專利名稱：藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及含有以晶狀體(lens)抗原或能夠表達(dá)所述抗原之微生物作為活性成分的藥物組合物。更確切地說，本發(fā)明涉及抗晶狀體蛋白抗體增加之抑制劑。本發(fā)明進(jìn)一步涉及用于治療、預(yù)防或阻止白內(nèi)障的藥劑。
白內(nèi)障是一種與各種因素引起晶狀體變得不透明而致視力逐漸喪失有關(guān)的嚴(yán)重疾病。它表現(xiàn)出因晶狀體混濁所引起的視力障礙癥狀。
白內(nèi)障目前通過施用各種藥物來治療。但是，這類藥物的應(yīng)用并非完全令人滿意，其部分原因是因?yàn)檫€沒有徹底闡明白內(nèi)障的病因?qū)W。所以，白內(nèi)障的治療在當(dāng)今最終依靠手術(shù)療法。所述的外科手術(shù)治療包括將晶狀體核和晶狀體皮質(zhì)從晶狀體膜內(nèi)摘除，或者從眼睛中剜除整個(gè)混濁晶狀體。然而，外科手術(shù)治療通常產(chǎn)生并發(fā)癥，而且這些并發(fā)癥是病人難以承受的，因?yàn)榧词鼓壳凹夹g(shù)水平的外科技術(shù)進(jìn)行手術(shù)也不可避免地要切開和縫合晶狀體皮質(zhì)。
總之，白內(nèi)障的病因?qū)W還未得到完全地闡述，而其用于治療的藥劑又不令人滿意。外科手術(shù)治療對病人會伴隨產(chǎn)生極大的負(fù)擔(dān)。
因此，本發(fā)明的目的是提供用于治療白內(nèi)障等的新藥物組合物。
根據(jù)本發(fā)明現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，施用能誘導(dǎo)晶狀體細(xì)胞損傷性免疫反應(yīng)的晶狀體抗體(這類抗原在下文有時(shí)被簡稱為本發(fā)明的晶狀體抗原)引起血漿中抗晶狀體蛋白抗體增加的抑制作用。如下文所述的實(shí)施例1和2所示，白內(nèi)障是由于晶狀體蛋白質(zhì)所致自身免疾產(chǎn)生晶狀體上皮細(xì)胞損害引起的。因此，本發(fā)明的晶狀體蛋白質(zhì)或能夠表達(dá)所述抗體的微生物適用于治療、預(yù)防或阻止白內(nèi)障發(fā)生。
因此，本發(fā)明提供了含有以能夠誘導(dǎo)晶狀體細(xì)胞損傷性免疫反應(yīng)之晶狀體抗原作為活性成分的藥物組合物；確切地說，提供了抗晶狀體蛋白質(zhì)抗體增加的抑制劑。更具體地說，本發(fā)明提供了包括含有具有序列表中SEQ IDNO1所描述的2-6號氨基酸之氨基酸序列或序列表中SEQ IDNO8所描述的162-166號氨基酸之氨基酸序列的表位的晶狀體抗體之藥物組合物。具體地說，所提供的藥物組合物中晶狀體抗原是晶狀體晶狀蛋白或晶狀體膜肽。本發(fā)明的晶狀體膜肽包括存在于晶狀體膜中或膜上的所有肽，并且包括構(gòu)成晶狀體膜蛋白的肽或存在于晶狀體膜中的受體。
本發(fā)明還進(jìn)一步提供了以動物晶狀體勻漿作為活性成分的藥物組合物。
本發(fā)明還提供了含有以能夠表達(dá)誘導(dǎo)晶狀體細(xì)胞損害性免疫反應(yīng)之晶狀體抗原的微生物作為活性成分的藥物組合物；具體地說，提供了抗晶狀體蛋白質(zhì)抗體增加的抑制劑，更確切地說，提供了含有適于腸道施用形式之所述活性成分的藥物組合物。
本發(fā)明還提供了用于治療、預(yù)防和阻止白內(nèi)障發(fā)生的上述藥物組合物。
本發(fā)明還提供了抑制抗晶狀體蛋白抗體增加的方法，包括施用選自由誘導(dǎo)晶狀體細(xì)胞損傷性免疫反應(yīng)之晶狀體抗原和能夠表達(dá)誘導(dǎo)晶狀體細(xì)胞損傷性免疫反應(yīng)之晶狀體抗原的微生物組成的組的活性成分。
本發(fā)明還提供了將選自由誘導(dǎo)晶狀體細(xì)胞損傷免疫反應(yīng)之晶狀體抗原和能夠表達(dá)誘導(dǎo)晶狀體細(xì)胞損傷性免疫反應(yīng)之晶狀體抗原的微生物組成的組的活性成分用于制備抗晶狀體蛋白質(zhì)抗體增加的抑制劑。


圖1(A)和1(B)為顯示用βH晶狀蛋白對小鼠進(jìn)行初始免疫后的第5周之晶狀體上皮細(xì)胞的光學(xué)顯微鏡照片。
圖2是表示用ELISA法測得的初始免疫后第5周小鼠血清(被稀釋10,000倍)中的抗βH-晶體蛋白抗體滴度的圖示。
圖3是表示用ELISA法測得從免疫前的26天至初次免疫的當(dāng)天口服晶狀體勻漿的小鼠在初次免疫后的第2、3、4或5周血清(稀釋10,000倍)中的抗β-晶狀蛋白抗體滴度的圖示。
圖4是表示ELISA法測得從免疫前的26天至初次免疫后的34天口服晶狀體勻漿的小鼠在初次免疫后的第2、3、4或5周血清(稀釋10,000倍)中的抗β-晶狀蛋白抗體滴度的圖示。
圖5是表示用ELISA法測得從初次免疫的當(dāng)天至初次免疫后的34天口服晶狀體勻漿的小鼠在初次免疫后的第2、3、4或5周血清(稀釋10,000倍)中的抗β-晶狀蛋白抗體滴度的圖示。
在本發(fā)明中，晶狀體抗原是指晶狀體中的抗原物質(zhì)或與所述抗原物質(zhì)具有相同抗原決定簇(表位)的物質(zhì)。其實(shí)例包括存在于晶狀體組織中的蛋白質(zhì)，如晶狀體晶狀蛋白(如α、β和γ晶狀蛋白)、晶狀體膜蛋白[如主要膜內(nèi)在蛋白(MIP)和表皮上皮蛋白(EEP)]和晶狀體膜上受體的組成肽。它們可以是天然存在的，或者是合成的。天然存在的物質(zhì)可以是分離的，或是含有所述分離物的物質(zhì)。這類含有分離物的物質(zhì)包括例如晶狀體勻漿和晶狀體上皮細(xì)胞勻漿。
天然存在的晶狀體抗原不限于衍生物方面，但可以是衍生于哺乳動物(如人、牛、馬、豬和羊)或能夠表達(dá)晶狀體抗原的微生物。
晶狀體晶狀蛋白是能誘導(dǎo)晶狀體細(xì)胞損傷性免疫反應(yīng)的典型晶狀體抗原。在用晶狀蛋白進(jìn)行免疫前和/或后給哺乳動物施用本發(fā)明的晶狀體抗原導(dǎo)致免疫耐受，后者能夠抑制血清中抗晶狀體蛋白質(zhì)抗體滴度的升高。在下面的實(shí)驗(yàn)性實(shí)施例7中詳細(xì)地描述了抑制作用。
本發(fā)明的晶狀體抗原的表位并沒有特別的限制，只要它具有提供產(chǎn)生晶狀體細(xì)胞損傷性抗體之免疫原性的氨基酸序列。具體的例子包括序列表中SEQID NO1所描述的氨基酸序列(2-6位氨基酸)和序列表中SEQID NO8所描述的氨基酸序列(162-166位氨基酸)。具有這類氨基酸序列的肽包括來源于晶狀體的人β-晶狀蛋白和大腸桿菌、沙門氏桿菌及酵母的拓?fù)洚悩?gòu)酶、大麥條紋鑲嵌型病毒的17KD蛋白、流感病毒的HF-1蛋白和非晶狀體來源的其它物質(zhì)。表位的鑒定在下文的實(shí)驗(yàn)性實(shí)施例3和4中有詳細(xì)描述。
在本發(fā)明中，術(shù)語“微生物”是包括病毒在內(nèi)的廣義微生物。具體的例子包括原核細(xì)胞(如細(xì)菌和放線菌)和真菌(如絲狀真菌、酵母、粘液菌、擔(dān)子菌和接合菌)、一些藻類、原生動物、病毒等。這些不僅包括野生的，而且包括用已知的重組技術(shù)人工進(jìn)行構(gòu)建的。其典型的例子包括感染性微生物，如細(xì)菌(如腦膜炎雙球菌、霍亂弧菌和大腸桿菌)和病毒(如EB病毒和巨細(xì)胞病毒)，因?yàn)橛善浔磉_(dá)的蛋白具有與人晶體蛋白相同的表位。
所述微生物可以是減毒的，并用于本發(fā)明。用本身已知的方法可以進(jìn)行微生物減毒，例如加熱和福爾馬林處理。
利用基因重組技術(shù)人工獲得的微生物包括用含有編碼本發(fā)明晶狀體抗原肽之DNA的重組載體轉(zhuǎn)化的宿主微生物。宿主微生物可以是例如細(xì)菌(如大腸桿菌、芽胞桿菌屬微生物和乳酸菌)或酵母。摻入了所述DNA的重組載體不受任何特別的限制，只要其能在上述各種宿主中復(fù)制或自我繁殖，并在所述宿主中表達(dá)所摻入的DNA。這類例子包括質(zhì)粒DNA和噬菌體DNA。具體的例子包括pUC18、pUC19、pSP64等在E.coli表達(dá)的質(zhì)粒載體；在枯草桿菌中表達(dá)的pPL608、pAMα1等和在酵母中表達(dá)的YEp51、pAAH5、pYE4等。作為噬菌體表達(dá)載體，其例證有λgt11、ZAPII等。
本發(fā)明的藥物組合物可以是例如抑制抗晶狀體蛋白抗體增加的抑制劑，或是治療、預(yù)防或阻止白內(nèi)障發(fā)生的藥劑。
晶狀體抗原可以通過一般用于配制制劑的常規(guī)方法制備成適于施用的制劑。當(dāng)所述藥物組合物用于口服時(shí)，該制劑要求以適合于消化道吸收的形式提供。
口服固體制劑的例子包括片劑、膠囊、顆粒、粉劑等。這些制劑可以含有根據(jù)本發(fā)明所加入的各種成分，例如結(jié)合劑(如糖漿、阿拉伯膠、明膠、山梨醇、黃蓍膠和聚乙烯吡咯烷酮)；賦形劑(如乳糖、玉米淀粉、磷酸鈣、山梨醇和甘氨醇)；潤滑劑(如硬脂酸鎂、滑石、聚乙二醇和硅石)；分解劑(disintegrators)(如馬鈴薯淀粉)；增潤劑(如十二烷基硫酸鈉)；分散劑；增稠劑；調(diào)味劑；乳化劑等。片劑可用已知方法包衣。
當(dāng)固體制劑中所含晶狀體抗原的量依服用次數(shù)、是否存在其它有效成分等的不同而不同時(shí)，一般是0.1-500mg/片。
口服液體制劑可以例如是水性或油性懸液溶液、糖漿或酏劑。液體制劑可以含有常用的添加劑，如懸浮劑(例如山漿醇糖漿、甲基纖維素、糖漿、明膠、羥乙基纖維素、羰甲基纖維素和硬脂酸鋁膠)；乳化劑(例如卵磷脂和脫水山梨醇-油酸)；非水性載體(例如杏仁油、分餾的椰子油、油酯、丙二醇和乙醇)；保存劑等。
當(dāng)液體制劑中所含晶狀體抗原的量依服用次數(shù)，是否存在其它有效成分等的不同而變化時(shí)，一般是1mg-100g/100ml。
口服制劑可以是在使用時(shí)溶于適當(dāng)載體(如水)中的固體制劑。
當(dāng)藥用組合物是供靜脈內(nèi)用的制劑時(shí)，可將p H調(diào)節(jié)劑、緩沖液、穩(wěn)定劑、保存劑、增溶劑等在必要時(shí)加入晶狀體抗原中，該混合物經(jīng)常規(guī)方法制成靜脈內(nèi)用制劑。
本發(fā)明的晶狀體抗原可以口服(包括腸內(nèi)施用、胃內(nèi)施用和吸入)或胃腸外施用(例如靜脈內(nèi)施用)。在抗原的劑量隨著血清中抗晶狀體蛋白抗體的滴度、白內(nèi)障進(jìn)展程度、疾病的嚴(yán)重程度、耐藥性等不同而變化時(shí)，成人每天口服的抗原量一般是0.1mg-10g，優(yōu)選1mg-1g，更優(yōu)選是10mg-100mg。它可以單劑施用或多劑施用。根據(jù)施用的途徑將制劑制備成最適宜的形式。
因?yàn)榫铙w抗原是生物組分，所以，其毒性低，并且很少引起副作用。
當(dāng)本發(fā)明的晶狀體抗原來源于微生物時(shí)，可以施用所述微生物本身。具體地說，它可以以腸內(nèi)制劑的形式施用，并且特別是施用至小腸內(nèi)。
所述微生物可以以適于在制劑中保持穩(wěn)定計(jì)數(shù)并且易于由腸道吸收的口服制劑來提供，其可以是固體劑型或液體劑型。在制劑中維持穩(wěn)定計(jì)數(shù)的方法即是穩(wěn)定所述微生物的方法，包括例如在無水介質(zhì)中分散微生物、向制劑中加入穩(wěn)定劑、包被微生物等，這可以根據(jù)劑型作適當(dāng)選擇。
固體制劑的例子包括顆料劑、粉劑、片劑、膠囊劑等。這類制劑依制劑的不同可以含有適當(dāng)?shù)某煞?，如結(jié)合劑(例如聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基纖維素、蔗糖脂肪酸酯、阿拉伯膠、明膠和支鏈淀粉)，賦形劑(如乳糖和玉米淀粉)；潤滑劑(如硬脂酸鎂、滑石、聚乙二醇和硅石)；分解劑(如馬鈴薯淀粉)；溫潤劑(如十二烷基硫酸鈉)；輔劑等。
為了制備腸包衣制劑和穩(wěn)定微生物，例如下述包衣可以優(yōu)先用于固體制劑。
包衣劑可以是本身已知的脂溶性物質(zhì)，例如合成和半合成物質(zhì)(如羰甲基纖維素、羥甲基纖維素鄰苯二甲酸酯和Endragit)；天然物質(zhì)，如片膠；異相烯酸與丙烯酸乙酯的共聚物和異丁烯酸與異丁烯酸甲酯的共聚物的混合物等。
可以含有穩(wěn)定劑以穩(wěn)定微生物。穩(wěn)定劑的例子包括聚乙烯吡咯烷酮、羰甲基纖維素鈉、聚丙烯酸鈉、精氨酸鈉等。
在固體制劑中微生物的量可以根據(jù)服用次數(shù)、是否存在其它有效成分或其它有效成分的其它方面不同而變化時(shí)，其穩(wěn)定計(jì)數(shù)一般是103-1010細(xì)胞/片。
口服液體制劑的例子包括水性或油性懸液、溶液、糖漿、糊劑、凝膠、酏劑等。生產(chǎn)這類制劑的方法包括將懸浮劑(如精氨酸或其鈉鹽)、加工過的淀粉(如糊精、果膠、角叉菜膠)(carrageenan)、刺槐豆膠、瓜耳膠、鱈魚膠、合成生物聚合膠(xanthane gum)、明膠等加入到含微生物的水或溶液中和將微生物和脂的脂質(zhì)體、乳劑或微團(tuán)等形式的復(fù)合物分散于溶液中等。微生物在液體制劑中穩(wěn)定也是優(yōu)選的，特別優(yōu)選的是微生物無效地分散于制劑中。
所述液體制劑可以含有常規(guī)添加劑，如懸浮劑、乳化劑、非水性載體、保存劑、佐劑等。
在液體制劑中的微生物量可以根據(jù)施用次數(shù)、是否存在其它有效成分或其它有效成分的其它方面等的不同而變化時(shí)，其可行性量一般是1×103-5×1010細(xì)胞/100ml。
所述口服制劑可以是在使用時(shí)溶解于適宜載體中(如水)的固體制劑。
在所述能表達(dá)本發(fā)明晶狀抗原之微生物的量隨血清中抗晶狀體蛋白質(zhì)抗體的滴度、白內(nèi)障進(jìn)展程度、疾病的嚴(yán)重程度、耐藥性以及所述抗原的表達(dá)效率等的不同而變化時(shí)，成人每天的微生物粗物質(zhì)重量一般是1mg-100g，優(yōu)選10mg-10g，更優(yōu)選的是100mg-1g，可以單劑或多劑施用。根據(jù)施用途經(jīng)可將所述制劑制成最適宜的劑型。
下文所描述的實(shí)驗(yàn)性實(shí)施例2和7有力地證明了本發(fā)明的晶狀體抗原和能表達(dá)本發(fā)明晶狀體抗原的微生物具有治療、預(yù)防或阻止白內(nèi)障發(fā)生作用的可能性。
借助下面的實(shí)施例本發(fā)明得以進(jìn)一步詳細(xì)地說明，本發(fā)明的效果通過實(shí)驗(yàn)實(shí)施例闡明。這些僅僅是實(shí)施例而已，并不在任何意義上限制本發(fā)明的范圍。實(shí)驗(yàn)實(shí)施例1通過用晶狀體勻漿或晶狀蛋白進(jìn)行免疫誘導(dǎo)晶狀體表皮細(xì)胞損傷將Lewis大鼠(雌性，一年齡)分成二組(每組4只大鼠)，并用晶狀體勻漿乳劑(第一組)或β-晶狀蛋白(第二組)和完全福氏佐劑(CFA)免疫5次。結(jié)果，初次免疫后的21天在第1組和第2組所有動物中都觀察到了嚴(yán)重的晶狀體表皮細(xì)胞損傷。僅僅給予磷酸緩沖鹽溶液(PBS)-CFA乳劑注射的對照組中，大鼠的眼組織與那些未經(jīng)處理大鼠的相同。由上述結(jié)果可見，晶狀體組成成分，尤其是晶狀蛋白，特別是β-晶狀蛋白是誘導(dǎo)晶狀體表皮細(xì)胞損傷的有效免疫原。實(shí)驗(yàn)實(shí)施例2通過用β-晶狀蛋白進(jìn)行免疫增加血清的抗晶狀蛋白抗體和誘導(dǎo)晶狀體表皮細(xì)胞損傷所述抗原局限為單一的βH-晶狀蛋白。用其免疫小鼠。
純化的βH-晶狀蛋白(Singma)溶解于PBS中，與CFA以1∶1的比例制成乳劑，并調(diào)終濃度為1mg/ml。用所述乳劑(100μl/動物)免疫小鼠(C57BL，雌性，6月齡)。初次免疫后，每隔一周進(jìn)行4次加強(qiáng)注射，除了用不完全福氏佐劑(IFA)代替CFA外，加強(qiáng)免疫的程序與上述相同。初始免疫后的第5周，從小鼠取血。處死小鼠，并摘除眼球供組織病理學(xué)檢查用。實(shí)驗(yàn)1制備被摘除眼球的光學(xué)顯微鏡切片，并進(jìn)行晶狀體表皮細(xì)胞的評價(jià)。結(jié)果，在被免疫的小鼠眼組織中觀察到了晶狀體表皮細(xì)胞損傷(圖1)。實(shí)施例2利用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)測定所收集血清中抗βH晶體蛋白抗體的滴度。βH-晶狀蛋白抗原以10μg/ml的濃度被固定在96孔微量滴定板上。封閉后，將免疫小鼠的血清稀釋103-106倍，與抗原反應(yīng)。清洗后，將堿性磷酸酶結(jié)合的羊抗鼠IgG作為第二抗體進(jìn)行反應(yīng)。清洗后，通過對硝基苯磷酸(pNPP)底物溶液的顯色測定抗體滴度。結(jié)果，免疫小鼠血清中抗βH-晶狀蛋白抗體的滴度遠(yuǎn)高于未處理小鼠和用PBS-佐劑乳劑免疫的小鼠(圖2)。
由上述結(jié)果可見，晶狀體表皮細(xì)胞損傷似乎伴隨著抗βH-晶狀蛋白抗體滴度的升高。換句話說，這些結(jié)果清楚地表明，由于自身免疫所致的晶狀體表皮細(xì)胞損傷與白內(nèi)障的發(fā)病機(jī)理有關(guān)。實(shí)驗(yàn)實(shí)施例3鑒定人βA3-晶狀蛋白的表位實(shí)驗(yàn)1利用常規(guī)方法合成組成已知氨基酸序列之人βA3-晶狀蛋白的15種寡肽(19氨基酸殘基，序列如表1)，并進(jìn)行βA3-晶狀蛋白和各個(gè)寡肽的竟?fàn)幰种圃囼?yàn)。
作為抗原，β-晶狀蛋白(含大約10％βA3-晶狀蛋白)以10μg/ml的濃度固定于微量滴定板上。印跡之后，加入β-晶狀蛋白單克隆抗體(1μg/ml)和各個(gè)寡肽，該混合物與抗原反應(yīng)。清洗后，將堿性磷酸酶結(jié)合的羊抗鼠lgG作為第二抗體進(jìn)行反應(yīng)。清洗后，通過底物pNNP的顯色測定針對抗原的肽竟?fàn)幰种苹钚?。結(jié)果1號肽表現(xiàn)出對βA3-晶狀蛋白強(qiáng)的抑制活性。這表明βA3-晶狀蛋白與抗體的結(jié)合位點(diǎn)(表位)存在于N端19氨基酸殘基(1號肽)。
表1人βA3-晶狀蛋白部分肽對βA3-晶狀蛋白-抗體結(jié)合的抑制作用(1)肽編號 氨基酸序列1)位置2)結(jié)合抑制作用1 METQAEQQELETLPTTKMA1-19 +++2 TTKMAQTNPTPGSLGPWKI15-33 -3 GPWKITIYDQENFQGKRME29-47 -4 GKRMEFTSSCPNVSERSFD43-61 -5 ERSFDNVRSJKVESGAWIG57-75 -6 GAWIGYEHTSFCGQQFILE71-89 -7 QFILERGEYPRWDAWSGSN85-103 -8 WSGSNAYHMERLMSFRPFC99-117 -9 FRPFCSANHKESKMTIFEK113-131-10 TIFEKENFIGRQWEISDDY127-145-11 ISDDYPSLQAMGWFNNEVG141-159-12 NNEVGSMKIQSGAWVCYHY155-173-13 VCYHYLGYRGYQYILKCDH169-187-14 LKCDHHEGDYKHWREWGSH183-201-15 EWGSHAQTSQIQSIRRIQQ197-215-1)氨基酸用IUPAC-IUB委員會對生物的化學(xué)命名推薦的單字母符號表示。
2)序列表SEQ ID NO1的氨基酸數(shù)3)+++＜250μg肽對結(jié)合抑制50％++＞250μg、＜500μg肽對結(jié)合抑制50％。
+7500μg、＜750μg肽對結(jié)合抑制50％。
-無結(jié)合抑制作用實(shí)驗(yàn)2將βA3-晶狀蛋白的N端區(qū)(1號肽)切成6或7個(gè)殘基的更小單位，以合成三種肽(16、17和18號肽)，將其以實(shí)驗(yàn)1相同的方式與βA3-晶狀蛋白進(jìn)行竟?fàn)幮砸种圃囼?yàn)。結(jié)果，只有16號肽具有βA3-晶狀蛋白結(jié)合抑制作用(表2)。由此可見，16號肽上(序列METQAE)存在表位。
表2人βA3-晶狀蛋白部分肽對βA3-晶狀蛋白-抗體結(jié)合的抑制作用(2)肽編號氨基酸序列1)位置2)結(jié)合抑制作用3)1 METQAEQQELETLPTTKM1-18 +++16 METQAE1-6++17 QQELET7-12-18 LPTTKMA 13-19-+)氨基酸用IUPAC-IUB委員會對生物化學(xué)命名推薦的單字母符號表示 。2)序列表SEQ ID NO1的氨基酸數(shù)3)+++＜250μg肽對結(jié)合抑制50％++＞250μg、＜500μg肽對結(jié)合力抑制50％。
+＞500μg、＜750μg肽對結(jié)合力抑制50％。
-無結(jié)合抑制作用實(shí)驗(yàn)3為了鑒別βA3-晶狀蛋白表位的最小單位，用異亮氨酸殘基取代16號肽6個(gè)氨基酸殘基中的一個(gè)殘基，得到16號肽的6種類似物(91-24號肽)。用如實(shí)驗(yàn)1相同的方法進(jìn)行βA3-晶狀蛋白與上述肽的競爭性抑制試驗(yàn)。結(jié)果，與16號肽相比，除了19號肽以外的5種16號肽類似物都對βA3-晶狀蛋白與抗體的結(jié)合表現(xiàn)出較低的抑制活性，只有19號肽象16號肽一樣，對βA3-晶狀蛋白與抗體的結(jié)合產(chǎn)生強(qiáng)的抑制作用(表3)。這些結(jié)果表明，除了第一位甲硫氨酸外，16號肽的5個(gè)連續(xù)氨基酸殘基(序列ETQAE)是βA3-晶狀蛋白的表位。
表3人βA3-晶狀蛋白部分肽類似物對βA3-晶狀蛋白-抗體結(jié)合的抑制作用肽編號 氨基酸序列1)、2)結(jié)合抑制作用3)16 METQAE ++19 IETQAE (2) ++20 METQAE (3)+21 METQAE (4)+22 METQAE (5)+23 METQIE (6)+24 METQAE (7)-PBS(對照) -+)氨基酸以IUPAC-IUB委員會對生物化學(xué)命名推薦的單字母符號表示。2)括號中的數(shù)字表示被描述的序列所在的序列表SEQ ID編號。3)+++＜250μg肽對結(jié)合抑制50％++＞250μg、＜500μg肽對結(jié)合抑制50％。
+＞500μg、＜750μg肽對結(jié)合抑制50％。
-無結(jié)合抑制作用實(shí)驗(yàn)實(shí)施例4鑒定人βB2-晶狀蛋白的表位利用常規(guī)方法合成組成具有已知氨基酸序列的人βB2-晶狀蛋白的17種寡肽(17個(gè)氨基酸殘基，序列如表4所示)，以實(shí)驗(yàn)性實(shí)施例3中實(shí)驗(yàn)1的相同方法進(jìn)行βB2-晶狀蛋白與各個(gè)寡肽的競爭性抑制試驗(yàn)。結(jié)果，38號肽對βB2-晶狀蛋白的結(jié)合具有強(qiáng)抑制作用。這表明βB2-晶狀蛋白與其抗體的結(jié)合部位(表位)存在于38號肽的17個(gè)氨基酸殘基。
表4人βB2-晶狀蛋白部分肽對βB2-晶狀蛋白-抗體結(jié)合的抑制作用肽編號氨基酸序列1)位置2)結(jié)合抑制作用3)25 MASDHQTQAGKPQSLNP1-17 -26 QSLNPKIIIFEQENFQG13-29 -27 ENFQGHSHELNGPCPNL25-41 -28 PCPNLKETGVEKAGSVL37-5329 AGSVLVQAGPWVGYEQA49-65 -30 GYEQANCKGEQFVFEKG61-77 -31 VFEKGEYPRWDSWTSSR73-89 -32 WTSSRRTDSLSSLRPIK85-101-33 LRPIKVDSQEHKIILYE97-113-34 IILYENPNFTGKKMEII109-125 -35 KMEIIDDDVPSFHAHGY121-137 -36 HAHGYQEKVSSVRVQSG133-149 -37 RVQSGTWVGYQYPGYRG145-161 -38 PGYRGLQYLLEKGDYKD157-173 +++39 GDYKDSSDFGAPHPQVQ169-185 -40 HPQVQSVRRIRDMQWHQ181-197 -41 RIRDMQWHQRGAFHPSN189-205 -1)氨基酸用IUPAC-IUB委員會對生物化學(xué)命名法推薦的單字母符號表示。
2)序列表SEQ ID NO1的氨基酸編號3)+++＜250μg肽對結(jié)合抑制50％++＞250μg、＜500μg肽對結(jié)合抑制50％。
+500μg、＜750μg肽對結(jié)合抑制50％。
-無結(jié)合抑制作用合成由截?cái)?dividing)具有βB2-晶狀蛋白部分序列的38號肽所得的肽，并用與實(shí)驗(yàn)實(shí)施例3的實(shí)驗(yàn)2所用的相同方法將表位區(qū)進(jìn)一步局限，而且，以實(shí)驗(yàn)實(shí)施例3的實(shí)驗(yàn)3中的方法鑒定βB2-晶狀蛋白表位的最小單位。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，表位是βB2-晶狀蛋白氨基酸序列(SEQ ID NO8)的162-166位氨基酸的連續(xù)5個(gè)氨基酸殘基(序列LQYLL)。實(shí)驗(yàn)實(shí)施例5用與人βA3-晶狀蛋白具有相同表位的非晶狀體來源肽誘導(dǎo)晶狀體表皮細(xì)胞損傷和交叉反應(yīng)利用Gene Bank數(shù)據(jù)庫檢索具有βA3-晶狀蛋白相同表位的非晶狀體來源的肽，即具有ETQAE氨基酸序列的肽。結(jié)果，發(fā)現(xiàn)例如大腸桿菌、沙門氏桿菌、酵母和病毒等微生物蛋白質(zhì)具有所述氨基酸序列(表5)。
此外，檢索非晶狀體來源的肽與人晶狀蛋白除所述表位序列外的序列同源性，以證實(shí)來源于表6所示三種動物的肽與晶狀蛋白的同源序列。
表5與人βA3晶狀蛋白有相同表位的非晶狀體來源的蛋白質(zhì)微生物蛋白質(zhì)大腸桿菌拓?fù)洚悩?gòu)酶1)酵母拓?fù)洚悩?gòu)酶沙門氏桿菌 拓?fù)洚悩?gòu)酶(BSMV)17KD蛋白質(zhì)流感病毒HF-1蛋白質(zhì)1)大腸桿菌的拓?fù)洚悩?gòu)酶含有該實(shí)驗(yàn)實(shí)施例所用肽I的氨基酸序列(GLTETQAEAILE，序列表SEQ ID NO9)。
表6除了人βA3-晶狀蛋白的表位序列外與人晶狀蛋白有序列同源性的非晶狀體來源的肽生物體含有與晶狀蛋白同源序列的肽的部分氨基酸序列1)、2)、3)科賽奇病毒 線蟲(C.elegans) [肽II]狒狒內(nèi)源病毒[肽III]1)氨基酸用UIPAC-IUB委員會對生物化學(xué)命名法推薦的單字母符號表示。2)劃線的序列與人βA3-晶狀蛋白同源。3)括號中的數(shù)字表示所述序列所在序列表的SEQ ID編號。
用表5中所列的大腸桿菌拓?fù)洚悩?gòu)酶部分氨基酸序列(肽I)或表6中所示的兩種肽(肽II、肽III)免疫小鼠，并檢測抗體滴度。
將小鼠(B6C3，雌性，一年齡)分成4組(每組包括2只)，以100μg/動物用肽I-III中的一種免疫。初次免疫后，每隔兩周進(jìn)行兩次加強(qiáng)注射。用與實(shí)驗(yàn)實(shí)施例2中相同的方法制備抗原和佐劑和乳劑，并用于免疫。初次免疫后的5周，從小鼠取血。處死小鼠，摘除眼球。用與實(shí)驗(yàn)性實(shí)施例2相同的方法經(jīng)ELISA檢測抗體滴度，制備眼組織的光學(xué)顯微鏡切片。并對晶狀體表皮細(xì)胞進(jìn)行評價(jià)。
結(jié)果，所有用肽I(包括βA3-晶狀蛋白表位)免疫的小鼠都表現(xiàn)出輕度晶狀體表皮細(xì)胞損傷。從用肽I免疫的小鼠采集的血清表現(xiàn)出與β-晶狀蛋白的交叉反應(yīng)(表7)。另外兩種肽沒有誘導(dǎo)晶狀體表皮細(xì)胞損傷，也未表現(xiàn)出與β-晶狀蛋白的交叉反應(yīng)。
表7用含晶狀蛋白同源序列的肽免疫的小鼠中晶狀體表皮細(xì)胞的損傷和血清的抗晶狀蛋白抗體滴度抗原抗體滴度晶狀體表皮細(xì)胞損傷的頻率(％)肽I 1/10,000 100肽II1/500 0肽III 1/500 0PBS 1/500 0(對照)1)抗體滴度表示為當(dāng)405nm的吸光度為空白值的兩倍時(shí)切片的稀釋比例。實(shí)驗(yàn)實(shí)施例6能夠表達(dá)誘導(dǎo)晶狀體表皮細(xì)胞損傷的β-晶狀蛋白的重組大腸桿菌大鼠βB2-晶狀蛋白cDNA(Aaits，H.J.et al.，Eur.J.Biochem.，18331-36，1989)被亞克隆至市售的表達(dá)載體pKK223-3(Pharmacia Biotech制造)，并用所述重組載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌JM105(Pharmacia Biotech制造)以在宿主E.Coli中表達(dá)βB2-晶狀蛋白。在含30μg/ml氨芐青霉素的LB培養(yǎng)基中于37℃培養(yǎng)所述轉(zhuǎn)化細(xì)胞24小時(shí)。利用以pKK223-3轉(zhuǎn)化的E.coliJM105作對照進(jìn)行下述實(shí)驗(yàn)。
將小鼠(B6C3，雌性，一年齡)分成2組(每組包括4只)，用能表達(dá)βB2-晶狀蛋白的重組E.coli β-B2-pKK(1,000μg/0.2ml)免疫。初次免疫后，每兩周進(jìn)行2次加強(qiáng)注射(1,000μg/動物)。每兩周用裂隙燈檢查晶狀體。初次免疫后的第7周，從小鼠采血，并用實(shí)驗(yàn)實(shí)施例2中相同的方法經(jīng)ELISA檢測交叉反應(yīng)。
小鼠和大鼠的β-晶狀蛋白多肽序列非常相似，而且βA3-晶狀蛋白和βB2-晶狀蛋白表現(xiàn)出包括表位部分在內(nèi)的90％或90％以上的高同源性。
用能表達(dá)βB2-晶狀蛋白的E.coli β-B2-pKK免疫的所有小鼠都在初次免疫后的第7周表現(xiàn)出晶狀體表皮細(xì)胞損傷。用能表達(dá)βB2-晶狀蛋白的E.coli免疫的小鼠之淋巴結(jié)細(xì)胞顯示與β-晶狀蛋白的交叉反應(yīng)(表8)。而且，這些小鼠血清中的抗βB2-晶狀蛋白抗體增加。相反，用對照E.coli JM105(不能表達(dá)βB2-晶狀蛋白)免疫的小鼠沒有顯示淋巴細(xì)胞的交叉反應(yīng)或血清抗體滴度的增加。對照組小鼠的晶狀體未顯示異常。上述結(jié)果證明，E.coli表達(dá)的自身抗原破壞免疫耐受并誘導(dǎo)晶狀體表此的細(xì)胞損傷。
表8用表達(dá)β-晶狀蛋白的重組E.coli免疫的小鼠中晶狀體表皮的細(xì)胞損傷和血清的抗晶狀蛋白抗體滴度抗原抗體滴度晶狀體表皮細(xì)胞損傷頻率(％)能表達(dá)βB2-晶狀蛋白 1/2,000 100的E.coli β-B2pkk不能表達(dá)βB2-晶狀蛋白 1/5000的F.coliJM1051)抗體滴度表示為當(dāng)405nm的吸光度為空白值的兩倍時(shí)切片的稀釋比例。實(shí)驗(yàn)性實(shí)施例7抑制經(jīng)口服晶狀體勻漿免疫的小鼠血清中抗β晶狀蛋白抗體的增加實(shí)驗(yàn)1雄性和雌性C57BL小鼠(15-16月齡)被分成晶狀體組和BSA組，用牛晶狀蛋白免疫之。用磷酸緩沖的鹽溶液(PBS)將牛晶狀體制成勻漿，使蛋白含量為20mg/ml，從初次免疫前26天至初次免疫的當(dāng)天，每4天給晶狀體口服晶狀體勻漿0.2ml/動物(4mg/動物)一次。作為對照蛋白，牛血清白蛋白(BSA)被溶解于PBS中至濃深度為20mg/ml，并以與晶狀體組相同的方式給BSA組口服。實(shí)驗(yàn)2雄性和雌性C57BL小鼠(15-16月齡)被分成PBS組、晶狀體組和BSA組，用牛晶狀蛋白免疫之。以與實(shí)驗(yàn)1中相同的方式在初次免疫的當(dāng)天至初次免疫后的34天中每4天給晶狀體組和BSA組進(jìn)行口服。PBS組給予口服PBS(0.2ml/動物)。實(shí)驗(yàn)3雄性和雌性C57BL小鼠(15-16月齡)被分成PBS組、晶狀體組和BSA組，用牛晶狀蛋白免疫之。以與實(shí)驗(yàn)1中相同的方式在初次免疫的當(dāng)天至初次免疫后的34天中每4天給晶狀體組和BSA組進(jìn)行口服。
從牛晶狀體中分離β-晶狀蛋白，并以1∶1的比例與CFA制成乳劑。自實(shí)驗(yàn)1-3小鼠的尾部經(jīng)皮下施用β-晶狀蛋白(1mg/ml，0.1mg/動物)免疫。初次免疫后，每兩周給予兩次加強(qiáng)注射。對于加強(qiáng)免疫而言，除了用IFA代替CFA外，其余同上述程序。初次免疫后的每隔一周，從小鼠采血，并以與實(shí)驗(yàn)性實(shí)施例2的相同方式經(jīng)ELISA測定血清中抗β-晶狀蛋白的抗體滴度。
關(guān)于每個(gè)實(shí)驗(yàn)，初次免疫后第3、4和5周的血清抗抗原(β-晶狀蛋白)抗體滴度表示于圖3-5中。用β-晶狀蛋白免疫的C57BL小鼠的血清抗體滴度在實(shí)驗(yàn)1-3的初次免疫后第3和4周升高，最高的峰值出現(xiàn)于初次免疫后的第5周。在實(shí)驗(yàn)2中，小鼠于初次免疫前后進(jìn)行口服。服用晶狀體勻漿的晶狀體組抗體滴度在初次免疫后第4和5周明顯地低于BSA組(對照組)。(圖4)，在實(shí)驗(yàn)1中，小鼠在初次免疫前進(jìn)行口服，而在實(shí)驗(yàn)3中，小鼠在初次免疫后進(jìn)行口服。晶體組的抗體滴度通常比BSA組的要低(圖3和5)。
由上述結(jié)果證明，在用β-晶狀蛋白免疫前和/或后施用晶狀體勻漿抑制血清抗抗原抗體滴度的升高，最好在免疫前開始施用本發(fā)明的制劑，并在甚至是免疫后繼續(xù)施用，以使抗體滴度的升高被顯著抑制。配方實(shí)施例1[片劑配方]重組酵母(啤酒酵母)1)80％晶狀蛋白纖維素 1％乳糖10％玉米淀粉 5％無水磷酸鈣 2％羥丙基纖維素1％硬酯酸鎂1％總計(jì) 100％1)利用市售酵母轉(zhuǎn)化試驗(yàn)盒(Yeast Starter Kit，Bio-Rad)通過轉(zhuǎn)化酵母以使能夠表達(dá)晶狀蛋白而制備。
根據(jù)上述配方用常規(guī)方法制備片劑，并利用常規(guī)方法應(yīng)用腸包衣，以產(chǎn)生腸包衣性。
本發(fā)明的含有作為活性成分的晶狀體抗原或能夠表達(dá)所述抗原的微生物的藥物組合物對于抗晶狀體蛋白質(zhì)抗體滴度的升高表現(xiàn)出明顯的抑制作用。因此，它極可能用于有效地治療或預(yù)防白內(nèi)障并延緩白內(nèi)障發(fā)生。所以，本發(fā)明組合物對于白內(nèi)障患者和白內(nèi)障的潛在患者極為有用。SEQ ID NO1序列長度215序列類型氨基酸拓?fù)鋵W(xué)線性分子類型蛋白質(zhì)序列Met Glu Thr Gln Ala Glu Gln Gln Glu Leu Glu Thr Leu Pro Thr Thr5 10 15Lys Met Ala Gln Thr Asn Pro Thr Pro Gly Ser Leu Gly Pro Trp Lys20 25 30Ile Thr Ile Tyr Asp Gln Glu Asn Phe Gln Gly lys Arg Met Glu Phe35 40 45Thr Ser Ser Cys Pro Asn Val Ser Glu Arg Ser Phe Asp Asn Val Arg50 55 60Ser Leu Lys Val Glu Ser Gly Ala Trp Ile Gly Tyr Glu His Thr Ser65 70 75 80Phe Cys Gly Gln Gln Phe Ile Leu Glu Arg Gly Glu Tyr Pro Arg Trp85 90 95Asp Ala Trp Ser Gly Ser Asn Ala Tyr His Met Glu Arg Leu Met Ser100 105 110Phe Arg Pro Phe Cys Ser Ala Asn His Lys Glu Ser Lys Met Thr Ile115 120 125Phe Glu Lys Glu Asn Phe Ile Gly Arg Gln Trp Glu Ile Ser Asp Asp130 135 140Tyr Pro Ser Leu Gln Ala Met Gly Trp Phe Asn Asn Glu Val Gly Ser145 150 155 160Met Lys Ile Gln Ser Gly Ala Trp Val Cys Tyr His Tyr Leu Gly Tyr165 170 175Arg Gly Tyr Gln Tyr Ile Leu Lys Cys Asp His His Glu Gly Asp Tyr180 185 190Lys His Trp Arg Glu Trp Gly Ser His Ala Gln Thr Ser Gln Ile Gln195 200 205Ser Ile Arg Arg Ile Gln Gln210 215SEQ ID NO2序列長度6序列類型氨基酸拓?fù)鋵W(xué)線性分子類型肽序列Ile Glu Thr Gln Ala Glu56SEQ ID NO3序列長度6序列類型氨基酸拓?fù)鋵W(xué)線性分子類型肽序列Met Ile Thr Gln Ala Glu56SEQ ID NO4序列長度6序列類型氨基酸拓?fù)鋵W(xué)線性分子類型肽序列Met Glu Ile Gln Ala Glu56SEQ ID NO5序列長度6序列類型氨基酸拓?fù)鋵W(xué)線性分子類型肽序列Met Glu Thr Gln Ala Glu56SEQ ID NO6序列長度6序列類型氨基酸拓?fù)鋵W(xué)線性分子類型肽序列Met Glu Thr Gln Ala Glu56SEQ ID NO7序列長度6序列類型氨基酸拓?fù)鋵W(xué)線性分子類型肽序列Met Glu Thr Gln Ala Ile56SEQ ID NO8序列長度205序列類型氨基酸拓?fù)鋵W(xué)線性分子類型蛋白質(zhì)序列Met Ala Ser Asp His Gln Thr Gln Ala Gly Lys Pro Gln Ser Leu Asn5 10 15Pro Lys Ile Ile Ile Phe Glu Gln Glu Asn Phe Gln Gly His Ser His20 25 30Glu Leu Asn Gly Pro Cys Pro Asn Leu Lys Glu Thr Gly Val Glu Lys35 40 45Ala Gly Ser Val Leu Val Gln Ala Gly Pro Trp Val Gly Tyr Glu Gln50 55 60Ala Asn Cys Lys Gly Glu Gln Phe Val Phe Glu Lys Gly Glu Tyr Pro65 70 75 80Arg Trp Asp Ser Trp Thr Ser Ser Arg Arg Thr Asp Ser Leu Ser Ser85 90 95Leu Arg Pro Ile Lys Val Asp Ser Gln Glu His Lys Ile Ile Leu Tyr100 105 110Glu Asn Pro Asn Phe Thr Gly Lys Lys Met Glu Ile Ile Asp Asp Asp115 120 125Val Pro Ser Phe His Ala His Gly Tyr Gln Glu Lys Val Ser Ser Val130 135 140Arg Val Gln Ser Gly Thr Trp Val Gly Tyr Gln Tyr Pro Gly Tyr Arg145 150 155 160Gly Leu Gln Tyr Leu Leu Glu Lys Gly Asp Tyr Lys Asp Ser Ser Asp165 170 175Phe Gly Ala Pro His Pro Gln Val Gln Ser Val Arg Arg Ile Arg Asp180 185 190Met Gln Trp His Gln Arg Gly Ala Phe His Pro Ser Asn195 200 205SEQ ID NO9序列長度12序列類型氨基酸拓?fù)鋵W(xué)線性分子類型肽序列Gly Leu Thr Glu Thr Gln Ala Glu Ala Ile Leu Glu5 10 12SEQ ID NO10序列長度12序列類型氨基酸拓?fù)鋵W(xué)線性分子類型肽序列Met Gln Tyr His Tyr Leu Gly Arg Thr Gly Tyr Thr5 10 12SEQ ID NO11序列長度12序列類型氨基酸拓?fù)鋵W(xué)線性分子類型肽序列Asp Phe Ala Thr Ile Phe Glu Lys Asn Ala Phe Leu5 10 12SEQ ID NO12序列長度12序列類型氨基酸拓?fù)鋵W(xué)線性分子類型肽序列Gln Lys Leu Gly Pro Trp Lys Arg Pro Val Ala Tyr5 10 12(接附圖)
權(quán)利要求
1.一種藥物組合物，該組合物含有作為活性成分的誘導(dǎo)晶狀體細(xì)胞損傷免疫反應(yīng)的晶狀體抗原。
2.權(quán)利要求1的藥物組合物，該組合物是一種抑制抗晶狀體蛋白質(zhì)抗體增加的抑制劑。
3.權(quán)利要求1或2的藥物組合物，其中所述晶狀體抗原含有其氨基酸序列是序列表中SEQ ID NO1所示的至少2-6位氨基酸的表位。
4.權(quán)利要求1或2的藥物組合物，其中所述晶狀體抗原含有其氨基酸序列為序列表中SEQ ID NO8所示的至少162-166位氨基酸的表位。
5.權(quán)利要求1-4中任一藥物組合物，其中所述晶狀體抗原是晶狀體晶狀蛋白或晶狀體膜肽。
6.權(quán)利要求1或2的藥物組合物，其中的活性成分是動物晶狀體勻漿或晶狀表皮細(xì)胞的勻漿。
7.一種藥物組合物，該組合物含有作為活性成分的能夠表達(dá)誘導(dǎo)晶狀體細(xì)胞損傷免疫反應(yīng)的晶狀體抗原之微生物。
8.權(quán)利要求7的藥物組合物，該組合物是一種抑制抗晶狀體蛋白質(zhì)抗體增加的抑制劑。
9.權(quán)利要求7或8的藥物組合物，該組合物為適于腸道內(nèi)施用的劑型。
10.權(quán)利要求1-9中的任一藥物組合物，該組合物是治療、預(yù)防或延緩白內(nèi)障發(fā)生的藥劑。
11.一種抑制抗晶狀體蛋白質(zhì)抗體增加的方法，該方法包括施用選自由誘導(dǎo)晶狀體細(xì)胞損傷免疫反應(yīng)之晶狀體抗原和能夠表達(dá)誘導(dǎo)晶狀體細(xì)胞損傷免疫反應(yīng)的晶狀體抗原之微生物組成的組的活性成分。
12.權(quán)利要求11的方法，其中所述晶狀體抗原含有其氨基酸序列為序列表中SEQ ID NO1所示至少2-6位氨基酸的表位。
13.權(quán)利要求11的方法，其中所述晶狀體抗原含有其氨基酸序列為序表中SEQ ID NO8所示至少162-166位氨基酸。
14.權(quán)利要求11的方法，其中所述晶狀體抗原是晶狀體晶狀蛋白或晶狀體膜肽。
15.權(quán)利要求12的方法，其中所述晶狀體抗原是晶狀體晶狀蛋白或晶狀體膜肽。
16.權(quán)利要求13的方法，其中所述晶狀體抗原是晶狀體晶狀蛋白或晶狀體膜肽。
17.權(quán)利要求11的方法，其中的活性成分是動物晶狀體勻漿或晶狀體表皮細(xì)胞的勻漿。
18.權(quán)利要求11的方法，其中的活性成分是能夠表達(dá)誘導(dǎo)晶狀體細(xì)胞損傷免疫反應(yīng)的晶狀體抗原之微生物，并且是適于腸道內(nèi)施用的劑型。
19.一種治療，預(yù)防或阻止白內(nèi)障發(fā)生的方法，該方法包括施用選自由誘導(dǎo)晶狀體細(xì)胞損傷免疫反應(yīng)之晶狀體抗原和能夠表達(dá)誘導(dǎo)晶狀體細(xì)胞損傷免疫反應(yīng)的晶狀體抗原之微生物組成的組的活性成分。
20.選自由誘導(dǎo)晶狀體細(xì)胞損傷免疫反應(yīng)之晶狀體抗原和能夠表達(dá)誘導(dǎo)晶狀體細(xì)胞損傷免疫反應(yīng)的晶狀體抗原之微生物組成的組的活性成分在制備抑制抗晶狀體蛋白質(zhì)抗體增加的抑制劑上的用途。
21.權(quán)利要求20的用途，其中所述晶狀體抗原含有其氨基酸序列為序列表中SEQ ID NO1所示的至少2-6位氨基酸的表位。
22.權(quán)利要求20的用途，其中所述的晶狀體抗原含有其氨基酸序列為序列表中SEQ ID NO8所示的至少162-166位氨基酸的表位。
23.權(quán)利要求20-22的任意一個(gè)的用途，其中所述晶狀體抗原是晶狀體晶狀蛋白或晶狀體膜肽。
24.權(quán)利要求20的用途，其中的活性成分是動物晶狀體勻漿或晶狀體表皮細(xì)胞勻漿。
25.權(quán)利要求20的用途，其中的活性成分是能夠表達(dá)誘導(dǎo)晶狀體細(xì)胞毒性免疫反應(yīng)的晶狀體抗原之微生物，并且是適于腸道內(nèi)施用的劑型。
26.權(quán)利要求20-25中的任意一個(gè)用途，其中的抑制劑是用于治療、預(yù)防或延緩白內(nèi)障發(fā)生的藥劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及含有作為活性成分的誘導(dǎo)晶狀體細(xì)胞損傷免疫反應(yīng)之晶狀體抗原或能夠表達(dá)誘導(dǎo)晶狀體細(xì)胞損傷免疫反應(yīng)的晶狀體抗原之微生物的藥物組合物。本發(fā)明的含有作為活性成分的晶狀體抗原或能夠表達(dá)所述抗原之微生物的藥物組合物對抗晶狀體蛋白質(zhì)抗體滴度的升高顯示出明顯的抑制作用。因此，它極有可能有效地治療或預(yù)防白內(nèi)障，并阻止白內(nèi)障的發(fā)生。所以，本發(fā)明組合物對于白內(nèi)障患者和白內(nèi)障的潛在患者非常有用。
文檔編號C07K16/18GK1151894SQ96121930
公開日1997年6月18日 申請日期1996年10月12日 優(yōu)先權(quán)日1995年10月13日
發(fā)明者井上惠里 申請人:千壽制藥株式會社