法，其中酰胺化反應(yīng)在縮合劑的存在下，在惰性有機(jī)溶劑中，在0至20℃的溫度下進(jìn)行，所述縮合劑選自疊氮磷酸的(C1-C4)烷酯、苯酯或雜環(huán)酯。
3.權(quán)利要求1所述的方法，其中酰胺化通過(guò)將羧酸原料轉(zhuǎn)化成其相應(yīng)的活性酯，其N(xiāo)15-氨基最好被保護(hù)，然后將該活性酯與摩爾過(guò)量的權(quán)利要求1中的通式Ⅱ的胺在有機(jī)極性溶劑存在下，在5至60℃的溫度下，最好在10至30℃的溫度下進(jìn)行反應(yīng)。
4.權(quán)利要求3所述的方法，其中活性酯是氰甲基酯，其與胺的摩爾比為1∶5至1∶30。
5.權(quán)利要求4所述的方法，其中氰甲基酯的制備是在惰性有機(jī)溶劑和對(duì)反應(yīng)過(guò)程無(wú)影響的堿存在下，將N15-氨基官能團(tuán)最好被保護(hù)的羧酸原料與摩爾用量過(guò)量約20至30倍的氯乙腈在5至60℃，最好在10至30℃的溫度下反應(yīng)。
6.制備通式Ⅰ的化合物的方法，式中W為-NR8R9-，其中R8如權(quán)利要求1所定義，R9為COOR10，而R10為(C1-C6)酰氧基-(C1-C4)烷基，該方法包括在無(wú)水堿金屬碳酸鹽存在下將N63-酰胺的N15被保護(hù)的衍生物(式中W為-WHR8，而R8如權(quán)利要求1所定義)與碳酸α-酰氧基烷基對(duì)硝基苯基酯反應(yīng)。
7.權(quán)利要求1至6所述的方法，該方法還包括除去N15保護(hù)基的附加步驟。
8.制備權(quán)利要求1的一種替考拉寧酰胺衍生物的方法，該方法包括在惰性溶劑中酸接受體存在下，將通式Ⅰ的N63酰胺的N15被保護(hù)的衍生物(式中Y為-NR1alk1XH或NR1-alk1-〔X-alk2〕p-TH)與通式r-〔alk2〕p-〔T-alk3〕q-W或r-〔alk3)qW(式中符號(hào)R1、alk1、alk2、alk3、X和T如權(quán)利要求1所定義，r為鹵素、甲磺?；蚣妆交酋；?所示的反應(yīng)物反應(yīng)。
9.制備通式Ⅰ的化合物的方法，式中A為氫，B為N-乙?；?β-D-2-脫氧-2-氨基吡喃葡糖基，M為α-D-吡喃甘露糖基，該方法包括在室溫下用濃有機(jī)酸水溶液，最好是在10至50℃的溫度下用濃度為75至95%的三氟乙酸水溶液對(duì)通式Ⅰ相應(yīng)的酰胺化合物進(jìn)行水解，式中A為N-〔(C9-C12)脂族乙酰基〕-β-D-2-脫氧-2-氨基-吡喃葡糖基，B為N-乙?；?β-D-2-脫氧-2-氨基-吡喃葡糖基，M為α-D-吡喃甘露糖基。
10.制備通式Ⅰ的化合物的方法，式中A和M均為氫，B為N-乙?；?β-D-2-脫氧-2-氨基吡喃葡糖基，該方法包括將通式Ⅰ相應(yīng)的酰胺化合物(式中A為N(C9-C12)脂族酰基〕-β-D-2-脫氧-2-氨基吡喃葡糖基，B為N-乙?；?β-D-2-脫氧-2-氨基吡喃葡糖基，M為α-D-吡喃甘露糖基)在極性非質(zhì)子有機(jī)溶劑中與強(qiáng)酸接觸，所述有機(jī)溶劑選自在室溫下為液態(tài)的醚，酮和其混合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及替考拉寧的新的C制備本發(fā)明的衍生物的方法包括將相應(yīng)的替考拉寧與形成活性酯的反應(yīng)物如氯乙腈反應(yīng)，然后將所述的活性酯與合適的二或多烷基胺接觸。本發(fā)明的酰胺衍生物對(duì)抗格蘭氏陽(yáng)性和格蘭氏陰性細(xì)菌有活性。
文檔編號(hào)C07K7/64GK1045976SQ90101759
公開(kāi)日1990年10月10日 申請(qǐng)日期1990年3月29日 優(yōu)先權(quán)日1989年3月29日
發(fā)明者艾德里亞挪·梅拉巴巴, 皮爾發(fā)斯托·塞尼西, 朱根·苛特·凱坦瑩, 羅密歐·西亞巴提 申請(qǐng)人:格魯波萊佩蒂特公司