專利名稱：一種由藤黃屬龍葵植物(g.m.d.)樹脂精制純化可溶解細(xì)胞的化合物(gmd1630)之方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明案系有關(guān)精制有用于溶解細(xì)胞的材料及制癌治療方面之潛力的應(yīng)用。更精確的言之，本發(fā)明系與由一系列萃取操作制備而得的新潛力性細(xì)胞毒藥劑有關(guān)。此一精制過程業(yè)已制出一供機(jī)構(gòu)偵測(cè)及藥力增強(qiáng)的臨床試驗(yàn)。
多種化合物業(yè)經(jīng)用以偵測(cè)實(shí)驗(yàn)性的動(dòng)物及若干種被證實(shí)在人類贅瘤的臨床治療上相當(dāng)有效，且在可接受的毒性程度上提供化學(xué)療法的指示。多種防止贅瘤之醫(yī)藥品業(yè)經(jīng)妥善研究。此包括烷基化劑，抗新陳代謝劑，天然產(chǎn)品，不同藥劑的醫(yī)藥品，荷爾蒙及拮抗劑，與放射性同位素。
不僅了解腫瘤形成之一般情形，且亦及腫瘤之異質(zhì)性，而由此業(yè)已發(fā)現(xiàn)許多種擴(kuò)癌藥物。三十年前對(duì)人體贅瘤用化學(xué)療法曾達(dá)成若干顯著性舒減的結(jié)果，且第一個(gè)示例指示婦女之絨毛膜癌可用methotrexate治療法治愈。今日，若干贅瘤性疾病若被治療以藥物或其他用藥程式之藥物時(shí)，被發(fā)現(xiàn)毋需縮減壽命。此等疾病包括婦女絨毛膜癌;兒童之急性白血病，威耳姆士氏(Wilm′s)瘤，尤汶士(Ewing′s)瘤，橫紋肌肉瘤(rhabdomyosarcoma)及視網(wǎng)膜胚細(xì)胞瘤(retinoblastoma);霍奇金氏(Hodgkin′s disease)，全體性組織細(xì)胞的淋巴瘤，蒲啟特氏(Burkitt′s)淋巴瘤，覃樣徵菌病及睪丸癌瘤。雖然此種令人印象深刻的結(jié)果，吾人深信人類癌癥之多種最通常形式仍能抵抗有效的化學(xué)療法。
為腫瘤行為而作之基礎(chǔ)機(jī)構(gòu)有關(guān)之基本的資料亦繼續(xù)提出。在為發(fā)現(xiàn)新的有用的化學(xué)治療藥劑及設(shè)計(jì)出更有效的攝生法加上較少毒性方面的努力在最近十年業(yè)已獲致最大的進(jìn)步。
有許多種與用于“腫塊消退”目的有關(guān)之中國(guó)草藥的應(yīng)用有關(guān)的古老報(bào)告。此名詞“腫塊消退”并不全然正確，由于腫塊可能起因于炎癥，腫瘤腫塊或若干其他原因。欲以近代醫(yī)學(xué)名詞區(qū)分出目標(biāo)疾病乃屬重要的。若吾人甚至能由草藥粗材精制出有效成分時(shí)，在研究及應(yīng)用方面將更有用的。在中國(guó)，G.M.D.植物樹脂曾被報(bào)導(dǎo)可用作治療癰之類似抗生藥物質(zhì)。多種包括摩耳林(morellin)，morellic acid，lavone之morell，屬藤黃科的α或β-guttiferin之化合物可由其萃取物分離出。其中多種被報(bào)導(dǎo)具有抗葡萄球菌的功效。然而僅少數(shù)被知悉有關(guān)其毒性，且亦無如本發(fā)明案所述之溶解細(xì)胞的功效。
為設(shè)計(jì)一方便且靈敏的偵測(cè)方法，由多種細(xì)胞系中之一種被選擇出。此一具有迅速的成長(zhǎng)率之細(xì)胞系為哺乳動(dòng)物類細(xì)胞提供一無窮盡的來源。且CE細(xì)胞在加入毒素后二小時(shí)內(nèi)顯示出迅速的溶解反應(yīng)。在活體內(nèi)應(yīng)用時(shí)連同此方法之其他兩個(gè)鑒定方法亦被使用以偵測(cè)其生物學(xué)上的功效及監(jiān)視中毒現(xiàn)象。
本發(fā)明提供若干可獲取有溶解細(xì)胞的性質(zhì)之有效成分GMD 1630之若干萃取操作。此萃取操作系被設(shè)計(jì)成適于自G.M.D.植物樹脂塊中以高產(chǎn)率快速的收集有效成分GMD 1630。在此操作中許多不需要的成分可被去除，且經(jīng)精制的材料亦由多種不同的有機(jī)溶劑消毒。本發(fā)明案亦提供若干能偵測(cè)出GMD 1630存在之藥力鑒別法。此于偵測(cè)中毒機(jī)構(gòu)方面乃屬重要的，且在監(jiān)視活體內(nèi)濃度方面非常有用的。
萃取操作系在精制純化方面以一彈性方式被設(shè)計(jì)出，在此有實(shí)施此等不同的萃取操作之所有有效的最適順序。二種主要的建議方式，亦即一為使用絕對(duì)酒精，另一為使用氯仿當(dāng)作二溶劑系已被應(yīng)用，且可將之結(jié)合以得高產(chǎn)率及良好的精制純化度。
至于酒精萃取系統(tǒng)方面，樹脂塊(由草藥鋪或由作為干燥的植物萃取物之天然來源取得)系被輾碎成粉末。此粉末則被浸以絕對(duì)酒精，且在室溫下被培養(yǎng)至經(jīng)萃取的材料達(dá)到飽和為止(于OD363中以較長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)并無變化)。此一酒精萃取物(AE)被以蒸餾水稀釋3至10倍。此混合物立即轉(zhuǎn)變成云霧狀，且GMD在以5000xg之離心力離心10分鐘后可被發(fā)現(xiàn)有沉淀物。以酒精及水溶劑系統(tǒng)反覆的溶解化及精制純化操作被發(fā)現(xiàn)可收集到精制的GMD 1630。實(shí)際操作上，20至30gm GMD樹脂塊系在20℃-75℃之300-500ml絕對(duì)酒精中4-6小時(shí)被萃取而而得。渣被去除且溶液在5000xg離心力下被離心以消除任何顆粒。自絕對(duì)酒精中再沉淀出有效成分，蒸餾水被加入以稀釋100%酒精至30-40%。溶液立即轉(zhuǎn)變成渾濁狀，且有效成分GMD1630在離心后被收集于錠狀薄片中以供測(cè)IR用。
至于氯仿萃取方面，GMD樹脂首先被溶解于蒸餾水中。在正常操作下20-30gm系在20-75℃下以持續(xù)振動(dòng)方式被溶解于300-500ml蒸餾水中。然后此溶液被以氯仿/水分離系統(tǒng)(每相均等體積)萃取。萃取系進(jìn)行至大部分黃色的成分自上層水相轉(zhuǎn)移至下層之氯仿相。下層相則予小心收集。而上層相則以相同操作再予萃取以獲取更多的有效成分。兩次萃取操作之每一下層相均予收集且以伴隨有氣體吹通或加熱之方式作氯仿蒸發(fā)予以濃縮。
于本發(fā)明之實(shí)施例中顯而可知有效成分GMD1630之純化度系與酒精萃取及氯仿萃取之每一操作有關(guān)?？v或萃取數(shù)次，操作順序并不影響精制純化之結(jié)果。在正常制備下，通常作四次萃取操作，亦即其中有二次氯仿萃取操作及二次酒精萃取操作。
通常最終制品系在培養(yǎng)的CE細(xì)胞上被測(cè)試以其溶解細(xì)胞的性質(zhì)。且此一制品亦被以紙層析術(shù)及紅外線光譜研究其純化度。在紅外線光譜(IR)中之波數(shù)1740，1690，1630，1590，1430，1260，1180，1140及1045(1/cm)處被發(fā)現(xiàn)有明顯的吸收波峰(其中以1630-1590-1430-1140為最高波峰依序之四個(gè)主要波峰)。而本發(fā)明案之有效成分GMD1630即指此由上述精制之萃取操作而得之純化GMD，以紅外線光譜波數(shù)1630者為代表而命名之。
在以實(shí)施例說明本發(fā)明案之最佳模式之前，發(fā)明人欲就與實(shí)施例有關(guān)之圖式先予說明。本案圖式中之

圖1系GMD1630之精制純化度，其中A為藤黃屬龍葵植物;B為樹脂塊;C為左邊-溶有GMD1630之85%酒精溶液的小瓶子，右邊為GMD1630之水性懸浮液的大瓶子;D為氯仿/水分離系統(tǒng)，其中上層水相中之不要的成分則予舍棄，而下層氯仿相中之GMD1630則被完全的溶解。圖2系經(jīng)純化之GMD1630在CE肉瘤細(xì)胞上的生物學(xué)效應(yīng)，其中A為對(duì)照組(未添加GMD1630)-CE肉瘤細(xì)胞系在早期融合的階段且以胺黑(amidoblack)固定及著色;B為實(shí)驗(yàn)組(添加有GMD1630)，可觀察到細(xì)胞溶解;C為在光線顯微鏡(100X)下所觀察的對(duì)照組A之CE細(xì)胞;D為在光線顯微鏡(100X)下所觀察之實(shí)驗(yàn)組B的CE細(xì)胞;圖3系制備而得之GMD1630的薄層層析譜，其中5個(gè)波峰系以氯仿/甲醇/醋酸(容積比40∶40∶20)予以確認(rèn);圖4系紅外線吸收光譜，其中GMD1630之粗材(點(diǎn)線)及精制品(實(shí)線)均被壓入KBr薄層內(nèi)供IR掃瞄;此掃瞄系用Nicolet Fourier-Transtorm IR光譜儀施行之。而純KBr之背景值則經(jīng)由電腦予以例行的扣除。此處的數(shù)據(jù)在波數(shù)(1/cm)1140，1180，1260，1340，1380，1430，1590，1630(最高)，1690，及1740處顯示出主要的IR吸收波峰。圖5系可見光-UV光譜圖，于此光譜圖中GMD1630系溶解于100%氯仿中并用Beckman DU-64掃瞄。結(jié)果顯示出在250-400nm范圍內(nèi)有二個(gè)主要的吸收波峰。圖6系經(jīng)GMD1630處理之肉瘤細(xì)胞的早期變化情形，其中CE細(xì)胞(肉瘤細(xì)胞系)則由經(jīng)純化的GMD1630(B)在37℃下處理20分鐘且予著色以與未經(jīng)處理之細(xì)胞(A)作比較。受病變的細(xì)胞則標(biāo)以()記標(biāo)，此顯示出特性的“畸形細(xì)胞”外觀。圖7系經(jīng)GMD1630處理之肉瘤細(xì)胞的早期變化情形(電子顯微鏡，24，000X)。圖8系人體紅血球處理以高劑量GMD1630之變化情形(電子顯微鏡，20，000X)，其中人體紅血球細(xì)胞為在37℃下以高濃度處理30分鐘(其劑量為50倍于用于CE細(xì)胞者)。其中若干紅血球細(xì)胞失去其正常形狀且變成方形(如箭頭所示)。圖9系毒性試驗(yàn)(EKG)，其中Balb/c老鼠為在普通麻醉狀態(tài)下且在注射溶解的GMD1630后被觀察任何EKG變化(以一“＊＊＊”記號(hào)指示)。而在兩小時(shí)或更長(zhǎng)的觀察期間內(nèi)并未發(fā)現(xiàn)有顯著的變化。
以下欲以若干例子說明本發(fā)明案之特殊實(shí)施例。而此并非以任何方式用以限制本發(fā)明案。
現(xiàn)說明本發(fā)明案之實(shí)施例。
實(shí)施例1材料及方法材料-伊戈氏(Eagle′s)培養(yǎng)基之Dulbecco-Vogt修飾，胎牛血清，胰蛋白酶-EDTA溶液，青徵素/鏈徵素溶液及漢姆氏(Ham′s)F12培養(yǎng)基均購自Gibco公司(Grand Island，New York，U.S.A.)。至于L-麩醯胺酸(L-glutamine)，硫酸鹽則取自Sigma公司(St.Louis，MO.U.S.A.)。而酒精及氯仿均購自Fisher公司(Medford，MA)。
a.由GMD植物液制得純化的GMD1630之制備方法GMD樹脂液之收集-GMD之樹干被予切割并插塞以排液管后予以纏繞。被收集之樹液經(jīng)予加熱至75℃并蒸發(fā)至完全干涸。此干燥的植物樹脂于其切割表面上顯示出一黃色的臘狀外觀。
b.由GMD樹脂作GMD1630之精制(圖1)GMD樹脂系由二個(gè)萃取操作之不同結(jié)合方式被萃取出有效的溶解細(xì)胞的成分一為酒精萃取，而另一為氯仿萃取。對(duì)酒精萃取操作而言，樹脂系先予壓碎并輾成粉末。20-30gm之GMD粉末在20-75℃下以強(qiáng)力攪拌方式被溶解入200-300ml之100%絕對(duì)酒精中。在實(shí)際操作上，完全溶解系在置放過夜并在360nm之飽和吸收度時(shí)可被觀察出。為濃縮溶解于酒精中之GMD1630，此溶液被以蒸餾水稀釋至20%以下之酒精濃度并在冰上急冷。此時(shí)立即可見云霧狀沉淀物且于沉淀物中之GMD1630可以快速離心方式濃縮而得。
薄層層析術(shù)GMD1630之最終精制純化及分析系使用薄層層析術(shù)予以施行。包括于氯仿中予以制備之濃縮GMD1630系以蒸發(fā)方式取得。供薄層層析術(shù)使用之溶劑系統(tǒng)為氯仿/甲醇/乙酸(容積比40∶40∶20)(圖3)。此成分則用碘蒸氣或硫酸予以確認(rèn)。為制備最佳的純化GMD1630，黃色成分之斑點(diǎn)系由刮除粉末予以去除并再溶解于氯仿中。
c.紅外線吸收光譜及可見光-UV吸收光譜在80%酒精中之已精制純化的GMD1630在高度真空狀態(tài)中被冷凍脫水成完全干燥且被處理成供測(cè)IR光譜用之固態(tài)試樣。干燥GMD1630與100mg經(jīng)刻意干燥的光譜級(jí)KBr于耐火矽酸鉛乳缽內(nèi)均勻混合。所得之混合物被置入一附有真空泵之不銹鋼模內(nèi)。其后此試樣于一壓力約4500kg/cm油壓模下模壓5分鐘。其后去除壓模之活塞及底座，且所得之錠狀薄片被放入IR試樣支架供直接測(cè)試用。掃瞄系以-Nicolet傅立葉變換(Fourier Transfer)IR光譜儀中以波數(shù)400至800(1/cm)進(jìn)行之(如圖4所示)。純KBr之背景值則經(jīng)由電腦自GMD1630-KBr錠片之?dāng)?shù)據(jù)中例行的扣除之。
為測(cè)試可則光-UV光譜，GMD1630則被溶于氯仿或100%乙醇中，并于Beckman DU-64可見光-UV光譜儀中以波長(zhǎng)200至700nm掃瞄之(其結(jié)果如圖5所示)。結(jié)果顯示出在250-400nm范圍內(nèi)有二個(gè)主要的吸收波峰(即290及360nm處于特性的可見光-UV吸收波峰)，此可為快速的化學(xué)鑒識(shí)法。且在波長(zhǎng)315nm處在一深的波谷，而吸收值之比例A290∶A315∶360＝2∶1∶2)。
實(shí)施例2.GMD1630當(dāng)作一增強(qiáng)藥力的細(xì)胞溶解劑之試管內(nèi)(活體外)應(yīng)用(圖2)a.由供作溶解細(xì)胞的鑒定用之子宮內(nèi)膜腫瘤樣品作CE細(xì)胞之培養(yǎng)(圖6)以膠原酵素(collagenase)Ⅰ使子宮內(nèi)膜腫瘤樣品變異之CE細(xì)胞系在DMEM加上10%FSC培養(yǎng)基中成長(zhǎng)至其早期融合的階段。培養(yǎng)基于其后每日則予重新更換。細(xì)胞在能提供調(diào)濕的5% CO /95%空氣之37℃孵育器中孵育。CE細(xì)胞變成在經(jīng)過65個(gè)繁殖變遷(population passage)后如同處于活體外情形之新創(chuàng)細(xì)胞系。供溶解細(xì)胞的藥力分析，CE細(xì)胞系成長(zhǎng)至其早期融合的階段且被加入經(jīng)精制純化之GMD1630。于本發(fā)明案之大多數(shù)實(shí)驗(yàn)中，在CE細(xì)胞之早期融合階段取10μl溶于50%酒精中之經(jīng)精制純化的GMD1630加入CE細(xì)胞之10ml培養(yǎng)板上，而另取10μl之50%酒精者供作對(duì)照組。被溶解的細(xì)胞則用等滲的磷酸鹽緩沖溶液清洗且培養(yǎng)板在4小時(shí)培育后用胺黑染色予以固定。每一組之細(xì)胞均再用光線顯微鏡觀察。細(xì)胞之溶解程度則由量測(cè)胺黑染色減少情形予以評(píng)估(系以未添加GMD1630之對(duì)照組比較)。
b.培養(yǎng)的CE細(xì)胞及紅血球經(jīng)以GMD1630處理之電子顯微圖(圖7及圖8)經(jīng)處理之CE細(xì)胞(圖7)在成長(zhǎng)培養(yǎng)基中變成浮游者被以離心方式收集。為供電子顯微圖用，此等培養(yǎng)物被清洗且固定于2%戊二醛(glutaraldehyde)，其后固定于1%五氧化鋨中，并于1%醋酸鈾中預(yù)染色。將此培養(yǎng)物嵌埋入環(huán)氧樹脂(Ciba Geigy公司商標(biāo)Araldite)內(nèi)，并予切割成500A切面，此切面則用2%醋酸鈾及雷諾氏鉛(Reynold′sLead)予以染色，然后用察司(Zeiss)顯微鏡觀察之。紅血球細(xì)胞(如圖8所示)亦用電子顯微鏡觀看其微細(xì)的變化。
實(shí)施例3.GMD1630當(dāng)作增強(qiáng)藥力的制癌藥之活體內(nèi)應(yīng)用TMC 97融合瘤系供其他目的用而被提出，且被視為供形成水腹用之優(yōu)良細(xì)胞系。A431為一得自美國(guó)加州之被贈(zèng)與的細(xì)胞系，且可于裸鼠內(nèi)形成腫瘤。GMD-1630之制癌功效則以此二細(xì)胞系及動(dòng)物模式予以評(píng)估。其結(jié)果則以下列之表1及表2有關(guān)GMD1630在活體內(nèi)之制癌功效予以表示。
表1GMD1630對(duì)Balb/c老鼠上之TMC 97融合瘤之效應(yīng)注射 老鼠 劑量 觀察參數(shù)(平均/SD)材料 (只數(shù)) (μg/g) WBC×10 RBC×10 HCT 水腫(mm) (mm) % ml食鹽水(對(duì)照組) 50 - 4.6/0.5 8.0/0.6 38/2 20/2GMD1630 50 2.75 4.9/0.7 8.4/0.5 42/3 7/1GMD1630 50 1.25 4.8/0.2 7.9/0.3 40/3 11/2GMD1630 50 0.25 4.5/0.2 8.2/0.3 42/2 15/3將100萬個(gè)TMC融合瘤細(xì)胞注射入每只Balb/c老鼠之腹腔內(nèi)以形成水腫。動(dòng)物(老鼠)則于20天后予以殺死并量測(cè)每只動(dòng)物之水腫數(shù)目。亦同時(shí)量測(cè)WBC，RBC及HCT并予比較。
表2GMD1630對(duì)人類子宮頸癌A431在裸鼠身上之腫瘤成長(zhǎng)的效應(yīng)裸鼠(數(shù)目) 注射材料(ug/g) 腫瘤尺寸mm×mm1 食鹽水 20×302 食鹽水 18×283 食鹽水 22×324 GMD-1630(3.0) 4×85 GMD-1630(3.0) 5×76 GMD-1630(2.0) 8×117 GMD-1630(1.5) 7×108 GMD-1630(0.5) 15×189 GMD-1630(0.5) 18×2010 GMD-1630(0.2) 20×25將100萬個(gè)A431(人類子宮頸癌表皮型)細(xì)胞以皮下注射方式注射入一只成年裸鼠之一處。自注射腫瘤細(xì)胞之日起以上述劑量之GMD1630每星期二次用肌內(nèi)注射方式注入。在三個(gè)星期后量測(cè)腫瘤之尺寸。
進(jìn)而連同血壓，心跳率，EKG(如圖9所示)，凝血及過敏試驗(yàn)進(jìn)行毒性試驗(yàn)，測(cè)試結(jié)果顯示出在對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組間并無任何顯著的差異。生化學(xué)的數(shù)據(jù)顯示經(jīng)處理以GMD1630之動(dòng)物與未處理者之間并無不同(其結(jié)果如表3所示)。
表3經(jīng)處理與未處理之動(dòng)物的生化學(xué)的分析對(duì)照組者 已處理者蛋白素 0.4mg% 0.4mg%球蛋白 3.7mg% 3.6mg%全蛋白 4.1mg% 4.0mg%SGOT 7mu/ml 8.0mu/mlSGPT 4mu/ml 5mu/ml堿性磷酸鹽酵素 14mu/ml 18mu/ml全膽紅素 0mg% 0mg%BUN(血中尿素氮) 12mg% 13mg%肌胺酸酐(creatinine) 0.5mg% 0.3mg%鈣 6.5mg% 6.5mg%磷酸鹽 3.6mg% 3.5mg%尿酸 0.5mg% 1.0mg%全膽固醇 75u/ml 61u/ml鈉 138mM 140mM鉀 6.8mM 7.6mM氯 98mM 95mM在有處理之動(dòng)物組中，Balb/c老鼠以如表1所述之2.0ug/gm劑量每隔1日持續(xù)注射兩個(gè)月。而生化學(xué)的數(shù)據(jù)系以日本日立自動(dòng)分析器(Hitachi Automatic Analyzer)736-740型檢測(cè)而得。
權(quán)利要求
1.一種由藤黃屬龍葵植物(G.M.D)樹脂精制化可溶解細(xì)胞的化合物GMD-1630之方法，其中精制純化系GMD樹脂經(jīng)以萃取，溶化，沉淀，濃縮等步驟反覆操作而成者。
2.按權(quán)利要求1所述之方法，其中GMD 1630有效成分系用酒精溶化過程予以萃取并由稀釋此酒精溶液入水中之快速沉淀過程予以濃縮而得。
3.按權(quán)利要求1所述之方法，其中GMD 1630有效成分系以氯仿-水分離系統(tǒng)予以萃取而得。
4.按權(quán)利要求1所述之方法，其中有效成分GMD 1630中之不具可溶解細(xì)胞的活性之其他成分系被去除。
5.按權(quán)利要求1所述之方法，其中有效成分系被化學(xué)的鑒識(shí)成在紅外線(IR)光譜之波數(shù)(1/cm)1630，1590，1430及1140處有波峰的物質(zhì);且在快速的化學(xué)鑒識(shí)方法中，于波長(zhǎng)290及360nm處亦有特性的可見光-紫外線(UV)吸收波峰(在波長(zhǎng)315nm處有一深的波谷，而吸收值之比例A290∶315∶360為2∶1∶2)。
6.一種供對(duì)由權(quán)利要求1所述方法而得之有效成分GMD 1630作溶解細(xì)胞之藥力偵測(cè)方法，其中所引用之哺乳動(dòng)物類細(xì)胞系供作生物學(xué)的直接鑒定用;所引用之細(xì)胞在原位上被以胺黑固定及染色;細(xì)胞之溶解度則以在加有毒素之板上的所減少之染色的細(xì)胞予以量測(cè)。
7.一種于等滲溶液或高滲溶液中加入由權(quán)利要求1所述方法而得之有效成分GMD 1630以使細(xì)胞溶解的方法，此方法系與有效成分GMD 1630結(jié)合至可能為細(xì)胞結(jié)構(gòu)之細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)而引起嚴(yán)重的形態(tài)變化有關(guān)。
全文摘要
一種由藤黃屬龍葵植物(G.M.D.)之樹脂經(jīng)由萃取精制及確認(rèn)出具有高度化學(xué)安定性的有效成分GMD1630之方法。此有效成分制品之藥理學(xué)的及毒物學(xué)的活性業(yè)經(jīng)徹底研究。數(shù)據(jù)顯示出此有效成分為一深具溶解細(xì)胞的潛力之化學(xué)化合物。細(xì)胞可為低于10ng/ml之低濃度不可逆的殺死。以如此的低濃度僅顯現(xiàn)出極低的中毒現(xiàn)象。于此發(fā)明內(nèi)提供有多種快速大量萃取有效成分GMD1630之方法及長(zhǎng)期儲(chǔ)存之途徑。此外本發(fā)明案亦設(shè)計(jì)出多種用以監(jiān)測(cè)中毒現(xiàn)象之試管內(nèi)的藥力鑒別及活體內(nèi)試驗(yàn)。
文檔編號(hào)C07G99/00GK1055932SQ9010232
公開日1991年11月6日 申請(qǐng)日期1990年4月19日 優(yōu)先權(quán)日1990年4月19日
發(fā)明者張連生 申請(qǐng)人:張連生