專利名稱：：糖化合物的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及糖類研究領域中有用的糖化合物、在該糖化合物的生產中有用的糖分解酶、以及在該糖化合物的制造中有用的Fucoidanobacter屬的細菌。巖藻依聚糖是包含在褐藻類中的硫酸化多糖，已報道它具有抗血液凝固作用、澄清血脂作用、抗腫瘤作用、抑制癌轉移作用、抗愛滋病毒感染作用等各種各樣的生物活性，作為醫(yī)藥品是非常有用的物質。然而，巖藻依聚糖是分子量非常大的硫酸化多糖，直接用作醫(yī)藥品時在抗原性、均一性、抗凝血活性等方面存在問題，所以常常需要將巖藻依聚糖分解到某種程度。因此，人們期待著弄清巖藻依聚糖的構造、闡明構造與生物活性的關系，但是，巖藻依聚糖是個分支很多的高分子，構成糖的種類也多，硫酸基也可以結合于各種各樣的位置，所以結構解析非常困難。為了解析多糖的結構，雖然有使分解多糖的酶作用，然后解析生成的寡糖的結構的方法，但現(xiàn)在市場上還沒有報告中的在巖藻依聚糖分解酶中的分解生成物的糖鏈結構已清楚的產物和成為巖藻依聚糖寡糖的標準品的物質。由于上述理由人們需要得到判明結構的糖化合物、在該糖化合物生產中有用的糖分解酶、以及在該糖化合物制造中有用的微生物。本發(fā)明的目的在于提供可以用于巖藻依聚糖的結構解析、巖藻依聚糖的酶分解物的鑒定以及可以用于生物活性檢索的糖化合物、在巖藻依聚糖的部分分解以及巖藻依聚糖寡糖的生產等與巖藻依聚糖有關研究中有用的新的內向(endo)型巖藻依聚糖分解酶、以及在糖化合物的制造中有用的新的微生物。如果概述本發(fā)明，本發(fā)明的第一項發(fā)明涉及將下面通式(1)或(2)(1)(2)代表的化合物中的至少一個醇式羥基進行硫酸酯化形成的糖化合物或其鹽。作為用通式(1)或(2)代表的化合物的例子，舉出下式(7)～(15)表示的化合物。(7)(8)(9)(10)(11)(12)(13)(14)(15)本發(fā)明的第二項發(fā)明涉及內向型巖藻依聚糖分解酶，其特征是具有下面的理化性質。(I)作用作用于巖藻依聚糖，至少可以使上述式(7)和式(8)表示的糖化合物游離出來。(II)最適pH該酶的最適pH是6～10。(III)最適溫度該酶的最適溫度是30～40℃。本發(fā)明的第三項發(fā)明涉及在作為本發(fā)明的第一項發(fā)明的糖化合物的制造中有用的新的微生物，也就是在其電子傳遞鏈中有甲基萘醌、GC含量約為60％的屬于Fucoidanobacter屬的細菌。本說明書記載的式(1)、(2)、(4)～(15)、以及(17)～(25)中的“～”意味著在甘露糖、或半乳糖中存在著α、β兩種異頭物。本發(fā)明者發(fā)現(xiàn)如果使作為本發(fā)明的第二項發(fā)明的酶或本發(fā)明的第三項發(fā)明的細菌的菌體提取物或培養(yǎng)液上清作用于巖藻依聚糖，可以得到本發(fā)明的糖化合物，從而使本發(fā)明完成。附圖的簡單說明圖1是利用L-柱分離糖化合物(a)的吡啶基(2)-氨基化糖化合物(PA-a)時的洗脫圖。圖2是利用L-柱分離糖化合物(b)的吡啶基(2)-氨基化糖化合物(PA-b)時的洗脫圖。圖3是利用L-柱分離糖化合物(c)的吡啶基(2)-氨基化糖化合物(PA-c)時的洗脫圖。圖4是利用L-柱分離糖化合物(d)的吡啶基(2)-氨基化糖化合物(PA-d)時的洗脫圖。圖5是利用L-柱分離糖化合物(e)的吡啶基(2)-氨基化糖化合物(PA-e)時的洗脫圖。圖6是利用L-柱分離糖化合物(f)的吡啶基(2)-氨基化糖化合物(PA-f)時的洗脫圖。圖7是利用L-柱分離糖化合物(g)的吡啶基(2)-氨基化糖化合物(PA-g)時的洗脫圖。圖8是利用L-柱分離糖化合物(h)的吡啶基(2)-氨基化糖化合物(PA-h)時的洗脫圖。圖9是利用L-柱分離糖化合物(i)的吡啶基(2)-氨基化糖化合物(PA-i)時的洗脫圖。圖10是糖化合物(a)的質譜分析(negative測定)圖。圖11是糖化合物(b)的質譜分析(negative測定)圖。圖12是糖化合物(c)的質譜分析(negative測定)圖。圖13是糖化合物(d)的質譜分析(negative測定)圖。圖14是糖化合物(e)的質譜分析(negative測定)圖。圖15是糖化合物(f)的質譜分析(negative測定)圖。圖16是糖化合物(g)的質譜分析(negative測定)圖。圖17是糖化合物(h)的質譜分析(negative測定)圖。圖18是糖化合物(i)的質譜分析(negative測定)圖。圖19是糖化合物(a)的mass-mass譜分析(negative測定)圖。圖20是糖化合物(b)的mass-mass譜分析(negative測定)圖。圖21是糖化合物(c)的mass-mass譜分析(negative測定)圖。圖22是糖化合物(d)的mass-mass譜分析(negative測定)圖。圖23是糖化合物(e)的mass-mass譜分析(negative測定)圖。圖24是糖化合物(f)的mass-mass譜分析(negative測定)圖。圖25是糖化合物(g)的mass-mass譜分析(negative測定)圖。圖26是糖化合物(h)的mass-mass譜分析(negative測定)圖。圖27是糖化合物(i)的mass-mass譜分析(negative測定)圖。圖28是糖化合物(a)的1H-NMR譜圖。圖29是糖化合物(b)的1H-NMR譜圖。圖30是糖化合物(c)的1H-NMR譜圖。圖31是糖化合物(d)的1H-NMR譜圖。圖32是糖化合物(e)的1H-NMR譜圖。圖33是糖化合物(f)的1H-NMR譜圖。圖34是糖化合物(g)的1H-NMR譜圖。圖35是糖化合物(h)的1H-NMR譜圖。圖36是糖化合物(i)的1H-NMR譜圖。圖37是表示作為本發(fā)明的第2項發(fā)明的酶的pH和相對活性(％)的關系圖。圖38是表示作為本發(fā)明的第2項發(fā)明的酶的反應溫度(℃)和相對活性(％)的關系圖。圖39是表示對作為本發(fā)明的第2項發(fā)明的酶進行處理的pH和殘余活性(％)的關系圖。圖40是表示對作為本發(fā)明的第2項發(fā)明的酶進行處理的溫度和殘余活性(％)的關系圖。圖41是利用DEAE-SepharoseFF分離糖化合物(a)-(i)時的洗脫圖。圖42是利用DEAE-SepharoseFF分離糖化合物(h)和(i)時的洗脫圖。以下，詳細地說明本發(fā)明。本發(fā)明的第2項發(fā)明中使用的菌株只要是屬于黃桿菌(Flavobact-erium)屬的，具有生產內向型巖藻依聚糖分解酶能力的菌株，無論哪種菌株都可以。舉一個具體的具有生產內向型巖藻依聚糖分解酶能力的菌株，例如，F(xiàn)lavobacteriumsp.SA-0082菌株。如果讓來自該菌株的內向型巖藻依聚糖分解酶作用于巖藻依聚糖，可以得到作為本發(fā)明的第一項發(fā)明的糖化合物。本菌株是本發(fā)明者從青森縣的海水中新發(fā)現(xiàn)的菌株，該菌株的菌學性質如下。1、Flavobacteriumsp.SA-0082菌株a、形態(tài)方面的性質(1)本菌株是短桿菌。寬0.8-1.0μm長1.0-1.2μm(2)有無胞子無(3)革蘭氏染色陰性b、生理方面的性質(1)生育的溫度范圍在37℃以下可以生育。最適生育溫度是15～28℃。(2)對氧的嗜好好氧型(3)過氧化氫酶陽性(4)氧化酶陽性(5)脲酶弱陽性(6)酸的生成D-葡萄糖陽性乳糖陽性麥芽糖陽性D-甘露醇陽性蔗糖陰性海藻糖陰性(7)水解淀粉陰性明膠陽性酪蛋白陰性七葉苷陽性(8)硝酸鹽的還原陰性(9)吲哚的生成陰性(10)硫化氫的生成陰性(11)奶的凝固陰性(12)鈉的需求性陽性(13)鹽的需求性在0％食鹽培養(yǎng)基中的生育陰性在1％食鹽培養(yǎng)基中的生育陰性在海水培養(yǎng)基中的生育陽性(14)醌系甲基萘醌6(15)菌體內DNA的GC含量32％(16)OF-測定0(17)菌落顏色黃色(18)運動性無(19)滑動性無本菌株被認為是Bergey′sManualofSystematicBacteriology、第一卷(1984)，以及Bergey′sManualofDeterminativeBacteriology、第九卷(1994)記載的水生黃桿菌(Flavobacteriumaquatile)、以及Flavobacteriummeningosepticum的類緣細菌，但是，前者在消化葡萄糖后不形成酸方面，在不能分解酪蛋白方面，能夠分解七葉苷方面，可以使明膠液化方面，對脲酶顯陽性方面是不同的。而后者在不能分解酪蛋白方面，在37℃下生育緩慢方面是不同的。因此，將本菌株鑒定為屬于Flavobacterium的細菌，命名為Flavobacteriumsp.SA-0082。上述菌株表示為Flavobacteriumsp.SA-0082，以FERMBP-5402(原保藏日平成7年3月29日，向國際保藏單位的移管申請日平成8年2月15日)保藏于國立生命科學和人體技術研究所〖日本國茨城縣筑波市東1丁目1番3號(郵政編碼305)〗。本發(fā)明的第2項發(fā)明中使用的菌株的培養(yǎng)基中加的營養(yǎng)源只要是使用的菌株可以利用的、能夠生產內向型巖藻依聚糖分解酶的培養(yǎng)基就可以，作為碳源，例如可以利用巖藻依聚糖、海藻粉末、藻酸、巖藻糖、葡萄糖、甘露醇、甘油糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖、淀粉等，作為氮源可以利用酵母提取液、蛋白胨、酪蛋白水解物、玉米漿、肉湯、脫脂大豆、硫銨、氯化銨等比較合適。此外，也可以加入鈉鹽、磷酸鹽、鎂鹽、鋅鹽等無機物，以及金屬鹽類。另外，本菌株在含有上述營養(yǎng)源的海水或人工海水中也可以非常好地生育。在培養(yǎng)內向型巖藻依聚糖分解酶的生產菌時，產量隨培養(yǎng)條件變動，但一般培養(yǎng)溫度為15～30℃、培養(yǎng)基的pH為5～9比較好，在5～72小時的通氣攪拌培養(yǎng)下，本發(fā)明的內向型巖藻依聚糖分解酶的產量達到最高。當然要根據(jù)使用的菌株、培養(yǎng)基的組成等來設定培養(yǎng)條件，使本發(fā)明的內向型巖藻依聚糖分解酶的產量達到最高。作為本發(fā)明的第2項發(fā)明的內向型巖藻依聚糖分解酶既存在于菌體中也存在于培養(yǎng)物上清中。在適當?shù)呐囵B(yǎng)基中培養(yǎng)上述Flavobacteriumsp.SA-0082菌株，收集該菌體，利用通常的破碎細胞的手段，例如通過超聲處理等破碎菌體得到無細胞提取液。然后，利用通常使用的純化手段從該提取液中可以得到純化的酶制品。例如，利用鹽析、離子交換層析、疏水柱層析、凝膠過濾等進行純化，可以得到不含其它的巖藻依聚糖分解酶的純化了的作為本發(fā)明的第2項發(fā)明的內向型巖藻依聚糖分解酶。另外，由于在從上述培養(yǎng)液除去菌體的上清中也存在大量的這種酶(菌體外酶)，所以，利用與菌體內酶同樣的純化手段也可以純化。作為本發(fā)明的第2項發(fā)明的內向型巖藻依聚糖分解酶的化學以及物理化學性質如下，菌體內酶、菌體外酶除了分子量外都表示出同樣的性質。(I)作用作用于巖藻依聚糖，至少可以使上述式(7)和式(8)表示的糖化合物游離出來。(II)最適pH該酶的最適pH是6～10(圖37)。即，圖37是表示該酶的pH和相對活性關系的圖?？v軸表示相對活性(％)，橫軸表示pH。(III)最適溫度該酶的最適溫度是30-40℃(圖38)。即，圖38是表示該酶的溫度和相對活性關系的圖?？v軸表示相對活性(％)，橫軸表示溫度℃。(IV)pH穩(wěn)定性該酶在pH6～11.5之間穩(wěn)定(圖39)。即，圖39是表示對該酶進行處理的pH和殘余活性(％)的關系圖，縱軸表示殘余活性(％)，橫軸表示pH。(V)溫度穩(wěn)定性該酶大約在30℃以下穩(wěn)定(圖40)。即，圖40是表示該酶的處理溫度和殘余活性(％)的關系圖，縱軸表示殘余活性(％)，橫軸表示處理溫度℃。(VI)分子量利用SephacrylS-200(Pharmacia)凝膠過濾法求該酶的分子量時，F(xiàn)lavobacteriumsp.SA-0082菌株的菌體外酶的分子量大約是7萬，菌體內酶是大約是46萬。(VII)酶活性的測定方法
技術領域：
：本發(fā)明的第2項發(fā)明的內向型巖藻依聚糖分解酶的酶活性的測定按如下方式進行。即，將2.5％的取自竹籃孔樣花紋海帶(kjellmaniellacrassifolia)的巖藻依聚糖溶液50μl、10μl的本發(fā)明的第2項發(fā)明的內向型巖藻依聚糖分解酶與含有60μl的667mM氯化鈉的83mM的磷酸緩沖液(pH7.5)混合攪拌，于230nm測定吸光度(AT)。作為對照，只用溶解本發(fā)明的酶的上述緩沖液代替作為本發(fā)明的第2項發(fā)明的內向型巖藻依聚糖分解酶，利用同樣的條件使其反應得到反應產物，以及只使用水代替巖藻依聚糖溶液進行反應得到反應產物，分別測定它們的吸光度(AB1和AB2)。1單位的酶定義為于上述反應體系中一分鐘使1μmol的甘露糖和糖醛酸之間的糖苷鍵切開的酶量。切開的鍵的定量以脫離反應時生成的不飽和糖醛酸的毫摩爾分子吸光系數(shù)作為5.5來進行計算。另外，酶的活性通過下式可以求得。(AT-AB1-AB2)×2.105×120/5.5×105×0.01×180＝U/ml2.105測定吸光度的樣品液量(ml)。120酶反應液的液量(μl)5.5不飽和糖醛酸在230nm的毫摩爾分子吸光系數(shù)(/mM)105稀釋用的反應液液量(μl)0.01酶量(ml)180反應時間(分)蛋白質的定量是通過測定酶液在280nm的吸光度進行的。此時，將1mg/ml的蛋白質的吸光度作為1.0計算。本發(fā)明者按如下所敘，確定了本發(fā)明的第2項發(fā)明的內向型巖藻依聚糖分解酶的作用機制。(1)竹籃孔樣花紋海帶巖藻依聚糖的制備利用自由粉碎機M-2型(奈良機械制作所制)將干燥的竹籃孔樣花紋海帶粉碎，在10倍量的85％甲醇中于70℃處理2小時后，過濾，將殘渣在10倍量的甲醇中于70℃處理2小時，過濾。向殘渣中加入20倍量的水，于100℃處理3小時后，過濾，得提取液。將提取液的鹽濃度調到與400mM的氯化鈉溶液相同后，添加氯化十六(烷)基吡啶鎓直到不產生沉淀為止。用乙醇充分洗凈，完全除去氯化十六(烷)基吡啶鎓，利用限界過濾器(過濾膜的排阻分子量是10萬)(Amicon社制)脫鹽和除去低分子，通過離心分離除去生成的沉淀。將上清冷凍干燥得到精制的竹籃孔樣花紋海帶巖藻依聚糖。收率大約是干燥的竹籃孔樣花紋海帶粉末重量的4％。(2)利用內向型巖藻依聚糖分解酶分解巖藻依聚糖以及分解物的純化使作為本發(fā)明的第2項發(fā)明的內向型巖藻依聚糖分解酶作用于純化的竹籃孔樣花紋海帶巖藻依聚糖進行分解物的大量制備。即、將5％的竹籃孔樣花紋海帶巖藻依聚糖溶液600ml、100mM的磷酸緩沖液(pH8.0)750ml和4M的氯化鈉150ml以及1750mU/ml的本發(fā)明的內向型巖藻依聚糖分解酶溶液3.43ml混合，于25℃反應144小時。用孔徑3500的透析膜對反應液透析，收集分子量3500以下的級份。用MicroAcilyzer-G3(旭化成社制)脫鹽后，經DEAE-SepharoseFF分成(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)和(i)9個級分。圖41給出了其洗脫圖。橫軸表示級分號，左邊的縱軸以及圖中的黑實心圓點用480nm的吸光度表示用酚硫酸法測定的糖含量，右邊的縱軸以及圖中的空心圓點用235nm的吸光度表示不飽和葡糖醛酸的含量，最右邊的縱軸以及圖中的虛線表示洗脫液中的醋酸銨濃度(M)。各個級分的級分號分別是，(a)42～43、(b)84～91、(c)51～52、(d)79、(e)102～103、(f)62～63、(g)45、(h)75、以及(i)77。就級分(h)和(i)收集上述的級分64～78，利用DEAE-SepharoseFF進行再純化。圖42給出了其洗脫圖。橫軸表示級分號，左邊的縱軸以及圖中的實心圓點用480nm的吸光度表示用酚硫酸法測定的糖含量，右邊的縱軸以及圖中的空心圓點用235nm的吸光度表示不飽和葡糖醛酸的含量，最右邊的縱軸以及圖中的虛線表示洗脫液中的醋酸銨濃度(M)。各個級分的級分號分別是(h)92～96、以及(i)99～103。(3)酶反應生成物的結構解析a、各級分均一性的確認將上述的(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)和(i)9個級分各取一部分，使用GlycoTAG和GlycoTAGReagentKit(都是寶酒造社制)使其還原性末端進行2-氨基吡啶化(PA化)，得到各個PA化糖(PA-a)、(PA-b)、(PA-c)、(PA-d)、(PA-e)、(PA-f)、(PA-g)、(PA-h)和(PA-i)。利用HPLC判明它們是否均一。HPLC的條件如下。裝置L-6200型(日立制作所制)柱子L-柱(4.6×250mm){(財)化學藥品檢查協(xié)會}洗脫液對于前述式(7)、(8)、和(9)[(PA-a)、(PA-b)、(PA-c)]物質，用50mM醋酸三乙基胺(pH5.5)對于前述式(10)、(12)、(13)、和(15)[(PA-d)、(PA-f)、(PA-g)、和(PA-i)]物質，使用100mM醋酸三乙基胺(pH5)。對于前述式(11)[(PA-e)]物質，從0分鐘直到10分鐘用200mM醋酸三乙基胺(pH3.8)，從10分鐘直到60分鐘，200mM醋酸三乙基胺(pH3.8)和含有0.5％四氫呋喃的200mM醋酸三乙基胺(pH3.8)的比率由100∶0直線變化到20∶80。對于前述式(14)[(PA-h)]物質，從0分鐘直到60分鐘，200mM醋酸三乙基胺(pH3.8)和含有0.5％四氫呋喃的200mM醋酸三乙基胺(pH3.8)的比率由80∶20直線變化到50∶50。檢測使用熒光檢測器F-1150(日立制作所制)，于激發(fā)波長320nm、熒光波長400nm下檢測。流速1ml/分柱溫40℃b、酶反應生成物的還原末端糖以及中性糖組成的分析各個PA化糖(PA-a)、(PA-b)、(PA-c)、(PA-d)、(PA-e)、(PA-f)、(PA-g)、(PA-h)和(PA-i)用4N的鹽酸于100℃水解3小時，通過HPLC檢測還原末端糖。另外，使用GlycoTAG和GlycoTAGReagentKit(都是寶酒造社制)，使該水解物的還原末端PA化，利用HPLC研究中性糖組成。HPLC的條件如下。裝置L-6200型(日立制作所制)柱子PalpakA型(4.6×150mm)(寶酒造社制)洗脫液700mM硼酸緩沖液(pH9.0)∶乙腈＝9∶1檢測使用熒光檢測器F-1150(日立制作所制)，于激發(fā)波長310nm、熒光波長380nm下檢測。流速0.3ml/分柱溫65℃結果，(PA-a)、(PA-b)、(PA-c)、(PA-d)、(PA-e)、(PA-f)、和(PA-i)的還原末端糖都是甘露糖。而作為中性糖組成，(PA-a)、(PA-b)、(PA-c)、(PA-e)、(PA-f)、和(PA-i)含有等摩爾的甘露糖和巖藻糖，(PA-d)中的甘露糖和巖藻糖比率是2∶1。(PA-g)以及(PA-h)的還原末端糖都是半乳糖，作為中性糖組成，(PA-g)中半乳糖和巖藻糖的比是1∶2，而(PA-h)中半乳糖和巖藻糖的比是2∶1。另外，為了研究作為構成糖之一的甘露糖的立體構型，利用F-kit葡萄糖/果糖以及磷酸甘露糖異構酶(都是BoehringerMannheim-Yamanouchi制)，根據(jù)說明書構建可以只測定D-甘露糖的反應系，用該反應系測定用2N鹽酸于100℃，對各100μg的(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、和(i)水解3小時后被中和的產物。其結果因為從(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、和(i)中都檢測出D-甘露糖，所以判明(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、和(i)的構成糖甘露糖都是D型的。為了研究作為(g)以及(h)構成糖之一的半乳糖的立體構型，利用可以只能檢測出D型的半乳糖的F-試劑盒乳糖/半乳糖(BoehringerMannheim-Yamanouchi制)。即用這一試劑盒測定用2N鹽酸于100℃對各100μg的(g)以及(h)水解3小時后被中和的產物。其結果，因為從(g)以及(h)檢測出半乳糖，所以判明(g)以及(h)的構成糖半乳糖都是D型的。另外另一種構成糖巖藻糖的立體構型按照ClinicalChemistry第36卷，第474-476頁(1990)記載的方法，用該反應系測定用2N鹽酸于100℃，對各100μg的(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)和(i)水解3小時后被中和的產物。利用該反應系不能檢測出D-巖藻糖，只能檢測出L-巖藻糖。結果從(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)和(i)中檢測出L-巖藻糖。c、酶反應生成物的分子量的分析使用API-III質量分析器(Perkin-ElmerScience社制)，對(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)和(i)進行質量分析，它們的分子量分別是564、724、1128、1062、1448、644、632、1358、和1288。(b)和(c)是由2價的陰離子形成主要的信號。(d)中可以檢測出1價的離子和帶有鈉的1價的離子和2價的離子。(e)中可以檢測出帶有4個鈉離子的2價的離子，帶有3個鈉離子的3價的離子，帶有1個鈉離子的4價的離子等。(f)中可以檢測出帶有2個鈉離子的1價的離子。(g)中可以檢測出1價的離子和結合了鈉的1價的離子和2價的離子。(h)中可以檢測出帶有4個、3個、2個、和1個鈉離子的、分別為1價、2價、3價、4價的離子等。(i)中2個硫酸基解離，可以檢測出帶有1個鈉離子的1價的離子以及獲得2個硫酸基的2價的離子。另外，通過NegativedMS/MS的分析，(a)中可以檢測出一價的硫酸離子(分子量97)、由不飽和己糖醛酸得到水分子和氫離子的一價離子(分子量157)、由不飽和己糖醛酸得到氫離子的一價離子(分子量175)、從巖藻糖和硫酸結合的產物得到水分子和氫離子的一價離子(分子量225)、從巖藻糖和硫酸結合的產物得到氫離子的一價離子(分子量243)、由不飽和己糖醛酸和甘露糖結合的產物得到水分子和氫離子的一價離子(分子量319)、從巖藻糖、硫酸和甘露糖結合的產物得到氫離子的一價離子(分子量405)。同樣，通過NegativedMS/MS的分析，(b)中可以檢測出一價的硫酸離子(分子量97)、由不飽和己糖醛酸得到氫離子的一價離子(分子量175)、從巖藻糖和硫酸結合的產物得到氫離子的一價離子(分子量243)、由不飽和己糖醛酸、巖藻糖、甘露糖和2個硫酸結合的產物得到2個氫離子的2價離子(分子量321)、從巖藻糖、硫酸和甘露糖結合的產物得到氫離子的一價離子(分子量405)、由不飽和己糖醛酸、甘露糖和硫酸結合的產物得到氫離子的一價離子(分子量417)。同樣，通過NegativedMS/MS的分析，(c)中可以檢測出一價的硫酸離子(分子量97)、由不飽和己糖醛酸得到氫離子的一價離子(分子量175)、從巖藻糖和硫酸結合的產物得到水分子和氫離子的一價離子(分子量225)、從巖藻糖和硫酸結合的產物得到氫離子的一價離子(分子量243)、由不飽和己糖醛酸、甘露糖、巖藻糖和硫酸結合的產物得到2個氫離子的2價離子(分子量371)、從巖藻糖、硫酸和甘露糖結合的產物得到氫離子的一價離子(分子量405)、由不飽和己糖醛酸、甘露糖、巖藻糖、己糖醛酸和硫酸結合的產物得到水和氫離子的1價離子(分子量721)。同樣，通過NegativedMS/MS的分析，從(d)的2價離子中可以檢測出一價的硫酸離子(分子量97)、由不飽和己糖醛酸得到氫離子的一價離子(分子量175)、從巖藻糖和硫酸結合的產物得到水分子和氫離子的一價離子(分子量225)、從巖藻糖和硫酸結合的產物得到氫離子的一價離子(分子量243)、從巖藻糖、硫酸和甘露糖結合的產物得到氫離子的一價離子(分子量405)、從(d)得到2個硫酸基、2個氫離子的2價離子(分子量450)、從(d)得到1個硫酸基、2個氫離子的2價離子(分子量490)。同樣，通過NegativedMS/MS的分析，從(e)中可以檢測出一價的硫酸離子(分子量97)、從巖藻糖和硫酸結合的產物得到水分子和氫離子的一價離子(分子量225)、從巖藻糖和硫酸結合的產物得到氫離子的一價離子(分子量243)、從巖藻糖和2分子的硫酸基以及鈉離子結合的產物得到2個氫離子的一價離子(分子量345)、從(e)得到2個硫酸基、帶有3個鈉離子和6個氫離子的3價離子(分子量450)、從(e)得到1個硫酸基、得到6個氫離子、帶有3個鈉離子的3價離子(分子量476)、由不飽和已糖醛酸、甘露糖、巖藻糖和硫酸結合的產物得到氫離子的1價離子(分子量563)、以及由不飽和己糖醛酸、甘露糖、巖藻糖和3分子硫酸結合的產物得到水分子和氫離子的1價離子(分子量705)。同樣，通過NegativedMS/MS的分析，從(f)中可以檢測出一價的硫酸離子(分子量97)、從巖藻糖和硫酸結合的產物得到氫離子的一價離子(分子量243)、由不飽和己糖醛酸、甘露糖、硫酸和鈉結合的產物得到水和氫離子的1價離子(分子量421)。同樣，通過NegativedMS/MS的分析，從(g)中可以檢測出從巖藻糖、硫酸和甘露糖結合的產物得到氫離子的一價離子(分子量405)、以及由2分子巖藻糖、1分子半乳糖和1分子硫酸基結合的產物得到氫離子的1價離子(分子量551)。同樣，通過NegativedMS/MS的分析，可以從3分子鈉結合于(h)、并得到5分子氫離子的產物檢測出一價的硫酸離子(分子量97)、從巖藻糖和硫酸結合的產物得到水分子和氫離子的一價離子(分子量225)、以及由2分子巖藻糖、4分子半乳糖和3分子硫酸基結合的產物得到1分子氫離子的1價離子(分子量1197)。同樣，通過NegativedMS/MS的分析，可以從由(i)得到2個硫酸基的2價離子中檢測出一價的硫酸離子(分子量97)、從巖藻糖、2分子硫酸和鈉結合的產物得到氫離子的一價離子(分子量345)。d、酶反應生成物的糖組成的分析從上述質量分析的結果顯示出(a)、(b)、(c)、(d)、(f)和(i)在分子內含有不飽和己糖醛酸的可能性極高。為了證明酶反應生成物的分子內存在有不飽和鍵的己糖醛酸，進行了如下的實驗。如果分子內存在有不飽和鍵，在230～240nm處應有強的吸收。因此，測定純化的(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)和(i)的各個寡糖水溶液的230～240nm的吸收度，在(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)及(i)的水溶液中存在強的吸收，則表明分子內存在有不飽和鍵。因為隨著該酶對巖藻糖的分解反應進行的同時，230～240nm的吸收度的增加也被證實，所以，強烈地顯示出該酶通過脫離反應切斷巖藻糖中的甘露糖和己糖醛酸之間或半乳糖和己糖醛酸之間的糖苷鍵。幾乎所有的酶反應生成物其非還原末端帶有不飽和的己糖醛酸，還原末端是甘露糖。由此表明在制備的巖藻依聚糖中存在著己糖醛酸和甘露糖交互并列的分子。由于巖藻依聚糖的很多構成糖是巖藻糖，所以巖藻依聚糖比一般的多糖更容易被酸水解。而己糖醛酸和甘露糖之間的結合鍵對酸是比較強的。本發(fā)明者為了弄清存在于竹籃孔樣花紋海帶巖藻依聚糖的分子內的己糖醛酸和甘露糖交互結合的分子種類中的己糖醛酸的種類，參考CarbohydrateResearch第125卷，第283-290頁，1984年的方法，首先將巖藻依聚糖溶解于0.3M的硝酸中，于100℃處理3小時，然后對處理物進行分子量分級，收集分子量在3000以上的級分，再利用陰離子交換樹脂收集吸附級分。將該物質冷凍干燥后用4N的鹽酸進行酸水解，pH調整到8后，進行PA化，利用HPLC進行糖醛酸的分析。HPLC的條件如下。裝置L-6200型(日立制作所制)柱子PalpakN型(4.6×250mm)(寶酒造社制)洗脫液200mM醋酸-三乙基胺緩沖液(pH7.3)∶乙腈＝25∶75檢測使用熒光檢測器F-1150(日立制作所制)，于激發(fā)波長320nm、熒光波長400nm下檢測。流速0.8ml/分柱溫40℃而PA化的己糖醛酸的標準物質中，葡糖醛酸是Sigma制，半乳糖醛酸是和光純藥社制，艾杜糖醛酸是Sigma制的4-methylumbelliferyl-α-L-iduronide的水解產物，甘露糖醛酸和葡糖醛酸是根據(jù)Actachemicascandinavicaj(第15卷第1397-1398頁、1961年)記載的方法將和光純藥社制的藻酸水解后再將經陰離子交換樹脂分離的產物PA化后得到的。結果表明上述巖藻依聚糖的分子中含有的己糖醛酸只是葡糖醛酸。利用陰離子交換樹脂將上述分子的水解物中的葡糖醛酸分離成D-甘露糖，冷凍干燥后測定其比旋度，判明呈現(xiàn)右旋的葡糖醛酸是D-葡糖醛酸。另外，關于預先用本發(fā)明的第2項發(fā)明的內向型巖藻依聚糖分解酶處理取自竹籃孔樣花紋海帶的巖藻依聚糖的產物雖然也和上述一樣用硝酸水解但檢測不出D-葡糖醛酸和甘露糖交互結合成的聚合物。由此判明本發(fā)明的酶通過脫離反應切斷的巖藻依聚糖的分子的骨架構造具有D-葡糖醛酸和甘露糖交互結合的構造。另外，為了研究D-葡糖醛酸和甘露糖各自的結合位置和糖苷鍵的異頭構型，對通過硝酸水解得到的聚合物進行了NMR分析。聚合物的NMR分析結果如下。其中，在1H-NMR的化學位移值，是將三乙基胺的甲基的化學位移值表示為1.13ppm，在13C-NMR，其化學位移值表示為9.32ppm。1H-NMR(D2O)δ5.25(1H，br-s，1-H)、4.32(1H，d，J＝7.6Hz，1′-H)、4.00(1H，br-s，2-H)、3.71(1H.m.5′-H)、3.69(1H，m，5-CH的H)、3.68(1H，m.3-H)、3.63(1H，m，5-CH的H)、3.63(1H，m，4′-H)、3.57(1H，m，4-H)、3.54(1H，m，3′-H)、3.53(1H，m，5-H)、3.25(1H，t，J＝8.5Hz，2′-H)13C-NMR(D2O)δ175.3(5′-COOHのC)、102.5(1′-C)、99.6(1-C)、78.5(2-C)、77.9(4′-C)、77.0(3′-C)、76.7(5′-C)、73.9(5-C)、73.7(2′-C)、70.6(3-C)、67.4(4-C)、61.0(5-CH2OH的C)峰的歸屬號如下式(16)。(16)D-葡糖醛酸的1位的立體構型從其連位結合常數(shù)(vicinalbingingconstant)為7.6Hz可以確定是β-D-葡糖醛酸。而甘露糖的1位的立體構型從其連位結合常數(shù)為5.25ppm可以確定是α-D-甘露糖。構成糖的結合形式利用異核1H檢測法HMBC確定。1H-NMR的歸屬中使用DQF-COSY法和HOHAHA法，在13C-NMR的歸屬中使用HSQC法。通過HMBC光譜，在1-H和4′-C之間以及4′-H和1-C之間、1′-H和2-C之間以及2-H和1′-C之間分別看到交叉峰。由此表明D-葡糖醛酸通過β鍵與D-甘露糖的2位結合，D-甘露糖通過α鍵與D-葡糖醛酸的4位結合。e、酶反應生成物的的糖結合形式以及硫酸基的結合位置的分析為了研究構成糖和硫酸基的結合形式，利用500MHz核磁共振裝置JNM-α500型(日本電子造)對酶反應生成物進行NMR光譜分析。從分析結果可以判明(a)是前式(7)表示的結構，(b)是前式(8)表示的結構，(c)是前式(9)表示的結構，(d)是前式(10)表示的結構，(e)是前式(11)表示的結構，(f)是前式(12)表示的結構，(g)是前式(13)表示的結構，(h)是前式(14)表示的結構，(i)是前式(15)表示的結構。即，(a)是在作為還原末端殘基的D-甘露糖上結合了不飽和的D-葡糖醛酸和結合了結合有硫酸基的L-巖藻糖的結構；(b)是在結合了硫酸基的還原末端殘基D-甘露糖上結合了結合有不飽和的D-葡糖醛酸和2個硫酸基的L-巖藻糖的結構；(c)是在還原末端殘基D-甘露糖上結合了D-葡糖醛酸和結合有硫酸基的L-巖藻糖結構，其D-葡糖醛酸結合了D-甘露糖，而該D-甘露糖又結合了結合有不飽和D-葡糖醛酸和硫酸基的L-巖藻糖；(d)是在還原末端殘基D-甘露糖上結合了結合有D-葡糖醛酸和2個硫酸基的L-巖藻糖的結構，該D-葡糖醛酸結合了D-甘露糖，而該D-甘露糖又結合了不飽和D-葡糖醛酸；(e)是在還原末端殘基D-甘露糖上結合了結合有硫酸基、D-葡糖醛酸和2個硫酸基的L-巖藻糖，該D-葡糖醛酸結合了帶有硫酸基的D-甘露糖，而該D-甘露糖又結合了帶有2分子的硫酸基的L-巖藻糖和不飽和D-葡糖醛酸；(f)是在結合了硫酸基的還原末端殘基D-甘露糖上結合了結合有不飽和的D-葡糖醛酸和硫酸基的L-巖藻糖的結構，(g)是在還原末端殘基D-半乳糖上結合了結合有硫酸基的L-巖藻糖結構，而該L-巖藻糖又結合了結合有硫酸基的L-巖藻糖；(h)具有以結合了硫酸基的還原末端殘基D-半乳糖為起點分成2個鏈的結構，其一條糖鏈是在D-半乳糖上結合帶有硫酸基的L-巖藻糖，在該L-巖藻糖上結合帶有硫酸基的L-巖藻糖，而另一條糖鏈是在結合了硫酸基的D-半乳糖上結合了帶有硫酸基的D-半乳糖的結構；(i)是在還原末端殘基D-甘露糖上結合了結合有硫酸基、D-葡糖醛酸和硫酸基的L-巖藻糖結構，該D-葡糖醛酸又結合了D-甘露糖，而該D-甘露糖又結合了帶有2分子的硫酸基的L-巖藻糖和不飽和的D-葡糖醛酸。使本發(fā)明的第2項發(fā)明的內向型巖藻依聚糖分解酶作用于巖藻依聚糖，得到包含在本發(fā)明的第1項發(fā)明的糖化合物中的化合物。下面給出了用作為本發(fā)明的第1項發(fā)明的糖化合物的例子式(7)、(8)、(9)、(10)、(11)、(12)、(13)、(14)以及式(15)所表示的化合物的物理性質，即(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)以及(i)的物理性質。圖1、2、3、4、5、6、7、8以及9中給出了各個吡啶(-2-)胺基化糖化合物(PA-a)、(PA-b)、(PA-c)、(PA-d)、(PA-e)、(PA-f)、(PA-g)、(PA-h)和(PA-i)的HPLC的洗脫圖，圖中縱軸表示相對熒光強度，橫軸表示保留時間(分)。而進一步在圖10給出了(a)的、圖11給出了(b)的、圖12給出了(c)的、圖13給出了(d)的、圖14給出了(e)的、圖15給出了(f)的、圖16給出了(g)的、圖17給出了(h)的、圖18給出了(i)的質譜圖，圖19給出了(a)、圖20給出了(b)、圖21給出了(c)、圖22給出了(d)、圖23給出了(e)、圖24給出了(f)、圖25給出了(g)、圖26給出了(h)、圖27給出了(i)的mass-mass譜圖，各圖中縱軸表示相對強度(％)，橫軸表示m/z值。而圖28給出了(a)、圖29給出了(b)、圖30中給出了(c)、圖31給出了(d)、圖32給出了(e)、圖33給出了(f)、圖34給出了(g)、圖35給出了(h)、圖36給出了(i)的1H-NMR光譜，各圖中縱軸表示信號強度，橫軸表示化學位移值(ppm)。在1H-NMR中的化學位移值中，HOD的化學位移值表示為4.65ppm。(a)的物理性質分子量564MSm/z563[M-H+]-MS/MSm/z97[HSO4]-、157[不飽和的D-葡糖醛酸-H2O-H+]-、175[不飽和的D-葡糖醛酸-H+]-、225[L-巖藻糖硫酸-H2O-H+]-、243[L-巖藻糖硫酸-H+]-、319[不飽和D-葡糖醛酸和D-甘露糖結合的產物-H2O-H+]-、405[M-不飽和的D-葡糖醛酸-H+]-、483[M-SO3-H+]-1H-NMR(D2O)δ5.78(1H，d，J＝3.7Hz，4″-H)、5.26(1H，d，J＝1.2Hz，1-H)、5.12(1H，d，J＝4.0Hz，1′-H)、5.03(1H，d，J＝6.1Hz，1″-H)、4.47(1H，d-d，J＝3.4，10.4Hz，3′-H)、4.21(1H，br-s，2-H)、4.12(1H，m，5′-H)、4.10(1H，d-d，J＝3.7.5.8Hz，3″-H)、4.03((1H，d，J＝3.4Hz，4′-H)、3.86(1H，m，3-H)、3.83(1H，d-d，J＝4.0，10.4Hz，2′-H)、3.72(1H，m，4-H)、3.72(1H，m，5-H)、3.70(2H，m，5-CH2的H2)、3.65(1H，d-d，J＝5.8，6.1Hz，2″-H)、1.08(3H，d，J＝6.7Hz，5′-CH3的H3)糖組成L-巖藻糖∶不飽和的D-葡糖醛酸∶D-甘露糖＝1∶1∶1(各1分子)硫酸基1分子(L-巖藻糖的3位)而1H-NMR中的峰的歸屬序號如下式(17)。(17)(b)的物理性質分子量724MSm/z723[M-H+]-、361[M-2H+]2-MS/MSm/z97[HSO4]-、175[不飽和的D-葡糖醛酸-H+]-、243[L-巖藻糖硫酸-H+]-、321[M-SO3-2H+]2、405[M-不飽和的D-葡糖醛酸-2SO3-H+]-、417[M-L-巖藻糖-2SO3-H+]-1H-NMR(D2O)δ5.66(1H，d，J＝3.4Hz，4″-H)、5.27(1H，d，J＝7.3Hz，1″-H)、5.25(1H，d，J＝1.8Hz，1-H)、5.21(1H，d，J＝3.7Hz，1′-H)、4.50(1H，d，J＝3.1Hz，4′-H)、4.32(1H，q，J＝6.7Hz，5′-H)、4.27(1H，d-d，J＝3.7，10.4Hz，2′-H)、4.21(1H，d-d，J＝3.4，6.7Hz，3″-H)、4.18((1H，d-d，J＝1.8，11.0Hz，5-CH的H)、4.15(1H，br-s，2-H)、4.10(1H，d-d，J＝5.8.11.0Hz、5-CH的H)、3.99(1H，d-d，J＝3.1，10.4Hz、3′-H)、3.90(1H，m，5-H)、3.82(1H，m，3-H)、3.82(1H，m，4-H)、3.54(1H，br-t，J＝7.3Hz，2″-H)、1.11(3H，d，J＝6.7Hz，5′-CH3的H3)糖組成L-巖藻糖∶不飽和的D-葡糖醛酸∶D-甘露糖＝1∶1∶1(各1分子)硫酸基3分子(L-巖藻糖的2位和4位以及D-甘露糖的6位)而1H-NMR中的峰的歸屬號如下式(18)。(18)(c)的物理性質分子量1128MSm/z1127[M-H+]MS/MSm/z97[HSO4]-、175[不飽和的D-己糖醛酸-H+]-、225[L-巖藻糖硫酸-H2O-H+]-、243[L-巖藻糖硫酸-H+]-、371[M-不飽和的D-葡糖醛酸-L-巖藻糖-SO3-2H+]2-、405[硫酸化L-巖藻糖和D-甘露糖結合的產物-H+]-、721[M-D-甘露糖-L-巖藻糖-SO3-H2O-H+]1H-NMR(D2O)δ5.69(1H，d，J＝3.7Hz，(4)″-H)、5.34(1H，s，(1)-H)、5.16(1H，s，1-H)、5.10(1H，d，J＝4.0Hz，(1)′-H)、5.05(1H，d，J＝3.7Hz、1′-H)、4.93(1H，d，J＝6.4Hz，(1)″-H)、4.50(1H，d-d，J＝3.4，10.7Hz、3′-H)、4.47(1H，d-d，J＝3.4，10.4Hz，(3)′-H)、4.39(1H，d，J＝7.9Hz，1″-H)、4.33(1H，br-s，(2)-H)、4.14(1H，m，2-H)、4.12(1H，m，(3)″-H)、4.12(1H，m，5-H)、4.12(1H，m，(5)′-H)、4.04(1H，m，4′-H)、4.03(1H，m，(4)′-H)、3.85(1H，m，2′-H)、3.85(1H，m，(2)′-H)、3.82(1H，m，3-H)、3.82(1H，m，(3)-H)、3.73(1H，m，4-H)、3.73(1H，m，5-H)、3.73(1H，m，(4)-H)、3.70(2H.m.5-CH2的H2)、3.70(2H，m，(5)-CH2的H2)、3.67(1H，m，5″-H)、3.62(111，m，4″-H)、3.62(1H.m，(2)″-H)、3.62(1H，m，(5)-H)、3.51(1H.t.J＝8.9Hz，3″-H)、3.28(1H.t.J＝7.9Hz，2″-H)、1.09(3H，d，J＝6.7Hz.(5)′-CH3的H3)、1.07(1H，d，J＝6.7Hz，5′-CH3的H3)糖組成L-巖藻糖∶不飽和的D-葡糖醛酸∶D-葡糖醛酸∶D-甘露糖＝2∶1∶1∶2(L-巖藻糖和D-甘露糖各2分子，不飽和的D-葡糖醛酸和D-葡糖醛酸各1分子)硫酸基2分子(每個L-巖藻糖的3位)而1H-NMR中的峰的歸屬序號如下式(19)。(19)(d)的物理性質分子量1062MSm/z1061[M-H+]MS/MSm/z97[HSO4]-、175[不飽和的己糖醛酸-H+]-、225[L-巖藻糖硫酸-H2O-H+]-、243[L-巖藻糖硫酸-H+]-、405[L-巖藻糖和D-甘露糖和硫酸基結合的產物-H+]-、450[M-2SO3-2H+]2-、490[M-SO3-2H+]2-1H-NMR(D2O)δ5.67(1H，d，J＝3.7Hz，(4)″-H)、5.32(1H，br-s，(1)-H)、5.17(1H，d，J＝3.5Hz，1′-H)、5.17(1H，br-s，1-H)、4.93(1H，d，J＝6.4Hz，(1)″-H)、4.71(1H，m，1″-H)、4.53(1H，d，J＝3.4Hz，4′-H)、4.33(1H，q，J＝6.7Hz，5′-H)、4.28(1H，d-d，J＝3.5，11.0Hz，2′-H)、4.18(1H，m，5-CH2的H)、4.13(1H，m，(2)-H)、4.12(1H，m，(3)″-H)、4.08(1H，m，5-CH2的H)、4.07(1H，m，2-H)、3.98(1H，d-d，J＝3.4，11.0，3′-H)、3.88(1H，m，5-H)、3.82(1H，m，4″-H)、3.78(1H，m，3-H)、3.78(1H，m，4-H)、3.78(1H，m，(3)-H)、3.67(2H，m，(5)-CH2的H2)、3.63(1H，m，(2)″-H)、3.60(1H，m，3″-H)、3.59(1H，m，5″-H)、3.57(1H，m，(4)-H)、3.57(1H，m，(5)-H)、3.16(1H，t，J＝7.9Hz，2″-H)、1.10(3H，d，J＝6.7Hz，5′-CH3的H3)糖組成L-巖藻糖∶不飽和的D-葡糖醛酸∶D-葡糖醛酸∶D-甘露糖＝1∶1∶1∶2(L-巖藻糖、不飽和的D-葡糖醛酸、D-葡糖醛酸各1分子，D-甘露糖2分子)硫酸基3分子(L-巖藻糖的2位和4位以及還原末端一側的D-甘露糖的6位)而1H-NMR中的峰的歸屬序號如下式(20)。(e)的物理性質分子量1448MSm/z767[M+Na-6H+]2-503.7[M+3Na-6H+]3366.5[M+Na-5H+]4MS/MSm/z97[HSO4]-、225[L-巖藻糖硫酸-H2O-H+]-、243[L-巖藻糖硫酸-H+]-、345[L-巖藻糖2硫酸+Na-2H+]、450[M+3Na-2SO3-6H+]3-、477[M+3Na-SO3-6H+]3-、563[不飽和的D-葡糖醛酸和D-甘露糖、L-巖藻糖和硫酸的結合產物-H+]-、705[不飽和的D-葡糖醛酸和D-甘露糖硫酸和L-巖藻糖2硫酸的結合產物-H2O-H+]1H-NMR(D2O)δ5.58(1H，d，J＝3.4Hz，(4)″-H)、5.35(1H，br-s，(1)-H)、5.22(1H，d，J＝6.7Hz，(1)″-H)、5.19(1H，d，J＝3.7Hz，1′-H)、5.19(1H，d，J＝3.7Hz，(1)′-H)、5.16(1H，d，J＝1.8Hz，1-H)、4.62(1H，d，J＝7.6Hz，1″-H)、4.50(1H，m，4′-H)、4.50(1H，m，(4)′-H)、4.30(1H，m，5-H)、4.30(1H，m，(5)′-H)、4.30(1H，m，(5)-CH2的H)、4.25(1H，m，2′-H)、4.25(1H，m，(2)-H)、4.25(1H，m，(2)′-H)、4.20(1H，m，(5)-CH2的H)、4.18(1H，m，5-CH2的H)、4.16(1H，m，(3)″-H)、4.08(1H，m，5-CH2的H)、4.07(1H，m，2-H)、4.02(1H，m，3′-H)、4.02(1H，m，(3)′-H)、3.85(1H，m，5-H)、3.85(1H，m，(5)-H)，3.78(1H，m，3-H)、3.78(1H，m，(3)-H)、3.76(1H，m，4″-H)、3.76(1H，m，5″-H)、3.75(1H，m，4-H)，3.75(1H，m，(4)-H)、3.58(1H，m，3″-H)、3.55(1H，m，(2)″-H)、3.18(1H，t，J＝82Hz，2″-H)、1.10(3H，d.J＝6.7Hz，(5)′-CH3的H3)、1.09(3H，d，J＝6.7Hz，5′-CH3的H3)糖組成L-巖藻糖∶不飽和的D-葡糖醛酸∶D-葡糖醛酸∶D-甘露糖＝2∶1∶1∶2(L-巖藻糖和D-甘露糖各2分子，不飽和的D-葡糖醛酸和D-葡糖醛酸各1分子)硫酸基6分子(每個L-巖藻糖的2位和4位以及每個D-甘露糖的6位)而1H-NMR中的峰的歸屬序號如下式(21)。(21)(f)的物理性質分子量644MSm/z687[M+2Na-3H+]-MS/MSm/z97[HSO4]-、243[L-巖藻糖硫酸-H+]-、421[不飽和的D-葡糖醛酸和D-甘露糖硫酸+Na-H2O-2H+]-1H-NMR(D2O)δ5.60(1H，d，J＝3.4Hz，4″-H)、5.24(1H，br-s，1-H)、5.08(1H，d，J＝4.0Hz，1′-H)、4.94(1H，d，J＝6.7Hz，1″-H)、4.45(1H，d-d，J＝31，10.4Hz，3′-H)、4.20(1H，br-s，2-H)、4.14(2H，m，5-CH2的H2)、4.14(1H，m，5′-H)、4.09、(1H，m，3″-H)、4.01(1H，d，J＝3.1Hz，4′-H)、3.91(1H，m，5-H)、3.85(1H，m，3-H)、3.85(1H，m，2′-H)、3.75(1H，t，J＝9.8Hz，4-H)、3.59(1H，t，J＝6.7Hz，2″-H)、1.06(3H，d，J＝6，4Hz，5′-CH3的H3)糖組成L-巖藻糖∶不飽和的D-葡糖醛酸∶D-甘露糖＝1∶1∶1(L-巖藻糖、D-甘露糖、不飽和的D-葡糖醛酸各1分子)硫酸基2分子(L-巖藻糖的3位以及D-甘露糖的6位)而1H-NMR中的峰的歸屬序號如下式(22)。(22)(g)的物理性質分子量632MSm/z631[M-H+]-MS/MSm/z405[D-半乳糖和L-巖藻糖硫酸的結合產物-H+]-、551[L-巖藻糖硫酸和L-巖藻糖和D-半乳糖的結合產物-H+]-1H-NMR(D2O)δ5.15(1H，d，J＝4.3Hz，F(xiàn)11-H)、4.93(1H，d，J＝3.7Hz，F(xiàn)21-H)、4.53(1H，d-d，J＝2.4.10.4Hz，F(xiàn)13-H)、4.49(1H，d，J＝7.6HzG11-H)、4.46(1H，d-d，J＝3.1，10.7Hz，F(xiàn)23-H)、4.36(1H，q，J＝6.7HzF25-H)、4.14(1H，q，J＝6.7HzF15-H)、4.09(1H，d，J＝2.4HzF14-H)、4.03(1H，d，J＝3.1HzF24-H)、3.97(1H，d-d，J＝4.3，10.4Hz，F(xiàn)12-H)、3.90(1H，br-s，G14-H)、3.81(1H，d-d，J＝3.7，10.7Hz，F(xiàn)22-H)、3.59(1H，m，G13-H)、3.59(1H，m，G15-H)、3.59(2H，m，G15-CH2的H2)、3.56(1H，m，G12-H)、1.19(3H，d，J＝6.7Hz，F(xiàn)15-CH3的H3)、1.14(3H，d，J＝6.7Hz，F(xiàn)25-CH3的H3)糖組成L-巖藻糖∶D-半乳糖＝2∶1(L-巖藻糖2分子，D-半乳糖1分子)硫酸基2分子(每個L-巖藻糖的3位)而1H-NMR中的峰的歸屬序號如下式(23)。(23)(h)的物理性質分子量1358MSm/z1445[M+4Na-5H+]-MS/MSm/z97[HSO4]-、225[L-巖藻糖硫酸-H2O-H+]-、1197[M-2SO3-H+]-1H-NMR(D2O)δ5.19(1H，d，J＝4.3Hz，F(xiàn)11-H)、4.93(1H，d，J＝3.7Hz，F(xiàn)21-H)、4.62(1H，m，G21-H)、4.59(1H，m，G11-H)、4.54(1H，d-d，J＝2.7，10.6Hz，F(xiàn)13-H)、4.46(1H，m，F(xiàn)23-H)、4.46(1H，d，J＝7.6HzG31-H)、4.41(1H，br-s，G14-H)、4.41(1H，d，J＝7.6Hz，G41-H)、4.37(1H，q，J＝6.4HzF25-H)、4.27(1H，m，G13-H)、4.24(1H，br-s，G34-H)、4.21(1H，m，G33-H)、4.19(1H，m，G43-H)、4.15(1H，br-s，G44-H)、4.13(1H，q，J＝6.7Hz，F(xiàn)15-H)、4.09(1H，d，J＝2.7Hz，F(xiàn)14-H)、4.04(1H，d，J＝2.8Hz，F(xiàn)24-H)、3.98(1H，m，G15-CH2的H)、3.96(1H，d-d，J＝4.3.10.6Hz，F(xiàn)12-H)、3.88(1H，br-s，G24-H)、3.93(1H，m，G35-CH2的H)、3.86(1H，m，G15-H)、3.81(1H，m，F(xiàn)22-H)、3.81(1H，m，G15-CH2的H)、3.80(1H，m，G35-H)、3.80(1H，m，G35-CH2的H)、3.66(1H，m，G23-H)、3.65(1H，m，G12-H)、3.64(1H，m，G25-CH2的H)、3.64(1H，m，G45-CH2的H)、3.61(1H，m.G45-H)、3.58(1H，m，G22-H)、3.56(1H，m，G25-CH2的H)、3.56(1H，m，G45-CH2的H)、3.55(1H，m，G42-H)、3.54(1H，m，G25-H)、3.54(1H，m，G32-H)、1.20(3H，d.J＝6.7Hz，F(xiàn)15-CH3的H3)、1.14(3H，d，J＝6.4Hz，F(xiàn)25-CH3的H3)糖組成L-巖藻糖∶D-半乳糖＝1∶2(L-巖藻糖2分子，D-半乳糖4分子)硫酸基5分子(各L-巖藻糖的3位、還原性末端D-半乳糖的3位、以及結合于還原性末端D-半乳糖的6位的D-半乳糖的3位、以及結合于該D-半乳糖的6位的D-半乳糖的3位)而1H-NMR中的峰的歸屬序號如下式(24)。(24)(i)的物理性質分子量1288MSm/z1149[M+Na-2SO3-2H+]MS/MSm/z97[HSO4]-、345[L-巖藻糖2硫酸+Na-2H+]-、1H-NMR(D2O)δ5.68(1H，d，J＝3.4Hz，(4)″-H)、5.34(1H，br-s，(1)-H)、5.19(1H，m，1-H)、5.19(1H，m，(1)′-H)、4.94(1H，m，1′-H)、4.94(1H，d，J＝6.4Hz，(1)″-H)、4.72(1H，d，J＝7.9Hz、1″-H)、4.54(1H，m，(4)′-H)、4.48(1H，d-d，J＝33，10.6Hz，3′-H)、4.38(1H，q，J＝6.4Hz，5′-H)、4.34(1H，q，J＝6.7Hz，(5)′-H)、4.29(1H，m，(2)′-H)、4.20(1H，m，5-CH2的H)、4.14(1H.m，(2)-H)、4.13(1H，m，(3)″-H)、4.09(1H，m，5-CH2的H)、4.08(1H，m，2-H)、4.05(1H，d，J＝3.3Hz，4′-H)、3.99(1H，m，(3)′-H)、3.89(1H，m，5-H)、3.83(1H，m，4″-H)、3.81(1H，m，2′-H)、3.80(1H，m，4-H)、3.78(1H，m，3-H)、3.78(1H，m，(3)-H)、3.68(2H，m，(5)-CH2的H2)、3.62(1H，m，(2)″-H)、3.60(1H，m，3″-H)、3.60(1H，m，5″-H)、3.58(1H，m，(5)-H)、3.56(1H，m，(4)-H)、3.17(1H，t，J＝7.9Hz，2″-H)、1.15(3H，d，J＝6.4Hz，5′-CH3的H3)、1.11(3H，d，J＝6.7Hz，(5)′-CH3的H3)糖組成L-巖藻糖∶不飽和的D-葡糖醛酸∶D-葡糖醛酸∶D-甘露糖＝2∶1∶1∶2(L-巖藻糖和D-甘露糖各2分子，不飽和的D-葡糖醛酸和D-葡糖醛酸各1分子)硫酸基4分子(結合于還原性末端D-甘露糖的L-巖藻糖的3位、另一個L-巖藻糖的2位和4位以及還原性末端D-甘露糖的6位)而1H-NMR中的峰的歸屬序號如下式(25)。另外，作為本發(fā)明的第一項發(fā)明糖化合物也可以通過使從作為本分明的第三項發(fā)明的屬于Fucoidanobacter屬的細菌得到的菌體提取物或培養(yǎng)上清作用于巖藻依聚糖來制造。作為本分明的第三項發(fā)明的菌株只要是屬于Fucoidanobacter屬的本發(fā)明的菌株哪種都可以，舉一個具體的例子，例如FucoidanobactermarinusSI-0098菌株。該菌株是本發(fā)明者從青森縣的海水中新發(fā)現(xiàn)的菌株，它的細菌學的性質如下。2、FucoidanobactermarinusSI-0098a、形態(tài)方面的性質(1)本菌株是球狀短桿菌，有時呈現(xiàn)雙球菌的形態(tài)。寬0.5-0.7μm長0.5-0.7μm(2)有無胞子無(3)革蘭氏染色陰性b、生理方面的性質(1)生育的溫度范圍在37℃可以生育。最適生育溫度是15～28℃。(2)對氧的嗜好好氧型(3)對過氧化氫酶陽性(4)對氧化酶陰性(5)對脲酶陰性(6)水解淀粉陽性明膠陰性酪蛋白陰性七葉苷陽性(7)硝酸鹽的還原陰性(8)吲哚的生成陰性(9)硫化氫的生成陽性(10)奶的凝固陰性(11)鈉的需求性陽性(12)鹽的需求性在0％食鹽培養(yǎng)基中的生育陰性在1％食鹽培養(yǎng)基中的生育陰性在海水培養(yǎng)基中的生育陽性(13)醌系甲基萘醌7(14)菌體內DNA的GC含量61％(15)細胞壁的二氨基庚二酸陰性(16)羥乙?；囼炾幮?17)羥基脂肪酸的存在陽性(18)OF-測定0(19)菌落顏色沒有生成有特征的菌落色素(20)運動性有(21)滑動性無(22)鞭毛極單毛本菌株按照Bergey′sManualofdeterminativebacteriology，第9卷(1994)記載的基本分類被分為第4類(革蘭氏陰性好氧性桿菌和球菌)。然而，本菌株在電子傳遞鏈中有甲基萘醌類7，GC含量為61％等方面與屬于第4類的菌有很大的不同?；旧细锾m氏陰性菌在電子傳遞鏈上有泛醌，而革蘭氏陽性菌有甲基萘醌類。雖然作為革蘭氏陰性菌的Flavobacterium屬以及Cytophaga屬例外地在電子傳遞鏈上有甲基萘醌類，但屬于這些屬的細菌的GC含量，作為土壤細菌Cytophagaarvensicola為43～46％，作為海洋細菌的Cytophagadiffluens、Cytophagafermentans、Cytophagamarina、以及Cytophagauliginosa是42％，與本菌株的性質完全不同。比較本菌株和已鑒定的菌株的16rDNA序列的相同性，即使在相同性最高的已鑒定的菌株Verrucom-icrobiumspinosum其相同性也只是76.6％。16SrDNA序列的相同性在90％以下時，一般都認為兩個細菌的屬是不同的，本發(fā)明者斷定本菌株是不屬于已知屬的新屬的細菌，由此本菌株被命名為FucoidanobactermarinusSI-0098。而上述菌株被表示為FucoidanobactermarinusSI-0098，以FERMBP-5403(原保藏日平成7年3月29日，向國際保藏單位的移管申請日平成8年2月15日)保藏于國立生命科學和人體技術研究所〖收件人日本國茨城縣筑波市東1丁目1番3號(郵政編碼305)〗。培養(yǎng)作為本分明的第三項發(fā)明的屬于Fucoidanobacter屬的細菌，通過使該菌體提取物或培養(yǎng)液上清作用于巖藻依聚糖，可以使本發(fā)明的第一項發(fā)明的糖化合物游離出來。作為培養(yǎng)的菌株只要是屬于Fucoidanobacter屬的，通過使其菌體提取物或培養(yǎng)液上清作用于巖藻依聚糖，可以得到本發(fā)明的第一項發(fā)明的糖化合物的菌株，無論哪種都可以，舉個具體的例子，如FucoidanobactermarinusSI-0098菌株。向Fucoidanobacter屬的細菌的培養(yǎng)基中加的營養(yǎng)源只要是該菌株能利用的、能夠使該菌株由巖藻依聚糖生產可能生成作為本發(fā)明的第一項發(fā)明的糖化合物的菌體提取物以及培養(yǎng)上清的營養(yǎng)源都可以。作為碳源，例如可以利用巖藻依聚糖、海藻粉末、藻酸、巖藻糖、葡萄糖、甘露醇、甘油糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖、淀粉等，作為氮源，酵母提取液、蛋白胨、酪蛋白水解物、玉米漿、肉湯、脫脂大豆、硫銨、氯化銨等比較合適。此外，也可以加入鈉鹽、磷酸鹽、鉀鹽、鎂鹽、鋅鹽等無機物，以及金屬鹽類。另外，本菌株在含有上述營養(yǎng)源的海水或人工海水中也可以非常好地生育。在培養(yǎng)作為本發(fā)明的第三項發(fā)明的屬于Fucoidanobacter屬的細菌時，一般培養(yǎng)溫度為15～30℃、培養(yǎng)基的pH為5～9比較好，在5～72小時的通氣攪拌培養(yǎng)下，該菌體提取物以及培養(yǎng)上清的內向型巖藻依聚糖分解酶的活性達到最高。根據(jù)使用的菌株、培養(yǎng)基的組成等設定培養(yǎng)條件，使該菌株生產的菌體提取物以及培養(yǎng)上清的內向型巖藻依聚糖分解活性達到最高。在適當?shù)呐囵B(yǎng)基中培養(yǎng)屬于Fucoidanobacter屬的SI-0098菌株，培養(yǎng)結束后如果離心可得到該菌體和培養(yǎng)上清，再利用通常的破碎細胞的手段，例如通過超聲處理等破碎菌體，然后離心，可得到菌體提取液。將通過限界過濾濃縮的培養(yǎng)液上清或菌體提取液與含有氯化鈉的磷酸緩沖液混合，再加入巖藻依聚糖，使其反應。反應結束后，利用分子量分級用的柱子將反應液分級，可以得到作為本發(fā)明的第一項發(fā)明的糖化合物。作為本發(fā)明的第一項發(fā)明的糖化合物可以用作糖鏈工程用試劑，如果按照特公平5-65108號記載的方法進行PA化，制備PA化物，則可以提供作為糖鏈工程用試劑的非常有用的物質。預料本發(fā)明的糖化合物具有作為抗癌劑、癌轉移抑制劑、抗病毒劑的生理活性。以下，用實施例給出了作為本發(fā)明的第一項發(fā)明的糖化合物的制造方法，但本發(fā)明并不限于以下的實施例的范圍。實施例1將Flavobacteriumsp.SA-0082(FERMBP-5402)接種于分注入由葡萄糖0.1％、胨1.0％、含有酵母提取液0.05％的人工海水(JamarinLaboratory制)pH7.5組成的培養(yǎng)基600ml的、經過滅菌(120℃，20分鐘)的2升的三角燒瓶里，24℃下培養(yǎng)20小時后作為種子培養(yǎng)液。將取自竹籃孔樣花紋海帶的巖藻依聚糖0.3％、胨0.5％、酵母提取液0.01％、以及含有消泡劑(信越化學工業(yè)制KM70)0.01％的人工海水(JamarinLaboratory制)pH7.5組成的培養(yǎng)基20升加入30升的發(fā)酵罐里，于120℃，滅菌20分鐘。冷卻后接種上述的種子培養(yǎng)液600ml，24℃下，在每1分鐘10升的通氣量和每分鐘125轉的攪拌速度的條件下培養(yǎng)20小時。培養(yǎng)結束后，將培養(yǎng)液離心分離得到菌體和培養(yǎng)液上清。利用限界過濾(過濾膜的排阻分子量為1萬，Amicon制)將培養(yǎng)液上清濃縮，測定本發(fā)明內向型巖藻依聚糖分解酶時可以檢測出6mU/ml的活性。另外，將這次培養(yǎng)得到的菌體懸浮于含有200mM的食鹽的20mM的醋酸-磷酸緩沖液(pH7.5)中，超聲破碎后，離心分離得到菌體提取液。測定菌體提取液中的本發(fā)明內向型巖藻依聚糖分解酶的活性，為20mU/ml。向上述的培養(yǎng)液上清的濃縮液中加入硫酸銨至終濃度達90％的飽和度，攪拌溶解后離心分離，將沉淀與上述菌體提取液同樣懸浮于緩沖液里，用含有50mM的食鹽的20mM的醋酸-磷酸緩沖液(pH7.5)充分透析。通過離心分離去除透析產生的沉淀后，讓樣品吸附于預先用含有50mM的食鹽的20mM的醋酸-磷酸緩沖液(pH7.5)平衡好的DEAE-sepharoseFF柱，用相同的緩沖液充分洗凈吸附物，利用50mM至600mM的食鹽梯度將吸附物洗脫出，收集活性級分。然后向該活性級分中加入食鹽使它的終濃度達到4M后，使它吸附于預先用含有4M的食鹽的20mM的磷酸緩沖液(pH8)平衡好的PhenylSepharoseCL-4B柱，用相同的緩沖液充分洗凈吸附物，利用4M至1M的食鹽梯度將吸附物洗脫出，收集活性級分。利用限界過濾器(Amicon制)將該活性級分濃縮后，利用預先用含有50mM的食鹽的10mM的磷酸緩沖液平衡好的SephacrylS-200柱進行凝膠過濾，收集活性級分。然后向該活性級分中加入食鹽使它的終濃度達到3.5M后，使它吸附于預先用含有3.5M的食鹽的10mM的磷酸緩沖液(pH8)平衡好的PhenylSepharoseHP柱，用相同的緩沖液充分洗凈吸附物，利用3.5M至1.5M的食鹽梯度將吸附物洗脫出，收集活性級分，得到純化的酶。從SephacrylS-200的保留時間可以求出該酶的分子量約為7萬。表1給出了以上的純化過程。表1</tables>實施例2將Flavobacteriumsp.SA-0082(FERMBP-5402)接種于分注入由葡萄糖0.25％、胨1.0％、含有酵母提取液0.05％的人工海水(JamarinLaboratory制)pH7.5組成的培養(yǎng)基600ml的、經過滅菌(120℃，20分鐘)的2升的三角燒瓶里，24℃下培養(yǎng)24小時后作為種子培養(yǎng)液。將由葡萄糖0.25％、胨1％、酵母提取液0.05％、以及含有消泡劑(信越化學工業(yè)制KM70)0.01％的人工海水(JamarinLaboratory制)pH7.5組成的培養(yǎng)基20升加入30升的發(fā)酵罐里，于120℃，滅菌20分鐘。冷卻后接種上述的種子培養(yǎng)液600ml，24℃下，在每1分鐘10升的通氣量和每分鐘125轉的攪拌速度的條件下培養(yǎng)24小時。培養(yǎng)結束后，將培養(yǎng)液離心分離得到菌體和培養(yǎng)液上清。利用限界過濾(過濾膜的排阻分子量為1萬，Amicon制)將培養(yǎng)液上清濃縮，測定本發(fā)明內向型巖藻依聚糖分解酶時可以檢測出1mU/ml的活性。另外，將這次培養(yǎng)得到的菌體懸浮于含有200mM的食鹽的20mM的醋酸-磷酸緩沖液(pH7.5)中，超聲破碎后，離心得到菌體提取液。測定菌體提取液中的本發(fā)明內向型巖藻依聚糖分解酶時可以檢測出5mU/ml的活性。向該提取液中加入硫酸銨至終濃度達90％的飽和度，攪拌溶解后離心分離，將沉淀與上述菌體提取液同樣懸浮于緩沖液里，用含有50mM食鹽的20mM的醋酸-磷酸緩沖液(pH7.5)充分透析。通過離心去除透析產生的沉淀后，讓樣品吸附于預先用含有50mM的食鹽的20mM的醋酸-磷酸緩沖液(pH7.5)平衡好的DEAE-sepharoseFF柱，用相同的緩沖液充分洗凈吸附物，利用50mM至600mM的食鹽梯度將吸附物洗脫出，收集活性級分。然后向該活性級分中加入食鹽使它的終濃度達到4M后，使它吸附于預先用含有4M食鹽的20mM的磷酸緩沖液(pH8)平衡好的PhenylSepharoseCL-4B柱，用相同的緩沖液充分洗凈吸附物，利用4M至1M的食鹽梯度將吸附物洗脫出，收集活性級分。利用限界過濾器(Amicon制)將該活性級分濃縮后，利用預先用含有50mM食鹽的10mM的磷酸緩沖液平衡好的SephacrylS-300進行凝膠過濾，收集活性級分。從SephacrylS-300的保留時間可以求出該酶的分子量約為46萬。用含有25mM食鹽的10mM的磷酸緩沖液(pH7)對該活性級分透析。將該酶液吸附于預先用含有250mM食鹽的10mM的磷酸緩沖液(pH7)平衡好的MonoQHR5/5柱，用相同的緩沖液充分洗凈吸附物，利用250mM至450mM的食鹽梯度將吸附物洗脫出，收集活性級分，得到純化的酶。表2給出了以上的純化過程。表2</tables>實施例3使本發(fā)明的實施例1得到的內向型巖藻依聚糖分解酶(菌體內酶)作用于純化的取自竹籃孔樣花紋海帶的巖藻依聚糖，進行分解物的制備。即，將2.5％的巖藻依聚糖溶液16ml、50mM的磷酸緩沖液(pH7.5)12ml、4M的氯化鈉4ml和32mU/ml的本發(fā)明的內向型巖藻依聚糖分解酶溶液8ml混合，25℃，反應48小時。反應液經CellulofineGCL-300柱(生化學工業(yè)社制)進行分子量分級，收集分子量2000以下的級分。該級分經MicroAcilyzerG3(旭化成社制)脫鹽后，再經DEAE-SepharoseFF分成3個級分。結果得到上述物質(a)、(b)、(c)的量分別為41mg、69mg、以及9.6mg。實施例4使本發(fā)明的實施例2得到的內向型巖藻依聚糖分解酶(菌體外酶)作用于純化的取自竹籃孔樣花紋海帶的巖藻依聚糖，進行分解物的制備。即，將2.5％的巖藻依聚糖溶液16ml、50mM的磷酸緩沖液(pH7.5)12ml、4M的氯化鈉4ml和32mU/ml的本發(fā)明的內向型巖藻依聚糖分解酶溶液8ml混合，25℃，反應48小時。反應液經CellulofineGCL-300柱(生化學工業(yè)社制)進行分子量分級，收集分子量2000以下的級分。該級分經MicroAcilyzerG3(旭化成社制)脫鹽后，再經DEAE-SepharoseFF分成3個級分，冷凍干燥。結果得到上述物質(a)、(b)、(c)的量分別為40mg、65mg、以及9.2mg。實施例5將由得自竹籃孔樣花紋海帶的巖藻依聚糖0.3％、胨0.5％、酵母提取液0.05％、以及含有消泡劑(信越化學工業(yè)制KM70)0.01％的人工海水(JamarinLaboratory制)pH7.5組成的培養(yǎng)基600ml加入到三角燒瓶里，滅菌(120℃，20分鐘)，然后將FucoidanobactermarinusSI-0098(FERMBP-5403)接種于該培養(yǎng)基中，25℃下，在每分鐘120轉的攪拌速度的條件下培養(yǎng)48小時。培養(yǎng)結束后，將培養(yǎng)液離心分離得到菌體和培養(yǎng)液上清。利用限界過濾(過濾膜的排阻分子量為1萬，Amicon制)將培養(yǎng)液上清濃縮，測定本發(fā)明內向型巖藻依聚糖分解酶時可以檢測出0.2mU/ml的活性。另外，將這次培養(yǎng)得到的菌體懸浮于含有200mM食鹽的20mM的醋酸-磷酸緩沖液(pH7.5)中，超聲破碎后，離心得到菌體提取液。測定菌體提取液中的本發(fā)明內向型巖藻依聚糖分解酶時可以檢測出20mU/ml的活性。實施例6使本發(fā)明的實施例5得到的FucoidanobactermarinusSI-0098菌株的菌體內酶作用于純化的取自竹籃孔樣花紋海帶的巖藻依聚糖，進行分解物的制備。即，將2.5％的巖藻依聚糖溶液16ml、含有800mM氯化鈉的100mM的磷酸緩沖液(pH8)20ml和20mU/ml的本發(fā)明的實施例5得到的Fucoid-anobactermarinusSI-0098菌株的菌體內酶溶液4ml混合，5℃，反應48小時。反應液經CellulofineGCL-300柱進行分子量分級，收集分子量2000以下的級分。該級分經MicroAcilyzerG3(旭化成社制)脫鹽后，再經DEAE-SepharoseFF分成3個級分，冷凍干燥。結果得到上述物質(a)、(b)、(c)的量分別為38mg、60mg、以及8.2mg。本發(fā)明提供可以用于巖藻依聚糖的結構解析、巖藻依聚糖的酶分解物的鑒定以及生物活性的檢定中的糖化合物；在巖藻依聚糖的部分分解以及巖藻依聚糖寡糖的生產等與巖藻依聚糖有關的研究中有用的新的內向型巖藻依聚糖分解酶；以及在糖化合物的制造中有用的新的微生物。權利要求1.將下述通式(1)或(2)表示的化合物中的至少一個醇式羥基進行硫酸酯化形成的糖化合物或其鹽，(1)(2)式中X代表H或用下式(3)(3)代表的基團，Y代表H或用下式(4)或(5)(4)(5)表示的基團，但是X和Y不能都是H；Z代表H或用下式(6)(6)表示的基團。2.下式(7)表示的糖化合物或其鹽。(7)3.下式(8)表示的糖化合物或其鹽。(8)4.下式(9)表示的糖化合物或其鹽。5.下式(10)表示的糖化合物或其鹽。(10)6.下式(11)表示的糖化合物或其鹽。7.下式(12)表示的糖化合物或其鹽。(12)8.下式(13)表示的糖化合物或其鹽。(13)9.下式(14)表示的糖化合物或其鹽。(14)10.下式(15)表示的糖化合物或其鹽。(15)11.內向型巖藻依聚糖分解酶，其特征是具有下述的理化性質，(I)作用作用于巖藻依聚糖，至少可以使上述式(7)和式(8)表示的糖化合物游離出來；(II)最適pH該酶的最適pH是6～10；(III)最適溫度該酶的最適溫度是30～40℃。12.電子傳遞鏈中含有甲基萘醌、GC含量約為60％的Fucoidanobacter屬的細菌。全文摘要本發(fā)明提供新的內向型巖藻依聚糖分解酶、以及在糖化合物的制造中有用的新的微生物。將以通式(1):[式中,Y代表H或用下式(2):表示的基團]代表的化合物中至少一個醇式羥基進行硫酸酯化形成的糖化合物或其鹽。文檔編號C07H3/06GK1183101SQ9619358公開日1998年5月27日申請日期1996年4月22日優(yōu)先權日1995年4月28日發(fā)明者酒井武,木村眸,兒島薰,中西芳邦,加藤郁之進,豬飼勝重,秋吉純子申請人:寶酒造株式會社,株式會社糖鎖工學研究所