專利名稱：新的青霉烯化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的青霉烯化合物，使用該物質(zhì)治療細(xì)菌感染，以及含有該物質(zhì)的新配方。
青霉烯是由酸核衍生的一類已知化合物
其中還標(biāo)明了本文所用的編碼系統(tǒng)。該核可以兩種同分異構(gòu)形式存在。5R異構(gòu)體(即在5-位具有以下構(gòu)型)
已知具有抗菌活性(由于與青霉素結(jié)合蛋白(PBP′s)的相互作用)。該活性通常限于游離酸或陰離子，所以這些青霉烯一般以羧酸陰離子鹽的形式或作為可體內(nèi)水解的酯用于抗菌治療。5S異構(gòu)體(在5-位具有以下構(gòu)型)
一般無抗菌活性(因為與PBP′s無相互作用)。根據(jù)H.R.Pfaendler等人，J.Am.Chem.Soc.1979，101(21)p6306-6310，例如由母核酸和丙酮基酯制備5S青霉烯是已知的。
GB2036015，GB2037277，GB2013674，EP0399228，US4282236，GB1604751，ZA8504947和J.Chem.Soc.Chem.Comm.1988，544描述了某些青霉烯-3-羧基酯衍生物，但它們不具有抗菌活性。
GB2042520公開了某些2-(乙基硫)青霉烯-3-甲酰胺(carboxamide)衍生物。
盡管青霉烯的5R和5S對映體的外消旋和其它混合物是已知的，但是，由于總的來說該5S異構(gòu)體沒有抗菌活性，因此幾乎沒有人試嘗分離純的青霉烯5S異構(gòu)體。
現(xiàn)在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，某些青霉烯酯5S異構(gòu)體抑制細(xì)菌酶引導(dǎo)肽酶1，因此在治療細(xì)菌感染方面具有潛在的用途。該化合物可以以相對于外消旋混合物的異構(gòu)富集態(tài)制備。
因此，本發(fā)明提供了通式(Ⅰ)5S青霉烯化合物的應(yīng)用
其中n是0或1，R2是氫或取代基，R3是酯-或酰胺形成基團(tuán)，R1是氫或通過碳連接的有機(jī)基團(tuán)，并且其中5S異構(gòu)體形式(作為細(xì)菌酶引導(dǎo)肽酶1抑制劑)的-COR3基團(tuán)對于體內(nèi)水解基本穩(wěn)定。
本發(fā)明還提供一種藥物組合物，特別是用于治療細(xì)菌感染(特別是通過細(xì)菌酶引導(dǎo)肽酶1抑制機(jī)理)，該藥物組合物含有式(Ⅰ)化合物和可藥用載體。
本發(fā)明還提供了一種用作活性治療物質(zhì)，特別是用于治療細(xì)菌感染，尤其是通過細(xì)菌引導(dǎo)肽酶1抑制機(jī)理的式(Ⅰ)化合物。
本發(fā)明還提供了在制造用于治療細(xì)菌感染(尤其是通過細(xì)菌酶引導(dǎo)肽酶1抑制機(jī)理)的藥物中的式(Ⅰ)化合物的應(yīng)用。
本發(fā)明還提供了治療哺乳動物細(xì)菌感染(特別是通過細(xì)菌酶引導(dǎo)肽酶1抑制機(jī)理)的方法，該方法包括對需要這種治療的哺乳動物施用有效量的式(Ⅰ)化合物。
本文所用的術(shù)語“芳基”包括苯基和萘基時，各芳基任選地用5個以下，優(yōu)選3個以下選自下述的基團(tuán)取代，所說的基團(tuán)為鹵素、巰基、(C1-6)烷基、苯基、(C1-6)烷氧基、羥基(C1-6)烷基、巰基(C1-6)烷基、鹵代(C1-6)烷基、羥基、氨基、季銨、硝基、羧基、(C1-6)烷基羰基氧、(C1-6)烷氧羰基、羧酸、甲酰、(C1-6)烷基羰基和磷酸基?！纪榛ū交鵆1-6烷基和萘基C1-6烷基，每個芳基基團(tuán)任選地按照如上所述被取代。
本文中所用的術(shù)語‘雜環(huán)基’和‘雜環(huán)’包括在各環(huán)上適當(dāng)?shù)睾?個以下雜原子的芳族和非芳族、單和稠合環(huán)，這些雜原子選自氧、氮和硫，該環(huán)可以被，例如3個以下的選自下述基團(tuán)的基團(tuán)取代或未取代，這些基團(tuán)為鹵素、(C1-6)烷基、(C1-6)烷氧基、鹵代(C1-6)烷基、羥基、羧基、羧基鹽(carboxy salts)、羧基酯(carboxy esters)如(C1-6)烷氧羰基或(C1-6)烷氧羰基(C1-6)烷基、芳基及氧代基團(tuán)。每個雜環(huán)可以含有4至7個，優(yōu)選5或6個環(huán)原子。術(shù)語‘雜芳基’是指可以在每個環(huán)上含有5或6個環(huán)原子的雜芳族雜環(huán)或環(huán)狀系統(tǒng)。稠和的雜環(huán)系統(tǒng)可以包括碳環(huán)并且需要包括唯一的雜環(huán)。根據(jù)雜環(huán)基團(tuán)的性質(zhì)，含有雜環(huán)基團(tuán)的本發(fā)明化合物可以有兩個或多個互變異構(gòu)形式。所有這些互變異構(gòu)形式均包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。
本文所用的術(shù)語‘烷基’、‘鏈烯基’、‘炔基’、和‘烷氧基’包括含有1至6個碳原子的直鏈和支鏈基團(tuán)，如甲基、乙基、丙基和丁基。一個具體烷基是甲基。
本文所用的術(shù)語“鹵素”是指氟、氯、溴和碘。
式(Ⅰ)化合物中的R2可以是氫。
當(dāng)R2不是氫時，它可以是通過碳、氧或硫原子連接在青霉烯環(huán)2-位上的有機(jī)基因。例如，R2可以是R4，CO2R4，OR4，SR4或SOR4，其中各個R4可以相同或不同并且可以是氫或者非取代或優(yōu)選取代的烷基，或者芳基或雜環(huán)基。
例如，當(dāng)R4代表取代的烷基時，烷基上的適當(dāng)?shù)娜〈u基、(C1-5)烷氧基、(C1-4)烷氧基(C1-4)烷氧基、氨基羰基氧、鹵素、巰基、(C1-6)烷硫基、芳基、芳硫基、芳氧基、雜環(huán)基、雜環(huán)硫基、氨基、(單-或雙-)-(C1-6)烷氨基，酰氨基或酰氧基，其中酰基可以是芳族或脂族的，例如(C1-6)烷?；?C1-6)烷氧羰基、任選取代的苯甲?；蛘呷芜x取代的苯氧羰基、羧基、(C1-6)烷氧羰基、疊氮基和烷基或芳基取代的甲硅烷氧基。
除氫以外的R2取代基的適合的例子包括甲基、羥甲基、羥乙硫基、苯基、4-氯苯基、4-甲氧苯基、4-甲氧羰基苯基、氨基羰基氧甲基、對硝基芐氧羰基氨基甲基、乙硫基、甲硫基、叔-丁基二苯基甲硅烷氧基甲基和芐基。
R2優(yōu)選是氫、羥甲基、羥乙硫基、苯基、或氨基羰基氧甲基。
COR3優(yōu)選能抗體內(nèi)水解。
當(dāng)R3是酯形成基團(tuán)時，它可以適當(dāng)?shù)剡x自那些已知對體內(nèi)代謝降解基本上穩(wěn)定的任何基團(tuán)。
R3可以是芳氧基。此外，R3也可以是任選取代的(C1-10)烷氧基，其中任選的取代基可以是鹵素、或有機(jī)基團(tuán)，例如(C1-6)烷基羰基、(C1-6)烷氧羰基、(C1-10)烷氧取代的(C1-10)烷氧基、芳基或雜環(huán)基。該烷氧基R3一般可以被1或2個這些取代基在烷基鏈(如果該鏈含有一個以上碳原子)的末端位置取代。
在R3取代的烷氧基鏈上的任選的芳基取代基的例子包括苯基和取代的苯基，其中該取代基可以選自鹵素、羧酸、羧基酯、氨基、季銨、烷氧基、羥基或磷酸。在R3取代的烷基鏈上的雜環(huán)取代基的實(shí)例包括任選取代的嘧啶基、苯并吡喃基和呋喃基。
該R3基團(tuán)的實(shí)例包括甲氧基，芐氧基、對-甲氧基芐氧基、2，2，2-三氯乙氧基、對-硝基苯氧基、丙酮氧基芐氧基、間-和對-(甲氧羰基)芐氧基、苯甲?；籽趸?、對-硝基芐氧基、4-吡啶基甲氧基、2，2，2-三氯乙氧基、2，2，2-三溴乙氧基、叔-丁基氧基、戊氧基、叔-戊基氧基，烯丙氧基、二苯基甲氧基、三苯基甲氧基、金剛烷基氧、2-芐氧基苯氧基、4-甲硫基苯氧基、四氫呋喃-2-基氧基、四氫吡喃-2-基氧基、五氯苯氧基、丙酮氧基、對-甲苯磺?；已趸?、甲氧基甲基氧、4-(4-硝基芐氧基羰基)-芐氧基、4-羧基芐氧基及其鹽、4-苯基丁氧基、2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基、4-溴芐氧基和(7-甲氧基-2-氧代-2H-1-苯并吡喃-4-基)甲氧基。
R3優(yōu)選是芐氧基、對-硝基芐氧基、對-甲氧基芐氧基、2，2，2-三氯乙氧基、甲氧基、對-(甲氧羰基)芐氧基或烯丙氧基。
當(dāng)R3是酰胺形成基團(tuán)時，它可以是NR52，其中每個R5可以相同或不同并且獨(dú)立地?fù)褡詺洹⒎蓟缛芜x取代的苯基或任選取代的(C1-6)烷基、其中(C1-6)烷基上的任選取代基可選自與烷基R4上的取代可以選擇的取代基相同的取代基。此外，兩個R5部分還可以是按照上述定義含氮雜環(huán)的殘基。NR52還可是氨基酸殘基、例如天然的α-氨基酸如甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、胱氨酸、蛋氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、賴氨酸、精氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、脯氨酸、羥基脯氨酸、組氨酸或色氨酸，其中氨基酸的氨基與青霉烯環(huán)系統(tǒng)3-位上的羰基連接形成酰胺鍵。
一個適合的R5可以是氫，其它的可以是任選取代的烷基，如芳基取代的烷基如芐基。
這些酰胺形成基團(tuán)R3的例子包括芐氨基、N-甲基芐氨基、吡咯烷基(pyrrolidino)、苯胺基、二乙氨基、對-甲氧基芐氨基、嗎啉代、2-(甲氧羰基)乙氨基、叔-丁基氨基和(3-吡啶甲基)氨基。
R3優(yōu)選是吡咯烷基。
R1可以是氫。R1還可以是取代基，該取代基選自任選取代的(C1-6)烷基，任選取代的(C1-6)鏈烯基和C1-6鏈烷?；?，其中在這些取代基的烷基上的任選取代基可以選自與烷基R4上的取代可選擇的取代基相同的取代基。R1優(yōu)選是在1-位通過借助于氧連接的取代基取代的C1-4烷基，這些取代基如羥基、(C1-5)烷氧基如甲氧基、氨基羰氧基、苯甲酸基、或任選地被基團(tuán)如芐氧羰基氨取代的(C1-6)鏈烷酰氧基。當(dāng)1-位碳原子是手性時，優(yōu)選的立體化學(xué)式如下
R1烷基還可以被R8-COO-或R8CO-NH-取代，其中R8是氨基酸(如天然α-氨基酸)的殘基。R1上的取代基還可以是疊氮基、N3或肽殘基，如化學(xué)式R9-NH-CHR10-CO[-NHCHR10-CO-]n-X-，其中R9是氨基取代基團(tuán)，如任選取代的C1-6鏈烷?；駽1-6烷氧基羰基，R10是從天然氨基酸(如上述的α-氨基酸)衍生的殘基，X是O或NH，n是1至4，更具體地說1至3如1至2之間的整數(shù)。這種肽殘基的例子是(CH3)3CO.CONH.CH(CH3).CONH.CH(CH2.CH(CH3)2).CONH。
R1優(yōu)選是氫、1-乙酸基乙基或1-羥乙基。
式(Ⅰ)化合物可適當(dāng)?shù)匕?0%或更優(yōu)選60%或更、更優(yōu)選70%或更、更優(yōu)選80%或最理想為90%或更多的5S異構(gòu)體。特別優(yōu)選的是式(Ⅰ)化合物基本上是純5S異構(gòu)體。
本發(fā)明的某些化合物可以從溶劑如有機(jī)溶劑中結(jié)晶或重結(jié)晶。在這種情況下可形成溶劑化物。本發(fā)明包括在其范圍內(nèi)的化學(xué)計量溶劑化物，包括水合物以及含有可變量水的化合物(該化合物可通過冷凍干燥方法生產(chǎn))。
因為本發(fā)明抗菌化合物打算用于藥物組合物，因此很容易理解，這些化合物每個都以基本上純的形式，如至少60%純，更合適至少75%純，優(yōu)選至少85%、最好至少95%純(%以重量為基)提供。該不純的化合物制劑可被用于制備在藥物組合物中使用的更純的制劑;這些低純化合物制劑應(yīng)含有至少1%、更合適至少5%、和優(yōu)選10～49%的式(Ⅰ)化合物。
式(Ⅰ)的某些化合物是已知的，它們還可以通過那些描述于J.A.C.S1979，101(21)，p6306-6310類似的方法制備，例如通過式(Ⅱ)化合物的環(huán)化作用制備
其中R21是R2或者可轉(zhuǎn)化成R2或可被R2替代的取代基，R31是R3或者可轉(zhuǎn)化成R3或可被R3替代的基團(tuán)，R11是R1或者可轉(zhuǎn)化成R1的基團(tuán)，其中R2、R3和R1定義如式(Ⅰ)，R81是有機(jī)基團(tuán)如苯基。
可轉(zhuǎn)化成R2的R21的例子包括-CH2OSiR3，它可轉(zhuǎn)化成-CH2OH和其它衍生物，或者是與苯基連接的可轉(zhuǎn)化成酸的酯。
當(dāng)式(Ⅰ)中的R2是氫時，式(Ⅱ)化合物(其中R21是氫)可以從相應(yīng)的化合物制得，其中相應(yīng)的化合物中的硫上的取代基是β-(烷氧羰基)乙烯基如β-(乙氧羰基)乙烯基或
R31可以是例如OR91，其中R91是羧酸保護(hù)基，可以通過常規(guī)方法將其去除，形成式(Ⅲ)的酸
進(jìn)一步的式(Ⅰ)化合物可以采用已知的酯-或酰胺形成反應(yīng)，由母核酸(Ⅲ)或其酰化衍生物制備，其中R21、R11和n定義如上述式(Ⅰ)和(Ⅱ)，尤其是其中的酸異構(gòu)富集于5S異構(gòu)體。作為純5S異構(gòu)體的該酸制劑，例如描述了Pfaendler J.A.C.S.opcit。
適當(dāng)?shù)孽；苌锇▽ΨQ或混合的酐。在酸結(jié)合劑例如叔胺(如吡啶或二甲基苯胺)、分子篩、無機(jī)堿(如碳酸鈣或碳酸氫鈉)或環(huán)氧乙烷(Oxirane)(它結(jié)合?；磻?yīng)中釋放的鹵化氫)存在條件下可以進(jìn)行?；磻?yīng)。環(huán)氧乙烷(Oxirane)優(yōu)選是(C1-6)-1，2-亞烷基氧化物-例如環(huán)氧乙烷或環(huán)氧丙烷。酰化反應(yīng)可以在-50℃至+50℃、優(yōu)選-20℃至+20℃范圍內(nèi)、于水或非水介質(zhì)如水、丙酮、四氫呋喃、乙酸乙酯、二甲基乙酰胺、二甲基甲酰胺、乙腈、二氯甲烷、1，2-二氯乙烷、或它們的混合物中進(jìn)行。該反應(yīng)還可以在水不混溶溶劑的不穩(wěn)定乳濁液中，特別是脂族酯或酮、如甲基異丁酮或乙酸丁酯中進(jìn)行。在堿性催化劑如吡啶或2，6-盧剔啶存在下，用酸酐適當(dāng)?shù)剡M(jìn)行酰化反應(yīng)。
適當(dāng)?shù)幕旌萧囚c例如碳酸單酯、三甲基乙酸、硫代乙酸、二苯基乙酸、苯甲酸、磷酸(如磷酸、亞磷酸、和次膦酸)或芳族或脂族磺酸(如對-甲苯磺酸或甲磺酸)。
酸(Ⅲ)的另外的?；苌锸酋；B氮、或活化酯如與2-巰基吡啶、氰基甲醇、對硝基苯酚、2，4-二硝基苯酚、苯硫酚、鹵代苯酚(包括五氯苯酚)、單甲氧基苯酚、N-羥基琥珀酰亞胺、N-羥基苯并三唑、或8-羥基喹啉的酯;或酰胺如N-?；蔷?，N-?；邕蛲?2-硫酮或N-酰基苯鄰二甲酰亞胺;或者是酸(Ⅲ)與肟反應(yīng)制備的亞烷基亞氨基酯。
酸(Ⅲ)的其它的反應(yīng)?；苌锇ㄔ谠幣c縮合劑如碳化二亞胺，例如N，N′-二乙基-、二丙基-或二異丙基碳化二亞胺，N，N′-二環(huán)己基碳化二亞胺，或N-乙基-N′-[3-(二甲氨基)丙基]碳化二亞胺;適當(dāng)?shù)聂驶衔?，例如N，N′-羰基二咪唑、或N，N′-羰基二-三唑;異噁唑啉鎓鹽(isoxazolinium salt)，例如N-乙基-5-苯基異噁唑啉鎓-3-磺酸鹽或N-叔-丁基-5-甲基異噁唑啉鎓高氯酸鹽;或者N-烷氧羰基-2-烷氧基-1，2-二氫喹啉，例如N-乙氧羰基-2-乙氧基-1，2-二氫喹啉反應(yīng)形成的活性中間產(chǎn)物。其它縮合劑包括路易斯酸(例如BBr3-C6H6);或磷酸縮合劑如二乙基磷?；杌??？s合反應(yīng)優(yōu)選在有機(jī)反應(yīng)介質(zhì)如二氯甲烷、二甲基甲酰胺、乙腈、乙醇、苯、二噁烷或四氫呋喃中進(jìn)行。
形成式(Ⅲ)酸的?；苌锏倪M(jìn)一步方法是用溶液或懸浮液處理該式(Ⅲ)酸，該溶液或懸浮液通過將羰基鹵化物、優(yōu)選草酰氯，或磷?；u化物如磷酰氯加入鹵代烴溶劑，優(yōu)選含有低級?；艴０?，優(yōu)選N，N-二甲基甲酰胺的二氯甲烷中制備。
酸(Ⅲ)或其?；苌锟梢院褪紿O-R3醇或式HNR52胺(其中R3和R5定義如前)發(fā)生反應(yīng)。由這些醇和胺形成酯和酰胺的方法在有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域中是眾所周知的。
這些醇的適當(dāng)?shù)睦影ㄆS醇、對-甲氧芐醇、2，2，2-三氯乙醇、甲醇、對-硝基苯酚、和羥基丙酮。
胺的適當(dāng)?shù)睦影ㄆS胺、N-甲基芐胺、吡咯烷、苯胺、二乙基胺、對-甲氧基芐胺、嗎啉、2-(甲氧羰基)乙胺、叔-丁胺和(3-吡啶甲基)胺。
通過酸(Ⅲ)的酰化衍生物與醇HO-R3在適當(dāng)?shù)娜軇┲蟹磻?yīng)可以形成酯。例如，式(Ⅰ)的酯可以通過式(Ⅲ)酸的金屬鹽(如鉀鹽，該鹽可以通過酸(Ⅲ)與金屬堿性化合物如碳酸鹽反應(yīng)制備)與鹵化物式X-R3(其中X是鹵化物基如碘)反應(yīng)制備。在室溫隋性溶劑中，通過游離酸與重氮基鏈烷烴或二苯基重氮基鏈烷烴反應(yīng)也可以形成酯。
在適當(dāng)?shù)娜軇┲?如果需要可含有酸結(jié)合劑如三乙胺或吡啶)，通過酸(Ⅲ)或N-?；苌锱c胺H-NR52反應(yīng)可以形成酰胺。合適的酸(Ⅲ)的N-酰化衍生物是一種混合酐，例如通過酸(Ⅲ)與氯甲酸乙酯在酸結(jié)合劑如三乙胺存在下、在有機(jī)溶劑如四氫呋喃中、在例如0至-20℃反應(yīng)形成的混合酐?？梢杂镁偷匦纬傻聂M(jìn)行酐與胺的反應(yīng)。
據(jù)信如上定義的某些式(Ⅰ)化合物是新的，并且在此意義上構(gòu)成本發(fā)明的另一方面。
尤其是按如上定義的式(Ⅰ)酰胺(其中當(dāng)R3是氨基或二-低級烷基氨基時，R2不是S-連接的有機(jī)基團(tuán))，據(jù)信是新的，并且在此意義上構(gòu)成本發(fā)明的另一方面。
本發(fā)明組合物包括適用于口服、局部或胃腸外使用的那些形式的組合物，這些組合物可用于治療哺乳動物包括人的細(xì)菌感染。
與其它抗菌素類似本發(fā)明化合物可以配制成以任何方便途徑施用于人或獸醫(yī)治療的制劑。
該組合物可配制成以任何途徑給藥的形式，所說的給藥途徑例如口服、局部或胃腸外、尤其是口服。該組合物可以是以下形式，片劑、膠囊、粉末、顆粒、錠劑、霜劑或液體制劑、如口服或無菌胃腸外溶液或懸浮液。
本發(fā)明的局部制劑可以是、例如油膏、霜劑或洗劑、眼膏和眼或耳滴劑，浸滲敷料和氣溶膠，并且可以含有適當(dāng)?shù)某Ｒ?guī)添加劑如防腐劑，有助藥物滲透的溶劑和油膏和霜劑中的潤滑劑。
制劑還可以含有可相容的常規(guī)載體，如霜劑或油膏基和用于洗劑的乙醇或油醇。這些載體在制劑中的含量可以從約1%至約98%。通常載體在制劑中的含量在約80%以下。
用于口服給藥的片劑和膠囊可制成單位劑量形式，并且含有常規(guī)的賦形劑如粘結(jié)劑、例如糖漿、阿拉伯膠、明膠、山梨醇、黃蓍膠或聚乙烯吡咯烷酮;填料，例如乳糖、糖、玉米淀粉、磷酸鈣、山梨醇或甘油;制片潤滑劑，例如硬脂酸鎂、滑石、聚乙二醇或二氧化硅;崩解劑，例如土豆淀粉;或者可接受的潤濕劑如十二烷基硫酸鈉?？梢园凑赵诔Ｒ?guī)制藥實(shí)踐中為人熟知的方法包衣該片劑?？诜褐苿┛梢允且韵滦问?，例如水或油懸浮液、溶液、乳劑、糖漿或酏劑，或者可以制成干產(chǎn)品而在使用前用水或其它適當(dāng)?shù)馁x形劑配制。這種液體制劑可以含有常規(guī)的添加劑如懸浮劑、如山梨醇、甲基纖維素、葡萄糖漿、明膠、羥乙基纖維素、羥甲基纖維素、硬脂酸鋁膠或氫化可食用脂肪、乳化劑，例如卵磷脂、脫水山梨醇-油酸酯、或阿拉伯膠;非水賦形劑(可以包括食用油)，例如杏仁油、油基酯如甘油、丙二醇、或乙醇;防腐劑，例如對羥基苯甲酸甲酯或丙酯，或者山梨酸，如果需要還含有常規(guī)調(diào)味劑或著色劑。
栓劑可以含有常規(guī)栓劑基質(zhì)，如可可脂或其它甘油酯。
為了胃腸外給藥，利用化合物和無菌賦形劑(優(yōu)選水)制備液體單位劑量形式。根據(jù)賦形劑和所采用的濃度，該化合物可以懸浮或溶解在賦形劑中。在制備溶液中，可將化合物溶解在注射用水中，并且在裝入合適的瓶或安瓿瓶封口前進(jìn)行無菌過濾。
更有益的是，可將例如局部麻醉劑、防腐劑和緩沖劑等制劑溶于該賦形劑。為了提高穩(wěn)定性，可以在裝入瓶子前冷卻該組合物并真空除去水。然后將該干的冷凍干燥粉末封入小瓶中，并且可以提供配套的小瓶注射用水以便在使用前配制注射液。除了將化合物懸浮在賦形劑中以代替溶解在賦形劑中和不能采用過濾滅菌之外，以基本相同的方法制備胃腸外懸浮液。在將化合物懸浮在無菌賦形劑之前，可以將化合物暴露于環(huán)氧乙烷滅菌。有益的是，將表面活性劑或潤濕劑包括在組合物中以利于化合物的均勻分布。
根據(jù)給藥方法，該組合物可以含有0.1%(重量)，優(yōu)選10%(重量)至60%(重量)的活性物質(zhì)。當(dāng)組合物包含劑量單位時，每個單位優(yōu)選含有50-500mg活性成份。根據(jù)給藥的途徑和次數(shù)，用于成人治療的劑量優(yōu)選每天100mg至5g。該劑量相當(dāng)于每天1.5至70mg/Kg。劑量在每天5至20mg/Kg更合適。
當(dāng)以上述劑量給藥式(Ⅰ)化合物或其可藥用鹽或者其可體內(nèi)水解的酯時，沒發(fā)現(xiàn)不能接受的毒性影響。
式(Ⅰ)化合物可以是本發(fā)明組合物中的唯一的治療劑，或者是與其它抗生素結(jié)合使用。
本發(fā)明化合物可潛在地用于抗廣譜微生物(包括革蘭陰性微生物如大腸桿菌和革蘭陽性微生物如S.aureus)的抗菌劑。
以下實(shí)施例說明本發(fā)明化合物及其中間體的制備。
實(shí)施例1 (5S)-青霉烯-3-羧酸芐酯1a (4S)-(順-β-甲酯基乙烯基巰基)氮雜環(huán)丁-2-酮
(ⅰ)在-10℃，向(-)順-β-甲酯基乙烯基異硫脲鎓氯鹽(32.1g，0.1mol)(通過Pfaendler H.R.等人(J.Amer.Chem.Soc.，101，1979，6306)方法制備)的乙醇(400ml)溶液中添加預(yù)冷的氫氧化鈉水溶液(200ml，1.0N，0.2mol)。將生成的含有(-)-順-β-甲酯基乙烯基硫醇的鈉鹽的懸浮液直接用于下步反應(yīng)。
(ⅱ)在-10℃下，將預(yù)冷的4-乙酰氧基氮雜環(huán)丁-2-酮(12.9g，0.1mol)的乙醇(200ml)溶液加入到上述(-)-順-β-甲酯基乙烯基硫醇鈉懸浮液中。在加入到上述(-)-順-β-甲酯基乙烯基硫醇鈉懸浮液中。在加入過程中溶液內(nèi)部溫度保持在-10℃。然后將反應(yīng)溶液在-10℃下攪拌30分鐘、5℃下攪拌15分鐘。加入二氯甲烷和飽和氯化鈉溶液，將有機(jī)溶液進(jìn)行分離、干燥(MgSO4)和蒸發(fā)。在硅膠上對殘余物進(jìn)行色譜，用乙酸乙酯-己烷混合物洗脫，得到白色半固體的氮雜環(huán)丁酮差向異構(gòu)混合物(26.1g)。將該半固體從二氯甲烷/正戊烷中重結(jié)晶，得到白色固體(0.902g)。將該白色固體再在二氯甲烷/正戊烷中重結(jié)晶三次，直到所得固體具有恒定熔點(diǎn)。由此獲得的產(chǎn)物是純的(4S)-(順-β-甲酯基乙烯基巰基)氮雜環(huán)丁-2-酮(0.66g)，m.p.130-131℃;[α]23D-79°(c 1.0，CHCl3)，δH(CDCl3)0.77(3H，d，J 7Hz)，0.90(6H，2xd，J 6.5和7Hz)，0.9-2.12(m，9H)，3.08(1H，ddd，J 15.5，2，1Hz)，3.52(1H，ddd，J 15.5，5，2Hz)，4.76(1H，dt，J 11和4.5Hz)，4.92(1H，dd，J 5和2.5Hz)，6.01(1H，d，J 10Hz)，6.28(1H，寬共振)，7.11(1H，d，J 10Hz)。
蒸發(fā)有機(jī)母液并從二氯甲烷/正戊烷中再次重結(jié)晶。對從二氯甲烷/正戊烷中所得固體重復(fù)進(jìn)行重結(jié)晶，又得到一定量的純(4S)-(順-β-甲酯基乙烯基巰基)氮雜環(huán)丁-2-酮(1.66g)，m.p.130℃;[α]23D-80℃(c 1.0，CHCl3)。
1b.[(4S)-(順-β-
酯基乙烯基巰基)-2-氧代氮雜環(huán)丁-1-基]三苯基正膦亞基乙酸芐酯
將乙醛酸芐酯-水合物(0.439g;2.415mM)溶于苯(100ml)中，對該溶液加熱回流1小時，同時除去水(Dean and Stark裝置)。然后將該溶液冷卻至室溫并加入(4S)-(順-β-
酯基乙烯基巰基)氮雜環(huán)丁-2-酮(0.500g;1.61mM)的干燥苯(10ml)溶液。加入三乙胺(4滴)，在室溫攪拌4小時。然后對該溶液進(jìn)行減壓蒸發(fā)，并從甲苯中共沸二次，產(chǎn)生非對映異構(gòu)羥基乙酸酯泡沫。
將該泡沫溶于干燥四氫呋喃(50ml)中并在氬氣氛下將其冷卻至-10℃。將2，6-盧剔啶(0.282ml)和亞硫酰(二)氯(0.177ml)加入并在-10℃持續(xù)攪拌15分鐘。然后過濾該溶液并蒸發(fā)濾液，得到非對映異構(gòu)氯代乙酸酯泡沫。
將該氯代乙酸酯溶于1，4-二噁烷(50ml)中，并向攪拌的溶液中加入三苯膦(1.68gm)。當(dāng)三苯膦全部溶解后，將該溶液蒸發(fā)至較小體積(約10ml)。加入2，6-盧剔啶(0.228ml)并在室溫攪拌該溶液16小時。然后將該溶液在乙酸乙酯和水之間分配。用5%檸檬酸溶液、飽和碳酸氫鈉溶液、鹽水洗滌該有機(jī)溶液，干燥(MgSO4)并蒸發(fā)。在硅膠上對殘余物進(jìn)行色譜，用乙酸乙酯-己烷混合物洗脫，得到純標(biāo)題正膦白色泡沫(0.740g)，νmax(CH2Cl2)1763，1700，1638，1582cm-1。
1c.(5S)-青霉烯羧酸芐酯
將[(4S)-(順-β-
酯基乙烯基巰基)-2-氧代氮雜環(huán)丁-1-基]三苯基正膦亞基乙酸芐酯(0.740g)溶于乙酸乙酯中并在氬氣流下冷卻至0℃。加入三氟乙酸(15ml)并將溶液在0℃攪拌15分鐘，隨后冷卻至-78℃。向溶液中通入臭氧2小時，t.l.c表明臭氧分解完全。用氬氣吹除過量的臭氧并加入三苯膦(0.315g)。加入飽和碳酸氫鈉并使溶液加熱至室溫。用飽和碳酸氫鈉、鹽水洗滌該有機(jī)溶液、干燥(MgSO4)并蒸發(fā)。將殘余物溶于二氯甲烷(20ml)并在室溫攪拌2小時，t.l.c表明環(huán)化形成雙環(huán)青霉烯已經(jīng)完成。對該溶液進(jìn)行減壓蒸發(fā)。殘余物在硅膠上進(jìn)行色譜。用乙酸乙酯-己烷混合物洗脫，得到混有乙醛酸
酯的標(biāo)題化合物(0.183g)。在硅膠上對該不純產(chǎn)物再次進(jìn)行色譜，用0%、1%和2%乙醇的二氯甲烷洗脫，得到純的標(biāo)題化合物白色結(jié)晶固體(0.051g)，m.p.(EtOAc-己烷)136-140℃;[α]23D-206°(c 1.0，CH2Cl2);νmax(CH2Cl2)1800，1720，1562cm-1;δH(CDCl3)3.59(1H，dt，J 16.5，1.5Hz)，3.86(1H，ddd，J 16.5，4，1Hz)，5.22(1H，d，J 12.5Hz)和5.28(1H，d，J 12.5Hz)(全部ABq)，5.80(1H，dd，J 4，2Hz)，7.2-7.45(6H，m)(實(shí)測值C，59.65;H，4.15;N，5.4;S，12.15%;M+，261.0464.C13H11NO3S要求C，59.75;H，4.25;N，5.35;S，12.25%;M，261.0460)。
實(shí)施例2 (5RS)-青霉烯-3-羧酸甲酯在10%鈀碳催化劑(30mg)存在條件下，于大氣壓將(5RS)-青霉烯-3-羧酸4-硝基芐酯[U.K.Pat.Appl.2，036，015(Beecham Group)](30mg)的二噁烷(5ml)和水(1.25ml)的溶液氫化2小時。產(chǎn)物經(jīng)硅藻土過濾并將碳酸鉀(8mg)的水(5ml)溶液加入濾液。0.25小時后，對溶液進(jìn)行減壓蒸發(fā)直至剛好混濁，然后用乙酸乙酯洗滌二次。對剩余的水溶液進(jìn)行冷凍干燥，得到粗鉀鹽。在干燥的二甲基甲酰胺(1ml)中攪拌該鹽并加入碘代甲烷(28mg、12μl)。在氬氣氛下、于室溫攪拌該混合物3小時，然后減壓蒸發(fā)。將殘余物在乙酸乙酯和鹽水之間分配;分離有機(jī)相，用鹽水洗滌，干燥并蒸發(fā)。用乙酸乙酯/己烷1∶1作為溶液，在硅膠60上進(jìn)行色譜，純化該殘余物，得到一種膠，該膠從乙酸乙酯/己烷中結(jié)晶得到甲酯(7mg);m.p.91-93℃;νmax(CHCl3)2970，1800，1720和1565cm-1;δH(CDCl3)3.58(1H，d，J 17.0Hz具有細(xì)分離峰，6-H)，5.80(1H，dd，J 3.9 & 1.9Hz，5-H)，和7.27(1H，s，2-H);M+(EI)，m/z185。
實(shí)施例3 (5R)-青霉烯-3-羧酸芐酯通過M.Ohtani等人(J.Org.Chem.，1984，49，5271)中描述的方法，將(5R)-青霉烯-3-羧酸對甲氧芐酯轉(zhuǎn)化成(5R)-青霉烯-3-羧酸鈉鹽。然后將其溶解在干燥的N，N-二甲基甲酰胺中并在室溫與芐基溴(2當(dāng)量)一起攪拌2小時。用乙酸乙酯稀釋該溶液，并用水、鹽水洗滌、干燥(MgSO4)和蒸發(fā)。在硅膠上對殘余物進(jìn)行色譜，用10-50%乙酸乙酯和己烷梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物白色固體，[α]23D+201°(C 1.0，CH2Cl2)(ZA8504947，1986，Merck)。
實(shí)施例4 (5RS)-青霉烯-3-羧酸芐酯按照GB2，036，015(1980)的方法制備該化合物，得到標(biāo)題化合物m.p.118-119℃λmax(EtOH)260和319nm;νmax(CHCl3)1795，1715cm-1δH(CDCl3)3.49(1H，ddd，J 16，2和2Hz)，3.83(1H，dd，J 16和4Hz)，5.23(2H，s)，5.74(1H，dd，J 4和2Hz)，7.24(1H，dd，J 2Hz)，7.35(5H，s)(實(shí)測值C，59.6;H，4.1;N，5.2;S，12.3%.C13H11NO3S要求C，59.7;H，4.2;N，5.4;S，12.3%)。
實(shí)施例5 (5RS)-青霉烯-3-羧酸對硝基芐酯按照GB2，036，015(1980)的方法制備，得到標(biāo)題化合物mp 160-165°，λmax(EtOH)319nm;νmax(CHCl3)1800，1715cm-1;δH(CDCl3)3.57(1H，ddd，J＝17，2，1Hz)，3.95(1H，ddd，J＝17.4，2Hz)，5.22和5.45(2H，ABq，J＝14Hz)，5.81(1H，dd，J 4，2Hz)，7.35(1H，d，J 1Hz)，7.57(2H，d，J＝9Hz)和8.23(2H，d，J＝9Hz)(實(shí)測值C，51.0;H，3.3;N，9.1;S，10.3%，C13H10N2O5S要求C，50.98;H，3.27;N，9.15;S，10.45%)。
實(shí)施例6 (5RS)-青霉烯-3-羧酸對甲氧芐酯按照實(shí)施例2的方法，用對甲氧芐基溴進(jìn)行制備，得到標(biāo)題化合物νmax(CHCl3)1798，1715cm-1;δH(CDCl3)3.55(1H，dt)，3.75-3.95(4H，s+m)，5.18(2H，ABq)，5.78(1H，dd，J 1.85，4.0Hz)，6.90(2H，d，J 8.7Hz)，7.25(1H，s)，7.33(2H，d，J 8.7Hz)(實(shí)測值M+291.0571;C14H13NO4S要求391.0565)。
實(shí)施例7 (5R)-青霉烯-3-羧酸對甲氧芐酯將(5R，6S)-6-溴代青霉烯-3-羧酸對甲氧芐酯(J.C.S.Chem.Commun.，1989，p.371)(2.0g)溶于乙腈(80ml)中，并在室溫與鋅粉(1.4g)和1M乙酸銨溶液一起攪拌30分鐘。得到的懸浮液經(jīng)硅藻土過濾、用乙酸乙酯稀釋并用碳酸氫鈉溶液、鹽水洗滌、干燥(MgSO4)和蒸發(fā)。在硅膠上對殘余物進(jìn)行色譜，用20→50%EtOAc/己烷梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物淺黃色固體(0.50g)，[α]23D+169°(c 1.0，CHCl3)。
實(shí)施例8 (5RS)-青霉烯-3-羧酸三氯乙酯按照與實(shí)施例4相類似的方法進(jìn)行制備，得到標(biāo)題化合物mp119-121°，λmax(EtOH)322;νmax(CHCl3)1800，1730cm-1;δH(CDCl3)3.53(1H，ddd，J 16，2和1Hz)，3.89(1H，dd，J 16和4Hz)，4.74和4.89(2H，ABq，J 12Hz)，5.31(1H，dd，J 4和2Hz)，7.42(1H，d，J 1Hz).(實(shí)測值C，32.3;H，2.0;N，4.9;S，10.6%.C8H6NO3SCl3要求C，31.7;H，2.0;N，4.6;S，10.6%)。
實(shí)施例9 (5RS)-2-(羥甲基)青霉烯-3-羧酸對硝基芐酯按照GB2，037，277B所述方法進(jìn)行制備，得到標(biāo)題化合物m.p.137-9°，λmax(EtOH)265和322nm;νmax(CHCl3)3600-3010，1795，1705cm-1;δH(CDCl3)3.11-3.40(1H，bs，exch D2O)，3.51(1H，dd，J＝2，16Hz)，3.84(1H，dd，J＝4，16Hz)4.67(2H，bs)，5.22和5.47(2H，ABq，J＝14Hz)，5.67(1H，dd，J＝2，4Hz)，7.20(2H，d，J＝8Hz)，8.20(2H，d，J＝8Hz).(實(shí)測值C，50.21;H，3.43;N，8.26;S，9.52%;C14H12N2O6S要求C，50.0;H，3.60;N，8.33;S，9.53%)。
實(shí)施例10 (5RS)-青霉烯-3-羧酸烯丙酯將[(4RS)-三苯甲基硫-2-氧代氮雜環(huán)丁-1-基]三苯基正膦亞基乙酸烯丙酯(0.500g;0.711mM)溶于干燥的乙腈(25ml)中。向攪拌著的溶液中加入4-二甲氨基吡啶(0.104g)和硝酸銀(0.185g)乙腈溶液。在室溫攪拌該溶液1小時。然后將溶液冷卻至5℃，并快速連續(xù)地加入4-二甲氨基吡啶(0.087g)、碘化鈉(1.066g)、隨后是乙酸甲酸酐(0.57ml)。除去冷卻浴并將溶液在室溫攪拌30分鐘。然后將反應(yīng)溶液在乙酸乙酯和水之間分配。用1N HCl、水、飽和碳酸氫鈉溶液、鹽水洗滌該有機(jī)溶液、干燥(MgSO4)并減壓蒸發(fā)。在硅膠上對粗產(chǎn)物進(jìn)行色譜。用10-25%乙酸乙酯/己烷進(jìn)行梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物淺黃色油(0.090g)，vmax(CH2Cl2)1800，1720cm-1;δH(CDCl3)3.58(1H，dt，J 16.6，1.5Hz)，3.88(ddd，J 16.5，4.0，0.7Hz)，4.72(2H，m)，5.2-5.5(2H，m)，5.70(1H，dd，J 2，4Hz)，5.85-6.10(1H，m)，7.30(1H，d，1Hz)，m/e 211.0300(C9H9NO3S要求M，211.0303)。
實(shí)施例11 (5S)-青霉烯-3-羧酸對硝基芐酯11a[(4S)-順-β-
酯基乙烯基巰基)-2-氧代氮雜環(huán)丁-1-基]-三苯基正膦亞基乙酸對硝基芐酯通過實(shí)施例1b的方法，讓乙醛酸對硝基芐酯-水合物與(4S)-(順-β-酯基乙烯基巰基)氮雜環(huán)丁酮反應(yīng)，得到標(biāo)題正膦泡沫，νmax(CH2Cl2)1762，1698，1638，1618，1581cm-1。
11b(5S)-青霉烯-3-羧酸對硝基芐酯通過實(shí)施例1c的方法，對實(shí)施例11a的正膦進(jìn)行臭氧分解，由乙酸乙酯/己烷中得到標(biāo)題化合物白色結(jié)晶固體，[α]23D-151°(C 1.0，CH2Cl2);νmax(CH2Cl2)1800，1722，1610cm-1;δH(CDCl3)3.62(1H，dt，J 16.5和1Hz)和3.90(1H，dd，J 16.5和4Hz)，5.27(1H，d，J 13.5Hz)和5.41(1H，d，J 13.5Hz)，5.83(1H，dd，J 2和4Hz)，7.38(1H，s)，7.60(2H，d，J 8.7Hz)，8.23(2H，d，J 8.7Hz);λmax(EtOH)316(ε7，300)，263nm(ε10，021);m/e 306.0310(C13H10N2O5S要求M，306.0310)。
實(shí)施例12 (5S)-青霉烯-3-羧酸甲酯12a(5S)-青霉烯-3-羧酸將(5S)-青霉烯-3-羧酸對硝基芐酯(0.250g;0.817mM)溶于30%1，4-二噁烷水溶液(50ml)中，并在室溫、氫氣壓下，有10%鈀碳催化劑(0.375g)存在條件下?lián)u動1小時。在添加碳酸氫鈉(0.076g)的水(2ml)溶液后，經(jīng)硅藻土對反應(yīng)懸浮液進(jìn)行過濾，用水充分洗滌。將濾液蒸發(fā)至小體積并在乙酸乙酯和水之間分配。分離水層，蒸發(fā)到較小體積并施加到Diaion HP 20-SS柱上，用水洗脫。將含有標(biāo)題酸鈉鹽的那些部分合并，然后冷凍干燥得到淺黃色固體。
12b (5S)-青霉烯-3-羧酸甲酯將實(shí)施例12a的鈉鹽懸浮在干燥的二甲基甲酰胺(5ml)中，并在室溫與甲基碘(0.5ml)一起攪拌14小時。減壓蒸發(fā)掉溶劑并將殘余物在乙酸乙酯和水之間分配。用鹽水洗滌有機(jī)溶液、干燥(MgSO4)并蒸發(fā)。在硅膠上對殘余物進(jìn)行色譜，用10-50%乙酸乙酯/己烷梯度洗脫，得到標(biāo)題酯白色固體，λmax(EtOH)315(ε7081)，225nm(ε2651);νmax(CH2Cl2)1800，1728，1568cm-1;δH(CDCl3)3.59(1H，d，J 16.5Hz)，3.8-3.95(4H，重疊s+dd)，5.80(1H，dd，J 1.7和3.8Hz)，7.28(1H，s)，m/e+185.0147(C7H7NO3S要求M，185.0147)。
實(shí)施例13 (5RS)-青霉-2-烯-3-羧酸4-(甲氧羰基)芐酯以40%的產(chǎn)率、按照實(shí)施例2的方法用4-(溴乙基)苯甲酸甲酯制備該酯;m.p.135-7℃(乙酸乙酯/己烷);νmax(CHCl3)2960，1800，1725sh，1715和1615cm-1;δH(CHCl3)3.60(1H，dt，J 16.6 & 1.6Hz，6-H)，3.87(1H，d，J 16.6 & 4.0Hz，6-H)，3.92(3H，s，OCH3)，5.25和5.35(2H，ABq，J 13.1Hz，OCH2Ar)，5.81(1H，dd，J 4.0和1.6Hz，5-H)，7.32(1H，s，2-H)，7.47(2H，d，J 8.2Hz，Ar-H)和8.04(2H，d，J 8.2Hz，Ar-H);(實(shí)測值C，56.3;H，4.0;N，4.5%.C15H13NO5S要求C，56.4;H，4.1;N，4.4%)。
實(shí)施例14 (5RS)-青霉-2-烯-3-羧酸 4-[(4-硝基芐基)氧基羰基]芐酯以53%的產(chǎn)率，按照實(shí)施例2的方法由4-(溴乙基)苯甲酸4-硝基芐酯制備青霉烯酯;m.p.132-5℃(乙酸乙酯/己烷);νmax(CHCl3)1800，1720，1610，1560和1525cm-1;δH(CDCl3)3.60(1H，dt，J 16.6 & 1.6Hz，6-H)，3.87(1H，ddd，J 16.6，3.9 & 0.7Hz，6-H)，5.26和5.37(2H，ABq，J 13.2Hz，OCH2Ar)，5.46(2H，s，OCH2Ar)，5.81(1H，d，J 3.9 & 1.6Hz，5-H)，7.33(1H，s，2-H)，7.50(2H，d，J 8.3Hz，Ar-H)，7.60(2H，d，J 8.7Hz，Ar-H)，8.09(2H，d，J 8.3Hz，Ar-H)和8.26(2H，d，J 8.7Hz，Ar-H);(實(shí)測值C，57.6;H，3.8，N，6.2%.C21H16N2O7S要求C，57.3;H，3.7;N，6.4%)。
實(shí)施例15 4-[[(5RS)-青霉-2-烯-3-羰基]氧甲基]苯甲酸鈉在10%鈀-碳催化劑(33mg)存在條件下，將(5RS)-青霉-2-烯-3-羧酸4-[(4-硝基芐基)氧基羰基]芐酯(33mg)的二噁烷(10ml)和水(2.5ml)溶液在大氣壓力下氫化3小時。反應(yīng)混合物經(jīng)硅藻土過濾，并將碳酸鈉(4.0mg)的水(5ml)溶液加入濾液中。0.5小時后，蒸發(fā)該溶液直至剛好變混濁，然后用乙酸乙酯洗滌。將水溶液冷凍干燥，得到標(biāo)題鈉鹽淺黃色固體(16mg;65%);νmax(KBr)3400，1786，1709和1597cm-1;δH(D2O)3.62(1H，brd，J 17.1Hz，6-H)，3.87(1H，dd，J 17.1 & 3.8Hz，6-H)，5.27(2H，s，OCH2Ar)，5.82(1H，dd，J 3.8 & 1.7Hz，5-H)，7.45(2H，d，J 8.1Hz，Ar-H)，7.62(1H，s，2-H)和7.83(2H，d，J 8.1Hz，Ar-H)。
實(shí)施例16 (5RS)-青霉-2-烯-3-羧酸正戊酯在有10%鈀-碳催化劑(50mg)存在條件下，將(5RS)-青霉烯-3-羧酸4-硝基芐酯(50mg)的二噁烷(10ml)和水(2.5ml)溶液在大氣壓下氫化2小時。產(chǎn)物經(jīng)硅藻土過濾并將碳酸鉀(14mg)的水(5ml)溶液加入該濾液。0.25小時后對該溶液進(jìn)行減壓蒸發(fā)直至剛好混濁，然后用乙酸乙酯洗滌兩次。用氯化鈉使該鉀鹽水溶液飽和，然后與乙酸乙酯/四氫呋喃1∶1(20ml)一起劇烈攪拌。用0.5N鹽酸將該混合物酸化至pH2.0，分離有機(jī)相、干燥并蒸發(fā)。在室溫、氬氣氛下，在干燥的二甲基甲酰胺(1ml)中攪拌該粗酸，并用1-碘代戊烷(48mg)和氟化銫(37mg)處理。18小時后，蒸發(fā)該混合物，殘余物在乙酸乙酯和稀碳酸氫鈉水溶液之間分配。分離有機(jī)相，用鹽水洗滌，然后在硫酸鈉上干燥并蒸發(fā)。用乙酸乙酯/己烷(4∶6)作為洗脫液，在硅膠60上對殘余物進(jìn)行色譜，得到戊酯膠(10mg);νmax(CHCl3)2980，2950，2880，1800，1715和1560cm-1;δH(CDCl3)，0.91(3H，t，J 7.0Hz，CH3)，1.29-1.43(4H，m，CH2′s)，1.69(2H，pent，J 7.0Hz，OCH2CH2)，3-57(1H，dd，J 16.5 & 1.9Hz)，6-H)，3-85(1H，dd，J 16.5 & 3.9Hz，6-H)，4.12-4.29(2H，m，OCH2)，5.79(1H，dd，J 3.9 & 1.9Hz，5-H)和7.24(1H，s，2-H);[實(shí)測值M+，241(EI).C11H15NO3S要求M，241]。
實(shí)施例17(5RS)-青霉-2-烯-3-羧酸4-苯基丁酯以24%產(chǎn)率，按照實(shí)施例16的方法，由碘丁基苯制備標(biāo)題青霉烯酯;νmax(CHCl3)2930，2860，1800，1710和1560cm-1;δH;(CDCl3)1.67-1.80(4H，m，OCH2CH2CH2)，2.60-2.70(2H，m，CH2Ar)，3.57(1H，dt，J 16-6 & 1.7Hz，6-H)，3-85(1H，dd，J 16.6 & 3-9Hz，6-H)，4.14-4.30(2H，m，OCH2)5.78(1H，dd，J 3-9 & 1.7Hz，5-H)，和7.15-7.34(6H，m，2-H和Ar-H′S)[實(shí)測值M+，303(EI).C16H17NO3S要求M，303]。
實(shí)施例18 (5RS)-青霉-2-烯-3-羧酸3-(甲酯基)芐酯在有10%鈀-碳催化劑(50mg)存在下，將(5RS)-青霉烯-3-羧酸4-硝基芐酯(50mg)的二噁烷(10ml)和水(2.5ml)溶液在大氣壓下氫化2小時。產(chǎn)物經(jīng)硅藻土過濾，并向濾液中加入碳酸鉀(14mg)和水(5ml)溶液。0.25小時后，減壓蒸發(fā)該溶液直至剛好混濁，然后用乙酸乙酯洗滌兩次。用氯化鈉使該鉀鹽溶液飽和，然后與乙酸乙酯/四氫呋喃1∶1(20ml)一起劇烈攪拌。用0.5N鹽酸將混合物酸化至pH2.0并分離有機(jī)相。干燥和蒸發(fā)。用3-(溴甲基)苯甲酸甲酯(45mg)和粉末狀碳酸鉀(14mg)處理該粗酸的干燥DMF(1ml)溶液。在氬氣氛下、室溫、攪拌該反應(yīng)混合物18小時，然后蒸發(fā)。殘余物在乙酸乙酯和鹽水之間分配;分離有機(jī)相，然后用鹽水洗滌、在硫酸鈉上干燥。蒸發(fā)該溶液，并用乙酸乙酯/己烷(4∶6)作為洗脫液在硅膠60上對殘余物進(jìn)行色譜，得到青霉烯酯(25mg);m.p.100-2℃(乙酸乙酯/己烷);νmax(CHCl3)2960，1800，1725和1560cm-1;δH(CDCl3)3.59(1H，dt，J 16.6 & 1.9Hz，6-H)，3.86(1H，dd，J 16.6 & 3.9Hz，6-H)，3.93(3H，s，OCH3)，5.25和5.33(2H，ABq，J 12.6Hz，OCH2)，5.80(1H，dd，J 3.9 & 1.9Hz，5-H)，7.30(1H，s，2H)，7.46(1H，t，J 7.7Hz，Ar5′-H，7.62(1H，s，J 7.7Hz，Ar6′-H)，8.01(1H，d，J 7.7Hz，Ar4′-H)和8.07(1H，s，Ar2′-H)(實(shí)測值C，56.9;H，4.0;N，4.6%.C15H13NO5S要求C，56.4;H，4.1;N，4.4%)。
實(shí)施例19(5RS)青霉-2-烯-3-羧酸2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯以16%產(chǎn)率、采用實(shí)施例18的方法，由1-碘-2-(2-甲氧基乙氧基)乙烷制備青霉烯酯膠;δH(CDCl3)3.39(3H，s，OCH3)，3.53-3.69(5H，m，6-H和OCH2CH20Me)，3.76(2H，t，J 4.9Hz，CO2CH2CH2O)，3.85(1H，dd，J 16.5 & 3.9Hz，6-H)，4.35和4.41(2H，2dt，J 12.0 & 4.9Hz，CO2CH2)，5.79(1H，dd，J 3.9 & 1.9Hz，5-H)和7.30(1H，s，2-H);[實(shí)測值M+，273(EI).C11H15NO5S要求M，273]。
實(shí)施例20 (5RS)青霉-2-烯-3-羧酸4-溴芐酯以54%產(chǎn)率，采用實(shí)施例18的方法，由4-溴代-1-(溴甲基)苯制備青霉烯酯;m.p.108℃(乙酸乙酯/己烷);νmax(CHCl3)1800，1720和1565cm-1;δH(CDCl3)3.58(1H，dt，J 16.6 & 1.8Hz，6-H)，3.86(1H，ddd，J 16.6，4.0，0.6Hz，6-H)，5.15和5.24(2H，ABq，J 12.6Hz，CH2Ar)，5.79(1H，dd，J 4.0 & 1.8Hz，5-H)，7.28(2H，d，J 8.2Hz，Ar-H)，7.29(1H，s，2-H)和7.50(2H，d，J 8.2Hz，Ar-H);(實(shí)測值C，45.8;H，2.8;N，4.2%.C13H10BrNO3S要求C，45.9;H，3.0;N，4.1%)。
實(shí)施例21 (5RS)-青霉-2-烯-3-羧酸(7-甲氧基-2-氧代-2H-1-苯并吡喃-4-基)甲酯采用實(shí)施例18的方法，由4-(溴甲基)-7-甲氧基香豆素制備青霉烯酯，產(chǎn)率51%;m.p.170-2℃;νmax(KBr)1786，1723，1710，1614，1560和1510cm-1;δH[(CD3)2SO/C5D5N1∶1]3.75(1H，brd，J 16.8Hz，6-H)，3.91(3H，s，OCH3)，4.08(1H，dd J 16.8 & 4.0Hz，6-H)，5.58和5.74(2H，2dd，J16.0 & 1.3Hz，CH2Ar)，5.99(1H，dd，J 4.0 & 1.8，5-H)，6.44(1H，s，2-H)，7.01-7-12(2H，m，6′-H & 8′-H)，7.77(1H，d，J 8.8Hz，5′-H)和8.08(1H，s，3′-H);[實(shí)測值MH+，360(NH3DCl).C17H13NO6S要求M，359]。
實(shí)施例22(5RS)-青霉-2-烯-3-羧酸甲氧基甲酯采用實(shí)施例18的方法，由氯甲基甲醚制備青霉烯甲氧基甲酯，產(chǎn)率36%;m.p.109-110℃(乙酸乙酯/己烷);νmax(CHCl3)2970，1800，1720和1560cm-1;δH(CDCl3)3.52(3H，s，OCH3)3.62(1H，dt，J 16.6 & 1.9Hz，6-H)，3.87(1H，dd，J 16.6 & 3.9Hz，6-H)，5.30和5.44(2H，ABq，J 5.9Hz，OCH2O)，5.81(1H，dd，J 3.9 & 1.9Hz，5-H)和7.35(1H，s，2-H);(實(shí)測值C，44.8;H，4.0;N，6.5%;M+，215.C8H9NO4S要求C，44.7;H，4.2;N，6.5;M，215)。
實(shí)施例23 (5S)-青霉-2-烯-3-羧酸甲氧基甲酯按照以下條件，對實(shí)施例22所述的外消旋甲氧基甲酯在手性固定相進(jìn)行制備h.p.l.c.柱Chiralpak AD-20mm流定相乙醇/己烷35∶65流量6毫升/分鐘溫度室溫監(jiān)測UV220nm樣品制備3mgml-1乙醇的1ml注射液從柱上洗脫的第二個對映體是所需要的(5S)-青霉烯;25D-258。
實(shí)施例24 (5RS)-6-(1-乙酰氧乙基)青霉烯-3-羧酸烯丙酯24a.[3-(1-羥乙基)-4-三苯甲基硫-2-氧代氮雜環(huán)丁-1-基]三苯基正膦亞基-乙酸烯丙酯
將[(4RS)-三苯甲基硫-2-氧代氮雜環(huán)丁-1-基]三苯基正膦亞基-乙酸烯丙酯(3.0g;4.27mM)溶于干燥的四氫呋喃(75ml)并且在氬氣氛下冷卻至-78℃。加入二異丙基氨基鋰溶液(5.34ml 2.0M在庚烷/四氫呋喃/乙基苯中的溶液)并將該溶液在-78℃攪拌30分鐘。然后加入乙醛(1.2ml)的四氫呋喃溶液，并且在加入冰醋酸(2ml)使反應(yīng)淬火之前在-78℃持續(xù)再攪拌30分鐘。反應(yīng)溶液在乙酸乙酯和水之間分配并升至室溫。用1N鹽酸溶液、水、飽和碳酸氫鈉溶液、水、鹽水洗滌該有機(jī)溶液，干燥(MgSO4)并減壓蒸發(fā)。在硅膠上對殘余物進(jìn)行色譜，用10-75%乙酸乙酯-己烷梯度洗脫，得到標(biāo)題正膦的非對映異構(gòu)體混合物淺黃色泡沫(2.44g)，νmax(CH2Cl2)1755，1622cm-1;m/e(氨氣DCI)748(MH+)。
24b[3-(1-乙酰氧乙基)-4-三苯甲基硫-2-氧代氮雜環(huán)丁-1-基]三苯基正膦亞基-乙酸烯丙酯
將實(shí)施例24a.(2.44g)的醇的非對映異構(gòu)體混合物溶于干燥的二氯甲烷(200ml)，并在室溫與三乙胺(1.32ml)，乙酸酐(0.96ml)和4-二甲氨基吡啶(0.25g)一起攪拌16小時。然后用1N鹽酸溶液、水、飽和碳酸氫鈉溶液、鹽水洗滌有機(jī)溶液、干燥(MgSO4)并蒸發(fā)。在硅膠上對殘余物進(jìn)行色譜，用乙酸乙酯-己烷混合物洗脫，得到非對映異構(gòu)的標(biāo)題正膦白色泡沫(1.48g)νmax(CH2Cl2)1755，1740，1620cm-1。
24c.(5RS)-6-(1-乙酰氧乙基)青霉烯-3-羧酸烯丙酯
將實(shí)施例24b的非對映異構(gòu)體正膦(0.750g;0.95mM)溶于干燥乙腈(25ml)中，并在室溫與4-二甲氨基吡啶(0.139g)和硝酸銀(0.363g)的乙腈溶液一起攪拌2小時。然后加入乙酸甲酸酐(0.8ml)、4-二甲氨基吡啶(0.118g)和碘化鈉(1.42g)并在室溫連續(xù)攪拌1小時。將反應(yīng)溶液在乙酸乙酯和水之間分配。用飽和碳酸氫鈉溶液、水、鹽水洗滌有機(jī)層，并干燥(MgSO4)。在進(jìn)行減壓蒸發(fā)之前，讓溶液在室溫保持30分鐘。在硅膠(25g)上對殘余物進(jìn)行色譜，用10-50%乙酸乙酯-己烷梯度洗脫。
第一洗脫成分為標(biāo)題化合物的單一的純異構(gòu)體(異構(gòu)體A)無色膠(0.010g)，νmax(CH2Cl2)1800，1748，1725cm-1;δH(CDCl3)1.53(3H，d J 6Hz)，2.07(3H，s)，4.07(1H，ddd，J 0.7，3.8 10.3Hz)，4.6-4.8(2H，m)，5.2-5.45(3H，m)，5.84(1H，d，J 4.0Hz)，5.85-6.05(1H，m)，7.31(1H，d，0.8Hz)。
第二洗脫成分也是標(biāo)題青霉烯純異構(gòu)體(異構(gòu)體B)(0.041g)，νmax(CH2Cl2)1801，1748，1728cm-1;δH(CDCl3)1.45(3H，d，J 6.5Hz)，2.12(3H，s)，4.03(1H，重疊ddd，J 1，2，4.5Hz)，4.6-4.85(2H，m)，5.2-5.45(2H，m)，5.62(1H，d，J 2Hz)，5.88-6.06(1H，m)，7.24(1H，d，J 1Hz)。
連續(xù)洗脫得到異構(gòu)體混合物(0.039g)，然后得到標(biāo)題青霉烯的第三個純異構(gòu)體(異構(gòu)體C)(0.056g)，νmax(CH2Cl2)1802，1748，1722cm-1;δH(CDCl3)1.37(3H，d，J 6.3Hz)，2.09(3H，s)，4.08(1H，dd J 4.4，7.8Hz)，4.6-4.82(2H，m)，5.25-5.58(3H，m)，5.82(1H，d，J 4.4Hz)，5.88-6.05(1H，m)，7.28(1H，d，J 0.7Hz)。
實(shí)施例25 (5RS，6RS)-6-[(SR)-1-乙酰氧乙基]-2-(2-羥乙基硫)青霉烯-3-羧酸對硝基芐酯在氬氣氛下將[3-(1SR-乙酰氧乙基-4-(2-羥乙基三硫羰基)-2-氧代氮雜環(huán)丁-1-基]三苯基正膦亞基乙酸對硝基芐酯(4.47g)[按照EPO，041，768(16、12、81)所述方法制備]的二甲苯(1L)溶液加熱回流5.5小時。將反應(yīng)混合物蒸發(fā)至干并在硅膠上進(jìn)行色譜二次，用乙酸乙酯/二氯甲烷(1∶9)和乙醚/乙酸乙酯(9∶1)洗脫，得到標(biāo)題化合物(297mg)，mp151-152℃，λmax(EtOH)260nm，333nm;νmax(CHCl3)1795，1730，1690cm-1;δH(CDCl3)1.55(3H，d，J 6Hz)，2.08(3H，s)，2.14(1H，br s)，3.11-3.32(2H，m)，3.85-3.95(2H，m)，4.03(1H，dd，J 4.0和9.8Hz)，5.22和5.47(2H，ABq，J 13Hz)，5.19-5.31(1H，m)，5.76(1H，d，J 4Hz)，7.61(2H，d，J 9Hz)，8.23(2H，d J 9Hz)(實(shí)測值M+468.0647，C19H20N2O8S2要求M，468.0657)。
實(shí)施例26 (5RS)-2-苯基青霉烯-3-羧酸甲酯26a(4RS)-苯甲酰硫氮雜環(huán)丁-2-酮將硫代苯甲酸(1.52g，11mM)溶于二氯甲烷(30ml)中并將溶液冷卻至-10℃。將氫氧化鈉(0.44g，11mM)溶于水(30ml)中并加至上述冷卻的溶液中。5分鐘后，將4-乙酰氧基氮雜環(huán)丁-2-酮(1.29g，10mM)的二氯甲烷(20ml)懸浮液加至冷卻的反應(yīng)混合物中，然后將其加熱至室溫并攪拌16小時。用5M鹽酸將反應(yīng)混合物酸化至pH3并分離二氯甲烷層。用二氯甲烷(3×50ml)萃取水層，并與有機(jī)層合并，用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌，然后在無水硫酸鎂上進(jìn)行干燥。過濾該二氯甲烷溶液并蒸發(fā)，得到淺黃色固體，在硅膠60上通過柱色譜純化該固體，用乙酸乙酯己烷混合物(1∶1)洗脫。分離出標(biāo)題化合物白色固體(1.54g)。νmax(CH2Cl2)1758，1670，cm-1;δH(CDCl3)7.93(2H，m，Ar)，7.63(1H，m，Ar)，7.50(2H，m，Ar)，6.55(1H，br s，N-H)，5.41(1H，dd，J 5.3，2.5Hz，4-H)，3.55(1H，ddd，J 15.2，5.2，2Hz，3-H)和3.11(1H，ddd，J 15.3，3，2.5Hz，3-H);MS(EI)m/z207。
26b(4RS)-苯甲酰硫-1-(1-羥基-1-甲酯基甲基)-氮雜環(huán)丁-2-酮將乙醛酸甲酯(1.76g，16mM)溶于干燥的苯(80ml)中并回流同時共沸除水1小時。使溶液冷卻至室溫并加入4-苯甲酰硫-氮雜環(huán)丁-2-酮(1.0g，4.8mM)，隨后加入3滴三乙胺。將反應(yīng)混合物攪拌1小時，然后蒸發(fā)，溶于甲苯(15ml)，過濾除去三乙胺鹽酸鹽并再次蒸發(fā)，得到標(biāo)題化合物(1∶1差向異構(gòu)體混合物)，該產(chǎn)物不需純化就可以在下一個步驟中使用。
26c(4RS)-苯甲酰硫-1-(1-氯-1-甲酯基甲基)-氮雜環(huán)丁-2-酮將4-苯甲酰硫-1-(1-羥基-1-甲酯基甲基)氮雜環(huán)丁-2-酮差向異構(gòu)體粗混合物(1∶1)(4.8mM)溶于干燥的四氫呋喃(50ml)中，并將溶液冷卻至-10℃，加入2，6-盧剔啶(0.84ml)，隨后加入亞硫酰氯(0.52ml)。立即產(chǎn)生白色沉淀并在-10℃攪拌1小時。對反應(yīng)混合物進(jìn)行過濾，除去盧剔啶鹽酸鹽，然后蒸發(fā)溶劑，剩下黃色油，從甲苯(2×10ml)中再蒸發(fā)該黃色油，除去亞硫酰氯殘余物并且不用進(jìn)一步純化就可用于下一個步驟。
26d(4RS)-苯甲酰硫-1-(1-甲酯基-1-三苯基正膦亞基甲基)-氮雜環(huán)丁-2-酮將4-苯甲酰硫-1-(1-氯-1-甲酯基甲基)氮雜環(huán)丁-2-酮(4.8mM)溶于干燥的二噁烷(30ml)中并加入三苯膦(2.52g，9.6mM)。蒸發(fā)該溶液得到一種漿體。在室溫攪拌該漿體并加入2，6-盧剔啶(0.67ml，5.7mM)。持續(xù)攪拌16小時，然后用乙酸乙酯(30ml)稀釋該反應(yīng)混合物并過濾除去2，6-盧剔啶鹽酸鹽。用1N鹽酸(1×10ml)、鹽水(1×10ml)洗滌有機(jī)層，并在無水硫酸鎂上干燥。過濾該溶液并蒸發(fā)，得到棕色固體。在硅膠60上通過柱色譜純化該固體，用乙酸乙酯-己烷混合物(1∶1)洗脫，得到標(biāo)題化合物白色泡沫(1.59g)。
26e(5RS)-2-苯基青霉烯-3-羧酸甲酯將(4RS)-苯甲酰硫-1-(1-甲酯基-1-三苯基正膦亞基甲基)-氮雜環(huán)丁-2-酮(1.59g)溶于干燥的甲苯(100ml)中，并將溶液回流4小時。使反應(yīng)混合物冷卻并蒸發(fā)，得到膏狀固體。在硅膠60上通過柱色譜純化該膏狀固體，用乙酸乙酯-己烷混合物(1∶1)洗脫，得到標(biāo)題化合物(0.515g)白色固體。νmax(CHCl2)1800，1720cm-1;
δH(CDCl2)ca，7.45(5H，m，Ar)，5.77(1H，dd，J 3.9，1.8Hz，5-H)3.85(1H，dd，J 16.4，3.8Hz，6-H)，3.72(3H，s，CO2CH3)和3.59(1H，dd，J 16.5 1.8Hz，6-H);MS m/z 261，(實(shí)測值M+261.0464 C13H11NO3S要求M+261.0464)。
實(shí)施例27 (5RS)-2-(4-甲氧苯基)青霉烯-3-羧酸甲酯按照與實(shí)施例26相似的方法制備。νmax(CH2Cl2)1798，1718，cm-1，δH(CDCl3)7.51(2H，d，J 8.8Hz，Ar)，6.99(2H，d，J 8.9Hz，Ar)，5.70(1H，dd，J 3.8，1.8Hz，5-H)，3.84(3H，s，CO2CH3)，3.83(1H，dd，J 16.1，3.8Hz，6-H)，3.54(3H，s，OCH3)和3.56(1H，dd，J 16.2，1.6Hz，6-H);MS m/z291，(實(shí)測值M+291.0568，C14H13NO4S要求M+291.0565)。
實(shí)施例28(5RS)-2-(4-氯苯基)青霉烯-3-羧酸甲酯按照與實(shí)施例26相似的方法制備。νmax(CH2Cl2)1798，1720cm-1;δH(CDCl3)7.44(2H，d，J 8.6Hz，Ar)，7.37(2H，d，J 8.6Hz，Ar)，5.77(1H，dd，J 3.8，1.6Hz，5-H)，3.87(1H，dd，J 16.4，3.8Hz，6-H)，3.73(3H，s，CO2CH3)和3.60(1H，dd，J 16.4，1.6Hz，6-H);MS m/z 295，(實(shí)測值M+295.0067，C13H10NO3ClS要求M+295.0070)。
實(shí)施例29 (5RS)-2-(4-甲酯苯基)青霉烯-3-羧酸甲酯通過與實(shí)施例26相似的方法制備。νmax(CH2Cl2)1805，1728cm-1;δH(CDCl3)8.05(2H，d，J 6.8Hz，Ar)，7.52(2H，d，J 6.8Hz，Ar)，5.80(1H，dd，J 3.8，1.7Hz 5-H)，3.93(3H，s，Ar CO2CH3)，3.89(1H，dd，J 16.5，3.9Hz，6-H)，3.70(3H，s，CO2CH3)和3.62(1H，dd，J 16.48，1.8Hz，6-H);MS m/z319，(實(shí)測值M+319.0517C15H13NO5S要求M+319.0514)。
實(shí)施例30 (5RS)-2-芐基青霉烯-3-羧酸甲酯通過與實(shí)施例26相似的方法制備。νmax(CH2Cl2)1800，1718cm-1;δH(CDCl3)ca7.28(5H，m，Ph)，5.58(1H，dd，J 3.8，1.5Hz，5-H)，4.23(1H，d，J 15.3Hz，CH2-Ph)4.13(1H，d，J 15.2Hz，CH2Ph)，3.87(3H，s，CO2CH3)3.74(1H，dd，J 16.3，3.8Hz，6-H)和3.45(1H，dd，J 16.3，1.5Hz 6-H);MS m/z 275，(實(shí)測值M+275.0618C14H13NO3S要求M+275.0616)。
實(shí)施例31 (5RS)-2-(羥甲基)青霉烯-3-羧酸芐酯通過與UK2，037，277B所述相似的方法制備該標(biāo)題化合物。νmax(CH2Cl2)1798，1718cm-1;
δH(CDCl3)ca 7.38(5H，m，Ph)，5.65(1H，dd，J 3.9 1.7Hz 5-H)，5.30(1H，d，J 12.7Hz，CH2Ph)，5.24(1H，d，J 12.7Hz，CH2Ph)，4.68(1H，d，J 15.7Hz，CH2OH)，4.60(1H，d，J 16Hz，CH2OH)，3.80(1H，dd，J 16.5，3.9Hz，6-H)和3.54(1H，dd，J 16.4，1.7Hz，6-H);MS m/z291(實(shí)測值M+291.0563 C14H13NO4S要求291.0565)。
實(shí)施例32(5RS)-2-(氨基甲酰氧基甲基)青霉烯-3-羧酸芐酯將(5RS)-2-羥甲基-青霉烯-3-羧酸芐酯(57mg)溶于干燥的二氯甲烷(1ml)中，并加入異氰酸三氯乙酰酯(25μl)。在氬氣下、在室溫攪拌反應(yīng)混合物30分鐘，然后用乙酸乙酯(10ml)稀釋并用飽和碳酸氫鈉水溶液(5ml)，水(5ml)和鹽水(5ml)洗滌。在無水硫酸鎂上干燥有機(jī)層并蒸發(fā)，得到棕色油。將該油溶于甲醇(1ml)，并在加入2，6-盧剔啶(46μl)后于室溫攪拌5小時。然后用乙酸乙酯(10ml)稀釋該反應(yīng)混合物，并用5%檸檬酸(5ml)，飽和碳酸氫鈉水溶液(5ml)、水(5ml)和鹽水(5ml)洗滌。在無水硫酸鎂上干燥有機(jī)層并蒸發(fā)，得到一種油。通過在硅膠60上的柱色譜純化該油，用乙酸乙酯-己烷混合物(1∶1)洗脫，得到標(biāo)題化合物膠質(zhì)固體(23mg)。νmax(CH2Cl2)1805，1748，1715cm-1;δH(CDCl3)ca7.5-7.25(5H，m，Ph)，5.67(1H，dd，J 3.9，1.8Hz，5-H)，5-47(1H，d，J 15.5Hz，CH2OCONH2)，5.30(1H，d，J 12.5Hz，CH2Ph)，5.14(1H，d，J 12.5Hz，CH2Ph)，5.11(1H，dd，J 15.5Hz，CH2OCONH2)，4.70(2H，br s，NH2)3.80(1H，dd，J 16.5，3.9Hz，6-H)和3.53(1H，dd，J 16.4，1.7Hz，6-H);MS(NH3C.I.)MNH4+352。
實(shí)施例33(5RS)-2-(氨基甲酰氧基甲基)青霉烯-3羧酸甲酯通過與實(shí)施例32所述相似的方法制備標(biāo)題化合物。νmax(CH2Cl2)1805，1745，1718，cm-1;δH(CDCl3)5.68(1H，dd，J 3.9，1.6Hz，5-H)，5.47(1H，d，J 15.4Hz，CH2OCONH2)，5.11(1H，d，J 15.4Hz，CH2OCONH2)，4.8(2H，br.s.NH2)3.84(3H，s，CO2CH3)，3.77(1H，dd，J 16.5，3.9Hz，6-H)，和3.54(1H，dd，J 16.5，1.9Hz，6-H);MS(NH3C.I.)MNH4+276。
實(shí)施例34(5RS)-2-苯基青霉烯-3-羧酸芐酯通過與實(shí)施例26所述相似的方法制備標(biāo)題化合物。νmax(CH2Cl2)1800，1718cm-1;δH(CDCl3)7.50-7.15(10H，m，Phx2)，5.77(1H，dd，J 3.8，1.7Hz，5-H)，5.17(1H，d，J 12.6Hz，CH2Ph)，5.10(1H，d，J 12.6Hz，CH3Ph)，3.84(1H，dd，J 16.4，3.9Hz，6-H)和3.59(1H，dd，J 16.4，1.8Hz，6-H);MS m/z M+337，(實(shí)測值M+337.0776，C19H15NO3S要求M+337.0773)。
實(shí)施例35(5RS)-2-(4-氯苯基)青霉烯-3-羧酸芐酯按照與實(shí)施例26所述相似的方法制備標(biāo)題化合物。νmax(CH2Cl2)1800，1718cm-1;
δH(CDCl3)7.45-7.15(10H，m，2xPh)，5.77(1H，dd，J 3.8，1.7Hz，5-H)，5.15(1H，d，J 12.6Hz)，CH2Ph)，5.09(1H，d，J 12.6Hz，CH3Ph)，3.84(1H，dd，J 16.4，3.8Hz，6-H)和3.60(1H，dd，J 16.4，1.8Hz，6-H);MS m/z H+371，(實(shí)測值M+371.0383，C19H14ClNO3S要求M+371.0383)。
實(shí)施例36(5RS)-2-甲基青霉烯-3-羧酸芐酯按照與實(shí)施例26所述相似的方法制備標(biāo)題化合物。νmax(CH2Cl2)1798，1720-1;
δH(CDCl3)7.5-7.3(5H，m，Ph)，5.62(1H，dd，J 3.9，1.8Hz，5-H)，5.30(1H，d，J 12.4Hz，CH2Ph)，5.22(1H，d，J 12.5Hz，CH2Ph)，3.76(1H，dd，J 16.2，3.9Hz，6-H)，3.46(1H，dd，J 16.4，1.8Hz，6-H)和2.35(3H，s CH3);MS m/z M+275，(實(shí)測值M+275.0620，C14H13NO3S要求M+275.0616)。
實(shí)施例37(5RS)-2-甲基青霉烯-亞砜-3-羧酸芐酯將(5RS)-2-甲基青霉烯-3-羧酸芐酯(27.5mg)溶于二氯甲烷(5ml)并冷卻至0℃。加入間氯過苯甲酸(19mg)并在0℃攪拌反應(yīng)混合物2小時。加入二氯甲烷(60ml)并用10%硫酸鈉水溶液(15ml)、10%碳酸鈉水溶液(15ml)和鹽水(20ml)洗滌有機(jī)相，然后在無水硫酸鎂上干燥。將溶液過濾并蒸發(fā)，得到標(biāo)題化合物澄清油(12mg)(異構(gòu)體比例5∶1)δH(CDCl3)，7.5-7.3(5H，m，Ph)，5.35(2H，s，CH2Ph)，4.97(1H，dd J 5.5，3.0Hz，5-H，少數(shù)異構(gòu)體)，4.82(1H，dd，J 5.7，3.3Hz，5-H，主要異構(gòu)體)，3.64(1H，dd，J 16.9，3.4Hz，6-H主要異構(gòu)體)3.46(1H，dd，J 16.8，5.7Hz，6-H主要異構(gòu)體)，2.57(3H，s，CH3主要異構(gòu)體)和2.42(3H，s，CH3少數(shù)異構(gòu)體);MS m/z M+291(實(shí)測值M+291.0566，C14H13NO4S要求291.0565)。
實(shí)施例38(5RS)-2-(甲氧基甲氧基甲基)青霉烯-3-羧酸對硝基芐酯在氬氣下，將醇(實(shí)施例9)(100mg，0.3mmol)、2，6-盧剔啶(320mg，3mmol)和溴甲基甲醚(375mg，3mmol)的二氯甲烷(20ml)溶液回流1小時。用碳酸氫鈉溶液隨后是檸檬酸溶液洗滌該反應(yīng)混合物，然后干燥、蒸發(fā)。在硅膠上進(jìn)行色譜，用乙酸乙酯/石油混合物洗脫，得到標(biāo)題化合物淺黃色無定形固體(65mg)。m.p.94-5℃(從乙酸乙酯/石油中得到的淺黃色針狀物)。λmax(EtOH)261(12，400)，318(10，000)nm.νmax.(CHCl3)1795，1705，1580cm-1.δH(CDCl3)3.36(3H，s)，3.49(1H，dd，J＝2.16Hz)，3.83(1H，dd，J＝4，16Hz)，4.62(2H，s)，4.64和4.88(2H，ABq的中心，J＝16Hz);5.20和5.44(2H，ABq的中心，J＝13Hz)，5.65(1H，dd，J＝2，4Hz)，7.59(2H，d，J＝8Hz)，8.20(2H，d，J＝8Hz).(實(shí)測值C，50.26;H，4.14;N，7.14;S，8.60%.C16H16N2O7S要求C，50.52;H，4.24;N，7.37;S，8.43%)。
實(shí)施例39(5RS)-2-(4-硝基芐氧羰基氨甲基)青霉烯-3-羧酸丙酮酯按照與實(shí)施例26所述相似的方法制備標(biāo)題化合物;m.p.(二噁烷/石油)180-2°;νmax.(液體石蠟)1810，1735，1700cm-1;λmax.(EtOH)317nm(ε8740);δH(d6DMSO)2.10(3H，s)，3.48(1H，dd，J 2.16Hz)，3.87(1H，dd，J 4.16Hz)，4.38(2H，d，J 6Hz)，4.83(2H，s)，5.21(2H，s)，5.70(1H，dd，J 2，4Hz)，7.60(2H，d，J 9Hz)，8.04(1H，t，J 6Hz)，8.23(2H，d，J 8Hz);m/z(實(shí)測值M+435.0736C18H17N3O8S要求M+435.0736);(實(shí)測值C，49.6;H，4.0;N，9.5%.C18H17N3O8S要求C，49.7;H，3.9;N，9.7%)。
實(shí)施例40 (5RS)-2-(4-硝基芐氧羰基氨甲基)青霉烯-3-羧酸對硝基芐酯通過與實(shí)施例26所述相似的方法制備標(biāo)題化合物;νmax.(CHCl3)1795，1720cm-1;m/zM+514(實(shí)測值M+514.0776.C32H18N4O9S要求514.0794)。
實(shí)施例41(5R，6S)-6-[1-(R)-羥乙基]青霉烯-3-羧酸烯丙酯41a[(3S，4R)-3-[1-R-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)乙基)]-2-氧代-4-(三苯甲基硫)氮雜環(huán)丁-1-基]三苯基正膦亞基乙酸烯丙酯將(3S，4R)-3-[1-R-(叔丁二甲基甲硅烷氧基)乙基]-4-(三苯甲基硫)氮雜環(huán)丁-2-酮(1g)和乙醛酸烯丙酯(342mg)的苯(10ml)溶液在迪安-斯達(dá)克榻分水器上回流1小時。將混合物冷卻至室溫，用三乙胺(0.1ml)處理，放置1 1/2 小時并蒸發(fā)。將殘余物溶于THF(18ml)，冷卻至-20℃并用2，6-盧剔啶(0.47ml)和亞硫酰氯(0.234ml)處理。升至室溫后，經(jīng)硅藻土過濾該混合物并蒸發(fā)濾液。將殘余物溶于苯(50ml)并蒸發(fā)，然后用二噁烷(1.5ml)、2，6-盧剔啶(0.47ml)和三苯膦(4g)處理，并在40℃攪拌過夜。將該混合物溶于乙酸乙酯(100ml)，用0.5N鹽酸(100ml)和水洗滌、干燥并蒸發(fā)。在硅膠上對殘余物進(jìn)行色譜，用乙酸乙酯/己烷1∶3洗脫，得到標(biāo)題化合物淺黃色泡沫(1.2g)。νmax.(CHCl3)1750，1610cm-1。
41b(5R，6S)-6-[1-R-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)乙基]青霉烯-3-羧酸烯丙酯將上述41a的正膦(1.2g)溶于二氯甲烷(1.5ml)/甲醇(10ml)中，然后用吡啶(0.146ml)和0.15M硝酸銀的甲醇(12.1ml)溶液處理。在室溫攪拌0.5小時，蒸發(fā)該溶液，并將殘余物溶于氯仿(100ml)并蒸發(fā)。將殘余物重復(fù)溶于二氯甲烷(17.5ml)、冰冷、然后順序地用乙酸甲酯酐(1.1ml)、4-二甲基氨吡啶(0.17g)和三乙胺鹽酸鹽(1.93g)處理。強(qiáng)烈攪拌1/2小時后，經(jīng)硅藻土過濾該混合物，濾液用乙酸乙酯(100ml)稀釋，用0.5N鹽酸(100ml)，水(50ml)和碳酸氫鈉溶液(50ml)洗滌，干燥并蒸發(fā)。將殘余物溶于小體積甲苯，在室溫放置1 1/2 小時并裝入二氧化硅柱。用5%然后是10%乙酸乙酯/己烷洗脫，得到標(biāo)題化合物(437mg)。從己烷/戊烷中結(jié)晶得到的無色針狀物，m.p.91-3℃。(實(shí)測值C，55.3，H，7.6，N3.8S，8.7%.C17H27NO4SSi要求C，55.3，H，7.4，N 3.8 S 8.7%)νmax.(KBr)1771，1705，1650，1557cm-1。
41c(5S，6S)-6-[1-R-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)乙基]青霉烯-3-羧酸烯丙酯將(5R，6S)-6-[1-R-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)乙基]青霉烯-3-羧酸烯丙酯(247mg)溶于100ml乙酸乙酯中，并放入Hanovia光化學(xué)反應(yīng)器的容器中。用氬氣鼓泡攪拌著的溶液2小時，然后用中壓UV燈經(jīng)Pyrex過濾器照射該溶液1/2小時。蒸發(fā)該溶液并在二氧化硅上對殘余物進(jìn)行色譜，用5%然后是8%乙酸乙酯/己烷洗脫。洗脫的第一青霉烯是標(biāo)題化合物固體(112mg)。
νmax.(KBr)1796，1712，1650，1557cm-1，F(xiàn)AB MS(基體3-NOBA/Na)m/z 392(100%，MNa+).[α]21D-214°(c.68;CHCl3)。
41d(5S，6S)-6-[1-(R)-羥乙基]青霉烯-3-羧酸烯丙酯用乙酸(0.036ml)，然后是1M氟化四丁銨的四氫呋喃(0.2ml)處理(5S，6S)-6-[1-R-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)乙基]青霉烯-3-羧酸烯丙酯(11mg)。在室溫攪拌4小時，用乙酸乙酯(5ml)稀釋該混合物，用水(5ml)，碳酸氫鈉溶液(5ml)和水(5ml)洗脫、干燥并蒸發(fā)。在二氧化硅上對殘余物進(jìn)行色譜，用乙酸乙酯/己烷1∶2洗脫，得到標(biāo)題化合物無色膠(6.4mg)。νmax.(CHCl3)3600，3500，1795，1710，1650，1555cm-1.δH(CDCl3)1.48(3H，d，J 6Hz)，1.83(1H，寬 s)，3.89(1H，ddd，J 10，4和7Hz)，4.2-4.5(1H，寬 m)，4.6-4.8(2H，m)，5.2-5.5(2H，m)，5.84(1H，d，J 4Hz)，5.85-6.0(1H，m)，7.31(1H，d，J 7Hz)，MS(E.I.)m/z 255(10%，M+)，170(100%)，112(80%)。
實(shí)施例42 (5SR，6RS)-6-乙基青霉烯-3-羧酸烯丙酯
42a(3RS，4SR)-3-乙基-4-三苯甲基硫-N-叔丁基二甲基甲硅烷基-氮雜環(huán)丁-2-酮在氬氣下，將4-三苯甲基硫-N-叔丁基二甲基甲硅烷基-氮雜環(huán)丁-2-酮(3g)的干燥四氫呋喃(20ml)溶液滴加到冷卻至-76°(浴溫)的LDA(二異丙胺1ml+0.83M正丁基鋰8.6ml)的四氫呋喃(15ml)溶液中。15分鐘后，加入乙基碘(3ml)。0.5小時后用乙酸乙酯稀釋該反應(yīng)產(chǎn)物，隨后順序地用飽和氯化銨溶液和鹽水洗滌，接著進(jìn)行干燥(MgSO4)和蒸發(fā)。在SiO2上進(jìn)行色譜，用正己烷/乙酸乙酯(20∶1)洗脫，得到標(biāo)題化合物(3.02g)，δH(CDCl3)0.22(6H，s)，0.68(3H，t，J 7.2Hz)，0.90-1.12(11H，m)，3.04-3.12(1H，m)，3.9(1H，d，J 1.63Hz)，7.18-7.5(15H，m)。
42b(5SR，6RS)-6-乙基-青霉烯-3-羧酸烯丙酯通過標(biāo)準(zhǔn)方法(JACS 1979，101(21)，p6306-6310和實(shí)施例26b、c、d)將(3RS，4SR)-3-乙基-4-三苯甲基硫-N-叔丁基二甲基甲硅烷基-氮雜環(huán)丁-2-酮轉(zhuǎn)化成正膦。除了在進(jìn)行色譜前需要在乙酸乙酯中加熱至40℃0.5小時對反應(yīng)后處理外，最終環(huán)化與實(shí)施例24c相似。用乙酸乙酯/正己烷(1∶4)洗脫，得到標(biāo)題化合物油，產(chǎn)率48%，νmax.(KBr)1778，1710，1648cm-1δH(CDCl3)1.08(3H，t，J 7.4Hz)，1.8-2.06(2H，m)，3.77(1H，m)，4.61-4.82(2H，m)，5.24-5.42(2H，m)，5.50(1H，d，J 1.6Hz)，5.81-6.04(1H，m)，7.24(1H，d，J 1.2Hz)(實(shí)測值M+239.0618，C11H13NO3S要求M，239.0616)。
實(shí)施例43 (5SR，6SR)-6-乙基青霉烯-3-羧酸烯丙酯將[5SR，5RS]-6-乙基-青霉烯-3-羧酸烯丙酯(0.024g)甲苯溶液加熱至100℃4.5小時，此時Hplc表明順∶反異構(gòu)體混合物接近1∶1。蒸發(fā)反應(yīng)物并用乙腈/水(0.47∶1)作為洗脫液進(jìn)行制備Hplc，得到標(biāo)題化合物蠟狀固體(2.6mg)，δH(CDCl3)1.03(3H，t，J 7.37Hz)，1.8-2.14(2H，m)，3.86-3.94(1H，m)，4.66-4.82(2H，m)，5.22-5.45(2H，m)，5.83(1H，d，J 4.13)，5.83-6.04(1H，m)，7.25(1H，d，J 0.82Hz)。
實(shí)施例44 (5RS，6SR)-6-[(RS)-1-乙酰氧基乙基]青霉烯-3-羧酸烯丙酯44a N-叔-丁基二甲基甲硅烷基-3-(1-羥乙基)-4-(三苯基甲基硫)氮雜環(huán)丁-2-酮
將N-叔丁基二甲基甲硅烷基-4-(三苯甲基硫)氮雜環(huán)丁-2-酮(3.0g;6.536mM)溶于干燥THF(75ml)并在氬氣氛下冷卻至-78℃。加入二異丙氨基鋰溶液(1.5M在庚烷/THF/乙苯中的溶液;5.23ml;7.84mM)，并將溶液在-78℃攪拌30分鐘。加入乙醛(0.438ml)的THF(5ml)溶液，并在-78℃持續(xù)攪拌30分鐘。通過加入冰醋酸(2ml)使反應(yīng)淬火，并且反應(yīng)溶液在乙酸乙酯和水之間分配。用1N HCl、水、飽和NaHCO3溶液、鹽水洗滌有機(jī)溶液，干燥(MgSO4)并蒸發(fā)。在硅膠(60g)上對殘余物進(jìn)行色譜，用10-25%乙酸乙酯-己烷梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物的非對映異構(gòu)體混合物白色泡沫(1.15g)。
44b 3-(1-羥乙基)-4-(三苯甲基硫)氮雜環(huán)丁-2-酮
將44a制備的甲硅烷化的氮雜環(huán)丁酮的非對映異構(gòu)體混合物(3.68g)溶于甲醇(100ml)中，并且在氬氣氛下、在-10℃與氟化鉀(0.467g)的甲醇溶液一起攪拌2小時。反應(yīng)溶液在乙酸乙酯和水之間分配，用鹽水洗滌有機(jī)相，干燥(MgSO4)并蒸發(fā)。
經(jīng)硅膠柱色譜得到標(biāo)題氮雜環(huán)丁酮非對映異構(gòu)體混合物白色泡沫(2.21g)，νmax.(CH2Cl2)3600，3400，1770cm-1。
44c 3-(1-乙酰氧乙基)-4-(三苯甲基硫)氮雜環(huán)丁-2-酮
將44b制備的氮雜環(huán)丁酮(2.21gm)溶于干燥的二氯甲烷中，并在冰浴中冷卻，同時攪拌。加入三乙胺(0.786ml)、4-二甲氨基吡啶(0.069g)和乙酸酐(0.642ml)并在5℃攪拌該反應(yīng)溶液1.5小時。然后用1N HCl，水，飽和NaHCO3溶液鹽水洗滌該溶液、干燥(MgSO4)和蒸發(fā)。進(jìn)行二氧化硅膠柱色譜，得到標(biāo)題氮雜環(huán)丁酮白色泡沫(1.89gm)，νmax.(CH2Cl2)3400，1780，1740cm-1。
44d [3-(1-乙酰氧乙基)-4-三苯甲基硫-2-氧代氮雜環(huán)丁-1-基]三苯基正膦亞基乙酸烯丙酯
按照實(shí)施例1的方法，讓乙醛酸烯丙酯單水合物與44c制備的氮雜環(huán)丁酮非對映異構(gòu)體混合物(0.092g)反應(yīng)，得到標(biāo)題正膦白色泡沫(0.870g)，νmax(CH2Cl2)1755，1622cm-1。
44e(5RS，6SR)-6-[(RS)-1-乙酰氧乙基]青霉烯-3-羧酸烯丙酯
根據(jù)實(shí)施例24c所述方法，使44d制備的非對映異構(gòu)正膦(0.800gm)反應(yīng)，得到標(biāo)題青霉烯，通過硅膠色譜純化該產(chǎn)物。用10→25%乙酸乙酯-己烷梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物(5RS，6SR，8RS)異構(gòu)體作為第一洗脫成份(0.036g);λmax.(EtOH)314nm(e 5754)，258nm(ε3137);νmax.(CH2Cl2)1800，1742，1722cm-1;δH(CDCl3)，1.42(3H，d，J 6.44Hz)，2.09(3H，s)，3.94(1H，dt，J 1.0，1.8，7.7Hz)，4.6-4.85(2H，m)，5.2-5.45(3H，m)，5.71(1H，d，J 1.8Hz)，5.85-6.05(1H，m)，7.26(1H，d，J 1.0Hz);(實(shí)測值m/e 297.0675.
C12H15NO5S要求M+297.0671)。
連續(xù)洗脫得到非對映異構(gòu)體混合物(0.125gm)，然后純的(5RS，6SR，8SR)異構(gòu)體(0.052gm)，該異構(gòu)體與實(shí)施例24c得到的異構(gòu)體B相對應(yīng)。
實(shí)施例45 (5S)-2-苯基青霉烯-3-羧酸甲酯如實(shí)施例23，在手性固定相對實(shí)施例26所述的外消旋甲酯進(jìn)行制備hplc，得到所要的(S)-對映體[α]25D-141°。
實(shí)施例46 (5RS)-2-(乙基硫)青霉烯-3-羧酸對硝基芐酯按照GB2，036，015A所述制備該化合物，得到標(biāo)題化合物，m.p.131°，λmax(EtOH)263和340nm;νmax(CHCl3)1790，1690cm-1;δH(CDCl3)1.36(3H，t，J 8Hz)，2.96(2H，q，J 8Hz)，3.46(1H，dd，J 16，2Hz)，3.83(1H，dd，J 16，4Hz)，5.18和5.45(2H，ABq，J 14Hz)，5.68(1H，dd，J 4，2Hz)，7.59(2H，d，J 9Hz)，8.17(2H，d，J 9Hz)(實(shí)測值M+366.0354，C15H14N2O5S2要求366.0343)。
實(shí)施例47 (5RS)-2-(甲基硫)青霉烯-3-羧酸芐酯按照GB2，036，015A所述制備該化合物，得到標(biāo)題化合物，m.p.136-137°;λmax257和339nmνmax(CH2Cl2)1795，1685cm-1;δH(CDCl3)2.50(3H，s)，3.43(1H，dd，J 16，2Hz)，3.79(1H，dd，J 4，2Hz)，7.20-7.50(5H，s)(實(shí)測值C，54.6;H，4.4;N，4.6;S，20.8%).C14H13NO3S2要求C，54.7;H，4.2;N，4.6;S，20.9%)。
實(shí)施例48 (5RS)-2-(叔丁基二苯基甲硅烷氧基甲基)青霉烯-3-羧酸芐酯按照GB2，037，277B所述制備該化合物，得到標(biāo)題化合物，m.p.89-89°;λmax(EtOH)265和323nm;νmax(CHCl3)1785，1700，1580cm-1;δH(CDCl3)1.04(9H，s)，3.44(1H，dd，J 2，16Hz)，5.56(1H，dd，J，2，4Hz)，7.20-7.78(15H，m)(實(shí)測值C，67.8;H，5.90;N，2.87;S，6.10%).C30H31NO4SSi要求C，68.02;H，5.90;N，2.64;S，6.05%)。
實(shí)施例49(5S，6S，8R)-2-羥甲基-6-(1-羥乙基)青霉烯-3-羧酸對硝基芐酯49a(5S，6S，8R)-2-羥甲基-6-[1-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)乙基]青霉烯-3-羧酸對硝基芐酯通過與實(shí)施例41c所述相似的方法對(5R，6S，8R)-2-羥甲基-6-[1-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)乙基]青霉烯-3-羧酸對硝基芐酯(J.Antibiotics，1983，36，938)(1g)進(jìn)行感光異構(gòu)，得到標(biāo)題化合物淺黃色固體(313mg)，νmax(CH2Cl2)1795cm-1;δH(CDCl3)0.13(6H，s)，0.88(9H，s)，1.45(3H，d，J 6Hz)，3.37(1H，t，J 7Hz)，3.91(1H，dd，J 10，4Hz)，4.41(1H，m)，4.66(2H，d，J 7Hz)，5.23(1H，d，J 13.7Hz)，5.49(1H，d，J 13.7Hz)，5.71(1H，d，J 4Hz)，7.62(2H，d，J 8.7Hz)和8.25(2H，d J 8.7Hz);m/zM+494。
49b(5S，6S，8R)-2-羥甲基-6-(1-羥乙基)青霉烯-3-羧酸對硝基芐酯將(5S，6S，8R)-2-羥甲基-6-[1-叔-(丁基二甲基甲硅烷氧基)乙基]青霉烯-3-羧酸對硝基芐酯(98.8mg)溶于干燥四氫呋喃(1ml)和乙酸(136μl)中，并加入1M氟化四丁銨的四氫呋喃(780μl)溶液。在室溫攪拌反應(yīng)混合物16小時。用乙酸乙酯(20ml)稀釋反應(yīng)混合物并用飽和碳酸氫鈉水溶液(1×20ml)和鹽水(1×20ml)洗滌該溶液。在無水硫酸鎂上干燥有機(jī)層，過濾后進(jìn)行真空蒸發(fā)，得到黃色油。在硅膠60上對該粗產(chǎn)物進(jìn)行色譜，用乙酸乙酯/己烷(4∶1)洗脫，得到標(biāo)題化合物淺黃色固體(48mg)。νmax(CH2Cl2)1792cm-1;δH(CDCl3)1.5(3H，d，J 6.2Hz)2.54(2H，brs)，3.89(1H，dd，J 10.3，4.1Hz)，4.39(1H，m)，4.64(1H，d，J 15.8Hz)，4.72(1H，d，J 15.8Hz)，5.23(1H，d，J 13.8Hz)，5.46(1H，d，J 13.7Hz)，5.73(1H，d，J 4.0Hz)，7.62(2H，d，J 8.7Hz)和8.22(2H，d，J 8.7Hz);m/z M+380。
實(shí)施例50 (5S，6S)-6-[(R)-1-乙酰氧乙基]青霉烯-3-羧酸烯丙酯按照實(shí)施例23所述，對實(shí)施例24的外消旋酯(異構(gòu)體A)進(jìn)行制備手性hplc，得到標(biāo)題化合物[α]24D-204°。
實(shí)施例51 (5RS)-2-(羥甲基)青霉烯-3-羧酸甲酯通過與GB2，037，277B所述相似的方法制備標(biāo)題化合物。νmax(CH2Cl2)1978，1715cm-1，δ(CDCl3)3.55(1H，dd，J 16.4，1.6Hz，6-H)，3.80(1H，d，J 3.9Hz，6-H)，3.88(3H，s，CO2CH3)，4.64(2H，br s，CH2-OH)，5.69(1H，dd，J 3.9，1.6Hz，5-H).實(shí)測值M+，215.0255.C8H9NO4S要求M，215.0252。
實(shí)施例52 (5RS，6RS)和(5RS，6SR)-2-乙基硫-6-乙基青霉烯-3-羧酸4-硝基芐酯a)1-乙酰氧基丁-1-烯在120℃攪拌1-丁醛(74ml)、乙酸酐(119ml)和乙酸鉀(10.1g)的混合物17小時。然后將混合物冷卻，在碳酸氫鈉水溶液中和并分離有機(jī)相，用無水硫酸鎂干燥，得到淺黃色油，蒸餾該油得到標(biāo)題化合物(7.5g)，b.p.122-4℃，νmax(膜)1755，1678cm-1。
b)(3RS，4RS)和(3RS，4SR)-4-乙酰氧基-3-乙基氮雜環(huán)丁-2-酮在室溫攪拌和混合1-乙酰氧基丁-1-烯(2.28g)和異氰酸氯磺酰酯(2.83g)2.5小時。在冰浴中冷卻該反應(yīng)混合物，并將水與碳酸氫鈉/亞硫酸鈉(35∶1)的混合物加至水/二氯甲烷溶液中。分離有機(jī)相并干燥(無水硫酸鎂)、過濾并真空除去溶劑。在Kieselgel-60上對粗產(chǎn)品進(jìn)行色譜，用乙酸乙酯-石油混合物(2∶3至1∶1)洗脫，得到標(biāo)題化合物異構(gòu)體混合物(1.1g);νmax(CHCl3)3420，1785，1725cm-1。
c)(3RS，4RS)和(3RS，4SR)-3-乙基-4-(乙基咕噸基)氮雜環(huán)丁-2-酮5℃的(3RS，4RS)和(3RS，4SR)-4-乙酰氧基-3-乙基氮雜環(huán)丁-2-酮(1.0g)的混合物的二氯甲烷(25ml)溶液，與5℃的乙基黃原酸鉀(1.15g)反應(yīng)，并劇烈攪拌該混合物。15分鐘后，混合物升溫至室溫并繼續(xù)攪拌1小時。分離有機(jī)相并用二氯甲烷(3×25ml)萃取水相。合并有機(jī)層，用無水硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)，得到標(biāo)題化合物黃色油(1.3g);λmax(εm)301nm(14，400)，237(3，500);νmax(CHCl3)3410，1770cm-1;δH(CDCl3)1.10(3H，t，J 8Hz)，1.40(3H，t，J 8Hz)1.65-2.12(2H，m)，3.07-3.36(1H，m)，3.40(2H，q，J 8Hz)，5.36(1H，d，J 2Hz)，6.60(1H，br s).實(shí)測值M+，235.0153.C8H13NOS3要求M，235.0160]d)(5RS，6RS)和(5RS，6SR)-2-乙基硫-6-乙基青霉烯-3-羧酸4-硝基芐酯通過與實(shí)施例26所述相似的方法將上述制備的(3RS，4RS)和(3RS，4SR)-3-乙基-4-(乙基咕噸基)氮雜環(huán)丁-2-酮的混合物轉(zhuǎn)化成標(biāo)題化合物;νmax(CHCl3)1790，1695，1605cm-1;λmax(C2H5OH)338nm(11，300)，261(17，200);實(shí)測值M+394.0672.C17H18N2O5S2要求M394.0654)。
實(shí)施例53 (5RS，6SR)-6-[(SR)-1-乙酰氧乙基]-2-(乙基硫)青霉烯-3-羧酸4-硝基芐酯在氬氣氛下，將[3-[(RS)-1-乙酰氧乙基]-4-(乙基三硫羰基)-2-氧代氮雜環(huán)丁-1-基](三苯基正膦亞基)乙酸對硝基芐酯(1.0g)(由EP0041768所述方法制備)的二甲苯(1L)溶液加熱回流10小時。將反應(yīng)混合物蒸發(fā)干燥并在硅膠上進(jìn)行色譜，用乙酸乙酯/石油醚梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物(120mg)，mp131-3℃;λmax(C2H5OH)334nm(ε11，000)和260nm(ε16，200);νmax(CHCl3)1795，1730，1695cm-1，δH(CDCl3)1.39(3H，t，J 7.4Hz)，1.54(3H，d，J 6.0Hz)，2.06(3H，s)，2.96-3.13(2H，m)，4.01(1H，dd，J 4.0和9.9Hz)，5.21和5.47(2H，ABq，J 13.7Hz重疊aq(J 7.4Hz)在5.26，以及3H)，5.75(1H，d，J 4Hz)，7.61(2H，d，J 8.7Hz)，8.22(2H，d，J 8.7Hz)，實(shí)測值M+452.0729;C，50.5;H，4.2;N，6.1;S，13.8.C19H20N2O2S2要求M 452.0712;C，50.5;H，4.4;N，6.2;S，14.2。
實(shí)施例54 N-芐基(5RS)-青霉烯-3-甲酰胺
在有10%鈀-碳催化劑(30mg)存在下，將(5RS)-青霉烯-3-羧酸4-硝基芐酯[U.K Pat.Appl.2，036，015(Beecham Group)]在二噁烷(5ml)和水(1.25ml)中的溶液在大氣壓下氫化2小時。產(chǎn)物經(jīng)硅藻土過濾并將碳酸鉀(8mg)的水(5ml)溶液加至濾液中。0.25小時后，減壓蒸發(fā)該溶液直至剛好混濁。然后用乙酸乙酯洗滌兩次。用氯化鈉使該鉀鹽水溶液飽和，然后與乙酸乙酯/四氫呋喃1∶1(10ml)一起強(qiáng)烈攪拌。用0.5N鹽酸將該混合物酸化至pH2.0并分離有機(jī)相，干燥并蒸發(fā)。在-10至-15℃，氬氣氛下，在干燥四氫呋喃(2ml)中攪拌該粗游離酸殘余物并用三乙胺(18mg，24μl)處理，5分鐘后用氯甲酸乙酯(19mg，17μl)處理。放置0.25小時使混合酐形成，然后加入芐胺(11mg，12μl)。在-10至-15℃攪拌該反應(yīng)混合物1.5小時，然后蒸發(fā)。殘余物在鹽水和乙酸乙酯之間分配;分離有機(jī)相、用鹽水洗滌、干燥并蒸發(fā)。用氯仿作為洗脫液在硅膠60上對殘余物膠進(jìn)行色譜，隨后從乙酸乙酯/己烷中結(jié)晶，得到芐酰胺(11mg);m.p.85-86℃;νmax(CHCl3)3420，2900，1785，1660，1580和1515cm-1;δH(CDCl3)3.64(1H，ddd，J 16.6，2.0和1.1Hz，6-H)，3.85(1H，dd，J 16.6和3.8Hz，6-H)，4.49(1H，dd，J 15.0和5.7Hz，PhCH)，4.60(1H，dd，J 15.0和6.1Hz，PhCH)，5.82(1H，dd，J 3.8和2.0Hz，5-H)，6.78(1H，br，NH)，7.16(1H，s，2-H)，和7.20-7.40(5H，m，Ary1-H);MH+(NH3DCI)，m/z261。
實(shí)施例55 1-[(5RS)-青霉-2-烯-3-羰基]吡咯烷
采用實(shí)施例54的方法，由吡咯烷無色膠制備青霉烯酰胺;νmax(CHCl3)2970，2880，1790，1610和1545cm-1;δH(CDCl3)1.80-2.07(4H，m，吡咯烷-H′s)，3.51-3.75(4H，m，吡咯烷-H′s)3.58(1H，dt，J 16.5 & 1.8Hz，6-H)，3.81(1H，ddd，J 16.5，3.8 & 0.6Hz，6-H)，5.83(1H，dd，J 3.8 & 1.8Hz，5-H)和7.10(1H，s，2-H);[實(shí)測值M+，224(EI).C10H12N2O2S要求M，224]。
實(shí)施例56 (5RS)-N-苯基青霉-2-烯-3-甲酰胺(carboxamide)在有10%鈀-碳催化劑(50mg)存在下，將(5RS)-青霉烯-3-羧酸4-硝基芐酯(50mg)在二噁烷(10ml)和水(2.5ml)中的溶液在大氣壓下氫化2小時。產(chǎn)物經(jīng)硅藻土過濾并將碳酸鉀(14mg)的水(5ml)溶液加入濾液。0.25小時后，減壓蒸發(fā)該溶液直至剛好混濁，然后用乙酸乙酯洗滌兩次。用氯化鈉使該鉀鹽水溶液飽和，然后與乙酸乙酯/四氫呋喃1∶1(20ml)一起強(qiáng)烈攪拌。用0.5N鹽酸將該混合物酸化至pH2.0并分離有機(jī)相、干燥并蒸發(fā)。在-15℃、氬氣氛下，在干燥THF(2ml)中的攪拌粗酸溶液，加入三乙胺(27μl)，5分鐘后加入二苯基膦酰氯(40μl)。放置15分鐘使混合酸酐形成，然后加入苯胺(18μl)和三乙胺(27μl)。2小時內(nèi)使反應(yīng)混合物熱至室溫，然后對其進(jìn)行蒸發(fā)干燥。殘余物在乙酸乙酯和鹽水之間分配;分離有機(jī)相，用鹽水洗滌、然后在硫酸鈉上面干燥并蒸發(fā)得到一種膠，用乙酸乙酯/己烷(3∶7)作為洗脫液在硅膠60上對該膠進(jìn)行色譜，得到青霉烯酰胺(9mg，23%);m.p.139-141℃(乙酸乙酯/己烷);νmax(CHCl3)3420，1790，1675，1605，1575，1530和1500cm-1;δH(CDCl3)3.73(1H，ddd，J 16.4，2.0 & 1.1Hz，6-H)，3.93(1H，dd，J 16.4 & 3.8Hz，6-H)，5.91(1H，dd，J 3.8 & 2.0Hz，5-H)，7.13(1H，t，J 7.8Hz，Ar-H)，7.24(1H，s，2-H)，7.34(2H，t，J 7.8Hz，Ar-H)和7.57(2H，d，J 7.8Hz，Ar-H).[實(shí)測值C，57.8;H，4.1;N，11.1%;M+246.0462(EI).C12H10N2O2S要求C，58.5;H，4.1;N，11.4%;M 246.0463]。
實(shí)施例57 (5RS)-N-芐基-N-甲基青霉-2-烯-3-甲酰胺采用實(shí)施例56的方法，以22%的產(chǎn)率，由N-甲基芐胺制備青霉烯酰胺無色膠;νmax(CHCl3)3000，1795，1625和1550cm-1;δH(CDCl3)3.02(3H，s，NCH3)，3.58(1H，d，J 16.4Hz，6-H)，3.81(1H，dd，J 16.4 & 3.7Hz，6-H)，4.70(2H，s，PhCH2)，5.80(1H，br s，5-H)和7.20-7.45(6H，m，2-H和Ar-Hs).[實(shí)測值M+，274(NH3DCI).C14H14N2O2S要求M，274]。
實(shí)施例58 (5RS)-N，N-二乙基青霉-2-烯-3-甲酰胺采用實(shí)施例56的方法，用二乙胺制備青霉烯酰二乙胺(24%)無色膠;νmax(CHCl3)3000，2950，1800，1620和1550cm-1;δH(CDCl3)1.19(6H，t，J 7.1Hz，NCH2CH3)，3.46(4H，d，J 7.1Hz，NCH2CH3)，3.58(1H，ddd，J 16.0，2.0 & 1.2Hz，6-H)，3.82(1H，ddd，J 16.6，3.9 & 0.6Hz，6-H)，5.82(1H，dd，J，3.9 & 2.0Hz，5-H)和6.82(1H，s，2-H).[實(shí)測值M+，226(EI).C10H14N2O2S要求M，226]。
實(shí)施例59 (5RS)-N-(4-甲氧苯基)青霉-2-烯-3-甲酰胺采用實(shí)施例56的方法，用茴香胺生產(chǎn)青霉烯酰胺，產(chǎn)率49%;m.p.129-132℃(乙酸乙酯/己烷);νmax(CHCl3)3420，3010，2960，2940，2850，1785，1670，1600，1575和1515cm-1;δH(CDCl3)3.71(1H，ddd，J 16.9，1.9 & 1.1Hz，6-H)，3.80(3H，s，OCH3)，3.91(1H，ddd，J 16.9，3.9 & 0.6Hz，6-H)，5.90(1H，dd，J 3.9 & 1.9Hz，5-H)，6.87(2H，d，J 9.0Hz，Ar-H)，7.21(1H，s，2-H)，7.48(1H，d，J 9.0Hz，Ar-H)和8.21(1H，br s，NH).[實(shí)測值C，56.7;H，4.4;N，10.6%;M+，276(EI).C13H12N2O3S要求C，56.5;H，4.4;N，10.2%;M，276]。
實(shí)施例60 N-[(5RS)-青霉-2-烯-3-羰基]嗎啉采用實(shí)施例56的方法，由嗎啉制備青霉烯酰胺無色膠;νmax(CHCl3)3000，2980，2940，2870，1795，1620和1550cm-1;δH(CDCl3)3.61(1H，dt，J 15.9 & 2.0Hz，6-H)，3.60-3.85(8H，m，嗎啉-H′s)，3.84(1H，dd，J 15.9 & 3.9Hz，6-H)，5.83(1H，dd，J 3.9 & 2.0Hz，5-H)和6.97(1H，s，2-H).[實(shí)測值M+，240(EI).C10H12N2O3S要求M，240]。
實(shí)施例61 (5RS)-N-(吡啶-3-基甲基)青霉-2-烯-3-甲酰胺采用實(shí)施例56的方法，由3-吡啶甲胺制備青霉烯酰胺無色固體(30%);m.p.146℃(分解);νmax(CHCl3)3430，3000，1790，1665，1580和1520cm-1;δH(CDCl3)3.66(1H，ddd，J 16.8，2.0 & 0.8Hz，6-H)，3.86(1H，dd，J 16.8 & 3.8Hz，6-H)，4.52和4.61(2H，2dd，J 17.0 & 5.9Hz，NCH2)，5.84(1H，dd，J 3.8 & 2.0Hz，5-H)，6.88(1H，v，br，NH)，7.18(1H，s，2-H)，7.29(1H，dd，J 8.0 & 4.6Hz，pyr 5-H)，7.70(1H，br d，J 8.0Hz，pyr 4-H)，8.53(1H，d，J 4.6Hz，pyr 6-H)和8.58(1H，d，J 1.0Hz，pyr 2-H).[實(shí)測值C，55.4;H，4.0;N，15.7%;M+，261.0571].C12H11N3O2S要求C，55.2;H，4.2;N，16.1%;M，261.0572]。
實(shí)施例62 3-[(5RS)青霉-2-烯-3-羰基氨基]丙酸甲酯采用實(shí)施例56的方法，用β-氨基丙酸甲酯(通過由其鹽酸鹽與三乙胺的四氫呋喃溶液一起攪拌1小時制備)制備標(biāo)題酰胺無色膠，產(chǎn)率37%;νmax(CHCl3)3440，3000，2960，1795，1740，1665，1580和1520cm-1;δH(CDCl3)2.60(2H，t，J 6.1Hz，CH2CO)，3.62(2H，q，J 6.1Hz，CH2N)，3.63(1H，d，J 16.6Hz精細(xì)的偶合，6-H)，3.72(3H，s，OCH3)，3.86(1H，dd，J 16.6 & 3.9Hz，6-H)，5.82(1H，dd，J 3.9 & 2.0Hz，5-H)，6.90(1H，br，NH)和7.11(1H，s，2-H).實(shí)測值M+256.0517.C10H12N2O4S要求256.0518。
實(shí)施例63 (5RS)-N-叔丁基青霉-2-烯-3-甲酰胺采用實(shí)施例56的方法，由叔丁胺制備青霉烯叔丁酰胺，產(chǎn)率19%;m.p.116-119℃;νmax(CHCl3)3420，2980，1780，1660，1580和1520cm-1;δH(CDCl3)1.40(9H，s，t-丁基)，3.63(1H，d，J 16.6Hz精細(xì)的偶合，6-H)，3.83(1H，dd，J 16.6 & 3.8Hz，6-H)，5.82(1H，dd，J 3.8 & 2.0Hz，5-H)，6.37(1H，brs，NH)和7.02(1H，s，2-H).實(shí)測值C，52.5;H，6.3;N，12.2%.C10H14N2O2S要求C，53.1;H，6.3;N，12.4%。
實(shí)施例64 (5RS)-2-芐基青霉烯-3-羧酸芐酯采用與實(shí)施例26相似的方法制備標(biāo)題化合物。δH(CDCl3)3.43(1H，dd，J 16.4 & 1.6Hz，6-H)，3.73(1H，dd，J 16.4 & 3.9Hz，6-H)，4.11 & 4.22(2H，ABq，J 15.3Hz，2-CH2)，5.25 & 5.35(2H，ABq，J 12.5Hz，OCH2)，5.57(1H，dd，J 3.9 & 1.6Hz，5-H)，7.20-7.47(10H，m，Ar-Hs).實(shí)測值M+，351.0921.C20H17NO3S要求M，351.0929。
實(shí)施例65 (5S，6S)-6-[(R)-1-(氨基甲酰氧基)乙基]青霉烯-3-羧酸烯丙酯將(5S，6S)-6-[(R)-1-羥乙基]青霉烯-3-羧酸烯丙酯(100mg)溶于乙酸乙酯(0.3ml)和異氰酸三氯乙酰酯(0.3ml)中并放置5小時。用乙酸乙酯(20ml)稀釋該混合物，并用碳酸氫鈉溶液洗滌、干燥并蒸發(fā)。將殘余物的氯仿溶液裝入二氧化硅柱，用乙酸乙酯/己烷1∶1慢慢洗脫，得到標(biāo)題化合物固體(95mg)。從乙酸乙酯/己烷中結(jié)晶得到無色針狀物，m.p.161-3℃;[α]21D-290°(c 0.7;CHCl3);νmax(KBr)3439，3357，3291，3211，1776，1717，1661，1620，1553cm-1;δH(CDCl3)1.54(3H，m，J 6.3Hz)，4.06(1H，dd，J 9.8 & 3.6Hz)，4.60(2H，寬s)，4.6-4.8(2H，m)，5.1-5.4(3H，m)，5.83(1J，d，J 4Hz)，5.8-6.1(1H，m)，7.32(1H，d，J 0.8Hz);λmax(C2H5OH)254nm(ε2856)，312nm(ε7788);m/z(FAB，基質(zhì) 3-NOBA/Na)321(MNa+，65%)。
實(shí)施例66 (5S，6S)-6-[(R)-1-苯甲酸乙基]青霉烯-3-羧酸烯丙酯將(5S，6S)-6-[(R)-1-羥乙基)青霉烯-3-羧酸烯丙酯(100mg)溶于二氯甲烷(5ml)中，攪拌并冰冷。用三乙胺(0.42ml)、4-二甲氨基吡啶(催化量)和苯甲酰氯(0.33ml)處理該溶液并在室溫攪拌2小時。用乙酸乙酯(50ml)稀釋該產(chǎn)物，并用0.5N HCl(50ml)、水和NaHCO3溶液洗滌，干燥并蒸發(fā)。在二氧化硅對殘余物進(jìn)行色譜，用乙酸乙酯/己烷混合物洗脫，得到標(biāo)題化合物(83mg)。從乙酸乙酯/己烷中結(jié)晶得到無色針狀物m.p.146-8℃;[α]22D-283°(c 0.5;CHCl3);νmax(KBr)1791，1702，1649，1554cm-1;δH(CDCl3)1.67(3H，d，J 6.3Hz)，4.23(1H，dd，J 9.8 & 4Hz)，4.6-4.8(2H，m)，5.2-5.5(2H，m)，5.5-5.7(1H，m)，5.91(1H，d，J 4Hz)，5.9-6.1(1H，m)，7.33(1H，s)，7.4-7.7(3H，m)，7.9-8.1(2H，m);λmax(C2H5OH)229nm(ε14975)，313nm(ε7150).實(shí)測值C，60.2;H，4.7;N，4.0;S，8.7%C18H17NO5S要求C，60.2;H，4.8;N，3.9;S，8.9%。
實(shí)施例67(5S，6S)-6-[(R)-1-甲氧乙基]青霉烯-3-羧酸烯丙酯將(5S，6S)-6-[(R)-1-羥乙基]青霉烯-3-羧酸烯丙酯(50mg)溶于硝基甲烷(2ml)中，冰冷，強(qiáng)烈攪拌并用無水、粉末狀的碳酸鈉(375mg)和氟碘酸三甲氧鎓(250mg)處理。5小時后，混合物經(jīng)硅藻土過濾，用二氯甲烷(20ml)稀釋，用NaHCO3溶液洗滌，干燥并蒸發(fā)。在二氧化硅上對殘余物進(jìn)行色譜，用乙酸乙酯/己烷混合物洗脫，得到標(biāo)題化合物無色膠(9mg)。[α]21D-210°(c 0.9;CHCl3);νmax(CHCl3)1790，1710，1650，1555cm-1;δH(CDCl3)1.40(3H，d，J 5.6Hz)，3.32(3H，s)，3.7-4.0(2H，m)，4.6-4.9(2H，m)，5.2-5.5(2H，m)，5.81(1H，d，J 3.7Hz)，5.85-6.05(1H，m)，7.32(1H，s);λmax(C2H5OH)253nm(ε2693)，314nm(ε6520).m/z(E.I.)269(M+，10%);m/z(NH3CI.)270(MH+，80%)，287(MNH+4，100%)。
實(shí)施例68 (5S，6S)-6-[(R)-1-[(N-(芐氧羰基)-(S)-丙氨酰)氧基]乙基]青霉烯-3-羧酸烯丙酯將(5S，6S)-6-[(R)-1-羥乙基]青霉烯-3-羧酸烯丙酯(50mg)，N-(芐氧羰基)-L-丙氨酸(180mg)和4-二甲氨基吡啶(24mg)溶于二氯甲烷(1ml)中，冷卻至-15℃并用二環(huán)己基碳二亞胺(165mg)處理。將混合物攪拌0.5小時，用乙酸乙酯(20ml)稀釋，用0.5N HCl、水和NaHCO3溶液洗滌、干燥并蒸發(fā)。在二氧化硅上對殘余物進(jìn)行色譜，用乙酸乙酯/己烷1∶3洗脫。蒸發(fā)含有產(chǎn)物的部分，將殘余物溶于乙酸乙酯/己烷1∶3(3ml)中，然后過濾除去固體副產(chǎn)物。蒸發(fā)濾液得到標(biāo)題化合物無色膠(54mg)。νmax(CHCl3)3420，1790，1715，1650，1560，1510cm-1;δH(CDCl3)1.40(3H，d，J 7.2Hz)，1.50(3H，d，J 6.2Hz)，4.06(1H，dd，J 10.1 & 3.8Hz)，4.28(1H，五重峰，J 7.2Hz)，4.6-4.8(2H，m)，5.11(2H，s)，5.15-5.45(4H，m)，5.78(1H，d，J 3.8Hz)，5.8-6.1(1H，m)，7.29(1H，s)，7.35(5H，s);m/z(FAB，基質(zhì)3-NOBA/Na)483(MNa+，55%)。
實(shí)施例化合物描述于以下文獻(xiàn)中GB2037277 實(shí)施例9、31、48J.Chem.Soc.Chem.Commun 1988，544-實(shí)施例2ZA8504947-實(shí)施例36GB2036015-實(shí)施例4，5，46，47US4282236-實(shí)施例31在這些文獻(xiàn)中沒有公開這些化合物的抗菌活性。
生物活性細(xì)菌引導(dǎo)肽酶1的抑制作用說明引導(dǎo)肽酶1(CP1)分裂基于與麥芽糖預(yù)結(jié)合蛋白(pre-MBP)的九肽(H-Phe-Ser-Ala-Ser-Ala-Leu-Ala-Lys-Ile-NH2)成為七肽(H-Phe-Ser-Ala-Ser-Ala-Leu-Ala-O-)和二肽殘基(Ⅰ)。通過反相梯度HPLC檢測九肽底物和七肽分裂產(chǎn)物。用LP1抑制劑終止或減慢基于pre-MBP的肽的分裂。
分析用HPLC級H2O制備所有溶液。按順序混合下列成份<
>＊當(dāng)使用除水之外的溶劑溶解該化合物時，將與試驗樣品中相同體積的溶劑加至對照肽或?qū)φ辗治鲋小?br> ＊對兩份完全相同的該實(shí)驗化合物樣品進(jìn)行分析，以測定平均活性減少。
＊從帶有質(zhì)粒pRD8(2)的菌株制備細(xì)菌引導(dǎo)肽酶，并按照Wolf等人1982(3)的方法進(jìn)行分離。
在37℃將樣品預(yù)熱5分鐘。
向每份樣品中加入在50mM三乙醇胺(pH8.0)中的5μl 1mM底物肽、1mM EDTA，1%tritonX-100(終體積＝20μl)。
在37℃水浴中保溫樣品2小時。
將樣品離心3秒鐘后，向每份樣品中加入20μl0.1%TFA以終止反應(yīng)。
將樣品離心5分鐘。盡管可以將樣品在分析前置于-20℃保藏，但是優(yōu)選立即在HPLC上對該樣品進(jìn)行分析。
HPLC分析按如下條件建立HPLC柱 Beckman 5μm C18 0.2×15cm溶劑 A＝H2O/0.1%TFAB＝CH3CN/0.08%TFA吸光度 215nm流速 0.2ml/分鐘梯度 15%B平衡15%-20%B在起始時20%-46%B13分鐘46%-90%B0.1分鐘注射 10μl
結(jié)果該化合物的活性以LP1活性減少的平均%表示。當(dāng)產(chǎn)物峰面積的減少與底物峰面積的增加相對應(yīng)時，以相對于對照的產(chǎn)物峰面積的減少計算該數(shù)值。
采用此方法，測得青霉烯-3-羧酸芐酯的兩個對映體和外消旋物(實(shí)施例1、3和4)的結(jié)果如下
因此結(jié)論是，由外消旋物觀察到的LP1抑制特性是由5S異構(gòu)體引起的。
(1)Dev，I.K.P.H.Ray &amp; P.Novak(J.Biological Chemistry 1990，265，(33)，p 20069).
(2)Dalbey，R.E.&amp; W.Wickner(J.Biological Chemistry 1985，260 p 15925
(3)Wolfe，P.B.，P.Silver &amp; W.Wickner(J.Biological Chemistry 1982，257 p 7898).
質(zhì)粒pRD8由Prof.W.Wickner-UCLA得到。
測示實(shí)施例化合物的抗引導(dǎo)肽酶(Ⅰ)抑制作用。測示結(jié)果列于下表
權(quán)利要求
1.通式(Ⅰ)5S青霉烯化合物的應(yīng)用
其中n是0或1，R2是氫或取代基，R3是酯或酰胺形成基團(tuán)，R1是氫或通過碳連接的有機(jī)基團(tuán)并且其中5S異構(gòu)體形式(作為細(xì)菌酶引導(dǎo)肽酶1的抑制劑)的-COR3基團(tuán)對于體內(nèi)水解基本穩(wěn)定。
2.按照權(quán)利要求1的應(yīng)用，其中R2是氫或通過碳、氧或硫原子連到青霉烯環(huán)2-位上的有機(jī)基團(tuán)。
3.按照權(quán)利要求2的應(yīng)用，其中R2是氫、羥甲基、羥乙基硫、苯基或氨基羰基氧甲基。
4.按照權(quán)利要求1至3任何之一的應(yīng)用，其中R3是芳氧基或任選取代的(C1-10)烷氧基，所說的任選取代基可以是鹵素或選自(C1-6)烷基羰基，(C1-6)烷氧羰基、(C1-10)烷氧基取代的(C1-10)烷氧基、芳基或雜環(huán)基的有機(jī)基團(tuán)。
5.按照權(quán)利要求4的應(yīng)用，其中R3是芐氧基、對硝基芐氧基、對甲氧基芐氧基、2，2，2-三氯乙氧基、甲氧基、對(甲氧羰基)芐氧基或烯丙基氧。
6.按照權(quán)利要求1至3任意之一的應(yīng)用，其中R3是NR52，其中每個R5可以相同或不同并且獨(dú)立地?fù)褡詺洹⒎蓟蛉芜x取代的(C1-6)烷基、兩個R5部分還可以是含氮雜環(huán)的殘基，或者NR52是氨基酸殘基。
7.按照權(quán)利要求6的應(yīng)用，其中R3是吡咯烷基。
8.按照任何上述權(quán)利要求的應(yīng)用，其中R1是氫或選自任意取代的(C1-6)烷基，任選取代的(C1-6)鏈烯基和C1-6鏈烷?；娜〈?。
9.按照權(quán)利要求8的應(yīng)用，其中R1是在1-位通過借助于氧連接的取代基取代的C1-4烷基。
10.按照權(quán)利要求9的應(yīng)用，其中R1是羥基、(C1-5)烷氧基、氨基羰氧基、苯甲酸基、或任選取代的(C1-6)鏈烷酰氧基。
11.按照權(quán)利要求10的應(yīng)用，其中R1是氫、1-乙酰氧基或1-羥乙基。
12.按照權(quán)利要求9至11之一的應(yīng)用，其中在1-位上的碳原子是手性的，其立體化學(xué)式如下
13.權(quán)利要求1所定義的式(Ⅰ)化合物的應(yīng)用，是藥劑制造，該藥劑通過細(xì)菌酶引導(dǎo)肽酶1的抑制機(jī)理用于治療細(xì)菌感染。
14.通過細(xì)菌酶引導(dǎo)肽酶1的抑制機(jī)理治療哺乳動物細(xì)菌感染的方法，該方法包括對需要該治療的哺乳動物施用有效量的在權(quán)利要求1中定義的式(Ⅰ)化合物。
15.一種藥物組合物，該組合物包括在權(quán)利要求1中定義的式(Ⅰ)化合物，其中當(dāng)R3是氨基或二低級烷基氨基時R2不是S-連接的有機(jī)基團(tuán)，并且其中化合物不是(5RS)-2-甲基青霉烯-3-羧酸芐酯，及可藥用載體。
16.在權(quán)利要求1中定義的，用作活性治療物質(zhì)的式(Ⅰ)化合物，其中當(dāng)R3是氨基或二低級烷基氨基時R2不是S-連接的有機(jī)基團(tuán)，并且其中化合物不是(5RS)-2-甲基青霉烯-3-羧酸芐酯。
17.在權(quán)利要求1中定義的式(Ⅰ)化合物，該化合物是酰胺，其中當(dāng)R3是氨基或二-低級烷基氨基時R2是非S-連接的有機(jī)基團(tuán)。
18.在權(quán)利要求1中定義的式(Ⅰ)化合物選自(5S)-青霉烯-3-羧酸芐酯(5RS)-青霉烯-3-羧酸對甲氧基芐酯(5RS)-青霉烯-3-羧酸三氯乙酯(5RS)-青霉烯-3-羧酸烯丙酯(5S)-青霉烯-3-羧酸對硝基芐酯(5S)-青霉烯-3-羧酸甲酯(5RS)-青霉-2-烯-3-羧酸4-(甲酯基)芐酯(5RS)-青霉-2-烯-3-羧酸4-[(4-硝基芐基)氧基羰基]芐酯4-[[(5RS)-青霉-2-烯-3-羰基]氧甲基]苯甲酸鈉(5RS)-青霉-2-烯-3-羧酸正戊酯(5RS)-青霉-2-烯-3-羧酸4-苯基丁酯(5RS)-青霉-2-烯-3-羧酸3-(甲酯基)芐酯(5RS)-青霉-2-烯-3-羧酸2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯(5RS)-青霉-2-烯-3-羧酸4-溴芐酯(5RS)-青霉-2-烯-3-羧酸(7-甲氧基-2-氧代-2H-1-苯并吡喃-4-基)甲酯(5RS)-青霉-2-烯-3-羧酸甲氧基甲酯(5S)-青霉-2-烯-3-羧酸甲氧基甲酯(5RS)-6-(1-乙酰氧乙基)青霉烯-3-羧酸烯丙酯(5RS，6RS)-6-[(SR)-1-乙酰氧乙基]-2-(2-羥基乙基硫)青霉烯-3-羧酸對硝酸芐酯(5RS)-2-苯基青霉烯-3-羧酸甲酯(5RS)-2-(4-甲氧苯基)青霉烯-3-羧酸甲酯(5RS)-2-(4-氯苯基)青霉烯-3-羧酸甲酯(5RS)-2-(4-甲酯基苯基)青霉烯-3-羧酸甲酯(5RS)-2-芐基青霉烯-3-羧酸甲酯(5RS)-2-(氨基甲酰氧基甲基)青霉烯-3-羧酸芐酯(5RS)-2-(氨基甲酰氧基甲基)青霉烯-3-羧酸甲酯(5RS)-2-苯基青霉烯-3-羧酸芐酯(5RS)-2-(4-氯苯基)青霉烯-3-羧酸芐酯(5RS)-2-甲基青霉烯-亞砜-3-羧酸芐酯(5RS)-2-(甲氧基甲氧基甲基)青霉烯-3-羧酸對硝基芐酯(5RS)-2-(4-硝基芐基氧基羰基氨甲基)青霉烯-3-羧酸丙酮酯(5RS)-2-(4-硝基芐基氧基羰基氨甲基)青霉烯-3-羧酸對硝基芐酯(5S，6S)-6-[1-(R)-羥乙基]青霉烯-3-羧酸烯丙酯(5SR，6RS)-6-乙基青霉烯-3-羧酸烯丙酯(5RS，6SR)-6-乙基青霉烯-3-羧酸烯丙酯(5RS，6SR)-6-[(RS)-1-乙酰氧基乙基]青霉烯-3-羧酸烯丙酯(5S)-2-苯基青霉烯-3-羧酸甲酯(5S，6S，8R)-2-羥甲基-6-(1-羥乙基)青霉烯-3-羧酸對硝基芐酯(5S，6S)-6-[(R)-1-乙酰氧基乙基]青霉烯-3-羧酸烯丙酯(5RS)-2-(羥甲基)青霉烯-3-羧酸甲酯(5RS，6RS)和(6RS，6SR)-2-乙基硫-6-乙基青霉烯-3-羧酸4-硝基芐酯(5RS，6SR)-6-[(SR)-1-乙酰氧基乙基]-2-(乙基硫)青霉烯-3-羧酸4-硝基芐酯N-芐基(5RS)-青霉烯-3-甲酰胺1-[(5RS)-青霉-2-烯-3-羰基]吡咯烷(5RS)-N-苯基青霉-2-烯-3-甲酰胺(5RS)-N-芐基-N-甲基青霉-2-烯-3-甲酰胺(5RS)-N，N-二乙基青霉-2-烯-3-甲酰胺(5RS)-N-(4-甲氧苯基)青霉-2-烯-3-甲酰胺N-[(5RS)-青霉-2-烯-3-羰基]嗎啉(5RS)-N-(吡啶-3-基甲基)青霉-2-烯-3-甲酰胺3-[(5RS)-青霉-2-烯-3-羰基氨基]丙酸甲酯(5RS)-N-叔丁基青霉-2-烯-3-甲酰胺(5RS)-2-芐基青霉烯-3-羧酸芐酯(5S，6S)-6-[(R)-1-(氨基甲?；趸?乙基]青霉烯-3-羧酸烯丙酯(5S，6S)-6-[(R)-1-苯甲酰氧基乙基]青霉烯-3-羧酸烯丙酯(5S，6S)-6-[(R)-1-甲氧基乙基]青霉烯-3-羧酸烯丙酯(5S，6S)-6-[(R)-1-[(N-(芐氧基羰基)-(S)-丙氨酰)氧基乙基]青霉烯-3-羧酸烯丙酯
19.按照權(quán)利要求1的應(yīng)用，其中式(Ⅰ)化合物按權(quán)利要求18定義或選自(5RS)-青霉烯-3-羧酸甲酯(5RS)-青霉烯-3-羧酸芐酯(5RS)-青霉烯-3-羧酸對硝基芐酯(5RS)-2-(羥甲基)青霉烯-3-羧酸對硝基芐酯(5RS)-2-(羥甲基)青霉烯-3-羧酸芐酯(5RS)-2-甲基青霉烯-3-羧酸芐酯(5RS)-2-(乙基硫)青霉烯-3-羧酸對硝基芐酯(5RS)-2-(甲基硫)青霉烯-3-羧酸芐酯(5RS)-2-(叔丁基二苯基甲硅烷氧基甲基)青霉烯-3-羧酸芐酯
20.制備權(quán)利要求1的式(Ⅰ)新化合物的方法，該方法包括式(Ⅱ)化合物的環(huán)化作用
其中R21是R2或者是可以被轉(zhuǎn)化成R2或被R2替代的取代基，R31是R3或者可以被轉(zhuǎn)化成R3或被R3替代的取代基，R11是R1或可轉(zhuǎn)化成R1的基團(tuán)，其中R2，R3和R1定義如式(Ⅰ)，R81是有機(jī)基團(tuán)。
全文摘要
通式(I)5S青霉烯化合物的應(yīng)用其中n是0或1，R是氫或取代基，R
文檔編號C07D499/88GK1095721SQ93116820
公開日1994年11月30日 申請日期1993年7月27日 優(yōu)先權(quán)日1992年7月29日
發(fā)明者R·索思蓋特, S·考爾頓, T·C·施梅爾, A·E·阿爾索, S·D·麥克里思 申請人:史密絲克萊恩比徹姆有限公司