專(zhuān)利名稱(chēng)：新型的類(lèi)視黃酸的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及式I的新化合物和其可藥用鹽，酯和酰胺 式中C7-C8鍵為雙鍵或叁鍵；當(dāng)C7-C8鍵為雙鍵時(shí)，R1和R2獨(dú)立地為鹵素或低級(jí)烷基，或當(dāng)C7-C8鍵為叁鍵時(shí)，R1和R2獨(dú)立地為低級(jí)烷基；或R1和R2一起為C3-C13亞烷基，其中一個(gè)碳原子可被選自硫、氧和氮的雜原子取代；或R1和R2與和它們相接的碳原子一起是具有5-6個(gè)碳原子的芳環(huán)或具有5-6個(gè)原子的雜芳環(huán)，其中R1或R2中的一個(gè)原子為選自氧、氮和硫的雜原子，且R1和R2的剩余原子都是碳。
當(dāng)R1和R2一起為C3-C13亞烷基時(shí)，它們優(yōu)選地為C3-C6亞烷基，尤其為C6-亞烷基。當(dāng)R1和R2與和它們相接的碳原子一起為芳環(huán)時(shí)，則優(yōu)選的芳環(huán)為噻吩、苯和吡啶。R1和R2鹵素可以是Cl、Br、F或I，Br和I是優(yōu)選的。R1和R2低級(jí)烷基為C1-4烷基，它們可以是直鏈的或支鏈的。優(yōu)選的低級(jí)烷基是甲基。
本發(fā)明優(yōu)選的化合物是式I的化合物，以及其可藥用鹽、酯和酰胺，式中C7-C8鍵為雙鍵，R1和R2獨(dú)立地為鹵素或低級(jí)烷基，或R1和R2一起為C3-13亞烷基，其中一個(gè)碳原子可被選自硫、氧和氮的雜原子取代，或R1和R2與和它們相接的碳原子一起是具有5-6個(gè)碳原子的芳環(huán)或具有5-6個(gè)原子的雜芳環(huán)，其中R1或R2中的一個(gè)原子是選自氧、氮和硫的雜原子，并且R1和R2的剩余原子都是碳。
本發(fā)明的另一方面涉及式I的化合物，其可藥用鹽、酯和酰胺，式中C7-C8鍵為叁鍵，R1和R2獨(dú)立地為低級(jí)烷基，或R1和R2一起為C3-13亞烷基，其中一個(gè)碳原子可被選自硫、氧和氮的雜原子取代，或R1和R2與和它們相接的碳原子一起是具有5-6個(gè)碳原子的芳環(huán)或具有5-6個(gè)原子的雜芳環(huán)，其中R1和R2的一個(gè)原子是選自氧、氮和硫的雜原子，并且R1和R2的剩余原子都是碳。
人們已知通過(guò)連接到蛋白質(zhì)族上的視黃酸功能是作為核視黃酸受體(“RAR”)。該族的三個(gè)成員稱(chēng)為RATα、RARβ和RARγ。連接到受體基團(tuán)上的9-順式視黃酸已知為視黃酸X受體(“RXR”)(Lev-in等人，Nature，355359-361(1992)； Heyman等人，Cell，68397-406(1992))，而連接到RARα的全-反式和13-順式視黃酸則不是。但是，9-順式視黃酸也起受體的RAR基團(tuán)的配位體的作用，因此可呈現(xiàn)出不希望的全-反式和13-順式視黃酸的副作用。已知RAR和RXR受體都形成傳遞其生物功能的雜二聚物(Leid等人，Cell，68377-395(1992)；Yu等人，Cell，671251-1266(1991)；Zhang等人，Nature，355441-446(1992))。
本發(fā)明的化合物對(duì)受體的RXR族顯示出高度的選擇性，并可用作抗增生制劑和對(duì)皮膚病和腫瘤適應(yīng)癥具有實(shí)用性。尤其是，本發(fā)明的化合物抑制皮脂(sebocytes)的增生。已知皮脂的增生會(huì)引起痤瘡。因此，抑制了皮脂的增生是治療痤瘡的已知方法，這樣，本發(fā)明的化合物可用于治療痤瘡。
另外，本發(fā)明的RXR選擇性化合物在本身失活的劑量下增加了類(lèi)視黃酸的活性，類(lèi)視黃酸可用于治療癌癥，尤其是白血病和硬性腫瘤，在硬性腫瘤中，尤其是頭，頸和胸部的瘤，特別是胸瘤，其本身也可用于治療皮膚病，尤其是痤瘡和太陽(yáng)損傷的皮膚，與9-順式或13-順式視黃酸相比它降低了毒性作用。具有RARα活性如全-反式視黃酸和13-順式視黃酸的類(lèi)視黃酸是具有生物活性的化合物，而這種生物活性是基于其結(jié)合到RARα受體和轉(zhuǎn)移活化RARα受體。因此，本發(fā)明的化合物在治療這種類(lèi)視黃酸已知有用的適應(yīng)征中可作為具有RARα活性的活性類(lèi)視黃酸的增效劑。與具有RARα活性的類(lèi)視黃酸一起施用本發(fā)明的化合物則可使用更低劑量的類(lèi)視黃酸，或在常規(guī)劑量下增加類(lèi)視黃酸的效力可用于任何其中具有RARα活性的這類(lèi)類(lèi)視黃酸已知是有用的這類(lèi)適應(yīng)征。
因此，本發(fā)明還包括增效具有RARα活性的類(lèi)視黃酸活性的方法，其中與有效量的具有RARα活性的化合物一起，向病人給藥一定量(優(yōu)選地為具有RARα活性的化合物重量的1-10倍量)的本發(fā)明化合物，它對(duì)增效具有RARα活性的化合物的活性是有效的?！芭c......一起”是指本發(fā)明的RXR-選擇性化合物與具有RARα活性的化合物一起可作為系列施用，或基本上是同時(shí)的，優(yōu)選地，但不是必須的，以單獨(dú)的、口服單位劑形一起給藥，或在給藥具有RARα活性的化合物前或后給藥，以使RXR-選擇性化合物和具有RARα活性的化合物同時(shí)存在于病人的血流中，以使本發(fā)明的RXR-選擇性化合物是以將增效具有RARα活性的化合物活性的濃度存在。優(yōu)選地，本發(fā)明的RXR-選擇性活性化合物和具有RARα活性的化合物的給藥間隔不多于4小時(shí)，更優(yōu)選地不多于1小時(shí)，最優(yōu)選地基本上是同時(shí)的。
按照本發(fā)明，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的化合物在標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞培養(yǎng)測(cè)試中，在產(chǎn)生人體白血病細(xì)胞的區(qū)別中增效具有RARα活性的類(lèi)視黃酸的活性。因此，本發(fā)明的化合物在引起消退或減輕血液瘤，尤其是與急性前髓細(xì)胞白血病有關(guān)的那些瘤中具有活性，該活性將增效具有RARα活性的類(lèi)視黃酸的已知活性。白血病的治療是通過(guò)與具有RARα活性的類(lèi)視黃酸一起向病人全身給藥本發(fā)明的化合物來(lái)實(shí)現(xiàn)的，眾所周知，具有RARα活性的類(lèi)視黃酸是用于阻止血液瘤發(fā)展或引起血液瘤消退。用量將取決于腫瘤的數(shù)量和大小以及病人的需要。
按照本發(fā)明，還發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的化合物在引起消退或減輕硬性腫瘤，尤其是與頭和頸、和與胸癌有關(guān)的那些瘤中，增效具有RARα活性的類(lèi)視黃酸的活性。因此，本發(fā)明的化合物在引起消退或減輕硬性腫瘤，尤其是與頭和頸癌以及與胸癌有關(guān)的那些瘤中具有活性，這種活性將增效具有RARα活性的類(lèi)視黃酸的已知活性。腫瘤的這種治療是通過(guò)與具有活性的RARα活性的類(lèi)視黃酸一起向病人全身給藥本發(fā)明的化合物以引起消退或減輕腫瘤，尤其是頭、頸和胸瘤。其用量將取決于瘤的數(shù)量和大小以及病人的需要。
為了治療上述疾病，將本發(fā)明的化合物作為含本發(fā)明化合物的組合物，任選地與具有RARα活性的化合物，以及與所述化合物相容的可藥用載體一起進(jìn)行全身給藥。在制備這類(lèi)組合物時(shí)，可使用任何常規(guī)的可藥用載體。當(dāng)口服給藥藥物時(shí)，通常是以規(guī)定的間隔，方便地是每天進(jìn)餐時(shí)間或每天一次給藥。
可藥用鹽包括在視黃酸技術(shù)中化學(xué)允許的并且在可藥用制劑中適用于病人的任何鹽?？墒褂帽景l(fā)明化合物的任何這類(lèi)常規(guī)可藥用鹽。在可使用的常規(guī)鹽中，有堿性鹽，包括例如堿金屬鹽如鈉或鉀，堿土金屬鹽如鈣或鎂，和銨或烷基銨鹽。
按照本發(fā)明，本發(fā)明的化合物可以其可藥用水解酯的形式給藥。在本發(fā)明的組合物和方法中可使用任何可藥用水解酯。在酯中有芳香酯例如芐基(OBzl)或用低級(jí)烷基、鹵素、硝基、硫基取代的芐基，或取代的硫，即低級(jí)烷基、叔丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、和9-芴基甲基。
可將藥物組合物制成任何常規(guī)形式，包括(a)用于口服給藥的固體形式例如片劑、膠囊、丸劑、粉末、顆粒等；和(b)用于局部給藥的制劑例如溶液、懸浮液、軟膏、乳膏、凝膠、微粉化的粉末、氣溶膠等。藥物組合物可被消毒和/或可包含輔助劑例如防腐劑、穩(wěn)定劑、濕潤(rùn)劑、乳化劑、用于改變滲透壓的鹽，和/或緩沖劑。
按照本發(fā)明，上述的本發(fā)明化合物以可藥用口服方式使用。本發(fā)明的這些藥物組合物包含本發(fā)明的所述化合物或其可藥用鹽和與相容的可藥用載體物質(zhì)相結(jié)合的其可藥用水解的酯?？墒褂萌魏纬Ｒ?guī)載體物質(zhì)。載體物質(zhì)可以是適于口服給藥的有機(jī)或無(wú)機(jī)惰性載體物質(zhì)。合適的載體包括水、明膠、阿拉伯樹(shù)膠、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、滑石、植物油、聚(亞烷基)二醇、凡士林等。此外，藥物制劑可包含其它藥用活性制劑，優(yōu)選為具有RARα活性的類(lèi)視黃酸。按照藥物復(fù)合的可接受的實(shí)踐，可加入的其它添加劑例如香味劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、乳化劑和緩沖劑等。
可將藥物制劑制成任何常規(guī)的口服劑量形式，包括用于口服給藥的固體形式例如片劑，膠囊，丸劑，粉劑，顆粒等。優(yōu)選的口服劑量形式包括片劑，硬明膠或軟明膠，甲基纖維素或其它易于溶解在消化道中的合適物質(zhì)的膠囊。本發(fā)明的口服劑量將按處方醫(yī)師確診的個(gè)別病人的需要而改變。
在向病人口服給藥以增效具有RARα活性的類(lèi)視黃酸(用于治療急性前髓細(xì)胞白血病，或頭，頸或胸瘤)的不同活性時(shí)，通常向成人每天施用的本發(fā)明的化合物的用量為具有RARα活性的類(lèi)視黃酸量的1-10倍。具有RARα活性的類(lèi)視黃酸的給藥量為約20-約300mg/m2天，優(yōu)選地為約50-100mg/m2/天，實(shí)際藥量將根據(jù)病人的年齡和體重而改變。通常結(jié)合治療約進(jìn)行3個(gè)月。
本發(fā)明的化合物或其可藥用鹽或水解酯以及具有RARα活性的類(lèi)視黃酸可按本發(fā)明公開(kāi)給藥。但優(yōu)選地是作為包含本發(fā)明化合物，其可藥用鹽或酯的口服組合物與具有RARα活性的類(lèi)視黃酸一起給藥，其用量要足以結(jié)合治療急性前髓細(xì)胞白血病或頭、頸或胸瘤。
一般優(yōu)選的單位口服劑形為片劑或膠囊，它含有10-50mg具有RARα活性的類(lèi)視黃酸和其用量為具有RARα活性的類(lèi)視黃酸用量1-10倍的本發(fā)明化合物，其可藥用鹽或其可藥用水解酯。因此，在每個(gè)片劑或膠囊中，本發(fā)明化合物的量為10-50mg。根據(jù)病人的體重和年齡每天可給藥這些片劑或膠囊一次或兩次。
按照本發(fā)明，局部和口服給藥本發(fā)明的化合物，其可藥用鹽和其可藥用水解酯對(duì)治療各種形式的痤瘡例如炎癥和非炎癥的都是有效的。
對(duì)于局部給藥皮膚時(shí)，優(yōu)選地將在可藥用載體中包含本發(fā)明化合物的組合物制成軟膏、酊劑、乳膏、凝膠、溶液、洗液、噴霧劑、懸浮液、香波、發(fā)皂等。事實(shí)上，按照本發(fā)明，可使用用于應(yīng)用到皮膚或頭皮上的任何常規(guī)組合物。在施加含本發(fā)明活性組分的組合物的方法中，優(yōu)選地是以凝膠、洗液或乳膏的形式施加本發(fā)明的活性組分。局部給藥到皮膚上的藥物制劑可通過(guò)將上述的本發(fā)明的活性組分與這類(lèi)制劑中通常使用的無(wú)毒的、治療惰性的、固體或液體載體混合而制備。這類(lèi)制劑應(yīng)包含基于組合物總重量至少約0.05％(重量)的本發(fā)明活性組分。由于本發(fā)明的活性組分相對(duì)來(lái)說(shuō)是無(wú)毒的和非刺激的，因此，在局部組合物中可使用超過(guò)3％的量。優(yōu)選地是這些制劑包含基于組合物總重量約1-2％(重量)的本發(fā)明活性組分。優(yōu)選地是將這些制劑每天施加到皮膚上一次或兩次。這些制劑可按病人的需要使用。在實(shí)施本發(fā)明時(shí)，也可將本發(fā)明活性組分加入到水溶液或醇溶液例如乙醇中。
在制備上述局部用制劑時(shí)，可使用的添加劑例如防腐劑、增稠劑、香料等以及在局部制劑的藥物混合技術(shù)中通用的那些。另外，可將常規(guī)的抗氧化劑加入到包含本發(fā)明上述活性組分的局部制劑中。在這些制劑中可使用的常規(guī)抗氧化劑包括N-甲基-α-生育酸胺、生育酚、丁基化的羥基苯甲醚，丁基化的羥基甲苯，乙氧基喹(ethoxy quin)等。
按本發(fā)明，可使用在頭發(fā)用的局部制劑中通常使用的常規(guī)香料和洗液。此外，必要時(shí)，在本發(fā)明的局部制劑中可使用常規(guī)的乳化劑。
包含本發(fā)明活性組分的軟膏配方可包含半固態(tài)石油烴與分散本發(fā)明活性組分的溶劑的混合物。
包含本發(fā)明活性組分的乳劑優(yōu)選地包含由致濕物，粘度穩(wěn)定劑和水的水相，脂肪酸醇，半固態(tài)石油烴和乳化劑的油相以及包含已分散在水性穩(wěn)定劑-緩沖溶液中的本發(fā)明活性組分的相所形成的乳化液?？蓪⒎€(wěn)定劑加入到局部制劑中。本發(fā)明可使用任何常規(guī)的穩(wěn)定劑。在油相中，脂肪酸醇組分起穩(wěn)定劑作用。這些脂肪酸醇組分優(yōu)選地是從還原至少14個(gè)碳原子的長(zhǎng)鏈飽和脂肪酸而衍生的。包含本發(fā)明活性組分的乳劑基藥物配方可由例如含脂肪酸醇的乳化液、半固態(tài)石油烴、1，2-乙二醇和乳化劑所組成的。
通常，治療痤瘡，無(wú)論是炎性還是非炎性，可通過(guò)向病人每天口服給藥0.1-10mg/kg本發(fā)明的化合物一次或兩次來(lái)實(shí)施。治療痤瘡可通過(guò)局部施加含本發(fā)明化合物的局部用組合物來(lái)實(shí)施，其用量為約0.05-3％(重量)，優(yōu)選地約1-2％(重量)，每天一次或兩次。
用于治療的劑量通常取決于給藥途徑，各個(gè)病人的年齡、體重、大小和疾病情況。
本發(fā)明優(yōu)選的化合物是(2E，4E，6Z，8E)-3，6，7-三甲基-9-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)-2，4，6，8-壬四烯酸(nonatetraenoic cid)；(2E，4E)-3-甲基-5-(2-(2-((E)-2-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)乙烯基)-1-環(huán)己烯-1-基)-2，4-戊二烯酸；(全-E)-6-溴-3，7-二甲基-9-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)-2，4，6，8-壬四烯酸；(全-E)-6-碘代-3，7-二甲基-9-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)-2，4，6，8-壬四烯酸；
(全-E)-6-氯代-3，7-二甲基-9(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)-2，4，6，8-壬四烯酸；(2E，4E)-3-甲基-5-(2-((E)-2(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)乙烯基)-1-環(huán)戊烯-1-基)-2，4-戊二烯酸；(2E，4E)-3-甲基-5-(2-((E)-2(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)乙烯基)-1-環(huán)庚烯-1-基)-2，4-戊二烯酸；(2E，4E)-3-甲基-5-(2-((E)-2(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)乙烯基)-1-環(huán)辛烯-1-基)-2，4-戊二烯酸；(2E，4E)-3-甲基-5-(2-(2-((E)-2-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)乙烯基)-1-苯基)-2，4-戊二烯酸；(2E，4E)-3-甲基-5-(3-((E)-2-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)乙烯基)-2-噻吩基)-2，4-戊二烯酸；(2E，4E)-3-甲基-5-(2-((E)-2-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)乙烯基)-3-噻吩基)-2，4-戊二烯酸；(2E，4E)-3-甲基-5-(4-((E)-2-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)乙烯基)-3-噻吩基)-2，4-戊二烯酸；(2E，4E)-3-甲基-5-[2-(2，6，6-三甲基-環(huán)己-1-烯基乙炔基)-環(huán)戊-1-烯基]-戊-2，4-二烯酸；(2E，4E)-3-甲基-5-[2-(2，6，6-三甲基-環(huán)己-1-烯基乙炔基)-環(huán)庚-1-烯基]-戊-2，4-二烯酸；和(2E，4E)-3-甲基-5-[2-(2，6，6-三甲基-環(huán)己-1-烯基乙炔基)-苯基]-戊-2，4-二烯酸。
測(cè)定與RAR受體和RXR受體有關(guān)的類(lèi)視黃酸結(jié)合和轉(zhuǎn)移活化(tr-ansactivation)特性的方法在現(xiàn)有技術(shù)中是已知的，例如Levin等人，Nature，355359-361(1992年1月23日)；Allenby等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，9030-34(1993年1月)；Allenby等人，J.Biol.Chem.，26916689-16695(1994年6月17日)。在那些公開(kāi)刊物中所描述的方法主要用于測(cè)定本發(fā)明實(shí)施例中所報(bào)導(dǎo)的類(lèi)視黃酸的結(jié)合和轉(zhuǎn)移活化的特性。
用于治療痤瘡的本發(fā)明化合物的活性可按任何常規(guī)方法測(cè)定。例如，本發(fā)明化合物抑制皮脂增生的能力是治療痤瘡的標(biāo)準(zhǔn)模式。本發(fā)明化合物的皮脂抗增生活性可按實(shí)施例20(1)的步驟測(cè)定。
另外，本發(fā)明化合物降低Rhino小鼠小囊(utricle)大小的能力是治療痤瘡的另一種標(biāo)準(zhǔn)模式。該活性可按實(shí)施例20(2)的步驟測(cè)定。
此外，本發(fā)明化合物降低Syrian Golden大田鼠皮脂腺大小的能力是治療痤瘡的另一種標(biāo)準(zhǔn)模式。該活性可按實(shí)施例20(3)的步驟測(cè)定。
本發(fā)明化合物增效類(lèi)視黃酸RARα活性的能力可按任何常規(guī)方法測(cè)定。因此，可通過(guò)在標(biāo)準(zhǔn)篩選測(cè)定中測(cè)量本發(fā)明化合物與具有RARα活性的類(lèi)視黃酸的結(jié)合活性而測(cè)定本發(fā)明化合物增效類(lèi)視黃酸RARα活性的能力，已知標(biāo)準(zhǔn)篩選測(cè)定是與熟知的用類(lèi)視黃酸治療的疾病狀態(tài)有關(guān)。所需降低具有RARα活性的類(lèi)視黃酸濃度以獲得特定的活性量或在恒定濃度下增加類(lèi)視黃酸的活性將表明本發(fā)明化合物的增效活性，在這種情況下，本發(fā)明化合物的濃度是一種在該濃度下本發(fā)明化合物本身活性很少或沒(méi)有活性。
例如，如下所示的在分化HL-60細(xì)胞(人體白血病的標(biāo)準(zhǔn)模式)中本發(fā)明化合物增效類(lèi)視黃酸活性的能力的結(jié)果表明了本發(fā)明化合物的增效活性。本發(fā)明化合物在分化HL-60細(xì)胞中增效具有RARα活性的類(lèi)視黃酸活性的能力可按實(shí)施例18進(jìn)行。
此外，如下所示的本發(fā)明化合物在抑制小鼠B細(xì)胞活化(免疫抑制的標(biāo)準(zhǔn)模式)中增效具有RARα活性的類(lèi)視黃酸活性的結(jié)果表明了本發(fā)明化合物的活性。本發(fā)明化合物在抑制小鼠B細(xì)胞活化中增效類(lèi)視黃酸活性的能力可按實(shí)施例19進(jìn)行。
此外，如下所示的本發(fā)明化合物在抑制胸癌細(xì)胞系(硬腫瘤的模式)的生長(zhǎng)中增效具有RARα活性的類(lèi)視黃酸活性的結(jié)果表明了本發(fā)明化合物的增效活性。本發(fā)明化合物在抑制胸癌細(xì)胞系的生長(zhǎng)中增效類(lèi)視黃酸活性的能力可按實(shí)施例21進(jìn)行。
本發(fā)明化合物可按任何常規(guī)方法制備。下列方法說(shuō)明了優(yōu)選的方法。
方法1a(R10和R20＝低級(jí)烷基) 方法1b(R11＝低級(jí)烷基；R21＝鹵素) 方法1c(R12＝低級(jí)烷基或鹵素；R22＝低級(jí)烷基，F(xiàn) or Cl) 方法1d(R13＝低級(jí)烷基或鹵素；R23＝Br)
方法2 方法3
方法4
方法5
方法6
方法7
方法8
方法9 方法1a-1d表明用于制得式I化合物的中間酯的優(yōu)選的制備方法，式中R1和R2不一起形成環(huán)。方法1a是其中R1和R2獨(dú)立地為低級(jí)烷基的式I化合物的制備途徑。方法1b是其中R1為低級(jí)烷基而R2為鹵素或低級(jí)烷基的式I化合物的制備途徑。方法1c是其中R1為低級(jí)烷基或鹵素而R2為低級(jí)烷基，氟或氯的式I化合物的制備途徑。方法1d是其中R1為低級(jí)烷基或鹵素而R2為溴的式I化合物的另一種制備途徑。但是，當(dāng)R1為烷基時(shí)，R2為溴的式I化合物最好通過(guò)方法1b的途徑制備。
在方法1a中，將1置于強(qiáng)堿(例如，二異丙基酰胺鋰)中，用烷基鹵化物烷基化烯醇化物，形成酯3，在平衡條件下(例如，在回流乙醇中的乙醇鈉)置于堿中后獲得主要作為一種異構(gòu)體(Z)的酯3。
方法1b優(yōu)選地用于制得R2為鹵素的式I化合物。但是，方法1b也可用于制備R2為低級(jí)烷基的式I化合物。將銅酸鹽(R1)2LiCu加入到乙炔7(Carotenoids，Otto Isled，ed.(Birkhauser Verlage，Basel，1971))中，由順式添加物得到新的銅酸鹽，在用合適的鹵物化(例如二噁烷中的碘)抑制(quenching)獲得3′；R2＝I。用烷基鹵化物抑制銅酸鹽將得到酯3′，其中，R2為烷基。銅酸鹽化學(xué)的優(yōu)點(diǎn)是在大多數(shù)情況下形成單一的異構(gòu)體。
方法1c優(yōu)選地用于制得R2為低級(jí)烷基的式I化合物。將市售的原料(例如，β-芷香酮)(R2＝CH3)與合適的膦酸酯15(Caroteno-ids，同上)偶合獲得所需的酯3″。
方法1d可用于形成R2為溴的式I化合物(G.Kobrich等人，Lleb-igs Ann.Chem.，51704(1967))。按參考方法使酮14轉(zhuǎn)化成烯烴16。使已知的溴代酸16的混合物轉(zhuǎn)變成酯3的混合物(例如，R1＝Me；R2＝Br)，然后經(jīng)HPLC分離，接著轉(zhuǎn)變成上述的最終產(chǎn)物。
在處理最終產(chǎn)物時(shí)，用酯3，3′，3″或3通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)步驟(Carote-noids，同上)制備。例如，反應(yīng)可按方法2所示進(jìn)行。在方法2中，將任何酯3，3′，3″或3還原成醇，接著用二氧化錳再次氧化成醛4。然后將醛4與膦酸酯5偶合得到作為甲基酯6的最終產(chǎn)物。6的基本水解產(chǎn)物游離酸。
其中R1和R2一起為C3-13亞烷基的式I化合物如方法3所示易于制備(R.M.Caates等人，J.Org.Chem.，473597(1982))。因此，使環(huán)酮8(例如環(huán)戊酮或環(huán)己酮等)置于二甲基甲酰胺中的三溴化磷中，得到溴代醛9(Coates等人，同上)，然后與鏻鹽101偶合，得到乙烯基溴11。隨后通過(guò)金屬轉(zhuǎn)移作用和與二甲基甲酰胺反應(yīng)，而使乙烯基溴轉(zhuǎn)化成醛12。在處理新醛時(shí)，通過(guò)將12與膦酸酯5偶合而易于形成最終產(chǎn)物13。接著水解得到所需的酸。
方法7表示用于方法3的中間體12的優(yōu)選的制備方法，其中R1和R2一起為C3-13亞烷基。因此，按已知方法(例如，Org.Synthesis，Coll Vol.5198(1973))將酮8轉(zhuǎn)變成酯36，然后轉(zhuǎn)化成烯醇磷酸酯37。用銅酸二甲酯置換磷酸酯基團(tuán)(J.Org.Chem.，532984(1988))，然后得到酯38。使38置于二異丙基酰胺鋰中，然后添加環(huán)檸檬醛39，得到內(nèi)酯40(Tet.Letters，212509(1980))。用叔丁醇鉀處理內(nèi)酯40，接著用甲基碘抑制反應(yīng)產(chǎn)物，獲得酯41。用二異丁基氫化鋁還原，接著用二氧化錳氧化，產(chǎn)生醛12。
方法4、5和6所示的途徑可用于獲得式I的化合物，式中R1和R2與和它們相接的碳原子一起是5-6節(jié)芳環(huán)(例如，噻吩，苯和吡啶等)。因此，在方法4中，表示含苯結(jié)構(gòu)22的途徑。用三苯膦氫溴化物處理2-苯并[C]呋喃酮，然后將產(chǎn)生的鹽17與醛18偶合，獲得所示的酸性酯19。通過(guò)?；?未示出)還原酸性酯19，得到芐基醇20，然后將其轉(zhuǎn)化成醛21，接著與環(huán)香葉基鏻內(nèi)鎓鹽10偶合，獲得酯22，水解后產(chǎn)生酸。
如方法5和6所示，由合適的溴噻吩制備各種噻吩衍生物。例如，在方法5中，使2，3-二溴噻吩23選擇性地金屬化并置于二甲基甲酰胺中，獲得醛24，然后用膦?；宜崛阴⑷?4同系化成為酯25。還原酯基團(tuán)得到醇26，經(jīng)保護(hù)后得到乙縮醛27，現(xiàn)在再次使其金屬化并用二甲基甲酰胺抑制，得到醛28。用環(huán)香葉基鏻內(nèi)鎓鹽縮合28，接著經(jīng)酸處理獲得醇29。然后用二氧化錳將醇29氧化成醛30，將它置于甲基鋰中，再次用二氧化錳氧化獲得甲基酮31。用膦?；宜崛阴ナ规溠娱L(zhǎng)獲得所需的物質(zhì)如酯32，經(jīng)水解得到酸。按類(lèi)似方法(參見(jiàn)實(shí)施倒)可制備其類(lèi)似物。
在方法6中，使醛24與環(huán)香葉基鏻內(nèi)鎓鹽10偶合獲得33，使33選擇性地金屬化并置于二甲基甲酰胺中，得到醛34。然后用膦?；宜崛阴ナ规溠娱L(zhǎng)，獲得所需物質(zhì)如酯36，經(jīng)水解獲得酸。
方法8和9表示其中C7-C8鍵為叁鍵的式I化合物的優(yōu)選的制備方法。
在方法8中，醛42在堿例如NaOH的存在下，在Wittig-Horner反應(yīng)中與4-(二乙氧基-膦?；?-3-甲基-丁-2-烯酸乙酯偶合，獲得酯43。
使用強(qiáng)堿例如丁基鋰，使2，2，6-三甲基環(huán)己酮與三甲基硅乙炔(TMS-乙炔)反應(yīng)。用Burgess試劑(甲氧基羰基氨磺酰-三乙銨氫氧化物，內(nèi)鹽)除去水，并用氟化四丁銨除去甲硅烷基保護(hù)基團(tuán)，得到2-乙炔基-1，3，3-三甲基-1-環(huán)己烯。
采用Pd(Ph3P)4/CuI復(fù)合物作催化劑和哌啶作溶劑，將環(huán)己烯衍生物與酯43偶合。然后將所得的酯水解成酸III。
在方法9中，使2-乙炔-芐基醇(化合物44，其中R為H)與氯化三甲基硅烷反應(yīng)。在用丁基鋰脫質(zhì)子化作用后，使保護(hù)醇(44，R＝SiMe13)與2，2，6-三甲基-環(huán)己酮反應(yīng)，形成其中R′為SiMe3的加合物45。用堿例如氫氧化鉀水溶液除去甲硅烷基保護(hù)基，接著用乙酰氯和三乙胺乙?；?，獲得乙酸酯45(R′＝乙?；?。
通過(guò)用Burgess試劑處理，從環(huán)己醇衍生物45中除去水，獲得相應(yīng)的環(huán)己烯衍生物。接著水解乙酰基并用MnO2氧化伯醇，獲得醛46。在Wittig-Horner反應(yīng)中，使醛46與4-(二乙氧基-膦?；?-3-甲基-丁-2-烯酸乙酯反應(yīng)，在水解其相應(yīng)的酯后獲得酸III。
下列實(shí)施例闡述本發(fā)明。在實(shí)施例中，濃度包括使用旋轉(zhuǎn)式汽化器在40℃和20mmHg真空下蒸發(fā)溶劑。HPLC是指使用帶有硅柱體的Walers Prep 500的高性能液相色譜。全部中間物和最終產(chǎn)物都經(jīng)HNMR光譜學(xué)檢定。
實(shí)施例1制備(2E，4E，6Z，8E)-3，6，7-三甲基-9-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)已烯-1-基)-2，4，6，8-壬四烯酸將(全-E)-乙基-3-甲基-5-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)-2，4-戊二烯酸酯(1；R1＝Me；13.1g)溶解在四氫呋喃(25ml)中，然后在-70℃下加入已溶解在四氫呋喃(100ml)中的新制備的二異丙基酰胺鋰溶液(根據(jù)得自二異丙胺和正丁基鋰的起始酯的1.2當(dāng)量；1.6M于己烷中)中。使得到的溶液在該溫度下再攪拌1小時(shí)，然后用甲基碘(10ml)處理，并加熱至室溫。加入飽和的氯化銨溶液，通過(guò)用己烷/乙酸乙酯混合物(4∶1)萃取分離有機(jī)物質(zhì)。在真空中除去溶劑，獲得油狀烷基化產(chǎn)物(14g)。將該物質(zhì)溶解在含甲醇鈉(10ml；4.6M在甲醇中)的甲醇(100ml)中并回流加熱2小時(shí)。在該時(shí)間后，將混合物冷卻到室溫，用水處理并如上所述用己烷/乙酸乙酯萃取。在真空中除去溶劑，獲得粗制(2E，4E)-2，3-二甲基-5-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)-2，4-戊二烯酸甲酯(13.2g)，它是約2、3雙鍵，9∶1的異構(gòu)體的混合物。將該物質(zhì)溶解在已冷卻至-70℃的己烷(150ml)中，然后用過(guò)量的氫化二異丁基鋁(1M在己烷中)處理，并加熱至0℃。隨后加入二乙醚(200ml)，接著加入羅謝爾鹽(Rochelle salt)的水溶液(20％，20ml)。當(dāng)開(kāi)始出現(xiàn)少量的放熱反應(yīng)時(shí)，將混合物小心地加熱到室溫。使混合物加熱到35℃，然后冷卻至室溫。接著加入固態(tài)硫酸鎂(50g)并過(guò)濾掉固體。
在真空中除去溶劑，獲得油狀粗醇。將該物質(zhì)溶解在己烷(20ml)中并加入到在已冷至5℃的己烷-乙醚的混合物(1∶1；400ml)中的二氧化錳(102g)的漿料中，在該混合攪拌1.5小時(shí)，然后在室溫下再攪拌1小時(shí)。然后過(guò)濾掉固體并在真空中濃縮該溶液。通過(guò)HPLC(5％乙醚-己烷溶劑體系)色譜純化殘余物，獲得純的(2E，4E)-2，3-二甲基-5-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)-2，4-戊二烯醛(pentadienal)(6g；51％全部產(chǎn)自于乙酯)。
用己烷洗滌氫化鈉(1.3g；64％在油中)，在真空中干燥，然后在5℃下懸浮在四氫呋喃(60ml)中。向上述懸浮液中加入3-甲基-4-二乙基膦?；投顾峒柞ピ谒臍溥秽?8.6g在30ml中)中的溶液，獲得純凈的鈉鹽溶液(注如果混濁，使混合物通過(guò)CELITE硅藻土過(guò)濾)。然后將透明溶液冷卻至10℃，用已溶解在四氫呋喃(20ml)中的上述醛(6g)處理，然后在室溫下攪拌30分鐘。加入己烷，用水洗滌該混合物，干燥(硫酸鎂)過(guò)濾掉固體并濃縮。從己烷中結(jié)晶殘余物，得到純的(2E，4E，6Z，8E)-3，6，7-三甲基-9-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)-2，4，6，8-壬四烯酸甲酯是黃色結(jié)晶固體。將該物質(zhì)溶解在含氫氧化鉀(4g)的乙醇-水(100ml；9∶1)的混合物中，回流加熱30分鐘。使混合物冷卻至室溫，倒入冷的磷酸(2M)的水溶液中，將固體萃取到二氯甲烷中。在真空中除去溶劑，并從乙腈中結(jié)晶殘余物，獲得(2E，4E，6Z，8E)-3，6，7-三甲基-9-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)-2，4，6，8-壬四烯酸(3.8g)呈淡黃色結(jié)晶固體。在質(zhì)子磁共振譜中該物質(zhì)表示有E，E，Z，E多烯體系的特征峰。
實(shí)施例2制備(全-E)-6-溴-3，7-二甲基-9-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)-2，4，6，8-壬四烯酸將(2E，4E)和(2Z，4E)-2-溴-3-甲基-5-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)-2，4-戊二烯酸(75g)的混合物溶解在二甲基甲酰胺(500ml)中，在10℃下，將其緩慢地加入到氫化鈉(10.5g，65％在油中)在四氫呋喃(100ml)的懸浮液中，然后攪拌直到全部氫中止放出。然后加入甲基碘(50g)，并將得到的混合物在50-60℃下加熱2小時(shí)，倒入冰水混合物中，并用己烷萃取。用水洗滌己烷萃取物，干燥(硫酸鎂)并濃縮。然后通過(guò)HPLC(2.5％乙醚/己烷)分離甲酯的混合物，獲得純的(2E，4E)-2-溴-3-甲基-5-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)-2，4-戊二烯酸甲酯(20g)和(2E，4E)-2-溴-3-甲基-5-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)-2，4-戊二烯酸甲酯(37g)。
如實(shí)施例1，將(2E，4E)-2-溴-3-甲基-5-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)-2，4-戊二烯酸酯還原成醇，然后立刻置于二氧化錳中，以獲得不穩(wěn)定的醛(15g)。然后如實(shí)施例1，將該物質(zhì)轉(zhuǎn)化成(全-E)-6-溴-3，7-二甲基-9-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)-2，4，6，8-壬四烯酸乙酯，接著水解成(全-E)-6-溴-3，7-二甲基-9-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)-2，4，6，8-壬四烯酸。
實(shí)施例3制備(全-E)-6-碘代-3，7-二甲基-9-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)-2，4，6，8-壬四烯酸用甲基鋰在乙醚中的溶液(1.4M，低溴化物)處理0℃下的溴化亞銅二甲硫配合物(10.3g)在四氫呋喃(500ml)中的漿料，再攪拌15分鐘，然后冷卻至-70℃。向該冷卻透明的溶液中加入溶于四氫呋喃(50ml)中的(E)-5-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)-4-戊烯-2-基酸乙酯(10g)，將混合物攪拌2小時(shí)，然后用碘化物在四氫呋喃中的溶液(13g在100ml)中處理0.5小時(shí)。在該處理期后，將混合物加熱至-60℃并倒入氯化銨水溶液中，使有機(jī)物質(zhì)萃取到己烷中。己烷萃取物用稀的硫代硫酸鈉水溶液洗滌，干燥(硫酸鈉)，在室溫下濃縮，得到不穩(wěn)定的碘代酯，經(jīng)HPLC(2.5％乙醚/己烷)提純，獲得純的(2E，4E)-2-碘代-3-甲基-5-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)-2，4-戊二烯酸乙酯(5g)。將該酯轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的醛，然后按上述實(shí)施例將其與膦酸酯偶合，將得到的視黃酸酯類(lèi)似物水解，在從己烷/四氫呋喃混合物中結(jié)晶后，獲得純的淡黃色固體(全-E)-6-碘代-3，7-二甲基-9-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)-2，4，6，8-壬四烯酸。
實(shí)施例4制備(2E，4E)-3-甲基-5-(2-((E)-2(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)乙烯基)-1-環(huán)己烯-1-基)-2，4-戊二烯酸將((2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)甲基)-三苯基鏻氯化物(18g)在四氫呋喃(300ml)中的懸浮液冷至-60℃，滴加正丁基鋰(1.4M在己烷中；32ml)處理，然后再攪拌10分鐘。向該冷卻溶液中加入己溶解在四氫呋喃中的2-溴環(huán)己烯-1-羧基醛(8.5g，經(jīng)HNMR分析75％純)并在將其再攪拌2小時(shí)后，使該混合物加熱至室溫。然后在反應(yīng)物中加入己烷，所得到的混合物用水、50％甲醇水溶液洗滌并干燥(硫酸鎂)。除去溶劑，得到粗制(E)-1-溴-2-(2-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)乙烯基)-環(huán)己烯(12.5g)，它是用于下一步的異構(gòu)體的混合物。按實(shí)施例1用DMF進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)金屬轉(zhuǎn)變作用和反應(yīng)，獲得粗制醛(4.5g)，將其溶解在四氫呋喃(100ml)中，并與過(guò)量的膦酸酯反應(yīng)，在經(jīng)HPLC(12.5％乙醚在己烷中)純化后獲得油狀(2E，4E)-3-甲基-5-(2-((E)-2，(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)乙烯基)-1-環(huán)己烯-1-基-2，4-戊二烯酸甲酯。用氫氧化鉀水溶液水解得到晶狀(2E，4E)-3-甲基-5-(2-((E)-2(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)乙烯基)-1-環(huán)己烯-1-基)-2，4-戊二烯酸(1.6g，得自于己烷-四氫呋喃)。
實(shí)施例5制備(2E，4E)-3-甲基-5-(2-((E)-2(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)乙烯基)-1-環(huán)戊烯-1-基)-2，4-戊二烯酸如實(shí)施例4，將2-溴環(huán)戊烯-1-羧基醛轉(zhuǎn)化成(2E，4E)-3-甲基-5-(2-((E)-2(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)乙烯基)-1-環(huán)戊烯-1-基)-2，4-戊二烯酸乙酯，用堿水解，獲得(2E，4E)-3-甲基-5-(2-((E)-2(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)乙烯基-1-環(huán)戊烯-1-基)-2，4-戊二烯酸。
實(shí)施例6制備(2E，4E)-3-甲基-5-(2-((E)-2(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)乙烯基)-1-環(huán)庚烯-1-基)-2，4-戊二烯酸如實(shí)施例4和5，將1-溴環(huán)庚烯-2-羧基醛轉(zhuǎn)化成(2E，4E)-3-甲基-5-(2-((E)-2(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)乙烯基)-1-環(huán)庚烯-1-基)-2，4-戊二烯酸乙酯，在用堿水解后，獲得(2E，4E)-3-甲基-5-(2-((E)-2(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)乙烯基)-1-環(huán)庚烯-1-基)-2，4-戊二烯酸。
實(shí)施例7制備(2E，4E)-3-甲基-5-(2-((E)-2-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)乙烯基)-1-環(huán)辛烯-1-基)-2，4-戊二烯酸如上述實(shí)施例，將1-溴環(huán)辛烯-2-羧基醛轉(zhuǎn)化成(2E，4E)-3-甲基-5-(2-((E)-2(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)乙烯基)-1-環(huán)辛烯-1-基)-2，4-戊二烯酸乙酯，接著經(jīng)堿水解而轉(zhuǎn)化成(2E，4E)-3-甲基-5-(2-((E)-2(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)乙烯基)-1-環(huán)辛烯-1-基)-2，4-戊二烯酸。
實(shí)施例8制備(2E，4E)-3-甲基-5-(2-(2-((E)-2-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)乙烯基)-2-苯基)-2，4-戊二烯酸如方法4所示，將2-苯并[C]呋喃酮(0.1mol)和三苯膦氫溴化物(0.1mol)在200℃下加熱2小時(shí)，冷卻至室溫，用熱乙腈消化，獲得白色固體的鹽17(39g)。將該鹽(4.6g)在二甲基亞砜(DMSO；50ml)中的溶液在5℃下用DMSO的鈉鹽溶液(1M，20ml)處理，然后用醛18(1.5g)處理，獲得淡黃色的反應(yīng)混合物。然后加入水，將所得到的混合物用磷酸水溶液(2M)酸化，并通過(guò)乙酸乙酯萃取分離酸19。將粗產(chǎn)物(4.3g)溶解在苯中并置于草酰氯(3ml)和二甲基甲酰胺(3滴)中，然后在室溫下保持30分鐘。在真空中除去溶劑，接著將粗?；热芙庠谒臍溥秽?100ml)中，在-20℃下加入硼氫化鈉，并加熱到室溫后獲得醇20。經(jīng)HPLC提純粗醇，接著從己烷/乙酸乙酯混合物中結(jié)晶，獲得3-甲基-5-(2-羥甲基苯基)-2，4-戊二烯酸乙酯20，呈無(wú)色固體(1.1g)。使醇20(1.1g)于0℃下置于二氧化錳(1.1g)在己烷/二氯甲烷(5∶1；60ml)的漿料中，之后在室溫下再攪拌2小時(shí)，得到醛21(1.1g)。然后用粗醛21(1.0g)處理由環(huán)香葉基鏻溴化物10(1.3g)在四呋喃(20ml)和正丁基鋰中于10℃下得到的鏻內(nèi)鎓鹽溶液，并在15-30分鐘內(nèi)加熱到室溫。用水稀釋?zhuān)⒂袡C(jī)物質(zhì)萃取到己烷/乙酸乙酯混合物(4∶1)中，獲得油狀粗制加成物22。使在己烷中的該物質(zhì)通過(guò)硅膠塞，得到油狀的酯(0.8g)。在用無(wú)機(jī)酸(2M，磷酸)酸化后，在回流的乙醇中用氫氧化鉀水溶液水解得到酸。從己烷/乙酸乙酯混合物中結(jié)晶，獲得白色固體的純(2E，4E)-3-甲基-5-(2-(2-((E)-2-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)乙烯基-1-苯基)-2，4-戊二烯酸。
實(shí)施例9制備(2E，4E)-3-甲基-5-(3-((E)-2-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)乙烯基)-2-噻吩基)-2，4-戊二烯酸在-70℃下，用正丁基鋰(1.6M在己烷中，1.1當(dāng)量)處理2，3-二溴噻吩(0.1mol)在二乙醚中的溶液(約5％濃度)并攪拌30分鐘。然后加入過(guò)量的二甲基甲酰胺，使混合物加熱到室溫，用水驟冷，然后用稀釋的磷酸水溶液酸化。用己烷萃取，獲得粗醛，然后經(jīng)HPLC提純。將該過(guò)程得到的全部醛加入到在四氫呋喃中過(guò)量的三乙基膦?；宜徕c中，使混合物在室溫下攪拌1小時(shí)，然后用水和乙酸驟冷。接著于-40℃下，向過(guò)量的己烷中的氫化二異丁基鋁中加入粗酯25，之后將混合物加熱至0℃，并用羅謝爾鹽(20％，10ml)的水溶液抑制，并將其加熱到32℃。然后用己烷萃取，獲得醇26，用2-甲氧基丙烯使其轉(zhuǎn)化為乙縮醛27。經(jīng)HPLC提純乙縮醛后，將全部產(chǎn)物溶解在已冷至-70℃的四氫呋喃(約5％濃度)中，然后如前所述用正丁基鋰處理。在該溫度下再攪拌30分鐘后，加入過(guò)量的二甲基甲酰胺，并使混合物加熱至室溫，用氯化銨水溶液(20％)抑制，在用己烷分離并用HPLC提純后獲得醛28。然后將該醛置于過(guò)量的內(nèi)鎓鹽(1.2M)中，該內(nèi)鎓鹽是在-70℃下由環(huán)香葉基鏻溴化物10和正丁基鋰在四氫呋喃和己烷中形成的，然后在室溫下再攪拌2小時(shí)。加入水和磷酸水溶液，在萃取到己烷中后獲得醇29。將該物質(zhì)溶解在二乙醚(最小體積)中，然后于0℃加入到在較多乙醚(300ml)中的二氧化錳(10倍)的漿料中，并加熱到室溫。在再攪拌1小時(shí)后，過(guò)濾掉固體，并除去溶劑，在經(jīng)HPLC提純后獲得醛30。然后將該物質(zhì)溶解到乙醚中，冷卻至-10℃，并置于過(guò)量的乙醚中的甲基鋰(1.4N)中，接著加熱到室溫。加入水并濃縮有機(jī)相獲得粗制醇，如上所述，用二氧化錳氧化該粗制醇，獲得酮31。在室溫下，將該物質(zhì)置于在四氫呋喃中的過(guò)量三乙基膦?；宜岬拟c鹽中，獲得所需的酯32(R為乙基)呈具有主要的所需異構(gòu)體的新形成的雙鍵(≈4∶1)的異構(gòu)體的混合物。經(jīng)HPLC提純?cè)撐镔|(zhì)，并從己烷中結(jié)晶出主要的異構(gòu)體，獲得純的(2E，4E)-3-甲基-5-(3-((E)-2-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)乙烯基)-2-噻吩基)-2，4-戊二烯酸乙酯。按實(shí)施例8，在回流的乙醇中用氫氧化鉀水溶液水解，并從四氫呋喃/己烷物中結(jié)晶后，獲得純(2E，4E)-3-甲基-5-(3-((E)-2-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)乙烯基)-2-噻吩基)-2，4-戊二烯酸。
實(shí)施例10制備(2E，4E)-3-甲基-5-(2-((E)-2-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)乙烯基)-3-噻吩基)-2，4-戊二烯酸如實(shí)施例9，將2，3-二溴噻吩轉(zhuǎn)化成醛24，然后置于由環(huán)香葉基鏻溴化物10和正丁基鋰制得的內(nèi)鎓鹽中，獲得加成物33。按實(shí)施例9，用在己烷/四氫呋喃中的正丁基鋰處理溴化合物33，接著用過(guò)量的二甲基甲酰胺處理，在用磷酸水溶液處理后，獲得醛34。之后按實(shí)施例1將該物質(zhì)與膦酸酯5偶合，獲得(2E，4E)-3-甲基-5-(2-((E)-2-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)乙烯基)-3-噻吩基)-2，4-戊二烯酸甲酯35(R＝甲基)，是末端為雙鍵的異構(gòu)體的混合物。經(jīng)HPLC提純，獲得(2E，4E)-3-甲基-5-(2-((E)-2-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)乙烯基)-3-噻吩基)-2，4-戊二烯酸甲酯，如上所述水解后，從四氫呋喃/己烷混合物中結(jié)晶得到純的(2E，4E)-3-甲基-5-(2-((E)-2-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)乙烯基)-3-噻吩基)-2，4-戊二烯酸。
實(shí)施例11制備(2E，4E)-3-甲基-5-(4-((E)-2-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)乙烯基)-3-噻吩基)-2，4-戊二烯酸按實(shí)施例10處理3，4-二溴噻吩，獲得(2E，4E)-3-甲基-5-(4-((E)-2-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)乙烯基)-3-噻吩基-2，4-戊二烯酸。
實(shí)施例12制備(全-E)-6-氯-3，7-二甲基-9-(2，6，6-三甲基-環(huán)己烯-1-基)-2，4，6，8-壬四烯酸用氫化鈉(64％油狀懸浮液；0.12M)處理2-氯膦?；宜崛阴?J.Org.Chem.，515467(1986))(0.12M)在四氫呋喃中的溶液，并在室溫下攪拌，獲得透明的陰離子溶液。向該混合物中加入β-芷香酮(0.1M)并使反應(yīng)在45℃下加熱過(guò)夜。加入水，并使產(chǎn)物萃取到己烷/乙酸乙酯(4∶1)中。除去溶劑，將得到偶合產(chǎn)物，雙鍵異構(gòu)體的混合物(1∶1)，通過(guò)HPLC分離該混合物得到所要的異構(gòu)體，(2E，4E)-2-氯-3-甲基-5-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)-2，4-戊二烯酸乙酯。按實(shí)施例1，用氫化二異丁基鋁氫化物還原該酯，接著如上所述用二氧化錳氧化，獲得(2E，4E)-2-氯-3-甲基-5-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)-2，4-戊二烯醛(2，4-pentadienal)。按實(shí)施例1，將該物質(zhì)與3-甲基-4-二乙基膦酰基巴豆酸甲酯偶合，獲得(全-E)-6-氯-3，7-二甲基-9-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)-2，4，6，8-壬四烯酸甲酯。如上所述，水解酯，從四氫呋喃和己烷的混合物中結(jié)晶酸，獲得純的黃色固體的(全-E)-6-氯-3，7-二甲基-9-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-基)-2，4，6，8-壬四烯酸。
實(shí)施例13制備全-E-3，7-二甲基-9-[(2-甲氧基-4-甲基-6-辛氧基)苯基]-2，4，6，8-壬四烯酸用甲基碘(100ml)和碳酸鉀(124.2g)處理2，6-二羥基-4-甲基-苯甲酸在丙酮中的溶液(50.4g，750ml)，并在回流下加熱18小時(shí)。然后將混合物冷至室溫，過(guò)濾掉固體。濃縮該溶液，獲得粗產(chǎn)物，將該產(chǎn)物溶解在乙酸乙酯中，并用氫氧化鈉水溶液(1N；冷的)洗滌。之后在真空中除去溶劑，獲得2，6-二甲氧基-4-甲基-苯甲酸甲酯(54g)。將該物質(zhì)(52.5g)溶解在已冷至-70℃的二氯甲烷(1000ml)中，用三氯化硼在相同溶劑中的溶液(29.3g/100ml；180ml)處理。然后將該混合物加熱到室溫并再攪拌45分鐘，隨后倒入冰中。分離有機(jī)層，用較多的水洗滌，干燥(硫酸鎂)，過(guò)濾并濃縮。
殘余物采用Water制備500色譜方法(7％乙酸乙酯/己烷洗脫液)經(jīng)高效制備液相色譜提純，獲得固體的2-羥基-6-甲氧基-4-甲基苯甲酸甲酯(28.3g)，用1-辛基碘(34.2g)處理該物質(zhì)(35g)在含有碳酸鉀(27.1g)的甲乙基酮(700ml)中的溶液，并在回流下加熱20小時(shí)。冷卻該反應(yīng)混合物，過(guò)濾掉固體，濃縮濾液，然后再溶解在己烷和乙酸乙酯的混合物中。用堿水(1N氫氧化鈉)，水洗滌該溶液，干燥(硫酸鎂)并濃縮至干。如上所述，經(jīng)HPLC提純，獲得純2-甲氧基-6-辛氧基-4-甲基-苯甲酸甲酯(51.8g)。
使該物質(zhì)(51.8g)在甲苯(500ml)中的溶液冷至-60℃并用二異丁基鋁氫化物的溶液(25％在己烷；281ml)處理，然后加熱至室溫。然后用冷的甲醇水溶液(100ml；1∶1)小心地處理該反應(yīng)混合物，以使溫度保持在20℃，接著加入己烷(500ml)和硫酸鎂。過(guò)濾掉固體，在真空中除去溶劑，獲得粗醇。將該物質(zhì)(47g)溶解在含有三苯基鏻氫溴化物(54.9g)的乙腈(500ml)中，回流加熱22小時(shí)。真空下除去溶劑，在室溫，0.1mm壓力下干燥該粗鹽(該物質(zhì)可從四氫呋喃中結(jié)晶，獲得純[(2-甲氧基-6-辛氧基-4-甲基)苯基]甲基-三苯基鏻溴化物)。然后按USP 4894480，實(shí)施例5中描述的，將該鹽轉(zhuǎn)化成全-E-3，7-二甲基-9-[(2-甲氧基-4-甲基-6-辛氧基)苯基]-2，4，6，8-壬四烯酸。
實(shí)施例14制備(E)-2-(2-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)乙烯基)-環(huán)庚烯羧甲醛如方法7所示，將環(huán)庚酮(152g)轉(zhuǎn)化成酯(Org.Syn.Coll.，5198(1973)；232g)，轉(zhuǎn)化成烯醇磷酸酯37(274g)，隨后用二甲基酮酸鋰處理，得到2-甲基-環(huán)庚-1-烯酸乙酯38(119g)。然后將2-甲基-環(huán)庚-1-烯酸乙酯(91g)在四氫呋喃中的溶液加入到二異丙基酰胺鋰的溶液(0.53mol)中，之后用環(huán)檸檬醛39(76g)中止，在用酸處理后獲得內(nèi)酯40(113g)。使40置于四氫呋喃中的叔丁醇鉀中，接著置于過(guò)量的甲基碘中，獲得甲酯41(111g)。用二異丁基鋁氫化物還原上述酯，隨后按實(shí)施例1用二氧化錳氧化，得到醛12(n＝3)(98g)。
實(shí)施例15A制備(2E，4E)-3-甲基-5-(2，6，6-三甲基-環(huán)己-1-烯基乙炔基)-環(huán)戊-1-烯基]-戊-2，4-二烯酸乙酯將(2E，4E)-5-(2-溴-環(huán)戊-1-烯基)-3-甲基-戊-2，4-二烯酸乙酯(1.43g)溶解在5ml苯中。在環(huán)境溫度下依次加入293mg Pd(Ph3P)4，95mg CuI，147mg(Ph)3P和8ml哌啶。通過(guò)滴液漏斗，在1小時(shí)內(nèi)向該混合物中加入已溶解在5ml苯中的2-乙烯基-1，3，3-三甲基-1-環(huán)己烯(745g)。4.5小時(shí)后，加入另外的乙炔(350mg)，繼續(xù)攪拌30分鐘。然后將該混合物倒入碎冰/HCl中，用EtOEt萃取，用水洗滌兩次，在Na2SO4上干燥，并蒸發(fā)至干。經(jīng)中壓色譜(SiO2，己烷/AcOEt＝98/2)，獲得1.478g黃色油狀(2E，4E)-3-甲基-5-(2，6，6-三甲基-環(huán)己-1-烯基乙炔基)-環(huán)戊-1-烯基]-戊-2，4-二烯酸乙酯。
按下面合成預(yù)先必要的(2E，4E)-5-(2-溴-環(huán)戊-1-烯基)-3-甲基-戊-2，4-二烯酸乙酯將2.03g NaH(50％在礦物油中)懸浮在120ml的DMF中，于0℃下加入4-(二乙氧基-氧膦基-3-甲基-丁-2-烯酸乙酯(12.9g)。將混合物在0℃下攪拌15分鐘，在RT下攪拌30分鐘。再冷卻到0℃后，按滴加入溶于11ml DMF中的2-溴-環(huán)戊-1-烯-碳化甲醛(carbaldehyde)(5.72g)，使之在0℃下反應(yīng)10分鐘，在RT下反應(yīng)2小時(shí)。然后將混合物倒入碎冰中，用EtOEt萃取，用飽和氯化鈉溶液洗滌，在Na2SO4上干燥，并蒸發(fā)至干。經(jīng)閃式色譜(flashchromatography)(硅膠，己烷/AcOEt＝97/13)提純殘余物，并從己烷/痕量AcOEt中結(jié)晶，最后得到3.408g純的淡黃色結(jié)晶(2E，4E)-5-(2-溴-環(huán)戊-1-烯基)-3-甲基-戊-2，4-二烯酸乙酯，mp.85-86℃。
預(yù)先必要的2-乙炔基-1，3，3-三甲基-1-環(huán)己烯的合成是按標(biāo)準(zhǔn)方法，通過(guò)向2，2，6-三甲基環(huán)己酮中加入TMS-乙炔的Li衍生物，用Burgess試劑(甲氧基-羰基氨磺酰-三乙基銨氫氧化物，內(nèi)鹽)處理使之脫水，最后用四丁銨氟化物脫甲硅基化。由于其不穩(wěn)定性，必須立即使用。B.制備(2E，4E)-3-甲基-5-[2-(2，6，6-三甲基-環(huán)己-1-烯基乙炔基)-環(huán)戊-1-烯基]-戊-2，4-二烯酸。
將(2E，4E)-3-甲基-5-[2-(2，6，6-三甲基-環(huán)己-1-烯基乙炔基)-環(huán)戊-1-烯基]-戊-2，4-二烯酸乙酯(1.47g)溶解在14ml THF/EtOH＝1/1中。加入3N NaOH水溶液(7.0ml)，使反應(yīng)瓶保持在暗處。在環(huán)境溫度下攪拌16小時(shí)后，將混合物倒入碎冰/HCl中，用EtOEt萃取兩次，用水洗滌，在Na2SO4上干燥，并蒸發(fā)至干。從EtOEt/戊烷中結(jié)晶，獲得1.31g黃色晶體(2E，4E)-3-甲基-5-[2-(2，6，6-三甲基-環(huán)己-1-烯基乙烯基)-環(huán)戊-1-烯基]-戊-2，4-二烯酸，mp.173-174℃。
實(shí)施例16類(lèi)似于實(shí)施例15制備。(2E，4E)-3-甲基-5-[2-(2，6，6-三甲基-環(huán)己-1-烯基乙炔基)-環(huán)庚-1-烯基]-戊-2，4-二烯酸，呈黃色晶體，mp.166-167℃。
實(shí)施例17制備(2E，4E)-3-甲基-5-[2-(2，6，6-三甲基-環(huán)己-1-烯基乙炔基)-苯基]-戊-2，4-二烯酸將229mg(2E，4E)-3-甲基-5-[2-2，6，6-三甲基-環(huán)己-1-烯基乙炔基)-苯基]-戊-2，4-二烯酸乙酯溶解在8ml乙醇中。在加入411mg氫氧化鉀在2.5ml水中的溶液后，使反應(yīng)混合物在50℃下攪拌2小時(shí)。然后將混合物倒入冰/水中，用2N鹽酸酸化，并用乙酸乙酯萃取。用水洗滌有機(jī)相，在硫酸鈉上干燥并蒸發(fā)得到淡黃色晶體，從乙酸乙酯/己烷中再結(jié)晶該晶體，得到93mg(2E，4E)-3-甲基-5-[2-(2，6，6-三甲基-環(huán)己-1-烯基乙炔基)-苯基]-戊-2，4-二烯酸，m.p.194-196℃。
下面制備在該實(shí)施例中使用的起始原料將970mg 2-乙炔基-芐醇溶解在50ml二乙醚中。加入1.9ml三乙胺，接著滴加0.9ml三甲基硅烷氯。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌4小時(shí)，倒入冰/5％碳酸氫鈉水溶液中并用醚萃取。蒸餾經(jīng)干燥蒸發(fā)掉溶劑后的油狀殘余物，獲得1.3g無(wú)色油狀的2-乙炔基芐基三甲基硅烷基醚，b.P.85-89℃/0.8mm。
將無(wú)色油溶解在5ml四氫呋喃中。在-78℃下滴加3.9ml丁基鋰(1.6mol在己烷中)后，使該反應(yīng)混合物在該溫度下攪拌30分鐘。滴加0.59g 2，2，6-三甲基環(huán)己酮在4ml四氫呋喃中的溶液，并使該反應(yīng)混合物在室溫下攪拌5小時(shí)，得到黃色溶液。將該黃色溶液倒入冰水/10％氯化銨水溶液中，用己烷萃取，在硫酸鈉上干燥并蒸發(fā)。黃色油狀殘余物經(jīng)閃式色譜(SiO2，己烷/5％乙酸乙酯)提純，獲得1.7g黃色油。
將黃色油溶解在90ml四氫呋喃中，在室溫下與28.8ml 0.5的氫氧化鉀標(biāo)準(zhǔn)水溶液一起攪拌6小時(shí)。將反應(yīng)混合物倒入冰/水中，用乙醚萃取，用水洗滌，干燥并蒸發(fā)。經(jīng)閃式色譜(SiO2，己烷/乙酸乙酯＝7.3)提純?cè)摎堄辔铮瑥囊宜嵋阴?己烷中結(jié)晶，獲得1.1g白色晶體，m.p.120-121℃。
將白色晶體溶解在10ml四氫呋喃中，隨后用679mg三乙胺和400mg乙酰氯處理。在室溫下攪拌4小時(shí)后，將反應(yīng)混合物倒入冰/1N鹽酸中，用乙醚萃取，在硫酸鈉上干燥并蒸發(fā)。經(jīng)閃式色譜(SiO2，己烷/乙酸乙酯-4∶1)，獲得0.8g無(wú)色油。
將該無(wú)色油溶解在13ml苯中，并加到1.3g Burgess試劑(甲氧基羰基氨磺酰-三乙銨氫氧化物，內(nèi)鹽)在40ml苯中的溶液中。使反應(yīng)混合物在3小時(shí)內(nèi)加熱至60℃。蒸餾掉大部分溶劑后，將殘余物溶解在冰水中并用乙醚萃取。經(jīng)干燥和蒸發(fā)掉溶劑后獲得的殘余物經(jīng)閃式色譜(SiO2，己烷/乙酸乙酯＝9∶1)提純，獲得0.7g淡黃色油。
將該黃色油溶解在18ml乙醇中，在45℃下，用0.78g氫氧化鉀在4ml水中的溶液處理2.5小時(shí)。將反應(yīng)混合物倒入冰/飽和的氯化銨溶液中，用乙醚萃取，干燥并蒸發(fā)。用中壓液相色譜(SiO2，己烷/乙酸乙酯＝9∶1)提純?cè)摎堄辔?，獲得0.46g淡黃色油。將該油溶解在20ml二氯甲烷中，在室溫劇烈攪拌下，用1.6g二氧化錳處理15小時(shí)。過(guò)濾掉二氧化錳，蒸發(fā)濾液，用中壓色譜(SiO2，己烷/2％乙酸乙酯)提純?cè)摎堄辔铮@得黃色油狀22.5mg 2-(2，6，6-三甲基-環(huán)己-1-烯基乙炔基)-苯甲醛，在冷卻下該黃色油固化。
用戊烷洗滌85mg氫化鈉(50％在礦物油中)并懸浮在4ml四氫呋喃中。在0℃下滴加470mg溶于4ml四氫呋喃中的4-(二乙氧基膦?；?-3-甲基-丁-2-烯酸乙酯，使反應(yīng)混合物在室溫下攪拌1小時(shí)。再冷卻至0℃后，滴加入225mg由前一步驟中所得的黃色醛在3ml四氫呋喃中的溶液。使反應(yīng)混合物在室溫下攪拌3小時(shí)，倒入冰/飽和的氯化銨溶液中，用乙醚萃取，用水洗滌，干燥并蒸發(fā)。首先用閃式色譜(SiO2，己烷/5％乙酸乙酯)提純殘余物，然后用中壓液相色譜(SiO2，己烷/2％乙酸乙酯)提純，獲得229mg無(wú)色油狀(2E，4E)-3-甲基-5-[2-(2，6，6-三甲基-環(huán)己-1-烯基乙炔基)苯基]-戊-2，4-二烯酸乙酯。
實(shí)施例18在類(lèi)視黃酸的作用下，將HL-60細(xì)胞(人體骨髓白血病細(xì)胞系)分化為粒細(xì)胞。HL-60細(xì)胞分化為粒細(xì)胞是通過(guò)RARα作為媒介的，這樣提出了使用類(lèi)視黃酸治療白血病的基礎(chǔ)，該實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明本發(fā)明RXR選擇性化合物在它們本身失活的劑量下，能增效全反式視黃酸和具有下式的其它RARα選擇性類(lèi)視黃酸的原分化效果高達(dá)數(shù)量級(jí)大小 (化合物A)測(cè)試化合物轉(zhuǎn)移活化類(lèi)視黃酸受體的能力如下
表1活性(ED50，nM)RARα RXRα全-反式視黃酸 6.741化合物A 3＞10000例4的化合物 ＞1000 1.7HL-60分化類(lèi)視黃酸誘導(dǎo)分化HL-60細(xì)胞是通過(guò)還原NBT(氮藍(lán)四唑)(Nit-roblueterstazolium)而測(cè)量它們的氧化的突發(fā)電位(burstpotent-ial)而測(cè)定的[pick等人，J.Reticuloendothelial Soc.，30581-593(1981)]。
將HL-60細(xì)胞保持在加有10％FCS，2mM L-谷氨酰胺、1mM丙酮酸鈉、1％非主要的氨基酸，50U/ml青霉素和50μg/ml鏈霉素(＝RPMI/FCS)的RPMI 1640介質(zhì)中。發(fā)現(xiàn)該細(xì)胞沒(méi)有支原體。
將30000細(xì)胞/100μl的RPMI/FCS移植入平底微滴井中。同時(shí)加入稀釋在完全培養(yǎng)基中的10μl類(lèi)視黃酸，以獲得最終濃度為10-11-10-6M(將10-2M在乙醇中的儲(chǔ)液保持在-20℃下并避光放置)。3天后，用多道吸移管取出培養(yǎng)基，用100μl NBT溶液(1mg/ml在具有200nM佛波醇肉豆蔻酸鹽乙酸酯(PMA)的PBS中)代替。在37℃下，再培養(yǎng)1小時(shí)后，除去NBT溶液，加入100μl的在0.01N HCl中的10％SDS。采用自動(dòng)化平板讀數(shù)計(jì)在540nm處光度法定量測(cè)定誘導(dǎo)的NBT的量。計(jì)算3個(gè)井的平均值。S.E.M為5-10％。結(jié)果RXR選擇性類(lèi)視黃酸對(duì)HL-60分化的影響作為RARα活化劑與其弱效能相符，實(shí)施例4 RXR選擇性類(lèi)視黃酸作為HL-60分化誘導(dǎo)劑的活性明顯地低于全-反式視黃酸(圖1)。實(shí)際上，實(shí)施例4在與其轉(zhuǎn)移活化特性一致中，甚至在1×10-6M下實(shí)際上是失活的。HL-60細(xì)胞對(duì)類(lèi)視黃酸呈現(xiàn)的敏感性比反式活化系統(tǒng)高出10倍(比較表1，RARα和圖1)。
但是，正如從圖2和3中看到的，實(shí)施例4 RXR選擇性類(lèi)視黃酸在其本身不具活性的濃度下，能增效全-反式視黃酸和化合物A的作用。增效的范圍為3X-10X，即比需要獲得可比較量的HL-60分化的單獨(dú)全-反式視黃酸或化合物A的濃度高出3-10倍。
從獲得的結(jié)果可看出，RXR選擇性配位體對(duì)HL-60分化的影響比其它的高，因此，無(wú)須通過(guò)殘余的RAR活化影響來(lái)解釋。所觀察到的效果多少也更明確優(yōu)先使用RARα配位體(化合物A)而不用較低選擇性的全-反式RA(RAR與RXR比較)。增效結(jié)果也與體外試驗(yàn)數(shù)據(jù)一致，該數(shù)據(jù)表明，RXR與RAR形成雜二聚物，它導(dǎo)致增強(qiáng)在RAR特效促進(jìn)順序上的轉(zhuǎn)錄活性。不清楚的是，為什么為觀察到任何效果需要相當(dāng)高的RXR選擇性類(lèi)視黃酸的濃度(10-7M)。該濃度在RXR轉(zhuǎn)錄活化測(cè)定中要比EC50高出兩個(gè)數(shù)量級(jí)，但還不知道RXR的類(lèi)視黃酸結(jié)合的親和力的改變是否取決于雜二聚物的形成。因此，表中所示的ED50值不能完全代表通過(guò)包含RXR的雜二聚物傳遞的效果。
實(shí)施例19測(cè)試實(shí)施例4的化合物在與全-反式RA相組合時(shí)抑制小鼠B細(xì)胞增殖的能力。本發(fā)明的RXR選擇性配合物增效了全-反式RA對(duì)小鼠B細(xì)胞增殖的抑制活性。原料和方法類(lèi)視黃酸在該研究中所使用的類(lèi)視黃酸的結(jié)合和轉(zhuǎn)移活化特性示于下列表中表2RARα結(jié)合 RARα活化 RXRα結(jié)合RXRα活化類(lèi)視黃酸 IC50(nM) ED50(nM) IC50(nM)ED50(nM)全-反式RA 14 6.7＞10000 41例4的化合物 ＞10000＞10000921.7細(xì)胞測(cè)定將小鼠脾的單個(gè)細(xì)胞的懸浮液安置在平底96孔微滴盤(pán)中，每孔0.2ml在加有10％胎牛血清，HEPES，抗菌素和50μM 2-巰基乙醇的IMDM中的2×105/ml細(xì)胞懸浮液。加入50μg/ml的特異B細(xì)胞的促細(xì)胞分裂劑E.coli脂多糖(DIFCO)(LPS)。將培養(yǎng)基于37℃下，在增濕的氣氛下和5％CO2中保溫。
首先將待測(cè)試的類(lèi)視黃酸以10nM-10μM一式三份滴定，并在整個(gè)培養(yǎng)周期中保存。接著進(jìn)一步滴定，以達(dá)到IC50值。將圓孢A(Cyclosporin A)(Sandoz AG)用作參考化合物(從1nM-1μM)。
培養(yǎng)2、3和4天后，將細(xì)胞用[3H]胸苷加以脈沖，4小時(shí)1μCi/孔。然后將培養(yǎng)基收集在玻璃纖維過(guò)濾器中，并將結(jié)合到DNA的放射性在β-液體閃爍計(jì)數(shù)器(Betaplate，Wallac Oy，Turku，F(xiàn)in-land)中測(cè)量。
將結(jié)果以未處理的培養(yǎng)基的應(yīng)答％來(lái)表示。在培養(yǎng)24、48和72小時(shí)后，按結(jié)合的3H胸苷測(cè)定促細(xì)胞分裂劑誘導(dǎo)的增殖。在培養(yǎng)期開(kāi)始時(shí)，向培養(yǎng)基中加入類(lèi)視黃酸。結(jié)果1、RXR選擇性配位體對(duì)小鼠B細(xì)胞增殖的影響首先測(cè)試實(shí)施例4的RXR選擇性配位體的直接干擾用LPS誘導(dǎo)的小鼠B細(xì)胞的增殖。結(jié)果示于圖4中，表明實(shí)施例4類(lèi)視黃酸具有抑制性，其IC50為100nM。全-反式RA(IC50＝1nM)的能力為1/100。在第4天時(shí)，低劑量(≈IC50，在3天時(shí))的實(shí)施例4類(lèi)視黃酸稍微增強(qiáng)了應(yīng)答，這與該體系中全部類(lèi)視黃酸活性的結(jié)果一致。2、RXR選擇性配位體對(duì)小鼠B細(xì)胞增殖的增效全-反式視黃酸的抑制效果全-反式RA抑制LPS誘導(dǎo)的小鼠B細(xì)胞增殖的IC50為1nM。10-30nM時(shí)獲得最大抑制，并且從不超出75-80％。將本發(fā)明的實(shí)施例4 RXR選擇性配位體配入到LPS刺激的置于1nM全-反式RA的培養(yǎng)基中，置于10nM全-反式RA中的培養(yǎng)基是平行的。在各種情況下，本身幾乎沒(méi)有抑制性的本發(fā)明實(shí)施例4 RXR配位體的濃度誘導(dǎo)增效了1nM RA到10nM RA的觀察到的水平。在培養(yǎng)的第2和3天獲得了類(lèi)似的結(jié)果。第3天的數(shù)據(jù)示于圖5中。
由于實(shí)施例4化合物的活性，可以加和或增強(qiáng)效果。但是，在培養(yǎng)基中后一點(diǎn)所獲得的結(jié)果表明效果不是簡(jiǎn)單的加和，而是增強(qiáng)。
在第4天時(shí)，1nM RA的抑制沒(méi)有任何增加，實(shí)際上，引起了應(yīng)答的稍微增強(qiáng)，而10nM RA的抑制僅為約30％。該現(xiàn)象的原因尚不清楚，但化合物的半衰期可能在其中起了作用。RXR選擇性配位體也具有類(lèi)似的影響(參見(jiàn)圖4的曲線)。但是，1nM RA和本發(fā)明實(shí)施例4 RXR配位體的結(jié)合仍然產(chǎn)物抑制，它相當(dāng)于由10nM RA引起的量級(jí)。結(jié)果示于圖6。
結(jié)果表明在其中類(lèi)視黃酸的作用是通過(guò)RARα傳遞的作用體系中，RXR選擇性類(lèi)視黃酸(實(shí)施例4)增效了全-反式RA的作用。獲得的增效超過(guò)RXR配位體在全-反式RA中的10-30倍。增效量大約為10倍用1nM RA與本發(fā)明RXR配位體組合時(shí)可獲得通常由10nMRA誘導(dǎo)的抑制量。
實(shí)施例20下面采用常規(guī)抗痤瘡活性測(cè)試法的測(cè)定表明本發(fā)明化合物的抗痤瘡活性。(1)對(duì)人皮脂的抗增生活性方法通過(guò)酶和機(jī)械方法的結(jié)合，從成年人皮脂腺中分離出皮脂細(xì)胞(Doran等人，1991)。將細(xì)胞培養(yǎng)在生長(zhǎng)停止的3T3小鼠成纖維細(xì)胞層上的含10％胎牛血清和4μg/ml地塞米松的Iscove的培養(yǎng)基中。將細(xì)胞涂覆在沒(méi)有測(cè)試化合物的培養(yǎng)基中。然后在涂覆開(kāi)始后24-48小時(shí)給以新鮮培養(yǎng)基中的測(cè)試化合物。將含有測(cè)試化合物的新鮮培養(yǎng)基每48小時(shí)提供給培養(yǎng)基。在收集的時(shí)間里，用PBS中的0.03％EDTA沖洗培養(yǎng)基，僅除去3T3成纖維細(xì)胞，接著在0.05％胰蛋白酶/0.03％EDTA中培養(yǎng)。將細(xì)胞懸浮并劇烈混合，以制備單一細(xì)胞懸浮體并用血球計(jì)計(jì)數(shù)。
將化合物的儲(chǔ)液制成在100％DMSO中的10-2M溶液并貯存在-20℃下暗處。使溶液中的化合物升至室溫，經(jīng)稀釋直接用于完全培養(yǎng)基中以達(dá)到合適的濃度。
以10-6和10-7M的化合物體外測(cè)試皮脂細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的抑制。
對(duì)實(shí)施例12、實(shí)施例2和實(shí)施例4的化合物測(cè)試接觸藥10天后體外第一通道人體皮脂細(xì)胞的增殖的抑制的影響。結(jié)果以抑制50％(IC50)生長(zhǎng)所必需的濃度(nM)表示。
表3體外人體皮脂細(xì)胞增殖的抑制化合物 IC50(nM)實(shí)施例4＞1000(測(cè)試兩次)實(shí)施例2 100和10000(測(cè)試兩次)實(shí)施例12 100(測(cè)試兩次)13-順式-視黃酸 1009-順式-視黃酸100實(shí)施例4化合物表示差的劑量應(yīng)答，其生長(zhǎng)抑制達(dá)30-40％。盡管這比13-順式視黃酸弱得多但仍顯示體外的生物活性。實(shí)施例2化合物盡管在該試驗(yàn)中1000nM劑量時(shí)的生長(zhǎng)抑制僅為70％，但是對(duì)于第一次試驗(yàn)來(lái)說(shuō)，IC50為100nM。(2)Rhino小鼠小囊降低活性在本實(shí)驗(yàn)中檢測(cè)化合物降低預(yù)先存在的小囊，角質(zhì)化的毛囊皮脂腺結(jié)構(gòu)，類(lèi)似于人體粉刺(Mezich等人，1985)大小的能力。方法使用6組從Jackson實(shí)驗(yàn)室獲得的6-8周齡期的雌性Rhino小鼠(hrrhhrrh)。將化合物溶解在100％丙酮中，于4℃、氮?dú)庀沦A存用于持久的實(shí)驗(yàn)。每天將測(cè)試化合物提供給小鼠的背部5天，持續(xù)3周。在最后給劑量的那一天，通過(guò)CO2吸入殺死小鼠。從背部切下皮片，并將其在2M溴化鈉中于室溫下培養(yǎng)2-3小時(shí)。然后從真皮上分離出表皮。
表皮通過(guò)70％、80％、95％、100％乙醇和二甲苯脫水。將樣品保持在上述溶液的每一份中2小時(shí)。從二甲苯中取出皮膚樣品，并置于玻璃顯微鏡載片上。采用Ultimage像分析軟件進(jìn)行像分析，用以確定小囊的平均直徑和面積。每個(gè)試樣約檢測(cè)5個(gè)區(qū)域，每個(gè)待測(cè)小鼠平均150個(gè)小囊。結(jié)果在rhino小鼠中測(cè)試本發(fā)明的幾個(gè)化合物(實(shí)施例12、實(shí)施例2和實(shí)施例4)。
向小鼠局部給藥劑量為100μl的在丙酮中的13-順式視黃酸，9-順式視黃酸，和實(shí)施例12、實(shí)施例2和實(shí)施例4的化合物。結(jié)果示于如下表4中
表4
ns＝由對(duì)照物沒(méi)有統(tǒng)計(jì)意義，所有其它p值＜0.05。注釋在該實(shí)驗(yàn)期間，沒(méi)有觀察到一些副作用。給藥100μg 13-順式視黃酸的動(dòng)物在第5天顯示出表皮脫落和紅斑。給藥9-順式-視黃酸的動(dòng)物在相同的劑量下，在較早的時(shí)間里顯示出這些效果。
在第7天給藥時(shí)，對(duì)于100μg的實(shí)施例12觀察到紅斑。在相同的天數(shù)里，在給藥100μg的實(shí)施例2的動(dòng)物上觀察到一些紅斑。但是，該紅斑沒(méi)有實(shí)施例2強(qiáng)。在這同一時(shí)點(diǎn)，可比較劑量的實(shí)施例4沒(méi)有顯示出可以看到的紅斑。
在第14天給藥時(shí)，在所有給藥100μg的實(shí)施例12的動(dòng)物上觀察到表皮脫落，這在該日之前未觀察到。如果將這些化合物在100μg濃度下對(duì)表皮脫落/紅斑從最嚴(yán)重到最不嚴(yán)重排序的話，則順序?yàn)?-順式-RA，13-順式-RA，實(shí)施例12，實(shí)施例2和實(shí)施例4。
因此，本發(fā)明的化合物與9-順式-RA、13-順式-RA比較，產(chǎn)生降低的刺激作用。(3)在體內(nèi)化合物對(duì)金色敘利亞大田鼠(Golden Syrian Hemster)皮脂腺大小的影響方法向Charles River金色敘利亞雄性大田鼠給藥在丙酮中的所需劑量。將化合物在避光的4℃下貯存，每周制備新溶液。
每天向大田鼠給藥達(dá)5天，休息2天，再給藥5天直到達(dá)20次劑量。溶液的體積為50ml/耳。
大田鼠通過(guò)CO2吸入殺死，切去耳朵用于組織測(cè)量。切去一個(gè)耳朵并從余下的一個(gè)耳朵上分離出前側(cè)表面。從耳端的5mm處移出2mm的穿孔物并在溶于100％丙二醇中的0.1％蘇丹黑B(Sudan Bla-ck B)中染色過(guò)夜。脫色后，用Donsanto像分析系統(tǒng)定量皮脂腺的大小。
數(shù)據(jù)以每劑80-120皮脂腺的平均面積，對(duì)照(溶劑處理的)切片的百分率表示。
表54周局部劑量的實(shí)施例4化合物和13-順式-視黃酸對(duì)大田鼠耳皮脂腺大小的影響
ns＝從對(duì)照物中沒(méi)有統(tǒng)計(jì)意義。所有其它有意義的值是從賦形劑對(duì)照物中得出的。參考文獻(xiàn)Doran等人，“Characterization of hrman sebeceous cellin vitro.，J.Invest.Dermatol.，96341-348(1991)。
Mezick等人，“Topical and systemic effects of retinoi-ds on horn-filled utriculus size in the rhino mouse.A mod-el to quantify‘a(chǎn)ntikeratinizing’effects of retinoids.”，J.Invest.Dermatol，83110-113(1985)。
實(shí)施例21對(duì)實(shí)施例6的化合物測(cè)試其與具有RARα活性的類(lèi)視黃酸，下面所示的全E-3，7-二甲基-9-[(2-甲氧基-4-甲基-6-辛氧基)苯基]-2，4，6，8-壬四烯酸(化合物B)，組合時(shí)抑制人體胸癌細(xì)胞系的能力 化合物B結(jié)果表明本發(fā)明的RXR選擇性配位體增效了化合物B的硬性腫瘤抑制活性。1、合成化合物B按下列步驟制備化合物B 化合物B用甲基碘(100ml)和碳酸鉀(124.2g)處理2，6-二羥基-4-甲基-苯甲酸1在丙酮中的溶液(50.4g，750ml)，回流加熱18小時(shí)。然后將混合物冷至室溫，過(guò)濾掉固體。濃縮溶液，獲得粗產(chǎn)物，將粗產(chǎn)物溶解在乙酸乙酯中，用氫氧化鈉水溶液(1N，冷的)洗滌。在真空中除去溶劑，獲得2，6-二甲氧基-4-甲基-苯甲酸甲酯2(54g)。將該物質(zhì)(52.5g)溶解在已冷至-70℃的二氯甲烷(1000ml)中，并用三氯化硼在相同溶劑中的溶液(29.3g/100ml；180ml)處理。然后將該混合物加熱至室溫并再攪拌45分鐘，然后倒入冰中。分離出有機(jī)層，用較多的水洗滌，干燥(硫酸鎂)，過(guò)濾并濃縮。然后將殘余物采用Waters制備500色譜法(7％乙酸乙酯/己烷洗脫液)通過(guò)高性能制備液體色譜(HPLC)提純，獲得純的固體2-羥基-6-甲氧基-4-甲基苯甲酸甲酯3(28.3g)。用1-辛基碘(34.2g)處理該物質(zhì)(35g)在含有碳酸鉀(27.1g)的甲乙基酮(700ml)中的溶液，并在回流下加熱20小時(shí)。冷卻反應(yīng)混合物，過(guò)濾掉固體并濃縮濾液，然后再溶解在己烷和乙酸乙酯的混合物中。隨后用堿水溶液(1N，氫氧化鈉)。水洗滌該溶液，干燥(硫酸鎂)并濃縮至干。如上所述，經(jīng)HPLC提純，獲得純的2-甲氧基-6-辛氧基-4-甲基-苯甲酸甲酯4(51.8g)。將該物質(zhì)(51.8g)在甲苯(500ml)中的溶液冷卻至-60℃，用二異丁基鋁氫化物的溶液(25％在己烷中；281ml)處理，并加熱到室溫。然后用冷卻的甲醇水溶液(100ml；1∶1)小心地處理該反應(yīng)混合物，以使溫度保持在20℃，接著加入己烷(500ml)和硫酸鎂。之后，過(guò)濾掉固體，在真空中除去溶劑，得到粗醇5。將該物質(zhì)(47g)溶解在含有三苯基 氫溴化物(54.9g)的乙腈(500ml)中，并回流加熱22小時(shí)。然后，在真空下除去溶劑，在室溫，0.1mmHg壓力下干燥粗鹽6(該物質(zhì)可從四氫呋喃中結(jié)晶，獲得純的[(2-甲氧基-6-辛氧基-4-甲基)苯基]甲基三苯基溴化物)。之后，按USP 4894480(實(shí)施例5)中描述的將該鹽6轉(zhuǎn)化成化合物B，全-E-3，7-二甲基-9-[(2-甲氧基-4-甲基-6-辛氧基)苯基]-2，4，6，8-壬四烯酸。2、試驗(yàn)如上所述，對(duì)化合物B和實(shí)施例6進(jìn)行類(lèi)視黃酸受體結(jié)合和轉(zhuǎn)移活性的測(cè)試。結(jié)果如下表6
由ATCC[Accession No.HTB 133]獲得的胸癌細(xì)胞系，T47-D，在加有10 FBS，10μg/ml胰島素和13ng/ml慶大霉素的RPMI 1640介質(zhì)中生長(zhǎng)，并在37℃，4.5％CO2和95.5％濕化空氣下培養(yǎng)。在達(dá)到70-80％融合時(shí)收集細(xì)胞并沉淀。將該細(xì)胞再懸浮在培養(yǎng)基中，并在七天測(cè)定期間允許線性生長(zhǎng)的密度下移植(150μ/l孔)到96-孔板(Coring)中(即，移入的T47-D為4×103細(xì)胞/l孔)。將板放置在37℃的保溫箱中過(guò)夜。
在移植后18-24小時(shí)，加入藥物(在100％DMSO中的1mM儲(chǔ)備液)。在96-孔微滴板中制備藥物組合物，并手工加入到測(cè)定板中。在加入藥物后3-7天內(nèi)進(jìn)行MTT測(cè)定。MTT測(cè)定是基于四唑鎓的測(cè)量該方法測(cè)量培養(yǎng)基中的細(xì)胞生活力。向測(cè)定板(500μl/孔)中加入MTT(3-[4，5-二甲基噻唑-2-基-2，5-二苯基四唑鎓溴化物)儲(chǔ)液(5mg/ml在1×PBS中)，并在37℃下培養(yǎng)2.5小時(shí)。
通過(guò)抽吸除去液體，加入50μl 95％的乙醇，搖動(dòng)(Mini-Orb-ital Shaker，Bellco)板15分鐘，以溶解甲產(chǎn)物。采用自動(dòng)板讀數(shù)計(jì)(Microplate EL 320 Reader，Bio-Tek Instruments)測(cè)定每孔中的任選密度，測(cè)試的波長(zhǎng)為570nm，參考波長(zhǎng)為660nm。按下列方程確定由各種濃度的化合物B與恒定濃度的實(shí)施例6的化合物組合而引起的細(xì)胞量生長(zhǎng)的抑制。 結(jié)果圖解地于圖7中。結(jié)果表明本發(fā)明的RXR選擇性化合物在抑制硬性腫瘤細(xì)胞系生長(zhǎng)中增效具有RARα活性的類(lèi)視黃酸的活性。
實(shí)施例A含20mg活性物質(zhì)的硬明膠膠囊組合物每明膠包含式I 20mgRARα類(lèi)視黃酸20mg明膠霜(Gelafine Bloom)30 70.0mg麥芽糊精MD 05108.0mgdl-α-生育酚 2.0mg抗壞血酸鈉 10.0mg微晶纖維素 48.0mg硬脂酸鎂 2.0mg(膠囊內(nèi)含物重) 280.0mg步驟
在明膠，麥芽糊粗，dl-α-生育酚和抗壞血酸鈉的溶液中濕磨活性物質(zhì)。
噴霧干燥濕磨的懸浮液。
將噴霧干燥的粉末與微結(jié)晶纖維素和硬脂酸鎂混合。
將每280mg的該混合物裝入合適大小和顏色的硬明膠膠囊中。


圖1用全-反式視黃酸(RA)，另一種RARα選擇性類(lèi)視黃酸(化合物A，本文)，和RXR選擇性類(lèi)視黃酸(實(shí)施例4，本文)誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞分化。OD540與分化折HL-60細(xì)胞數(shù)成正比。圖2用全-反式視黃酸(RA)和實(shí)施例4的組合物誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞的分化。圖3用化合物A和實(shí)施例4的組合物誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞的分化。圖4胸苷通過(guò)置于全-反式RA或?qū)嵤├?中的B細(xì)胞培養(yǎng)基而摻入，該值與未處理的培養(yǎng)基有關(guān)。圖5在培養(yǎng)3天后，通過(guò)全-反式RA和實(shí)施例4的RXR選擇性類(lèi)視黃酸，單獨(dú)或組合以抑制LPS誘導(dǎo)的B細(xì)胞增殖。圖6在培養(yǎng)4天后，通過(guò)全-反式RA和實(shí)施例4的RXR選擇性類(lèi)視黃酸，單獨(dú)或組合以抑制LPS誘導(dǎo)的B細(xì)胞增殖。圖7在胸癌細(xì)胞系中，具有RARα活性的化合物(化合物B)和RXR選擇性化合物(實(shí)施例6)的增強(qiáng)抗增殖活性。
權(quán)利要求
1.式I的化合物和可藥用鹽、酯和酰胺， 式中C7-C8鍵為雙鍵或叁鍵；當(dāng)C7-C8鍵為雙鍵時(shí)，R1和R2獨(dú)立地為鹵互或低級(jí)烷基，或當(dāng)C7-C8鍵為叁鍵時(shí)，R1和R2獨(dú)立地為低級(jí)烷基，或R1和R2一起為C3-13亞烷基，其中一個(gè)碳原子可被選自硫、氧和氮的雜原子取代；或R1和R2與和它們相接的碳原子一起是具有5-6個(gè)碳原子的芳環(huán)或具有5-6個(gè)原子的雜芳環(huán)，其中R1或R2的一個(gè)原子為選自氧、氮和硫的雜原子，且R1和R2和剩余原子都是碳。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中C7-C8鍵是雙鍵。
3.權(quán)利要求2的化合物，其中R1和R2一起為C3-6亞烷基，其中一個(gè)碳原子可被選自硫、氧和氮的雜原子取代。
4.權(quán)利要求3的化合物，其中R1和R2一起是C3-6亞烷基。
5.權(quán)利要求4的化合物，(2E，4E)-3-甲基-5-(2-((E)-2-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)乙烯基)-1-環(huán)戊烯-1-基)-2，4-戊二烯酸，(2E，4E)-3-甲基-5-(2-(2-((E)-2-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)乙烯基)-1-環(huán)己烯)-1-基)-2，4-戊二烯酸，(2E，4E)-3-甲基-5-(2-((E)-2-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)乙烯基)-1-環(huán)庚烯-1-基)-2，4-戊二烯酸，(2E，4E)-3-甲基-5-(2-((E)-2-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)乙烯基)-1-環(huán)辛烯-1-基)-2，4-戊二烯酸。
6.如權(quán)利要求2的化合物，其中R1和R2與和它們相接的碳原子一起是具有5-6個(gè)碳原子的芳環(huán)或具有5-6個(gè)原子的雜芳環(huán)，其中R1或R2的一個(gè)原子是選自氧、氮和硫的雜原子，并且R1和R2的剩余原子都是碳。
7.權(quán)利要求6的化合物，(2E，4E)-3-甲基-5-(2-(2-((E)-2-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)乙烯基)-1-苯基)-2，4-戊二烯酸，(2E，4E)-3-甲基-5-(2-((E)-2-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)乙烯基)-3-噻吩基)-2，4-戊二烯酸，(2E，4E)-3-甲基-5-(3-((E)-2-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)乙烯基)-2-噻吩基)-2，4-戊二烯酸和(2E，4E)-3-甲基-5-(4-((E)-2-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)乙烯基)-3-噻吩基)-2，4-戊二烯酸。
8.權(quán)利要求2的化合物，其中R1和R2為低級(jí)烷基，它們可相同或不同。
9.權(quán)利要求8的化合物，(2E，4E，6Z，8E)-3，6，7-三甲基-9-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)-2，4，6，8-壬四烯酸。
10.權(quán)利要求2的化合物，其中R1和R2中的一個(gè)是低級(jí)烷基，而另一個(gè)是鹵素。
11.權(quán)利要求10的化合物，(全-E)-6-溴-3，7-二甲基-9-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)-2，4，6，8-壬四烯酸，(全-E)-6-氯-3，7-二甲基-9-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)-2，4，6，8-壬四烯酸，(全-E)-6-碘-3，7-二甲基-9-(2，6，6-三甲基-1-環(huán)己烯-1-基)-2，4，6，8-壬四烯酸。
12.權(quán)利要求1的化合物，其中C7-C8鍵為叁鍵。
13.權(quán)利要求12的化合物，其中R1和R2一起為C3-13亞烷基，其中的一個(gè)碳原子可被選自硫、氧和氮的雜原子取代，或R1和R2與和它們相接的碳原子一起是具有5-6個(gè)碳原子的芳雜或具有5-6個(gè)原子的雜芳環(huán)，其中R1或R2的一個(gè)原子為選自氧、氮和硫的雜原子并且R1和R2的剩余原子都是碳。
14.權(quán)利要求13的化合物，其中R1和R2一起為C3-6亞烷基。
15.權(quán)利要求14的化合物，(2E，4E)-3-甲基-5-[2-(2，6，6-三甲基-環(huán)己-1-烯基乙炔基)-環(huán)戊-1-烯基]-戊-2，4-二烯酸和(2E，4E)-3-甲基-5-[2-(2，6，6-三甲基-環(huán)己-1-烯基乙炔基)-環(huán)庚-1-烯基]-戊-2，4-二烯酸。
16.權(quán)利要求12的化合物，其中R1和R2與和它們相接的碳原子一起是具有5-6個(gè)碳原子的芳環(huán)或具有5-6個(gè)原子的雜芳環(huán)，其中R1或R2的一個(gè)原子為選自氧、氮和硫的雜原子并且R1和R2的剩余原子為碳。
17.權(quán)利要求16的化合物，其中所述的環(huán)選自噻吩、苯和吡啶。
18.權(quán)利要求17的化合物，(2E，4E)-3-甲基-5-[2-(2，6，6-三甲基-環(huán)己-1-烯基乙炔基)-苯基]-戊-2，4-二烯酸。
19.下式的一種化合物
20.藥物組合物，它包含權(quán)利要求1的式I化合物或其可藥用鹽，酯或酰胺，和可藥用惰性載體。
21.權(quán)利要求21的組合物，它用于局部給藥，其中在所述組合物中的所述化合物的含量為組合物總重量的約0.05-約3％。
22.以單位劑量形式用于口服給藥的組合物，它包含具有RARα活性的類(lèi)視黃酸的第一化合物；權(quán)利要求1中的式I的第二化合物或其可藥用鹽、酯或酰胺，其中在所述單位劑形中的第一化合物的含量為10-50mg，在所述單位劑形中的所述第二化合物的含量為所述第一化合物量的1-10倍。
23.如權(quán)利要求1中要求的化合物可用于藥劑，尤其用于治療硬性腫瘤，白血病或痤瘡。
24.按權(quán)利要求1中要求的化合物的用途，它用于制造用于治療硬性腫瘤，白血病或痤瘡的藥物組合物。
25.如本文描述的本發(fā)明，尤其涉及實(shí)施例。
全文摘要
式I的新型壬四烯酸衍生物，其中虛線鍵是任選的，R
文檔編號(hào)C07C63/00GK1136557SQ9610202
公開(kāi)日1996年11月27日 申請(qǐng)日期1996年2月15日 優(yōu)先權(quán)日1995年2月24日
發(fā)明者邁克爾·克勞斯, 艾倫·J·洛維, 彼得·莫爾, 邁克爾·羅森伯格 申請(qǐng)人:霍夫曼-拉羅奇有限公司