專利名稱：一種防治心血管病的藥物組合物及其制備方法與用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種防治心血管病的藥物組合物及其制備方法與用途，具體地說，該藥物組合物可用于防治因缺血、缺氧引起的各種心腦血管疾病。
番紅花為鳶尾科植物，是一種古老名貴的植物藥，在我國醫(yī)藥名著《本草綱目》中記述番紅花“甘平無毒，主治心憂郁積，氣悶不散；久食令人心喜，又治驚悸。”國內(nèi)外大量研究說明番紅花主要成份為水溶性胡蘿卜素，亦稱番紅花總甙、番紅花素、西紅花總甙、西紅花素或梔子黃素，大量的動物實驗研究證明，如美國專利U.S.4,176,179；U.S.4,070,460，番紅花甙及其甙元能降低膽固醇、甘油三酯、防治動脈粥樣硬化，冠心病、治療腦水腫、骨髓損傷，乳頭瘤、關節(jié)炎及高血壓等。
八十年代前，我國所用的番紅花主要依賴進口，其國際市場價格一直成上升的勢頭，由15年前的200美元，突破至2000美元大關，故藥源奇缺，目前尚不能在工業(yè)生產(chǎn)中利用該物質(zhì)。
盡管梔子果實中含番紅花甙(中藥大辭典下冊1980頁)，但數(shù)十年來，從未有人想到利用梔子果實代替番紅花提取番紅花甙或?qū)⒎t花甙用于臨床，藥學界只是在番紅花的引種、栽培方面做了大量工作，時至今日，仍有人懷疑梔子中真正含有番紅花甙，這可能與從梔子中提取番紅花甙的方法有關。
以往食品制造領域技術人員通常用水或酒精水溶液從梔子果實中提取分離番紅花甙，經(jīng)過濾后，進行濃縮干燥，作為梔子色素而制造銷售，廣泛用于食品著色劑，但采用這類方法提取分離的番紅花甙含量低，雜質(zhì)多，常常引起變色，通常含量為5～10％(日本特許公開昭和52-1397，特許公開昭和58-27537)為了除去梔子色素中的不純物，如多酚和環(huán)烯萜苷等，日本有關專家又研制使用苯乙烯加防腐劑(特許公開56-27753)和聚酰胺樹脂二種吸附劑及使用半硬質(zhì)聚乙烯類膠體(特許公開昭和61-50981)，然而前種方法繁瑣、耗時；后者成本高。為了進一步克服上述不足，還有人采用酸性白土或活性白土，將其加入提取的黃色素溶液，分離出白土后，用水和酒精溶液洗脫，收集洗脫液，噴霧干燥(特許公開昭和52-129921)，但該方法番紅花甙的含量仍然不夠高，一般在10～15％，也費時費工。用上述所有的提取、分離、精制方法均不能得到番紅花甙1單體。
本發(fā)明的目的在于避免上述現(xiàn)有技術中的不足之處而提供一種對心血管系統(tǒng)疾病的預防、治療作用顯著，毒性低的藥物組合物；從原藥材中提取的甙類成分除可制備各種制劑外，尚可用于保健品、藥品色素或食用色素。
本發(fā)明的目的還在于利用國內(nèi)大量生產(chǎn)、價格便宜的藥材來代替依賴進口、價格昂貴的藥材作為制備所述藥物組合物的原料。
本發(fā)明的目的尚在于利用成本低、操作簡單、宜于工業(yè)化生產(chǎn)的制備方法、生產(chǎn)純度較高因而適宜于制備藥品的番紅花甙、番紅花甙1番紅花酸成分。
本發(fā)明的目的可以通過以下措施來達到一種防治心血管病的藥物組合物其特征在于其中包括從梔子果實中提取的番紅花甙，通式(I)，番紅花酸及其鹽作為活性成分。
番紅花甙1R1＝R2＝D-龍膽雙糖番紅花甙2R1＝D-龍膽雙糖，R2＝D-葡萄糖番紅花甙3R1＝D-龍膽雙糖，R2＝H番紅花甙4R1＝D-葡萄糖，R2＝-CH3番紅花酸R1＝R2＝H同時還包括所述活性成分可用的載體。
本發(fā)明還提供了制備含番紅花甙、番紅花甙1或其甙元番紅花酸的藥物組合物的方法，其包括下述步驟1.將市售或自采的成熟的梔子果實粉碎后，按常規(guī)方法脫脂；脫脂溶劑采用石油醚、乙醚、汽油或其它混合液。
2.脫脂后的藥材用含醇量為30～80％水醇溶液提取，醇液可選自甲醇、乙醇、丙醇或正丁醇。
3.提取液經(jīng)常壓、減壓或薄膜蒸發(fā)濃縮成浸膏，通常采用減壓濃縮。
4.將浸膏中加入2～5倍量的乙醇進行沉淀。
5.濾除浸膏中的醇沉淀物后，保留濾液，將其濃縮成濃縮液。濃縮可以在減壓或常壓下按常規(guī)進行。
6.濃縮液可采取A、B二種方法處理。
A法，濃縮液用樹脂柱層析分離，先用水沖柱洗掉雜質(zhì)，再用含醇量30～95％水醇液梯度洗脫。所用樹脂為市售人工合成的大孔型樹脂，多孔型樹脂或弱酸性陽離子交換樹脂。所用醇為甲醇或乙醇，合并含番紅花甙的洗脫組分，濃縮或噴霧干燥后，得番紅花甙的混合物，即番紅花甙，得率以重量計為0.4～1％。
番紅花甙即為暗棕色固體，呈粉末狀，味微苦。本品易溶于0.1mol/L NaOH溶液，溶解于水和甲醇，略溶于無水乙醇，極微溶于氯仿。本品可使硫酸溶液顯蘭色，顯示出番紅花甙及其甙元的反應；本品溶液的最大可見吸收波長分別在458±1nm和
432±1nm，吸收度比值為0.893；本品用KBr法測定紅外光譜與番紅花提取物的圖譜完全一致，本提取物的柱層析帶和高效液相圖譜與番紅花提取物的相一致，主要有四種甙番紅花甙1、番紅花甙2、番紅花甙3和番紅花甙4、但番紅花提取物中甙2高于梔子提取物甙2，而甙3則低于梔子提取物。根據(jù)上述方法制備的番紅花甙，能進一步分離番紅花各甙。將番紅花甙上硅膠柱層析，用甲醇∶乙酸乙脂∶水作為洗脫劑，按極性從小到大比例，常規(guī)梯度洗脫，合并相同組分，濃縮、干燥，重結晶，得番紅花甙110～50％、番紅花甙24～6％、番紅花甙3和甙4微量。所得到番紅花甙1純度好，經(jīng)高效液相色譜儀測定，含量在75～98％；番紅花甙1為深紅色針狀結晶，熔點為176～178℃，溶解度和顯色反應與番紅花提取物一致。兩種提取物分離純化的甙1的薄層層析和高效液相層析圖譜相一致。本品可見和紅外光譜與番紅花薩得拉標準光譜完全一致。根據(jù)核磁共振氫譜分析，元素分析和化學定量分析推測結構為上所示，分子式為C44H64O24，分子量為977。
B法，也可將濃縮液直接用硅膠柱層析，用甲醇∶乙酸乙酯∶水作為洗脫劑，按極性從小到大配成不同比例的洗脫液，作為常規(guī)梯度洗脫，合并相同組分，分別濃縮、干燥、重結晶，得番紅花甙110～50％、番紅花甙24～6％、番紅花甙3和甙4微量。
7.將番紅花甙溶于水，進行常規(guī)酸水解或堿水解，得到番紅花酸，經(jīng)高效液相色譜儀測定，番紅花酸含量在75～98％，得率為10.0～30.0％。將番紅花酸與醫(yī)藥上可接受的堿作用，即得番紅花酸鹽。常用的堿為1.0mol/L的氫氧化鈉，氫氧化鉀或氫氧化鈣。番紅花酸為褐色粉末，味微苦，氣味特殊，熔點為284～286℃；溶于稀堿溶液，微溶于水及有機溶媒；顯色反應與番紅花提取制備的相一致；本品可見和紅外光譜與其薩得拉標準光譜相一致。根據(jù)核磁碳譜分析、元素分析和化學定量分析，推證其結構為上所示，分子式為C20H24O4，分子量為368。
8.番紅花甙、番紅花甙1、番紅花酸及其鹽可用常規(guī)制劑方法制成片劑、沖劑、膠囊劑、丸劑、注射劑、控釋劑或緩釋劑。常用的藥用載體有(a)填料和增溶劑，如淀粉、乳糖、葡萄糖、甘露糖醇和二氧化硅；(b)粘合劑，例如羧甲基纖維素、藻酸鹽、明膠和聚乙烯吡咯烷酮；(c)致濕劑，如甘油；(d)崩解劑，瓊脂、碳酸氫鈣、碳酸氫鈉；(e)溶解延緩劑；(f)再吸收加速劑，如季銨化合物；(g)潤濕劑，如十六醇，硬脂酸單甘油酯；(h)吸附劑，如高嶺土和膨潤土；(i)潤滑劑。
丸劑的制作方法取番紅花甙1.25～20.09克，加煉蜜100克，糯米粉200克，以熟知的方法制成小蜜丸100克或大蜜丸每丸3克。
膠囊的制作方法取番紅花甙1.25～20克，淀粉5.0克，乳糖5.0克，分別過四號篩，加入1％羧甲基纖維素鈉適量制成軟材，經(jīng)二號篩制粒，顆粒烘干，控制水份2％以下，加入1.0克淀粉，過二號篩整粒，加入滑石粉，測定顆粒含量，計算出裝量分裝于2號膠囊100粒。
靜脈注射劑的制作方法取注射用水適量，將丙二醇10克、硫代硫酸鈉0.1克加入攪拌溶解，調(diào)節(jié)pH7.0，加入番紅花甙10.1～2.5克，攪拌溶解，過濾溶液，從濾器上補加適量注射用水，使濾液總量達100ml，上述澄清濾液攪拌均勻，灌封于2ml安瓿中，每安瓿2ml。滅菌，即得，加入5％葡萄糖液供靜脈注射或滴注。
緩釋片劑的制作方法取番紅花甙3.75～24.00克，乳糖3.0克，硬脂酸2.5克，十八醇2.5克，微晶纖維素2.0克，羥基丙基甲基纖維素5.0克，混合均勻，用1％羥基丙基甲基纖維素的醇溶液制粒，經(jīng)干燥后，加入適量滑石粉，然后壓沖100片，再用水不溶性丙烯酸樹脂包薄膜衣。
本發(fā)明提供的藥物組合物可用于治療或預防高血脂.動脈粥樣硬化.冠心病、缺氧性腦血管疾病及各種血栓栓塞性病。番紅花甙.番紅花甙1和甙元及其鹽可作為保健品、藥品色素或食用色素。
本發(fā)明提供的藥物組合物對心血管系統(tǒng)疾病療效顯著，其所含的番紅花甙，與番紅花甙1及番紅花酸或鹽具有相似的藥理作用。其主要作用包括調(diào)血脂作用；抑制血小板聚集和血栓形成；改變血液流變學，降低血液粘滯度；增加血氧飽和度，抗心肌缺血作用?？傊?，凡是由缺氧引起的疾病，都可用本品治療。
一、調(diào)血脂作用，不僅對膽固醇.甘油三酯.低密度脂蛋白、極低密度脂蛋白有顯著的降低作用；而且能非常顯著地升高高密度脂蛋白。番紅花甙及其化合物可用于治療高血脂、動脈粥樣硬化的心血管疾病。
1、大鼠脂代謝紊亂預防給藥挑選健康雄性Wistar大鼠，體重為180±20g。隨機分組為對照組和給藥組，每組10只。各組動物均喂飼高脂飼料(配方為蛋黃10％，豬油15％，膽固醇3％，甲基硫氧嘧啶0.1％，普通飼料72.9％)。實驗開始灌胃給藥，每天1次，對照組給同量水，于第10天后禁食12小時，腹主動脈取血.分離血清。用酶法測定血清總膽固醇(TC).甘油三脂(TG)和高密度脂蛋白的含量。按技術人員熟知的公式計算低密度脂蛋白(LDL-c).極低密度脂蛋白(VLDL-c)和動脈粥樣硬化指數(shù)。實驗結果見表1。結果揭示了對照組和給藥組之間，各項指標都有非常顯著的區(qū)別(P＜0.01)。
2、家兔脂代謝紊亂治療給藥選擇健康雄性青紫蘭家兔，加喂膽固醇后，挑選形成脂代謝紊亂的家兔，隨機分組，每組10只，繼續(xù)喂食膽固醇，再加喂熟蛋黃，一直至實驗結束。治療實驗開始，給藥組灌胃給藥，每天一次，對照組灌胃給同量水，每2周測一次血脂，按藥理工作者所熟知的方法求得TC、TG、HDL-c、LDL-c、VLDL-c。治療六周后的實驗結果見

圖1。實驗結果表明番紅花甙及其化合物對脂代謝紊亂的家兔有顯著的治療作用。
二、抑制血小板聚集和血栓形成作用1、體外和半體外抑制血小板聚集實驗選擇雄性SD大鼠，體重為300±20g，用硅化注射器從腹主動脈取血4.5ml，加入預先放入0.5ml 3.8％枸櫞酸鈉的試管中，將其離心3min(1000轉(zhuǎn)/分)吸取上層PRP；余下的血漿再次離心(3000轉(zhuǎn)/分)10min，上清即為PPP。取20μl PRP置比濁管內(nèi)，37℃溫育5min，于PPP自動平衡聚集儀上，測定誘導劑ADP和凝血酶的最大聚集百分數(shù)，實驗結果說明番紅花甙及其化合物對ADP和凝血酶誘導的大鼠血小板聚集有顯著的抑制作用，結果見表2和3。
取雄性SD大鼠，體重250±20g，隨機分成對照組和給藥組。灌胃給藥，2小時后，腹主動脈取血，操作同上體外法，誘導劑為ADP，實驗結果見表4。實驗結果表明體內(nèi)給藥，番紅花甙及其化合物對ADP誘導的大鼠血小板聚集有明顯的抑制作用。
2、對靜脈注射ADP小鼠死亡率的影響選擇雄性昆明種小鼠，體重為20g，隨機分成對照組和給藥組。灌胃給藥2小時后，尾靜脈注射ADP 480mg/12ml/kg，記錄3min內(nèi)小鼠的死亡率。實驗結果見表5。實驗結果表明番紅花甙及其化合物對小鼠尾靜脈注射ADP引起的肺微血管的血小板血栓有明顯的抑制作用。
3、對大鼠動靜脈旁路血栓形成的作用取健康雄性SD大鼠，體重300±20g，腹腔注射戊巴比妥鈉35mg/kg，麻醉后，仰臥固定，分離氣管，插入一根長5cm的聚乙烯塑料管。分離右頸總動脈及左頸外靜脈。在聚乙烯管中放入一根長6cm 4號手術線，肝素生理鹽水溶液，充滿聚乙烯管。當聚乙烯管一端插入靜脈后，從該管的另一端準確注入肝素抗凝，再將此端插入右頸總動脈。打開血流后，血流從右頸總動脈流至聚乙烯管內(nèi)，返回左頸外靜脈，血流中的血小板接觸絲線的粗糙面，即可粘附其上，形成血小板血栓。給藥后2小時，施行手術，術后立即放開血流，15分鐘止血流，取出絲線稱重，該重量減去線重即血栓濕重。實驗結果見表6。表6表明番紅花甙及其化合物對大鼠動靜脈旁路血栓形成有顯著的抑制作用。
方法同上，番紅花甙，50mg/kg，灌胃給藥，分別于給藥后1、2、4、8、16小時進行手術，每一時間點為6只大鼠，求其每一時間點血栓的平均濕重，結果見圖2。實驗結果表明番紅花甙對大鼠動靜脈旁路血栓形成抑制作用長達16小時以上。
4、對家兔體外血栓形成的影響挑選健康雄性家兔(大耳白)，體重2.5±0.5kg/只，隨機分為對照組和給藥組，于給藥前和給藥后3.5小時，用硅化注射器從心臟取血1.8ml，立即注入旋轉(zhuǎn)環(huán)內(nèi)，觀察纖維蛋白血栓形成時間(TFT)，15分鐘后于濾紙片上傾出血栓，測定其長度和濕重。在64℃干燥2小時，測其干重，實驗結果見表7。實驗結果說明番紅花甙及其化合物對家兔體外血栓的長度、濕重和干重均有明顯的降低作用，對纖維蛋白血栓形成時間有延長作用。
三、對血液流變學的影響1、對大鼠血液流變學的作用選擇健康雄性SD大鼠，體重為200±20g，隨機分成對照組和給藥組。灌胃給藥，2小時后，腹主動脈取血，肝素抗凝，按廖氏法測定全血比粘度和血漿比粘度，紅細胞沉降速率，紅細胞壓積和紅細胞電泳時間。全血比粘度以20s-1和100s-1兩種切變速率進行測定。實驗結果見表8。實驗結果說明番紅花甙及其化合物能非常顯著地降低全血比粘度、紅細胞沉降速率和壓積，但對紅細胞電泳時間無明顯影響。
2、對家兔的血液粘度的影響挑選健康雄性大耳白家兔，體重2.5±0.5kg/只，隨機分成對照組和給藥組，灌胃給藥后3.5小時，分別從兔心取血2.0ml，加入盛有0.2ml3.8％枸櫞酸鈉的試管混勻，供測定。實驗結果見表9。實驗結果表明番紅花甙對家兔全血比粘度和血漿比粘度有明顯的降低作用。
四、抗心肌缺血作用1、對大鼠冠狀動脈結扎心肌梗塞的作用挑選健康雄性SD大鼠，體重220±20g，隨機分成對照組和給藥組。每組10只，術前1小時灌胃給藥，大鼠用乙醚麻醉，仰臥固定，打開胸腔，剪開心包膜，輕壓胸廓，將心臟擠出胸腔外，用6號小園彎針穿無損傷線，在肺動脈園錐與左心耳之間結扎冠狀動脈后，放回胸腔，迅速抽緊胸壁縫線，在此結上下各縫一針，完全關閉胸腔，使動物恢復自主呼吸。用心電圖機檢測手術是否成功，術后注射慶大霉素0.2ml。
術后24小時，再用乙醚麻醉大鼠，測定心電圖。開腔取出心臟，沖洗干凈后，剪去心房，切片(約8～9件)，浸入N-BT液，在37℃水溶液中振動染色15分，將染色和非染色心肌梗塞組織分離稱重；由大鼠腹主動脈取血，分離血清后測CPK和LDH活性。實驗結果見表10。實驗結果表明番紅花甙及其化合物對冠狀動脈結扎引起大鼠心肌梗塞面積縮小，并降低血清CPK和LDH活性。
2、對豚鼠離體心臟灌流的影響挑選健康豚鼠，雌雄各半，體重為400±20g克，隨機分成對照組和給藥組，每組6只，根據(jù)Langedorf大鼠心臟裝置，采用改良宋氏法，心臟固定在灌流裝置上后，即進行含氧的生理任一洛氏液灌流20～30分記錄冠脈流量(CBF)、心率和心肌收縮力等指標，待這些指標穩(wěn)定后，換入含藥灌流液記錄5、10、15、20、25及30分鐘的各項指標，結果見圖3，與對照組相比，冠脈流量顯著地增加，對心率有較弱的作用，但對心肌收縮幅度無明顯影響。
3、對垂體后葉素所致離體豚鼠心肌缺血的影響方法同上，對照組和給藥組灌流液中均含有垂體后葉素40μ/L，記錄5、10、15、20、25及30分鐘的各項指標；按照磷酸肌酸激酶(CPK)試劑盒操作步驟，在波長340nm處測定灌流液中CPK活性。垂體后葉素可使對照組冠脈流量明顯減少，CPK活性明顯增加；加入番紅花甙及其化合物可明顯對抗垂體后葉素誘發(fā)的冠脈痙攣，增加冠脈流量，顯著地抑制CPK的活性。結果見表11，圖4。
本發(fā)明采用梔子作原料代替番紅花，提取分離番紅花甙。原料易得，價格便宜。梔子在全國大部分地區(qū)都有栽培，成熟果實每公斤十幾元，以甙的含量計算為0.6％，提取一公斤番紅花甙僅需人民幣2000元。番紅花近年價格曾漲至2000美元，即使按30％的提取率來計算，從番紅花中提取一公斤番紅花甙要6600美元的番紅花。用梔子代替番紅花可節(jié)省大量外匯，同時僅原料一項，成本可降低二十余倍。
本發(fā)明采用柱層析分離甙類成分，尤其是采用樹脂柱層析，分離方法簡便，成本低，去雜質(zhì)效果好，宜于工業(yè)化生產(chǎn)，得到的甙純度較高。樹脂柱層析后得到的番紅花甙，經(jīng)高效液相色譜法測定，其中甙1含量為10～50％，甙2含量為6％左右；經(jīng)紫外——可見分光光度計測定，番紅花甙及其酸含量為50％以上。
由于純度較高，所以番紅花甙吸濕性小。
圖1為本發(fā)明番紅花甙對家兔脂代謝紊亂后的治療作用示意圖。
圖2為本發(fā)明番紅花甙對大鼠動靜脈旁路血栓形成影響的時效圖。
圖3為本發(fā)明番紅花甙對正常離體豚鼠心臟冠脈灌流量影響示意圖。
圖4為本發(fā)明番紅花甙對離體豚鼠心臟冠脈痙攣的冠流量作用示意圖。
番紅花甙提取實施例1kg梔子果實、粉碎脫脂，用60％的酒精4L，在50～60℃溫度下，攪拌提取2次，合并提取液，減壓濃縮，濃縮液用2倍體積量的乙醇反復沉淀，棄去沉淀，回收乙醇后的濃縮液上大孔樹脂柱，吸附后，用水沖洗10小時，再用75～85％乙醇梯度洗脫，合并洗脫液，減壓濃縮、干燥，再精制得番紅花甙8.7克。
經(jīng)高效液相色譜法測定，總甙中番紅花甙1含量為45.7％，番紅花甙2為6.4％。
番紅花甙1提取實施例100克番紅花甙，上硅膠柱，用乙酸乙脂/甲醇/水混合液進行梯度洗脫，收集番紅花甙1帶的洗脫液，減壓濃縮，再用甲醇重結晶，過濾后干燥得26.7克。
經(jīng)高效液相色譜法測定，番紅花甙1的含量為86.4％。
番紅花酸制備實施例100g番紅花甙溶解適量水中，加入0.5N硫酸，進行沸水浴水解，溶液褪色后，析出紅色沉淀，過濾用水沖洗至呈中性，干燥。得番紅花酸24.8克。
經(jīng)高效液相色譜法測定，番紅花酸含量在85.4％。
實施例一、注射劑處方1番紅花甙12.50克維生素C5.00克丙二醇 10.00克硫代硫酸鈉 0.10克配制取注射用水適量，將丙二醇、硫代硫酸鈉、維生素C加入，攪拌溶解，調(diào)節(jié)pH為6.5～7.5，加入番紅花甙1攪拌溶解，過濾溶液，從濾器上補加適量注射用水，使濾液總量達100.0毫升。
上述澄清濾液攪拌均勻，灌封于2毫升安瓿中，每安瓿2毫升，滅菌即得。
注加入5％葡萄糖液中供靜脈滴入。
處方2番紅花甙12.50克維生素C5.00克乳糖 3.00克注射用水加到100.0毫升配制用注射用水適量，加入維生素C、乳糖攪拌溶解，調(diào)節(jié)pH為6.5～7.5，再加入番紅花甙1溶解，除菌過濾，使濾液總量達100毫升灌封于2毫升安瓿中，每安瓿2毫升經(jīng)冷凍干燥，除去藥液中水分，得冷凍干燥粉末，在無菌條件下密封成注射用凍干粉劑。
使用方法1、肌肉注射，取粉針一支用生理鹽水2ml溶解后注射，一日一次或二次。
2、靜脈注射，取粉針一支用50％葡萄粉注射液20ml溶解后應用，一日一次或二次。
3、靜脈滴注，取粉針二至三支用50％葡萄粉注射液100～500ml溶解后應用。
實施例二、膠囊處方1番紅花甙(50～100％) 5.0g維 生 素C 10.0g糊 精 1.0g乳 糖 1.0g淀 粉 3.0g低取代羥基丙基纖維素0.5g將處方中各藥物稱量后，混合均勻，用0.5％HPMC(羥基丙基甲基纖維素)的水溶液制粒，過二號篩后，得濕顆粒，將顆粒干燥后裝100粒膠囊。
使用方法一日一次或二次，一次一粒。
處方2
番紅花甙(50～100％)5.0g維 生 素C 10.0g淀 粉 3.0g乳 糖 1.0g糊 精 1.0g乙基纖維素 0.5g按處方中各藥物稱量后，混合均勻，用10％西黃蓍膠液制成小丸，干燥后用水不溶性丙烯酸樹脂包薄膜衣，干燥后裝100粒膠囊。
使用方法一日一次或二次，一次一粒。
實施例三、丸劑處方番紅花甙 5g煉蜜 100g糯 米 粉 200g按處方稱取各藥物，制成小蜜丸或大蜜丸(每丸重3g)。
口服，一日一次，一次服用小蜜丸3g或大蜜丸1丸。
實施例四、緩釋制劑處方1(片劑)番紅花甙(50～100％)15.0g維 生 素C 15.0g乳 糖 3.0g硬 脂 酸 2.5g十 八 醇 2.5g微晶纖維素 2.0g羥基丙基甲基纖維素 5.0g按處方中各藥物稱量后，混合均勻，用1％羥基丙基甲基纖維素的醇溶液制粒，經(jīng)干燥后，加入適量滑石粉，然后壓100片，再用水不溶性丙烯酸樹脂包薄膜衣。
使用方法一周一次，每次二片。
處方2(膠囊)番紅花甙15.0g維生素C 15.0g乳糖3.0g羥基丙基甲基纖維素 5.0g乙基纖維素 2.5g糊精1.0g按處方中各藥物稱量后，混合均勻，用10％阿拉伯膠液制成小丸，再用水不溶性丙烯酸樹脂包薄膜衣經(jīng)干燥后，裝100粒膠囊。
使用方法一周一次，每次二粒。
表1 番紅花甙對預防大鼠脂紊亂的作用(N＝10)組別 劑量 TC TG HDLLDLVLDL(mg/kg) (mg/dl) (mg/dl)(mg/dl)(mg/dl) (mg/dl)高脂對照 218.24 233.00 44.90 126.74 46.60±28.69 ±52.74 ±5.50 ±27.89 ±10.55番紅花甙 50106.19 130.69 56.86 23.19 26.14±12.96***±41.09***±4.71***±10.81***±12.22****P＞0.05，**P＜0.05，***P＜0.01，****P＜0.001，VS高脂對照組表2、番紅花甙對ADP誘導的大鼠血小板聚集抑制作用組別終濃度 動物數(shù) 抑制率(ug/ml) (％)對照組 N.S 12 0番紅花甙 12.5 6 23.325.0 6 38.850.0 6 52.7
表3、番紅花甙對凝血酶誘導的大鼠血小板聚集抑制組別終濃度動物數(shù)抑制率(ug/ml) (％)對照組 120番紅花甙 75.0653.4100.0 680.8表4、番紅花甙對ADP誘導的大鼠血小板聚集的作用組別 劑量 動物數(shù)抑制率(mg/kg)(％)對照組 N.S 6 0番紅花甙 50.0664.4
表5、番紅花甙對靜脈注射ADP小鼠死亡率的影響組別 劑量 動物數(shù)死亡數(shù)死亡率(mg/kg) (％)對照組 N.S 4639 84.78番紅花甙 25.01811 61.1150.0267 26.92100.0 223 13.44表6、番紅花甙對大鼠動靜脈旁路血栓形成的作用組別 劑量 動物數(shù)抑制率(mg/kg) (％)對照組 60番紅花甙 50 6 25.031006 54.21
表7、番紅花甙對家兔血栓形成的影響(N＝6)組別 劑量 TFT血 栓mg/kg長度(mm)濕重(mg) 干重(mg)對照組 6.72±1.9511.63±2.73 406.4±109.0 108.0±84.9番紅花甙 25.0 8.80±1.478.14±1.05***231.4±66.6***89.3±36.650.0 9.52±2.16**5.70±2.24****202.6±91.2****78.5±65.6表8、番紅花甙對大鼠血液流變學的作用(N＝8)組別 劑量 全血比粘度 血漿比粘度 紅細胞 紅細胞紅細胞(mg/kg) 20s-1 100s-1 沉降速率 壓積電泳時間對照組 4.82 3.241.510.63 49.88 20.50±0.45 ±0.39 ±0.13 ±0.23 ±3.25±1.5番紅花甙 50.0 4.43 2.911.270.81 47.43 19.21±0.29 ±0.36 ±0.26 ±0.53 ±2.46±1.4100.0 4.28 2.851.201.39 44.60 18.51±0.25**±0.51**±0.20***±0.79**±4.57*±1.9**P＞0.05，**P＜0.06，***P＜0.01，****P＜0.001，VS對照組表9、番西紅花甙對家兔血液粘度的影響(n＝6)組別劑量全血比粘度血漿比粘度(mg/kg) 給藥前 給藥后 給藥前給藥后對照組3.30±0.29 3.30±0.23 1.98±0.231.96±0.20番紅花甙 50.0 3.49±0.37 2.24±0.20***1.94±0.091.34±0.04**100.03.36±0.30 2.09±0.26***1.80±0.201.09±0.10****P＞0.05，**P＜0.05，***P＜0.01，****P＜0.001，VS對照組表10、番紅花甙對大鼠冠狀動脈結扎心肌梗塞的改善組別 劑量 心肌梗塞面積CPK LDH(mg/kg) (％) (μ/L)μ/L對照組 50.80±3.31 1684.4±469.53540.0±583.6番 紅花 甙 100.0 36.30±3.95****953.3±304.8**2612.8±660.4**
表11、番紅花甙對磷酸肌酸酶釋放的影響組別劑量 缺血前缺血后釋放抑制率(mg/kg)(μ/L)(μ/L) (％)對照組 209±23 309±21 0.0維拉帕米爾 0.125 205±21 251±21**54.4番紅花甙 6.3 212±28 296±28*16.612.5 193±29 243±28**50.925.0 230±38 223±40***107.權利要求
1.一種防治心血管病的藥物組合物，其特征在于其中包括從梔子果實提取番紅花甙，通式(I)，番紅花甙1、番紅花酸及其鹽作為活性成分， 番紅花甙1R1＝R2＝D-龍膽雙糖番紅花甙2R1＝D-龍膽雙糖，R2＝D-葡萄糖番紅花甙3R1＝D-龍膽雙糖，R2＝H番紅花甙4R1＝D-葡萄糖，R2＝-CH3番紅花酸R1＝R2＝H同時還包括所述活性成分可藥用的載體。
2.根據(jù)權利要求1所述的藥物組合物，其特征在于可以是片劑。
3.根據(jù)權利要求1所述的藥物組合物，其特征在于可以是注射劑。
4.根據(jù)權利要求1所述的藥物組合物，其特征在于可以是膠囊劑。
5.根據(jù)權利要求1所述的藥物組合物，其特征在于可以是丸劑。
6.根據(jù)權利要求1所述的藥物組合物，其特征在于可以是沖劑。
7.根據(jù)權利要求1所述的藥物組合物，其特征在于可以是緩釋劑。
8.根據(jù)權利要求1所述的藥物組合物，其特征在于可以是控釋劑。
9.一種制備權利要求1所述藥物組合物的方法，其特征在于包括下述步驟<1>將梔子果實粉碎后，按常規(guī)方法脫脂；<2>脫脂后的藥材用含醇量為30～80％的水與甲醇、乙醇、丙醇或正丁醇配成的水醇液提??；<3>提取液經(jīng)常壓、減壓或薄膜蒸發(fā)濃縮成浸膏；<4>將浸膏中加入2～5倍量的乙醇進行沉淀；<5>濾除浸膏中的醇沉淀物后，將濾液濃縮成濃縮液；<6>A法，濃縮液用樹脂柱層析分離，先用水沖柱洗掉雜質(zhì)，再用含醇量30～95％的水醇液梯度洗脫，合并含番紅花甙的洗脫組分，濃縮或噴霧干燥后，得番紅花甙，收率以重量計為0.4～1％；再將番紅花甙用硅膠柱層析，用甲醇∶乙醇乙酸∶水作為洗脫劑，按極性從小到大比例，常規(guī)梯度洗脫，合并相同組分，濃縮、干燥，得番紅花甙110～50％、番紅花甙24～6％、番紅花甙3和甙4微量，B法，也可將濃縮液直接用硅膠柱層析，用甲醇∶乙酸乙酯∶水作為洗脫劑，按極性從小到大配成不同比例的洗脫液，作為常規(guī)梯度洗脫，合并相同組分，濃縮、干燥、重結晶，得番紅花甙110～50％、番紅花甙24～6％、番紅花甙3和甙4微量，<7>將番紅花甙溶于水，進行常規(guī)酸水解或堿水解，得到番紅花酸；將番紅花酸與醫(yī)藥學上可接受的堿作用，即得番紅花酸鹽，<8>番紅花甙、番紅花甙1、番紅花酸及其鹽可用常規(guī)制劑方法制成片劑、沖劑、膠囊劑、丸劑、注射劑、控釋劑或緩釋劑。
10.根據(jù)權利要求9所述藥物組合物的制備方法，其特征在于<6>A方法中所述樹脂中所用樹脂為大孔型樹脂、多孔型樹脂、弱酸性陽離子交換樹脂。
11.權利要求1所述的藥物組合物，其特征在于組合物中所含梔子果實中提取的番紅花甙、番紅花甙1和番紅花酸及其鹽，尚可作為保健品、藥品色素或食用色素。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種用價格低廉，來源廣泛的梔子果實替代價格昂貴藥源緊缺的番紅花制備番紅花甙(I)、番紅花甙
文檔編號C07H1/00GK1123663SQ9411150
公開日1996年6月5日 申請日期1994年11月29日 優(yōu)先權日1994年11月29日
發(fā)明者錢之玉, 江聲華, 劉璇 申請人:中國藥科大學