專利名稱：根赤殼菌素衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有酪氨酸激酶抑制活性和具有抗腫瘤、抗微生物或免疫抑制作用的新的根赤殼菌素衍生物或其可藥用鹽。
背景技術(shù)：
已知下式(B)表示的微生物代謝產(chǎn)物根赤殼菌素具有抗菌和抗癌作用[Narure，171，344(1953)；Neoplasma，24，21(1977)]或具有免疫抑制作用(未審日本專利申請公開No.298764/94)。

而且，其中酚羥基用各種酰基修飾的根赤殼菌素衍生物具有抗腫瘤作用是已知的(未審日本專利申請公開No.226991/92)。此外，其中酚羥基用?；蛲榛揎椀母鄽ぞ匮苌锞哂醒苌梢种谱饔靡惨压_(未審日本專利申請公開No.279279/94)。
酪氨酸激酶是采用ATP作為磷酸鹽供體并催化底物蛋白質(zhì)特定酪氨酸殘基中的γ-磷酸酯基轉(zhuǎn)化為羥基的酶，因此在細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的控制機(jī)理中起重要的作用。已知多組酪氨酸激酶，并且酪氨酸激酶活性增加(例如結(jié)腸癌中的Src、乳腺癌和胃癌中的ErbB-2、白血病中的Abb等)也是已知的。酪氨酸激酶活性的無序增加可導(dǎo)致細(xì)胞的異常分化和增生。其結(jié)果是，酪氨酸激酶的特定抑制劑可用于防止或治療多種疾病，包括作為抗腫瘤劑。
Lck是一種酪氨酸激酶，通過抗原刺激激活T淋巴細(xì)胞可使其得到活化，并且該酶的抑制劑可以用作免疫抑制劑。而且，Src與破骨細(xì)胞中的骨的再吸收有關(guān)也是已知的，該酶抑制劑也可作為骨重吸收的抑制劑用于治療骨質(zhì)疏松。此外，作為多種生長因子的受體類型的酪氨酸激酶EGF-R(表皮生長因子受體)抑制劑，F(xiàn)GF-R(纖維細(xì)胞生長因子受體)抑制劑，PDGF-R(血小板衍生的生長因子受體)抑制劑等，可用作固體瘤的生長抑制劑，血管生成抑制劑，血管平滑肌生長抑制劑等等。
對酪氨酸激酶活性的抑制作用可采用以癌基因v-Src(可從RIKEN基因庫獲得)轉(zhuǎn)染的大鼠纖維細(xì)胞系SR-3Y1，用抗-磷酸酪氨酸抗體通過Western Blotting分析進(jìn)行測量，并計算其中酪氨酸發(fā)生磷?；募?xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的量。由于在該方法中采用的SR-3Y1細(xì)胞的細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)酪氨酸磷酰化水平隨v-Src酪氨酸激酶增加，所以根赤殼菌素衍生物抑制v-Src酪氨酸激酶活性的能力可通過其中酪氨酸發(fā)生磷酰化的細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的量的減少測定。Robinson，SP.等[Intemational Journal ofOncology，2，253(1993)]報道了通過Western Blotting分析測定酪氨酸磷?；种谱饔玫姆椒?，和Kwon，H.J.等[Cancer Research，52，6926(1992)]報道了采用SR-3Y1細(xì)胞的試驗實施例。
本發(fā)明公開本發(fā)明的目的是提供具有酪氨酸激酶抑制活性和具有抗腫瘤、抗微生物或免疫抑制作用的新的根赤殼菌素衍生物或其可藥用鹽。
本發(fā)明涉及下式(I)表示的根赤殼菌素衍生物或其可藥用鹽

其中R1和R2相同或不同，各自表示氫、烷酰基、鏈烯?；蚴宥』谆坠柰榛?1)當(dāng)X表示鹵素時，Y表示氧原子或R4-O-N{其中R4表示氫原子或表示取代或未取代的低級烷基(所說的取代基選自羥基，低級烷氧基，低級烷酰氧基，疊氮基，氨基，一-或二-低級烷氨基，低級烷酰基氨基，低級烷氧羰基氨基，低級鏈烯氧基羰基氨基，羧基，低級烷氧羰基，低級烷基氨基甲酰基和環(huán)亞氨基}；R3表示氫，烷酰基，鏈烯?；?SO-Z<其中Z表示下式(A)

{其中XA，R1A，R2A的定義分別同X，R1和R2；和YA表示氧原子或R4A-O-N(其中R4A的定義同R4)}>；和(2)當(dāng)X與R3彼此結(jié)合表示單鍵時；Y表示R4B-O-N(其中R4B的定義同R4)。
下文中式(I)表示的化合物被稱為化合物(I)。其它通式標(biāo)號的化合物也按同樣的方式稱呼。
在化合物(I)各基團(tuán)的定義中，烷?；侵妇哂?-20個碳原子的直鏈或支鏈烷酰基(例如甲?；?、乙?；?、丙?；?、丁?；?、己?；?、月桂酰基、肉豆蔻基、棕櫚?；?、硬脂酰基等)。鏈烯?；侵妇哂?-20個碳原子的直鏈或支鏈鏈烯?；?例如棕櫚油酰基、亞油?；?、亞麻?；?。鹵素是指氟，氯，溴或碘原子。低級烷基是指具有1-8個碳原子的直鏈或支鏈烷基(例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、異戊基、己基、庚基、辛基等)。
取代的低級烷基的取代基是1-3個相同或不同的基團(tuán)(例如羥基、低級烷氧基、低級烷酰氧基、疊氮基、氨基、一-或二-低級烷氨基、低級烷酰基氨基、低級烷氧羰基氨基、低級鏈烯氧基羰基氨基、羧基、低級烷氧羰基、低級烷基氨基甲?；铜h(huán)亞氨基等)。低級烷基氨基甲?；侵冈诎被柞；牡由先〈?-2個低級烷基基團(tuán)。
這里，低級烷氧基、低級烷酰氧基、一或二-低級烷氨基、低級烷?；被⒌图壨檠豸驶被?、低級烷氧羰基和低級烷基氨基甲酰基中的烷基部分的定義同上述低級烷基的定義，其中一個碳原子可被硅原子替代。低級鏈烯氧基羰基氨基中的低級鏈烯基是指具有2-6個碳原子的直鏈或支鏈鏈烯基(例如乙烯基、烯丙基、丁烯基、戊烯基、己烯基、戊二烯基、己二烯基等)。環(huán)亞氨基表示例如鄰苯二甲酰亞胺基，琥珀酰亞胺基，戊二酰亞胺基等。
化合物(I)的可藥用鹽包括酸加成鹽，金屬鹽，銨鹽，有機(jī)胺加成鹽，氨基酸加成鹽等。酸加成鹽的實例包括無機(jī)酸鹽(例如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽等)，和有機(jī)酸鹽(例如甲酸鹽、乙酸鹽、草酸鹽、苯甲酸鹽、甲磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、酒石酸鹽、檸檬酸鹽、琥珀酸鹽、乳酸鹽等)。金屬鹽的實例包括堿金屬鹽(例如鋰鹽、鈉鹽、鉀鹽等)，堿土金屬鹽(例如鎂鹽、鈣鹽等)，鋁鹽，鋅鹽等。銨鹽的實例包括銨鹽，四甲基銨鹽等。有機(jī)胺加成鹽的實例包括與嗎啉、哌啶等形成的鹽。氨基酸加成鹽的實例包括與甘氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、賴氨酸等形成的鹽。
通常本發(fā)明化合物是采用旋光性的根赤殼菌素作為起始原料制備的，并且其所有可能的立體異構(gòu)體和異構(gòu)體的混合物均包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
下面描述了化合物(I)的制法。
化合物(I)的制備方法主要包括下述反應(yīng)步驟肟的形成(步驟1)，鹵代醇的形成(步驟2)和?；磻?yīng)(步驟3)。根據(jù)目的化合物的不同可將上述反應(yīng)步驟結(jié)合采用。
下面描述的制備方法中，在所用方法中定義的基團(tuán)發(fā)生變化或定義的基團(tuán)不適用于所采用的方法時，可通過采用引入-消除保護(hù)基的方法得到目的化合物，所述保護(hù)基是在有機(jī)合成化學(xué)中經(jīng)常采用的[例如可參考“有機(jī)合成中的保護(hù)基”(Protective Group in Organic Synthesis)，T.W.Greene，John Wiley & Sons Inc.(1981)]。而且，如果必要的話，可以改變反應(yīng)步驟(如引入取代基)的順序。
制備方法1

(在上述通式中，R1a和R2a分別表示從上述定義的R1和R2除去四甲基甲硅烷基的基團(tuán)；和R4的定義如上)。
步驟1根赤殼菌素或采用已知方法從根赤殼菌素得到的化合物(C)(未審日本專利申請公開No.226991/92)可用作起始原料。
化合物(Ia)可通過下面化合物(C)與化合物(II)或其酸加成鹽的反應(yīng)制備。吡啶，氯仿，二氯甲烷，乙醚，四氫呋喃，二甲基甲酰胺，乙腈等可單獨作為溶劑或以其混合物作為溶劑。當(dāng)采用化合物(II)酸加成鹽時，反應(yīng)在堿例如胺(如吡啶、三乙胺、二異丙基乙胺等)存在下，或在堿金屬碳酸鹽或碳酸氫鹽(如碳酸鈉、碳酸鉀等)存在下進(jìn)行，相對化合物(II)而言使用量為1當(dāng)量或更多，優(yōu)選采用也可作為溶劑的吡啶。化合物(II)或其酸加成鹽的用量對根赤殼菌素而言通常是1當(dāng)量或更多，優(yōu)選2-10當(dāng)量。反應(yīng)通常在20-100℃進(jìn)行1-80小時。
制備方法2

{在上式中，R1a，R2a，X和Y的定義如上所述；和R3a表示氫、甲?；?SO-Z(其中Z的定義如上所述)}。
步驟2-1其中R3a為氫的一系列化合物(Ib)可通過下述化合物(Ia)或(C)與酸(例如鹽酸、氫溴酸等)或路易斯酸(如四氯化鈦等)的反應(yīng)制備。二噁烷，四氫呋喃，乙醚，氯仿，二氯甲烷，二甲基甲酰胺，乙腈等可單獨作為溶劑或以它們的混合物作為溶劑。酸或路易斯酸的用量相對化合物(Ia)或(C)而言通常是1當(dāng)量或更多，優(yōu)選1-1O當(dāng)量。反應(yīng)通常在-20℃至40℃進(jìn)行10分鐘-48小時。
步驟2-2
其中R3a為甲?；囊幌盗谢衔?Ib)可在二甲基甲酰胺中，通過下述化合物(Ia)或(C)與草酰氯，磷酰氯或磷酰溴的反應(yīng)制備。相對化合物(Ia)或(C)而言磷酰氯或磷酰溴的用量通常是1當(dāng)量或更多，優(yōu)選2-5當(dāng)量。反應(yīng)通常在-10℃至40℃進(jìn)行1-48小時。
步驟2-3其中R3a為-SO-Z(其中Z的定義如上所述)化合物(Ib)的二聚體可通過下述化合物(Ia)或(C)與亞硫酰氯或亞硫酰溴的反應(yīng)制備。二甲基甲酰胺，氯仿，二氯甲烷，二甲亞砜，乙腈等可單獨作為溶劑或以它們的混合物作為溶劑。相對化合物(Ia)或(C)而言亞硫酰氯或亞硫酰溴用量通常是1當(dāng)量或更多，優(yōu)選2-10當(dāng)量。反應(yīng)通常在-10℃至40℃進(jìn)行1-48小時。
制備方法3

(在上式中，R1a，R2a，X和Y的定義如上所述；R1b和R2b的定義分別與R1a和R2a相同；和R3b表示烷?；蜴溝；?。
步驟3其中羥基用烷?；蜴溝；揎椀幕衔?Ic)可在堿存在下，通過下述化合物(Ib’)與1當(dāng)量或更多等量(優(yōu)選1-100當(dāng)量)的具有目標(biāo)烷?；蜴溝；孽Ｂ?，酸酐或混合酸酐進(jìn)行反應(yīng)制備。雖然任意羥基的修飾受適當(dāng)引入和除去羥基保護(hù)基的影響，但是同時修飾多個羥基也是可能的。作為堿使用的吡啶，N，N-二甲基苯胺，N，N-二乙基苯胺等的用量相對化合物(Ib’)而言通常是1當(dāng)量或更多，優(yōu)選1-200當(dāng)量。該反應(yīng)在溶劑(如二甲基甲酰胺，二甲亞砜，氯仿，二氯甲烷，甲苯等)中進(jìn)行。而且，可采用同時作為溶劑的堿(如吡啶等)。此外，通過加入0.1-4當(dāng)量的N，N-二甲基氨基吡啶等可使反應(yīng)加速。反應(yīng)通常在-20℃至50℃進(jìn)行5分鐘-24小時。
制備方法4

{在上式中，X，Y和R3的定義如上所述；R1c和R2c均為氫，或其中一個為氫而另一個為烷?；蜴溝；缓蚏1d和R2d表示上述的R1c和R2c至少一個氫原子被t-BuMe2Si取代的基團(tuán)(其中t-BuMe2Si表示叔丁基二甲基甲硅烷基)。}步驟4化合物(Ie)可在堿存在下，通過化合物(Id)與叔丁基二甲基甲硅烷基氯的反應(yīng)制備。氯仿，二氯甲烷，乙醚，四氫呋喃，丙酮，二甲基甲酰胺，乙腈等可單獨作為溶劑或以它們的混合物作為溶劑?？刹捎冒?如吡啶、咪唑、三乙胺、二異丙基乙胺等)作為堿。叔丁基二甲基甲硅烷基氯的用量相對化合物(Id)而言通常是1當(dāng)量或更多，優(yōu)選1-10當(dāng)量。堿的用量相對叔丁基二甲基甲硅烷基氯而言，通常是1當(dāng)量或更多，優(yōu)選1-5當(dāng)量。反應(yīng)通常在0-50℃進(jìn)行10分鐘-24小時。
在化合物(I)的制備方法中，R1，R2，R3，X或Y官能基的轉(zhuǎn)化不僅可通過上述的步驟進(jìn)行，而且可以通過已知的方法進(jìn)行[例如，Comprehensive Organic Transformations，RC.Larock(1989)]。
將有機(jī)合成中常用的技術(shù)(如過濾、提取、洗滌、干燥、濃縮、結(jié)晶、多種類型的色譜法等)任選地結(jié)合可進(jìn)行上述方法產(chǎn)物的分離和純化。中間體可不經(jīng)純化用于下一個步驟。
如果需要得到化合物(I)的鹽，化合物(I)的鹽可在其能得到時如上述進(jìn)行純化；或者，當(dāng)化合物是以游離堿形式獲得時，可通過將游離堿溶解或懸浮于合適的溶劑中，并向其中加入酸或堿而形成它們的鹽。
而且，化合物(I)或其可藥用鹽可以與水或多種溶劑的加成產(chǎn)物的形式存在，這些加成產(chǎn)物也包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)?；衔?I)的實例如表1所示。表1 (1)化合物(I)的實例

化合物 R1，R2R3X Y1 H HCO Cl O2 H H Cl O3 H H Br O4 H ZaCl O5 CH3CO CH3COCl O6 CH3CO HCO Cl O7 CH3CO ZaCl O8 H —— NOH9 H —— NOCH31O(CH3)3C(CH3)2Si —— O11(CH3)3C(CH3)2Si ——NOH12(CH3)3C(CH3)2Si ——NOCH2OCH313H—— NOCH2OCH314H—— NO(CH2)3N315CH3(CH2)14CO HCOClO16CH3(CH2)14CO ZaClO

(其中R1A和R2A的定義分別與上述的R1和R2相同)在R3和X定義中的“—”表示R3和X彼此結(jié)合形成的單鍵。表1(2)化合物(I)的實例

化合物 R1，R2R3XY17 CH3(CH2)14CO HCl O18 CH3(CH2)14CO CH3CO Cl O19 CH3(CH2)14CO HBr O20 CH3(CH2)14CO CH3CO Br O21 CH3(CH2)14CO CH3(CH2)14CO Br O22 (CH3)3C(CH3)2Si ——NO(CH2)6Pht23 H ——NO(CH2)6Pht24 H ——NO(CH2)6N325 H ——NO(CH2)5CO2C(CH3)326 H ——NO(CH2)5CO2(CH2)2Si(CH3)327 H ——NO(CH2)6NHCO2CH2CH＝CH228 H ——NO(CH2)5CO2H29 H ——NOCH2CO2H在R3和X定義中的“—”表示R3和X彼此結(jié)合形成的單鍵。在Y定義中的“Pht”表示鄰苯二甲酰亞胺基。表1(3)化合物(I)的實例

化合物-R11，-R2-R3-X ＝Y(jié)30-H —— ＝NOCH2CON(CH3)231-H ——＝NO(CH2)3OH32-CO(CH2)14CH3—— ＝NOCH333-H -H-Cl ＝NOCH334-H -H-Br ＝NOCH335-H -CHO -Cl ＝NOCH336-H -H-Cl ＝NOCH2CON(CH3)2在R3和X定義中的“-”表示R3和X彼此結(jié)合形成的單鍵。
實施本發(fā)明的最好模型下面，通過以下試驗實施例描述化合物(I)的典型實例的藥理活性。
試驗實施例1細(xì)胞內(nèi)酪氨酸激酶的抑制試驗采用含有10％牛胎兒血清的Dulbecco改進(jìn)的Eagle培養(yǎng)基(DMEM)，其中已加入各種濃度的試驗根赤殼菌素衍生物，在5％二氧化碳?xì)夥罩杏?7℃培養(yǎng)SR-3Y1細(xì)胞15小時。如此培養(yǎng)的細(xì)胞在冷卻的緩沖溶液中4℃溶解20分鐘進(jìn)行溶胞(50mM Tris HCl，PH7.5，150mM NaCl，1％Triton X-100，0.1％SDS，1％脫氧膽酸鈉，2mMEDTA，1mMPMSF，20μM亮肽酶素，0.15單位/ml抑肽酶，1mMNa3VO4)，然后在20,000g離心30分鐘。測量所得上清液的蛋白質(zhì)濃度后，將每道(lane)樣品調(diào)整到同樣的蛋白質(zhì)量以通過SDS-PAGE進(jìn)行蛋白質(zhì)分離。將這樣分離的蛋白質(zhì)樣品轉(zhuǎn)移到硝基纖維素膜上，隨后向其上加入小鼠多克隆磷酸酪氨酸抗體MX-pTYR(Kyowa MedexCO.，Ltd)作為第一抗體和辣根過氧化物酶-偶合小鼠IgG抗體(BIO-RAD Co.)作為第二抗體，從而可影響它們在膜上與蛋白質(zhì)樣品的反應(yīng)。采用ECL試劑(Amersham Co.)進(jìn)行測定，和通過掃描從X-射線膠片得到的帶密度測定酪氨酸-磷酸化蛋白質(zhì)的量。根赤殼菌素衍生物抑制酪氨酸磷酸化作用的活性可通過與不加藥物的對照組相比，使酪氨酸-磷酸化蛋白質(zhì)的比例減少一半時各衍生物的濃度(IC50)來表示。
結(jié)果列于表2中。
表2細(xì)胞內(nèi)酪氨酸激酶的抑制活性化合物 IC50(μM)根赤殼菌素 0.188 0.029 ＜0.0510 0.1511 0.0214＜0.05從表2看出，與根赤殼菌素相比，化合物(I)清楚地顯示了強(qiáng)烈的抑制細(xì)胞內(nèi)酪氨酸激酶活性的作用，因此可用作酪氨酸激酶抑制劑。
試驗實施例2對HeLa S3胞的細(xì)胞生長抑制試驗用含有10％牛血清和2mM的谷氨酸的MEM介質(zhì)(由NissuiPharmaceutical制造)將HeLaS3胞調(diào)至3.0×104細(xì)胞/ml，并按0.1ml/孔分份將其分散于96孔微量滴定平板上。在二氧化碳?xì)怏w培養(yǎng)箱中于37℃培養(yǎng)細(xì)胞20小時，除去培養(yǎng)液中的上清液，然后用生理鹽水洗滌平板一次，之后向各個孔中加入含有各試驗化合物的0.1ml介質(zhì)，并在二氧化碳?xì)怏w培養(yǎng)箱中用于37℃下培養(yǎng)細(xì)胞72小時。除去培養(yǎng)液中的上清液后，向各孔中加入含有0.02％中性紅的0.1ml介質(zhì)，并在二氧化碳?xì)怏w培養(yǎng)箱中37℃下將細(xì)胞染色1小時。除去培養(yǎng)液中的上清液后，用生理鹽水洗滌平板一次，用0.001N鹽酸/30％乙醇提取染料，然后通過微量板讀數(shù)器測定550nm的吸收值。通過將未-處理細(xì)胞的吸收值與用已知濃度的各樣品處理過的細(xì)胞的吸收值進(jìn)行比較，可以計算出各個試驗化合物抑制50％細(xì)胞生長的濃度(IC50)。
結(jié)果列于表3中。
表3對HeLaS3細(xì)胞的細(xì)胞生長抑制活性化合物 IC50(μM)根赤殼菌素 6.74 6.06 5.07 1.58 0.099 0.0510 3.211 0.1213 0.0214 0.05從表3看出，化合物(I)顯示了對HeLaS3細(xì)胞的細(xì)胞生長抑制活性，這種活性大于已知的根赤殼菌素的活性，因此可用作抗腫瘤劑。
試驗實施例3對P338白血病的抗腫瘤試驗移植7天后從P338腹水-誘導(dǎo)的小鼠(DBA/2)的腹腔中收集腹水。對腹水中的P338細(xì)胞計數(shù)，采用無菌生理鹽水制成5×106細(xì)胞/ml的腫瘤細(xì)胞懸浮液，并將其中的0.2ml部分(含有1×106細(xì)胞)移植到CDF1小鼠的腹腔中，小鼠體重為20-25g。在腫瘤移植24小時后，將各個試驗化合物溶于含有聚氧乙烯脫水山梨糖醇單月桂酸酯的生理鹽水中，在腫瘤移植24小時后將各個0.2ml部分加到CDF1小鼠(每組5只動物)的腹腔中，然后觀察小鼠的存活天數(shù)共觀察30天。通過服用試驗化合物組與對照組小鼠(未-處理組)平均存活天數(shù)的比判斷試驗化合物的作用(延長生命期，ILS％)。
結(jié)果列于表4中。
表4對P338白血病的抗腫瘤活性化合物 ILS(％)根赤殼菌素 27138346442從表4看出，與根赤殼菌素相比化合物(I)可顯著地延長生命期，因而可用作抗腫瘤劑。
試驗實施例4對肉瘤180固體腫瘤的抗腫瘤試驗在ddY小鼠腹腔內(nèi)移植5×106肉瘤180細(xì)胞7天后，從腹水中收集細(xì)胞，用無菌生理鹽水洗滌一次，然后采用無菌生理鹽水制成5×107細(xì)胞/ml的細(xì)胞懸浮液。將0.1ml細(xì)胞懸浮液移植到ddY小鼠(體重20±2g)的右腋區(qū)皮下，腫瘤移植后24小時，將0.1-0.2ml的各個試驗化合物靜脈注射到ddY小鼠(每組5只動物)中，上述試驗化合物是溶于生理鹽水或溶于含有聚氧乙烯脫水山梨糖醇單月桂酸酯的生理鹽水中的。移植7天后測量各腫瘤的主軸(a)和副軸(b)以計算腫瘤體積，即a×b2/2。通過施用試驗化合物組的腫瘤體積(T)與未服藥的對照組的腫瘤體積(C)的比值(T/C)表示各個試驗化合物的抗腫瘤活性。
結(jié)果列于表5中。
表5對肉瘤180固體腫瘤的抗腫瘤活性化合物T/C(％)根赤殼菌素 881 512 504 39從表5中看出，與根赤殼菌素相比化合物(I)顯示出色的抗腫瘤活性，因而可用作抗腫瘤劑。
試驗實施例5抗菌活性試驗采用下述方法制備的介質(zhì)(PH7)通過瓊脂稀釋法測量抗菌活性將3g細(xì)菌用胰化凍(Bacto-Tryptone)(Difco制造)，3g肉提取物，1g酵母提取物，1g葡萄糖和16g瓊脂溶于1升水?？咕钚杂勺钚∩L抑制濃度(MIC)表示。
結(jié)果列于表6中。
表6抗菌活性

CA白色假絲酵母(Candian albicans)ATCC 10231BS枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)No.10707EHEnterococcus hirae ATCC 10541從表6中看出，化合物(I)顯示抗菌活性，因而可用作抗菌劑。
試驗實施例6通過混合小鼠淋巴細(xì)胞培養(yǎng)反應(yīng)進(jìn)行的T細(xì)胞生長抑制試驗從AKR小鼠(Japan SLC Co.，Ltd)身上無菌地切下脾臟并制成單細(xì)胞懸浮液。將上述懸浮液與絲裂霉素C(MMC)(Kyowa Hakko Kogyo Co.，Ltd)混合(最后濃度50μg/ml)并在37℃培養(yǎng)30分鐘。培養(yǎng)后用溶液(HBSS)洗滌細(xì)胞三次，上述溶液是將2.5％牛胎兒血清(FCS，Gibco Co.)加到Hank’平衡鹽溶液(Gibco Co.)中而制成的，然后調(diào)節(jié)到1×107細(xì)胞/ml。
將50μl的B10.BR小鼠(Japan SLC Co.，Ltd)淋巴結(jié)細(xì)胞懸浮液(含有1.5×105細(xì)胞)，50μl的AKR小鼠脾細(xì)胞懸浮液(含有5×105細(xì)胞)和100μl含有各試驗濃度根赤殼菌素的溶液加到96孔微量滴定平板的各孔中，并在二氧化碳培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)72小時。培養(yǎng)完成前18小時加入1.0μCi部分的[3H]-胸腺嘧啶。培養(yǎng)完成后，用細(xì)胞收集器通過濾紙收集細(xì)胞并干燥，然后向其中加入甲苯閃爍劑，采用閃爍計數(shù)器測量結(jié)合到細(xì)胞上的放射活性[3H]-胸腺嘧啶的量(試驗組)。在對照組中，進(jìn)行同樣的培養(yǎng)，只是不加入化合物(I)溶液，然后測量結(jié)合到細(xì)胞上的放射活性[3H]-胸腺嘧啶的量。根據(jù)下式計算T細(xì)胞的生長抑制比，從中計算抑制50％生長時各個試驗化合物的濃度(IC50)。
T細(xì)胞的生長抑制比(％)

(在上式中，MMC-處理的AKR小鼠的放射活性是指結(jié)合到MMC-處理的AKR小鼠脾細(xì)胞內(nèi)的[3H]-胸腺嘧啶的放射劑量，和B10.BR小鼠的放射活性是指結(jié)合到B10.BR小鼠淋巴結(jié)細(xì)胞內(nèi)的[3H]-胸腺嘧啶的放射劑量。)結(jié)果列于表7中。
表7混合的小鼠淋巴細(xì)胞培養(yǎng)反應(yīng)的T細(xì)胞生長抑制比(％)化合物 IC50(μM)根赤殼菌素 0.153 0.38 0.019 0.0219 0.15從表7中可以看出，化合物(I)通過混合小鼠淋巴細(xì)胞培養(yǎng)反應(yīng)可抑制T細(xì)胞的生長，從而明顯顯示了免疫抑制作用。而且，其抑制作用優(yōu)于現(xiàn)有技術(shù)中的根赤殼菌素。
化合物(I)或其可藥用鹽可以其本身通過口服或非腸道施用，或者以藥物組合物形式施用。所述藥物組合物劑量形式的實例包括片劑，丸劑，粉劑，粒劑，膠囊，栓劑，注射液，滴輸注劑等。
這些劑型一般可采用已知方法制備并且其中可含有多種填充劑，潤滑劑，結(jié)合劑，崩解劑，懸浮劑，張力劑，乳化劑，吸收增強(qiáng)劑等。
可在藥物組合物中使用的載體的實例包括水，注射用蒸餾水，生理鹽水，葡萄糖，果糖，蔗糖，甘露糖醇，乳糖，淀粉，玉米淀粉，纖維素，甲基纖維素，羧甲基纖維素，羥丙基纖維素，藻酸，滑石，檸檬酸鈉，碳酸鈣，磷酸氫鈣，硬脂酸鎂，脲，硅樹脂，脫水山梨糖醇脂肪酸酯，甘油脂肪酸酯等， 這些載體可根據(jù)藥物制劑的類型任選采用。
雖然為了上述的目的時，根據(jù)想要的治療作用、施用方法、治療期、年齡、體重等可以改變劑量和施用次數(shù)， 但是通常成人可按每0.01-5mg/kg的劑量施用。
本發(fā)明的實施方式可參考下面實施例和參考實施例的敘述。這里，各化合物的結(jié)構(gòu)式列于前面表1中。
實施例1化合物1
將1ml的磷酰氯滴加到冰浴冷卻的5ml二甲基甲酰胺中，在室溫攪拌30分鐘后，在冰浴冷卻下將這樣制備的溶液緩慢加到根赤殼菌素(2g)的二甲基甲酰胺溶液(20ml)中，并在室溫攪拌混合物24小時。用乙酸乙酯(200ml)稀釋反應(yīng)溶液，以水洗滌三次，然后用無水硫酸鈉干燥。減壓蒸去溶劑然后通過硅膠柱色譜法純化殘留物(2％甲醇/氯仿)，得到1.4g化合物1。
1HMR(CD3OD)δ(ppm)8.00(1H，s)，7.14(1H，ddd，1.0，11.2，16.1Hz)，6.44(1H，s)，6.16(1H，t，10.8 Hz)，5.95(1H，d，16.1 Hz)，5.68(1H，t，10.0 Hz)，5.32(1H，m)，5.25(1H，m)，5.20(1H，dd，5.6，10.0 Hz)，4.10(1H，d，16.1 Hz)，3.65(1H，d，16.1 Hz)，1.97(1H，m)，1.42(3H，d，6.3 Hz)FAB-MS m/z429 [M+H]+實施例2化合物2在冰浴冷卻些下將1.3ml的濃鹽酸(36％)滴加到根赤殼菌素(2g)的二噁烷溶液(70ml)中，并在室溫攪拌所得的混合物6小時。將反應(yīng)溶液與水(100ml)混合，冰浴冷卻下用飽和碳酸氫鈉水溶液小心地中和，然后用乙酸乙酯(150ml)提取三次。用無水硫酸鈉干燥提取物，減壓蒸去溶劑然后通過硅膠柱色譜法純化所得殘留物(2％甲醇/氯仿)，得到1g化合物2。
1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)7.25(1H，ddd，1.0，11.3，16.4 Hz)，6.50(1H，s)，6.21(1H，dt，1.0，11.7 Hz)，5.99(1H，d，16.4 Hz)，5.79(1H，dt，1.0，11.7 Hz)，5.42(1H，m)，5.17(1H，ddd，1.0，5.9，11.7 Hz)，4.25(1H，d，16.4 Hz)，4.03(1H，dd，5.9，8.1 Hz)，3.70(1H，d，16.4 Hz)，2.07(1H，ddd，1.2，6.8，15.1 Hz)，1.93(1H，ddd，3.7，8.1，15.1 Hz)，1.46(3H，d，6.3 Hz)FAB-MS m/z401[M+H]+實施例3化合物3在冰浴冷卻些下將1.0ml的濃鹽酸(47％)滴加到根赤殼菌素(2.5g)的二噁烷溶液(50ml)中，并在室溫攪拌所得的混合物2小時。將反應(yīng)溶液與水(100ml)混合，冰浴冷卻下用飽和碳酸氫鈉水溶液小心地中和，然后用乙酸乙酯(150ml)提取三次。用無水硫酸鈉干燥提取物，減壓蒸去溶劑然后通過硅膠柱色譜法純化所得殘留物(2％甲醇/氯仿)，得到1.7g化合物3。
1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)7.28(1H，dd，10.8，16.0 Hz)，6.51(1H，s)，6.13(1H，t，10.8 Hz)，6.00(1H，d，16.0 Hz)，5.96(1H，t，10.8 Hz)，5.40(1H，m)，5.33(1H，dd，5.2，10.8 Hz)，4.24(1H，d，16.1 Hz)，4.18(1H，m)，3.71(1H，d，16.1 Hz)，2.08(1H，m)，1.92(1H，m)，1.45(3H，d，6.4 Hz)FAB-MS m/z445，447[M+H]+實施例4化合物4冰浴冷卻下將0.5ml的亞硫酰氯滴加到根赤殼菌素(1.4g)的二甲基甲酰胺溶液(7.5ml)中，在室溫攪拌混合物12小時。加入乙酸乙酯(100ml)稀釋反應(yīng)溶液并用水洗滌三次。用無水硫酸鈉干燥，減壓蒸去溶劑然后通過硅膠柱色譜法純化所得殘留物(4％甲醇/氯仿)，得到1.0g化合物4。
1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)7.15(2H，dd，10.8，16.1 Hz)，6.52(2H，s)，6.27(2H，t，10.8 Hz)，6.05(2H，d，16.1 Hz)，5.73(2H，t，10.8 Hz)，5.39(2H，m)，5.35(2H，m)，4.88(2H，m)，4.28(2H，d，16.4 Hz)，3.74(2H，d，16.4 Hz)，2.27(2H，m)，2.10(2H，m)，1.50(6H，d，6.3 Hz)FAB-MS m/z847 [M+H]+實施例5化合物5將0.75ml乙酸酐加到化合物2(170mg)的無水吡啶溶液(1ml)中，并在室溫攪拌所得的混合物10小時。用20ml乙酸乙酯稀釋反應(yīng)溶液，然后按水，稀鹽酸水溶液和飽和碳酸氫鈉水溶液的順序進(jìn)行洗滌。用無水硫酸鈉干燥，減壓蒸去溶劑然后通過硅膠柱色譜法純化所得殘留物(2∶1正己烷/乙酸乙酯)，得到125mg化合物5。
1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)7.06(1H，s)，6.93(1H，dd，11.2，16.3Hz)，6.12(1H，t，11.2 Hz)，6.04(1H，d，16.1 Hz)，5.73(1H，t，11.2 Hz)，5.40(1H，m)，5.14(1H，t，8.0 Hz)，5.00(1H，ddd，1.1，8.0，11.2 Hz)，4.41(1H，d，16.3 Hz)，3.96(1H，d，16.3 Hz)，2.35(3H，s)，2.34(3H，s)，2.21(1H，dd，8.7，15.4 Hz)，2.04(1H，ddd，3.3，8.7，15.4 Hz)，1.96(3H，s)，1.54(3H，d，6.3 Hz)FAB-MS m/z527[M+H]+實施例6化合物6將乙酸酐(1ml)加到化合物1(166mg)的吡啶溶液(1ml)中，并在室溫攪拌所得的混合物13小時。用水稀釋反應(yīng)溶液并用乙酸乙酯(50ml×3)提取。按稀鹽酸水溶液，飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化鈉水溶液的順序洗滌提取物。用無水硫酸鈉干燥，減壓蒸去溶劑然后通過硅膠柱色譜法純化所得殘留物(2∶1正己烷/乙酸乙酯)，得到174mg化合物6。
1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)7.99(1H，s)，7.07(1H，s)，6.93(1H，dd，11.1，16.3 Hz)，6.14(1H，t，11.1 Hz)，6.04(1H，d，16.3 Hz)，5.75(1H，t，11.1 Hz)，5.43(1H，m)，5.34(1H，t，7.5 Hz)，5.05(1H，dd，7.5，11.1 Hz)，4.31(1H，d，16.2 Hz)，3.96(1H，d，16.2 Hz)，2.35(3H，s)，2.34(3H，s)，2.14(1H，m)，2.06(1H，m)，1.57(3H，d，6.4 Hz)FAB-MS m/z513[M+H]+實施例7化合物7將乙酸酐(0.5ml)加到化合物4(30mg)的吡啶溶液(0.5ml)中，并在室溫攪拌所得的混合物13小時。減壓蒸去溶劑然后通過硅膠柱色譜法純化所得殘留物(1∶1正己烷/乙酸乙酯)，得到30mg化合物7。
1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)7.06(2H，s)，6.88(2H，dd，11.0，15.9Hz)，6.17(2H，t，10.8 Hz)，6.05(2H，d，16.3 Hz)，5.67(2H，t，10.4 Hz)，5.45(2H，m)，5.05(2H，dd，7.8，9.7 Hz)，4.82(2H，dd，8.5，8.4 Hz)，4.30(2H，d，15.8 Hz)，3.95(2H，D，15.8 Hz)，2.338(6H，s)，2.337(6H，s)，2.25(2H，m)，2.06(2H，m)，1.54(6H，d，6.4 Hz)FAB-MS m/z1015[M+H]+實施例8將鹽酸羥胺(20mg)加到根赤殼菌素(42mg)的吡啶溶液(2ml)中，并在50℃攪拌所得的混合物8小時。減壓蒸去溶劑然后通過硅膠柱色譜法純化所得殘留物(25∶1氯仿/甲醇)得到10mg化合物8。通過1H NMR鑒定所得的化合物8發(fā)現(xiàn)為異構(gòu)體的混合物(約3∶1)，這是因為肟羥基的存在所致。
1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)7.22(1H，dd，11.3，16.2 Hz)，7.12(0.5H，dd，11.2，16.1 Hz)，6.83(1.5H，d，16.2 Hz)，6.43(1H，s)，6.42(0.5H，s)，6.16(1H，t，11.3 Hz)，6.11(0.5H，t，11.2 Hz)，5.58(1H，dd，3.6，11.3Hz)，5.46(0.5H，dd，3.4，11.2 Hz)，5.30(1.5H，m)，4.79(0.5H，d，16.3 Hz)，4.72(0.5H，d，16.3 Hz)，3.91(1H，d，16.1 Hz)，3.81(1H，d，16.1 Hz)，3.35(1.5H，m)，3.02(1.5H，m)，2.97(0.5H，m)，2.42(1.5H，m)，1.60(1.5H，m)，1.53(3H，d，6.6 Hz)，1.52(1.5H，d，7.7 Hz)FAB-MS m/z380[M+H]+實施例9化合物9將O-甲基羥胺鹽酸鹽(100mg)加到根赤殼菌素(200mg)的吡啶溶液(1ml)中，并在80℃攪拌所得的混合物90分鐘。減壓蒸去溶劑然后通過硅膠柱色譜法純化所得殘留物(1％甲醇/氯仿)得到34mg化合物9。1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)7.23(1H，dd，11.3，16.2 Hz)，6.70(1H，d，16.2 Hz)，6.4 2(1H，s)，6.14(1H，t，11.3 Hz)，5.58(1H，dd，3.6，11.3 Hz)，5.30(1H，m)，3.904(1H，d，16.1 Hz)，3.901(3H，s)，3.80(1H，d，16.1 Hz)，3.33(1H，m)，3.01(1H，m)，2.42(1H，ddd，3.5，3.5，14.5 Hz)，1.59(1H，ddd，4.1，9.0，14.5Hz)，1.52(3H，d，6.5 Hz)FAB-MS m/z394[M+H]+實施例10化合物10冰浴冷卻根赤殼菌素(500mg)的二甲基甲酰胺溶液(7.5ml)，將其與咪唑(700mg)和叔丁基二甲基硅烷氯化物(1.1g)的二甲基甲酰胺溶液(2.5ml)依次混合，在室溫攪拌所得的混合物12小時。通過加入乙酸乙酯(50ml)稀釋反應(yīng)溶液，然后用水洗滌兩次。用無水硫酸鈉干燥，減壓蒸去溶劑然后通過硅膠柱色譜法純化所得殘留物(3∶1正己烷/乙酸乙酯)，得到902mg化合物10。1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)7.58(1H，dd，10.8，16.2 Hz)，6.39(1H，s)，6.13(1H，ddd，1.1，10.8，10.8 Hz)，6.04(1H，d，16.2 Hz)，5.78(1H，dd，3.5，10.8 Hz)，5.32(1H，m)，3.89(1H，d，16.3Hz)，3.70(1H，d，16.3 Hz)，3.40(1H，ddd，1.9，1.9，3.4 Hz)，3.02(1H，ddd，1.9，2.3，9.4 Hz)，2.44(1H，ddd，3.2，3.2，14.4Hz)，1.54(3H，d，6.6 Hz)，1.50(1H，m)，1.00(9H，s)，0.94(9H，s)，0.24(3H，s)，0.22(3H，s)，0.21(3H，m)，0.20(3H，s)FAB-MS m/z593[M+H]+實施例11
化合物11將吡啶(0.1ml)和鹽酸羥胺(240mg)加到化合物10(319mg)的二氯甲烷溶液(5ml)中，然后在70℃攪拌所得的混合物30小時。將反應(yīng)溶液冷卻到室溫，用氯仿稀釋，然后按稀鹽酸水溶液，飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化鈉水溶液的順序洗滌提取物。用無水硫酸鈉干燥，減壓蒸去溶劑然后通過硅膠柱色譜法純化所得殘留物(1∶1正己烷/乙酸乙酯)，得到18mg化合物11。通過1H NMR鑒定所得的化合物11發(fā)現(xiàn)為異構(gòu)體的混合物(約1∶1)，這是因為肟羥基的存在所致。1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)7.24(1H，dd，11.3，16.1 Hz)，7.13(1H，dd，11.2，16.0 Hz)，6.87(1H，d，16.1 Hz)，6.37(1H，s)，6.36(1H，s)，6.20(1H，d，16.0 Hz)，6.14(1H，t，11.3 Hz)，6.08(1H，t，11.2 Hz)，5.65(1H，dd，3.0，11.3 Hz)，5.53(1H，dd，3.1，11.2 Hz)，5.26(2H，m)，4.85(1H，d，16.3 Hz)，3.91(1H，d，16.2 Hz)，3.60(1H，d，16.2 Hz)，3.39(2H，m)，3.01(1H，d，16.3 Hz)，2.98(2H，m)，2.42(2H，m)，1.56(3H，d，6.5 Hz)，1.54(3H，d，6.5 Hz)，1.49(2H，m)，1.00(18H，s)，0.943(9H，s)，0.942(9H，s)，0.23(6H，s)，0.212(6H，s)，0.209(6H，s)，0.20(6H，s)FAB-MS m/z608 [M+H]+實施例12化合物12在0℃下按順序?qū)⒍惐野?160μl)和氯甲基甲基醚(75μl)加到化合物11(100mg)的二氯甲烷溶液(1ml)中，并在0℃攪拌所得的混合物7小時。減壓蒸去溶劑，然后通過硅膠柱色譜法純化所得殘留物(5∶1正己烷/乙酸乙酯)，得到58mg的化合物12。通過1H NMR鑒定所得的化合物12發(fā)現(xiàn)為異構(gòu)體的混合物(約1∶1)，這是因為肟羥基的存在所致。1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)7.24(1H，dd，11.2，16.1 Hz)，7.12(1H，dd，11.2，16.1 Hz)，6.81(1H，d，16.1 Hz)，6.36(2H，s)，6.12(1H，ddd，2.0，11.2，11.2 Hz)，6.07(1H，ddd，1.5，11.2，11.2Hz)，5.66(1H，dd，2.9，11.2 Hz)，5.52(1H，dd，3.2，11.2 Hz)，5.28(2H，m)，5.22(2H，ABq，7.3 Hz)，5.18(2H，s)，4.81(1H，d，16.4 Hz)，3.97(1H，d，16.4 Hz)，3.59(1H，d，16.4 Hz)，3.50(3H，s)，3.48(3H，s)，3.37(2H，m)，3.05(1H，d，16.4 Hz)，3.02-2.94(2H，m)，2.45-2.39(2H，m)，1.56(3H，d，7.8 Hz)，1.54(3H，d，6.6 Hz)，1.00(18H，s)，0.943(9H，s)，0.940(9H，s)，0.23(6H，s)，0.21(6H，s)，0.204(6H，s)，0.200(6H，s)FAB-MS m/z652[M+H]+實施例13化合物13將1M四正丁基氟化銨的四氫呋喃溶液(50μl)加到化合物12(22mg)的四氫呋喃溶液(0.5ml)中，并在室溫攪拌所得的混合物2小時。加入乙酸乙酯稀釋反應(yīng)溶液，然后用水洗滌兩次。用無水硫酸鈉干燥，減壓蒸去溶劑，然后通過硅膠柱色譜法純化所得殘留物(2％甲醇/氯仿)，得到11mg化合物13。通過1H NMR鑒定所得的化合物13發(fā)現(xiàn)為異構(gòu)體的混合物(約1∶1)，這是因為肟羥基的存在所致。1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)7.29(1H，dd，11.2，16.1 Hz)，7.18(1H，dd，11.0，16.1 Hz)，6.77(1H，d，16.1 Hz)，6.43(2H，s)，6.17(1H，t，11.2 Hz)，6.16(1H，d，16.1 Hz)，6.13(1H，t，11.0 Hz)，5.61(1H，dd，3.4，11.2 Hz)，5.50(1H，dd，3.4，11.0 Hz)，5.30(2H，m)5.19(2H，ABq，7.3 Hz)，5.13(2H，ABq，7.1 Hz)，4.65(1H，d，16.6 Hz)，3.，95(1H，d，16.4 Hz)，3.84(1H，d，16.4 Hz)，3.46(1H，d，16.6 Hz)，3.47(3H，s)，3.43(3H，s)，3.33(1H，m)，3.30(1H，m)，3.02(1H，m)，2.97(1H，m)，2.42(2H，m)，1.68-1.58(2H，m)，1.53(3H，d，7.8 Hz)，1.51(3H，d，6.6 Hz)FAB-MS m/z424[M+H]+
實施例14化合物14在室溫攪拌根赤殼菌素(36.4mg)和O-(3-疊氮基丙基)羥胺鹽酸鹽(20mg)的吡啶溶液(0.5ml)14小時。減壓蒸去溶劑，然后通過硅膠柱色譜法純化所得殘留物(1％甲醇/氯仿)，得到29.3mg化合物14。1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)7.24(1H，ddd，1.0，11.2，16.1 Hz)，6.72(1H，d，16.1 Hz)，6.43(1H，s)，6.15(1H，ddd，1.7，11.2，11.2Hz)，5.59(1H，dd，3.7，11.2 Hz)，5.30(1H，m)，4.20(2H，m)，3.92(1H，d，16.1 Hz)，3.81(1H，d，16.1 Hz)，3.42(2H，t，6.6Hz)，3.34(1H，m)，3.01(1H，m)，2.42(1H，ddd，3.4，3.4，14.4Hz)，1.96(2H，m)，1.59(1H，ddd，3.9，8.8，14.4 Hz)，1.52(3H，d，6.4 Hz)FAB-MS m/z463[M+H]+實施例15化合物15將化合物1(60mg)和4-二甲氨基吡啶(40mg)的二氯甲烷(2ml)溶液冷卻到0℃，向其中緩慢滴加入棕櫚酰氯(0.1ml)，并在0℃攪拌所得的混合物30分鐘。減壓蒸去溶劑，然后通過硅膠柱色譜法純化所得殘留物(4∶1正己烷/乙酸乙酯)，得到92mg化合物15。1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)7.98(1H，s)，7.03(1H，s)，6.94(1H，dd，11.2，16.3 Hz)，6.14(1H，t，11.2 Hz)，6.04(1H，d，16.3Hz)，5.74 1H，t，11.2 Hz)，5.40(1H，m)，5.32(1H，brt，7.6Hz)，5.05(1H，dd，7.6，11.2 Hz)，4.29(1H，d，16.3 Hz)，3.95(1H，d，16.3 Hz)，2.63-2.52(4H，m)，2.14(1H，dd，7.6，15.4Hz)，2.05(1H，m)，1.80-1.72(4H，m)，1.55(3H，d，6.3 Hz)，1.43-1.26(48H，m)，0.88(6H，t，6.7 Hz)FAB-MS m/z905 [M+H]+
實施例16化合物16將化合物4(96mg)和4-二甲氨基吡啶(126mg)的二氯甲烷溶液(6ml)冷卻到0℃，向其中緩慢滴加入棕櫚酰氯并在0℃攪拌所得的混合物2小時。減壓蒸去溶劑然后通過硅膠柱色譜法純化所得殘留物(4∶1正己烷/乙酸乙酯)，得到130mg化合物16。1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)7.02(2H，s)，6.88(2H，m)，6.16 (1H，t，10.8 Hz)，6.15(1H，t，10.8 Hz)，6.04(1H，d，16.2 Hz)，6.03(1H，d，16.2 Hz)，5.66(1H，t，10.8 Hz)，5.64(1H，t，10.8 Hz)，5.43(2H，m)，5.06(1H，dd，6.0，10.8 Hz)，5.02(1H，dd，6.8，9.0 Hz)，4.80(1H，brt，8.8 Hz)，4.68(1H，brt，8.6 Hz)，4.29(1H，d，16.3 Hz)，4.27(1H，d，16.2 Hz)，3.95(2H，d，16.3 Hz)，2.60-2.52(8H，m)，2.29-2.18(2H，m)，2.06(2H，m)，1.81-1.71(8H，m)，1.522(3H，d，6.3 Hz)，1.517(3H，d，6.3 Hz)，1.43-1.21(96H，m)，0.88(12H，t，6.8 Hz)FAB-MS m/z1801.9[M+H]+實施例17化合物17將濃鹽酸(36％，0.5ml)滴加到化合物a(參考實施例1制備)(343mg)的二噁烷溶液(5ml)中，并在室溫攪拌所得的混合物30分鐘。用水洗滌反應(yīng)溶液并用無水硫酸鈉干燥，減壓蒸去溶劑然后通過硅膠柱色譜法純化所得殘留物(4∶1正己烷/乙酸乙酯)，得到96mg化合物17。1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)7.01(1H，s)，6.95(1H，dd，11.1，16.3Hz)，6.21(1H，t，11.1 Hz)，6.03(1H，d，16.3 Hz)，5.77(1H，t，11.1 Hz)，5.51(1H，m)，4.97(1H，ddd，1.0，6.6，11.1 Hz)，4.32(1H，d，16.2 Hz)，3.97(1H，t，6.6 Hz)，3.93(1H，d，16.2 Hz)，2.62-2.45(4H，m)，2.12(1H，m)，2.01(1H，m)，1.79-1.69(4H，m)，1.50(3H，d，6.3 Hz)，1.44-1.21(48H，m)，0.88(6H，t，6.6Hz)FAB-MS m/z877[M+H]+
實施例18化合物18將化合物17(25mg)的二氯甲烷溶液(4ml)冷卻到0℃，并向其中滴加入吡啶(5滴)和乙酰氯(5滴)，在0℃攪拌所得的混合物30分鐘。減壓蒸去溶劑然后通過硅膠柱色譜法純化所得殘留物(5∶1正己烷/乙酸乙酯)，得到15mg化合物18。1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)7.02(1H，s)，6.93(1H，dd，11.2，16.4Hz)，6.12(1H，t，11.2 Hz)，6.03(1H，d，16.4 Hz)，5.73(1H，t，11.2 Hz)，5.38(1H，m)，5.13(1H，t，8.0 Hz)，5.01(1H，dd，8.0，11.2 Hz)，4.34(1H，d，16.4 Hz)，3.96(1H，d，16.4 Hz)，2.61-2.55(4H，m)，2.20(1H，m)，2.03(1H，m)，1.95(3H，s)，1.80-1.71(4H，m)，1.53(3H，d，6.4 Hz)，1.43-1.26(48H，m)，0.88(6H，t，6.6 Hz)FAB-MS m/z919[M+H]+實施例19化合物19將濃氫溴酸(47％，3滴)緩慢滴加到化合物a(見下文，通過參考實施例1制備)(106mg)的二噁烷溶液(5ml)中，并在室溫攪拌所得的混合物30分鐘。用氯仿稀釋反應(yīng)溶液并用水洗滌。用無水硫酸鈉干燥，減壓蒸去溶劑然后通過硅膠柱色譜法純化所得殘留物(3∶1正己烷/乙酸乙酯)，得到41mg化合物19。1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)7.03(1H，s)，6.99(1H，dd，10.8，16.1Hz)，6.14(1H，t，10.8 Hz)，6.05(1H，d，16.1 Hz)，5.94(1H，t，10.8 Hz)，5.50(1H，m)，5.10(1H，dd，5.9，10.8 Hz)，4.29(1H，d，16.1 Hz)，4.13(1H，br t，5.9 Hz)，3.94(1H，d，16.1 Hz)，2.60-2.54(4H，m)，2.13(1H，dd，6.9，15.2 Hz)，2.00(1H，m)，1.80-1.69(4H，m)，1.50(3H，d，6.3 Hz)，1.44-1.26(48H，m)，0.88(6H，t，6.6 Hz)FAB-MS m/z921，923[M+H]+
實施例20化合物20按順序?qū)⑦拎?5滴)和乙酸酐(3滴)滴加到化合物19的二氯甲烷溶液(1ml)中，并在室溫攪拌所得的混合物16小時。減壓蒸除溶劑并通過硅膠制備薄層色譜純化所得的殘留物(0.25mm×10cm×20cm，5∶1正己烷/乙酸乙酯)，得到4.3mg化合物20。1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)7.04(1H，s)，6.97(1H，dd，10.7，16.1Hz)，6.05(1H，t，10.7 Hz)，6.04(1H，d，16.1 Hz)，5.89(1H，t，10.7 Hz)，5.38(1H，m)，5.27(1H，brt，7.8 Hz)，5.09(1H，dd，7.8，10.7 Hz)，4.32(1H，d，16.4 Hz)，3.96(1H，d，16.4 Hz)，2.63-2.56(4H，m)，2.21(1H，dd，7.8，14.4 Hz)，2.02(1H，m)，1.976(3H，s)，1.81-1.71(4H，m)，1.53(3H，d，6.4 Hz)，1.47-1.23(48H，m)，0.88(6H，t，6.8 Hz).FAB-MS m/z963，965[M+H]+實施例21化合物21按順序?qū)?-二甲氨基吡啶(300mg)和棕櫚酰氯(1.0ml)加到化合物3(250mg)的二氯甲烷溶液(10ml)中，并在室溫攪拌所得的混合物30分鐘。減壓蒸去溶劑然后通過硅膠柱色譜法純化所得殘留物(3∶1正己烷/乙酸乙酯)，得到130mg化合物21。1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)7.04(1H，s)，6.97(1H，dd，11.0，16.8Hz)，6.04(1H，t，11.0 Hz)，6.00(1H，d，16.8 Hz)，5.89(1H，t，11.0 Hz)，5.38(1H，m)，5.28(1H，t，7.6 Hz)，5.10(1H，dd，7.6，11.0 Hz)，4.31(1H，d，16.1 Hz)，3.95(1H，d，16.1 Hz)，2.61-2.53(6H，m)，2.22(1H，dd，7.8，14.4 Hz)，2.01(1H，m)，1.81-1.71(6H，m)，1.53(3H，d，6.4 Hz)，1.43-1.26(72H，m)，0.88 6H，t，6.8 Hz)FAB-MS m/z1160，1162 [M+H]+
實施例22化合物22將偶氮二羧酸二乙酯(0.1ml)滴加到化合物11(250mg)，N-(6-羥基己基)鄰苯二甲酰亞胺(244mg)和三苯膦(135mg)的四氫呋喃溶液(1.5ml)中，并在室溫攪拌所得的混合物21小時。減壓蒸去溶劑然后通過硅膠柱色譜法純化所得殘留物(7.5∶1正已烷/乙酸乙酯)，得到49mg化合物22。1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)7.83(2H，m)，7.71(2H，m)，7.08(1H，dd，11.2，16.1 Hz)，6.30(1H，s)，6.27(1H，d，16.1 Hz)，6.18(1H，dd，10.5，11.2 Hz)，5.48(1H，dd，3.2，10.5 Hz)，5.24(1H，m)，3.98(1H，d，16.1 Hz)，3.91(2H，m)，3.69(2H，m)，3.56(1H，d，16.1 Hz)，3.41(1H，m)，2.96(1H，m)，2.42(1H，m)，1.83-1.37(9H，m)，1.55(3H，d，6.5 Hz)，0.975(9H，s)，0.973(9H，s)，0.24(3H，5)，0.22(3H，s)，0.204(3H，s)，0.197(3H，s)FAB-MS m/z837[M+H]+實施例23化合物23將四正丁基氟化銨(1M四氫呋喃溶液，0.05ml)滴加到化合物22(21.6mg)的四氫呋喃溶液(1ml)中，并在室溫攪拌所得的混合物10分鐘。將反應(yīng)溶液傾入到飽和氯化銨水溶液中并用乙酸乙酯提取3次。用無水硫酸鈉干燥提取物，減壓蒸去溶劑然后通過硅膠柱色譜法純化所得殘留物(1％甲醇/氯仿)，得到16mg化合物23。1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)7.79-7.71(4H，m)，7.03(1H，dd，11.2，16.1 Hz)，6.77(1H，d，16.1 Hz)，6.42(1H，s)，6.04(1H，dd，10.5，11.2 Hz)，5.39(1H，dd，3.2，10.5 Hz)，5.26(1H，m)，3.93(2H，m)，3.84(1H，d，16.1 Hz)，3.73(1H，d，16.1 Hz)，3.62(2H，m)，3.23(1H，m)，2.91(1H，m)，2.39(1H，m)，1.80-1.33(9H，m)，1.47(3H，d，6.8 Hz)FAB-MS m/z609 [M+H]+
實施例24化合物24將O-(6-疊氮基己基)羥胺鹽酸鹽(575mg)加到根赤殼菌素(900mg)的吡啶(5ml)溶液中，并在室溫攪拌所得的混合物78小時。減壓蒸去溶劑然后通過硅膠柱色譜法純化所得殘留物(1％甲醇/氯仿)，得到319mg化合物24。1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)7.23(1H，dd，11.2，16.1 Hz)，6.72 (1H，d，16.1 Hz)，6.42(1H，s)，6.15(1H，dd，10.5，11.2 Hz)，5.58(1H，3.4，10.5 Hz)，5.30(1H，m)，4.19-4.08(2H，m)，3.9 1(1H，d，16.1 Hz)，3.81(1H，d，16.1 Hz)，3.34(1H，m)，3.01(1H，m)，2.42(1H， m)，1.77-1.65(2H，m)，1.62-1.56(9H，m)，1.52(3H，d，6.6 Hz)FAB-MS m/z505[M+H]+實施例25化合物25將O-[5-(叔丁氧基羰基)戊基]羥胺鹽酸鹽(400mg)加到根赤殼菌素(364mg)的吡啶(3ml)溶液中，并在室溫攪拌所得的混合物19小時，然后在60℃攪拌2小時。減壓蒸去溶劑然后通過硅膠柱色譜法純化所得殘留物(1％甲醇/氯仿)，得到316mg化合物25。1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)7.23(1H，dd，11.3，16.2 Hz)，6.71(1H，dd，16.2 Hz)，6.42(1H，s)，6.15(1H，dd，10.3，11.3 Hz)，5.58(1H，dd，3.4，10.3 Hz)，5.30(1H，m)，4.15-4.08(2H，m)，3.91(1H，d，16.0 Hz)，3.81(1H，d，16.0 Hz)，3.33(1H，m)，3.02(1H，m)，2.42(1H，m)，2.25-2.20(2H，m)，1.75-1.34(7H，m)，1.52(3H，d，6.5 Hz)，1.43(9H，s)FAB-MS m/z550 [M+H]+
實施例26化合物26將O-[5-[[2-(三甲基甲硅烷基)乙基]氧基羰基]戊基]羥胺鹽酸鹽(915mg)加到根赤殼菌素(800mg)的吡啶溶液(2ml)中，并在室溫攪拌所得的混合物22小時。減壓蒸去溶劑然后通過硅膠柱色譜法純化所得殘留物(1％甲醇/氯仿)，得到295mg化合物26。1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)7.23(1H，dd，11.2，16.1 Hz)，6.71(1H，d，16.1 Hz)，6.42(1H，s)，6.15(1H，dd，10.7，11.2 Hz)，5.58(1H，dd，3.7，10.7 Hz)，5.30(1H，m)，4.19-4.13(4H，m)，3.91(1H，d，16.1 Hz)，3.81(1H，d，16.1 Hz)，3.34(1H，m)，3.01(1H，m)，2.41(1H，m)，2.33-2.29(2H，m)，1.77-1.30(7H，m)，1.52(3H，d，6.8 Hz)，1.00-0.95(2H，m)，0.03(9H，s)FAB-MS m/z594[M+H]+實施例27化合物27將O-[6-(烯丙氧基羰基氨基)己基]羥胺鹽酸鹽(116mg)加到根赤殼菌素(140mg)的吡啶(3ml)溶液中，并在室溫攪拌所得的混合物79小時。減壓蒸去溶劑然后通過硅膠柱色譜法純化所得殘留物(1％甲醇/氯仿)，得到156mg化合物27。1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)7.23(1H，dd，11.2，16.1 Hz)，6.71(1H，d，16.1 Hz)，6.42(1H，s)，6.15(1H，t，11.2 Hz)，5.91(1H，m)，5.58(1H，dd，3.7，11.2 Hz)，5.30(1H，m)，5.27(1H，dd，1.7，17.3 Hz)，5.16(1H，brd，10.5 Hz)，4.50(2H，m)，4.18-4.06(2H，m)，3.91(1H，d，16.1 Hz)，3.80(1H，d，16.1 Hz)，3.35(1H，m)，3.12-3.07(2H，m)，3.01(1H，m)，2.41(1H，m)，1.76-1.30(9H，m)，1.52(3H，d，6.6 Hz)FAB-MS m/z563[M+H]+
實施例28化合物28將6-氨基氧基己酸鹽酸鹽(270mg)加到根赤殼菌素(430mg)的吡啶溶液(2ml)中，并在室溫攪拌所得的混合物12小時，然后在60℃攪拌1小時。減壓蒸去溶劑然后通過硅膠柱色譜法純化所得殘留物(2％甲醇/氯仿)，得到213mg化合物28。1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)7.23(1H，dd，11.3，16.2 Hz)，6.71(1H，d，16.2 Hz)，6.42(1H，s)，6.15(1H，dd，10.8，11.3 Hz)，5.58(1H，dd，3.6，10.8 Hz)，5.30(1H，m)，4.16-4.08(2H，m)，3.91(1H，d，16.1 Hz)，3.80(1H，d，16.1 Hz)，3.33(1H，m)，3.02(1H，m)，2.42(1H，m)，2.30(2H，m)，1.77-1.45(7H，m)，1.52(3H，d，6.5 Hz)FAB-MS m/z494[M+H]+實施例29化合物29將氨基氧基乙酸半鹽酸鹽(1.0g)加到根赤殼菌素(1.5g)的吡啶溶液(5ml)中，并在室溫攪拌所得的混合物20小時，然后在60℃攪拌1.5小時。減壓蒸去溶劑然后通過硅膠柱色譜法純化所得殘留物(2％甲醇/氯仿)，得到692mg化合物29。1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)7.27(1H，dd，11.2，16.1 Hz)，6.82(1H，d，16.1 Hz)，6.42(1H，s)，6.17(1H，dd，10.5，11.2 Hz)，5.61(1H，dd，3.4，10.5 Hz)，5.31(1H，m)，4.64(2H，m)，3.91(1H，d，16.4 Hz)，3.82(1H，d，16.4 Hz)，3.34(1H，m)，3.02(1H，m)，2.42(1H，m)，1.60(1H，ddd，4.2，9.0，14.4 Hz)，1.53(3H，d，6.6 Hz)FAB-MS m/z438[M+H]+
實施例30化合物30按順序?qū)-羥基琥珀酰亞胺(2.5g)和4-二甲基氨基吡啶(310mg)加到化合物29(5.2g)的四氫呋喃溶液(100ml)中，在室溫攪拌混合物幾分鐘，然后向其中滴加二環(huán)己基碳化二亞胺(4.5g)的四氫呋喃溶液(30ml)。室溫攪拌2小時后，通過過濾除去這樣沉淀得到的脲衍生物，減壓濃縮所得的濾液得到琥珀酰亞胺酯粗結(jié)晶。將所得的琥珀酰亞胺酯溶于100ml二氯甲烷中并按順序與三乙胺(4.5ml)和二甲胺鹽酸鹽(2.0g)混合，然后于室溫攪拌所得混合物。攪拌12小時后，減壓除去反應(yīng)溶劑，并將所得的殘留物溶于乙酸乙酯(500ml)中，用1N鹽酸水溶液和飽和氯化鈉水溶液洗滌，用無水硫酸鈉干燥。通過硅膠柱色譜法純化(100g；2％甲醇/氯仿)得到2g化合物30。1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)7.27(1H，dd，11.3，16.1 Hz)，6.81(1H，d，16.1 Hz)，6.42(1H，s)，6.17(1H，dd，10.5，11.3 Hz)，5.61(1H，dd，3.5，10.5 Hz)，5.30(1H，m)，3.91(1H，d，16.1 Hz)，3.82(1H，d，16.1 Hz)，3.34(1H，m)，3.08(3H，s)，3.02(1H，dd，2.2，3.7，8.9 Hz)，2.95(3H，s)，2.42(1H，ddd ，3.6，3.7，14.5Hz)，1.60(1H，ddd，4.1，8.9，14.5 Hz)，1.52(3H，d，6.6Hz)FAB-MS m/z 465[M+H]+實施例31化合物31將根赤殼菌素(364mg)和O-(3-羥基丙基)羥胺鹽酸鹽(137mg)溶于3ml吡啶中并在室溫攪拌64小時。減壓蒸去溶劑然后通過硅膠柱色譜法純化所得殘留物(15g；1.5％甲醇/氯仿)，得到186mg化合物31。1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)7.23(1H，dd，11.3，16.1 Hz)，6.72(1H，d，16.1 Hz)，6.42(1H，s)，6.15(1H，dd，10.6，11.3 Hz)，5.59(1H，dd，3.5，10.6 Hz)，5.30(1H，m)，4.22 (2H，m)，3.91(1H，d，16.1 Hz)，3.80(1H，d，16.1 Hz)，3.67(2H，m)，3.33(1H，m)，3.01(1H，m)，2.41(1H，m)，1.92(2H，m)，1.58(1H，m)，1.52(3H，d，6.5 Hz)FAB-MS m/z 438[M+H]+實施例32化合物32將三乙胺(0.2ml)和4-二甲氨基吡啶(78mg)加入化合物9(100mg)的二氯甲烷溶液(6ml)中，在冰浴冷卻下向混合物中滴加入棕櫚酰氯(0.2ml)的四氫呋喃溶液(2ml)。在0℃攪拌1小時，然后在室溫攪拌2小時，接著減壓蒸去溶劑。將所得的殘留物溶于二乙醚中，用飽和氯化銨水溶液，飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化銨水溶液洗滌并通過硅膠柱色譜法純化(15g；20％乙酸乙酯/己烷)，得到156mg化合物32。1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)7.09(1H，dd，11.3，16.2 Hz)，6.98(1H，s)，6.73(1H，d，16.2 Hz)，6.09(1H，dd，10.7，11.3 Hz)，5.64(1H，dd，3.1，10.7 Hz)，5.34(1H，m)，4.02(1H，d，16.3 Hz)，3.96(3H，s)，3.73(1H，d，6.3 Hz)，3.43(1H，m)，2.97(1H，m)，2.57(2H，m)，2.46(2H，m)，2.41(1H，m)，1.77-1.59(4H，m)，1.56(3H，d，6.5 Hz)，1.46-1.26(48H，m)，0.88(6H，t，6.8Hz)FAB-MS m/z 870[M+H]+實施例33化合物33將2滴濃鹽酸(36％)加到化合物9(33mg)的二噁烷溶液(1.5ml)中，并在室溫靜置混合物30分鐘。用乙酸乙酯(5ml)稀釋反應(yīng)溶液，用水洗滌兩次，然后用無水硫酸鈉干燥。通過硅膠制備薄層色譜進(jìn)行純化(0.5ml×10cm×20cm；氯仿-甲醇-乙酸，194∶5∶1)得到12mg化合物33。1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)6.66(2H，m)，6.42(1H，s)，6.10(1H，m)，5.80(1H，t，10.3 Hz)，5.32(1H，m)，4.97(1H，dd，3.4，10.3 Hz)，4.59(1H，d，15.4 Hz)，3.89(3H，s)，3.84(1H，m)，3.67(1H，d，15.4 Hz)，2.09(1H，m)，1.94(1H，m)，1.45(3H，d，6.1 Hz)FAB-MS m/z 430[M+H]+實施例34化合物34用化合物9(22mg)，按實施例3的方法可以得到8mg化合物34。1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)6.63(2H，m)，6.42(1H，s)，5.99(1H，m)，5.93(1H，t，10.3 Hz)，5.31(1H，m)，5.10(1H，dd，3.6，10.3 Hz)，4.65(1H，d，15.7 Hz)，3.68(1H，m)，3.67(1H，d，15.7 Hz)，2.03(1H，m)，1.97(1H，ddd，3.6，9.8，14.4 Hz)，1.44(3H，d，6.0 Hz)FAB-MS m/z 474，476[M+H]+實施例35化合物35在冰浴冷卻下，將0.16ml草酰氯滴加到化合物9(362mg)的二甲基甲酰胺溶液(7ml)中，在冰浴冷卻下攪拌30分鐘，然后在室溫攪拌15小時。用50ml乙酸乙酯稀釋反應(yīng)溶液，用水洗滌兩次并用無水硫酸鈉干燥。進(jìn)行硅膠柱色譜法純化(10g；2％甲醇/氯仿)后得到94mg化合物35。1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)8.10(1H，s)，6.87(1H，d，16.0 Hz)，6.75(1H，dd，11.1，16.0 Hz)，6.49(1H，s)，6.19(1H，t，11.1Hz)，5.58(1H，t，11.1 Hz)，5.45(1H，m)，5.32(1H，m)，5.27(1H，dd，4.5，11.1 Hz) 3.91(3H，s)，3.85(1H，d，15.9 Hz)，3.75(1H，d，15.9 Hz)，2.03(1H，m)，1.95(1H，dd，4.8，14.4Hz)，1.51(3H，d，6.4 Hz)FAB-MS m/z 458[M+H]+實施例36化合物36用化合物30(410mg)，按實施例33的方法可以得到188mg化合物36。1H-NMR(CD3OD)δ(ppm)6.78(1H，d，16.0 Hz)，6.70(1H，dd，10.8，16.0 Hz)，6.42(1H，s)，6.10(1H，dd，10.8，11.4 Hz)5.82(1H，t，11.4 Hz)，5.33(1H，m)，4.98(1H，dd，3.1，11.4 Hz)，4.87-4.79(2H，m)，4.61(1H，d，15.1 Hz)，3.84(1H，m)，3.67(1H，d，15.1 Hz)，3.07(3H，s)，2.95(3H，s)，2.09(1H，m)，1.93(1H，m)，1.45 3H，d，6.0 Hz)FAB-MS m/z 501 [M+H]+實施例37片劑將化合物4(50g)，乳糖(40g)，玉米淀粉(68g)和羧甲基纖維素鉀(10g)混合，并通過加入10％羥丙基纖維素溶液捏和所得混合物。將捏和溶液加到模壓制粒機(jī)上制備顆粒，這些顆?？呻S后與硬脂酸鎂混合得到完全(whole)顆粒，用作制備片劑的顆粒。以適用的方式將其置于制片機(jī)上，可以得到每片含有50mg化合物4的片劑(170mg)。
實施例38膠囊加入10％羥丙基纖維素溶液捏和由30g化合物4，80g乳糖和58g土豆淀粉組成的混合物。將捏和溶液加到模壓制粒機(jī)上制備顆粒，這些顆粒可隨后與硬脂酸鎂混合并采用膠囊包裝機(jī)封裝在硬膠囊中，得到每個含有30mg化合物4的膠囊(170mg)。
實施例39軟膠囊將化合物4(10g)溶于100g大豆油中，并以適用的方式將所得的溶液注射到膠囊中，以制備每個含有10mg化合物4的膠囊(110mg)。
參考實施例114，16-二棕櫚?；鄽ぞ?化合物a)將根赤殼菌素(5g)、吡啶(3.3ml)和4-二甲氨基吡啶(1.2g)的甲苯溶液(150ml)冷卻到0℃，向溶液中緩慢滴加入棕櫚酰氯(12.5ml)，在0℃攪拌所得的混合物30分鐘。用氯仿(400ml)稀釋反應(yīng)溶液并用稀鹽酸水溶液、飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和鹽水洗滌。用無水硫酸鈉干燥，然后通過硅膠柱色譜純化(4∶1正己烷/乙酸乙酯)得到12g化合物a。1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)7.52(1H，dd，10.3，16.1 Hz)，7.02(1H，s)，6.15(1H，t，10.3 Hz)，6.06(1H，d，16.1 Hz)，5.79(1H，dd，3.9，10.3 Hz)，5.40(1H，m)，4.03(1H，d，16.4 Hz)，3.92(1H，d，16.4 Hz)，3.52(1H，m)，3.02(1H，ddd，2.2，2.2，7.8 Hz)，2.58(2H，t，7.6 Hz)，2.49(2H，ddd，1.7，7.3，7.3 Hz)，2.40(1H，3.4，3.4，14.7 Hz)，1.78-1.60(5H，m)，1.54(3H，d，6.6Hz)，1.49-1.23(48H，m)，0.88(6H，t，6.8 Hz).FAB-MS m/z841[M+H]+工業(yè)實用性本發(fā)明根赤殼菌素衍生物可在藥劑中使用，該藥劑具有抗腫瘤、抗菌或免疫抑制作用。
權(quán)利要求
1.下式(I)表示的根赤殼菌素衍生物或其可藥用鹽
其中R1和R2相同或不同，各自表示氫、烷?；?、鏈烯?；蚴宥』谆坠柰榛?1)當(dāng)X表示鹵素時，Y表示氧原子或R4-O-N{其中R4表示氫原子或表示取代或未取代的低級烷基(所說的取代基選自羥基，低級烷氧基，低級烷酰氧基，疊氮基，氨基，一-或二-低級烷氨基，低級烷?；被?，低級烷氧羰基氨基，低級鏈烯氧基羰基氨基，羧基，低級烷氧羰基，低級烷基氨基甲酰基和環(huán)亞氨基}；R3表示氫，烷?；?，鏈烯?；?SO-Z<其中Z表示下式(A)
{其中XA，R1A，R2A的定義分別同X，R1和R2；和YA表示氧原子或R4A-O-N(其中R4A的定義同R4)}>；和(2)當(dāng)X與R3彼此結(jié)合表示單鍵時；Y表示R4B-O-N(其中R4B的定義同R4)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中X表示鹵素。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中Y表示R4-O-N(其中R4的定義如上所述)。
4.由酪氨酸激酶引起的疾病的治療劑，該治療劑含有至少一種權(quán)利要求1-3任意一項所述的化合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及式(Ⅰ)表示的根赤殼菌素衍生物或其可藥用鹽,其中R
文檔編號C07D493/04GK1189160SQ96195001
公開日1998年7月29日 申請日期1996年4月26日 優(yōu)先權(quán)日1996年4月26日
發(fā)明者我妻勉, 齋藤裕, 山下順范, 水上民夫, 秋永士朗, 五味克成, 赤坂一人, 高橋勇美 申請人:協(xié)和發(fā)酵工業(yè)株式會社