專利名稱：3-(2-氨基乙基)-4-[3-(三氟甲基)苯甲?；鵠-3，4-二氫-2h-1，4-苯并噁嗪衍生物、制備 ...的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及3-(2-氨基乙基)-4-[3-(三氟甲基)苯甲?；鵠-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪衍生物、它們的制備及其在醫(yī)藥中的應(yīng)用。
本發(fā)明的化合物對(duì)應(yīng)于通式(Ⅰ) 其中，R1代表氫原子、氟原子或氯原子，或者甲基、C1-C3的烷氧基或硝基;
R3單獨(dú)時(shí)代表氫原子或C1-C3的烷基;
R4單獨(dú)時(shí)代表2，3-二氫-1H-茚-2-基、2，3-二氫-1H-茚-1-基或1，2，3，4-四氫化萘-1-基;或者R3與R4以及與它們相連的氮原子一起構(gòu)成1，2，3，4-四氫-9H-吡啶并[3，4，-b]吲哚-2-基、1，2，3，4-四氫-9H-吡啶并[4，3-b]吲哚-3-基、4，5，6，7-
四氫噻嗯并[2，3-c]吡啶-6-基、4，5，6，7-四氫噻嗯并[3，2-c]吡啶-6-基或2，3-二氫-1H-異吲哚-2-基，它們的通式分別如下 優(yōu)選下列化合物，其中，R1代表氟原子、氯原子或甲基或甲氧基，R3代表氫原子或C1-C3的烷基，R4代表2，3-二氫-1H-茚-2-基、2，3-二氫-1H-茚-1-基或1，2，3，4-四氫化萘-1-基。
由于通式(Ⅰ)表示的分子有一個(gè)不對(duì)稱的碳原子(苯并噁嗪環(huán)中的3位)，本發(fā)明的化合物可以以純對(duì)映異構(gòu)體或?qū)τ钞悩?gòu)體的混合物形式存在。而且，當(dāng)R4代表2，3-二氫-1H-茚-1-基或1，2，3，4-四氫化萘-1-基時(shí)，分子還包含另一個(gè)不對(duì)稱中心。本發(fā)明的化合物能夠以純旋光異構(gòu)體或這些旋光異構(gòu)體的混合物的形式存在。此外，本發(fā)明的化合物可以呈現(xiàn)為游離堿或酸加成鹽的狀態(tài)。
依照本發(fā)明，可以通過由下述反應(yīng)式所介紹的方法制備通式(Ⅰ)的化合物。
反應(yīng)路線路 在一種諸如醚的溶劑中，在一種諸如吡啶的堿的存在下，使通式(Ⅱ)的2-氨基苯酚與通式(Ⅲ)的三氟乙酸酐反應(yīng)(通式(Ⅱ)中的R1如上文所定義)，得到通式(Ⅳ)的酰胺，然后，在一種諸如乙醇的溶劑中，在溫度約80℃和一種諸如乙醇鈉的堿存在下，使之與通式(Ⅴ)的4-溴丁-2-烯酸乙酯反應(yīng)，接著，還原通式(Ⅵ)的3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪-3-醋酸乙酯衍生物的酯官能團(tuán)，得到通式(Ⅶ)的3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪-3-乙醇的衍生物，在通常情況下，用一種諸如氫化鋁鋰的還原劑來還原;或者當(dāng)R1代表硝基時(shí)，依據(jù)Synth.Commun(1982)12(6)463，在1，1-二甲基乙醇中用硼氫化鈉來還原。接著在一種諸如二氯甲烷的溶劑中，使前面得到的衍生物與通式(Ⅷ)的3-(三氟甲基)苯甲酰氯反應(yīng)，得到通式(Ⅸ)的一種醇，再使這種醇和亞硫酰二氯反應(yīng)，得到通式(Ⅹ)的化合物。最后，使這種化合物與式HNR3R4的胺反應(yīng)，其中R3、R4如上文所定義。
初始物可以購(gòu)得，在文獻(xiàn)中也已有敘述，即依據(jù)文獻(xiàn)敘述的方法或本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法可以合成這些物質(zhì)。
具體地說，其中R1代表甲氧基的通式(Ⅱ)的氨基苯酚在J.Amer.Chem.Soc.(1949)71 1265中有描述。
其中R4代表2，3-二氫-1H-茚-2-基的式(Ⅶ)各種胺在J.Med.Chem.(1980)23 745有描述。
其中R4代表2，3-二氫-1H-茚-2-基的式(Ⅶ)各種胺在J.Amer.Chem.Soc.(1966)88 2233中有描述。
其中R4代表1，2，3，4-四氫化萘-1-基的式(Ⅶ)各種胺在J.Amer.Chem.Soc.(1960)82 459，C.R.Hebd.Seances Acad.Sci.Ser.C.(1969)268 2225和J.Med.Chem.(1966)9 830中有描述。
1，2，3，4-四氫-9H-吡啶并[3，4-b]吲哚在Organic Synthesis(1971)51 136中有描述。
1，2，3，4-四氫-9H-吡啶并[4，3-b]吲哚在J.Chem.Soc.(C)(1968)1235中有描述。
4，5，6，7-四氫噻嗯并[2，3-c]吡啶和4，5，6，7-四氫噻嗯并[3，2-c]吡啶在Arkiv.Kemi(1970)13(19)217中有描述。
4，5，6，7-四氫噻嗯并[3，2-c]吡啶在專利申請(qǐng)EP-0342118中也有描述。
2，3-二氫-1H-異吲哚在Organic Synthesis Coll.(1973)5 406和1064中有描述。
如果想得到旋光純的通式(Ⅰ)化合物，可以利用通式(Ⅸ)的施光純的醇，而這種醇可以采用諸如酶方法制備。
這種酶方法的基本原則在于通過諸如硅膠柱色譜法把旋光純的醇與相應(yīng)的構(gòu)型相反的乙酯分離開。
依據(jù)第一種方法，將外消旋的通式(Ⅸ)的醇進(jìn)行?；?例如采用醋酐)，在一種酶的存在下，將外消旋乙酸酯的兩種對(duì)映異構(gòu)體之一進(jìn)行立體定向水解，將沒有被水解的乙酸酯分離出來，得到一種旋光純的醇和一種構(gòu)型相反的旋光純乙酸酯。如果需要的話，后者自身可以通過化學(xué)或酶的途徑被水解，以提供第二種對(duì)映異構(gòu)體的醇。
依據(jù)第二種方法，在諸如醋酸乙烯酯的介質(zhì)中，在一種只能催化對(duì)映異構(gòu)體中其中一種的酯化作用的酶存在下，將外消旋通式(Ⅸ)的醇進(jìn)行立體定向酯化。象第一種方法一樣，得到一種旋光純的醇和一種構(gòu)型相反的旋光純醋酸酯。如果需要的話，后者自身也可以通過化學(xué)或酶途徑被水解，以提供該醇的第二種對(duì)映異構(gòu)體。
在這兩種方法中，隨著所用酶的不同，可以得到醇(Ⅸ)的左旋對(duì)映體、右旋對(duì)映體或構(gòu)型相反的醋酸酯。
可以使用的酶可以是Miehei毛霉(Mucor Miehei)、環(huán)鴉片青霉(Penicillium Cyclopium)或小麥芽(germe de blé)的脂酶。
而且，當(dāng)R4代表2，3-二氫-1H-茚-1-基或1，2，3，4-四氫化萘-1-基時(shí)，由于化合物的分子中包含另一個(gè)不對(duì)稱中心，因此它們以非對(duì)映體異構(gòu)物形式存在。使用旋光的胺可以合成旋光純的化合物。(J.Amer.Chem.Soc.(1966)88 2233和C.R.Hebd.Seances Acad.Sci.Ser.C(1969)268 2225)。
以下的實(shí)施例具體說明本發(fā)明幾種化合物的制備。
微量元素分析和I.R(紅外)光譜及R.M.N(核磁共振)譜證明獲得的化合物的結(jié)構(gòu)。
實(shí)施例小標(biāo)題括號(hào)中的序號(hào)與后面表格的序號(hào)相對(duì)應(yīng)。
實(shí)施例1(第1號(hào)化合物)(±)-3-[2-(1，2，3，4-四氫-9H-吡啶并[3，4-b]吲哚-2-基)乙基]-4-[(3-三氟甲基)-苯甲?；鵠-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪的(E)-2-丁烯二酸鹽(1∶1)1.1N-(2-羥苯基)-三氟乙酰胺在4升反應(yīng)器中，在磁攪拌下，配制1.5升二乙醚和104克(0.95摩爾)2-氨基苯酚的懸浮液，加入77毫升吡啶。然后用冰和乙醇的混合物冷卻反應(yīng)介質(zhì)，再在一小時(shí)內(nèi)逐滴加入200克(0.95摩爾)三氟醋酐，讓溫度回到室溫，并持續(xù)攪拌一小時(shí)。
接著，加入冰水，分離出有機(jī)相，并依次用1N鹽酸、水、碳酸氫鈉的飽和溶液和氯化鈉的飽和溶液洗滌有機(jī)相。有機(jī)相再用硫酸鎂干燥，蒸發(fā)溶劑。得到170克的生成物，直接用于下一步驟。
1.2(±)-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪-3-醋酸乙酯。
在冷卻至0℃的3升反應(yīng)器中，在磁攪拌下，倒入650毫升乙醇，再緩慢地、少量多次加入5.9克(0.259摩爾)的鈉，然后逐滴依次加入53克(0.259摩爾)的N-(2-羥苯基)三氟乙酰胺和50克(0.259摩爾)純度達(dá)75%的4-溴丁-2-烯酸乙酯，加熱混合物至80℃，持續(xù)1個(gè)半小時(shí)。
蒸發(fā)溶劑，然后用160毫升水和65毫升1N蘇打處理殘余物。再用二乙醚萃取。用氯化鈉飽和溶液洗滌有機(jī)相，然后用硫酸鎂干燥，蒸發(fā)溶劑。得到38.22克的生成物。然后以環(huán)己烷與異丙醚的混合物(1/1)為淋洗劑，通過硅膠柱色譜法進(jìn)行純化，得到28.02克的產(chǎn)物。
1.3(±)-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪-3-乙醇。
在1升反應(yīng)器中，加入190毫升四氫呋喃，將其用冰與鹽的混合物冷卻。然后在氬氣氛下，先加入7.7克(0.202摩爾)氫化鋁鋰，再逐滴加入在190毫升四氫呋喃的28.02克(0.127摩爾)(±)-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪-3-醋酸乙酯的溶液，攪拌混合物三小時(shí)。
用干冰與丙酮的混合物冷卻反應(yīng)器，然后逐滴加入60毫升水和30毫升1N蘇打，持續(xù)攪拌半小時(shí)。
通過硅藻土過濾，濾出沉淀物，依次用四氫呋喃和醋酸乙酯洗滌，蒸發(fā)濾液溶劑，得到24.99克粗產(chǎn)物，接著以環(huán)己烷與醋酸乙酯的混合物(1/1)為淋洗劑，用硅膠柱色譜法進(jìn)行純化。得到15.5克產(chǎn)物。
1.4(±)-4-[3-(三氟甲基)苯甲?；鵠-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪-3-乙醇。
在500毫升圓底燒瓶中加入77毫升二氯甲烷、15.93克(0.072摩爾)(±)-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪-3-乙醇和10.67克(0.077摩爾)碳酸鉀，再逐滴加入溶于77毫升二氯甲烷的16.05克(0.077摩爾)3-(三氟甲基)苯甲酰氯，在室溫下攪拌混合物3個(gè)半小時(shí)。
然后加入72毫升1N蘇打，分離出有機(jī)相，先用水再用氯化鈉的飽和溶液洗滌有機(jī)相，再用硫酸鎂干燥，蒸發(fā)溶劑。于是得到33.48克油狀生成物。接著以環(huán)己烷與醋酸乙酯的混合物(1/1)為淋洗劑，用硅膠柱色譜法提純。得到21.93克產(chǎn)物。
1.5(±)-3-(2-氯乙基)-4-[3-(三氟甲基)苯甲酰基]-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪。
在21.93克(±)-4-[3-(三氟甲基)苯甲酰基]-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪-3-乙醇的280毫升二氯甲烷溶液中加入18毫升(0.248摩爾)亞硫酰二氯，在室溫下攪拌混合物6小時(shí)。
蒸發(fā)溶劑，再用甲苯處理殘余物，然后蒸發(fā)，對(duì)得到的油狀物以環(huán)己烷和異丙醚的混合物(1/1)為淋洗劑，通過硅膠柱色譜法進(jìn)行提純。得到21.74克產(chǎn)物。
1.6(±)-3-[2-(1，2，3，4-四氫-9H-吡啶并[3，4-b]吲哚-2-基)乙基]-4-[(3-三氟甲基)苯甲?；鵠-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪的(E)-2-丁烯二酸鹽(1∶1)。
在2.5克(0.007摩爾)(±)-3-(2-氯乙基)-4-[3-(三氟甲基)苯甲?；鵠-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪的20mlN，N-二甲基甲酰胺溶液中，在室溫、氬氣氛和磁攪拌下，加入1.20克(0.007摩爾)1，2，3，4-四氫-9H-吡啶并[3，4-b]吲哚、1.45克(0.0105摩爾)的碳酸鉀和1.16克(0.007摩爾)碘化鉀，加熱混合物至160℃，持續(xù)一小時(shí)。然后將混合物冷卻，再加入80毫升水和80毫升醋酸乙酯，分離各相，用80毫升的醋酸乙酯萃取水相兩次，然后合并有機(jī)相，用100毫升的氯化鈉飽和溶液洗滌，再用硫酸鎂干燥，接著過濾并蒸發(fā)溶劑。得到4克油狀生成物，然后以環(huán)己烷與醋酸乙酯的混合物(7/3)為淋洗劑，通過硅膠柱色譜法進(jìn)行提純，得到3.5克黃色油狀的純堿。加入等當(dāng)量的延胡索酸來制備延胡索酸鹽。將其分離并在乙醇中以白色晶體的形態(tài)重結(jié)晶。最后分離出1.71克的延胡索酸鹽。熔點(diǎn)211-212℃。
實(shí)施例2(第十二號(hào)化合物)(±)-6-氟-3-[2-(4，5，6，7-四氫噻嗯并[2，3-c]吡啶-6-基)乙基]-4-[(3-三氟甲基)苯甲酰基]3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪的(E)-2-丁烯二酸鹽(1∶1)。
2.12-氨基-4-氟苯酚。
在磁攪拌，在50克(0.318摩爾)4-氟-2-硝基-苯酚于1.5升水的溶液中，加入120克(0.689摩爾)連二亞硫酸鈉，加熱回流混合物，再加入120克(0.689摩爾)連二亞硫酸鈉，繼續(xù)加熱回流0.75小時(shí)。
然后冷卻混合物，再少量分批地加入碳酸氫鈉，直至達(dá)到堿性pH。加入1升二乙醚，分離各相，用1升二乙醚萃取水相。然后合并有機(jī)相，用1升水和1升氯化鈉飽和溶液進(jìn)行洗滌。再用硫酸鎂干燥。過濾并蒸發(fā)溶劑。于是得到21.1克的生成物，直接用于下一步驟。
2.2N-(5-氟-2-羥苯基)三氟乙酰胺。
在1升反應(yīng)器中，在磁攪拌下，配制260毫升二乙醚和21克(0.165摩爾)的2-氨基-4-氟苯酚懸浮液，加入14毫升吡啶，然后用冰和乙醇混合物冷卻反應(yīng)介質(zhì)，再在一小時(shí)內(nèi)，逐滴加入23.3毫升(0.165摩爾)三氟醋酸酐，然后讓溫度回到室溫，持續(xù)攪拌3小時(shí)。
接著加入冰水，分離有機(jī)相，并依次用170毫升1N鹽酸、水、碳酸氫鈉的飽和溶液和氯化鈉飽和溶液洗滌有機(jī)相。然后用硫酸鎂干燥，并蒸發(fā)溶劑。
得到32.7克的生成物。直接用于下一步驟中。
2.3(±)-6-氟-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪-3-醋酸乙酯。
在冷卻至0℃的1升反應(yīng)器中，在磁攪拌下，倒入370毫升乙醇，再緩慢少量分批加入3.5克(0.146摩爾)鈉，然后逐滴加入32.54克(0.146摩爾)N-(5-氟-2-羥苯基)三氟乙酰胺和28.18克(0.146摩爾)純度達(dá)75%的4-溴丁-2-烯酸乙酯，加熱混合物至80℃，并持續(xù)3小時(shí)。
然后蒸發(fā)溶劑，用90毫升水和37毫升1N蘇打處理殘余物，再用二乙醚萃取。用氯化鈉的飽和溶液洗滌有機(jī)相，再用硫酸鎂干燥，蒸發(fā)溶劑。得到38.74克生成物，然后以環(huán)己烷和異丙醚的混合物(1/1)為淋洗劑，用硅膠柱色譜法進(jìn)行提純。最后得到23.22克產(chǎn)物。
2.4(±)-6-氟-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪-3-乙醇。
在1升反應(yīng)器中，倒入145毫升四氫呋喃，用冰和鹽的混合物將其冷卻，然后，在氬氣氛下，先加入5.9克(0.153摩爾)氫化鋁鋰，再逐滴加入溶于145毫升四氫呋喃的23.22克(0.097摩爾)(±)-6-氟-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪-3-醋酸乙酯，攪拌混合物2.5小時(shí)。
用干冰和丙酮的混合物冷卻反應(yīng)器，再逐滴加入45毫升水和23毫升1N蘇打，持續(xù)攪拌半小時(shí)。
用硅藻土濾出沉淀物，濾液依次用四氫呋喃和醋酸乙酯洗滌，蒸發(fā)濾液溶劑，得到18.07克粗產(chǎn)物。然后對(duì)此生成物以環(huán)己烷和醋酸乙酯的混合物(1/1)為淋洗劑，用硅膠柱色譜法進(jìn)行提純，得到13.9克產(chǎn)物。
2.5(±)-6-氟-4-[3-(三氟甲基)苯甲?；鵠-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪-3-乙醇。
在500毫升圓底燒瓶中加入70毫升二氯甲烷、13.69克(0.069摩爾)(±)-6-氟-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪-3-乙醇和10.27克(0.074摩爾)碳酸鉀，再逐滴加入溶于70毫升二氯甲烷的15.44克(0.074摩爾)的3-(三氟甲基)苯甲酰氯，在室溫下攪拌混合物5小時(shí)。
然后加入70毫升1N蘇打，分離有機(jī)相，先用水，再用氯化鈉飽和溶液洗滌有機(jī)相，然后用硫酸鎂干燥，蒸發(fā)溶劑。得到27.53克油狀生成物，然后對(duì)此生成物以環(huán)己烷和醋酸乙酯的混合物(2/1)為淋洗劑，用硅膠柱色譜提純，得到11.27克產(chǎn)物。
2.6(±)-3-(2-氯乙基)-6-氟-4-[3-(三氟甲基)-苯甲酰基]-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪。
往11.27克(0.031摩爾)(±)-6-氟-4-(3-三氟甲基)苯甲?；鵠-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪-3-乙醇在140毫升二氯甲烷的溶液中加入9毫升(0.124摩爾)亞硫酰二氯，在室溫下攪拌混合物5小時(shí)。
然后蒸發(fā)溶劑，用甲苯處理殘余物，再蒸發(fā)殘余物，然后以環(huán)己烷和異丙基醚的混合物(1/1)為淋洗劑，用硅膠柱色譜法提純，得到10.33克產(chǎn)物。
2.7(±)-6-氟-3-[2-(4，5，6，7-四氫噻嗯并[2，3-c]吡啶-6-基)乙基]-4-[(3-三氟甲基)苯甲酰基]-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪的(E)-2-丁烯二酸鹽(1∶1)。
往1.11克(0.003摩爾)(±)-3-(2-氯乙基)-6-氟-4-[3-(三氟甲基)苯甲?；鵠-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪在15毫升N，N-二甲基甲酰胺的溶液中，在室溫、氬氣氛及磁攪拌下，加入0.66克(0.003摩爾)的4，5，6，7-四氫噻嗯并[2，3-c]吡啶的草酸鹽、1.19克(0.0086摩爾)碳酸鉀及0.5克(0.003摩爾)碘化鉀，將混合物加熱至160℃，持續(xù)一小時(shí)。然后冷卻混合物，再加入50毫升水和50毫升二乙醚，分離各相，兩次用50毫升的二乙醚萃取水相，收集有機(jī)相，用50毫升氯化鈉飽和溶液洗滌，再用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)溶劑。得到1.56克油狀生成物，然后以環(huán)己烷與醋酸乙酯的混合物(7/3)為淋洗劑，用硅膠柱色譜提純此生成物。得到0.80克黃色油狀堿。
加入等當(dāng)量的延胡索酸制備其延胡索酸鹽，分離并使它在2-丙醇中以白色晶體形態(tài)重結(jié)晶。
最后分離出0.77克延胡索酸鹽。
熔點(diǎn)181-182℃。
實(shí)施例3(第24號(hào)化合物)(±)-3-[2-[(2，3-二氫-1H-茚-2-基)甲氨基]乙基]-6-甲氧基-4-[3-(三氟甲基)苯甲?；鵠-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪的乙二酸鹽(1∶1)3.1N-(2-二羥基-5-甲氧基苯基)三氟乙酰胺。
在2升反應(yīng)器中，在磁攪拌下，配制1升二乙醚與75.33克(0.54摩爾)2-氨基-4-甲氧基苯酚的懸浮液，加入56毫升吡啶。用冰與乙醇的混合物冷卻反應(yīng)介質(zhì)，然后在一小時(shí)內(nèi)逐滴加入131.4克(0.625摩爾)三氟醋酸酐，再讓溫度回到室溫并持續(xù)攪拌2小時(shí)。
加入冰水，分離有機(jī)相，依次用500毫升1N鹽酸、水、碳酸氫鈉飽和溶液和氯化鈉飽和溶液洗滌有機(jī)相。然后用硫酸鎂干燥，蒸發(fā)溶劑。
得到41.6克生成物，直接用于下一步驟中。
3.2(±)-6-甲氧基-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪-3-醋酸乙酯。
在磁攪拌下，向冷卻至0℃的1升反應(yīng)器中，加入450毫升乙醇，再少量分批緩慢加入7克(0.32摩爾)鈉，然后逐滴加入37.94克(0.16摩爾)N-(2-羥基-甲氧基苯基)三氟乙酰胺和41.2克(0.16摩爾)純度達(dá)75%的4-溴丁-2-烯酸乙酯，加熱混合物至80℃，并持續(xù)2小時(shí)。
接著蒸發(fā)溶劑，用100毫升水和40毫升1N蘇打處理殘余物，再用二乙醚萃取。用氯化鈉飽和溶液洗滌有機(jī)相，再用硫酸鎂干燥，蒸發(fā)溶劑。得到38.46克生成物，然后再將生成物以環(huán)己烷與異丙基醚的混合物(1/1)為淋洗劑，通過硅膠柱色譜法提純，得到21.22克產(chǎn)物。
3.3(±)-6-甲氧基-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪-3-乙醇向1升反應(yīng)器中倒入130毫升四氫呋喃，用冰和鹽的混合物將其冷卻，然后在氬氣氛中，先加入5克(0.132摩爾)氫化鋁鋰，再逐滴加入20.73克(0.0825摩爾)(±)-6-甲氧基-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪-3-醋酸乙酯在130毫升四氫呋喃中的溶液。持續(xù)攪拌1.5小時(shí)。然后用干冰與丙酮的混合物冷卻反應(yīng)器，接著逐滴加入40毫升水與20毫升1N蘇打，持續(xù)攪拌半小時(shí)。
通過硅藻土過濾，濾出沉淀物，依次用四氫呋喃與醋酸乙酯洗滌濾液，蒸發(fā)濾液溶劑，得到25.15克粗產(chǎn)物，然后將此生成物以環(huán)己烷與醋酸乙酯的混合物(1/1)為淋洗劑，通過硅膠柱色譜法進(jìn)行提純，得到10.53克產(chǎn)物。
3.4(±)-6-甲氧基-4-[3-(三氟甲基)苯甲酰基]3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪-3-乙醇在500毫升圓底燒瓶中加入80毫升二氯甲烷、10.53克(0.05摩爾)(±)-6-甲氧基-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪-3-乙醇和7.4克(0.0535摩爾)碳酸鉀，再逐滴加入溶于80毫升二氯甲烷的11.16克(0.0535摩爾)3-(三氟甲基)苯甲酰氯，在室溫下攪拌混合物2小時(shí)。
然后加入50毫升1N蘇打，分離有機(jī)相，先用水再用氯化鈉飽和溶液洗滌有機(jī)相，再用硫酸鎂干燥，蒸發(fā)溶劑。得到22.25克油狀生成物。將此生成物以環(huán)己烷與醋酸乙酯的混合物(2/1)為淋洗劑，通過硅膠柱色譜法進(jìn)行提純。得到14.74克產(chǎn)物。
3.5(±)-3-(2-氯乙基)-6-甲氧基-4-[3-(三氟甲基)苯甲?；鵠-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪。
向14.74克(0.039摩爾)(±)-6-甲氧基-4-[3-(三氟甲基)苯甲?；鵠-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪-3-乙醇的165毫升二氯甲烷溶液中，加入14毫升(0.19摩爾)亞硫酰二氯，在室溫下攪拌混合物5小時(shí)。
蒸發(fā)溶劑，用甲苯處理殘余物，再蒸發(fā)至干，將獲得的油以環(huán)己烷與異丙醚的混合物(1/1)為淋洗劑，通過硅膠柱色譜法進(jìn)行提純。得到14.7克產(chǎn)物。
3.6(±)-3-[2-[(2，3-二氫-1H-茚-2-基)甲氨基]乙基]-6-甲氧基-4-[3-(三氟甲基)苯甲?；鵠-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪的乙二酸鹽(1∶1)。
在常溫、氬氣氛和磁攪拌下，向1.6克(0.004摩爾)(±)-3-(2-氯乙基)-6-甲氧基-4-[3-(三氟甲基)苯甲?；鵠-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪的18毫升N，N-二甲基甲酰胺溶液中，加入0.73克(0.004摩爾)N-甲基-2，3-二氫-1H-茚-2-胺的鹽酸鹽、1.38克(0.01摩爾)碳酸鉀和0.66克(0.004摩爾)碘化鉀，加熱混合物至150℃，持續(xù)1小時(shí)。
冷卻混合物，加入38毫升水和70毫升二乙醚，分離各相，兩次用70毫升的二乙醚萃取水相，收集有機(jī)相，并用70毫升氯化鈉飽和溶液洗滌有機(jī)相，而后用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)溶劑。得到1.91克油狀生成物。將此生成物用二氯甲烷和乙醇(85/15)混合物作為淋洗劑，通過硅膠柱色譜法進(jìn)行提純。
得到0.940克的黃色油狀純堿。
加入等當(dāng)量的草酸制備草酸鹽，將其分離并使之在醋酸乙酯中以白色晶體的形態(tài)重結(jié)晶。
最后分離出0.370克草酸鹽。
熔點(diǎn)185-187℃。
實(shí)施例4(第30號(hào)化合物)6-氯-3-[2-[(1，2，3，4-四氫化萘-1-基)甲氨基]乙基]-4-[3-(三氟甲基)苯基]-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪的(E)-2-丁烯二酸鹽(1∶1)(65∶35的(±)-非對(duì)映異構(gòu)體的混合物)。
4.1N-(5-氯-2-羥基苯基)三氟乙酰胺。
在1升反應(yīng)器中，在磁攪拌下，用320毫升二乙醚和25克(0.174摩爾)2-氨基-4-氯苯酚配制成懸浮液，加入18毫升吡啶，再用冰和乙醇的混合物冷卻反應(yīng)介質(zhì)，在1小時(shí)內(nèi)，逐滴加入24.6毫升(0.174摩爾)三氟醋酸酐，重新讓溫度回到室溫，并繼續(xù)攪拌1小時(shí)。
加入冰水，傾析，再依次用320毫升1N鹽酸溶液、水、碳酸氫鈉飽和溶液以及氯化鈉飽和溶液洗滌有機(jī)相，然后用硫酸鎂干燥，蒸發(fā)溶劑。得到40.3克生成物，直接用于下一步驟中。
4.2(±)6-氯-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪-3-醋酸乙酯。
在磁攪拌下，在冷卻至0℃的3升反應(yīng)器中加入420毫升乙醇，再少量分批緩慢加入3.8克(0.166摩爾)鈉，然后，依次逐滴加入40克(0.166摩爾)N-(5-氯-2-羥基苯基)三氟乙酰胺和40克(0.155摩爾)純度達(dá)75%的4-溴丁-2-烯酸乙酯，加熱混合物至85℃，持續(xù)2小時(shí)。再蒸發(fā)溶劑，用100毫升水和40毫升1N蘇打處理殘余物，然后用二乙醚萃取殘余物，分離有機(jī)相，用氯化鈉的飽和水溶液洗滌有機(jī)相，再用硫酸鎂干燥，然后蒸發(fā)。得到28.59克生成物，然后對(duì)此生成物用環(huán)己烷與異丙基醚的混合物(1/1)為淋洗劑，通過硅膠柱色譜法進(jìn)行提純。得到23.72克產(chǎn)物。
4.3(±)6-氯-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪-3-乙醇在1升反應(yīng)器中放入150毫升四氫呋喃，用冰和鹽的混合物將其冷卻，然后在氬氣氛下，先加入5.92克(0.156摩爾)氫化鋁鋰，再逐滴加入溶于150毫升四氫呋喃的23.52克(0.0973摩爾)(±)6-氯-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪-3-醋酸乙酯，攪拌混合物一個(gè)半小時(shí)。
然后用干冰和丙酮的混合物冷卻反應(yīng)器，再逐滴加入40毫升1N蘇打，攪拌半小時(shí)后，用硅藻土過濾沉淀物，先用四氫呋喃后用醋酸乙酯洗滌。然后蒸發(fā)溶劑。分離出27.5克粗產(chǎn)物，再對(duì)此生成物用環(huán)己烷與醋酸乙酯的混合物(1/1)為淋洗劑，通過硅膠柱色譜法進(jìn)行提純。得到19.67克產(chǎn)物。
4.4(±)6-氯-4-[(3-三氟甲基)苯甲?；鵠-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪-3-乙醇。
在1升圓底燒瓶中加入100毫升二氯甲烷、19.17克(0.09摩爾)(±)6-氯-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪-3-乙醇和13.3克(0.096摩爾)碳酸鉀，再逐滴加入溶于100毫升二氯甲烷的20克(0.096摩爾)3-(三氟甲基)苯甲酰氯，在室溫下攪拌混合物3小時(shí)。
然后加入90毫升1N蘇打，分離有機(jī)相，先用水再用氯化鈉的飽和溶液洗滌有機(jī)相，而后用硫酸鎂干燥，蒸發(fā)溶劑，得到36克油狀生成物。然后對(duì)此生成物用環(huán)己烷與醋酸乙酯的混合物(2/1)為淋洗劑，通過硅膠柱色譜法進(jìn)行提純。得到24.21克產(chǎn)物。
4.5(±)6-氯-3-(2-氯乙基)-4-[(3-三氟甲基)-苯甲?；鵠-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪向24.21克(±)6-氯-4-[(3-三氟甲基)苯甲?；鵠-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪-3-乙醇的260毫升二氯甲烷溶液中加入18毫升(0.25摩爾)亞硫酰二氯，在室溫下攪拌6小時(shí)。
蒸發(fā)溶劑，用甲苯處理殘余物，再蒸發(fā)，得到的25.21克油狀物用環(huán)己烷和異丙基醚混合物(1/1)為淋洗劑，通過硅膠柱色譜法進(jìn)行提純。得到23.73克產(chǎn)物。
4.6(±)6-氯-3-[2-[(1，2，3，4-四氫化萘-1-基)甲氨基]乙基]-4-[(3-三氟甲基)苯甲?；鵠-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪的(E)-2-丁烯二酸鹽(1∶1)。
在室溫、氬氣氛和磁攪拌下，向1.8克(0.0044摩爾)(±)6-3-(2-氯乙基)-4-[(3-三氟甲基)苯甲酰基]-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪在13毫升N，N-二甲基甲酰胺的溶液中，加入0.88克(0.0044摩爾)的N-甲基-1，2，3，4-四氫化萘-1-胺的鹽酸鹽、1.23克(0.009摩爾)碳酸鉀和0.74克(0.0044摩爾)碘化鉀，加熱混合物至120℃并持續(xù)1個(gè)半小時(shí)。
冷卻混合物后，加入50毫升水，得到一種粘性生成物，然后用水洗滌此生成物。再將其溶于50毫升醋酸乙酯中，用硫酸鎂干燥后，再過濾，然后在減壓條件下蒸發(fā)溶劑。得到2.39克油狀物，然后對(duì)此生成物用環(huán)己烷與醋酸乙酯的混合物(8/2)為淋洗劑，通過硅膠柱色譜法進(jìn)行提純。得到1.62克(0.003摩爾)堿。
在15毫升2-丙醇中加入0.35克(0.003摩爾)延胡索酸來制備延胡索酸鹽。加熱回流混合物后，在減壓條件下蒸發(fā)溶劑。用二乙醚處理殘余物，過濾分離沉淀物，以后用2-丙醇重結(jié)晶。在五氧化二磷存在下，加熱干燥后，最后分離出0.3克延胡索酸鹽。
熔點(diǎn)145-146℃。
實(shí)施例5(第38號(hào)化合物)(+)6-氯-3-[2-(2，3-二氫-1H-茚-2-基)甲氨基]乙基]-4-[(3-三氟甲基)-苯甲酰基]-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪的(E)-2-丁烯二酸鹽(2∶1)5.1(-)6-氯-4-[(3-三氟甲基)苯甲?；鵠-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪-3-乙醇。
在60毫升醋酸乙酯中溶解5.7克(0.0148摩爾)(±)6-氯-4-[(3-三氟甲基)苯甲?；鵠-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪-3-乙醇，加入570毫克10%樹脂上的Miehei毛霉(Mucor Miehei)脂酶(Lipozyme IM60TM，NovoTM)和1.36毫升醋酸乙烯酯，在室溫下一邊攪拌混合物，一邊用旋光柱的HPLC跟蹤反應(yīng)進(jìn)展情況，用正己烷與2-丙醇(95/5)的混合物作淋洗劑。
經(jīng)過三天的反應(yīng)后，轉(zhuǎn)化率為52%，醇的ee對(duì)映體余量高于98%，用硅藻土過濾混合物，用10毫升醋酸乙酯洗滌固體，然后在減壓條件下濃縮濾液，通過閃色譜法分離酯與左旋醇的混合物，先用1/9的醋酸乙酯與環(huán)己烷混合物淋洗酯和混合物，再用4/6的醋酸乙酯與環(huán)己烷混合物淋洗醇。得到2.5克左旋醇和3克酯。
醇[α]25D＝-48°(c＝0.5;CHCl3)。ee＝98.3%。
酯ee＝91%。
5.2(+)-6-氯-3-[2-[(2，3-二氫-1H-茚-2-基)甲氨基]乙基]-4-[3-(三氟甲基)苯甲?；鵠-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪的(E)-2-丁烯二酸鹽(2∶1)。
在與前面的例子中所描述的類似條件下，用亞硫酰二氯處理(-)-6-氯-4-[(3-三氟甲基)苯甲?；鵠-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪-3-乙醇，得到6-氯-3-(2-氯乙基)-4-[(3-三氟甲基)苯甲酰基]-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪(此物質(zhì)的旋光能力未得到確定)，然后使后者與N-甲基-2，3-二氫-1H-茚-2-胺反應(yīng)，再用延胡索酸處理此堿。
熔點(diǎn)168-169℃[α]20D＝+16.2°(c＝1;CH3OH)。
實(shí)施例6(第39號(hào)化合物)(-)-6-氯-3-[2-[(2，3-二氫-1H-茚-2-基)甲氨基]乙基]-4-[(3-三氟甲基)苯甲?；鵠-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪的(E)-2-丁烯二酸鹽(2∶1)。
6.1(+)-6-氯-4-[(3-三氟甲基)苯甲?；鵠-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪-3-乙醇。
在14毫升甲苯中溶解實(shí)施例5.1制得的3.0克酯，加入70毫升0.3M pH值為7.3的磷酸鹽緩沖液，在室溫下強(qiáng)力攪拌混合物直至形成乳濁液，再加入300毫克Miehei毛霉(Mucor Miehei)的游離脂酶(BiocatalystTM)，然后象在實(shí)施例5.1中說明的那樣，通過旋光柱HPLC跟蹤反應(yīng)進(jìn)展情況，經(jīng)過67小時(shí)的反應(yīng)后，轉(zhuǎn)化率為28%，pH值是6.95;加入4N蘇打使pH值調(diào)整到7.5，將混合物加熱至35℃，繼續(xù)攪拌。
經(jīng)過48小時(shí)的反應(yīng)后，轉(zhuǎn)化率為67%，重新使pH值調(diào)整至7.5，加入300毫克酶，繼續(xù)攪拌。
經(jīng)過32小時(shí)的反應(yīng)后，轉(zhuǎn)化率為82%，醇的對(duì)映體余量是98.1%。用100毫升二乙醚稀釋混合物，然后用硅藻土進(jìn)行過濾。用100毫升二乙醚萃取水相四次，用硫酸鎂干燥，在減壓條件下蒸發(fā)溶劑，并象在實(shí)施例5.1中敘述的那樣，通過色譜法提純殘余物。
得到2.15克右旋醇和0.49克酯。
醇[α]25D＝+51°(c＝0.63;CHCl3)。ee＝98.1%。
酯ee＝50%。
6.2(-)-6-氯-3-[2-[(2，3-二氫-1H-茚-2-基)甲氨基]乙基]-4-[3-(三氟甲基)苯基]-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪的(E)-丁烯二酸鹽(2∶1)在與前面的實(shí)施例中所敘述的類似條件下，用亞硫酰二氯處理(+)-6-氯-4-[(3-三氟甲基)苯甲?；鵠-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪-3-乙醇，得到6-氯-3-(2-氯乙基)-4-[(3-三氟甲基)苯甲?；鵠-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪(其旋光能力未被確定)，然后使后者與N-甲基-2，3-二氫-1H-茚-2-胺反應(yīng)，再用延胡索酸處理該堿。
熔點(diǎn)169-170℃[α]20D＝-16.9°(c＝1;CH3OH)。
實(shí)施例7(第36號(hào)化合物)(±)-3-[2-[(2，3-二氫-1H-茚-2-基)氨基]乙基]-6-硝基-4-[(3-三氟甲基)苯甲?；鵠-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪的(E)-2-丁烯二酸鹽(2∶1)。
7.1N-(2-羥基-5-硝基苯基)三氟乙酰胺在210毫升二乙醚中加入18克(0.116摩爾)2-氨基-4-硝基苯酚，制備懸浮液，再加入16毫升吡啶，用冰與乙醇的浴冷卻混合物，然后逐滴加入24.5克(0.116摩爾)三氟醋酸酐。
使混合物重新回到室溫，持續(xù)攪拌一夜。
將混合物倒入200毫升冰水中。分離有機(jī)相，依次用1N鹽酸、水、碳酸氫鈉飽和溶液和氯化鈉飽和溶液洗滌有機(jī)相。用硫酸鎂干燥后，得到22.29克黃色固體。直接用于下一步驟。
7.2(±)-6-硝基-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪-3-醋酸乙酯。
在磁攪拌下，在冷卻至0℃的1升三頸燒瓶中倒入220毫升乙醇，然后少量分批緩慢加入3克(0.133摩爾)鈉，再依次逐滴加入22.29克(0.088摩爾)N-(2-羥基-5-硝基苯基)三氟乙酰胺和22.65克(0.088摩爾)純度達(dá)75%的4-溴丁-2-烯酸乙酯，加熱回流混合物3小時(shí)。
蒸發(fā)溶劑，用53毫升水和21毫升1N蘇打處理殘余物，然后用二乙醚進(jìn)行萃取。用氯化鈉飽和溶液洗滌有機(jī)相，用硫酸鎂干燥，蒸發(fā)溶劑。得到紅橙色的油狀物，然后對(duì)此種油狀物用環(huán)己烷與醋酸乙酯的混合物(85/15)為淋洗劑，通過硅膠柱色譜法進(jìn)行提純。得到9.25克產(chǎn)物。
7.3(±)-6-硝基-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪-3-乙醇。
在氬氣氛下，加熱回流8.4克(0.0317摩爾)(±)-6-硝基-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪-3-醋酸乙酯、3克(0.762摩爾)硼氫化鈉和133毫升1，1-二甲基乙醇的混合物，然后逐滴加入26.6毫升甲醇，繼續(xù)加熱回流30分鐘。
用冰浴冷卻混合物，加入60毫升水，蒸發(fā)甲醇和1，1-二甲基乙醇，再用120毫升醋酸乙酯萃取水相三次，用80毫升氯化鈉飽和溶液洗滌有機(jī)相兩次，再將有機(jī)相用硫酸鎂干燥，過濾有機(jī)相，在減壓條件下蒸發(fā)溶劑。得到9.3克油狀生成物，然后對(duì)此生成物用環(huán)己烷與醋酸乙酯(60/40)的混合物為淋洗劑，通過硅膠柱色譜法進(jìn)行提純。
得到5.2克遇冷結(jié)晶的生成物，直接用于下一步驟中。
7.4(±)-6-硝基-4-[3-(三氟甲基)苯甲?；鵠-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪-3-乙醇在500毫升圓底燒瓶中加入40毫升二氯甲烷、5.16克(0.023摩爾)(±)-6-硝基-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪-3-乙醇和3.5克(0.025摩爾)碳酸鉀，然后逐滴加入溶于40毫升二氯甲烷的5.2克(0.025摩爾)3-(三氟甲基)苯甲酰氯，在室溫下攪拌混合物3.5小時(shí)。
加入22毫升1N蘇打，蒸發(fā)二氯甲烷，用醋酸乙酯萃取水性殘余物。洗滌并干燥有機(jī)相后，在減壓條件下蒸發(fā)溶劑。然后對(duì)殘余物用環(huán)己烷與醋酸乙酯(7/3到5/5)的混合物為淋洗劑，通過硅膠柱色譜法進(jìn)行提純。得到5.4克純產(chǎn)物。
7.5(±)-3-(2-氯乙基)-6-硝基-4-[(3-三氟甲基)苯甲?；鵠-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪。
在5.37克(0.0135摩爾)(±)-6-硝基-4-[3-(三氟甲基)苯甲酰基]-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪-3-乙醇的80毫升二氯甲烷溶液中。逐滴加入4.85毫升(0.0675摩爾)亞硫酰二氯，用熱水浴使之溫?zé)?，持續(xù)攪拌5個(gè)半小時(shí)。
蒸發(fā)溶劑，用甲苯處理殘余物，再蒸發(fā)甲苯，用二異丙醚洗滌殘余物，得到21.74克生成物，直接用于下一步驟中。
7.6(±)-3-[2-[(2，3-二氫-1H-茚-2-基)氨基]乙基]-6-硝基-4-[3-(三氟甲基)苯甲?；鵠-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪的(E)-2-丁烯二酸鹽(2∶1)。
在1.58克(0.0038摩爾)(±)-3-(2-氯乙基)-6-硝基-4-[3-(三氟甲基)苯甲?；鵠-3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪的15mlN，N-二甲基甲酰胺溶液中，在室溫、氬氣氣氛和磁攪拌下，加入0.69克(0.0038摩爾)N-甲基-2，3-二氫-1H-茚-2-胺的鹽酸鹽、1.32克(0.0095摩爾)碳酸鉀和0.63克(0.0038摩爾)碘化鉀。加熱混合物至110℃，待續(xù)3個(gè)半小時(shí)。
冷卻混合物，加入40毫升水和100毫升二乙醚，分離各相，用50毫升的二乙醚萃取水相兩次，收集有機(jī)相，用50毫升氯化鈉飽和溶液洗滌有機(jī)相兩次，然后用硫酸鎂干燥，過濾，蒸發(fā)溶劑。得到2.5克油狀生成物，然后對(duì)此生成物用二氯甲烷和甲醇(98/2)的混合物為淋洗劑，通過硅膠柱色譜法進(jìn)行提純。得到1.36克黃色的純堿。在熱的該堿的2-丙醇溶液中。加入等當(dāng)量的延胡索酸以制備其延胡索酸鹽。將它分離并使之在甲醇中重結(jié)晶。最后分離出0.90克延胡索酸鹽。
熔點(diǎn)176-178℃。
以下表格說明本發(fā)明的若干種化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)和物理特征。在“鹽(Sel)”欄中，“-”指堿狀態(tài)的化合物，“ox”指草酸鹽，即乙二酸鹽，“fum”指延胡索酸鹽，即(E)-2-丁烯二酸鹽;括號(hào)中標(biāo)出的比例是酸與堿的摩爾比。





本發(fā)明的化合物經(jīng)過多種試驗(yàn)。這些試驗(yàn)揭示了這些化合物作為醫(yī)藥物質(zhì)的價(jià)值。
這些化合物同樣被用于小鼠大腦局部缺血的試驗(yàn)中。局部缺血是由快速靜脈注射氯化鎂誘發(fā)心臟停跳而引起的。在這個(gè)試驗(yàn)中要測(cè)量“存活時(shí)間”，即注射氯化鎂時(shí)間與可以觀察到的每只小鼠最后的呼吸運(yùn)動(dòng)之間的時(shí)間間隔。這最后的呼吸運(yùn)動(dòng)被認(rèn)為是中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能的最后標(biāo)志。
注射氯化鎂后大約19秒出現(xiàn)呼吸停止。
一些雄性小鼠(Swiss OFl IFFA CREDO)被分成十只一組來研究。在實(shí)驗(yàn)前，隨意進(jìn)食飲水。將本發(fā)明的化合物通過腹膜內(nèi)給藥10分鐘后，再測(cè)量存活時(shí)間。實(shí)驗(yàn)結(jié)果以一組10只使用本發(fā)明化合物的小鼠與另一組10只僅用賦形劑的小鼠的存活時(shí)間的差表示。存活時(shí)間的變化與化合物劑量大小之間的關(guān)系用半對(duì)數(shù)曲線圖記錄下來。
依照此曲線，可以計(jì)算出“3秒鐘有效劑量”(DE3″)，即相對(duì)于沒有用化合物的10只小鼠的參照組，存活時(shí)間延長(zhǎng)三秒的劑量(毫克/千克)。
存活時(shí)間延長(zhǎng)3秒，這不僅具有統(tǒng)計(jì)意義，而且是可重復(fù)的。
通過腹膜給藥，本發(fā)明的化合物的DE3″是0.1到30毫克/千克。
用所謂“patch-clamp”技術(shù)，對(duì)本發(fā)明的化合物作了電壓相關(guān)(“Voltage-dependent”)的鋇流研究。
對(duì)通過電壓相關(guān)的鈣通道的鋇流的測(cè)定是在培養(yǎng)(培養(yǎng)6至10天)的初生鼠(Sprague-Dawley)的皮質(zhì)細(xì)胞的制備物上進(jìn)行的。在皮質(zhì)細(xì)胞的情況下，如Soc.Neurosci.Abstr.(1989)15825中所敘述的那樣，這涉及到經(jīng)由L、N與P通道的混合流。
將包含皮質(zhì)細(xì)胞的容量為800微升的測(cè)量室置于倒裝的Olympus IMT-2TM顯微鏡的載物臺(tái)上，在放大400×倍下觀察細(xì)胞。借助于一個(gè)溶液分配裝置不繼地向測(cè)量室注溶液(4至5毫升/分)。此裝置有九個(gè)進(jìn)口(死容量＜50微升)，其唯一一個(gè)由50微米直徑的聚乙烯管構(gòu)成的出口放在距被研究細(xì)胞不到3毫米處。此裝置的優(yōu)點(diǎn)在于能夠使被研究細(xì)胞的溶液進(jìn)行快速交換。
所使用的patch-clamp方法在Pfluegers Archives(1981)39185-100中有說明。采用一臺(tái)與使用Axon InstrumentsTM的PCLAMPTM軟件的AT386-33MHz型處理機(jī)聯(lián)機(jī)的Axopatch-IDTM放大器來刺激細(xì)胞，獲得數(shù)據(jù)和分析結(jié)果。為了記錄鋇流，借助于Narishige WR60TM液壓顯微操作器使硼硅酸鹽玻璃滴管靠近細(xì)胞，將滴管尖充滿參比細(xì)胞內(nèi)溶液，其組成(mM)如下CsCl(140)、CaCl2(1)、Na2ATP(4)、EGTA(11;pCa＝8)、Hepes(10)、Tris-OH(pH＝7.2)。
所謂的全“細(xì)胞”(Whole Cell)構(gòu)型一獲得，就將組成(mM)為TEA-Cl(144)、BaCl2(5)、MgCl2(2)、CsCl(3)，葡萄糖(10)、Hepes(10)、Tris-OH(pH＝7.4)的所謂TEA-鋇溶液注入細(xì)胞。
這種溶液使得可以擺脫鈉流與鉀流而測(cè)量出鈣流(經(jīng)過電壓相關(guān)的鈣通道的鋇流也類似)。
運(yùn)用持續(xù)250毫秒的去極化電勢(shì)跳變，使細(xì)胞膜的電位由-80毫伏達(dá)到0毫伏，從而得到與電壓相關(guān)的總鋇流。激發(fā)頻率為0.25赫茲。
一旦鋇流的振幅(amplitude)穩(wěn)定下來，就使用溶于TEA-鋇溶液中的本發(fā)明化合物。獲得穩(wěn)定的抑制效果后，用參比TEA-鋇溶液重新灌注細(xì)胞，以便觀察效果的回復(fù)。
比較獲得的效果值與100μM鎘溶液的效果值。電壓相關(guān)的鋇流的抑制作用隨著所研究化合物的劑量的改變而改變，對(duì)最有效的化合物而言是濃度為1μM的40%與濃度為10μM的90%。
用本發(fā)明的化合物所進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在活體外，這些化合物具有神經(jīng)無鈣拮抗性，在活體內(nèi)，它們有神經(jīng)保護(hù)性和抗局部缺血性。
這些結(jié)果意謂著這些化合物可以用于治療和預(yù)防大腦紊亂，如由諸如局部缺血病、心跳或呼吸停止、腦部血栓或栓塞引起的大腦紊亂;用于治療大腦衰退、由多種梗塞引起的癡呆、諸如阿爾茨海默癥或匹克病等老年癡呆;用于治療橄欖體腦橋小腦萎縮和其他神經(jīng)退化癥，如亨延頓氏舞蹈病、單側(cè)肌萎縮硬化;用于治療顱外傷或脊柱外傷;用于預(yù)防痙攣病癥引起的神經(jīng)元損傷;用于治療某些癌癥;治療由愛滋病引起的神經(jīng)病變;用于預(yù)防和治療糖尿病視網(wǎng)膜病變、視神經(jīng)變性和與青光眼有關(guān)的視網(wǎng)膜病變，總之，可用于治療所有與神經(jīng)元鈣機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定性機(jī)能障礙有關(guān)的疾病。
為此，這些化合物可以結(jié)合適當(dāng)?shù)馁x形劑，呈所有適于腸胃或腸道外給藥的藥物形式，如片劑、糖衣丸劑、膠囊劑、膠囊、栓劑、可以飲用或注射的溶液或懸浮劑，劑量為1到1000毫克有效物質(zhì)/天。
權(quán)利要求
1.以純旋光異構(gòu)體或旋光異構(gòu)體混合物的形式、以堿或酸加成鹽的狀態(tài)存在的通式(Ⅰ)的化合物 其中，R1代表氫原子、氟原子或氯原子或甲基、C1-C3的烷氧基或硝基；R3單獨(dú)時(shí)代表氫原子或C1-C3的烷基；R4單獨(dú)時(shí)代表2，3-二氫-1H-茚-2-基、2，3-二氫-1H-茚-1-基或1，2，3，4-四氫化萘-1-基；或者，R3和R4和與它們相連的氮原子一起構(gòu)成1，2，3，4-四氫-9H-吡啶并[3，4-b]吲哚-2-基、1，2，3，4-四氫-9H-吡啶并[4，3-b]吲哚-3-基、4，5，6，7-四氫噻嗯并[2，3-c]吡啶-6-基、4，5，6，7-四氫噻嗯并[3，2-c]吡啶-6-基或2，3-二氫-1H-異吲哚-2-基，它們各自的結(jié)構(gòu)式如下
2.按權(quán)利要求1的化合物，其特征在于R1代表氟原子、氯原子或甲基或甲氧基，R3代表氫原子或C1-C3的烷基，R4代表2，3-二氫-1H-茚-2-基、2，3-二氫-1H-茚-1-基或1，2，3，4-四氫化萘-1-基。
3.按權(quán)利要求1的化合物的制備方法，其特征在于，使通式(Ⅱ)的2-氨基苯酚和三氟醋酸酐反應(yīng)，得到式(Ⅳ)的酰胺， [式(Ⅱ)中R1如權(quán)利要求1中所定義]，然后使這種酰胺與4-溴丁-2-烯酸乙酯反應(yīng)，再用還原劑還原所得到的通式(Ⅵ)的3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪-3-醋酸乙酯衍生物的酯官能團(tuán)， 得到通式(Ⅶ)的3，4-二氫-2H-1，4-苯并噁嗪-3-乙醇衍生物， 接著使后者與3-(三氟甲基)苯甲酰氯反應(yīng)，得到通式(Ⅸ)的醇， 再使之與亞硫酰二氯反應(yīng)，得到通式(Ⅹ)的化合物， 最后，使這種化合物與式HNR3R4的胺反應(yīng)，NHR3R4中R3、R4如權(quán)利要求1中所定義。
4.以包含權(quán)利要求1的一種化合物為特征的藥物。
5.以包含與賦形劑結(jié)合的一種權(quán)利要求1化合物為特征的藥物組合物。
全文摘要
符合通式(I)的化合物(其中各代號(hào)意義詳見說明書)。
文檔編號(hào)C07D265/26GK1109880SQ9510165
公開日1995年10月11日 申請(qǐng)日期1995年1月30日 優(yōu)先權(quán)日1994年2月3日
發(fā)明者P·喬治, J·弗羅斯特, P·帕索, C·盧塞爾, R·巴殊, P·H·威廉斯, J·C·穆勒 申請(qǐng)人:合成實(shí)驗(yàn)室公司