專利名稱：牛膝糖肽的提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從牛膝中提取牛膝糖肽的方法。
牛膝(Achyranthes bidentata Blume)具有增強(qiáng)機(jī)體免疫功能的作用，一般用于中藥方劑中，用水煎服。然而，水煎中藥除了煎煮麻煩這一通病外，最主要的是牛膝中溶于水部分的成份復(fù)雜，除了有效成份牛膝糖肽外，還有相當(dāng)一部分其它成份也溶于水中，從而達(dá)不到少量高效的目的。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，牛膝中蛋白肽和糖等成份結(jié)合的糖肽具有免疫活性，且水溶性好，易為人體充分吸收。牛膝糖肽的糖含量高且含有多種氨基酸，可以調(diào)節(jié)機(jī)體功能，促進(jìn)新陳代謝，提高機(jī)體免疫力，延緩細(xì)胞衰老。牛膝糖肽無(wú)毒副作用，對(duì)冠心病、高血壓有顯著的療效，且可加速手術(shù)后創(chuàng)口的愈合及各種癌癥術(shù)后化療后的康復(fù)，特別還對(duì)白血球下降者有顯著的升白功效，但目前尚無(wú)一種簡(jiǎn)單易行的方法從牛膝中分離提取得到蛋白、肽和糖結(jié)合的糖肽。
本發(fā)明的目的是提供一種從牛膝中提取糖肽的獨(dú)特的方法。
本發(fā)明的目的是通過(guò)下列構(gòu)思來(lái)實(shí)現(xiàn)的牛膝用水浸泡，分離得到浸泡上清液，向內(nèi)加入與水混溶的有機(jī)溶劑進(jìn)行沉淀，分離得到沉淀物，即為牛膝糖肽。
在所述的提取方法中，浸泡用水的用量相對(duì)于1份(重量)牛膝而言，為1-2份(重量)，所述的浸泡用水可選自由潔凈的自來(lái)水，離子交換水和蒸餾水所組成的組。浸泡時(shí)間視不同季節(jié)的室溫高低而定，較好的時(shí)間為8-24小時(shí)。
其中所述的有機(jī)溶劑以醇類、丙酮或其混合溶劑為佳，其用量相對(duì)于1份(重量)的浸泡上清液而言，為2-6份(重量)，較好的是用4.5倍丙酮進(jìn)行沉淀。優(yōu)選的沉淀時(shí)間為4-10小時(shí)。
進(jìn)一步地說(shuō)，若市售牛膝中雜質(zhì)太多，應(yīng)先揀去雜質(zhì)，用水淘洗干凈，所得的干凈濕牛膝再進(jìn)行提取。
下面將結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作詳細(xì)的闡述。
實(shí)施例1市售的牛膝切片，揀去雜質(zhì)，并用水淘洗干凈。稱取1000克干凈濕牛膝，加入1000克潔凈自來(lái)水浸泡12小時(shí)。過(guò)濾棄去濾渣，向?yàn)V液中加入4.5倍的丙酮，靜置5小時(shí)，用虹吸管吸去上清液，對(duì)下層漿液進(jìn)一步進(jìn)行離心分離，得到棕色漿狀沉淀的牛膝糖肽粗制品。
粗產(chǎn)品的牛膝糖肽漿液經(jīng)透析或重結(jié)晶純化后得精制品牛膝糖肽漿液，放入冷凍機(jī)中進(jìn)行干燥而得淡黃色的牛膝糖肽粉末。得率12%。
實(shí)施例2稱取經(jīng)實(shí)施例1所述處理過(guò)的干凈濕牛膝500克，加入1000克蒸餾水浸泡8小時(shí)。離心分離棄去沉淀物，向上清液中加入5倍量(體積)的乙醇，放置3小時(shí)。然后倒出上清液。下層漿液再離心，所得的棕色漿狀沉淀即為牛膝糖肽漿液。
用實(shí)施例1所述的方法進(jìn)行純化和干燥后可得到牛膝糖肽粉。得率10%急毒性(LD50)試驗(yàn)取昆明種小鼠，(體重18-22克)60天，其中雌雄各半。一天禁食后，取實(shí)施例1的樣品以20g/kg的劑量給小鼠灌胃給藥。給藥后小鼠的活動(dòng)和攝水及進(jìn)食物無(wú)異常，連續(xù)觀察7天，無(wú)小鼠死亡。結(jié)論本發(fā)明的牛膝糖肽以20g/kg給藥對(duì)小鼠無(wú)急性毒性。
藥物免疫藥理試驗(yàn)以實(shí)施例1和2制得的牛膝糖肽粉，在25mg/kg劑量下，給小鼠連續(xù)口服4天，對(duì)T細(xì)胞和B細(xì)胞有明顯的促進(jìn)增殖作用。臨床試驗(yàn)將實(shí)施例1和2制得的牛膝肽粉，按常規(guī)方法制成牛膝糖肽膠囊。
抽樣選取原發(fā)性高血壓、高脂血癥、冠心病、病毒性心肌炎、腦血管意外、慢性胃炎、消化性潰瘍以及腫瘤等病例，總病例數(shù)115例，其中男性68例，女性47例，服用方法牛膝糖肽3＃，每日3次，療程為2-3周。
結(jié)果全數(shù)病例服用牛膝糖肽膠囊后，胸悶、心悸、氣促、頭暈、納呆、腹痛以及骨胳疼痛均有不同程度緩解，其中著重觀察了40例。在40例中，以冠心病、高血壓、惡性腫瘤等病例癥狀改善較為顯著。一般在服后3-4天即見(jiàn)效。用藥前后復(fù)查血常規(guī)、尿常規(guī)、肝功能、腎功能等，均未見(jiàn)異常。
全數(shù)病例在服藥期間基本上未發(fā)現(xiàn)有副作用。
含量測(cè)定用高效液相色譜(HPLC)測(cè)量實(shí)施例1和2的樣品，其中糖的含量分別為98.715、98.235;在氨基酸自動(dòng)分析儀上測(cè)得有多種氨基酸。
用本發(fā)明的方法來(lái)提取牛膝糖肽，具有生產(chǎn)設(shè)備簡(jiǎn)單，成本低，工藝先進(jìn)，得率高的特點(diǎn)。所提取的產(chǎn)品是一種新的增強(qiáng)人體免疫功能的促進(jìn)劑，易為人體所吸收，是一種全天然新型的機(jī)體調(diào)節(jié)型的高效新藥和保健品。
權(quán)利要求
1.一種提取牛膝糖肽的方法，其特征在于ⅰ)用水浸泡牛膝；ⅱ)分離得到上清液，向內(nèi)加入與水混溶的有機(jī)溶劑進(jìn)行沉淀；ⅲ)分離得到沉淀物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于ⅰ)中浸泡用水的用量相對(duì)于1份(重量)牛膝而言為1-2份(重量)水。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于所述的浸泡用水系選自由潔凈自來(lái)水、離子交換水和或蒸餾水組成的組。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于ⅰ)步驟的浸泡時(shí)間為8-24小時(shí)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于ⅱ)步驟中沉淀時(shí)間為4-10小時(shí)。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方式，其特征在于其中所述的與水混溶的有機(jī)溶劑選自由醇類、丙酮和其混合物所組成的組。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種牛膝糖肽的提取方法，其特征在于用水浸泡牛膝，分離得到上清液，向內(nèi)加入與水相混溶的有機(jī)溶劑沉淀，分離得到沉淀物。本方法具有工藝獨(dú)特、簡(jiǎn)單、先進(jìn)，得率高，成本低廉的優(yōu)點(diǎn)，所提取的產(chǎn)品是一種全新的機(jī)體調(diào)節(jié)型高效新藥和保健品。
文檔編號(hào)C07K9/00GK1088214SQ9310963
公開(kāi)日1994年6月22日 申請(qǐng)日期1993年8月20日 優(yōu)先權(quán)日1993年8月20日
發(fā)明者王思清, 胡月華 申請(qǐng)人:上海化城生化科技有限公司