專利名稱：可識別細胞表面抗原的單克隆抗體的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及可抑制造血干細胞的生長固著的、并可識別具有造血干細胞生長固著支持潛能的脾臟基質(zhì)細胞的新型單克隆抗體，本發(fā)明進一步涉及產(chǎn)生該單克隆抗體的雜交瘤。
因為本發(fā)明的單克隆抗體可識別作為抗原的對于骨髓細胞在造血組織中生長固著起重要作用的物質(zhì)，并且具有抑制造血干細胞生長固著的特性，所以其可用作具有從骨髓內(nèi)放出白血病細胞、提高對由抗癌藥引起的白血病的治療效果、增強抗癌藥的效力的作用的藥物，是非常有用的物質(zhì)。
已知粒細胞集落刺激因子，例如基因重組粒細胞集落刺激因子(rG—CSF)基本上作為一種液性因子刺激粒細胞的分化和增殖，并已在小鼠體內(nèi)實驗中報導，給予rG—CSF可增強骨髓造血，另外可在脾臟中引起顯著的髓外造血以增殖造血干細胞和脾臟中的所有造血前體細胞。并且認為脾臟中的髓外造血機制是，由于rG—CSF的刺激作用使脾臟造血微環(huán)境改變，致使造血能力增強而發(fā)生造血過程。
因此，本發(fā)明人注意到在給予rG—CSF后觀察脾臟基質(zhì)細胞，以便了解脾臟中造血能力的增強情況，并從給予了rG—CSF的小鼠的脾臟建立造血基質(zhì)細胞系(CF—1細胞)，以試圖分析基質(zhì)細胞與rG—CSF對造血能力的增強作用，并使用造血基質(zhì)細胞檢查對造血的支持能力，結(jié)果已認識到了其體外集落刺激活性及造血干細胞支持能力(Blood，80，1914(1992))。
由于在骨髓移植時同時移植CF—1細胞和骨髓細胞而了解到造血干細胞的體內(nèi)支持能力，所以認為上述造血基質(zhì)細胞系(CF—1細胞)具有表達一種細胞粘附因子的功能，該因子可使造血干細胞生長固著在造血組織上。
雖然已確定某些具有造血干細胞生長固著支持潛能的脾基質(zhì)細胞為一種細胞系(CF—1細胞)并已檢查了其細胞學特性，但迄今尚未制得識別其表面抗原的特異性抗體，也沒有完全了解特性。
因此，本發(fā)明人基于上述有關脾基質(zhì)細胞的知識和研究結(jié)果，努力進行了深入研究以圖開發(fā)能夠識別具有造血干細胞生長固著支持潛能之脾臟基質(zhì)細胞的特異性抗體，并建立了具有造血干細胞生長固著支持能力的脾臟基質(zhì)細胞的細胞系，同時使用該脾臟基質(zhì)細胞系作為免疫抗原制備了單克隆抗體，結(jié)果得到了一種新的單克隆抗體。
本發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)，所得到的單克隆抗體可識別具有造血干細胞生長固著支持潛能的脾臟基質(zhì)細胞的表面抗原，并具有抑制造血干細胞生長固著的特性，從而完成了本發(fā)明。
本發(fā)明的目的是提供識別具有造血干細胞生長固著支持能力之脾臟基質(zhì)細胞的表面抗原，并具有抑制造血干細胞生長固著之特性的新的單克隆抗體，本發(fā)明的另一個目的是提供生產(chǎn)該單克隆抗體的雜交瘤。
本發(fā)明的單克隆抗體涉及相對于具有造血干細胞生長固著之支持能力的脾臟基質(zhì)細胞表面抗原的新的單克隆抗體，并且其為識別與增強脾臟造血能力有關的脾基質(zhì)細胞的抗體，并且它極適用作具有抑制造血干細胞生長固著功能的物質(zhì)。有時，本文所說的造血干細胞的生長固著是指由造血組織的基質(zhì)細胞引起的造血干細胞的粘附，以及作為CFU—S集落的細胞分化和增殖。
本發(fā)明的單克隆抗體基本上可按下述方法制得。
例如，使用得自投用了rG—CSF的動物的脾臟基質(zhì)細胞，如由本發(fā)明人建立的CF—1細胞(脾臟基質(zhì)細胞)系作為抗原，按照常規(guī)免疫方法免疫動物，按照常規(guī)細胞融合方法對免疫細胞進行細胞融合，并按照常規(guī)克隆方法克隆融合的細胞。
作為可舉例的制備本發(fā)明單克隆抗體的方法，其包括使用本發(fā)明人建立的上述CF—1細胞(作為培養(yǎng)細胞系)作為抗原(Blood，Vol.80，1914(1992))，使以抗原免疫的哺乳動物的漿細胞(免疫細胞)與哺乳動物如小鼠的骨髓瘤細胞融合、克隆所得到的融合細胞(骨髓瘤)、從中選擇產(chǎn)生能識別上述細胞系之根據(jù)本發(fā)明的抗體的克隆、并培養(yǎng)之以回收目的抗體。但該方法只是一個例子，并且在這種情況下，例如不只可以使用上述CF—1細胞，而且還可適當?shù)厥褂冒吹玫紺F—1細胞的方法制得的造血組織的其他基質(zhì)細胞，或衍生于人脾臟基質(zhì)細胞的造血組織的基質(zhì)細胞，以按如上述CF—1細胞情況下的同樣方式產(chǎn)生目的抗體。
制備這種單克隆抗體的方法，對用上述抗原免疫的哺乳動物沒有特殊限制；較好選擇那些在細胞融合中對將要使用的骨髓瘤細胞有適應性的動物，并且優(yōu)選使用小鼠、大鼠或倉鼠。
按照常規(guī)方法進行免疫，例如經(jīng)腹腔內(nèi)注射用脾臟基質(zhì)細胞如上述CF—1細胞免疫哺乳動物。具體地說，最好在適當量的PBS或等滲氯化鈉溶液中稀釋或懸浮之，每個月給予動物注射幾次。較好使用在最后一次給予上述細胞后分離的脾細胞作為免疫細胞。
可以使用不同的已知細胞作為與上述免疫細胞相融合的另一親代細胞，即哺乳動物骨髓瘤細胞，這些已知細胞包括P3(P3×63Ag8.653)(J.Immunol.，123，1548(1978))、P3—U1(CurrentTopics in Micro—biology and Immunology.，81.1—7(1978))、NS—1(Eur.J.Immunol.，6，511—519(1976))、MPC—11(Cell，8，405—415(1976))、Sp2/o—Ag14(Nature，276，269—270(1978))、FO(J.I mmunol.Meth.，35，1—21(1980))、S194(J.Exp，Med.，148，313—323，(1978))和R210(Nature，277，131—133(1979))等。
可基本上按照常規(guī)方法，例如Milstein等人(MethodsEnzymol.，73，3—46(1981))的方法完成上述免疫細胞與骨髓瘤細胞的細胞融合。
更具體地說，可以在融合加速劑存在下，在常規(guī)營養(yǎng)培養(yǎng)基中完成上述細胞融合。可用聚乙二醇(PEG)和仙臺病毒(HVJ)作為融合加速劑，并且可在需要時加入適當?shù)淖魟┤缍谆鶃嗧?，以增強融合效力。就免疫細胞與骨髓瘤細胞的比例來說，前者優(yōu)選是后者使用量的1—10倍。用于上述細胞融合的培養(yǎng)基的例子包括適于上述骨髓瘤細胞增殖的RPMI—1640培養(yǎng)基和MEM培養(yǎng)基，以及常規(guī)用于培養(yǎng)這種類型細胞的其他培養(yǎng)基；此外，可以在培養(yǎng)基中添加血清如胎牛血清(FBS)。
可在上述培養(yǎng)基中將預定量的上述免疫細胞和骨髓瘤細胞混合，向培養(yǎng)基中加入預加熱到大約37℃的PEG溶液，例如平均分子量為1,000—6,000的，濃度約30—60％(W/V)的PEG的溶液，并混合之以進行細胞融合。然后，經(jīng)反復重復加入適當培養(yǎng)基，離心反應混合物及上清等操作，以得到所形成的目的雜交瘤。
經(jīng)在常規(guī)選擇培養(yǎng)基，例如HAT培養(yǎng)基(添加次黃嘌呤、氨基喋呤和胸苷的培養(yǎng)基)中培養(yǎng)來選擇所說的雜交瘤。在HAT培養(yǎng)基中持續(xù)培養(yǎng)足夠時間，以使目的雜交瘤以外的其他細胞(非融合細胞)死亡，一般培養(yǎng)幾天到幾周。然后，以常規(guī)的有限稀釋法篩選產(chǎn)生目的抗體的雜交瘤并使之單克隆化。
可在常規(guī)培養(yǎng)基中繼代培養(yǎng)產(chǎn)生本發(fā)明單克隆抗體的已建立雜交瘤細胞系并在液氮中長期儲存。
可以使用常規(guī)培養(yǎng)雜交瘤并從上清中得到單克隆抗體的方法從雜交瘤中收集本發(fā)明的單克隆抗體，或者可以將雜交瘤注入適當?shù)牟溉閯游矬w內(nèi)以使之增殖，然后從動物腹水中得到單克隆抗體。前者適于制得高純度的抗體，后者適于大量產(chǎn)生抗體。
另外，可以使用常規(guī)純化手段如鹽析枝術、凝膠過濾及親和層析法，將按上述方法制得的單克隆抗體純化到高純度。
因為本發(fā)明的單克隆抗體具有抑制造血干細胞生長固著的潛能，所以可在白血病的臨床治療中用作具有增強抗腫瘤劑效力之功能的藥物；例如，利用這一功能，從骨髓釋放急性髓樣白血病細胞以改善白血病之抗腫瘤劑的效力。
在利用本發(fā)明之單克隆抗體的白血病藥物中，顯然使用該抗體作為改善白血病抗腫瘤劑之效力的藥物的特殊體系，對其改變和應用只要是按照本領域技術人員顯而易見的常規(guī)方法實踐的，則均應包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。


圖1顯示以免疫熒光法進行的分析(不存在抗體的對照、CF—1細胞)。
圖2顯示以免疫熒光法分析GSPST—1抗體對CF—1細胞的結(jié)合性質(zhì)。
圖3顯示以免疫熒光法分析HMS—1抗體對CF—1細胞的結(jié)合性質(zhì)。
圖4顯示按照免疫熒光法進行的分析(不存在抗體的對照，骨髓細胞)。
圖5顯示按照免疫熒光法分析GBPST—1抗體對骨髓細胞的結(jié)合性質(zhì)。
圖6顯示按照免疫熒光法分析HMS—1抗體對骨髓細胞的結(jié)合性質(zhì)。
圖7顯示本發(fā)明的單克隆抗體(GSPST—1)抑制骨髓移植的試驗。
圖8顯示本發(fā)明的單克隆抗體(HMS—1)抑制骨髓移植的試驗。
下面，將參照參考實驗例和實施例更詳細地描述本發(fā)明，但本發(fā)明并不受限于這些實施例。
參考實施例脾臟基質(zhì)細胞系的建立和其特性(1)脾臟基質(zhì)細胞系的建立從已投用rG—CSF(100μg/kg)5天的C57BL/6J小鼠之脾細胞的初級培養(yǎng)物建立具有造血干細胞支持能力的脾臟基質(zhì)細胞系。
即，在無菌條件下摘出給予rG—CSF后的脾臟，在25cm2塑料瓶(Corning Co.)內(nèi)，并在添加10％熱滅活胎牛血清(FBS)(Sanko Junyaku，Tokyo)、100U/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素的Isocove氏改良的Dulbecco氏培養(yǎng)基(IMDM)(Boehringer—Mannheim Co.)中，在37℃和5％CO2條件下，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6周，每周換兩次新鮮生長培養(yǎng)基。
在匯合培養(yǎng)物中，使用加在無Ca、Mg的PBS中的0.05％胰蛋白酶加入0.02％EDTA(Sigma Chemical Co.)，從培養(yǎng)瓶中收獲粘附細胞群體(基質(zhì)細胞)，并移入新的培養(yǎng)瓶中。這些繼代培養(yǎng)每周重復1或2次。早期傳代中(第1到第10代)，細胞的分裂比例為1/4到1/8，繼后這一比例為1/16至1/32。大約第10代后基質(zhì)細胞變?yōu)榫坏暮屠w維母細胞樣的。
在第20代時按上述方法收獲這些基質(zhì)細胞并使用有限稀釋法使細胞克隆化；重復進行兩次細胞克隆以建立基質(zhì)細胞系(CF—1細胞系)。
繼后，將這些細胞維持在含添加10％熱滅活FBS之5mlIMDM的25cm2培養(yǎng)瓶(Corning Co.)中，并以1/32的分裂比例每5天繼代培養(yǎng)1次?？蓮男∈笠酝獾钠渌麆游锝⑵⑴K基質(zhì)細胞系；例如，可使用上述同樣方法，經(jīng)用SV—40腺病毒載體轉(zhuǎn)化細胞(J.Cell.physiol.，148，245(1991))而建立人脾臟基質(zhì)細胞系。
(2)CF—1細胞的特性使用標準細胞化學技術檢查按上述方法建立的作為細胞系的CF—1細胞的堿性磷酸酶、酸性磷酸酶、β一半乳糖苷酶、2—萘酚基乙酸酯酶。還使用下列單克隆和多克隆抗體，以免疫酶學組織化學法檢查CF—1細胞的特性macI(Sero Tec)；因子VIII相關抗原(Dauopatts)；和I型膠原蛋白、III型膠原蛋白及粘連蛋白(Chemicon International Inc.)。用乳膠球攝入法(顆粒直徑1.09μm；Sigma)試驗胞吞作用，并在匯合培養(yǎng)后使細胞在25cm2培養(yǎng)瓶中暴露于10-6mol/L磷酸氫化可的松(Sigma)4周，以試驗CF—1細胞轉(zhuǎn)變成脂肪細胞的能力。
結(jié)果發(fā)現(xiàn)，CF—1細胞為堿性磷酸酶、因子VIII相關抗原、mac I和吞噬作用陰性，而它們對I型膠原蛋白、III型膠原蛋白和粘連蛋白則為陽性。在加10-6mol/L氫化可的松匯合培養(yǎng)的4周期間，CF—1細胞沒有轉(zhuǎn)變?yōu)橹炯毎?，而只含有微量脂肪。從這些數(shù)據(jù)看，CF—1細胞沒有前脂肪細胞、巨噬細胞及血管內(nèi)皮細胞的物征，因此可進一步表明它們衍生于與之不同的基質(zhì)細胞。
(3)CF—1細胞對造血干細胞的維持為了檢驗是否造血干細胞受到CF—1細胞的維持，按照Till和McCulloch的方法進行CFU—S試驗(脾臟集落形成細胞檢測法)。用900cGy(MBR—1520R；Hitachi，Tokyo)照射10只小鼠/組，然后靜脈內(nèi)注射骨髓單核細胞(BM細胞)(1.0×105/只，5.0×104/只，或2.5×104/只)和CF—1細胞(1.0×105/只)，并在第12天計數(shù)脾臟中的集落數(shù)作為CFU—S集落(脾臟集落)。
結(jié)果可見，當將骨髓單核細胞(BM細胞)和CF—1細胞移植到經(jīng)過照射的小鼠體內(nèi)時，各BM細胞組的脾集露數(shù)目比沒有移植CF—1細胞的小鼠顯著增加(1.4—1.8倍間)并且在移植后第12天，移植BM細胞和CF—1細胞之小鼠的存活比率比只移植BM細胞小鼠高，顯示低的死亡率，因此進一步表明CF—1細胞對造血干細胞的維持作用。
下列實施例詳細舉例說明本發(fā)明。
實施例單克隆抗體的制備(1)抗原和免疫使用按上述參考實施例所述方法制得的CF—1細胞作抗原進行免疫。使用添加10％胎牛血清(FBS；Sanko Junyaku)的Isocove氏改進的Dulbecco氏培養(yǎng)基(IMDM)(Boehringer—Mannheim Co.)，在5％CO2和37℃條件下繼代培養(yǎng)細胞。
用1mM EDTA/PBS處理細胞，并用吸移法從培養(yǎng)瓶中除去之。將細胞以大約1×107個/ml的細胞數(shù)懸浮于1mM EDTA/PBS中，并給予Wistar Imamich大鼠(7周令，雌性，動物繁殖研究所)。初次免疫給動物腹腔注射1ml濃度約107個/ml的細胞，一個月后再次追加注射1ml濃度約1×107個/ml的細胞。另外，以一個月間隔給予追加注射幾次濃度約1×107個/ml的1ml細胞懸浮液，并在被免疫大鼠抗體和CF—1細胞間的反應性被確認后，用1ml濃度為1×108個/ml細胞懸浮作最后免疫。最終免疫后3天殺死大鼠并摘取其脾臟。
(2)細胞融合將從大鼠體內(nèi)摘除的脾臟切碎，離心分離的脾細胞，懸浮在IMDM培養(yǎng)基(Boehringer—Mannheim Co.)中并充分洗凈。另一方面，以同樣方法在含有10％胎牛血清(FBS；Sanlco Junyaku)的IMDM(Boehringer—Mannheim Co.)中培養(yǎng)小鼠骨髓瘤細胞系Sp2/0—Ag14(Nature，276，269—270(1978))得到骨髓瘤細胞，并在上述IMDM培養(yǎng)基中洗凈，然后將其1×108個細胞和2×108個上述脾細胞放入離心管中并混合，以在聚乙二醇4000(NakaraiKagaku)作用下按常規(guī)方法(Clin.Exp.Immunol.，42，458—462(1980))進行細胞融合。
然后，將所得到的融合細胞分散于加有含20％FBS之IMDM培養(yǎng)基的96孔平板中，并在37℃和5％CO2條件下在保溫箱中培養(yǎng)之。第二天后逐步將其置換成HAT選擇培養(yǎng)基，并繼續(xù)進行培養(yǎng)。
開始培養(yǎng)后，每周兩次將上清置換成新的HAT培養(yǎng)基以繼續(xù)培養(yǎng)并維持細胞增殖。
然后使用有限稀釋法，按常規(guī)程序克隆所得到的融合的細胞。即利用上述融合細胞之上清中的抗體，用有限稀釋法檢測其與抗原的結(jié)合性質(zhì)，而按常規(guī)方法克隆只表現(xiàn)有強的抗原結(jié)合性質(zhì)的克隆。
(3)篩選使用流式細胞計數(shù)儀，以間接熒光抗體法完成對融合細胞(雜交瘤)的篩選。
使用CF—1細胞作為靶細胞以篩選產(chǎn)生目的抗體的克隆。即，離心并回收懸浮在反應緩沖液(含有2％FBS和0.02％NaN3的PBS)細胞，然后將細胞沉淀物懸浮在100μl雜交瘤培養(yǎng)上清(約1×106個/100μl)中并在4℃下反應1小時。用上述緩沖液清洗1次后，向細胞中加入FITC標記的羊抗大鼠IgG(FC)抗體(Chemicon)并保溫1小時。將細胞懸液洗1次后，用流式細胞計數(shù)器(FACScan，Becton Dickinson)分析之。
(4)抗體的純化按常規(guī)方法培養(yǎng)如上述步驟(3)中篩選的融合細胞，按常規(guī)方法分離上清液中產(chǎn)生的抗體并純化之。
從小孔中回收對抗原有高抗體滴度的雜交瘤，分散于組織培養(yǎng)塑料皿(Corning Co.)中，在5％CO2和37℃條件下培養(yǎng)之，增殖，并按常規(guī)方法純化以得到單克隆抗體GSPST—1和HMS—1。
在這種情況下，就HMS—1抗體和GSPST—1抗體來說，將所得到的細胞注射到BALB/cAJcl—nu棵鼠(8周令，雄性，NipponKurea)的腹腔中，10—14天后回收其腹水，用33％硫酸銨鹽析和對PBS透析。
有時，上述實施例中描述其中使用CF—1細胞作為免疫的抗原的情況；但在使基包括衍生于人脾臟基質(zhì)細胞之造血組織的基質(zhì)細胞系在內(nèi)其他脾臟基質(zhì)細胞的情況下，也有可能以同樣方式建立單克隆抗體，并且本發(fā)明不只限于上述單克隆抗體，而是包括以同樣方式制得的具有同樣特征的所有單克隆抗體，及所有產(chǎn)生該單克隆抗體的雜交瘤。
產(chǎn)生本發(fā)明的單克隆抗體HMS—1的雜交瘤是由作為親代細胞的Wistar Imamich大鼠脾細胞和小鼠骨髓瘤細胞系SP2/0—Ag14制得的新的融合細胞，并已按照用于專利程序目的的微生物保藏布達佩斯條約的規(guī)定，于1993年8月9日保藏于作為國際保藏機構(gòu)的National Institute of Bioscience and HumanTechnology，Agency of Industrial Science and Technology(地址日本國茨城縣コくば市東1段1—3號(郵編305))，該細胞株名稱為HMS—1(大鼠小鼠雜交瘤)，登記號為FERMBP—4383。
(5)抗體的性質(zhì)(i)抗體的反應性(對CF—1細胞的反應性)按照免疫熒光分析法檢查所得到的單克隆抗體GPST—1和HMS—1對CF—1細胞的反應性，結(jié)果如圖1至3所示。其中圖1顯示對沒有抗體的對照組的分析結(jié)果；圖2顯示GSPST—1對CF—1細胞的結(jié)合性質(zhì)的分析結(jié)果；圖3顯示HMS—1對CF—1細胞的結(jié)合性質(zhì)的分析結(jié)果。在附圖中，垂直軸顯示細胞的相對數(shù)目，橫軸顯示熒光強度。
如從圖1至圖3中看出的，單克隆抗體GSPST—1和HMS—1具有與CF—1細胞結(jié)合的性質(zhì)，并識別CF—1細胞的表面抗原。
(對骨髓細胞的反應性)另外，圖4到6中顯示用流式細胞計數(shù)器(FACScan，Becton Dickinson)分析得到的GSPST—1和HMT—1對正常骨髓細胞的反應性。其中，圖4顯示對沒有抗體的對照的分析結(jié)果；圖5顯示GSPST—1對骨髓細胞的結(jié)合性質(zhì)的分析結(jié)果；圖6顯示HMS—1對骨髓細胞的結(jié)合性質(zhì)的分析結(jié)果。附圖中，垂直軸顯示細胞的相對數(shù)目，橫軸顯示熒光強度。
如圖4至6中所示，GSPST—1完全沒有與骨髓細胞結(jié)合的性質(zhì)，而HMS—1則有與某些骨髓細胞結(jié)合的性質(zhì)。
(ii)抗體的分型繼后，對所得單克隆抗體的IgG亞類的分型(使用大鼠MonoAb—ID—Sp試劑盒(Zymed))結(jié)果顯示，GSPST—1是IgG2a，HMS—1是IgG2b。
(iii)骨髓移植抑制作用另外，使用這些抗體進行對骨髓移植之抑制作用的實驗以檢查其特性。結(jié)果如圖7和8中所示。從圖7和圖8可以看出，雖然HMS—1具有抑制骨髓移植的作用，但GSPST—1中未見有這種作用。上述結(jié)果是在通過尾靜脈給經(jīng)過致死劑量照射(900cGy)的C57BL/6J小鼠注射1.0×105個/只骨髓細胞和單克隆抗體，并觀察脾臟集落的形成而得到的。另外，圖8中“未處理的”顯示沒給予骨髓細胞時的情況。因為根據(jù)上述實驗結(jié)果認識到本發(fā)明的單克隆抗體HMS—1對骨髓移植的抑制作用，故可以看出該抗體還抑制造血干細胞的生長固著和CFU—S集落的形成。
再者，對于本領域技術人員顯而易見的是，單克隆抗體抑制骨髓移植的作用相當于抑制造血干細胞生長固著和形成CFU—S集落的活性。例如，據(jù)報導使用已知的肥大細胞作為抗原而產(chǎn)生的單克隆抗體(ACK—2抗體，為C—kit抗體之一)，具有與本發(fā)明的單克隆抗體相似的抑制小鼠骨髓移植的功能(Blood，78，1708(1991))；在該報導中，根據(jù)骨髓移植抑制實驗的結(jié)果，得出了抗體抑制造血干細胞生長固著和CFU—S集落形成的結(jié)論。
上述已知抗體ACK—2是使用肥大細胞作為抗原制備的，并且肥大細胞是從造血干細胞分化并增殖的造血細胞。另一方面，用于本發(fā)明中的造血組織的基質(zhì)細胞不是造血細胞，而是支持造血細胞分化和增殖的細胞，因此兩者是完全不同的。
另外，當給裸鼠腹腔內(nèi)注射產(chǎn)生HMS—1的骨髓瘤時，表明小鼠并沒有因腹水儲存而死亡。因此，認為HMS—1抑制骨髓移植的作用并不是由于所謂細胞程序性死亡〔(apoptosis)，也稱為細胞自身破壞，為一種在核小體單位處消化核染色質(zhì)DNA(所謂梯形成)而導改細胞死亡的現(xiàn)象〕，而是一種由于單克隆抗體上負責造血干細胞在造血組織上生長固著的分子相結(jié)合所引起的現(xiàn)象。從而可以看出，由HMS—1識別的抗原是一種對于造血干細胞在造血組織上生長固著有重要作用的物質(zhì)。
如從上述實難所確認的，本發(fā)明的單克隆抗體HMS—1識別具有造血干細胞生長固著支持潛能的，并具有抑制造血干細胞生長固著特性的脾臟基質(zhì)細胞的表面抗原。
因此，HMS—1具有抑制骨髓細胞在造血組織上生長固著的作用；已經(jīng)報導，根據(jù)造血細胞粘附分子的VLA4和VLA5的表達降低而證明白血病細胞是從骨髓釋放的〔VLA moleculeexpression may be involved in the release of acute myeloidleukaemic cells from the bone marrow，leuk.Res.，16(5)，469—474(1992)〕，并且認為抗VLA4和VLA5的單克隆抗體通過從骨髓釋放白血病細胞而改善白血病的治療效果。因而可在治療白血病前相似地使用上述HMS—1以獲得同樣的效果。
以上，已參照實施例具體描述了本發(fā)明的單克隆抗體；本發(fā)明的單克隆抗體包括上文有代表性的實施例中舉例的這些抗體，但不只限于這些，還包括以同樣方法制備的，具有同樣特性和功能的所有單克隆抗體。
工業(yè)可利用性因為本發(fā)明的單克隆抗體識別一種作為抗原的對于骨髓細胞在造血組織上生長固著很重要的物質(zhì)，并且具有抑制造血干細胞生長固著的特性，所以可用作具有提高抗腫瘤劑作用之功能的藥物，例如可基于其上述特性從骨髓中釋放白血病細胞而用作具有改善白血病治療效果、增強抗腫瘤劑之效力的藥物。
權利要求
1.一種單克隆抗體，可抑制造血干細胞生長固著并可識別具有支持造血干細胞生長固著支持潛能的脾臟基質(zhì)細胞的表面抗原。
2.產(chǎn)生如權利要求1記載的單克隆抗體的雜交瘤。
全文摘要
本發(fā)明的目的是提供一種新的單克隆抗體。本發(fā)明涉及抑制造血干細胞生長固著，并識別具有支持造血干細胞生長固著潛能的脾臟基質(zhì)細胞的表面抗原的單克隆抗體，以及產(chǎn)生該單克隆抗體的雜交瘤。因為本發(fā)明的單克隆抗體具有抑制造血干細胞生長固著的特性，故可用作具有增強臨床治療白血病的抗腫瘤劑的效力的藥物。
文檔編號C07K16/18GK1130406SQ94193262
公開日1996年9月4日 申請日期1994年9月2日 優(yōu)先權日1993年9月3日
發(fā)明者福島直 申請人:中外制藥株式會社