專利名稱：壬四烯酸衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明包括具有下式的化合物(全-E)-3，7-二甲基-9-[3，5-二甲基-2-(壬氧基)-苯基]-2，4，6，8-壬四烯酸和其可藥用鹽及其可藥用的可水解酯。
本發(fā)明還包括在用于減少皮酯分泌和預(yù)防或治療與皮脂有關(guān)的疾病如痤瘡的藥物組合物制造中的藥物組合物和使用式Ⅰ化合物的方法、其可藥用鹽及其可藥用的可水解酯。已知抑制皮脂的產(chǎn)生和/或分泌是治療和/或預(yù)防疾病例如痤瘡的有效方法。由皮脂分泌增多引起的疾病還包括皮膚病癥例如皮脂溢，它包括皮屑、油性皮膚、油性發(fā)質(zhì)、粟粒疹、黑頭粉刺。
根據(jù)本發(fā)明，在治療各種類型的痤瘡例如炎性的和非炎性的痤瘡中，局部給藥和口服式Ⅰ的化合物，其可藥用鹽及其可藥用的可水解酯是有效的。
在可藥用的制劑中，式Ⅰ化合物的可藥用鹽包括本領(lǐng)域中任何化學(xué)上可允許的且可用于人類患者的鹽?？梢允褂檬舰窕衔锏娜魏未祟惓Ｒ?guī)的可藥用鹽。在這類可用的常規(guī)鹽中有堿鹽，包括例如堿金屬鹽(如鈉鹽或鉀鹽)、堿土金屬鹽(如鈣鹽或鎂鹽)及銨鹽或烷基銨鹽。
依據(jù)本發(fā)明，式Ⅰ化合物可以以其可藥用的可水解酯的形式給藥。依據(jù)本發(fā)明的可水解酯是一種在生理條件下水解得到式Ⅰ化合物的酯。在本發(fā)明的組合物和方法中，可使用式Ⅰ化合物的任何可藥用的可水解酯。這類酯中有芳族酯例如芐基酯(OBzl)或低級烷基、鹵素、硝基、硫或取代的硫(即低級烷基、叔丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基和9-芴基甲基)取代的芐基。
可以采用本領(lǐng)域已知的常規(guī)方法來制備式Ⅰ化合物和其可藥用鹽及可水解酯。更具體地說，可以通過包括下述方法在內(nèi)的方法來制備式Ⅰ化合物和其可藥用鹽及可水解酯在Wittig反應(yīng)條件下使式Ⅱ化合物與式Ⅲ化合物反應(yīng)，并且如果需要，水解該烷基酯基以得到式Ⅰ羧酸化合物。
其中Ph是苯基且X-是一種陰離子， 式Ⅰ化合物的可藥用的可水解酯可以由式Ⅰ化合物通過常規(guī)方法制備，例如使式Ⅰ化合物與一種醇反應(yīng)。
下面將更詳細地描述式Ⅰ化合物及其酯和鹽的制備
實施例1第一步2-羥甲基-4，6-二甲基苯酚(1)的制備將24.4g2，4-二甲基苯酚、2.44g粉末Na2CO3、7.8g多聚甲醛和7.8g異丙醇的混合物在90-100℃(浴溫)攪拌5小時。冷卻至室溫后，將該混合物傾倒入200ml 1N NaOH中并用4×50ml＝200ml的二氯甲烷(Fisher)洗。該合并的二氯甲烷洗滌液以20ml水反萃取。該合并的水層用20ml濃HCl(Fisher)酸化并用100ml+25ml＝125ml二氯甲烷萃取。將該合并的二氯甲烷萃取液用50ml鹽水洗，用Na2SO3干燥并在50℃、高真空下濃縮至干，得到22.0g(72.4%)棕色油狀粗品(1)。
第二步2-(壬氧基)-3，5-二甲基苯甲醇(2)的制備將22.0g粗品(1)、24.7ml1-溴壬烷、5.79ml氫氧化鈉和100ml的異丙醇回流過夜。然后加入100ml水和100ml己烷，且環(huán)己烷層用20ml 1N NaOH洗，并用50ml己烷萃取合并的水層。再后，以100ml+2×50ml＝200ml的95%甲醇萃取合并的己烷溶液。濃縮合并的甲醇萃取液。用100ml甲苯共沸除去殘余的水。50℃高真空度下干燥殘余物得到28.1g棕色油狀粗品(2)。
第三步1-(氯甲基)-3，5-二甲基-2-(壬氧基)苯(3)的制備將28.1g(2)、28ml異丙醇和42ml濃HCl溫和地回流過夜，將該混合物冷至室溫并以140ml己烷和140ml水稀釋。有機層再用140ml水洗。然后，該有機層以4×50ml＝200ml 90%含水甲醇洗。該己烷溶液用Na2SO4干燥并在室溫高真空度下濃縮至干，得到27.6g褐色油狀物(3)。
第四步(全-E)-3，7-二甲基-9-[3，5-二甲基-2-(壬氧基)-苯基]-2，4，6，8-壬四烯酸乙基酯(5)的制備將27.6g(3)、21.9g三苯基膦和93ml甲苯回流過夜。用冰水浴冷卻該混合物，然后在15分鐘內(nèi)加入74.4ml 1.0M的叔丁醇鉀(0.8當量)的叔丁醇溶液，將得到的深紅色懸浮液于室溫攪拌1小時。冷至-10℃后，在15ml甲苯的幫助下加入15.5g7-甲酰-3-甲基-辛-2，4，6，-三烯-1-酸乙基酯(4)(使用前在高真空度下干燥)。去掉冷水浴。將該混合物在室溫下攪拌3小時。
該反應(yīng)混合物用2×100ml＝200ml水洗。該合并的水層用50ml甲苯反萃取。用Na2SO3干燥后，合并的甲苯溶液在低于35℃高真空度下濃縮至干。殘渣用200ml己烷、200ml甲醇和20ml水的混合物重新溶解。甲醇層用2×100ml＝200ml己烷反萃取。合并的己烷溶液在低于35℃高真空度下濃縮至干得到紅色油狀物粗品(5)。將該粗品溶在100ml乙醇中。用冰水浴冷卻后，加入(5)的晶種。將得到的懸浮液于冰箱存放過夜。過濾黃色沉淀并用100ml冷的95%乙醇洗滌。于室溫高真空度下干燥得到21.64g黃色固體(5)。
第5步(全-E)-3，7-二甲基-9-[3，5-二甲基-2-(壬氧基)-苯基]-2，4，6，8-壬四烯酸(Ⅰ)的制備將21.6g(5)、216ml乙醇和19.1ml(191mmol)10N NaOH回流20分鐘。移去熱源后，將反應(yīng)瓶浸入水浴并在混合物仍溫?zé)釙r加入19.1ml乙酸。該混合物冷至室溫后加入晶種，并用冰水浴冷卻該混合物。攪拌30分鐘后，將得到的黃色懸浮液存置冰箱過夜。過濾黃色固體并以100ml冷的90%含水乙醇洗滌。高真空度下干燥得17.84g黃色固體粗品(Ⅰ)。將該粗品懸浮于357ml乙醇中。然后加入4.5ml濃NH4OH。待固體溶解后，加入4.5ml乙酸。得到的懸濁液存置于冰箱中過夜。濾出黃色固體并用100ml冷的95%含水乙醇洗滌，在室溫高真空度下干燥得到15.3g黃色固體(Ⅰ)(經(jīng)HPLC分析純度為98.2%)。將該固體再懸浮于306ml乙醇中。然后加入3.8ml濃NH4OH。待固體溶解后再加入3.8ml乙酸。得到的懸濁液存置于冰箱中過夜。濾出黃色固體，用100ml冷的95%含水乙醇洗滌，并在室溫高真空度下干燥過夜得到13.56g黃色固體(Ⅰ);經(jīng)HPLC分析純度為98.9%。
(注意類維生素A(retinoids)化合物，特別是其溶液應(yīng)盡可能避光保存)依據(jù)本發(fā)明，上述式Ⅰ化合物或其可藥用鹽和其可藥用的可水解酯(總稱為本發(fā)明的活性成份)能夠提供用于減少皮脂分泌和降低痤瘡損害的方法，因而通過施用這些活性成份的可藥用的口服或局部用組合物，作為預(yù)防或治療疾病(如痤瘡)的手段和方式。本發(fā)明的這些藥物組合物包括所述本發(fā)明的活性成份與可相容的可藥用載體物質(zhì)結(jié)合。任何常規(guī)的載體物質(zhì)均可使用。這些載體物質(zhì)可以是適于口服給藥的有機或無機的惰性載體物質(zhì)。合適的載體包括水、明膠、阿拉伯膠、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、滑石粉、植物油、聚(亞烷基)二醇、凡士林等。而且，該藥物制劑可含有其它藥物活性物質(zhì)。根據(jù)藥物配方實踐，可加入另外的添加劑，例如調(diào)味劑、防腐劑、增溶劑、乳化劑、緩沖劑等。
該藥物制劑可制成任何常規(guī)的形式，包括(a)適于口服給藥的固體形式，例如片劑、膠囊劑、丸劑、粉劑、粒劑等;和(b)適于局部給藥的制劑，例如溶液劑、懸濁劑、軟膏劑、霜劑、凝膠劑、微粉劑、噴霧劑等。該藥物制劑可以是滅菌和和/或可以含有佐劑，例如防腐劑、增溶劑、潤濕劑、乳化劑、用改變滲透壓的鹽和/或緩沖劑。
用于皮膚局部給藥的上述組合物優(yōu)選制成軟膏劑、酊劑、霜劑、凝膠劑、溶液劑、洗劑、噴霧劑、懸濁劑、香波、發(fā)皂等。事實上，依據(jù)本發(fā)明，可以使用任何常規(guī)的組合物應(yīng)用于頭皮或皮膚。應(yīng)用含有本發(fā)明活性成份的組合物的優(yōu)選方法是以凝膠劑、洗劑或霜劑的形式使用本發(fā)明的活性成份。適于皮膚局部給藥的本發(fā)明藥物制劑可通過將本發(fā)明的上述活性成份與此類制劑中常用的無毒的、醫(yī)療上惰性的固體或液體載體混合來制備。這類制劑應(yīng)至少含有約0.01重量百分比的本發(fā)明活性成份(以組合物的總重計算)。由于本發(fā)明活性成份是相對無毒和無刺激性的，所以它在局部用組合物中的使用量可以超過0.2%。這類制劑優(yōu)選含有約0.01到0.2%重量百分比的本發(fā)明活性成份(以組合物總重計算)。還優(yōu)選每天對皮膚給藥一或兩次此類制劑?？筛鶕?jù)患者所需應(yīng)用此類制劑。在本發(fā)明的實施中，可以水溶液或醇溶液(如乙醇)的形式來使用本發(fā)明的活性成份。
在制備上述局部用組合物中可以用本領(lǐng)域中局部用制劑的藥物配方中常規(guī)的附加劑，例如防腐劑、增稠劑、芳香劑等。另外，可將常規(guī)的抗氧化劑結(jié)合到含有與上述本發(fā)明活性成份的局部用組合物中。可用在此類制劑中的常規(guī)的抗氧化劑包括N-甲基-α-生育酚胺(tocopherolamine)、生育酚類、丁基化羥基茴香醚、丁基化羥基甲苯、乙氧喹等。
根據(jù)本發(fā)明，可使用通常用于頭發(fā)的局部用制劑中的常規(guī)芳香劑和洗劑。而且，如果需要，在本發(fā)明的局部用制劑中可以使用常規(guī)的乳化劑。
含有本發(fā)明活性成份的軟膏劑可含有半固態(tài)石油烴和本發(fā)明活性成份的溶劑分散液的混合物。
含有本發(fā)明活性成份的霜劑優(yōu)選包括乳劑，該乳劑由以下三相組成，即濕潤劑、粘度穩(wěn)定劑和水的水相，脂肪酸醇、半固態(tài)石油烴和乳化劑的油相及含有分散于水性穩(wěn)定劑-緩沖液中的本發(fā)明活性成份的相組成的乳劑。局部用制劑中可以加入穩(wěn)定劑。依據(jù)本發(fā)明可以使用任何常用的穩(wěn)定劑。在油相中，脂肪酸醇組份作為穩(wěn)定劑。這些脂肪酸醇組份優(yōu)選由至少約14個碳原子的長鏈飽和脂肪酸還原得到。含有本發(fā)明活性成份的霜基藥物制劑可同例如含有脂肪酸醇、半固態(tài)石油烴、1，2-亞乙基二醇和乳化劑的水性乳液組成。
優(yōu)選的口服藥劑形式包括片劑、硬的或軟的明膠或甲基纖維素或其它易于在消化道中溶解的適宜材料的膠囊劑。根據(jù)本發(fā)明所考慮的口服劑量將依個體患者需求而變化，這將由處方醫(yī)師決定。然而，通常使用每日劑量為從約0.01mg到3ml/kg體重，優(yōu)選從約0.025mg到約1.5mg/kg患者體重。根據(jù)病人需求，該藥劑可以依照醫(yī)生決定的任何劑量方案給藥。
將本發(fā)明的活性成份以任何所需內(nèi)服劑量結(jié)合到口服單位劑量形式中也是本發(fā)明所考慮的范圍，然而，優(yōu)選以每劑含有約1mg到約50mg的本發(fā)明活性成份與適宜的醫(yī)療惰性填充劑和稀釋劑配成制劑。特別優(yōu)選的是將此類藥劑結(jié)合到軟明膠膠囊劑和片劑中。
根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明的活性成份表現(xiàn)出顯著的皮脂抑制和抗痤瘡活性，因此可用于上述減少皮脂分泌和治療痤瘡的藥物制劑。
適于治療的劑量一般依賴于給藥途徑，患者年齡，體重及痤瘡癥狀。
如下實施例2-4所述，在幾種痤瘡模型中試驗了本發(fā)明的化合物。在測試的全部劑量下均顯示沒有毒性。
實施例2體外試驗從成人的皮脂腺中分離皮脂細胞(該皮脂腺是由整容手術(shù)切除的面部皮膚得到的)，并于一層鼠3T3成纖維細胞(Rheinwald和Green，1975)上培養(yǎng)該皮脂細胞。該方法是根據(jù)Karasek(1986)的方法，并包括用電角膜刀選擇性切除表皮角化細胞，然后酶促和機械分離從皮脂腺得到的皮脂細胞(Doran等人，1991)。
在含有10%胎牛血清和4μg/ml地塞米松的Iscove′s培養(yǎng)基中培養(yǎng)皮脂細胞。
在未加試驗化合物時，將細胞接種于培養(yǎng)基中，然后在開始接種24-48小時后，在新鮮的培養(yǎng)基中加入試驗化合物。每48小時往培養(yǎng)物中加含有試驗化合物的新鮮培養(yǎng)基。在收集日，將該培養(yǎng)物用0.03%EDTA的PBS沖洗，以僅除去3T3成纖維細胞，然后在0.05%胰蛋白酶/0.03%EDTA中培養(yǎng)。將該細胞懸浮、充分混合來制備單細胞懸浮液并用血細胞計數(shù)器計數(shù)。
全部試驗化合物以下列方式進行處理。制備10-2M的DMSO溶液為貯液，存于-20℃暗處。貯液存放一個月后不再使用。試驗使用期間，將該溶液分為等份，移至室溫，并直接稀釋到全培養(yǎng)基中至適宜濃度使用。
用于試驗抑制體外皮脂細胞生長增殖的化合物濃度如下10-6、10-7、10-8和10-9M。下表(表1)顯示了50%抑制皮脂細胞增殖所必需的化合物的量(μm)(ED50)與僅以烯釋劑處理的對照培養(yǎng)物的比較結(jié)果。這些結(jié)果表明本發(fā)明的化合物抑制人皮脂細胞的增殖。
表1人皮脂細胞增殖的體外抑制化合物 ED50(μm)13-順式視黃酸 0.05化合物Ⅰ 0.01實施例3倉鼠耳皮脂腺分析重150-160g的Charles River Golden Syrian雄性倉鼠在運到后，施用化合物前房養(yǎng)一個月。給倉鼠飼喂含在丙二醇中的13-順式視黃酸或化合物Ⅰ，進行口服藥劑研究?；衔铫窈?3-順式視黃酸于4℃避光保存。每周配制新鮮溶液。
經(jīng)口服管給倉鼠飼服0.2ml藥液。給動物每日給藥共五天，停藥兩天，再給藥五天，直至服完20劑藥。在給藥開始和結(jié)束時對倉鼠稱重。
通過吸入CO2來處死倉鼠并切除其耳作組織學(xué)評價。一只耳以10%緩沖福爾馬林固定、經(jīng)石蠟包埋、切片并用蘇木精和曙紅(H&E)染色。通過使用Leitz TAS Plus系統(tǒng)進行影像分析來測定倉鼠耳的橫向切片中皮脂腺的面積。
數(shù)據(jù)給出的皮脂腺的平均面積為對照組(溶劑處理的)切片的30-40%。表2給出了該數(shù)據(jù)。這些結(jié)果表明當口服給藥時，本發(fā)明的化合物使原有的倉鼠耳皮脂腺減小。
表24周口服給藥化合物Ⅰ對倉鼠耳皮脂腺大小的影響劑量(mg/kg) 化合物 I 13-順式視黃酸降低% 降低%實驗10.5 -19 ND1.5 -27 ND5 -33 ND實驗20.5 -11ns -132.5 -18 -245 -24 -3410 -33 -30實驗3a. 載體=丙二醇0.5 -19 ND1.6 -27 ND6 -33 NDb. 載體=Labrafil0.6 -18 ND1.6 -26 ND5 -26 ND
c. 載體=吐溫800.5 -13 ND1.4 -13 ND6 -22 ND實施例4Rhino小鼠小囊分析實驗前，對雄性和雌性rhino小鼠稱重。為進行局部研究，將試驗化合物溶于100%丙酮中，并施用100μl于小鼠背部，一周五次，每日一次，共持續(xù)3周。為進行口服研究，將試驗化合物溶于100%丙二醇中，并經(jīng)口服管飼服100μl，一周五次，每天一次，共持續(xù)3周。在通過CO2吸入處死小鼠時，記錄其最終的體重。取下小鼠背部的皮，經(jīng)組織學(xué)方法處理后制得全量的組織。通過造影分析測定小囊的大小，該造影分析是在改裝的MACINTOSH計算機上使用Leitz TAS Plus系統(tǒng)或Ulrimage系統(tǒng)進行的。給出的數(shù)據(jù)為由溶劑處理的對照組織的%變化(表3和4)。這些結(jié)果證明當局部或口服給藥時，本發(fā)明的化合物使rhino小鼠小囊減小。
表3局部3周施用化合物對Rhino小鼠小囊大小的影響劑量(mg/kg) 化合物 I 13-順式視黃酸降低% 降低%實驗10.01 -10 -440.1 -42 -55
實驗20.001 -1 -270.01 -11 -580.1 -30 -61表4口服3周給藥化合物Ⅰ對Rhino小鼠小囊大小的影響劑量(mg/kg) 化合物 I 13-順式視黃酸降低% 降低%0.25 -23 -191.25 -23 -395 -28 -47下述實施例說明了本發(fā)明提供的含有式Ⅰ化合物的藥物制劑。
實施例5口服溶液劑配方1組份 mg/ml化合物Ⅰ 50mg乙醇胺 15mg無水乙醇 0.05ml卵磷脂150mg甘油單油酸酯 0.1ml
聚乙二醇化的杏/橄欖油2足量至1.0ml配方2組份 mg/ml化合物Ⅰ 50mg甘油單油酸酯 0.10ml10%氫氧化鈉乙醇溶液 0.05ml聚乙二醇400 足量至1.0ml配方3組份 mg/ml化合物Ⅰ 50丁基化的羥基茴香醚 1(Butylated Hydroxyanisol)中鏈的甘油三酯 足量至1ml配方4組份 mg/ml化合物Ⅰ 50mg二乙醇胺 15mg甘油 100mg丁基化的羥基茴香醚 1mg聚乙二醇400 足量至1ml
配方5組份 mg/ml化合物Ⅰ 50mg丁基化的羥基茴香醚 1mgLabrafil 1944 CS2足量至1ml實施例5膠囊配方:組份 mg/?；衔颕 10 40 80豆油 100.4 200.8 401.6精煉蜂蠟 7.5 15 30氫化豆絮片 7.5 15 30氫化菜油 26.5 53 106EDTA鈉鹽 0.5 1 2丁基化的羥基茴香醚 0.1 0.2 0.4162.5 325.0 650.0方法加熱第2項至約70℃，溶解第2，3，4，5和6項并混合直至得到均相溶液。冷卻至30℃。加入化合物Ⅰ并混合。裝入軟殼膠囊。
配方2組份 mg/?；衔颕 10 40 80無水乳糖 50 95 190玉米淀粉 50 40 80抗壞血酸棕櫚酸酯 2 5 10滑石粉 10 20 40122 200 400
方法混合第1，2，3，4和5項并過篩。將過篩的粉末混合物再混合5分鐘并裝入合適的膠囊中。
實施例6靜脈注射溶液劑配方1組份 mg/ml化合物Ⅰ 10mg無水乙醇 100mg聚乙烯吡咯烷酮(15KDa) 15mg氫氧化鈉2N 100mg丙二醇 200mg注射用水適量 1ml配方2組份 mg/ml化合物Ⅰ 10mg芐醇 50mg聚氧乙烯山梨糖醇單油酸酯 80mg乙醇 100mg聚乙二醇400 300mg磷酸鹽緩沖液(PH7.5) 足量至1ml
權(quán)利要求
1.式Ⅰ化合物、其可藥用鹽和其可藥用的可水解酯。
2.用作藥物的如權(quán)利要求1所要求的化合物。
3.一種制備如權(quán)利要求1所要求的化合物的方法，該方法包括在Wittig反應(yīng)條件下使式Ⅱ的化合物與式Ⅲ的化合物反應(yīng);并且，如果需要，水解除去烷基酯基得到式Ⅰ的羧酸， 其中Ph為苯基且X-是一種陰離子。
4.一種藥物組合物，它含有如權(quán)利要求1所述要求的化合物和可藥用載體。
5.如權(quán)利要求1所要求的化合物在制備適于減少皮脂分泌或預(yù)防痤瘡的藥物組合物中的用途。
6.如權(quán)利要求5的用途，其中藥物組合物是適于口服施用的。
7.如權(quán)利要求6的用途，其中藥物組合物在含有約1mg至約50mg所述化合物的單位劑量形式中。
8.如權(quán)利要求5的用途，其中藥物組合物是適于局部施用的。
9.如權(quán)利要求8的用途，其中所述組合物含有約0.01重量百分比至約0.2重量百分比的所述化合物。
全文摘要
用于減少皮脂分泌和治療痤瘡的式Ⅰ的化合物、其可藥用鹽和其藥用的可水解酯，及其口服或局部用組合物。
文檔編號C07C59/68GK1098086SQ9410018
公開日1995年2月1日 申請日期1994年1月5日 優(yōu)先權(quán)日1993年1月6日
發(fā)明者T·I·多蘭, M·羅森伯格, S·S·夏皮羅 申請人:霍夫曼-拉羅奇有限公司