專利名稱：含有2,4－亞甲基脯氨酸的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑、合成及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一類新型的降壓藥物，即含有2，4-亞甲基脯氨酸的依那普利類似物。
高血壓是危害現(xiàn)代人健康的多發(fā)病之一，它可以引起多種心血管疾病，治療高血壓是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)面臨的巨大挑戰(zhàn)之一。高血壓是人體內(nèi)血壓調(diào)節(jié)失衡所引起的，腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)是人體血壓調(diào)控的主要機制之一，它的調(diào)控機制如圖一。
從圖一我們可以看到，由肝臟合成并分泌的血管緊張素原在腎素作用下產(chǎn)生無活性的十肽，即血管緊張素I，血管緊張素I在血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)作用下，脫去羧端的組氨酰亮氨酸生成血管緊張素II。血管緊張素II作用于受體可引起多種生理活性，如強烈的血管收縮、醛甾酮分泌、腎的鈉吸收，、傷口痊愈等等，因此血管緊張素II過多就可以導(dǎo)致血壓升高，控制血管緊張素II的生成就可以達(dá)到治療高血壓的目的。由此可見RAS系統(tǒng)與高血壓，特別是腎型高血壓有著密切的聯(lián)系。到目前為止抗腎型高血壓的藥物研究主要集中在以下三個方面(1)血管緊張素轉(zhuǎn)化酶ACE抑制劑，(2)腎素抑制劑，(3)血管緊張素II受體拮抗劑。雖然腎素抑制劑和血管緊張素II的拮抗劑近些年研究取得了一些可喜的結(jié)果，但是一直沒能取得突破性進(jìn)展，僅僅處在研究階段，還沒有相應(yīng)的藥物上市。但是ACE抑制劑則不然，它已有多種藥物上市用于高血壓的治療，市場調(diào)查表明，ACE抑制劑將是需求增長最快的一類藥物，近十年來它一直是人們感興趣的研究領(lǐng)域。ACE是一種二肽水解酶，它不僅能使血管緊張素I轉(zhuǎn)化為具有收縮血管的血管緊張素II，而且還能催化水解血管舒緩素(brandykinin)降解神經(jīng)肽和P物質(zhì)。ACE廣泛存在于多種組織中，如肺、腎臟、腦、血液、皮膚等等。它是一種糖蛋白，分子量為130,000到160,000D，這主要取決于來源的組織。
Squibb公司的Ondentti和Cushman認(rèn)為ACE與含鋅的羧肽酶A相似，提出了底物與酶相互作用模型(見圖2)。從圖2中我們可以發(fā)現(xiàn)在ACE中重要的活性部位包括S1、S′1、S′2，它們是酶對底物發(fā)生特異性作用的部位(11)。在ACE活性部位中重要的催化集團(tuán)包括精氨酸、酪氨酸、賴氨酸、谷氨酸和螯合的Zn(II)等。
自從1965年Ferreia等從蛇毒中分到九肽替普羅肽(Teprotide)對ACE有特異性抑制作用，人們開始了對ACE抑制劑的研究。到目前為止，ACE抑制劑有兩大類。(一)肽類抑制劑、(二)肽類似物ACE抑制劑，肽類似物抑制劑按肽鏈的長短又可以分為兩類。1.二肽類似物抑制劑二肽類似物抑制劑的典型代表為Captopril，它與ACE活性部位的作用機制見Fig 3，從圖中我們可以看到，Captopril不僅與酶的S1′、S2′活性部位相結(jié)合，而且?guī)€基還可以強烈地與鋅離子絡(luò)合，從而表現(xiàn)出較好的抑制活性。其中一些抑制劑都是建立在對Captopril的改造上，基本上都是以巰基丙脯氨酸為模板，然后以一些脯氨酸類似物取代脯氨酸或者是用一些與鋅離子配位的基團(tuán)如-COOH、-CONOH、-PO3H2等取代巰基。
雖然二肽類似物抑制劑具有較高的活性，可以用于作為口服藥物，但是它也具有顯著的缺點，如口服量大，易引起味覺消失和皮疹等，因此人們逐漸轉(zhuǎn)向不含巰基的三肽類似物抑制劑的研究。
從圖2圖3的對比，我們可以發(fā)現(xiàn)，卡托普利沒有相應(yīng)的取代基和ACE的活性部位S1相作用，然而從底物與ACE相互作用看，S1活性部位對于抑制劑的結(jié)合也起到十分重要作用。Patchett等人首先成功地引入與S1.活性場相結(jié)合的羧基基團(tuán)。合成了一系列三肽類似物抑制劑，在這些抑制劑中效果最好的是化合物Enalaprilat和Lisinopril它們的活性要比卡托普利高十幾倍，臨床上已用于治療高血壓。其中Enalapril是Enalaprilat的藥物前體，它具有更好的體內(nèi)耐受性，因此在臨床上得到了更廣泛的應(yīng)用。Enalaprilat類抑制劑之所以具有較好的活性，這是因為它不僅具有與鋅離子配位的羧基，而且還有與S1活性場相結(jié)合的苯基側(cè)鏈以及亞氨與酶所形成的氫鍵，見圖4。不含羧基的三肽類似物抑制劑，它們雖然沒有與鋅離子強配位的基團(tuán)，但是抑制活性卻很高。這可能由于抑制劑上的羰基在酶上氨基酸的羧基負(fù)離子輔助下表現(xiàn)出較強的親核配位能力，見圖五。Fig.5 Proposed binding of the ketomethylene inhibitor 10c at the active siteof AC由此可見，三肽類似物抑制劑能更好地與ACE的活性中心相匹配，具有較高的抑制活性，而且依那普利是一類不含巰基的高效ACE抑制劑，沒有卡托普利因含有巰基所帶來的種種副作用，因此血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑的研究近些年來雖有了長足發(fā)展，并已有多種藥物用于高血壓治療，但是這些藥物都或多或少具有一些副作用，如咳嗽、血管性神經(jīng)水腫等等，尋找副作用小但高效的ACE抑制劑一直是藥學(xué)、化學(xué)工作者所追求的目標(biāo)。而2，4-亞甲基脯氨酸是一種從Aleleia herbert smiltii pittier分離出的非正常氨基酸。Montelione等人利用核磁共振研究了含有2，4-亞甲基脯氨酸的二肽Ac-Tyr-2，4-MePro的溶液構(gòu)象，證明反式構(gòu)象占優(yōu)(＞95％)。Talluri等人研究了Ac-2，4-MePro-NHCH3的衍生物晶體構(gòu)象，也證明反式為優(yōu)式構(gòu)象。通過利用分子動力學(xué)和CNDO 2對含有2，4-亞甲基脯氨酸的二肽計算發(fā)現(xiàn)反式構(gòu)象和順式構(gòu)象自由能差為5.9-8.8kal/mol，遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于脯氨酸的2kal/mol。由此可見，2，4-亞甲基脯氨酸是很好的脯氨酸替代物，我們針對上述存在的問題和特點，將2，4-亞甲基脯氨酸首次用于ACE抑制劑，合成了一類以2，4-亞甲基脯氨酸替代脯氨酸的依那普利類似物，以尋求一類高抑制活性的ACE抑制劑。
本發(fā)明的目的就是提供一種含有2，4-亞甲基脯氨酸的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑、合成及其用途。通過對肽骨架的修飾和改造，設(shè)計和合成了三肽類似物抑制劑-含有2，4-亞甲基脯氨酸的依那普利類似物，即以2，4-亞甲基脯氨酸替代脯氨酸以限制肽鍵的反式構(gòu)象、增強親脂性，從而提高了該ACE抑制劑的生物活性。
本發(fā)明所提供的含有2，4-亞甲基脯氨酸血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑具有如下分子通式
R2＝H，CnH2n+1，n＝14；R3＝HCH3；R4＝CnH2n+1，n＝1-3，NH2(CH2)m-，m＝1-4.其可以是1-(N-(1(S)-羧乙基-3-苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸芐脂、1-(N-(1(R)-羧乙基-3-苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸·鹽酸鹽、1-(N、N-甲基-(1(S)-羧乙基-3-苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸·鹽酸鹽、1-(N-(1(S)-羧乙基-3-苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸·鹽酸鹽、1-(N-(1(R)-羧乙基-3-對甲氧基苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸·鹽酸鹽、1-(N-(1(S)-羧乙基-3-對甲氧基苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸·鹽酸鹽、1-(N-(1(R)-羧乙基-3-對氯苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸·鹽酸鹽、1-(N-(1(S)-羧乙基-3-對氯苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸·鹽酸鹽、1-(N-(1(R)-羧甲基-3-間氯苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸·鹽酸鹽、1-(N-(1(R)-羧甲基-3-間氯苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸·鹽酸鹽、1-(N-(1(S)-羧乙基-3-對氯苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸·鹽酸鹽、1-(N-(1(S)-羧丁基-3-對氟苯乙基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸·鹽酸鹽、1-(N-(1(R)-羧丁基-3-苯乙基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸·鹽酸鹽、1-(N-(1(S)-羧乙基-3-苯丁基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸·鹽酸鹽、1-(N-(1(R)-羧基-3-苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸、1-(N-(1(S)-羧基-3-苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸、1-(N-(1(R)-羧乙基-3-苯乙基-N-甲基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸、1-(N-(1(S)-羧乙基-3-苯乙基-N-甲基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸、1-(N-(1(R)-羧基-3-苯丙基-N-甲基)-L-(γ-氨基)丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸、1-(N-(1(S)-羧基-3-苯丙基-N-甲基)-L-(γ-氨基)丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸、1-(N-(1(R)-羧基-3-對甲氧基苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸、1-(N-(1(S)-羧基-3-對甲氧基苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸、1-(N-(1(R)-羧基-3-間甲氧基苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸、1-(N-(1(S)-羧基-3-間甲氧基苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸、1-(N-(1(R)-羧基-3-苯丁基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸、1-(N-(1(S)-羧基-3-苯丁基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸、1-(N-(1(R)-羧基-3-鄰甲基苯丁基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸、1-(N-(1(S)-羧基-3-鄰甲基苯丁基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸。1-(N-(1(S)-羧基-3-苯甲基-N-甲基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸、1-(N-(1(R)-羧基-3-苯甲基-N-甲基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸、本發(fā)明還提供了該類含有2，4-亞甲基脯氨酸的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑的合成方法。分下列步驟首先是合成2，4-亞甲基脯氨酸芐酯，即以叔丁氧基甲酰胺(t-Butyl Carbamate-Boc)保護(hù)的絲氨酸為起始原料，利用芐基保護(hù)羧基，再與對甲苯磺酰氯反應(yīng)，在三乙胺的作用下發(fā)生消除反應(yīng)，生成了保護(hù)的脫氫丙氨酸。脫氫丙氨酸與烯丙基溴反應(yīng)。再進(jìn)一步在高壓汞燈照射下發(fā)生分子內(nèi)[2+2]加成反應(yīng)，生成了Boc保護(hù)的2，4-亞甲基脯氨酸芐酯，脫除Boc保護(hù)基后得化合物2，4-亞甲基脯氨酸芐酯。反應(yīng)通式如下
Reagents and conditionsa.BzlBr，K2CO3，acetone，reflux；b.TsCl，pyridine，0℃；c.Et3N，ether，0℃→5℃；d.Allyl bromide，K2CO3，acetone，reflux；e.Hg lamp(high pressure)，acetophenone，benzene；f.3.9N HCl in AcOEt，R.T.
其次是合成酮酸酯以進(jìn)一步合成含有手性的丙氨酸化合物，我們采用下面三種方法合成酮酸酯當(dāng)苯環(huán)上無取代基時，酮酸酯可利用格氏試劑與草酸二乙酯一步反應(yīng)制得，反應(yīng)通式如下
Reagents and conditionsa.40％HBr，98％H2SO4；b.Mg，I2，THF；c.(COOEt)2，THF.
當(dāng)苯環(huán)上取代基為甲氧基、烷基時，丙酮酸與對甲氧基苯甲醛縮合，然后乙酯化，再用鈀碳選擇性氫化雙鍵生成酮酸酯，反應(yīng)通式如下
Reagents and conditionsa.p-MeO PhCHO，2N NaOH，EtOH；b.DCC，EtOH，CHCl3；c.Pd/C，H2(leq.)，1atm.
當(dāng)苯環(huán)上的取代基為氯或氟原子時，酮酸酯合成是先縮合、乙酯化，再硼氫化鉀還原羰基，然后堿性條件下再加熱煮沸使烯醇異構(gòu)化，反應(yīng)通式如下
Reagents and conditionsa.p-Cl PhCHO，2N NaOH，EtOH；b.KBH4，6NHCl，H2O；c.5％NaOH，boiling；d.DCC，EtOH，CHCl3.再次是含有手性的丙氨酸的合成酮酸酯與丙氨酸芐酯發(fā)生反應(yīng)生成西佛堿，西
(R＝HCL MeO n＝2，3)Reagents and conditionsa.NaBH3CN，NMM，EtOH，R.T.b.Pd/C，H2，latm.佛堿被氰基取代的硼氫化鈉還原得到還原胺化產(chǎn)
Reagents and conditionsa.DCC，HOBt，DMF；b.Pd/C，H2，HCl，THF；c.NaOH，EtOH，R.T.，Dowex 50×4 200-400 mesh；d.Mel，NaHCO3，DMF；e.Pd/C，THF.物，再催化氫化脫掉芐基即得含有手性的丙氨酸化合物，反應(yīng)通式如上。
最后是含有2，4-亞甲基脯氨酸的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑的合成，反應(yīng)通式如上圖。即由化合物2，4-亞甲基脯氨酸芐酯與含有手性的丙氨酸化合物在常規(guī)的二環(huán)己基碳二亞胺(Dicyclohexylcarbodimide-DCC)和1-羥基拚三唑(1-Hydrobenzotriazole-HOBt)溶劑中縮合反應(yīng)，或胺烷基化后，再在甲醇溶劑中利用Pd/C作為催化劑催化，在氫化時加入乙酸乙酯、HCl溶液，以四氫呋喃作溶劑，脫掉芐基即得所需的最終產(chǎn)物A、B、C、E。
并對其中部分的含有2，4-亞甲基脯氨酸的血管緊張素抑制劑抑制活性進(jìn)行了測定，結(jié)果如下表
表1的測定和比較結(jié)果證實了此類依那普利類似物的較高的生物活性，也決定了其用途是作為治療高血壓的降壓藥物。
綜上所述，由于2，4-亞甲基脯氨酸替代脯氨酸，增加了肽鍵的反式構(gòu)象的比例、增強親脂性，因此其生物活性較已知藥物高，其中化合物1-(N-(1(S)-羧基-3-苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸的IC50值為1.3nM，抑制活性約是Enalaprilat的兩倍，是卡托普利的七倍。乙基保護(hù)化合物1-(N-(1(S)-乙氧基甲?；?3-對氯苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸·鹽酸鹽的抑制活性是藥物前體Enalapril的五倍。由此可見，2，4-亞甲基脯氨酸是脯氨酸很好的替代物，是一個很有發(fā)展前途的抑制劑。
以下實施例將有助于理解本發(fā)明，但不限于本發(fā)明實施例一.2，4-亞甲基脯氨酸芐脂合成叔丁氧基甲酰胺BocSer(9.35g，45mmol)溶于110ml丙酮中，加入芐基溴(6.4ml，54mmol)、碳酸鉀(13.7g，99mmol)，攪拌下加熱回流3-8小時，過濾掉碳酸鉀，減壓濃縮，加入乙酸乙酯溶解，飽和氯化鈉溶液洗滌兩次，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，快速柱層析(石油醚/乙酸乙酯＝40∶1)得無色液體6.7g，產(chǎn)率50.5％。1H NMR(90MHz，CCl4)δ7.30(5H，s)，5.48(1H，br s)，5.15(2H，s)，4.26(1H，m)，3.82(2H，m)，1.43(9H，s).
將上述產(chǎn)物(10.1g，34.2mmol)溶于20ml吡啶中，0--25℃下加入對甲苯磺酰氯(7.2g，37.6mmol)，1-15℃攪拌2-15小時。加入200ml乙醚，冰浴冷卻下加入鹽酸中和至中性，分出醚層，水層再用乙醚提取兩次，合并有機相，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，快速柱層析(石油醚/乙酸乙酯＝4∶1、2∶1)得微黃色固體，m.p.78-80℃，產(chǎn)率68.0％。1H NMR(90MHz)δ7.80(2H，m)，7.30(7H，m)，5.30(1H，br s)，5.15(2H，s)，4.50(1H，m)，4.35(2H，m)，2.45(3H，s)，1.43(9H，s).
將上述固體(10.4g，23.15mmol)溶于50ml 1∶1的乙酸乙酯/乙醚混合溶劑中，加入三乙胺(4.5ml，32.41mmol)，室溫攪拌2-8小時，過濾，濾液用5％檸檬酸溶液(2×10ml)、飽和碳酸氫鈉溶液(2×10ml)、飽和氯化鈉溶液(2×10ml)洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，快速柱層析(石油醚/乙酸乙酯＝20∶1)得到無色液體6.31g，產(chǎn)率98.4％。1H NMR(90MHz，CCl4)δ7.23(5H，s)，6.79(1H，br s)，6.10(1H，s)，5.60(1H，s)，5.14(2H，s)，1.40(9H，s).
將上述產(chǎn)物(3.9g，14.1mmol)溶于20ml丙酮，依次加入烯丙基溴(2.2ml，25.4mmol)、碳酸鉀(3.51g，25.4mmol)，攪拌下加熱回流2-30小時，過濾掉碳酸鉀，減壓濃縮，向殘留物中加入75ml乙酸乙酯，有機相用飽和氯化鈉溶液洗滌兩次，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，快速柱層析(石油醚/乙酸乙酯＝50∶1、20∶1)得無色油狀物3.16g，產(chǎn)率70.6％。1H NMR(90MHz)δ7.30(5H，s)，5.98-5.55(1H，m)，5.80(1H，s)，5.34(1H，s)，5.14(2H，s)，5.00(1H，m)，4.00(2H，d，J＝9.0Hz)，1.43(9H，s).
將上述產(chǎn)物(2.0g，6.3mmol)溶于250ml苯，加入光敏劑苯乙酮(24mg，0.2mmol)，高壓汞燈照射2-30小時，減壓濃縮，快速柱層析得無色液體1.45g，產(chǎn)率72.6％。1H NMR(90MHz)δ7.32(5H，s)，5.12(2H，s)，3.44(2H，s)，2.72(1H，m)，2.23-2.02(2H，m)，1.70(2H，m)，1.42(9H，s).
將上述產(chǎn)物(2.3g，7.25mmol)放入25ml蛋形瓶中，加入10ml HCl-乙酸乙脂溶液，室溫攪拌1-5小時，TLC表明原料全部消失，減壓濃縮，真空干燥得微黃色固體2，4-亞甲基脯氨酸芐脂1.75g，m.p.139-140℃，產(chǎn)率95.2％。二、酮酸酯的合成1、苯環(huán)上無取代基按文獻(xiàn)(L.M.Weinstock，R.B.Currie，and A.V.Lovell，synth，commun.，1981，11(2)，943.) 合成苯乙醇在酸性條件下溴化反應(yīng)，在THF溶劑格氏化后與草酸二乙酯反應(yīng)，得苯丙酮酸酯，減壓蒸餾，收集109-113℃/0.3mmHg(lit74，105-110℃/0.2-0.3mmHg)餾分得無色液體苯丙酮酸酯，產(chǎn)率56.2％。1H NMR(60MHz，CCl4)δ7.20(5H，s)，4.20(2H，q，J＝6.9Hz)，2.90(4H，m)，1.35(3H，t，J＝7.0Hz).
苯丙醇同樣步驟反應(yīng)收集130-135℃/0.1-0.2mmHg(lit74，130℃/0.1mmHg)餾分得無色液體苯丁酮酸酯，產(chǎn)率60.2％。1H NMR(90MHz，CCl4)δ7.18(5H，s)，4.20(2H，q，J＝6.8Hz)，2.72(4H，m)，1.92(2H，m)，1.34(3H，t，J＝7.0Hz).2.當(dāng)苯環(huán)上的取代基為氯Cl和氟F的合成丙酮酸(20.9ml，0.3mol)放入500ml三頸瓶中，冰水浴冷卻下加入2N氫氧化鈉(150ml，0.3mol)、10ml乙醇、對氯苯甲醛(42g，0.3mol)，電動攪拌下再滴加氫氧化鈉(150ml，0.3mol)，攪拌1-6小時，過濾，所濾固體依次用蒸餾水、甲醇、乙醚洗滌，真空干燥得黃色固體50g，產(chǎn)率71.7％。
上述固體(50g，0.214mol)溶于700ml蒸餾水，加入94％硼氫化鉀(7.0g，0.122mol)，攪拌至溶液黃色褪掉，室溫攪拌1-10小時，放置過夜。冰浴冷卻下用鹽酸酸化，無色固體析出，過濾，真空干燥得20.2g，產(chǎn)率44.4％。m.p.138-140℃。1H NMR(90MHz)δ7.30(4H，m)，6.50-5.70(2H，br m)，3.30(1H，d，J＝6.8Hz)，3.0(1H，m).
上述固體(20g，0.094mol)放入500ml園底燒瓶中，加入230ml氫氧化鈉溶液，水浴加熱1-4小時，體系呈微黃色溶液。冰浴冷卻，濃鹽酸酸化至PH＝3，乙醚提取三次，無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮得微黃色固體15.6g，產(chǎn)率78.0％。
上述產(chǎn)物(15.6g，73.4mmol)溶于100ml氯仿中，加入乙醇(8.5ml，146.8mmol)、DCC(15.1g，73.4mmol)，室溫攪拌6-30小時，減壓濃縮，加入乙酸乙酯白色固體析出，過濾，濾液用飽和碳酸氫鈉溶液、飽和氯化鈉溶液各洗兩次，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，快速柱層析得淡黃色液體對氯苯丙酮酸酯11.8g，產(chǎn)率66.8％。1H NMR(60MHz，CCl4)δ7.19(4H，m)，4.18(2H，q，J＝7.2Hz)，2.95(4H，m)，1.37(3H，t，J＝7.0Hz).3.當(dāng)苯環(huán)上的取代基為甲氧基Meo和烷基的合成丙酮酸(11.9ml，0.17mol)放入500ml三頸瓶中，冷卻條件下攪拌加入氫氧化鈉(85ml，0.17mol)、對甲氧基苯甲醛(20.8ml，0.17mol)，再滴加氫氧化鈉(85ml，0.17mol)，室溫攪拌1-6小時，酸化至pH＝3，乙酸乙酯提取三次，合并有機相，用飽和氯化鈉溶液洗滌兩次，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮得黃色固體30.0g，產(chǎn)率85.6％。
將上述黃色固體(6.5g，31.5mmol)溶于50ml氯仿中，加入乙醇(3.70ml，63.0mmol)、DCC(6.5g，31.5mmol)，攪拌24小時。蒸去溶劑，加入乙酸乙酯白色固體析出，過濾，濾液用飽和碳酸氫鈉溶液、飽和氯化鈉溶液各洗兩次，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，快速柱層析得黃色固體6.78g，m.p.69-71℃，產(chǎn)率92.0％。1H NMR(90MHz)δ7.80(1H，d，J＝17Hz)，7.55(2H，d，J＝9.0Hz)，7.16(1H，d，J＝17Hz)，6.90(2H，d，J＝9.0Hz)，4.36(2H，q，J＝7.0Hz)，3.90(3H，s)，1.40(3H，J＝7.0Hz).
將上述產(chǎn)物(1.17g，5.0mmol)溶于20ml甲醇中，加入100mg Pd/C，通入氫氣，濾去鈀碳，減壓濃縮，快速柱層析得無色液體對甲氧基丙酮酸酯800mg，產(chǎn)率67.8％。1H NMR(90MHz，CCl4)δ7.09(2H，d，J＝8.9Hz)，6.70(2H，d，J＝9.0Hz)，4.20(2H，q，J＝7.0Hz)，3.75(3H，s)，2.91(4H，m)，1.37(3H，t，J＝6.9Hz).三.手性丙氨酸的合成1、通用實驗步驟在250ml蛋形瓶中放入上述酮酸酯(30mmol)、丙氨酸芐脂(20mmol)和45ml乙醇，加入NMM(20mmol)，室溫攪拌1-6小時，然后滴入NaBH3CN(40mmol)的乙醇溶液，室溫攪拌。減壓濃縮，向殘留物中加入50ml乙醚和50ml水，分出醚層，水相再用乙醚提取兩次，合并有機相，無水硫酸鎂干燥。減壓濃縮，加入30ml 1.43N HCl乙酸乙酯溶液，再減壓濃縮，加入無水乙醚微黃色粘稠物析出，傾掉乙醚，再用無水乙醚洗滌兩次，然后加入飽和碳酸氫鈉溶液使體系呈堿性，乙醚提取三次，合并有機相，無水硫酸鎂干燥，減壓濃縮，柱層析得到無色液體。
化合物a(R＝H，n＝2，S config.)。產(chǎn)率26.2％，[α]D25＝-19.1(c，1.36，CH2Cl2)。1H NMR(300MHz)δ7.40(5H，s)，7.35-7.18(5H，m)，5.20(2H，ABsystem)，4.20(2H，m)，3.50(1H，q，J＝6.9Hz)，3.40(1H，t，J＝6.5Hz)，2.77(2H，m)，2.22(1H，br s)，2.10-1.85(2H，m)，1.42(3H，d，J＝6.9Hz)，1.32(3H，t，J＝7.1Hz).MS m/z370(M++1)，296(M+-CO2Et)，234(M+-COOBn)，91(C6H5CH2+，base peak).Anal.Cald.for C22H27NO4C，71.91；H，7.40；N，3.81FoundC，71.33；H，7.39；N，4.16化合物b(R＝H，n＝2，R config.)產(chǎn)率43.1％，[α]D25＝-18.5(c，0.98，CH2Cl2)。1H NMR(300MHz)δ7.35(5H，s)，7.30-7.10(5H，m)，5.10(2H，ABsystem)，4.12(2H，m)，3.40(1H，q，J＝7.0Hz)，3.28(1H，t，J＝6.6Hz)，2.70(2H，t，J＝7.9Hz)，2.50(1H，br s)，2.05-1.85(2H，m)，1.45(3H，d，J＝7.0Hz)，1.35(3H，t，J＝7.2Hz).MS m/z370(M++1)，296(M+-CO2Et)，234(M+-COOBn)，91(C6H5CH2+，base peak).Anal.Cald.for C22H27NO4C，71.91；H，7.40；N，3.81FoundC，71.23；H，7.42；N，4.03化合物c(R＝H，n＝3，S config.)產(chǎn)率31.8％，[α]D25＝-22.93(c，1.08，CH2Cl2)。1H NMR(300MHz)δ7.42(5H，s)，7.40-7.20(5H，m)，5.20(2H，ABsystem)，4.22(2H，m)，3.45(1H，q，J＝7.0Hz)，3.39(1H，t，J＝6.0Hz)，2.67(2H，m)，2.40(1H，br s)，1.90-1.60(4H，m)，1.40(3H，d，J＝7.0Hz)，1.30(3H，t，J＝7.1Hz).MS m/z384(M++1，base peak)，310(M+-CO2Et)，248(M+-COOBn).Anal.Cald.for C23H29NO4C，72.03；H，7.62；N，3.65FoundC，71.69；H，7.73；N，3.92化合物d(R＝H，n＝3，R config.)產(chǎn)率41.0％，[α]D25＝-11.07(c，1.76，CH2Cl2)。1H NMR(300MHz)δ7.42(5H，s)，7.39-7.20(5H，m)，5.20(2H，ABsystem)，4.20(2H，m)，3.45(1H，q，J＝7.0Hz)，3.35(1H，m)，2.69(2H，m)，2.56(1H，br s)，1.76(4H，m)，1.40(3H，d，J＝7.0Hz)，1.32(3H，t，J＝7.1Hz).MS m/z384(M++1，base peak)，310(M+-CO2Et)，248(M+-COOBn).Anal.Cald.for C23H29NO4C，72.03；H，7.62；N，3.65
FoundC，71.87；H，7.65；N，3.91化合物e(R＝Cl，n＝2，S config.)產(chǎn)率18.2％，[α]D25＝-16.4(c，1.06，CH2Cl2)。1H NMR(300MHz)δ7.38(5H，s)，7.25(2H，d，J＝8.4Hz)，7.05(2H，d，J＝8.4Hz)，5.15(2H，AB system)，4.17(2H，dq，J＝14.0Hz，3.5Hz)，3.45(1H，q，J＝7.0Hz)，3.30(1H，t，J＝6.4Hz)，2.65(2H，m)，2.05-1.75(3H，m)，1.39(3H，d，J＝7.0Hz)，1.28(3H，t，J＝7.1Hz).MS m/z404(M++1)，330(M+-CO2Et)，268(M+-COOBn，base peak).Anal.Cald.for C22H26NO4ClC，65.42；H，6.48；N，3.48FoundC，65.07；H，6.64；N，3.75化合物f(R＝Cl，n＝2，R config.)產(chǎn)率26.5％，[α]D25＝-21.3(c，1.81，CH2Cl2)。1H NMR(300MHz)δ7.35(5H，s)，7.25(2H，d，J＝8.3Hz)，7.10(2H，d，J＝8.3Hz)，5.15(2H，AB system)，4.15(2H，dq，J＝14.0Hz，3.5Hz)，3.38(1H，q，J＝6.9Hz)，3.25(1H，t，J＝6.4Hz)，2.70(2H，t，J＝7.9Hz)，2.30(1H，br s)，2.05-1.80(2H，m)，1.35(3H，d，J＝7.0Hz)，1.29(3H，t，J＝7.1Hz).MS m/z404(M++1)，330(M+-CO2Et)，268(M+-COOBn，base peak).Anal.Cald.for C22H26NO4ClC，65.42；H，6.48；N，3.48FoundC，65.34；H，6.60；N，3.69化合物g(R＝MeO，n＝2，S config.)產(chǎn)率24.3％，[α]D25＝-16.8(c，0.96，CH2Cl2)。1H NMR(300MHz)δ7.36(5H，s)，7.09(2H，d，J＝8.6Hz)，6.81(2H，d，J＝8.6Hz)，5.16(2H，AB system)，4.18(2H，m)，3.77(3H，s)，3.45(1H，q，J＝7.0Hz)，3.15(1H，t，J＝6.5Hz)，2.78-2.55(2H，m)，2.00(1H，br s)，1.95(2H，m)，1.37(3H，d，J＝6.9Hz)，1.29(3H，t，J＝7.0Hz).MS m/z400(M++1)，326(M+-CO2Et，base peak)，264(M+-COOBn).Anal.Cald.for C23H29NO5C，69.16；H，7.31；N，3.50FoundC，69.12；H，7.32；N，3.41化合物h(R＝MeO，n＝2，R config.)產(chǎn)率34.0％，[α]D25＝-22.2(c，0.99，CH2Cl2)。1H NMR(300MHz)δ7.38(5H，s)，7.10(2H，d，J＝8.6Hz)，6.82(2H，d，J＝8.6Hz)，5.15(2H，AB system)，4.15(2H，m)，3.77(3H，s)，3.40(1H，q，J＝7.0Hz)，3.25(1H，t，J＝6.9Hz)，2.64(2H，t，J＝7.2Hz)，2.32(1H，br s)，1.90(2H，m)，1.33(3H，d，J＝7.3Hz)，1.28(3H，t，J＝7.0Hz).MS m/z400(M++1)，326(M+-CO2Et，base peak)，264(M+-COOBn).Anal.Cald.for C23H29NO5C，69.16；H，7.31；N，3.50FoundC，69.22；H，7.31；N，3.302、通用實驗步驟將上述化合物(5mmol)溶于30ml乙醇中，加入200mg 10％Pd/C，60Mpa壓力下氫化，有白色固體析出，加熱使之溶解，趁熱過濾，濾液濃縮析出無色固體，過濾，用無水乙醚洗滌，真空干燥。得到相對應(yīng)的化合物手性丙氨酸2。
2a(R＝H，n＝2，S config.)，m.p.147-149℃。產(chǎn)率67.9％，[α]D25＝+29.8(c，1.33，MeOH)(lit77，[α]D25＝+28.6[c，1.07，MeOH])。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.25(5H，m)，4.10(2H，q，J＝6.9Hz)，3.27(1H，t，J＝6.5Hz)，3.20(1H，q，J＝6.9Hz)，2.63(2H，t，J＝7.8Hz)，1.85(2H，m)，1.35-1.10(6H，t over d).MS m/z280(M++1)，234(M-COOH)，206(M-CO2Et，base peak).Anal.Cald.for C15H21NO4C，64.50；H，7.57；N，5.06FoundC，64.69；H，7.62；N，5.162b(R＝H，n＝2，R config.)，m.p.138-140℃。產(chǎn)率61.0％，[α]D25＝-28.9(c，1.20，MeOH)(lit77，[α]D25＝-27.1[c，1.09，MeOH])。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.23(5H，m)，4.09(2H，m)，3.21(2H，tover q)，2.67(2H，t，J＝7.7Hz)，1.85(2H，m)，1.25-1.10(6H，t over d).MS m/z280(M++1)，234(M+-COOH)，206(M+-CO2Et，base peak).Anal.Cald.for C15H21NO4C，64.50；H，7.57；N，5.02FoundC，64.54；H，7.59；N，5.13
2c(R＝H，n＝3，S config.)產(chǎn)率77.0％，[α]D25＝+14.0(c，1.33，MeOH)，m.p.138-140℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.23(5H，m)，4.10(2H，q，J＝7.0Hz)，3.23(1H，t，J＝6.5Hz)，3.18(1H，q，J＝7.0Hz)，2.57(2H，t，J＝7.0Hz)，1.80-1.41(4H，m)，1.30-1.10(6H，t over d).MS m/z294(M++1)，248(M+-COOH)，220(M+-CO2Et，base peak).Anal.Cald.for C16H23NO4C，65.51；H，7.90；N，4.77FoundC，65.42；H，8.04；N，4.912d(R＝H，n＝3，R config.)產(chǎn)率80.2％，[α]D25＝-20.5(c，0.99，MeOH)，m.p.150-152℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.23(5H，m)，4.09(2H，m)，3.28(1H，t，J＝6.4Hz)，3.17(1H，q，J＝6.9Hz)，2.57(2H，t，J＝7.3Hz)，1.70-1.45(4H，m)，1.28-1.12(6H，t over d).MS m/z294(M++1)，248(M+-COOH)，220(M+-CO2Et，base peak).Anal.Cald.for C16H23NO4C，65.51；H，7.90；N，4.77FoundC，65.54；H，8.05；N，4.882e(R4＝Cl，n＝2，S config.)產(chǎn)率81.4％，[α]D25＝+25.1(c，1.91，MeOH)，m.p.176-177℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.37(5H，m)，4.26(2H，m)，4.18-4.08(2H，m)，2.83(1H，m)，2.77(1H，m)，2.23(2H，m)，1.52(3H，d，J＝7.1Hz)，1.28(3H，t，J＝7.0Hz).MS m/z296(MH+-H2O)，280(M++2-Cl)，234(MH+-Cl-COOH)，206(MH+-Cl-COOEt).Anal.Cald.for C15H20NO4ClC，57.42；H，6.42；N，4.46FoundC，57.85；H，7.13；N，4.512f(R＝Cl，n＝2，R config.)產(chǎn)率79.5％，[α]D25＝-32.3(c，1.04，MeOH)，m.p.188-190℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.30(5H，m)，4.27(2H，m)，4.15(1H，q，J＝7.2Hz)，4.08(1H，m)，2.75(2H，m)，2.25(2H，m)，1.52(3H，d，J＝7.1Hz)，1.30(3H，t，J＝7.1Hz).MS m/z296(MH+-H2O)，280(M++2-Cl)，234(MH+-Cl-COOH)，206(MH+-Cl-COOEt).Anal.Cald.for C15H20NO4ClC，57.42；H，6.42；N，4.46FoundC，57.53；H，6.94；N，4.412g(R＝MeO，n＝2，S config.)產(chǎn)率76.1％，[α]D25＝+29.2(c，1.16，MeOH)，m.p.142-144℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.12(2H，d，J＝8.6Hz)，6.87(2H，d，J＝8.6Hz)，4.10(2H，q，J＝7.0Hz)，3.71(3H，s)，3.27(1H，t，J＝6.5Hz)，3.20(1H，q，J＝6.9Hz)，2.58(2H，t，J＝7.5Hz)，1.80(2H，m)，1.30-1.10(6H，tover d).MS m/z310(M++1)，264(M+-COOH)，236(M+-COOEt)，121(CH2OC6H5CH2+，base peak).Anal.Cald.for C16H23NO5C，62.12；H，7.49；N，4.52FoundC，62.04；H，7.55；N，4.582h(R4＝MeO，n＝2，R config.)產(chǎn)率83.3％，[α]D25＝-28.3(c，1.90，MeOH)，m.p.135-137℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.11(2H，d，J＝8.5Hz)，6.87(2H，d，J＝8.6Hz)，4.09(2H，m)，3.76(3H，s)，3.25-3.15(2H，m)，2.58(2H，t，J＝7.5Hz)，1.80(2H，m)，1.30-1.10(6H，t over d).MS m/z310(M++1)，264(M+-COOH)，236(M+-COOEt)，121(CH2OC6H5CH2+，base peak).Anal.Cald.for C16H23NO5C，62.12；H，7.49；N，4.52FoundC，62.04；H，7.55；N，4.58四。2，4-亞甲基脯氨酸的血管緊張素抑制劑的合成1.通用實驗步驟化合物2(1mmol)與化合物2，4-亞甲基脯氨酸芐脂(254mg，1mmol)、HOBt(153mg，1mmol)溶于20ml DMF，冰浴冷卻下加入NMM(0.11ml，1mmol)、DCC(206mg，1mmol)，室溫攪拌24小時。減壓濃縮，加入乙酸乙酯，過濾，濾液用飽和碳酸氫鈉溶液、飽和氯化鈉溶液洗滌兩次，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，快速柱層析得無色粘稠物，用HCl和乙酸乙酯處理得如下產(chǎn)物實施例1以2a為原料得產(chǎn)物1-(N-(1(S)-羧乙基-3-苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸芐脂柱層析洗脫液石油醚/乙酸乙酯＝1∶1，產(chǎn)率62.7％。1H NMR(300MHz)δ7.50-7.08(10H，m)，5.27(2H，AB system)，4.15(2H，m)，3.55(2H，m)，3.47(1H，q，J＝6.8Hz)，3.30(1H，t，J＝6.6Hz)，2.72(1H，t，J＝3.0Hz)，2.65(2H，m)，2.20(1H，br s)，2.23-2.02(2H，m)，2.03-1.90(2H，m)，1.69(2H，m)，1.35-1.25(6H，t over d).MS m/z479(M++1)，405(M+-COOEt)，234(C6H5CH2CH2CH(CO2Et)NHCHCH3+，base peak)，91(C6H5CH2+).Anal.Cald.for C28H34N2O5·3/4H2OC，68.36；H，7.27；N，5.69FoundC，68.22；H，7.25；N，5.77實施例2以2b為原料得產(chǎn)物1-(N-(1(R)-羧乙基-3-苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸芐脂，柱層析洗脫液石油醚/乙酸乙酯＝3∶2，產(chǎn)率66.9％。1H NMR(300MHz)δ7.50-7.06(10H，m)，5.23(2H，AB system)，4.13(2H，m)，3.50(2H，m)，3.42(1H，q，J＝6.8Hz)，3.25(1H，t，J＝6.5Hz)，2.80(1H，t，J＝2.9Hz)，2.71(2H，t，J＝8.0Hz)，2.37(1H，br s)，2.10(2H，m)，2.09-1.85(2H，m)，1.67(2H，m)，1.27(3H，d，J＝7.2Hz)，1.23(3H，t，J＝7.1Hz).MS m/z479(M++1)，405(M+-COOEt)，234(C6H5CH2CH2CH(CO2Et)NHCHCH3+，base peak)，91(C6H5CH2+).Anal.Cald.for C28H34N2O5·3/4H2OC，68.36；H，7.27；N，5.69FoundC，68.45；H，7.23；N，5.84實施例3以2c為原料得產(chǎn)物1-(N-(1(S)-羧乙基-3-苯丁基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸芐脂，柱層析洗脫液石油醚/乙酸乙酯＝1∶1，產(chǎn)率69.1％。1H NMR(300MHz)δ7.50-7.00(10H，m)，5.20(2H，AB system)，4.15(2H，m)，3.50(2H，m)，3.45(1H，q，J＝6.8Hz)，3.27(1H，t，J＝5.5Hz)，2.81(1H，s)，2.60(2H，m)，2.20(1H，br s)，2.15(2H，m)，1.70(2H，m)，1.61(4H，m)，1.40-1.15(6H，t over d).MS m/z493(M++1)，248(C6H5CH2CH2CH2CH(CO2Et)NHCHCH3+，base peak)，419(M+-COOEt)，91(C6H5CH2+).Anal.Cald.for C29H36N2O5.1/4H2OC，70.07；H，7.40；N，5.64FoundC，70.03；H，7.51；N，5.89實施例4以2d為原料得產(chǎn)物1-(N-(1(R)-羧乙基-3-苯丁基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸芐脂，柱層析洗脫液石油醚/乙酸乙酯＝3∶2，產(chǎn)率58.9％。1H NMR(300MHz)δ7.57-7.00(10H，m)，5.20(2H，AB system)，4.10(2H，m)，3.47(2H，m)，3.38(1H，q，J＝6.8Hz)，3.28(1H，t，J＝5.5Hz)，2.80(1H，s)，2.60(2H，m)，2.31(1H，br s)，2.10(2H，m)，1.72(2H，m)，1.65(4H，m)，1.37-1.08(6H，t over d).MS m/z493(M++1)，248(C6H5CH2CH2CH2CH(CO2Et)NHCHCH3+，base peak)，419(M+-COOEt)，91(C6H5CH2+).Anal.Cald.for C29H36N2O5·1/4H2OC，70.07；H，7.40；N，5.64FoundC，70.16；H，7.52；N，5.98實施例5以2e為原料得產(chǎn)物1-(N-(1(S)-羧乙基-3-對氯苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸芐脂，柱層析洗脫液石油醚/乙酸乙酯＝3∶2，產(chǎn)率41.0％。1H NMR(300MHz)δ7.50-7.10(9H，m)，5.19(2H，AB system)，4.25(2H，m)，4.10(1H，m)，3.48(1H，m)，2.88(2H，m)，2.70(1H，m)，2.47(2H，m)，2.12(2H，m)，1.88(2H，m)，1.77(2H，m)，1.60(3H，d，J＝7.0Hz)，1.29(3H，t，J＝7.1Hz).MS m/z479(MH+-HCl)，234(C6H5CH2CH2CH(CO2Et)NHCHCH3+，base peak)，405(M+-HCl-COOEt).Anal.Cald.for C28H33N2O5Cl·HCl·H2OC，59.26；H，6.40；N，4.94FoundC，59.20；H，7.00；N，5.12實施例6以2f為原料得產(chǎn)物1-(N-(1(R)-羧乙基-3-對氯苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸芐脂，柱層析洗脫液石油醚/乙酸乙酯＝2∶1，產(chǎn)率35.2％。1H NMR(300MHz)δ7.42-7.10(9H，m)，5.17(2H，AB system)，4.27(2H，m)，4.10(1H，m)，3.42(1H，m)，2.92(2H，m)，2.78(1H，m)，2.56(2H，m)，2.12(2H，m)，1.88-1.50(7H，m over d)，1.32(3H，t，J＝7.1Hz).MS m/z479(MH+-HCl)，234(C6H5CH2CH2CH(CO2Et)NHCHCH3+，base peak)，405(M-HCl-COOEt).Anal.Cald.for C28H33N2O5Cl·HCl·H2OC，59.26；H，6.40；N，4.94FoundC，59.82；H，6.92；N，5.20實施例7以2g為原料得產(chǎn)物1-(N-(1(S)-羧乙基-3-對甲氧基苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸芐脂，柱層析洗脫液石油醚/乙酸乙酯＝2∶1，產(chǎn)率68.5％。1H NMR(300MHz)δ7.36(5H，m)，7.18(2H，m)，6.80(2H，m)，5.20(2H，AB system)，4.30(2H，m)，3.78(3H，s)，3.75(1H，m)，3.40(1H，m)，2.97(2H，m)，2.66(1H，m)，2.48(2H，m)，2.15(2H，m)，1.90(2H，m)，1.79(2H，m)，1.63(3H，d，J＝7.0Hz)，1.30(3H，t，J＝7.5Hz).MS m/z509(M++1)，264(MeOC6H5CH2CH2CH(CO2Et)NHCHCH3+，base peak)，435(M+-COOEt).Anal.Cald.for C29H36N2O6·HClC，63.90；H，6.84；N，5.14FoundC，64.01；H，7.03；N，4.93實施例8以2h為原料得產(chǎn)物1-(N-(1(R)-羧乙基-3-對甲氧基苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸芐脂柱層析洗脫液石油醚/乙酸乙酯＝3∶1，產(chǎn)率68.2％。1H NMR(300MHz)δ7.36(5H，m)，7.17(2H，m)，6.80(2H，m)，5.15(2H，AB system)，4.29(2H，m)，3.78(1H，m)，3.75(3H，s)，3.41(1H，m)，2.85(2H，m)，2.78(1H，m)，2.50(2H，m)，2.10(2H，m)，1.90-1.55(7H，m over d)，1.32(3H，t，J＝7.2Hz).MS m/e509(M+1)，264(MeOC6H5CH2CH2CH(CO2Et)NHCHCH3，base peak)，435(M-COOEt).Anal.Cald.for C29H36N2O6·HClC，63.90；H，6.84；N，5.14FoundC，63.89；H，7.00；N，4.882.通用實驗步驟上一步產(chǎn)物(0.5mmol)溶于20ml四氫呋喃，加入1mlHcl與乙酸乙酯溶液和50mg 10％Pd/C，室溫下氫化24小時。過濾，濾液濃縮得微黃色粘稠物，少量二氯甲烷溶解，加入無水乙醚固體析出，過濾，在裝有氫氧化鉀的干燥器中真空干燥24小時得如下產(chǎn)物實施例9以1-(N-(1(R)-羧乙基-3-苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸芐脂為反應(yīng)原料，得到化合物1-(N-(1(R)-羧乙基-3-苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸·鹽酸鹽，產(chǎn)率為45.4％1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.39-7.12(5H，m)，4.25(2H，m)，4.10(1H，m)，3.90(1H，m)，3.60(2H，m)，2.84(1H，m)，2.78(2H，m)，2.30(2H，m)，2.08(2H，m)，1.68(2H，m)，1.50(3H，d，J＝6.5Hz)，1.32(3H，t，J＝7.1Hz).MS m/z370(M+-H2O)，342(M+-H2O-CO)，266(MH+-H2O-C6H5CH2CH2，base peak)，234(C6H5CH2CH2CH(CO2Et)NHCHCH3+)，91(C6H5CH2+).Anal.Cald.for C21H28N2O5·1.85HClC，55.32；H，6.59；N，6.14FoundC，55.34；H，6.53；N，6.08
實施例10以1-(N-(1(S)-羧乙基-3-苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸芐脂為反應(yīng)原料，得到化合物1-(N-甲基-(1(S)-羧乙基-3-苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸·鹽酸鹽，產(chǎn)率為60.5％。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.40-7.10(5H，m)，4.30(2H，m)，4.18(1H，m)，3.92(1H，m)，3.72(2H，m)，2.86(1H，m)，2.78(2H，m)，2.30(2H，m)，2.18(2H，m)，1.70(2H，m)，1.57(3H，d，J＝6.9Hz)，1.39(3H，t，J＝6.9Hz).MS m/z370(M+-H2O)，342(M+-H2O-CO)，266(MH+-H2O-C6H5CH2CH2，base peak)，234(C6H5CH2CH2CH(CO2Et)NHCHCH3+).Anal.Cald.for C21H28N2O5.2.6HClC，52.19；H，6.38；N，5.79FoundC，52.11；H，6.33；N，5.43實施例11以1-(N-(1(R)-羧乙基-3-對甲氧基苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸芐脂為反應(yīng)原料，得到化合物1-(N-(1(R)-羧乙基-3-對甲氧基苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸·鹽酸鹽，產(chǎn)率為68.6％。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.15(2H，m)，6.88(2H，m)，4.25(2H，m)，4.06(1H，m)，3.79(1H，m)，3.75(3H，s)，3.55(2H，m)，2.85(1H，m)，2.65(2H，m)，2.29(2H，m)，2.10(2H，m)，1.65(2H，m)，1.48(3H，d，J＝6.6Hz)，1.36(3H，t，J＝7.0Hz).MS m/e373(M+-EtO)，264(MeOC6H5CH2CH2CH(CO2Et)NHCHCH3+)，121(MeOC6H5CH2+，base peak).Anal.Cald.for C22H30N2O6·2.5HCl
C，51.84；H，6.42；N，5.49FoundC，52.04；H，6.40；N，5.28實施例12以1-(N-(1(S)-羧乙基-3-對甲氧基苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸芐脂為反應(yīng)原料，得到化合物1-(N-(1(S)-羧乙基-3-對甲氧基苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸·鹽酸鹽(產(chǎn)率60.5％)1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.14(2H，m)，6.86(2H，m)，4.25(2H，m)，4.10(1H，m)，3.82(1H，m)，3.75(3H，s)，3.60(2H，m)，2.82(1H，m)，2.65(2H，m)，2.28(2H，m)，2.12(2H，m)，1.65(2H，m)，1.47(3H，d，J＝6.5Hz)，1.34(3H，t，J＝7.0Hz).MS m/e373(M+-EtO)，264(MeOC6H5CH2CH2CH(CO2Et)NHCHCH3+)，121(MeOC6H5CH2+，base peak).Anal.Cald.for C22H30N2O6·2.5HClC，51.84；H，6.42；N，5.49FoundC，51.90；H，6.22；N，5.28實施例13以1-(N-(1(R)-羧乙基-3-對氯苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸芐脂為反應(yīng)原料，得到化合物1-(N-(1(R)-羧乙基-3-對氯苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸·鹽酸鹽，產(chǎn)率為62.7％。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.40-7.15(4H，m)，4.28(2H，m)，4.06(1H，m)，3.93(1H，m)，3.60(2H，m)，2.85(1H，m)，2.60(2H，m)，2.30(2H，m)，2.10(2H，m)，1.67(2H，m)，1.54(3H，d，J＝6.7Hz)，1.29(3H，t，J＝7.0Hz).MS m/z371(MH+-HCl-H2O)，266(MH+-H2O-ClC6H5CH2CH2，basepeak).
實施例14以1-(N-(1(S)-羧乙基-3-對氯苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸芐脂為反應(yīng)原料，得到化合物1-(N-(1(S)-羧乙基-3-對氯苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸·鹽酸鹽，產(chǎn)率為80.0％。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.42-7.10(4H，m)，4.24(2H，m)，4.07(1H，m)，3.95(1H，m)，3.65(2H，m)，2.85(1H，m)，2.66(2H，m)，2.27(2H，m)，2.12(2H，m)，1.66(2H，m)，1.50(3H，d，J＝6.9Hz)，1.29(3H，t，J＝6.9Hz).MS m/z371(MH+-HCl-H2O)，266(MH+-H2O-ClC6H5CH2CH2，basepeak).
實施例15以1-(N-(1(R)-羧乙基-3-苯丁基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸芐脂為反應(yīng)原料，得到化合物1-(N-(1(R)-羧乙基-3-苯丁基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸·鹽酸鹽，產(chǎn)率為80.1％。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.38-7.12(5H，m)，4.25(2H，m)，4.12(1H，m)，3.98(1H，m)，3.58(2H，m)，2.85(1H，m)，2.65(2H，m)，2.09(2H，m)，1.90(2H，m)，1.65(2H，m)，1.56(2H，m)，1.48(3H，d，J＝6.8Hz)，1.35(3H，t，J＝7.1Hz).MS m/z384(M+-H2O)，356(M+-H2O-CO)，131(CH2(CO2Et)NHCH2CH3+，base peak)，248(C6H5CH2CH2CH2CH(CO2Et)NHCHCH3+).Anal.Cald.for C22H30N2O5·2.1HClC，55.15；H，6.73；N，5.84FoundC，55.05；H，6.85；N，5.68實施例16以1-(N-(1(S)-羧乙基-3-苯丁基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸芐脂為反應(yīng)原料，得到化合物1-(N-(1(S)-羧乙基-3-苯丁基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸·鹽酸鹽，產(chǎn)率為81.2％。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.36-7.12(5H，m)，4.23(2H，m)，4.09(1H，m)，3.90(1H，m)，3.59(2H，m)，2.83(1H，m)，2.62(2H，m)，2.10(2H，m)，1.88(2H，m)，1.67(2H，m)，1.57(2H，m)，1.47(3H，d，J＝6.9Hz)，1.25(3H，t，J＝7.1Hz).MS m/z384(M+-H2O)，356(M+-H2O-CO)，131(CH2(CO2Et)NHCH2CH3+，base peak)，248(C6H5CH2CH2CH2CH(CO2Et)NHCHCH3+).Anal.Cald.for C22H30N2O5·1.5HClC，57.80；H，6.94；N，6.13FoundC，57.47；H，7.07；N，6.593.通用實驗步驟上一步反應(yīng)產(chǎn)物(0.2mmol)放入蛋形瓶中，加入5mlNaOH、甲醇，室溫攪拌10小時。濃縮溶液，加入鹽酸酸化至pH＝1，然后利用Dowex 50×4(200-400 mesh)進(jìn)行分離，先用雙蒸水洗至中性，再用吡啶水溶液淋洗，蒸掉溶劑得到下列無色固體產(chǎn)物
實施例17以化合物1-(N-(1(R)-羧乙基-3-苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸·鹽酸鹽為原料，得到的產(chǎn)物1-(N-(1(R)-羧基-3-苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸，產(chǎn)率為47.0％。m.p.182-184℃，1H NMR(300MHz，D2O)δ7.40-7.10(5H，m)，4.43(1H，m)，4.0(1H，q，J＝7.0Hz)，3.49(2H，s)，2.90(1H，t，J＝3.0Hz)，2.75(1H，m)，2.58(1H，m)，2.40(3H，m)，2.10(1H，m)，1.68(2H，m)，1.32(3H，d，J＝7.0Hz).MS m/z255(M+-C6H5CH2CH2)，179(C6H5CH2CH2CH(CO2H)NH2+)，91(C6H5CH2+).
實施例18以化合物1-(N-(1(S)-羧乙基-3-苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸·鹽酸鹽為原料，得到的產(chǎn)物化合物1-(N-(1(S)-羧基-3-苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸(產(chǎn)率50.2％)，m.p.178-180℃。1H NMR(300MHz，D2O)δ7.41-7.15(5H，m)，3.58(1H，m)，3.55(2H，s)，3.40(1H，m)，2.82(1H，m)，2.69(2H，m)，2.20-1.90(4H，m)，1.60(2H，m)，1.35(3H，d，J＝7.0Hz).MS(ESI)m/z399(M++39)，361(M++1)，99(CH2CHNH2CHCH3CO+，base peak).
實施例19以化合物1-(N-(1(R)-羧乙基-3-對甲氧基苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸·鹽酸鹽為原料，得到的產(chǎn)物化合物1-(N-(1(R)-羧基-3-對甲氧基苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸，產(chǎn)率為65.4％。m.p.147-149℃。1H NMR(300MHz，D2O)δ7.18(2H，m)，6.90(2H，m)，4.47(1H，m)，4.08(1H，m)，3.78(3H，s)，3.52(2H，s)，2.90(1H，m)，2.70(2H，m)，2.62-2.02(4H，m)，1.70(2H，m)，1.30(3H，d，J＝6.5Hz).MS m/z238(MeOC6H5CH2CH2(COOH)NHCHCH3+，base peak)，121(MeOC6H5CH2+)，329(MH+-CO2-H2O)，372(M+-H2O).Anal.Cald.for C20H26N2O6·H2OC，58.82；H，6.90；N，6.85FoundC，58.97；H，6.26；N，6.88實施例20以化合物1-(N-(1(S)-羧乙基-3-對甲氧基苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸·鹽酸鹽為原料，得到的產(chǎn)物化合物1-(N-(1(S)-羧基-3-對甲氧基苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸，產(chǎn)率為62.8％。m.p.151-153℃。1H NMR(300MHz，D2O)δ7.18(2H，m)，6.90(2H，m)，3.80(2H，s)，3.78(3H，s)，3.55(1H，m)，3.40(1H，m)，2.86(1H，m)，2.69(2H，m)，2.62-2.10(4H，m)，1.65(2H，m)，1.30(3H，d，J＝6.5Hz).MS(ESI)m/z391(M++1)，373(MH+-H2O，base peak)，219(M+-C6H8O2N-CO2H).
實施例21以化合物1-(N-(1(R)-羧乙基-3-苯丁基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸·鹽酸鹽為原料，得到的產(chǎn)物1-(N-(1(R)-羧基-3-苯丁基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸，產(chǎn)率為78.2％。m.p.149-151℃。1H NMR(300MHz，D2O)δ7.40-7.29(4H，m)，4.36(1H，m)，4.15(1H，m)，3.60(2H，m)，2.96(1H，m)，2.69(2H，m)，2.46(2H，m)，1.80-1.55(6H，m)，1.45(3H，d，J＝6.8Hz).MS m/z356(M+-H2O)，328(M+-CO2)，313(MH+-CO2-H2O)，91(C6H5CH2+，base peak)，131(CH2(CO2H)NH2CHCH3CO+).Anal.Cald.for C20H26N2O5C，64.16；H，6.99；N，7.42FoundC，63.59；H，6.42；N，7.28實施例22以化合物1-(N-(1(S)-羧乙基-3-苯丁基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸·鹽酸鹽為原料，得到的產(chǎn)物化合物1-(N-(1(S)-羧基-3-苯丁基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸，產(chǎn)率為76.2％。m.p.154-155℃。MS m/z356(M+-H2O)，328(M+-CO2)，313(MH+-CO2-H2O)，91(C6H5CH2+)，131(CH2(CO2H)NH2CHCH3CO+，base peak).Anal.Cald.for C20H26N2O5·2/3H2OC，62.16；H，7.12；N，7.25FoundC，61.81；H，6.73；N，7.37實施例23以1-(N-(1(S)-羧乙基-3-苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸芐脂(300mg，0.628mmol)、1.0ml碘甲烷、2.0g碳酸氫鈉混合于DMF中，加熱至60-90℃，攪拌10-30分鐘，冷至0℃，加入20ml水，乙醚提取三次，合并有機相，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，快速柱層析，得無色液體200mg，取此無色液體(180mg，0.366mmol)溶于四氫呋喃中，加入10％Pd/C，常溫常壓下氫化24小時。過濾，濾液濃縮，快速柱層析(氯仿/甲醇＝10∶1)得無色粘稠物110mg，即化合物1-(N，N-甲基-(1(S)-羧乙基-3 苯丙基)-L-丙氨酰)-2，4-亞甲基脯氨酸·鹽酸鹽，產(chǎn)率為74.8％。1H NMR(300MHz)δ7.32-7.08(5H，m)，4.15(2H，m)，3.90(1H，m)，3.70(1H，q，J＝6.5Hz)，3.50(1H，m)，3.29(1H，t)，2.80(1H，m)，2.61(2H，m)，2.52(3H，s)，2.48(2H，m)，2.20-1.90(2H，m)，1.80(2H，m)，1.36-1.10(6H，t over d).MS m/z403(M++1)，329(M+-COOEt)，248(C6H5CH2CH2CH(CO2Et)NCH3CHCH3+，base peak)，91(C6H5CH2+).
權(quán)利要求
1.一種含有2，4-亞甲基脯氨酸的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑，其特征在于是依那普利類似物，分子通式如下
R2＝H，CnH2n+1，n＝14；R3＝HCH3；R4＝CnH2n+1，n＝1-3，NH2(CH2)m-，m＝1-4
2.如權(quán)利要求1所述的含有2，4-亞甲基脯氨酸的 血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑的合成方法，其特征在于是由2，4-亞甲基脯氨酸芐酯與含有手性的丙氨酸經(jīng)縮合、或胺烷基化、脫芐反應(yīng)制得。
3.如權(quán)利要求2所述的含有2，4-亞甲基脯氨酸的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑的合成方法，其特征在于含有手性的丙氨酸是由酮酸酯與丙氨酸芐酯經(jīng)縮合、氫化、脫芐反應(yīng)制得。
4.如權(quán)利要求1所述的含有2，4-亞甲基脯氨酸的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑的用途，其特征在于是用于治療高血壓的降壓藥物。
全文摘要
本發(fā)明是一種含有2,4－亞甲基脯氨酸的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑、合成及其用途,該化合物是依那普利類似物,其是通過2,4－亞甲基脯氨酸替代脯氨酸以限制肽鍵的反式構(gòu)象、增強親脂性,從而提高了該ACE抑制劑的生物活性;其是2,4－亞甲基脯氨酸芐酯與含有手性的丙氨酸經(jīng)縮合、或胺烷基化、脫芐反應(yīng)制得,其中含有手性的丙氨酸是酮酸酯與丙氨酸芐酯反應(yīng)的產(chǎn)物;其可發(fā)展成治療高血壓的降壓藥物。
文檔編號C07D209/00GK1178788SQ97106230
公開日1998年4月15日 申請日期1997年1月15日 優(yōu)先權(quán)日1997年1月15日
發(fā)明者劉世峰, 徐杰誠 申請人:中國科學(xué)院上海有機化學(xué)研究所