專利名稱：晶狀去氧精胍啉(deoxyspergualin)及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有抗腫瘤及免疫抑制活性的N-〔4-(3-氨基丙基)氨丁基〕-2-(7-胍基庚酰胺)-2-羥基乙酰胺三鹽酸鹽(以下簡稱去氧精胍啉鹽酸鹽)，及其制備方法。
去氧精胍啉的分子式如下，它對各種動物
腫瘤有良好拮抗活性，並有良好的免疫抑制活性，因此，對臨床應(yīng)用是一個有用的化合物。去氧精胍啉常規(guī)制備成三鹽酸鹽。
用7-胍基庚酰胺與乙醛酰亞精胺經(jīng)酸催化脫水縮合的合成方法制備去氧精胍啉鹽酸鹽是已知的〔美國專利號4，518，532和4，603，015〕。
按上述合成方法得到地去氧精胍啉鹽酸鹽粉末有不合要求的性質(zhì)，如吸濕性及熱不穩(wěn)定性。本發(fā)明提供的去氧精胍啉鹽酸鹽結(jié)晶改善了其吸濕及熱不穩(wěn)定性。
簡言之，本發(fā)明涉及去氧精胍啉鹽酸鹽的結(jié)晶，本發(fā)明也涉及去氧精胍啉鹽酸鹽結(jié)晶的制備方法，該方法的特征是將去氧精胍啉鹽酸鹽的粉末或水懸浮糖漿狀物在水和水相混或水溶的有機溶劑存在下結(jié)晶化。
我們首次發(fā)現(xiàn)去氧精胍啉鹽酸鹽可以結(jié)晶，並且與傳統(tǒng)制備和使用的粉末或冷凍干燥粉末相比，該結(jié)晶明顯的改善了吸濕性，治療性能和熱穩(wěn)定性。本發(fā)明以這種發(fā)現(xiàn)為基礎(chǔ)。
在本發(fā)明中，術(shù)語“去氧精胍啉鹽酸鹽粉末”意指由去氧精胍啉鹽酸鹽的水懸浮糖漿減壓干燥得到的粉末或冷凍干燥的粉末。術(shù)語“去氧精胍啉鹽酸鹽水懸浮糖漿”意指由減壓濃縮去氧精胍啉鹽酸鹽水溶液所得到的糖漿狀剩余物。通常這種糖漿狀物的水含量是30%或以下。
本發(fā)明的晶狀去氧精胍啉鹽酸鹽改善了吸濕性和熱穩(wěn)定性，該結(jié)晶呈α-型或β-型。
可用下法制備去氧精胍啉鹽酸鹽的α-型結(jié)晶
去氧精胍啉鹽酸鹽本身可用各種方法制備，其中之一是美國專利號4，518，532實例4中敘述的方法。本發(fā)明不限于任何特定的制備去氧精胍啉鹽酸鹽的方法。
當去氧精胍啉鹽酸鹽在低濕度大氣中放置時，最好相對濕度(以下簡稱為RH)在52%或以下，在適宜的溫度、該粉末結(jié)晶成為本發(fā)明的去氧精胍啉鹽酸鹽α-型結(jié)晶。
晶化所用的溫度不限于任何特定的溫度或溫度范圍，以不引起去氧精胍啉鹽酸鹽降解為條件，而實際使用溫度是在0℃到30℃的范圍。晶化所需的時間為2～20天，通常大約10天。取決于粉末的量和溫度。
α-型結(jié)晶也可由去氧精胍啉鹽酸鹽的糖漿狀物得到。就是，濃縮去氧精胍啉鹽酸鹽的水溶液至產(chǎn)生糖漿狀物，然后在低濕度大氣中放置，最好RH為52%或以下，得α-型結(jié)晶。晶化溫度和時間類似于以上所述，但晶化時間可通過攪拌糖漿狀物或在糖漿狀物中加適量α-型結(jié)晶而縮短。
制備α-型結(jié)晶最實用的方法如下。把小量預(yù)先制備的α-型結(jié)晶加到水含量在20%(W/W)或以下的糖漿狀物水懸浮液中，在30%或以下的RH進行攪拌，直至它幾小時內(nèi)固化。儲存在硅膠干燥器內(nèi)，使晶化完全。
去氧精胍啉鹽酸鹽α-型結(jié)晶的物化性質(zhì)如下。
1.X-射線衍射圖形
研究X-射線衍射圖形(在

圖1和表1所示)，使用X-射線衍射儀(ShimadzuXD-610)，它裝有CuX-射線管，石墨單色儀和檢測用的閃爍計數(shù)器。
圖1表明去氧精胍啉鹽酸鹽α-型結(jié)晶的X-射線粉末衍射圖形，衍射角(度)列于橫坐標，強度(Kcps)在縱坐標。
表1 α-型結(jié)晶的X-射線衍射圖形
X-光源銅X-射線管40KV，30mA.λ＝1.54051
濾器石墨單色儀
2.熱分析
用RigakuBenki(TAS-100型)儀同時得到的去氧精胍啉鹽酸鹽α-型結(jié)晶差熱分析(DTA)和熱解重量分析(TG)的結(jié)果列于圖2。以溫度(℃)為橫坐標，重量(mg)或電子伏特(μV)為縱坐標來描繪該結(jié)果。
3.吸濕性
為了評價去氧精胍啉鹽酸鹽粉末和α-型結(jié)晶的吸濕性，測定了在不同RH(%)條件下儲存24小時后每個樣品的重量改變。結(jié)果列于表2。
表2.在不同濕度條件下的重量變化
如表2指明的，在RH為52%或以下的條件下去氧精胍啉鹽酸鹽α-型結(jié)晶不吸水，與粉末相比表明吸濕度改善。
4.熱穩(wěn)定性
為了評價去氧精胍啉鹽酸鹽α-型結(jié)晶與其粉末相比的熱穩(wěn)定性，樣品在50℃貯放6天，用高壓液相色譜(HPLC)分析，測定未分解物的量，結(jié)果列于表3。
表3.熱穩(wěn)定性比較
注量(%)＝ (儲存后的量)/(開始的量) ×100
正如表3所指明的，α-型結(jié)晶的熱穩(wěn)定性顯著改善。
去氧精胍啉鹽酸鹽β-型結(jié)晶可用下法制備。去氧精胍啉鹽酸鹽本身可用各種方法制備，其中之一是美國專利號4，518，532實例4中所敘述的方法。本發(fā)明不限于制備去氧精胍啉鹽酸鹽的任何特定的方法。如此得到的去氧精胍啉鹽酸鹽粉末在水和一種水溶或水相混的有機溶劑的混合液中放置，即得去氧精胍啉鹽酸鹽的β-型結(jié)晶。
本發(fā)明中可用于晶化的有機溶劑是能與水混合均勻的溶劑。例如甲醇、乙醇、異丙醇、正丙醇、丙酮、四氫呋喃、1，4-二氧六環(huán)及其混合物都可應(yīng)用。最好的溶劑是乙醇，但不特別限于此。用于結(jié)晶的溶劑濃度范圍，例如溶液中乙醇，一般為85至99.5%(V/V)，優(yōu)選90至99%(V/V)。
晶化溫度不是關(guān)鍵，只要所用溫度不引起去氧精胍啉鹽酸鹽降解即可，通常在-20°-50℃的范圍，最好是由5℃到室溫。晶化所需時間為2到20天的范圍，取決于所用鹽酸鹽的量，通常大約是10天。在晶化早期階段放入小量預(yù)先得到的β-型晶種可促進晶化。
在上述方法中，可用去氧精胍啉鹽酸鹽的糖漿狀物(糖漿水懸浮液)代替其粉末。這樣，就要考慮糖漿中的水含量，因此在晶化系統(tǒng)中有機溶劑，如乙醇的濃度是85-99.5%，最好是90-98(V/V)。
用于晶化的有機溶劑與去氧精胍啉鹽酸鹽的比例不受限制，但通常在比例為3∶1-20∶1(V/W)的范圍內(nèi)。
晶化時攪拌可減少晶化時間，這種晶化時間范圍為幾小時到幾天。這樣形成的β-型結(jié)晶可用任何普通方法收集，如減壓過濾或用離心過濾。
去氧精胍啉鹽酸鹽β-型結(jié)晶的物化性質(zhì)如下。
1.X-射線衍射圖形
研究X-射線衍射圖形(在圖3和表4表明)，所用X-射線衍射儀裝有CuX-射線管、石墨單色儀和檢測用的閃爍計數(shù)器。
圖3表明，去氧精胍啉鹽酸鹽β-型結(jié)晶的粉末X-射線衍射圖，以衍射角(度)為橫坐標，強度(Kcps)為縱坐標
表4 β-型結(jié)晶的X-射線衍射圖形
X-射線源銅X-光管.40KV，30mA.
λ＝1.54051
濾器石墨單色儀
2.熱分析
用Shimadzu儀(DTG-40型)同時得到的去氧精胍啉鹽酸鹽β-型結(jié)晶的差熱分析(DTA)和熱解重量分析(TG)的結(jié)果列于圖4。以溫度(℃)為橫坐標，重量(mg)或電子伏特(μV)為縱坐標描繪該結(jié)果。
3.吸濕性
在不同的RH(%)中貯放24小時后，測每個樣品的重量變化來評價去氧精胍啉鹽酸鹽的粉末和β-型結(jié)晶的吸濕性。結(jié)果列于表5。
表5 在不同濕度條件下的重量變化
如表5指明的，在所有濕度條件下β-型結(jié)晶的重量變化比粉末小。還有，β-型結(jié)晶在RH為64%時不潮解，而粉末在這種濕度時潮解。
4.熱穩(wěn)定性
為了評價去氧精胍啉鹽酸鹽β-型結(jié)晶與粉末相比的熱穩(wěn)定性，樣品在50℃貯放6天，用HPLC分析來測定未分解物的量。結(jié)果列于表6。
表6 熱穩(wěn)定性的比較
注量(%)＝ (儲存后的量)/(開始的量) ×100
由表6可明顯地看到，β-型結(jié)晶顯著的改善熱穩(wěn)定性。
本發(fā)明將由下面的實例進一步闡明。然而應(yīng)當明白，本發(fā)明決不限于這些實例。
實例1
將去氧精胍啉鹽酸鹽(500mg)在25℃和RH為52%的條件下放置11天使其晶化。得結(jié)晶(506mg)，具有圖1所示的典型α-型結(jié)晶的X-射線衍射圖形。
實例2
把去氧精胍啉鹽酸鹽(500mg)的冷凍干燥粉末在25℃和RH為43%時放置11天，得α-型結(jié)晶(510mg)
實例3
在25℃和RH為31%時把去氧精胍啉鹽酸鹽的冷凍干燥粉末(500mg)放置11天得α-型結(jié)晶(509mg)。
實例4
40g去氧精胍啉鹽酸鹽水溶液減壓濃縮，產(chǎn)生糖漿剩余物(46g)。然后加20mgα-型結(jié)晶，混合物在室溫，RH為15%時攪拌。攪拌2小時后，固化的剩余物放在硅膠干燥器內(nèi)3天得α-型結(jié)晶(42g)。
實例5
把0.5ml95%(V/V)乙醇加到裝有100mg去氧精胍啉鹽酸鹽粉末的小瓶中，溶液在5℃放3天。在溶劑中形成的結(jié)晶減壓過濾收集，減壓干燥得55mgβ-型體晶。所得結(jié)晶的X-射線衍射圖表明為如圖3所示的典型β-型結(jié)晶的X-射線衍射圖形。
實例6
將含有20g去氧精胍啉鹽酸鹽的水溶液(100ml)減壓濃縮得24g糖漿剩余物。把75ml乙醇加到該剩余物內(nèi)，種入20mgβ-型晶種?；旌衔镌?℃放9天。按實例5的方法收集結(jié)晶、干燥，得β-型結(jié)晶(16g)。
實例7
將去氧精胍啉鹽酸鹽(150g)的水溶液(500ml)減壓濃縮得糖漿狀剩余物(175g)。1升乙醇加到該剩余物中，在5℃攪拌2天。形成的結(jié)晶離心過濾收集，減壓干燥得129gβ-型結(jié)晶。
實例8
將去氧精胍啉鹽酸鹽(950g)的水溶液(4升)減壓濃縮得糖漿狀剩余物(1120克)，加1.5升乙醇，將懸浮液轉(zhuǎn)移到晶化用的容器內(nèi)(10升體積)。把6.5升乙醇及2gβ-型結(jié)晶在攪拌下加入混合物中，攪拌(在15℃)繼續(xù)4天。離心過濾收集結(jié)晶，減壓干燥，得880gβ-型結(jié)晶。
本發(fā)明的晶狀去氧精胍啉鹽酸鹽是新的，在吸濕性和熱穩(wěn)定性方面都有明顯改善，該結(jié)果使得去氧精胍啉在調(diào)配和儲存方面都較易處理。
權(quán)利要求
1、晶狀去氧精胍啉(deoxyspergualin)三鹽酸鹽。
2、權(quán)利要求1中的晶狀去氧精胍啉三鹽酸鹽，其中它呈α-型結(jié)晶或β-型結(jié)晶的形式。
3、去氧精胍啉三鹽酸鹽的α-型結(jié)晶X-射線粉末衍射圖形如下
4、去氧精胍啉三鹽酸鹽的β-型結(jié)晶X-射線粉末衍射圖形如下
5、一種制備晶狀去氧精胍啉三鹽酸鹽的方法，它包括將去氧精胍啉三鹽酸鹽粉末或水懸浮糖漿狀物在水或水溶的有機溶劑存在下結(jié)晶化。
全文摘要
本發(fā)明涉及具有抗腫瘤及免疫抑制活性的N-[4-(3-氨基丙基)氨丁基]-2-(7-胍基庚酰胺)-2-羥基乙酰胺三鹽酸鹽及其制備方法。
文檔編號C07C279/14GK1047670SQ9010380
公開日1990年12月12日 申請日期1990年5月28日 優(yōu)先權(quán)日1989年5月29日
發(fā)明者豬飼勝重, 守口誠, 梅田芳久, 加藤郁之進, 才野哲之 申請人:寶酒造株式會社, 日本化株式會社