專利名稱：：Yy肽類似物及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明部分地是用政府的撥款進(jìn)行的，因此政府在本發(fā)明中享有一定的權(quán)利。本發(fā)明涉及在胃腸病的治療中可用作治療劑的肽衍生物。YY肽(PYY)是一種含36個(gè)殘基的肽酰胺，最初是從豬腸中分離而得，它位于胃腸道和胰腺的內(nèi)分泌細(xì)胞中(Tatemotoetal.Proc.Natl.Acad.Sci.792514，1982)。YY肽有氨基末端(N-termi-nal)和羧基末端(C-terminal)酪氨酸酰胺；因此，此兩個(gè)酪氨酸給出了PYY本身的名稱(在肽的命名法中，Y代表酪氨酸)。此外，PYY與其同系肽-神經(jīng)肽Y(NPY)一樣，具有許多中樞及周邊神經(jīng)調(diào)節(jié)功能，后者最初是從豬腦中分離而得(Tatemoto，Proc.Natl.Acad.Sci.795485，1982)，但與PYY位于細(xì)胞內(nèi)相反，NPY存在于粘膜下及腸肌神經(jīng)元中(分別支配粘膜層及平滑肌層)(Ekbladetal.Neuroscience20169，1987)。PYY及NPY均被認(rèn)為可抑制腸的活動(dòng)性和血流(Laburthe，TrendsEndocrinol.Metab.1168，1990)，并且也被認(rèn)為既可刺激凈吸收(MacFadyenetal.Neuropeptides7219，1986)，又可減弱小鼠中(Lundbergetal.Proc.Natl.Acad.Sci.USA794471，1982；Playfordetal.Lancet3351555，1990)及人類中(Playfordetal.文獻(xiàn)同上)基礎(chǔ)的腸分泌(Cox.etal.Br.J.Pharmacol.101247，1990；Coxetal.J.Physiol.39865，1988；Coxetal.Peptides12323，1991；Frieletal.Br.J.Pharmacol.88425，1986)及促分泌素所致的腸分泌。此外，已有報(bào)道，在一些可引起腹瀉的疾病中，血漿PYY水平被升高(Adrianetal.Gastroenterology891070，1985)?？偠灾?，這些觀察結(jié)果提示，PYY和NPY在飯后被釋放到循環(huán)系統(tǒng)中去(Adrianetal.Gastroenterology891070，1985；Balasubramaniametal.Neu-ropeptides14209，1989)，因而在調(diào)節(jié)腸分泌和吸收中可能起一種生理學(xué)功能，作為腹瀉的天然抑制劑。已在鼠腸上皮中鑒定出一種高親和力的PYY受體系統(tǒng)，該受體系統(tǒng)表現(xiàn)出對(duì)PYY的親和力略高于對(duì)NPY的親和力(Laburtheetal.Endocrinology1181910，1986；Laburthe，TrendsEndocrinol.Metab.文獻(xiàn)同上)，并表現(xiàn)出負(fù)偶聯(lián)(negativelycoupled)到腺苷酸環(huán)化酶(Servinetal.Endocrinology124692，1989)。在鼠小腸的電壓鉗(VotageClamped)制備物中，PYY始終顯示出比NPY更大的抗分泌效力(Coxetal.J.Physiol.文獻(xiàn)同上)，并發(fā)現(xiàn)NPY的C-末端片段較PYY的抗分泌效力低(Coxetal.Br.J.Pharmacol.文獻(xiàn)同上)。利用幾個(gè)局部序列進(jìn)行了“結(jié)構(gòu)-活性”的研究，從而已鑒定出PYY(22-36)是與腸PYY受體相互作用的活性位點(diǎn)(Balsubrama-niametal.Pept.Res.132，1988)。此外，PYY參與許多生理活動(dòng)，包括營(yíng)養(yǎng)吸收(如見(jiàn)Bilcheiketal.DigestiveDiseaseWeek506623，1993)、細(xì)胞增殖(如見(jiàn)Laburthe，TrendsEndocrinol.Metab.1168，1990；Voisinetal.J.Biol.Chem，1993)、脂解(如見(jiàn)Valetetal.，J.Clin.Invest.85291，1990)、以及血管收縮(如見(jiàn)Lundbergetal.，Proc.Natl.Acad.Sci.，USA794471，1982)。豬和人PYY的氨基酸序列如下豬PYYYPAKPEAPGEDASPEELSRYYASLRHYLNLVTRQRY(SEQ.ID.NO.(序列編號(hào))1)人PWYPIKPEAPGEDASPEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY(SEQ.ID.NO.2)狗和鼠PYY的氨基酸序列與豬PYY相同。一方面，本發(fā)明用公式描述了新的YY肽類似物或其藥用可接受的鹽其中X為一條有0-5個(gè)氨基酸的鏈，包括，其N-末端氨基酸與R1和R2相連；Y為一條有0-4個(gè)氨基酸的鏈，包括，其C-末端氨基酸與R3和R4相連；R1為H、C1-C12烷基(如甲基)、C6-C18芳基(如苯基、萘乙?；?、C1-C12酰基(如甲?；?、乙酰基、及十四烷?；?、C7-C18芳烷基(如苯甲基)、或C7-C18烷芳基(如對(duì)-甲苯基)；R2為H、C1-C12烷基(如甲基)、C6-C18芳基(如苯基、萘乙酰基)、C1-C12?；?如甲?；⒁阴；?、及十四烷?；?、C7-C18芳烷基(如苯甲基)、或C7-C18烷芳基(如對(duì)-甲苯基)；A22為一個(gè)芳香族氨基酸、Ala、Aib、Anb、N-Me-Ala、或被刪去；A23為Ser、Thr、Ala、Aib、N-Me(甲基)-Ser、N-Me-Thr、N-Me-Ala、或被刪去；A24為L(zhǎng)eu、Ile、Val、Trp、Gly、Aib、Anb、N-Me-Leu、或被刪去；A25為Arg、Lys、homo-Arg(高精氨酸)、二乙基-homo-Arg、Lys-ε-NH-R(其中R為H、一個(gè)分支或直鏈的C1-C10烷基、或一個(gè)芳基)、Orn、或被刪去；A26為Ala、His、Thr、3-Me-His、1-Me-His、β-吡唑基丙氨酸、N-Me-His、Arg、Lys、homo-Arg、二乙基-homo-Arg、Lys-ε-NH-R(其中R為H、一個(gè)分支或直鏈的C1-C10烷基、或一個(gè)芳基)、Orn、或被刪去；A27為一個(gè)除Tyr外的芳香族氨基酸；A28為L(zhǎng)eu、Ile、Val、Trp、Aib、Anb、或N-Me-Leu；A29為Asn、Ala、Gln、Gly、Trp、或N-Me-Asn；A30為L(zhǎng)eu、Ile、Val、Trp、Aib、Anb、或N-Me-Leu；A31為Val、Ile、Trp、Aib、Anb、或N-Me-Val；A32為T(mén)hr、Ser、N-Me-Ser、N-Me-Thr、或D-Trp；R3為H、C1-C12烷基(如甲基)、C6-C18芳基(如苯基、萘乙?；?、C1-C12?；?如甲?；⒁阴；?、及十四烷?；?、C7-C18芳烷基(如苯甲基)、或C7-C18烷芳基(如對(duì)-甲苯基)；以及R4為H、C1-C12烷基(如甲基)、C6-C18芳基(如苯基、萘乙酰基)、C1-C12酰基(如甲?；?、乙酰基、及十四烷?；?、C7-C18芳烷基(如苯甲基)、或C7-C18烷芳基(如對(duì)-甲苯基)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，A27為Phe、Nal、Bip、Pcp、Tic、Trp、Bth、Thi、或Dip。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，X為A17-A18-A19-A20-A21或其藥用可接受的鹽，其中A17為Cys、Leu、Ile、Val、Aib、Anb或N-Me-Leu；A18為Cys、Ser、Thr、N-Me-Ser、或N-Me-Thr；A19為Arg、Lys、homo-Arg、二乙基-homo-Arg、Lys-ε-NH-R(其中R為H、一個(gè)分支或直鏈的C1-C10烷基、或C6-C18芳基)、Cys、或Orn；A20為一個(gè)芳香族氨基酸、或Cys；以及A21為一個(gè)芳香族氨基酸、Cys。在另一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，Y為A33-A34-A35-A36或其藥用可接受的鹽，其中A33為Arg、Lys、homo-Arg、二乙基-homo-Arg、Lys-ε-NH-R(其中R為H、一個(gè)分支或直鏈的C1-C10烷基、或一個(gè)芳基)、Cys、或Orn；A34為Cys、Gln、Asn、Ala、Gly、N-Me-Gln、Aib、或Anb；A35為Arg、Lys、homo-Arg、二乙基-homo-Arg、Lys-ε-NH-R(其中R為H、一個(gè)分支或直鏈的C1-C10烷基、或一個(gè)芳基)、Cys、或Orn；以及A36為一個(gè)芳香族氨基酸、Cys。優(yōu)選地，該化合物有公式N-α-Ac(乙酰基)-Ala-Ser-Leu-Arg-His-Phe-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(SEQ.ID.NO.3)，H-Ala-Ser-Leu-Arg-His-Phe-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(SEQ.ID.NO.4)，N-α-Ac-Ala-Ser-Leu-Arg-His-Trp-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(SEQ.ID.NO.5)，N-α-Ac-Ala-Ser-Leu-Arg-His-Thi-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(SEQ.ID.NO.6)，N-α-Ac-Tyr-Ser-Leu-Arg-His-Phe-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(SEQ.ID.NO.7)或其藥用可接受的鹽。另一方面，本發(fā)明用公式描述了新的YY肽類似物或其藥用可接受的鹽其中N-末端氨基酸與R1和R2相連；Y為一條有0-4個(gè)氨基酸的鏈，包括，其C-末端氨基酸與R3和R4相連；R1為H、C1-C12烷基(如甲基)、C6-C18芳基(如苯基、萘乙?；?、C1-C12?；?如甲酰基、乙?；?、和十四烷?；?、C7-C18芳烷基(如苯甲基)、或C7-C18烷芳基(如對(duì)-甲苯基)；R2為H、C1-C12烷基(如甲基)、C6-C18芳基(如苯基、萘乙?；?、C1-C12?；?如甲?；⒁阴；?、和十四烷?；?、C7-C18芳烷基(如苯甲基)、或C7-C18烷芳基(如對(duì)-甲苯基)；A25為Arg、Lys、homo-Arg、二乙基-homo-Arg、Lys-ε-NH-R(其中R為H、一個(gè)分支或直鏈的C1-C10烷基或一個(gè)芳基)、Orn、或被刪去；A26為Ala、His、Thr、3-Me-His、1-Me-His、β-吡唑基丙氨酸、N-Me-His、Arg、Lys、homo-Arg、二乙基-homo-Arg、Lys-ε-NH-R(其中R為H、一個(gè)分支或直鏈的C1-C10烷基、或一個(gè)芳基)、Orn、或被刪去；A27為一個(gè)芳香族氨基酸；A28為L(zhǎng)eu、Ile、Val、Trp、Aib、Anb、或N-Me-Leu；A29為Asn、Ala、Gln、Gly、Trp、或N-Me-Asn；A30為L(zhǎng)eu、Ile、Val、Trp、Aib、Anb、或N-Me-Leu；A31為Val、Ile、Trp、Aib、Anb、或N-Me-Val；A32為T(mén)hr、Ser、N-Me-Ser、N-Me-Thr、或D-Trp；R3為H、C1-C12烷基(如甲基)、C6-C18芳基(如苯基、萘乙?；?、C1-C12?；?如甲?；?、乙酰基、和十四烷酰基)、C7-C18芳烷基(如苯甲基)、或C7-C18烷芳基(如對(duì)-甲苯基)；以及R4為H、C1-C12烷基(如甲基)、C6-C18芳基(如苯基、萘乙?；?、C1-C12?；?如甲?；?、乙?；⒓笆耐轷；?、C7-C18芳烷基(如苯甲基)、或C7-C18烷芳基(如對(duì)-甲苯基)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，A27為Phe、Nal、Bip、Pcp、Tic、Trp、Bth、Thi、或Dip。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，Y為A33-A34-A35-A36或其藥用可接受的鹽，其中A33為Arg、Lys、homo-Arg、二乙基-homo-Arg、Lys-ε-NH-R(其中R為H、一個(gè)分支或直鏈的C1-C10烷基、或C6-C18芳基)、Cys、或Orn；A34為Gln、Asn、Ala、Gly、N-Me-Gln、Aib、Cys或Anb；A35為Arg、Lys、homo-Arg、二乙基-homo-Arg、Lys-ε-NH-R(其中R為H、一個(gè)分支或直鏈的C1-C10烷基、或C6-C18芳基)、Cys、或Orn；以及A36為一個(gè)芳香族氨基酸、Cys。優(yōu)選地，該化合物有公式N-α-Ac-Arg-His-Phe-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(SEQ.ID.NO.8)。另一方面，本發(fā)明描述了新的YY肽二聚類似物的特征。此二聚體可由公式I的兩條肽、公式II的兩條肽、或公式I的一條肽和公式II的一條肽組成。在一實(shí)施方案中，該二聚體是通過(guò)使用一個(gè)二羧酸偶聯(lián)劑(linker)而形成的，該二羧酸偶聯(lián)劑能連接位于每個(gè)肽內(nèi)的一個(gè)自由胺(一級(jí)或二級(jí))(如見(jiàn)R.VavrekandJ.Stewart，PeptidesStructureandFunction381-384(PierceChemicalCo.1983))。合適的二羧酸偶聯(lián)劑的例子為琥珀酸、谷氨酸、和苯二甲酸。在其它的實(shí)施方案中，二聚體是利用一個(gè)氨基酸偶聯(lián)劑而生成的，氨基酸偶聯(lián)劑能連接一條肽的自由胺基和另一條肽的自由羧基。優(yōu)選地，該氨基酸偶聯(lián)劑是一種非α-氨基酸。合適的氨基酸偶聯(lián)劑的例子有氨基-己酸及氨基-戊酸。而在另一實(shí)施方案中，該二聚體是通過(guò)位于每條肽鏈內(nèi)的半胱氨酸之間的二硫鍵而形成的(如見(jiàn)M.BerngtowiczandG.Piatsueda，PeptidesStructureandFunction233-244(PierceChemicalCo.1985)；F.Albericio，etal.，Peptides1990，535(ESCOM1991))。在本文的肽序列中所見(jiàn)到的符號(hào)X、Y、Z、A22、A23、A24、等等，以及Ser、Leu、或其相似符號(hào)，代表一個(gè)氨基酸殘基，也即，當(dāng)其在N-末端時(shí)為“＝N-CH(R)-CO-”、或當(dāng)其在C-末端時(shí)為“-NH-CH(R)-CO-N＝”、或當(dāng)其不在N-或C-末端時(shí)為“-NH-CH(R)-CO-”，其中R表示一個(gè)氨基酸或其殘基的側(cè)鏈(或識(shí)別基團(tuán))。例如，Asp的R為-CH2COOH、Gly的R為-H、Ser的R為-CH2OH、Ala的R為-CH3、以及Arg的R為-CH2CH2CH2CH2NH20此外，當(dāng)氨基酸殘基是有光學(xué)活性的時(shí)，除了特別說(shuō)明為D-型，則都為L(zhǎng)-型構(gòu)型。如上所述，以及為了描述本發(fā)明的方便，使用了各種氨基酸的常規(guī)的及不常規(guī)的縮寫(xiě)。這些縮寫(xiě)對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)都是熟悉的，但為了清楚起見(jiàn)，列于下面。在此所提及的所有肽序列，都是根據(jù)通常的慣例而寫(xiě)，即其N-末端氨基酸在左邊、C-末端氨基酸在右邊。兩個(gè)氨基酸殘基之間的一條短杠則表示一個(gè)肽鍵。Asp＝D＝天冬氨酸Ala＝A＝丙氨酸Arg＝R＝精氨酸Asn＝N＝天冬酰胺Cys＝C＝半胱氨酸Gly＝G＝甘氨酸Glu＝E＝谷氨酸Gln＝Q＝谷氨酰胺His＝H＝組氨酸Ile＝I＝異亮氨酸Leu＝L＝亮氨酸Lys＝K＝賴氨酸Met＝M＝甲硫氨酸Phe＝F＝苯丙氨酸Pro＝P＝脯氨酸Ser＝S＝絲氨酸Thr＝T＝蘇氨酸Trp＝W＝色氨酸Tyr＝Y(jié)＝酪氨酸Val＝V＝纈氨酸Orn＝鳥(niǎo)氨酸Nal＝2-萘丙氨酸Thi＝2-噻吩丙氨酸Pcp＝4-氯苯丙氨酸Bth＝3-苯并噻吩丙氨酸Bip＝4，4′-聯(lián)苯丙氨酸Tic＝四氫異喹啉-3-羧酸Aib＝氨基異丁酸Anb＝α-氨基正丁酸Dip＝2，2-二苯丙氨酸Thz＝4-噻唑丙氨酸本發(fā)明的化合物能以藥用可接受的鹽的形式提供。優(yōu)選的鹽例子是那些含有治療上可接受的有機(jī)酸的鹽類，如乙酸、乳酸、順丁烯二酸、檸檬酸、蘋(píng)果酸、抗壞血酸、琥珀酸、苯甲酸、水楊酸、甲烷磺酸、甲苯磺酸、三氟乙酸、或pamoicacid，以及多聚酸，如鞣酸或羧甲基纖維素；以及含有無(wú)機(jī)酸的鹽類，諸如氫鹵酸(如鹽酸)、硫酸、或磷酸、等等。另一方面，本發(fā)明描述了存在于治療用組合物中的上述化合物之一和藥用可接受的載體，該組合物可降低過(guò)多的腸水及電解質(zhì)分泌。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，該組合物的形態(tài)可以是一種可用于口服的液體、藥丸、藥片或膠囊；一種可鼻滴或經(jīng)鼻噴霧給藥的液體；或一種可靜脈內(nèi)、皮下、非腸道、腹膜內(nèi)或直腸給藥的液體。此治療組合物的形態(tài)也可以是一種油乳劑或分散體，內(nèi)含一種親脂的鹽(諸如pamoicacid)；或是一種用于皮下或肌肉給藥的可生物降解的持久性釋放組合物。為了達(dá)到最大效力，要求零級(jí)釋放。另一方面，本發(fā)明描述了一種可降低哺乳動(dòng)物中過(guò)多腸水和電解質(zhì)分泌的方法，此方法包括，給予該哺乳動(dòng)物(如，人)治療有效量的上述化合物。此外，本發(fā)明描述了一種可調(diào)節(jié)哺乳動(dòng)物中的細(xì)胞繁殖的方法，該方法包括，給予該哺乳動(dòng)物治療有效量的含上述化合物的組合物。優(yōu)選地，該方法調(diào)節(jié)一種腸細(xì)胞的繁殖。本發(fā)明也描述了可在哺乳動(dòng)物中增加養(yǎng)份運(yùn)輸、調(diào)節(jié)脂解、及調(diào)節(jié)血流的方法，這些方法包括，給予該哺乳動(dòng)物治療有效量的上述組合物。本發(fā)明的化合物表現(xiàn)出與其抗分泌能力及抗活動(dòng)性能力有關(guān)的廣泛的生物學(xué)活性。該化合物被認(rèn)為可通過(guò)直接作用于上皮細(xì)胞、或者，也有可能是通過(guò)抑制可刺激腸分泌的激素或神經(jīng)遞質(zhì)的分泌，從而抑制胃腸分泌。本發(fā)明的化合物也可控制腸血流，進(jìn)而可調(diào)整腸的流體靜壓力，有利于水的凈吸收。本發(fā)明的化合物在對(duì)很多胃腸失調(diào)的治療中尤為實(shí)用(如見(jiàn)Harrison′sPrinciplesofInternalMedicine，McGraw-HillInc.，NewYork，12thEd.)，這類失調(diào)不僅與吸收降低有關(guān)，也與過(guò)多的腸電解質(zhì)及水分泌有關(guān)，如傳染性腹瀉(如病毒性的或細(xì)菌性的)、炎性腹瀉、短暫腸綜合征(Shortbowelsyndrome)、或典型地出現(xiàn)于繼手術(shù)(如回腸造口術(shù))后的腹瀉。傳染性腹瀉的例子包括(并不局限于)急性病毒性腹瀉、急性細(xì)菌性腹瀉(如沙門(mén)氏菌、彎曲桿菌、及梭狀芽孢桿菌、或由于原蟲(chóng)感染)、或旅行者腹瀉(如諾沃克病毒或輪狀病毒)。炎性腹瀉的例子包括(并不局限于)吸收不良綜合征、熱帶嘔吐(tropicalspue)、慢性胰腺炎、節(jié)段性回腸炎、腹瀉、以及過(guò)敏性腸綜合征(irritablebowelsyndrome)。已發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的肽能用來(lái)治療涉及胃腸失調(diào)的緊急或危及生命的情況，如手術(shù)后或由于霍亂。此外，本發(fā)明的化合物能用來(lái)治療患獲得性免疫缺陷綜合癥(AIDS)的病人，尤其是在其惡病質(zhì)期間。在哺乳動(dòng)物中，本發(fā)明的化合物不僅可增加細(xì)胞增生，也有助于抑制小腸液及電解質(zhì)分泌，增加養(yǎng)分的運(yùn)輸(在胃腸道中)、調(diào)節(jié)脂解作用(如在脂肪組織中)、以及調(diào)節(jié)血流。本發(fā)明的化合物有其優(yōu)點(diǎn)，由于它們是天然PYY肽的截短物，因此，該較短的肽不僅使該化合物的合成和純化較為容易，而且改善了生產(chǎn)過(guò)程，降低了費(fèi)用。此外，一個(gè)較短的PYY化合物還有其優(yōu)點(diǎn)，因?yàn)檫@類肽將只與PYY受體作用，而不與同源的受體(如NPYY1和Y3)作用，因此，可減小非所愿的興奮劑或頡抗劑副反應(yīng)。關(guān)于本發(fā)明的其它特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)，可從以下對(duì)優(yōu)選實(shí)施例的描述中以及從權(quán)利要求書(shū)中了解到。圖1表示用HF斷裂(cleavage)而得的N-α-Ac-[Phe27]PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.3)(≈25mg)的半制備性反相層析圖。條件VydacC18半制備性柱(250×10mm，孔徑大小300，顆粒大小10微米)，流速4.7ml/分鐘，收集組分1、2、3、4并用分析層析進(jìn)行分析。合并同源的組分(1-3)，并在一高速真空器(aspeedvac.)中干燥。圖2表示隨著PYY(SEQID.NO.1)、PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.10)、[Im-DNP-His26]PYY(SEQ.ID.NO.9)、[Ala32]PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.11)、[Ala23,32pyy(22-36)(SEQ.ID.NO.12)、[Glu28]PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.13)、N-α-Ac-PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.14)、N-α-Ac-[p.Cl-Phe28]PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.15)、Nα-Ac-[Glu26]PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.16)、N-α-Ac[Phe27]PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.3)、N-α-Ac-[N-Me-Tyr26]PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.17)、N-α-十四烷酰-PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.18)、N-α-萘乙酰-PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.19)及PYY(22-26)(SEQ.ID.NO.10)濃度的增加，125I-PYY與鼠空腸膜結(jié)合的抑制圖。圖3A-3B表示PYY(SEQ.ID.NO.1)、PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.10)及其類似物的抗分泌作用，是基于鼠空腸的電壓箝制備物中的基底短路電流(baselineshortcircuitcurrent，SCC)。在SCC中的變化值用μA/0.6cm2表示，均值±SEM來(lái)自3-7個(gè)不同的空腸制備物。A和B中所示的肽，用與圖2中所用的相同符號(hào)表示。圖4顯示隨著PYY、N-α-Ac-PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.14)、N-α-Ac-[Tic27]PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.25)、N-α-Ac-[Bip27]PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.22)、N-α-Ac-[Nal27]PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.23)、N-α-Ac-[Bth27]PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.21)、N-α-Ac-[Phe27]PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.3)、N-α-Ac-[Phe27]PYY(25-36)(SEQ.ID.NO.26)、N-α-Ac-[Trp27]PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.5)、及N-α-Ac-[Thi27]PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.6)濃度的增加，125I-PYY與鼠空腸膜結(jié)合的抑制圖。下面描述本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例的合成、生物學(xué)效能及應(yīng)用。為了確定引發(fā)抗分泌作用所必需的結(jié)構(gòu)要求，合成了PYY活性位點(diǎn)PYY(22-36)的幾個(gè)類似物，并比較了它們?cè)谑罂漳c中的結(jié)合和抗分泌效力?，F(xiàn)有我們描述本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施例的結(jié)構(gòu)、合成及應(yīng)用。結(jié)構(gòu)本發(fā)明的肽具有列舉于前面的本發(fā)明概述中的通式。它們?cè)诘?7位均有一個(gè)芳香族氨基酸基團(tuán)，這一點(diǎn)對(duì)其抗分泌活性及用作抗腹瀉化合物均很重要。合成本發(fā)明的肽可用在肽領(lǐng)域中的技術(shù)人員所知的任何技術(shù)合成。在“SolidPhasePeptideSynthesis”(第二版)一書(shū)(Stewart，J.M.andYoung，J.D.PierceChemicalCompany，Rockford，IL，1984)中對(duì)多種可行技術(shù)作了很好的總結(jié)。列于表1及表2的肽的合成如下肽的合成是在一個(gè)AppliedBiosystem430A型合成儀上進(jìn)行的。氨基酸和序列的分析分別用的是WatersPico-Tag儀和AppliedBiosystem470型儀器。肽的純化是按照標(biāo)準(zhǔn)規(guī)程，用的是配置了481型分光光度計(jì)和U6K注射器的Waters600型溶劑分配系統(tǒng)進(jìn)行的。肽產(chǎn)物是在密執(zhí)安大學(xué)、蛋白化學(xué)廠(AnnArbor，密執(zhí)安州)按照標(biāo)準(zhǔn)方法測(cè)定的。所有Boc-L-氨基酸衍生物、溶劑、化學(xué)試劑及樹(shù)脂都購(gòu)自市場(chǎng)，使用前未作進(jìn)一步純化。將對(duì)-甲基苯羥胺(MBHA)樹(shù)脂(0.45mmol，-NH2)置于肽合成儀的反應(yīng)容器內(nèi)，使用生產(chǎn)廠商所提供的程序并結(jié)合雙偶聯(lián)程序(doublecouplingprocedure)(如見(jiàn)Balasubramaniametal.，PeptideResearch132，1988)，將被保護(hù)的氨基酸衍生物被順序地偶聯(lián)上去。所有氨基酸都是利用2.2當(dāng)量預(yù)先制備的對(duì)稱酐偶聯(lián)的。不過(guò)，為避免副反應(yīng)，Arg、Gln和Asn是經(jīng)預(yù)先制成1-羥基苯并三唑(HOBT)酯而偶聯(lián)的。合成結(jié)束時(shí)，去除N-α-Boc基團(tuán)，并且在某些情況下，使自由的α-NH2與乙酐(2當(dāng)量)和二異丙基乙胺反應(yīng)使其乙?；?，直至獲得陰性的茚三酮試驗(yàn)(Anal.Biochem.34595，1970)。然后該肽樹(shù)脂用內(nèi)含對(duì)-甲酚(～0.8g)的HF(10ml)在-2～-4℃下處理1小時(shí)。清除HF，將殘余物用二乙醚轉(zhuǎn)移到一個(gè)多孔濾器漏斗(afrittedfilterfunnel)中，并用二乙醚反復(fù)洗滌，用乙酸(2×15ml)抽提并凍干。如此獲得的粗制肽用半制備性RP-HPLC純化，見(jiàn)圖1。所合成的類似物的例子有[im-DNP-His26]PYYYPAKPEAPGEDASPEELSRYYASLR[im-DNP-His26]YLNLVTRQRY-NH2(SEQ.IDNo.9)PYY(22-36)ASLRHYLNLVTRQRY-NH2(SEQ.IDNo.10)[Ala32]PYYASLRHYLNLV[Ala]RQRY-NH2(SEQ.IDNo.11)[Ala23，32]PYYA[Ala]LRHYLNLV[Ala]RQRY-NH2(SEQ.IDNo.12)[Glu28]PYY(22-36)ASLRHY[Glu]NLVTRQRY-NH2(SEQ.IDNo.13)N-α-Ac-PYY(22-36)N-α-Ac-ASLRNYLNLVTRQRY-NH2(SEQ.IDNo.14)N-α-Ac[p.Cl.Phe26]PYYN-α-Ac-ASLR[p.Cl.Phe26]YLNLVTRQRY-NH2(SEQ.IDNo.15)N-α-Ac[Glu28]PYYN-α-Ac-ASLRHY[Glu]NLVTRQRY-NH2(SEQ.IDNo.16)N-α-Ac[Phe27]PYYN-α-Ac-ASLRH[Phe]ENLVTRQR[N-Me-Tyr]-NH2(SEQ.IDNo.3)N-α-Ac[N-Me-Tyr36]PYYN-α-Ac-ASLRHYENLVTRQR[N-Me-Tyr]-NH2(SEQ.IDNo.17)N-α-myristoyl-PYY(22-36)N-α-myristoyl-ASLRHYLNLVTRQRY-NH2(SEQ.IDNo.18)N-α-naphtheleneacetyl-PYY(22-36)N-α-naphthsleneacetyl-ASLRHYLNLVTRQRY-NH2(SEQ.IDNo.19)N-α-Ac[Phe27]PYYN-α-Ac-ASLRH[Phe]ENLVTRQR[N-Me-Tyr]-NH2(SEQ.IDNo.3)N-α-Ac-PYY(22-36)N-α-Ac-ASLRHYLNLVTRQRY-NH2(SEQ.IDNo.20)N-α-Ac-[Bth27]PYY(22-36)N-α-Ac-ASLRH[Bth]LNLVTRQRY-NH2(SEQ.IDNo.21)N-α-Ac-[Bip27]PYY(22-36)N-α-Ac-ASLRH[Bip]LNLVTRQRY-NH2(SEQ.IDNo.22)N-α-Ac-[Nal27]PYY(22-36)N-α-Ac-ASLRH[Mal]LNLVTRQRY-NH2(SEQ.IDNo.23)N-α-Ac-[Trp27]PYY(22-36)N-α-Ac-ASLRH[Trp]LNLVTRQRY-NH2(SEQ.IDNo.5)N-α-Ac-[Thi27]PYY(22-36)N-α-Ac-ASLRH[Thi]LNLVTRQRY-NH2(SEQ.IDNo.6)N-α-Ac-[Tic27]PYY(22-36)N-α-Ac-ASLRH[Tic]LNLVTRQRY-NH2(SEQ.IDNo.25)N-α-Ac-[Phe27]PYY(25-36)N-α-Ac-H[Phe]LHLVTRQRY-NH2(SEQ.IDNo.26)N-α-Ac-[Phe27，Thi36]PYY(22-36)N-α-Ac-ASLRH[Phe]LNLVTRQR[Thi]-NH2(SEQ.IDNo.27)N-α-Ac-[Thz26，Phe27]PYY(22-36)N-α-Ac-ASLR[Thz][Phe]LNLVTRQRY-NH2(SEQ.IDNo.28)N-α-Ac-[Pcp27]PYY(22-36)N-α-Ac-ASLRH[Pcp]LNLVTRQRY-NH2(SEQ.IDNo.29)N-α-Ac-[Phe22，27]PYY(22-36)N-α-Ac-[Phe]SLRH[Phe]LNLVTRQRY-NH2(SEQ.IDNo.30)N-α-Ac-[Tyr22，Phe27]PYY(22-36)N-α-Ac-[Tyr]SLRH[Phe]LNLVTRQRY-NH2(SEQ.IDNo.7)N-α-Ac-[Trp28]PYY(22-36)N-α-Ac-ASLRHY[Trp]NLVTRQRY-NH2(SEQ.IDNo.31)N-α-Ac-[Trp30]PYY(22-36)N-α-Ac-ASLRHYLN[Trp]VTRQRY-NH2(SEQ.IDNo.32)N-α-Ac-[Ala26，Phe27]PYY(22-36)N-α-Ac-ASLR[Ala][Phe]LNLVTRQRY-NH2(SEQ.IDNo.33)N-α-Ac-[Bth27]PYY(22-36)N-α-Ac-ASLRH[Bth]LNLVTRQRY-NH2(SEQ.IDNo.34)N-α-Ac-(Phe27]PYY(22-36)N-α-Ac-ASLRH[Phe]LNLVTRQRY-NH2(SEQ.IDNo.35)N-α-Ac-[Phe27，36]PYY(22-36)N-α-Ac-ASLRH[Phe]LNLVTRQR[Phe]-NH2(SEQ.IDNo.36)N-α-Ac-[Phe27，D-Trp32]PYY(22-36)N-α-Ac-ASLRH[Phe]LNLV[D-Trp]RQRY-NH2(SEQ.IDNo.37)(上表中，myristoyl-為十四烷?；?，naphthaleneacetyl-為萘乙?；?分析結(jié)合研究制備僅在Thr36處作標(biāo)記的125I-PYY和鼠空腸上皮質(zhì)膜的方法按照標(biāo)準(zhǔn)的方法進(jìn)行(如見(jiàn)Laburtheetal.Endocrinology，文獻(xiàn)同上；Servinetal.文獻(xiàn)同上；Voisinetal.Ann.N.Y.Acad.Sci.611343，1990)。結(jié)合試驗(yàn)是在總體積為0.25ml的60mMHEPES緩沖液(pH7)中進(jìn)行的，內(nèi)含2％BSA(牛血清白蛋白)、0.1％桿菌肽、5mMMgCl2、和0.05nM125I-PYY(含或不含競(jìng)爭(zhēng)性肽)。20,000×g離心10分鐘以分開(kāi)結(jié)合肽和游離肽。在含1μM不標(biāo)記的PYY(代表10％的總結(jié)合量)時(shí)測(cè)定非特異性125I-PYY結(jié)合。短路電流的測(cè)定肽的抗分泌作用是通過(guò)測(cè)定被架置在Ussing箱中并被自動(dòng)地加上電壓的鼠空腸粘膜中的短路電流(SSC)來(lái)進(jìn)行研究的，如Coxetal.所描述的(J.Physiol.文獻(xiàn)同上)。簡(jiǎn)單地說(shuō)，把粘膜條放置在有機(jī)玻璃Ussing箱的兩個(gè)半部之間(窗口大小為0.6cm2)，Ussing箱內(nèi)含充氧(95％O2/5％CO2)的Krebs-Henseleit溶液(117mMNaCl、4.7mMKCl、2.5mMCaCl2；1.2mMMgSO4、24.8mMNaHCO3及11.1mM葡萄糖)，pH7.4，37℃。常規(guī)作法是從每一只動(dòng)物中獲得4個(gè)空腸制備物，這些制備物表現(xiàn)出類似的電位差和SCC，但沒(méi)將其配對(duì)。用一個(gè)W-P二極電壓夾給制備物自動(dòng)加電壓，SCC即在筆式記錄儀上連續(xù)顯示出來(lái)。一旦達(dá)到一穩(wěn)定的基底SCC，只把肽加到嗜堿側(cè)儲(chǔ)存器(thebasolateralreservoir)中，從而構(gòu)建出漸增的濃度-反應(yīng)曲線圖。數(shù)據(jù)分析在結(jié)合試驗(yàn)中，所有點(diǎn)都是取至少三次試驗(yàn)的平均值、每次試驗(yàn)重復(fù)兩次。為清楚起見(jiàn)，結(jié)合試驗(yàn)中的SEMs(平均標(biāo)準(zhǔn)誤)未在圖2中表示出來(lái)，但均小于10％。SCC中的變化值表示為均值±1SEMμA/0.6cm2，來(lái)自3-7個(gè)不同的制備物。EC50值是從合并的“漸增濃度-反應(yīng)”曲線中采用一迭代曲線選配程序(aniterativecurvefittingprogram)計(jì)算而得。數(shù)據(jù)組(SCC記錄)的比較采用不成對(duì)的Student′s的t-檢驗(yàn)，當(dāng)p值＜0.5時(shí)，認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。下面是關(guān)于本發(fā)明的化合物的生物學(xué)活性的結(jié)果(見(jiàn)表1和表2)。如下所述，對(duì)所檢測(cè)的化合物分析了純度及它們?cè)谑罂漳c中的結(jié)合效力和抗分泌效力。反相分析層析表明，純化的肽中，有＞96％是同源的，此外，具有預(yù)期的氨基酸組成和含量。例如，圖1顯示了N-α-Ac-[Phe27]PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.3)的RT-HPLC層析圖。通過(guò)序列分析進(jìn)一步鑒定了該游離肽(見(jiàn)表1和表2)。肽的總產(chǎn)率在10％-30％范圍內(nèi)。PYY、[im-DNP-His26]PYY(SEQ.ID.NO.9)、及PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.10)的類似物取代125I-PYY結(jié)合到鼠空腸上皮質(zhì)膜，是以一種濃度依賴的方式。盡管根據(jù)IC50值，[im-DNP-His26]PYY(SEQ.ID.NO.9)及PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.10)的效力比PYY低20倍，但它們顯示出與完整的激素相同的最大反應(yīng)(圖2、表1)。用Ala替代Thr32(正如在[Ala32]PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.11)中的結(jié)果是降低了結(jié)合效力，當(dāng)用Ala替代Ser23和Thr32時(shí)，則進(jìn)一步降低受體親和力。此外，在第28位引進(jìn)一個(gè)負(fù)電荷但不改變螺旋結(jié)構(gòu)(正如在[Glu28]PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.13)中)時(shí)，降低了結(jié)合，原因可能是由于破壞了離子間的相互作用。由于已知疏水基可增加與受體的相互作用(Bala-subramaniametal.Biochem.Biophys.Res.Comm.1371041，1986)，也測(cè)定了PYY(22-36)的N-α-十四烷酰-及N-α-萘乙酰-衍生物的結(jié)合。這兩種類似物均表現(xiàn)出比PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.10)稍低的結(jié)合親和力，可能是由于增加了位阻。而另一方面，PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.14)的N-α-乙?；磻?yīng)使受體親和力增加了4倍。用N-α-Ac-PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.20)對(duì)結(jié)構(gòu)-活性的進(jìn)一步研究表明，用N-Me-Tyr替代Tyr36或用p.Cl-Phe替代His26，降低了結(jié)合效力。然而，用Phe替代Tyr27，卻使受體的親和力增加了28％。作為對(duì)照，對(duì)PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.10)及其幾個(gè)類似物的結(jié)合效力也作了檢測(cè)，然而，所有這些類似物都不抑制125I-PYY的結(jié)合，甚至在濃度達(dá)10μM時(shí)。在鼠空腸的粘膜制備物中，PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.10)類似物以一種濃度依賴的方式降低基底SCC(圖3A及B)，計(jì)算所得的EC50值列于表1。PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.10)類似物作為抗分泌劑的效力普遍低于作為結(jié)合抑制劑的效力。類似物的抗分泌效力順序與結(jié)合研究中的相似，但有兩個(gè)明顯的例外，即N-α-十四烷酰-PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.18)和N-α-萘乙酰-PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.19)。N-α-乙?；磻?yīng)以及用Phe替代Tyr27，增加了PYY(22-36)的抗分泌效力，這種類似物(N-α-Ac-[Phe27]PPY(22-36)(SEQ.ID.NO.3))的效力比完整的激素僅小9倍。此外，在最大抑制反應(yīng)中沒(méi)有顯著性差異對(duì)PYY(440nm，n＝6)(SEQ.ID.NO.1)及N-α-Ac-[Phe27]PYY(22-36)(1.4μM，n＝7)(SEQ.ID.NO.3)分別為-12.6±2.4及-12.0±1.3μA/0.6cm2。表1PYY、PYY片斷及其類似物的結(jié)合效力及抗分泌效力的比較肽RTaMH+(Calc.)結(jié)合bSCCb(分)IC50(nM)EC50(nM)<<p>a恒溶劑成份的(isocratic)，27％CH3CN，內(nèi)含0.1％TFA；b三次獨(dú)立試驗(yàn)的平均值；c恒溶劑成份的，32％CH3CN，內(nèi)含0.1％TFA；d摘自文獻(xiàn)10；n.d.未測(cè)定與其中等程度的結(jié)合效力相反，N-α-十四烷酰-PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.18)及N-α-萘乙酰-PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.19)類似物表現(xiàn)出很弱的抗分泌反應(yīng)，臨界濃度為約20nM，EC50分別大于2μM和30μM。當(dāng)濃度漸增至7.4μM后，N-α-十四烷酰-PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.18)使基礎(chǔ)的SCC降低了-5.2±0.6μA/0.6cm2(n＝7)。隨后加入PYY(100nM)進(jìn)一步使SCC降低了-10.2±0.7μA/0.6cm2(n＝7)，這與對(duì)PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.10)的對(duì)照反應(yīng)沒(méi)有顯著性差異。能中和PYY反應(yīng)，用類似物(1μM)處理3種組織，構(gòu)建出“PYY濃度-反應(yīng)”曲線，并與對(duì)照進(jìn)行比較。該片段使基礎(chǔ)電流減少了-0.4±0.3μA/0.6cm2，但所得的PYYEC50值(4.4±1.2nM，n＝3)并不顯著不同于未經(jīng)處理的對(duì)照(2.6±1.1nM，n＝3)。這些結(jié)果表明，對(duì)PYY(SEQ.ID.NO.1)的活性位點(diǎn)PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.10)，進(jìn)行修飾，能導(dǎo)致這些片段的結(jié)合效力和抗分泌效力的很大增加。在這一系列中，其主要類似物的效力順序如下PYY(SEQ.ID.NO.1)＞N-α-Ac-[Phe27]PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.3)＞N-α-Ac-PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.14)＞PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.10)。此外，我們的研究顯示Ser23和Thr32的羥基、以及His26的咪唑基對(duì)于與腸PYY-優(yōu)選受體的相互作用來(lái)說(shuō)很重要。盡管一般來(lái)說(shuō)，類似物的結(jié)合效力與抗分泌效力之間有很好的相關(guān)性，但也有明顯的例外。N-α-十四烷酰-PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.18)和N-α-萘乙酰-PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.19)類似物抑制125I-PYY結(jié)合的效力屬中等，但卻表現(xiàn)出很弱的抗分泌反應(yīng)。這一觀察結(jié)果提示，這些類似物可能是頡抗物。然而，用這些類似物預(yù)先處理空腸膜卻沒(méi)能顯著改變對(duì)PYY的抗分泌反應(yīng)。此差異的原因目前尚不清楚。表2和圖4給出了其它的PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.10)及PYY(25-36)類似物的IC50值。根據(jù)表2所示結(jié)果，在這一系列中，類似物表現(xiàn)出如下的效力順序N-α-Ac-[Tic27]PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.25)＜N-α-Ac-[Bip27]PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.22)＜N-α-Ac-[Nal27]PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.23)＜N-α-Ac-[Bth27]PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.21)＜N-α-Ac-[Phe27]PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.3)＜N-α-Ac-[Phe27]PYY(25-36)(SEQ.ID.NO.26)＜N-α-Ac-[Trp27]PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.5)＜N-α-Ac-[Thi27]PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.6)＜N-α-Ac-PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.14)＜PYY(SEQ.ID.NO.1)。表2PYY和PYY類似物的受體結(jié)合數(shù)據(jù)的比較到目前為止被鑒定的NPY/PYY受體主要被歸入Y-1、Y-2、和Y-3亞型(Balsubramaniametal.J.Biol.Chem.26514724，1990；Mi-chel，TrendsPharmacol.Sci.12389，1991)。Y-1和Y-2受體均表現(xiàn)出對(duì)PYY的親和力大于對(duì)NPY，而且更有意義的是，NPY和PYY的C-末端片段僅在Y-2亞型中是有效的。而另一方面，Y-3受體對(duì)NPY表現(xiàn)出比對(duì)PYY更大的親和力。由于鼠空腸粘膜抗分泌反應(yīng)顯示出一種興奮劑效力順序PYY(SEQ.ID.NO.1)＞NPY(SEQ.ID.NO.24)＞PYY(13-36)(SEQ.ID.NO.32)＞NPY(13-36)(SEQ.ID.NO.33)，所以這些上皮受體象是屬于Y-2類，而且對(duì)Y-1選擇性興奮劑[Pro34]NPY完全不敏感(Coxetal.Peptides，文獻(xiàn)同上)。他們的結(jié)果進(jìn)一步描述了N-α-Ac-PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.14)及N-α-Ac-[Phe27]PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.3)比PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.10)及不同長(zhǎng)度NPY的相應(yīng)C-末端片段更有效(Coxetal.Br.J.Pharmacol.文獻(xiàn)同上)。與對(duì)NPY(SEQ.ID.NO.24)及其各個(gè)片段相比，這些受體對(duì)PYY(SEQ.ID.NO.1)及其C-末端片段具有更高的親和力，該結(jié)果與用鼠腸上皮膜進(jìn)行受體結(jié)合研究所獲得的效力順序是一致的(Laburtheetal.文獻(xiàn)同上；Laburthe，文獻(xiàn)同上；Voisinetal.Ann.N.Y.Acad.Sci.文獻(xiàn)同上)；Voisionetal.Am.J.Physiol.)。此外，如上所述，合成了表3中所列的類似物并檢測(cè)了結(jié)合活性。表3中所示結(jié)果表明，N-α-Ac-[Tyr22，Phe27]PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.7)在其競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合中，與PYY(SEQ.ID.NO.1)相似，表明在第22位引進(jìn)一個(gè)芳香族氨基酸(如Tyr)，是一種有效的PYY類似物。表3應(yīng)用在本發(fā)明的方法的實(shí)施中，將有效量的本發(fā)明的類似物(如N-α-Ac-[Phe27]PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.3)、N-α-Ac-[Trp27]PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.24)、N-α-Ac-[Phe27]PYY(25-36)(SEQ.ID.NO.3)、N-α-Ac-[Thi27]PYY(22-36)(SEQ.ID.NO.6)或其衍生物)的任一種或其組合，通過(guò)為本領(lǐng)域所知的任何一種一般的和可接受的方法，施用單獨(dú)的或以與其它化合物或本發(fā)明的化合物的組合物。因此，這些化合物或組合物可經(jīng)口(如經(jīng)口腔)、舌下、腸胃外(如經(jīng)肌肉、靜脈、或皮下)、直腸(如經(jīng)栓劑或洗滌)、皮膚(如皮膚電穿孔)、或經(jīng)吸入(如經(jīng)氣溶膠)，以固體、液體或氣體劑型給藥，包括片劑和懸液。給藥方式可任意地采用單個(gè)單位劑量的形式進(jìn)行連續(xù)治療，或一次劑量治療。因此，本發(fā)明的方法可用于非常有必要解除癥狀時(shí)或危急時(shí)。此外，本發(fā)明的方法也可有效地用作連續(xù)治療或預(yù)防性治療。在制備本發(fā)明中的組合物時(shí)，可利用的制藥載體可以是固體、液體或氣體。因此，該組合物的形態(tài)可以是藥片、藥丸、膠囊、栓劑、粉末、腸包被的或其它的被保護(hù)的制劑(如結(jié)合到離子交換樹(shù)脂上或包埋在脂蛋白的小泡中)、持續(xù)釋放性制劑、溶液、懸液、酏劑、氣溶膠、等等。載體可選自不同的油，包括源自石油、動(dòng)物、植物、或合成的油，如花生油、大豆油、礦物油、芝麻油、等等。水、鹽水、含水的右旋糖、以及乙二醇則是優(yōu)選的液體載體，尤其(當(dāng)與血液等滲時(shí))可用于注射的溶液。例如，用于靜脈內(nèi)注射的制劑包括活性成分的無(wú)菌水溶液，即把固體的活性成分溶于水中制成水溶液，然后對(duì)此溶液作無(wú)菌處理。合適的制藥賦形劑包括淀粉、纖維素、滑石、葡萄糖、乳糖、明膠、麥芽、米、面粉、白堊、二氧化硅、硬脂酸鎂、硬脂酸鈉、單硬脂酸甘油(glycerolmono-stearate)、氯化鈉、脫脂奶粉、甘油、丙二醇、水、乙醇、等等。該組合物中可加入常規(guī)的制藥添加劑，如防腐劑、穩(wěn)定劑、潤(rùn)濕劑或乳化劑、調(diào)節(jié)滲透壓的鹽、緩沖液、等等。關(guān)于合適的制藥載體以及它們配制方法的描述見(jiàn)E.W.Martin的Remington′sPharmaceuti-calSciences?？傊?，此組合物中須包含有效量的活性化合物以及一合適的載體，以便制備出可用適當(dāng)?shù)慕o藥方式給予接受者的、適當(dāng)?shù)膭┬?。為治療前面所提及的疾病所需的本發(fā)明的化合物的劑量大小取決于給藥的方式、施藥對(duì)象的年齡和體重、以及施藥對(duì)象有待治療的狀況，并最終將由參診的醫(yī)師或獸醫(yī)決定。由參診的醫(yī)師或獸醫(yī)所確定的該活性化合物的這種劑量，在此被稱作“治療有效量”。因此，典型的給藥方式是口服給藥或非腸胃給藥?？诜o藥每天的劑量一般在0.1-100mg/kg體重的范圍；非腸胃給藥，每天的劑量一般在0.001-50mg/kg體重的范圍。重要的是，對(duì)于有效地預(yù)防或治療胃腸病，尤其是傳染性腹瀉(如病毒性的或細(xì)菌性的)、炎性腹瀉、或手術(shù)所致的腹瀉，該治療劑在其實(shí)際應(yīng)用中的含量水平，是相對(duì)無(wú)毒、無(wú)抗原性、及無(wú)刺激性的。在此所描述的例子及實(shí)施例應(yīng)理解為，僅僅是為了說(shuō)明的目的，本領(lǐng)域的技術(shù)人員將能由此而作各種不同的修改和改變，這些修改或改變都包括在此申請(qǐng)的精神和范圍之內(nèi)以及所附錄的權(quán)利要求范圍之內(nèi)。權(quán)利要求1.一種具有以下公式的化合物或其藥用可接受的鹽其中X為一條含有0-5個(gè)氨基酸的鏈，包括，其N-末端氨基酸與R1和R2相連；Y為一條含有0-4個(gè)氨基酸的鏈，包括，其C-末端氨基酸與R3和R4相連；R1為H、C1-C12烷基、C6-C18芳基、C1-C12?；?、C7-C18芳烷基、或C7-C18烷芳基；R2為H、C1-C12烷基、C6-C18芳基、C1-C12?；7-C18芳烷基、或C7-C18烷芳基；A22為一個(gè)芳香族氨基酸、Ala、Aib、Anb、N-Me-Ala、或被刪去；A23為Ser、Thr、Ala、Aib、N-Me-Ser、N-Me-Thr、N-Me-Ala、D-Trp、或被刪去；A24為L(zhǎng)eu、Gly、Ile、Val、Trp、Aib、Anb、N-Me-Leu、或被刪去；A25為Arg、Lys、homo-Arg、二乙基homo-Arg、Lys-ε-NH-R(其中R為H、一個(gè)分支或直鏈的C1-C10烷基、或一個(gè)芳基)、Orn、或被刪去；A26為Ala、His、Thr、3-Me-His、1-Me-His、β-吡唑基丙氨酸(pyrozolylalanine)、N-Me-His、Arg、Lys、homo-Arg、二乙基-homo-Arg、Lys-ε-NH-R(其中R為H、一個(gè)分支或直鏈的C1-C10烷基、或一個(gè)芳基)、Orn、或被刪去；A27為一個(gè)除Tyr外的芳香族氨基酸；A28為L(zhǎng)eu、Ile、Val、Trp、Aib、Anb、或N-Me-Leu；A29為Asn、Ala、Gln、Gly、Trp、或N-Me-Asn；A30為L(zhǎng)eu、Ile、Val、Trp、Aib、Anb、或N-Me-Leu；A31為Val、Ile、Trp、Aib、Anb、或N-Me-Val；A32為T(mén)hr、Ser、N-Me-Ser、N-Me-Thr、或D-Trp；R3為H、C1-C12烷基、C6-C18芳基、C1-C12?；?、C7-C18芳烷基、或C7-C18烷芳基；以及R4為H、C1-C12烷基、C6-C18芳基、C1-C12?；?、C7-C18芳烷基、C7-C18烷芳基。2.權(quán)利要求1的化合物或其藥用可接受的鹽，其中的A27為Phe、Nal、Bip、Pcp、Tic、Trp、Bth、Thi、或Dip。3.權(quán)利要求1的化合物，其中的X為A17-A18-A19-A20-A21，其中A17為Cys、Leu、Ile、Val、Aib、Anb或N-Me-Leu；A18為Cys、Ser、Thr、N-Me-Ser、或N-Me-Thr；A19為Cys、Arg、Lys、homo-Arg、二乙基-homo-Arg、Lys-ε-NH-R(其中R為H、一個(gè)分支或直鏈的C1-C10烷基、或C6-C18芳基)、或Orn；A20為一個(gè)芳香族氨基酸或Cys；以及A21為一個(gè)芳香族氨基酸、Cys。4.權(quán)利要求1的化合物或其藥用可接受的鹽，其中Y為A33-A34-A35-A36，其中A33為Cys、Arg、Lys、homo-Arg、二乙基-homo-Arg、Lys-ε-NH-R(其中R為H、一個(gè)分支或直鏈的C1-C10烷基、或C6-C18芳基)、或Orn；A34為Cys、Gln、Asn、Ala、Gly、N-Me-Gln、Aib、或Anb；A35為Cys、Arg、Lys、homo-Arg、二乙基-homo-Arg、Lys-ε-NH-R(其中R為H、一個(gè)分支或直鏈的C1-C10烷基、或C6-C18芳基)、或Orn；以及A36為一個(gè)芳香族氨基酸、Cys。5.權(quán)利要求4的化合物或其藥用可接受的鹽，其中該化合物有公式N-α-Ac-Ala-Ser-Leu-Arg-His-Phe-Leu-Ash-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(SEQ.ID.NO.3)。6.權(quán)利要求4的化合物或其藥用可接受的鹽，其中該化合物有公式H-Ala-Ser-Leu-Arg-His-Phe-Leu-Ash-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(SEQ.ID.NO.4)。7.權(quán)利要求4的化合物或其藥用可接受的鹽，其中該化合物有公式N-α-Ac-Ala-Ser-Leu-Arg-His-Trp-Leu-Ash-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(SEQ.ID.NO.5)。8.權(quán)利要求4的化合物或其藥用可接受的鹽，其中該化合物有公式N-α-Ac-Ala-Ser-Leu-Arg-His-Thi-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(SEQ.ID.NO.6)。9.權(quán)利要求4的化合物或其藥用可接受的鹽，其中該化合物有公式N-α-Ac-Tyr-Ser-Leu-Arg-His-Phe-Leu-Ash-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(SEQ.ID.NO.7)。10.一種具有以下公式的化合物或其藥用可接受的鹽其中N-末端氨基酸與R1和R2相連；Y為一條含有0-4個(gè)氨基酸的鏈，包括，其C-末端氨基酸與R3和R4相連；R1為H、C1-C12烷基、C6-C18芳基、C1-C12?；7-C18芳烷基、或C7-C18烷芳基；R2為H、C1-C12烷基、C6-C18芳基、C1-C12?；?、C7-C18芳烷基、或C7-C18烷芳基；A25為Arg、Lys、homo-Arg、二乙基-homo-Arg、Lys-ε-NH-R(其中R為H、一個(gè)分支或直鏈的C1-C10烷基、或一個(gè)芳基)、Orn、或被刪去；A26為Ala、His、Thr、3-Me-His、1-Me-His、β-吡唑基丙氨酸、N-Me-His、Arg、Lys、homo-Arg、二乙基-homo-Arg、Lys-ε-NH-R(其中R為H、一個(gè)分支或直鏈的C1-C10烷基、或一個(gè)芳基)、Orn、或被刪去；A27為一個(gè)芳香族氨基酸；A28為L(zhǎng)eu、Ile、Val、Trp、Aib、Anb、或N-Me-Leu；A29為Asn、Ala、Gln、Gly、Trp、或N-Me-Asn；A30為L(zhǎng)eu、Ile、Val、Trp、Aib、Anb、或N-Me-Leu；A31為Val、Ile、Trp、Aib、Anb、或N-Me-Val；A32為T(mén)hr、Ser、N-Me-Ser、N-Me-Thr、或D-Trp；R3為H、C1-C12烷基、C5-C18芳基、C1-C12?；7-C18芳烷基、或C7-C18烷芳基；以及R4為H、C1-C12烷基、C6-C18芳基、C1-C12酰基、C7-C18芳烷基或C7-C18烷芳基。11.權(quán)利要求10的化合物，其中的A27為Phe、Nal、Bip、Pcp、Tic、Trp、Bth、Thi、或Dip。12.權(quán)利要求10的化合物或其藥用可接受的鹽，其中的Y為A33-A34-A35-A36，其中A33為Arg、Lys、homo-Arg、二乙基-homo-Arg、Lys-ε-NH-R(其中R為H、一個(gè)分支或直鏈的C1-C10烷基、或C6-C18芳基)、Cys、或Orn；A34為Cys、Gln、Asn、Ala、Gly、N-Me-Gln、Aib、或Anb；A35為Arg、Lys、homo-Arg、二乙基-homo-Arg、Lys-ε-NH-R(其中R為H、一個(gè)分支或直鏈的C1-C10烷基、或C6-C18芳基)、Cys、或Orn；以及A36為一個(gè)芳香族氨基酸、Cys。13.權(quán)利要求12的化合物或其藥用可接受的鹽，其中該化合物是有公式N-α-Ac-Arg-His-PheLeu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(SEQ.ID.NO.26)。14.一種能降低過(guò)多的腸水及電解質(zhì)分泌的治療用組合物，所說(shuō)組合物含有治療有效量的權(quán)利要求1和權(quán)利要求10的化合物、以及一種藥用可接受的載體物質(zhì)。15.一種可降低哺乳動(dòng)物中過(guò)多的腸水和電解質(zhì)分泌的方法，所說(shuō)方法包括，給所說(shuō)哺乳動(dòng)物施用治療有效量的權(quán)利要求14的組合物。16.一種可調(diào)節(jié)哺乳動(dòng)物中的細(xì)胞增生的方法，所說(shuō)方法包括，給所說(shuō)哺乳動(dòng)物施用治療有效量的權(quán)利要求14的組合物。17.一種可增強(qiáng)哺乳動(dòng)物中的養(yǎng)分運(yùn)輸?shù)姆椒?，所說(shuō)方法包括，給所說(shuō)哺乳動(dòng)物施用治療有效量的權(quán)利要求14的組合物。18.一種可調(diào)節(jié)哺乳動(dòng)物中的脂解作用的方法，所說(shuō)方法包括，給所說(shuō)哺乳動(dòng)物施用治療有效量的權(quán)利要求14的組合物。19.一種可調(diào)節(jié)哺乳動(dòng)物中的血流的方法，所說(shuō)方法包括，給所說(shuō)哺乳動(dòng)物施用治療有效量的權(quán)利要求14的組合物。20.一種含有權(quán)利要求10的兩條肽、或權(quán)利要求1的1條肽或權(quán)利要求10的1條肽的二聚化合物，其中，所說(shuō)二聚體是通過(guò)一個(gè)酰胺鍵、或所說(shuō)兩條肽間的一個(gè)二硫鍵形成的。全文摘要本發(fā)明提供了PYY的類似物。本發(fā)明還提供了可用于控制諸如細(xì)胞增生、養(yǎng)分運(yùn)輸、脂解及腸水和電解質(zhì)分泌等生物學(xué)活動(dòng)的組合物和方法。文檔編號(hào)C07K7/00GK1124927SQ94192277公開(kāi)日1996年6月19日申請(qǐng)日期1994年3月29日優(yōu)先權(quán)日1993年3月29日發(fā)明者安彼開(kāi)帕坎·巴拉蘇博拉馬尼爾姆申請(qǐng)人:辛辛那提大學(xué)