專利名稱：隱杯傘素類抗腫瘤劑的制作方法
背景技術(shù)：
在延長患者生命、滿足患者過正常生活的期望方面，化療起主要作用的人腫瘤包括伯基特氏淋巴瘤、急性淋巴細(xì)胞白血病、何杰金氏病以及約10至15種其它類型的腫瘤。例如，見A.Golden等，Eur.J.Cancer,17,129(1981)(表1)。雖然，這些腫瘤的治愈率表明了篩選系統(tǒng)在選擇對人有效的抗腫瘤劑方面的成功，但是，這些有代表性的腫瘤僅代表了各種類型腫瘤的一小部分，特別是對臨床實體瘤有高度活性的藥物極少。這些藥物包括環(huán)磷酰胺、阿霉素、5-FU、六甲基密胺等。因此，多種類型惡性腫瘤的患者的復(fù)發(fā)率和死亡率仍很高。
復(fù)發(fā)后，用原來的治療方案可使一些患者病情緩解。但是，通常需要高劑量的初始化療劑或使用附加試劑，這表明產(chǎn)生了至少部分抗藥性。最近有證據(jù)表明可同時對幾種藥物產(chǎn)生抗藥性，包括患者并未接觸過的藥物。多重抗藥性(mdr)腫瘤的出現(xiàn)可能是腫瘤物質(zhì)的機能并構(gòu)成了治療失敗的主要原因。為了克服此抗藥性，可采用帶有或沒有放射的高劑量化療法并進行同種異體或自體骨髓移植。高劑量化療可使用原來的藥物(一種或多種)或可包括附加試劑。需要開發(fā)與mdr亞型不交叉耐藥的新藥以增進治療方案的治療潛力并便于原治療患者的調(diào)整治療。
最近，Kelner,M.等，Cancer Res.,47,3186(1987)檢測了稱為隱杯傘素的一類新天然產(chǎn)物的體外抗腫瘤活性。隱杯傘素M純化后送到國家癌癥研究所癌癥治療室(NCI DCT)進行體內(nèi)藥物篩選。隱杯傘素M顯著增加了患Dunning白血病鼠的生命，但是對實體瘤體系其治療指數(shù)低。隱杯傘素極高的毒性妨礙了其在人腫瘤治療中的應(yīng)用。近來，已開發(fā)了隱杯傘素的合成類似物，它們具有一定的抗腫瘤活性，文獻(xiàn)包括美國專利5439936和5523490。
但是，仍需要抑制腫瘤特別是實體瘤生長的化療劑，該化療劑具有適當(dāng)?shù)闹委熤笖?shù)，能有效地進行體內(nèi)治療。
發(fā)明概述本發(fā)明提供了通式(Ⅰ)的隱杯傘素類似物及其藥用鹽
其中R1是(CH2)n-(X)-(Y)或H；n是0-4,X是O或S或N，而Y是CH2OC(O)(C1-C4)烷基，被1至2個OH或1至2個鹵原子(Cl、Br、I或F)任選取代的(C1-C8)烷基；糖類，優(yōu)選單糖，更優(yōu)選果糖；CH2C(O)-O-(CH2)2-O-C(O)CH2SH,(CH2)2-O-(CH2)2W，其中W是鹵原子；(C1-C8)烷基-O-(C1-C8)烷基；(C6-C10)芳基，(C6-C10)芳基(C1-C4)烷基或C(O)O(C6-C10)芳基，其中芳基部分被1至2個OH、鹵原子、(C1-C4)烷基或O(C1-C4)烷基任選取代；CH2CO2(C1-C4)烷基，CH2CO2H,Si((C1-C4)烷基)3，氨基酸殘基，優(yōu)選丙氨?；?；或者H，其條件是當(dāng)Y是H,n是2至4；或者X不存在，而Y是CHO、NO2、COOH、OAc、(C2-C4)鏈烯基-CHO、CH(O(C1-C4)烷基)2；環(huán)(C3-C6)烷基或任選地含1-3個選自N、S或非過氧化物O雜原子的(C5-C12)芳基，該芳基被1至2個(C1-C4烷基)、CHO、OH或鹵原子任選取代；R2是不存在；或者R1-C-C-R2一起構(gòu)成5至7元環(huán)，該環(huán)任選含有一個或多個，優(yōu)選1至2個，選自N、S或非過氧化物O的雜原子，并被(C1-C4)烷基、OH或鹵原子任選取代；R3是H或(C1-C4)烷基；R4是H、SCH2CO2(C1-C4)烷基、O-(C5-C12)芳基或S-(C5-C12)芳基，其中芳基被鹵原子、OH或(C1-C4)烷基任選取代；R5是H、OH或不存在；R6是(C1-C4)烷基或H；R7是OH或Si((C1-C4)烷基)3；或
R6和R7一起為亞乙二氧基；R8是(C1-C4)烷基，該烷基被OH或鹵原子任選取代；由…代表的鍵可存在或不存在。
優(yōu)選X不存在，n是2至4。
本發(fā)明還提供了式(Ⅰ)的化合物，其中環(huán)丙基被-(CH2)2OH代替，而其羰基氧被羥基代替，即式(Ⅱ)的化合物
其中R1-R4定義如式(Ⅰ)，…表示的鍵分別存在或不存在。但是，優(yōu)選R1是Z為OH或鹵原子的(C1-C4)烷基-Z、或-S-(C5-C12)芳基，優(yōu)選-S-苯基，該芳基被1至2個OH任選取代；R2不存在；R3是(C1-C4)烷基，優(yōu)選甲基；R4是-S-(CH2)n-COOH，其中n、鹵原子或(C1-C4)烷基是1至4，或R4是-S-芳基，優(yōu)選-S-苯基，該芳基被1至2個OH、鹵原子或(C1-C4)烷基任選取代。
本發(fā)明也提供了含式(Ⅰ)化合物的二聚物，其中隱杯傘素類單體相同或不同。例如，在式(Ⅰ)中，R1和R4可以是X和Y都不存在的式(Ⅰ)化合物。因此，本發(fā)明也提供了其中單體結(jié)構(gòu)相同或不同的含式(Ⅰ)化合物的二聚物。一般來說，二聚物為式(Ⅲ)
其中L是連接基。例如，L可以是烷基或酯連接基團。適宜的連接基團的例子包括-CH2-O-CH2-,-(CH2)n-，其中n是1至8，以及-CH2-S-CH2C(O)-O-(CH2)2-O-C(O)CH2-S-CH2-。其它連接基團對本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見的。雖然顯示了通過每個類似物的5位碳原子連接，但是應(yīng)理解此類似物可通過其它位置連接，例如3、5或7位碳原子的任意結(jié)合。連接位置不是5位時，將存在R1取代基，其定義如式(Ⅰ)。連接通過3位時，應(yīng)意識到環(huán)丙基部分將不存在。連接是通過每個類似物的5位時，L優(yōu)選-CH2-O-CH2-或-CH2-S-CH2C(O)-O-(CH2)2-O-C(O)CH2-S-CH2-。
這些化合物用作抗腫瘤劑，即在體外或在哺乳動物宿主如人或馴養(yǎng)動物體內(nèi)抑制腫瘤細(xì)胞生長，并對實體瘤和多重抗藥性腫瘤有特殊效果。
因此，本發(fā)明提供了治療腫瘤，即在體外或優(yōu)選在體內(nèi)抑制腫瘤細(xì)胞生長的治療方法，該方法通過給哺乳動物如腫瘤病人使用抑制所述癌細(xì)胞，即腫瘤細(xì)胞生長的有效量的式(Ⅰ)化合物實現(xiàn)。實體瘤的治療手段相對較少，而本發(fā)明化合物特別適于實體瘤的治療。這些腫瘤包括表皮樣腫瘤和急性(AML)或慢性(CML)髓細(xì)胞樣腫瘤，以及肺、卵巢、乳腺和直腸癌。本發(fā)明化合物也可直接用來治療子宮內(nèi)膜腫瘤、膀胱癌、胰腺癌、淋巴瘤、何杰金氏病、前列腺癌、肉瘤及睪丸癌，還可治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤，如腦腫瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤和造血細(xì)胞癌癥如B細(xì)胞白血病/淋巴瘤、骨髓瘤、T細(xì)胞白血病/淋巴瘤，及小細(xì)胞白血病/淋巴瘤。這些白血病/淋巴瘤可以是急性(ALL)或慢性(CLL)的。
本發(fā)明化合物也可通過將該化合物與能結(jié)合腫瘤相關(guān)抗原的試劑連接靶向于特定的腫瘤。此抗原可位于腫瘤上或在腫瘤細(xì)胞區(qū)域內(nèi)。適宜的試劑包括多克隆和單克隆抗體。該化合物-試劑復(fù)合物可進一步包括將化合物連接于試劑上的連接劑。
本發(fā)明還提供了藥物組合物，如藥物單劑量形式，其中含有與藥用載體結(jié)合的、抗腫瘤有效量的、本發(fā)明的一種或多種隱杯傘素類似物。
在本文中，考慮到本發(fā)明的方法，術(shù)語“抑制”指與不治療時相比降低腫瘤細(xì)胞生長速度，或引起腫瘤細(xì)胞塊體積縮小。抑制也包括使治療徹底退化。因此，本發(fā)明類似物可以是腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞抑制劑或細(xì)胞毒物質(zhì)。
被治療對象可以是易患癌癥即惡性細(xì)胞群體的或患有腫瘤的任何哺乳動物。該類似物對體內(nèi)人腫瘤細(xì)胞及體外人腫瘤細(xì)胞系有效。
附圖簡述

圖1是本發(fā)明代表性化合物的略圖。
圖2A是化合物33合成的略圖。
圖2B是化合物35合成的略圖。
發(fā)明詳述本發(fā)明提供了通式(Ⅰ)的隱杯傘素類似物及其藥用鹽
其中R1是(CH2)n-(X)-(Y)或H；n是O-4，當(dāng)X不存在時優(yōu)選n是2-4；X是O或S或N，而Y是CH2OC(O)(C1-C4)烷基、被1至2個OH或1至2個鹵原子任選取代的(C1-C8)烷基、糖類，優(yōu)選單糖，更優(yōu)選果糖、CH2C(O)-O-(CH2)2-O-C(O)CH2SH,(CH2)2-O-(CH2)2W，其中W是鹵原子；(C1-C8)烷基-O-(C1-C8)烷基，優(yōu)選(C1-C4)烷基-O-(C1-C4)烷基；(C6-C10)芳基、(C6-C10)芳基(C1-C4)烷基或C(O)O(C6-C10)芳基，其中芳基部分被1至2個OH、鹵原子、(C1-C4)烷基或O(C1-C4)烷基任選取代；CH2CO2(C1-C4)烷基、CH2CO2H、Si((C1-C4)烷基)3、氨基酸殘基，優(yōu)選丙氨?；?；或者H，其條件是當(dāng)Y是H,n是2至4；或者X不存在，而Y是CHO、NO2、NH2、OH、COOH、OAc、(C2-C4)鏈烯基-CHO、CH(O(C1-C4)烷基)2；環(huán)(C3-C6)烷基或(C5-C12)芳基，優(yōu)選C5芳基，該芳基任選地含1-3個選自N、S或非過氧化物O雜原子，并被1至2個(C1-C4烷基)、CHO、OH或鹵原子任選取代；R2不存在；或者R1-C-C-R2一起構(gòu)成5至7元環(huán)，所述環(huán)任選含有一個或多個選自N、S或非過氧化物O的雜原子，并被(C1-C4)烷基、OH或鹵原子任選取代；R3是H或(C1-C4)烷基；R4是H、SCH2CO2(C1-C4)烷基、O-(C5-C12)芳基或S-(C5-C12)芳基，其中芳基被鹵原子、OH或(C1-C4)烷基任選取代；R5是H、OH或不存在；R6是(C1-C4)烷基或H；R7是OH或Si((C1-C4)烷基)3；或R6和R7一起為亞乙二氧基；R8是(C1-C4)烷基，該烷基任選含有OH或鹵原子；由…代表的鍵可存在或不存在。
在進一步優(yōu)選的實例中，X不存在，n是2至4，而Y是OH或OAc。
在特別優(yōu)選的實例中，R1是(CH2)n-X-Y，其中n是1,X是O或S，而Y是被1至2個OH或1至2個鹵原子任選取代的(C1-C8)烷基，或-(CH3)2O(C1-C4)烷基；優(yōu)選R2和R5不存在；R3、R6和R8為CH3；R4是H；而R7是OH。
按照本發(fā)明的另一個優(yōu)選實例，R6和R7一起為亞乙二氧基，而R1是H；R2和R5不存在；R3和R4是H，而R8是CH3。
在另一個實例中，R1是CH2OH而R7是-OSi((C1-C4)烷基)3。
在本文中，術(shù)語“烷基”包括支鏈或直鏈烷基。
在本文中，術(shù)語“糖類”包括最多含8個碳，優(yōu)選最多含6個碳的單糖，以及二糖。該術(shù)語包括葡萄糖、果糖和核糖，以及脫氧糖如脫氧核糖等。
圖1中所示化合物是本發(fā)明的代表化合物。
本發(fā)明化合物可衍生自隱杯傘素S,6-羥基甲基?；鶃喖谆h(huán)戊二烯(HMAF，即R1是CH2OH,R2不存在，R3是甲基，R4是H,R5不存在，R6是甲基，R7是OH而R8是甲基的式(Ⅰ)化合物)及亞甲基環(huán)戊二烯(即R1是H,R2不存在，R3是甲基，R4是H,R5不存在，R6是甲基，R7是OH而R8是甲基的式(Ⅰ)化合物)。它們的合成是本領(lǐng)域已知的(例如，見WO91/04754；WO94/18151)。
除非另外說明，X是S或O的下列式(Ⅰ)化合物可通過向HMAF的酸性溶液中加入適當(dāng)試劑制備。
當(dāng)Y是(C1-C8)烷基時，使用烷基醚。例如，化合物16(其中Y是乙基)用乙醚制備。當(dāng)Y是被1至2個OH或1至2個鹵原子取代的(C1-C8)烷基時，加入適宜的醇或硫醇(如果需要，加以鹵化)。例如，化合物19、20和22，其中X是O而Y是2,3-二羥基丙基、2-溴乙基及2-羥乙基，分別使用甘油、2-溴乙醇和乙二醇鹵化。Y是CH2OC(O)(C1-C4)烷基的化合物，通過R1為(CH2)nOCH2OH的化合物與(C1-C4)烷基C(O)Cl在堿存在下反應(yīng)制備?；衔?3是合成化合物20的副產(chǎn)物。對X為S而Y是2,3-二羥基丙基的化合物32，使用硫代甘油作為試劑。
適宜的糖類用于合成Y是單糖的式(Ⅰ)化合物。例如，用果糖制備化合物18。
當(dāng)Y是CH2C(O)-O(CH2)2-O-C(O)CH2SH時，即化合物51，使用一定量的二巰基乙酸乙二醇酯作為試劑。
當(dāng)Y是(CH2)2-O-(CH2)2W，其中W是鹵原子時，使用適當(dāng)鹵代的醇。例如，通過加入2-溴乙醇得到化合物53。
Y是(C1-C8)烷基-O-(C1-C8)烷基，其中(C1-C8)烷基是直鏈烷基的式(Ⅰ)化合物，可使用與制備化合物53類似的方法制備。當(dāng)(C1-C8)烷基是支鏈時，可通過向HMAF中加入適當(dāng)?shù)南N和催化量的POCl3得到所需的產(chǎn)物。例如，Y是2-甲氧基-2-丙基的化合物21可通過向HMAF中加入2-甲氧基丙烯制備。
當(dāng)Y是(C6-C10)芳基或(C6-C10)芳基(C1-C4)烷基時，可使用硫代芳基或芳基硫醇作為試劑制備。例如，Y是(C6H4)OH的化合物23通過加入4-羥基苯硫酚制備?；衔?5是合成化合物23過程中得到的副產(chǎn)物。通過向HMAF的酸性溶液中加入芐基硫醇制備化合物24。X是S而Y是4-甲基苯的化合物26通過向HMAF的酸性溶液中加入對甲苯硫酚制備。Y是4-甲基苯而R4是甲苯硫酚的化合物48是使用一定量的對甲苯硫酚制備化合物26時的副產(chǎn)物。n=O,X是S,Y是4-甲基苯而R4分別是H或甲苯硫酚的化合物49和50可通過向酰基亞甲基環(huán)戊二烯的酸性溶液中加入對甲苯硫酚制備。Y是C(O)O(C6-C10)芳基的化合物可通過向HMAF的堿性溶液中加入適當(dāng)?shù)姆蓟燃姿狨ブ苽?。例如，Y是苯基乙酸酯的化合物27是通過向HMAF溶液中加入苯基氯甲酸酯和吡啶制備的。
Y是CH2CO2(C1-C4)烷基而X是S的化合物可通過向HMAF酸性溶液中加入適當(dāng)?shù)牧虼贾苽?。例如，Y是CH2CO2Me而R4和R5是H的化合物25，是通過向HMAF在丙酮中的酸性溶液中加入甲基硫代羥乙酸酯制備的。Y是CH2CO2Me,R4是CH2CO2Me而R5分別是H和OH的化合物30和31，是通過向HMAF在丙酮和THF中的中性溶液中加入甲基硫代羥乙酸酯制備的?；衔?5是形成的副產(chǎn)物。
Y是CH2CO2H的化合物可通過相應(yīng)的酯水解制備。例如，化合物29是上述化合物25合成過程中的副產(chǎn)物。CO2H基團的堿金屬、堿土金屬及胺鹽也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
Y是Si((C1-C4)烷基)3時，將適當(dāng)?shù)墓柰榛噭┘尤氲紿MAF和咪唑的溶液中。例如，R1是三乙基甲硅烷氧基而R7分別是OH或三乙基甲硅烷氧基的化合物43和44，都可通過將三乙基甲硅烷基氯加到HMAF和咪唑的DMF溶液中得到。
當(dāng)Y是氨基酸殘基，例如，甘氨?；虮滨；鶗r，可使用含氨基酸類似物的適當(dāng)?shù)牧虼?，例如半胱氨酸及其類似物。例如，Y是甘氨?；幕衔?7是通過將半胱氨酸加到HMAF的酸性溶液中制備的。
X不存在的式(Ⅰ)化合物可制備如下。n是2而Y是CHO的化合物，即化合物10，可通過將丙烯醛加到亞甲基環(huán)戊二烯的酸性溶液中制備。n是1而Y是CHO的化合物11，是通過用Dess Martin試劑將HMAF氧化制備的。
Y是CH(O(C1-C4)烷基)2的化合物，可通過在適當(dāng)溶劑中將化合物10還原制備。例如，Y是CH(OMe)2的化合物39是通過在甲醇中化合物10與硼氫化鈉反應(yīng)制備的。Y是CH(OEt)2的化合物40是通過化合物10在乙醇中與硼氫化鈉反應(yīng)制備的。
Y是-(C2-C4)鏈烯基-CHO的化合物可通過將適當(dāng)?shù)逆溔不┘拥紿MAF的酸性溶液中制備。例如Y是-CH=CHCH(O)的化合物41是通過用丙炔基醛處理HMAF的酸性溶液制備的。
Y是環(huán)(C3-C6)烷基的化合物可通過本領(lǐng)域已知方法制備。例如，在合成化合物10過程中制備化合物13。
當(dāng)Y是(C5-C12)芳基或雜芳基時，適當(dāng)取代的芳基或雜芳基試劑被加到酸性、堿性或中性HMAF中。例如，Y是咪唑基的化合物36是通過用咪唑處理HMAF的中性THF溶液制備的。
X不存在而n是2至4的化合物可制備如下。Y是OH的化合物可通過用適當(dāng)?shù)倪€原試劑將相應(yīng)的醛或酸還原獲得。例如，用氰基硼氫化鈉和乙酸將醛化合物10還原制備化合物9。乙酸存在時，得到Y(jié)是OAc的化合物。例如，化合物46是化合物10還原反應(yīng)的副產(chǎn)物。
R1-C-C-R2構(gòu)成5至7元環(huán)的化合物可通過本領(lǐng)域的已知方法制備。例如，通過將隱杯傘素S加到多聚甲醛的酸性溶液中制備化合物14。
R1是CH2OH而R7是((C1-C8)烷基)3SiO-的化合物可通過用適當(dāng)?shù)墓柰榛噭┨幚鞨MAF和咪唑制備。例如，化合物42是通過向HMAF和咪唑中加入三乙基甲硅烷基氯制備的。
Y是COOH的化合物38是通過用Jones試劑將化合物10氧化制備的。
可通過本領(lǐng)域已知的方法制備式(Ⅲ)的二聚化合物。例如，通過將乙醚加到HMAF和丙酮的酸性溶液中制備化合物17。當(dāng)丙烯腈被加到HMAF和丙酮的酸性溶液中時得到副產(chǎn)物化合物47?；衔?4是合成HMAF過程中的副產(chǎn)物，在合成化合物51時得到化合物52。
使用的藥用鹽包括鹽，如胺的酸加成鹽和自由羥基的一、二及三磷酸酯。胺鹽包括無機酸和有機酸的鹽，包括鹽酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、碳酸氫鹽等?？赏ㄟ^羥基芳基與金屬氫氧化物、胺或銨反應(yīng)形成堿金屬胺或銨鹽。
本發(fā)明的化合物可制成藥物組合物并以適于所選給藥途徑的不同形式給哺乳動物如癌癥病人施用，給藥途徑如口服或非腸道給藥，后者如靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、肌肉內(nèi)或皮下途徑。
因此，本發(fā)明化合物可與藥用載體如惰性稀釋劑或可同化的食用載體結(jié)合口服給藥。它們可包封于硬或軟明膠膠囊中，可壓制成片劑，或可直接與病人的食物混和。對于口服治療給藥，該活性化合物可與一種或多種賦形劑混和并以可消化的片劑、口含片、錠劑、膠囊、酏劑、混懸劑、糖漿、糯米紙囊劑等形式使用。這些組合物及制劑應(yīng)含有至少0.1％的活性化合物。當(dāng)然，該組合物及制劑的此百分比可以變化并一般占所給單位劑型重量的2至約60％。在這些治療用組合物中，活性化合物的量為獲得有效量濃度的量。
此片劑、錠劑、丸劑、膠囊等也可含有以下成分粘合劑如黃蓍膠、阿拉伯膠、玉米淀粉或明膠；賦形劑如磷酸二氫鈣；崩解劑如玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、藻酸等；潤滑劑如硬脂酸鎂；以及甜味劑如蔗糖、乳糖或糖精，或矯味劑如薄荷、冬青油，或草莓香料。當(dāng)該單位劑型是膠囊時，除上述物質(zhì)外其中還可含有液體載體，例如植物油或聚乙二醇?？纱嬖诙喾N其它物質(zhì)作為包衣或以其它方式修飾固體單位劑型的物理形式。例如，可用明膠、蠟、蟲膠或糖等包衣片劑、丸劑或膠囊。糖漿或酏劑可含有活性化合物，蔗糖甜味劑、對羥基苯甲酸甲酯或丙酯防腐劑，著色劑及矯味劑如草莓或橘味香料。當(dāng)然，用于制備任何單位劑型的任何物質(zhì)應(yīng)是藥用的并且其使用量基本無毒。此外，可將此活性化合物摻混進緩釋制劑和藥具中。
也可通過輸液或注射將此活性化合物靜脈內(nèi)或腹膜內(nèi)施用。此活性化合物的溶液可在水中制備，其中水任選地與無毒表面活性劑混和。也可在甘油、液體聚乙二醇、甘油三乙酸酯及其混合物以及在油中制備分散劑。在貯存和使用的普通條件下，這些制劑含有防腐劑以防止微生物生長。
適于注射或輸液用的藥物劑型可含有含活性組分的滅菌水溶液或分散液或滅菌粉末，該活性組分適于滅菌可注射難溶溶液或分散液的即時制備。在所有情況下，最終劑型必須滅菌，并且在制備和保存條件下為流質(zhì)并穩(wěn)定。該液體載體可以是溶劑或液體分散介質(zhì)，例如，水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇、液體聚乙二醇等)、植物油、無毒甘油酯及其適當(dāng)?shù)幕旌衔?。例如，通過形成脂質(zhì)體、通過維持所需顆粒粒度或通過使用表面活性劑以保持適當(dāng)?shù)牧鲃有??？墒褂枚喾N抗細(xì)菌和抗真菌劑防止微生物作用，例如，對羥基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫汞撒等。在很多情況下，應(yīng)優(yōu)選包括等滲劑，例如，糖、緩沖劑或氯化鈉。通過在組合物中使用延遲吸收試劑如單硬脂酸鋁和明膠可使此注射組合物的吸收延長。通過將活性化合物以所需量與所需的、上述列舉的多種其它組分一起在適當(dāng)?shù)娜軇┲谢旌?，然后過濾除菌制備滅菌注射溶液。對于用于制備滅菌注射溶液的滅菌粉末，優(yōu)選的制備方法是真空干燥和凍干技術(shù)，該技術(shù)可得到活性組分與在上述過濾滅菌溶液中存在的任何所需附加組分的粉末。
圖(Ⅰ)化合物的使用劑量可通過下述方法確定聯(lián)系其體外活性及在動物模型中的體內(nèi)活性，如鼠科動物或狗模型，見美國專利5439936和5523490有關(guān)隱杯傘素類似物部分，對于較高等的哺乳動物，如兒童和成人，例如，見Borch等的美國專利4938949。
該類似物的治療有效劑量需要隨被治療對象和腫瘤變化。但是，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)由于與隱杯傘素S和M相比毒性低，因此可使用較高劑量的該類似物。30至112000μg每千克體重是特別有效的靜脈給藥治療劑量，如果腹膜內(nèi)給藥，則300至112000μg每千克體重是有效的。本領(lǐng)域技術(shù)人員會意識到該劑量可根據(jù)給藥方法變化。
本發(fā)明將通過參照下列詳細(xì)的實施例進一步描述。
實施例實施例Ⅰ隱杯傘素類似物的合成總論熔點未校正。1H和13C NMR在300和75MHz檢測。高分辨質(zhì)譜在University of Minnesota Mass Spectrometry ServiceLaboratory測定。所有色譜使用硅膠(Dayisi230-425目，F(xiàn)isherScientific)，而除非特別說明溶劑為乙酸乙酯和己烷。分析TLC在Whatman4420222硅膠板上進行。通過TLC常規(guī)控制反應(yīng)。
隱杯傘素S、羥基甲基酰基亞甲基環(huán)戊二烯(HMAF)和亞甲基環(huán)戊二烯的合成是本領(lǐng)域已知的(例如，見WO91/04754；WO94/18151)。
化合物11向攪拌的103.5mg HMAF(MW246,0.406mmol)的15ml二氯甲烷溶液中加入327mg Dess-Martin試劑。將此混合物室溫攪拌1小時并在乙醚和飽和硫酸氫鈉及碳酸氫鈉溶液(1∶1)之間進行萃取。用鹽水將此有機萃取物洗滌至中性。用硫酸鎂干燥后，將此溶液濃縮并進行色譜純化，得到65.7mg(64.0％)化合物11，是黃色膠狀物。
1H NMR(CDCl3)δ0.83(m,1H),1.19(m,1H),1.41(s,3H),1.45(m,1H),1.67(m,1H),2.31(s,3H),2.50(s,3H),380(s,1H),7.08(s,1H),10.25(s,1H)；MS m/z244(M+)；UVλmax241nm(∈14000),293nm(∈12000)
化合物12(6-硝基?；鶃喖谆h(huán)戊二烯)將?；鶃喖谆h(huán)戊二烯(99mg,0.46mmol)溶解于二氯甲烷(20ml)并在氮氣氛下向此溶液中加入四氟硼酸硝(141mg,1.1mmol)。形成暗棕色沉淀；將此化合物攪拌4小時，再加入四氟硼酸硝(53mg)并繼續(xù)攪拌2小時。加入水(5ml)并用二氯甲烷(3×25ml)萃取此混合物。將合并的萃取物用飽和碳酸氫鈉溶液、水洗滌，然后用硫酸鎂干燥。除去溶劑并將此殘余物用己烷-乙酸乙酯洗脫進行色譜純化，得到硝基化合物12，為黃色固體(30mg)。
1H NMRδ0.90(ddd,1H),1.23(ddd,1H),1.50(ddd,1H),1.69(ddd,1H),1.46(s,3H),2.02(s,3H),2 34(s,3H),6.97(s,1H).MS m/z261(M+-CH3),244(M+-OH),215(M+-NO2).
化合物14向250ml 1M硫酸和200ml丙酮的溶液中加入40g多聚甲醛(MW30,1.33mmol)。將此溶液加熱至澄清，然后冷卻至室溫。向上述溶液中加入1g隱杯傘素S(MW264,3.79mmol)。將此混合物室溫攪拌72小時并在乙酸乙酯和水之間萃取。用飽和碳酸氫鈉和鹽水分別洗滌此萃取物至中性。用硫酸鎂干燥后，濃縮此溶液并進行色譜純化，得到245mg化合物14(23.4％)和226mg HMAF(24.3％)?；衔?4是白色結(jié)晶。
mp100.5-102.5；IR(KBr)3469,2966,2858,1703,1656,1596,1172cm-1；1H NMR(CDCl3)δ0.48(m,1H),0.84(m,1H),0.99(m,1H),1.10(s,3H),1.17(m,1H),1.32(s,3H),1.67(s,3H),3.61(s,1H),3.73(d,J=11.7Hz,1H),3.96(d,J=11.7Hz,1H),4.56(s,1H),4.75(d.J=5.4Hz,1H),4.91(d,J=5.4Hz,1H),6.52(s,1H)；13C NMR(CDCl3)δ199.7,141.4,136.5,135.9,134.7,90.0,80.375.9,70.8,46.8,32.3,24.7,22.5,13.8,8.9,5.6；MS m/z276(M+),217,201,173；HRMS for C16H20O4理論值276.1362,實測值276.1364；UVλmax305nm(∈3148).
化合物23向170mg HMAF(MW246,0.691mmol)的15ml丙酮和1M硫酸溶液(1∶1)中加入63mg4-羥基噻吩(MW126,0.5mmol)。將此混合物在室溫攪拌2小時并在乙酸乙酯和水之間萃取。用飽和碳酸氫鈉和鹽水分別洗滌有機萃取物至中性。用硫酸鎂干燥后，濃縮此溶液并進行色譜純化得到128mg(72.3％)化合物23黃色膠狀物。
IR(KBr)3360,2974,1646,1592,1588,1495cm-1；1H NMR(CDCl3)δ0.75(m,1H),1.09(m,1H),1.38(m,1H),1.42(s,3H),1.52(m,1H),1.70(s,3H),2.14(s,1H),3.96(q,JAB=13.2Hz,2H),6.77(d,J=8.4Hz,2H),7.07(s,1H),7.20(d,J=8.4Hz,1H)；13C NMR(CDCl3)δ197.9,159.6,156.7,142.4,138.2,136.0,135.9,132.9,131.5,125.8,123.6,116.1,115.9,76.2,37.6,34.2,27.8,16.3,14.2,12.5,9.5；MS m/z354(M+),298,270.229；HRMS for C21H22O3S理論值354.1296,實測值354.1286；UVλmax(甲醇) 332nm(∈7844).
化合物24向117mg HMAF(MW246,0.475mmol)的15ml丙酮和1M硫酸溶液(1∶1)中加入46mg芐基硫醇(MW124,0.371mmol)。將此混合物在室溫攪拌過夜并在乙酸乙酯和水之間萃取。用飽和碳酸氫鈉和鹽水分別洗滌有機萃取物至中性。用硫酸鎂干燥后，濃縮此溶液并進行色譜純化得到100mg(76.6％)化合物24黃色膠狀物。
IR(KBr)3451,2980,1659,1598,1496,1097cm-1,1H NMR(CDCl3)δ0.64(m,1H),1.02(m,1H),1.29(m,1H),1.33(s,3H),1.46(m,1H),1.91(s,3H),1.98(s,3H),3.62(s.
2H),3.71(s,2H),7.06(s,1H),7.29(m,5H)；13C NMR(CDCl3)δ197.2,159.5,141.8,138.4,137.8,134.9,130.1,128.7,128.3,126.9,126.0,75.9,37.5,36.8,28.6,27.5,15.7,14.1,12.8,9.3.MS m/z352(M+)、294,229；HRMS forC22H24O2S理論值352.1497，實測值352.1488；UVλmax(甲醇) 332nm(∈8431).
化合物25和29向166mg HMAF(MW246,0.675mmol)的15ml丙酮和1M硫酸溶液(1∶1)中加入51mg巰基乙酸甲酯(MW106，0.481mmol)。將此混合物在室溫攪拌過夜并在乙酸乙酯和水之間萃取。用飽和碳酸氫鈉和鹽水分別洗滌有機萃取物至中性。用硫酸鎂干燥后，濃縮此溶液并進行色譜純化得到59mg化合物25(36.7％)和94mg(61.1％)化合物29?；衔?5是黃色膠狀物IR(KBr)3451,2944,1731,1665,1592,1496,1278cm-1；1H NMR(CDCl3)δ0.72(m,1H),1.07(m,1H),1.35(m,1H),1.37(s,3H),1.49(m,1H),2.12(s,3H),2.16(s,3H),3.23(s,2H),3.74(s,3H),3.92(q,JAB=12.3Hz,2H),7.09(s,1H)；13C NMR(CDCl3)δ197.5,170.7,159.6,142.5,138.3,134.7,129.1,126.5,76.1,52.3,37.6,33.2,29.6,27.5,16.1,14.2,12.9,9.5；UVλmax(methanol)334nm(∈8093).化合物29也是黃色膠狀物1H NMR(CDCl3)δ0.73(m,1H),1.09(m,1H),1.32(m,1H),1.37(s,3H),1.50(m,1H),2.12(s,3H),2.16(s,3H),3.25(s,2H),3.93(m,2H),7.11(s,1H)；13C NMR(CDCl3)δ197.8,174.7,159.8,142.7,138.2,135.1,129.4,126.4,76.1,37.7,33.2,29.6,27.6,16.2,14.3,12.9,9.5化合物26向125mg HMAF(MW246,0.508mmol)的20ml丙酮和1M硫酸溶液(1∶1)中加入59mg對甲苯硫酚(MW124,0.476mmol)。將此混合物在室溫攪拌5小時并在乙酸乙酯和水之間萃取。用飽和碳酸氫鈉和鹽水分別洗滌有機萃取物至中性。用硫酸鎂干燥后，濃縮此溶液并進行色譜純化得到127mg(75.8％)化合物26黃色膠狀物IR(KBr)3456,2972,1663,1596,1500,1092cm-1；1H NMR(CDCl3)δ0.71(m,1H),1.07(m,1H),1.32(m,1H),1.38(s,3H),1.50(m,1H),1.82(s,3H),2.14(s,3H),2.31(s,3H),3.97(s,1H),4.04(q,JAB=12.9Hz,2H),7.05(s,1H),7.07(d,q=8.1Hz,2H),7.23(d,q=7.8Hz,2H)；13C NMR(CDCl3)δ197.3,159.2,142.3,138.4,137.3,135.0,132.2,131.3,129.8,129.5,126.1,76.0,37.5,33.1,27.6,21.0,16.1,14.1,12.6,9.4；MS m/z352(M+),297,250,229；HRMS for C22H24O2S理論值352.1497，實測值352.1499；UVλmax(甲醇)333nm(∈6598).
化合物32向195mg HMAF(MW246,0.793mmol)的10ml丙酮和1M硫酸溶液(1∶1)中加入70.2mg硫代甘油(MW92,0.763mmol)。將此混合物在室溫攪拌20小時并在乙酸乙酯和水之間萃取。用飽和碳酸氫鈉和鹽水分別洗滌有機萃取物至中性。用硫酸鎂干燥后，濃縮此溶液并進行色譜純化得到147mg(78.3％)化合物32黃色膠狀物。
IR(KBr)3385,2908,1658,1586,1495,1284cm-1；1H NMR(CDCl3)δ0.72(m,1H),1.09(m,1H),1.26(m,1H),1.36(s,3H),1.49(m,1H),2.10(s,3H),2.16(s,3H),2.65(m,3H),3.81(m,5H),4.03(s,1H),7.10(s,1H)；13CNMR(CDCl3)δ197.6,159.6,141.8,138.2,135.1,130.4,126.2,76.1,70.7,70.6,65.2,37.6,35.2,35.1,29.5,29.4,27.6,16.3,14.2,13.1,9.5；MS m/z336(M+),261,229,201；HRMSfor C18H24O4S理論值336.1395實測值336.1395；UVλmax(甲醇)332nm(∈6893).
化合物16向22mg HMAF(MW246,0.089mmol)的3ml丙酮和1M硫酸溶液(1∶1)中加入7.5ml乙醚。將此混合物在室溫攪拌24小時并在乙酸乙酯和水之間分配。用飽和碳酸氫鈉和鹽水分別洗滌有機萃取物至中性。用硫酸鎂干燥后，濃縮此溶液并進行色譜純化得到17mg(80.2％)化合物16黃色膠狀物。
IR(KBr)3457,2968,1659,1592,1502,1284,1097cm-1；1H NMR(CDCl3)δ0.72(m,1H),1.08(m,1H),1.23(t,J=6.9Hz,3H),1.33(m,1H),1.38(s,3H),1.48(m,1H),2.11(s,3H),2.14(s,3H),3.53(q,J=6.9Hz,2H),3.91(s,1H),4.42(q,JAB=10.7,2H),7.10(s,1H)；13C NMR(CDCl3)δ197.4,159.5,142.2,138.8,134.3,130.0,126.4,75.8,65.0,63.5,37.2,27.2,15.6,14.8,13.8,12.7,9.0；MS m/z274(M+),261,228.200,185；HRMS for C17H22O3理論值274.1569，實測值274.1568；UVλmax(甲醇)330nm(∈7225)化合物17向36mg HMAF(MW246,0.146mmol)的3ml丙酮和1M硫酸溶液(1∶1)中加入0.5ml乙醚。將此混合物在室溫攪拌30小時并在乙酸乙酯和水之間分配。用飽和碳酸氫鈉和鹽水分別洗滌有機萃取物至中性。用硫酸鎂干燥后，濃縮此溶液并進行色譜純化得到5mg(14.4％)化合物17,11mg化合物16和13mg HMAF。化合物17是黃色膠狀物
IR(KBr)3433,2920,1659,1592,1502,1350,1163cm-1；1H NMR(CDCl3)δ0.67(m,1H),1.08(m,1H),1.31(m,1H),1.37(s,3H),1.48(m,1H),2.07(s,3H),2.11(s,3H),4.48(s,2H),7.10(s,1H)；13C NMR(CDCl3)δ197.9,159.9,143.3,139.1,134.6,129.6,126.8,76.1,63.2,37.6,27.5,15.9,14.2,13.1,9.4；MS m/z475(M+H),391,307,229；HRMS for C30H34O5(M+H)理論值475.2535實測值475.2467；UVλmax(甲醇)330nm(∈12905).
化合物18向1.5g HMAF(MW246,6.098mmol)的66ml丙酮和40ml 1M硫酸溶液(1∶1)中加入20g果糖。將此混合物在室溫攪拌過夜并在乙酸乙酯和水之間分配。用飽和碳酸氫鈉和鹽水分別洗滌有機萃取物至中性。用硫酸鎂干燥后，濃縮此溶液并進行色譜(用二氯甲烷和甲醇作溶劑)純化得到350mg化合物18(14.1％，混合物)黃色膠狀物(其中含有回收的701mg HMAF)；IR(KBr)3397,2932,1659,1574,1369,1085cm-1；MS m/z409(M+H),307,229,203；HRMS for C21H28O8(M+H)理論值409.1863，實測值409.1869；UVλmax(甲醇)332nm(∈4745).
化合物19向110mg HMAF(MW246,0.447mmol)的15ml丙酮和1M硫酸溶液(1∶1)中加入5ml甘油。將此混合物在室溫攪拌22小時并在乙酸乙酯和水之間分配。用飽和碳酸氫鈉和鹽水分別洗滌有機萃取物至中性。用硫酸鎂干燥后，濃縮此溶液并進行色譜(向一般溶劑系統(tǒng)中加入5％甲醇)純化得到79mg化合物19(55.2％)黃色膠狀物(其中含有回收的40mg HMAF)IR(KBr)3415,2926,1659,1586,1103cm-1；1H NMR(CDCl3)δ0.72(m,1H),1.08(m,1H),1.26(m,1H),1.37(s,3H),1.50(m,1H),2.10(s,3H),2.15(s,3H),2.57(s,1H),3.58(m,4H),3.86(m,1H),3.91(s,1H),4.51(q,JAB=12.9Hz,2H),7.10(s,1H)；13C NMR(CDCl3)δ198.0,160.1,143.2,138.8,134.6,129.4,126.9,76.2,70.9,70.6,64.4,63.8,37.6,27.4,16.1,14.2,13.1,9.4；MS m/z320(M+),277,228,185；HRMS C18H24O5理論值320.1623,實測值320.1616；UVλmax(甲醇)331nm(∈7920).
化合物20和53向188mg HMAF(MW246,0.764mmol)的10ml丙酮和1M硫酸溶液(1∶1)中加入5ml 2-溴代乙醇。將此混合物在室溫攪拌4.5小時并在乙酸乙酯和水之間萃取。用飽和碳酸氫鈉和鹽水分別洗滌有機萃取物至中性。用硫酸鎂干燥后，濃縮此溶液并進行色譜純化得到179.2mg化合物20(66.4％)黃色膠狀物。
IR(KBr)3445,2914,1650,1592,1502.1097cm-1；1HNMR(CDCl3)δ0.71(m,1H),1.07(m,1H),1.35(m,1H),1.38(s,3H),1.48(m,1H),2.15(s,3H),3.47(t,J=6.0Hz,2H),3.77(t,J=6.0Hz,2H),3.91(s,1H),4.54(q,JAB=12Hz,2H),7.09(s,1H)；13C NMR(CDCl3)δ198.1,160.6,143.2,138.9,134.4,129.3,127.0,76.3,69.4,64.1,37.7,30.6,27.6,16.4,14.3,13.2,9.5；MS m/z 352(M-H),326,228,285；HRMS for C17H21BrO3(M-H)理論值352.0674.實測值352.0671；UVλmax(甲醇)332nm(∈7777).
產(chǎn)物化合物53為黃色膠狀物1H NMR(CDCl3)δ0.72(m,1H),1.05(m,1H),1.32(m,1H),1.37(s,3H),1.50(m,1H),2.13(s,3H),2.15(s,3H),3.46(t,J=6.3Hz,2H),3.65(m,4H),3.79(t,J=6.3Hz,2H),3.90(s,1H),4.51(q,JAB=12Hz,2H),7.09(s,1H).
化合物21向260mg HMAF(MW246,1.057mmol)的6ml 2-甲氧基丙烯溶液中加入2滴三氯氧磷。將此混合物在室溫攪拌6天并在乙酸乙酯和水之間萃取。用飽和碳酸氫鈉和鹽水分別洗滌有機萃取物至中性。用硫酸鎂干燥后，濃縮此溶液并進行色譜純化得到133mg化合物21(39.6％)黃色膠狀物(其中含有回收的87mg HMAF)IR(KBr)3457,2980,1665,1598,1502,1091cm-1,1H NMR(CDCl3)δ0.72(m,1H),1.06(m,1H),1.25(m,1H),1.38(s,3H),141,(s,3H),1.42(s,3H),1.49(m,1H),2.15(s,3H),3.25(s,6H),3.95(s,1H),4.43(s,2H),7.11(s,1H)；13C NMR(CDCl3)δ197.7,159.5,142.2,134.9,134.8,130.5,126.7,100.3,76.1,54.4,48.6,37.4,27.5,24.4,24.3,15.9,14.0,13.0,9.3；MS m/z318(M+),260,229,185,73；HRMS for C19H26O4理論值318.1831,實測值318.1823；UVλmax(甲醇)330nm(∈8728)
化合物22向9.0mg HMAF(MW246,0.037mmol)的9ml丙酮和1M硫酸溶液(1∶1)中加入4.5ml乙二醇。將此混合物在室溫攪拌2小時并在乙酸乙酯和水之間萃取。用飽和碳酸氫鈉和鹽水分別洗滌有機萃取物至中性。用硫酸鎂干燥后，濃縮此溶液并進行色譜純化得到11mg化合物22(100％)黃色膠狀物IR(KBr)3439,2914,1665,1598,1508,1344,1103cm-1,1H NMR(CDCl3)δ0.71(m,1H),1.06(m,1H),1.32(m,1H),1.36(s,3H),1.47(m,1H),2.11(s,3H),2.14(s,3H),2.55(s,1H),3.57(t,J=4.5Hz,2H),3.73(t,J=4.5Hz,2H),3.98(s,1H),4.50(q,JAB=12Hz,2H),7.09(s,1H)；13C NMR(CDCl3)δ197.9,160.0,142.9,138.9,134.5,129.6,126.8,76.1,70.9,64.2,61.6,37.5,27.4,16.0,14.1,13.1,9.3；MS m/z290(M+),250,228,185；HRMS C17H22O4理論值290.1518，實測值190.1515；UVλmax(甲醇)331nm(∈9404).
化合物10和13向1g亞甲基環(huán)戊二烯(MW216,4.63mmol)的5ml丙酮和2.5ml 2M硫酸溶液中加入2.5ml丙烯醛。將此混合物在室溫攪拌7小時并在乙酸乙酯和水之間萃取。用飽和碳酸氫鈉和鹽水分別洗滌有機萃取物至中性。用硫酸鎂干燥后，濃縮此溶液并進行色譜純化得到378mg化合物10(30.0％)和241mg化合物13(13.6％)?；衔?0是黃色膠狀物0.68(m,1H),1.07(m,1H),1.32(m,1H),1.36(s,3H),1.46(m,1H),2.01(s,3H),2.06(s,3H),2.65(t,J=7.8Hz,2H),3.00(m,2H),3.93(s,1H),7.12(s,1H),9.83(s,1H)；13C NMR(CDCl3)δ200.4,196.3,157.3,139.4,138.3,135.4,133.7,125.3,75.4,43.5,36.9,27.0,19.5,15.4,13.4,12.4,8.6；MS m/z272(M+),244,215,201；HRMSfor C17H20O3理論值272.1413,實測值272.1416；UVλmax(甲醇)332nm(∈8500)化合物13也是黃色膠狀物(混合物)HRMS C23H28O5理論值384.1937.
實測值384.1947；UVλmax(甲醇)329nm(∈6000).
化合物30、31和45向108mgHMAF(MW246,0.439mmol)的40ml丙酮和THF(1∶1)中加入1.5ml巰基乙酸甲酯。將此混合物在室溫攪拌4天并在乙酸乙酯和水之間萃取。用飽和碳酸氫鈉和鹽水分別洗滌有機萃取物至中性。用硫酸鎂干燥后，濃縮此溶液并進行色譜純化得到44mg化合物30、20mg化合物31和29mg化合物45?；衔?0是黃色膠狀物1H NMR(CDCl3)δ0.70(m,1H),1.09(m,1H),1.33(s,3H),1.35(m,1H),1.50(m,1H),2.14(s,3H),2.15(s,3H),3.23(s,2H),3.67(s,3H),3.74(s,3H),3.92(s,2H),4.08(m,3H)；MS m/z438(M+),424,333,315；HRMS C21H26O6S2理論值438.1172，實測值438.1188；UVλmax(甲醇)372nm(∈10760),243nm(∈14364).化合物31為談黃色膠1HNMR(CDCl3)δ0.46(m,1H),0.88(m,1H),1.04(m,1H),1.32(s,3H),1.38(m,1H),1.87(s,3H),2.03(s,3H),3.13(m,2H),3.44(m,3H),3.73(s,3H),3.77(s,3H),4.02(s,1H),4.41(q,2H)；MS m/z456(M+),425,351,333；HRMSC21H28O7S2理論值456.1277,實測值456.1288；UVλmax(甲醇)263nm(∈17264),204nm(∈8648).化合物45也是黃色膠 MS m/z352(M+),334,263,244,229,201；HRMS C18H24O5S理論值352.1345，實測值352.1333；UVλmax(甲醇)328nm(∈2692),238nm(∈11099).
化合物9向30mg化合物10(MW272,0.110mmol)的5ml THF溶液中加入5滴乙酸和一些氰基硼氫化鈉。將此混合物室溫攪拌1小時并在乙酸乙酯和水之間萃取。用飽和氯化銨和鹽水分別洗滌有機萃取物。用硫酸鎂干燥后，濃縮此溶液并進行色譜純化得到21mg化合物9(69.5％)黃色膠狀物1HNMR(CDCl3)δ0.67(m,1H),1.06(m,1H),1.26(m,1H),1.36(s,3H),1.46(m,1H),1.73(m,2H),2.06(s,3H),2.07(s,3H),2.74(m,2H),3.70(t,J=6.3Hz,2H),3.96(s,1H),7.14(s,1H)；13C NMR(CDCl3)δ197.0,157.7,139.6,139.0,136.6,136.5,128.2,75.9,62.0,37.3,33.0,27.5,24.0,15.9,13.8,12.8,9.0；MSm/z274(M+),246,215、187；HRMS C17H22O3理論值274.1569，實測值274.1557；UVλmax(甲醇)330nm(∈6700)
化合物27在0℃氬氣氛下，向163mg HMAF(MW246,0.663mmol)的10ml二氯甲烷溶液中加入0.18ml吡啶和0.34ml氯代甲酸苯基酯。將此混合物攪拌3小時并在乙酸乙酯和水之間萃取。用鹽水洗滌有機萃取物。用硫酸鎂干燥后，濃縮此溶液并進行色譜純化得到20mg化合物27黃色膠狀物1H NMR(CDCl3)δ0.85(m,1H),1.18(m,1H),1.43(m,1H),1.52(s,3H),1.61(m,1H),2.12(s,3H),2.28(s,3H),4.04(s,1H),5.06(q,JAB=11.1Hz,2H),6.93-7.47(m、6H)化合物28在氬氣氛下，向116mg HMAF(MW246,0.447mmol)的10ml二氯甲烷溶液中加入0.10ml吡啶和0.25ml芐基氯。將此混合物濃縮并進行色譜純化得到152mg化合物28(92.1％)黃色膠狀物(其中含回收的13mg HMAF):
1H NMR(CDCl3)δ0.65(m,1H),1.02(m,1H),1.18(m,1H),1.32(s,3H),1.44(m,1H),2.03(s,3H)、2.16(s,3H),3.86(s,1H),5.28(q,JAB=13.2Hz,2H),7.06(s,1H)化合物33按照圖2A所示的方案制備化合物33。化合物A按照文獻(xiàn)制備，為白色固體mp134-6℃；IR(KBr)2993,2952,1757,1743,1454cm-1；1H NMR(CDCl3)d 0.74(m,1H),1.03(m,1H),1.13(m,1H),1.25(s,3H),1.32(m,1H),2.08(m,2H),2.27(m,2H),2.54(d,J=7.5Hz,1H),2.92(m,1H),4.45(s,1H)；13C NMR(CDCl3)d216.6,211.4,87.7,87.4,57.6,41.3,39.2,38.3,25.1,14.1,13.4,11.9；MS m/z206(M+),177,149,124；HRMS C12H14O3理論值206.0943.實測值206.0941.
化合物B--在25℃，向攪拌的化合物A(2.83g,13.7mmol)的2-丙醇(500ml)溶液中，加入碳酸鉀(8g,58.0mmol)。將此混合物攪拌7天，然后在乙酸乙酯和水之間萃取。用飽和氯化銨洗滌有機萃取物并硫酸鎂干燥。然后將此粗品濃縮并進行色譜純化得到1.88g化合物A和0.78g化合物B(82.1％)?；衔顱是白色固體mp183-5℃；IR(KBr)3369,2995,1696,1616,1407,1367,1226cm-1；1H NMR(CDCl3)d 1.24(m,1H),1.38(m,1H),1.68(m,1H),1.88(m,1H),2.00(s,3H),2.16(m,2H),2.46(m,2H),3.21(m,1H),4.06(d,J=2.7Hz,1H)；13C NMR(CDCl3)d 206.1,204.8,147.5,128.0,72.0,42.2,39.5,32.1,21.7,19.4,18.6,11.7；MS m/z206(M+),177,150,147；HRMS C12H14O3理論值206.0943，實測值206.0944.
化合物C--在25℃，將對甲苯磺酸(12mg,0.063mmol)加到攪拌的化合物B(107mg,0.519mmol)和乙二醇(3.04g,49mmol)的苯(10ml)溶液中，將其隨后攪拌24小時。將此混合物在乙酸乙酯和飽和碳酸氫鈉之間萃取。用鹽水洗滌合并的有機層，用硫酸鎂干燥并濃縮為油狀物，將其色譜純化得到5mg化合物B和118mg化合物C(95.3％)，化合物C為無色油狀物IR(KBr)3469,2952,2892,1757,1690,1616,1374,1159,1085cm-1；1H NMR(CDCl3)d 1.00(m,3H),1.36(m,1H),1.88(d,J=2.7Hz,3H),1.96(m,2H),2.36(m,2H),3.19(t,J=3.9Hz,1H),3.78(t,J=3.9Hz,1H),4.00(m.4H)；13C NMR(CDCl3)d205.4,148.3,128.3,108.9,67.9,65.6,64.5,41.9,39.3,26.8,20.8,12.8,11.5,6.22；MS m/z250(M+),221,193,177；HRMSC14H18O4理論值250.1205實測值250.1201化合物D--在氮氣氛下，向攪拌的化合物C(8.0mg,0.032mmol)的吡啶(0.5ml)溶液中加入TESCl(0.1ml,0.25mmol)。將此混合物在60℃攪拌30分鐘，然后濃縮為油狀物。通過色譜將此粗品純化得到13mg化合物D(定量)，為無色油狀物
IR(KBr)2959,2885,1710,1610,1454,1414,1381,1219cm-1；1H NMR(CDCl3)d 0.62(q,J=7.8Hz,6H),0.94(m,11H),1.28(m,1H),1.83(m,1H),1.87(d,J=2.4Hz,3H),2.35(m,2H),3.13(m,2H),3.75(d,J=3.3Hz,1H),4.01(m,4H)；13C(CDCl3)d205.6,148.8,128.8,109.5,69.1,65.3,64.7,43.3,39.5,27.4,21.5,12.9,11.6,6.8,6.5,4.8；MS m/z364(M+),336,291,219,161；HRMS C20H32O4Si理論值364.2070實測值364.2070.
化合物E--在氮氣氛下，將化合物D(13mg,0.0357mmol)和苯基亞硒酸酐(13mg,0.0361mol)的氯代苯(0.5ml)溶液在95℃攪拌0.5小時。然后將此溶液濃縮并進行色譜純化得到4.9mg化合物D和7.0mg化合物E(78.2％)，化合物E為無色油狀物IR(KBr)2959,2878,1716,1683,1622,1454,1381,1213cm-1；1H NMR(CDCl3)d0.54(q,J=6,3Hz,6H),0,89(m,10H),1.27(m,2H),1.57(m,1H),1.93(m,3H),3.79(s,1H),4.00(m,4H),6.30(dd,J=2.4,6Hz,1H),7.28(dd,J=2.1,6Hz,1H)；13C NMR(CDCl3)d 195.9,154.7,146.9,137.7,127.5,109.5,69.2,65.5,64.6,47.4,28.0,12.8,11.1,7.1,6.7,5.0；MS m/z362(M+),333,289.
187,159,87；HRMS C20H30O4Si理論值362.1913實測值362.1919化合物I--向化合物E(20mg,0.055mmol)和CeCl3·7H2O(35mg,0.094mmol)的甲醇(1ml)溶液中加入硼氫化鈉(過量)。將此混合物在25℃攪拌15分鐘后，再加入硼氫化鈉。攪拌15分鐘后，將此混合物在乙醚和飽和氯化銨之間萃取。用硫酸鎂干燥此醚萃取物并濃縮得到粗品化合物F，為淡黃色油狀物。
向上述粗品化合物F的二氯甲烷(1ml)溶液中，在25℃分別加入Et3N(20ml,0.143mmol)和MsCl(20ml,0.258mmol)。攪拌5分鐘。然后將此混合物在乙醚和飽和碳酸氫鈉之間萃取。用鹽水洗滌此醚萃取物并用硫酸鎂干燥。濃縮后，色譜純化得到化合物H和化合物I，為黃色膠狀物。
室溫向上述化合物H的丙酮(2ml)和水(1ml)溶液中加入一些對苯甲磺酸。將此混合物放置5分鐘并在乙醚和飽和碳酸氫鈉之間萃取。然后用鹽水洗滌此醚萃取物并用硫酸鎂干燥。濃縮并色譜純化后，與上述產(chǎn)物I混合得到10.5mg化合物I，為黃色膠狀物IR(KBr)3456,2912,2885,1730,1636,1441,1367cm-1；1H NMR(CDCl3)d 0.75(m,1H),1.10(m,2H),1.24(m,1H),1.88(s,3H),2.34.J=6.9Hz,1H),3.95(m,2H),4.06(m,2H),4.68(d,J=5.7Hz,1H),6.34(m,1H),6.42(m,2H):13C NMR(CDCl3)d152.0,139.8,134.6,130.5,125.3,117.9,111.9,71.3,67.0,66.1,31.5,16.4,9.5,6.6；MS m/z232(M+),215,189,160,145；HRMS for C14H16O3理論值232.1099實測值232.1093化合物33--將化合物I(7.3mg,31mmol)和重鉻酸吡啶鎓(26mg,69mmol)的二氯甲烷(1ml)溶液在25℃攪拌1小時。用乙醚稀釋此混合物并隨后過濾。將此濃縮的粗品色譜純化得到5.2mg化合物33(71.9％)，為黃色結(jié)晶mp138-140℃,IR(KBr)2959,2892,1683,1616,1549,1441,1360cm-1；1H NMR(CDCl3)d 1.14(m,2H),1.35(m,2H),2.06(s,3H),4.02(m,2H),4.16(m,2H),6.63(dd,J=2.4,4.8Hz,1H),6.76(d,J=4.8Hz,1H),7.39(s,1H)；13C NMR(CDCl3)d 187.6,159.6,140.3,135.4,131.0,127.9,124.8,106.2,66.0.33.4,16.9,12.9；MS m/z 230(M+),202,158；HRMS C14H14O3理論值230.0942實測值230.0948；UVλmax(甲醇)230nm(e6543),330(e3484).
化合物35按照圖2B所示的方案制備化合物35。
化合物J--向化合物B(37mg,0.18mmol)的吡啶(3ml)溶液中加入TESCl(0.25ml,0.624mmol)。將此混合物在氮氣氛下在60℃攪拌0.5小時。濃縮并色譜純化后，得到50mg化合物J(87％)，為無色油狀物
IR(KBr)2952,2872,1703,1622,1461,1414,1226cm-1；1H NMR(CDCl3)d 0.58(q,J=7.8Hz,6H),0.97(m,10H),1.25(m,2H),1.58(m,1H),1.85(m,2H),1.98(s,3H),2.42(m,2H),3.09(b,1H),4.01(d,J=3Hz,1H)；13C NMR(CDCl3)d206.0,205.0,147.0,128.6,72.6,43.0,39.6,32.1,21.4,19.6,18.0,11.5,6.5,4.5；MS m/z320(M+),291,259,HRMS C18H28O3Si理論值320.1808實測值320.1803.
化合物K--在氮氣氛下，將化合物J(278mg,0.869mmol)和苯基亞硒酸酐(320mg,0.889mmol)的氯代苯(2.5ml)溶液在95℃攪拌0.5小時。然后將此溶液濃縮并進行色譜純化得到58.7mg化合物J和131.2mg化合物K(60.2％)，為無色膠狀物IR(KBr)2952,2878,1730,1690,1636,1454,1240cm-1；1H NMR(CDCl3)d 0.52(q,J=7.8Hz,6H),0.85(t,J=7.8Hz,9H),1.20(m,1H),1.36(m,1H),1.69(m,1H),1.82(m,1H),2.06(s,3H),3.58(s,1H),4.26(d,J=2.4Hz,1H),6.45(dd,J=2.1,6Hz,1H),7.33(dd,J=2.1,6Hz,1H)；13C NMR(CDCl3)d205.9,195.3,153.2,144.3,139.4,127.7,72.1,47.3,32.4,20.1,19.7,11.4,6.4,4.4；MS m/z318(M+),289,261；HRMS C18H26O3Si理論值318.1651實測值318.1658.
化合物N--在25℃，向化合物K(9.5mg,0.0299mmol)和CeCl3·7H2O(58.5mg,0.157mmol)的甲醇(0.3ml)溶液中加入硼氫化鈉(過量)。攪拌30分鐘。將此混合物在乙醚和飽和氯化銨之間萃取。用硫酸鎂干燥此醚萃取物并濃縮得到粗品化合物L(fēng)，為淡黃色油狀物。
向上述粗品化合物L(fēng)的二氯甲烷(0.2ml)溶液中，在25℃分別加入Et3N(5ml,0.036mmol)和MsCl(5ml,0.965mmol)。將此混合物攪拌5分鐘，然后將此混合物在乙醚和飽和碳酸氫鈉之間分離。用鹽水洗滌此醚萃取物并用硫酸鎂干燥。濃縮后，色譜純化得到8.2mg化合物N(90.3％)，為黃色膠狀物。
IR(KBr)3557,3449,2946,2878,1716,1643,1461,1112cm-1；1H NMR(CDCl3)d 0.66(q,J=7.8Hz,6H),0.87(m,2H),0.98(t,J=7.8Hz,9H),1.26(m,2H),1.86(s,3H),2.55(d,J=3.9Hz,1H),3.24(s,1H),4.94(d,J=2.1Hz,1H),6.35(m,2H),6.46(m,1H)；13C NMR(CDCl3)d 148.9,140.0,130.4,117.8,117.5,77.0,68.6,61.9,16.1,11.6,7.8,6.8,5.0；MS m/z304(M+),287,275；HRMS C18H28O3Si理論值304.1859實測值304.1860化合物O--在25℃，將化合物N(1.2mg,3.95mmol)和Dess-Martin試劑(2.2mg,5.19mmol)的二氯甲烷(0.2ml)溶液攪拌30分鐘。將此混合物在乙醚和10％亞硫酸鈉之間分離。然后用鹽水洗滌此醚萃取物并用硫酸鎂干燥。濃縮后，進行色譜純化得到1.1mg化合物0(92.3％)，為黃色膠狀物IR(KBr)2952,2872,1690,1610,1549,1354,1132cm-1；1H NMR(CDCl3)d 0.71(q,J=7.8Hz,6H),0.85(m,1H),0.97(t,J=7.8Hz,9H),1.21(m,2H),1.45(m,1H),2.08(s,3H),4.50(s,1H),6.66(dd,J=2.4,4.8Hz,1H),6.72(d,J=5.1Hz,1H),7.25(s,1H)；13C NMR(CDCl3)d 193.3,161.2,140.7,131.8,131.2,128.3,122.8,32.9,17.1,12.5.10.3,6.9,5.2；MS m/z 302(M+),273,245；HRMSC18H26O2Si理論值302.1702實測值302.1710；UVλmax227nm(e15612),323nm(e10720).
化合物35--向化合物0(9.0mg,0.0298mmol)的丙酮(0.8ml)和水(0.4ml)溶液中加入一些對苯甲磺酸。將此混合物攪拌30分鐘。在乙醚和飽和碳酸氫鈉之間萃取。然后用鹽水洗滌此醚萃取物并用硫酸鎂干燥。濃縮后，進行色譜純化得到定量的化合物35，為黃色膠狀物
IR(KBr)3449,3013.2925,1663,1609,1441,1367,1260cm-1；1H NMR(CDCl3)d 0.81(m,1H),1.25(m,1H),1.36(m,1H),1.44(m,1H),2.12(s,3H),3.82(d,J=2.4Hz,1H),4.55(d,J=2.1Hz,1H),6.70(dd,J=2.7,5.1Hz,1H),6.81(t,1H),7.32(s,1H)；13CNMR(CDCl3)d194.2,162.2,140.9,132.7,131.4,126.5,124.1,74.6,32.8.17.0,12.7,10.3；MS m/z188(M+),160,145；HRMS C12H12O2理論值188.0837實測值188.0840；UVlmax(甲醇)227nm(e13626),323nm(e7474).
化合物42、43和44向340mg HMAF(MW246,1.38mmol)和110mg咪唑(MW68,1.62mmol)的4ml DMF溶液中加入0.7ml三乙基甲硅烷基氯(d0.898,MW360,1.75mmol)。將此混合物室溫攪拌1.5小時。在乙醚和飽和碳酸氫鈉之間萃取此混合物。用鹽水洗滌此醚萃取物并用硫酸鎂干燥。過濾并濃縮后，進行色譜純化得到90.3mg化合物42、30mg化合物43和41.7mg化合物44?；衔?2是黃色膠狀物1H NMR(CDCl3)δ0.74(m,10H),0.94(t,J=7.8Hz,6H),1.08(m,lH),1.26(m,1H),1.37(s,3H),1.46(m,1H),2.11(s,3H),2.17(s,3H),4.62(s,2H),7.02(s,1H).化合物43是黃色膠1H NMR(CDCl3)δ0.62(m,10H),0.94(t,J=7.5Hz,6H),1.06(m,1H),1.34(m,1H),1.38(s,3H),1.47(m,1H),2.12(s,3H),2.18(s,3H),3.92(s,1H),4.63(q,JAB=12.6Hz,2H),7.09(s,1H).化合物44也是黃色膠1H NMR(CDCl3)δ0.65(m,19H),0.87(t,J=7.8Hz,12H),1.00(m,1H),1.17(m,1H),1.30(d,3H),1.36(m,1H),2.03(d,3H),2.09(s,3H),4.55(q,2H),6.96(s,1H).
化合物38用Jones試劑將化合物10氧化得到化合物38，為黃色膠狀物1H NMR(CDCl3)δ0.69(m,1H),0.88(m,1H),1.05(m,1H),1.36(s,3H),1.47(m,1H),2.06(s,3H),2.07(s,3H),2.52(m,2H),3.03(m,2H),7.13(s,1H).
化合物46化合物46是化合物10還原為化合物9時的副產(chǎn)物,為黃色膠狀物
1H NMR(CDC3)δ0.68(m,1H),1.06(m,1H),1.25(m,1H),1.36(s,3H),1.47(m,1H),2.04(s,3H),2.05(s,3H),2.06(s,3H),2.27(m,2H),2.72(m,2H),3.95(s,1H),4.10(m,2H),7.13(s,1H).
化合物39當(dāng)在甲醇中用硼氫化鈉處理化合物10時，得到少量的化合物39?；衔?9是黃色膠狀物1HNMR(CDCl3)δ0.67(m,1H),1.06(m,1H),1.32(m,1H),1.36(s,3H),1.46(m,1H),1.78(m,2H),2.05(s,3H),2.06(s,3H),2.70(m,2H),3,33(s,3H),3.34(s,3H),3.95(s,1H),4.35(t,J=2.4Hz,1H),7.14(s,1H).
化合物40當(dāng)在乙醇中用硼氫化鈉處理化合物10時，得到少量的化合物40?；衔?0是黃色膠狀物1H NMR(CDCl3)δ0.67(m,1H),1.04(m,1H),1.21(m,6H),1.29(m,1H),1.36(s,3H),1.46(m,1H),1.77(m,2H),2.05(s,3H),2.06(s,3H),2.71(m,2H),3.50(q,2H),3.65(q,2H),3.95(s,1H),4.48(t,J=5.4Hz,2H),7.13(s,1H).
化合物15當(dāng)在-78℃，在乙酸酐中用BF3·Et20處理HMAF時，得到低收率的化合物15，為黃色膠狀物1H NMR(CDCl3)δ0.97(m,1H),1.16(m.2H),1.46(m,1H),1.51(s,3H),2.10(s,3H),2.14(s,3H),2.19(s,3H),4.60(s,1H),4.65(s,2H),7.18(s,1H)化合物47當(dāng)在硫酸和丙酮中用丙烯腈處理HMAF時，得到副產(chǎn)物化合物47，為黃色膠狀物MS m/z432(M+),414,399,386,371,217；HRMS C28H32O4理論值432.2302,實測值432.2312.
化合物48當(dāng)使用限量的巰基化合物制備化合物26時，形成副產(chǎn)物化合物48，為黃色膠狀物
1H NMR(CDCl3)δ0.64(m,1H),1.05(m,1H),1.26(m,1H),1.37(s,3H),1.48(m,1H),1.84(s,3H),2.16(s,3H),2.28(s,3H),2.32(s,3H),4.04(s,2H),6.87-7.27(m,8H)；HRMSC28H28O2S2理論值460.1532實測值160.1504化合物49和50室溫向酰基亞甲基環(huán)戊二烯的丙酮和1M硫酸溶液(1∶1)中加入對甲苯硫酚。將此混合物攪拌過夜并在乙酸乙酯和水之間萃取。用飽和碳酸氫鈉和鹽水分別洗滌此有機萃取物。用硫酸鎂干燥后，將其濃縮并進行色譜純化得到低收率的化合物49和50?；衔?9是黃色膠狀物1H NMR(CDCl3)δ0.69(m,1H),0.88(m,1H),1.06(m,1H),1.25(m,1H),1.37(s,3H),2.16(s,3H),2.22(s,3H),2.28(s,3H),3.90(s,1H),6.90-7.30(m,5H). 化合物50也是黃色膠1H NMR(CDCl3)δ0.63(m,1H),1.06(m,1H),1.25(m,1H),1.37(s,3H),1.45(m,1H),1.83(s,3H),2.16(s,3H),2.28(s,3H),2.32(s,3H),4.04(s,1H),6.87-7.30(m,8H).
化合物41當(dāng)用丙炔基醛在丙酮和1M硫酸(1∶1)中處理HMAF時，得到化合物41，為黃色膠狀物1H NMR(CDCl3)δ0.72(m,1H),1.14(m,1H),1.31(m,1H),1.38(s,3H),1.42(m,1H),2.05(s,3H),2.13(s,3H),3.96(s,1H),6.55(s,1H),7.16(s,1H),7.17(s,1H),9.68(d.1H).
化合物54當(dāng)制備HMAF時得到副產(chǎn)物化合物54，為黃色膠狀物1H NMR(CDCl3)δ0.67(m,2H),1.01(m,2H),1.22(m,2H),1.34(s,3H),1.48(m,2H),1.71(s,3H),1.79(s,3H),2.04(s,3H),2.18(s,3H),3.86-4.21(m,4H),4.60(s,2H),7.15(s,1H)化合物55當(dāng)形成化合物23時得到副產(chǎn)物化合物55，為黃色膠狀物1H NMR(CDCl3)δ1.70(s,3H),2.29(s,3H),2.37(s,3H),2.95(t,3H),3.74(t,3H),4.22(s,1H),4.91(s,2H),6.40-7.15(m,8H).
化合物36室溫在THF中用咪唑處理HMAF得到化合物36，為黃色膠狀物1H NMR(CD3OD)δ0.65(m,1H),1.06(m,1H),1.23(m,1H),1.34(s,3H),1.49(m,1H),1.74(s,3H),2.05(s,3H),5.08(d,2H),6.78-7.47(m,4H).
化合物51和52室溫向HMAF的丙酮和1M硫酸(1∶1)溶液中加入限量的二巰基乙酸乙二醇酯。將此混合物攪拌n小時并按照以前方法處理得到化合物51，為黃色膠狀物1H NMR(CDCl3)δ0.72(m,1H),1.09(m,1H),1.35(m,1H),1.36(s,3H),1.50(m,1H),2.12(s,3H),2.15(s,3H),3.28(t,J=7.8Hz,4H),3.87(s,1H),3.92(q,JAB=13.2,2H),4.36(s,4H),7.08(s,1H).化合物52也是黃色膠1H NMR(CDCl3)δ0.72(m,2H),1.10(m,2H),1.37(s,6H),1.53(m,2H),2.14(s,6H),2.19(s,6H),3.25(m,4H),3.87(s,2H),4.37(m,4H),4.65(s,4H),7.09(s,2H)化合物37向HMAF的丙酮和1M硫酸溶液(1∶1)中加入等量的半胱氨酸。將此混合物室溫攪拌過夜。加入大量乙酸乙酯并加入硫酸鎂除去水層。再加入固體碳酸氫鈉以中和硫酸。然后將此溶液過濾、濃縮并進行色譜純化得到化合物37，為黃色膠狀物1H NMR(CD3OD)δ0.78(m,1H),0.89(m,1H),1.06(m,1H),1.31(s,3H),1.43(m,1H),2.15(s,3H),2.21s,3H),2.91-4.02(m,8H),7.04(s,1H).
化合物56、57和58向HAMF的丙酮和1M硫酸(1∶1)溶液中加入大量的對羥基硫酚。將此混合物室溫攪拌過夜。用乙酸乙酯萃取此混合物。然后用飽和碳酸氫鈉和鹽水分別洗滌有機萃取物。用硫酸鎂干燥后，將此溶液濃縮并進行色譜純化得到化合物56、57和58?；衔?6是黃色膠狀物
1H NMR(CDCl3)0.70(m,1H),0.89(m,1H),1.05(m,1H),1.36(s,3H),1.51(m,1H),2.16(s,3H),2.21(s,3H),3.92(s,1H),6.74(d,J=8.4Hz,1H),6.94(d,J=8.4Hz,1H),7.25(s,1H)；化合物57是黃色膠0.67(m,1H),1.07(m,1H),1.24(m,1H),1.37(s,3H),1.51(m,1H),1.67(s,3H),195(s,3H),4.08(s,1H),6.45(s,1H),6.78(d,J=8.4Hz,1H),7.33(d,J=8.4Hz,1H)；化合物58也是黃色膠δ0.62(m,1H),1.04(m,1H),1.24(m,1H),1.34(s,3H),1.47(m,1H),1.79(s,3H),2.15(s,3H),4.07(s,1H),6.72(d,J=8.4Hz,1H),6.77(d,J=8.4Hz,1H),6.88(d.J=8.4Hz,1H),7.26(d,J=8.4Hz,1H)實施例Ⅱ體外研究為了評價細(xì)胞毒性作用，將不同濃度的隱杯傘素加到MV522(人肺癌細(xì)胞系)和8392(B細(xì)胞白血病/淋巴瘤)細(xì)胞的培養(yǎng)基中，放置48小時，然后通過臺盼藍(lán)排除測定細(xì)胞生長/變化。作為此48小時聯(lián)系接觸研究的替代形式，將細(xì)胞加到96孔板中的培養(yǎng)基中，與不同濃度的隱杯傘素接觸2小時，脈沖加入[3H]-胸苷1至2小時后，在玻璃過濾器上收獲。將濾紙放入含閃爍液體的小瓶中并用β粒子(閃爍)計數(shù)器測定殘余的放射性。
實施例Ⅲ體內(nèi)研究選擇若干類似物劑型進行體內(nèi)研究。抗癌試劑絲裂霉素C用作藥物對照。每天通過IP(腹膜內(nèi))途徑連續(xù)接種5天后，第10天開始藥物治療。開始治療后，監(jiān)視動物3周。對于所用的所有類似物，都未達(dá)到最大耐受劑量(MTD)。
由Simonsen,Inc.(Gilroy,CA)得到重18-22g的BALB/c nu/nu4周齡小鼠并放養(yǎng)于加利福尼亞大學(xué)(san Diego,CA)的無胸腺小鼠群落中，用高效微?？諝膺^濾器(HEPA)過濾通風(fēng)櫥保持無病原體條件。隨意給在用聚酯纖維過濾蓋通風(fēng)的塑料籠中飼養(yǎng)的5組動物提供滅菌食物和水。所有接觸動物的人員都穿戴清潔的、滅菌大衣，手套，口罩和鞋及頭罩。所有研究按照NIH“動物護理和使用指南”的指導(dǎo)進行并得到大學(xué)學(xué)會動物護理和使用委員會的許可(條例3-006-2)。
用于異種皮移植研究的MV522肺癌細(xì)胞系按照Kelner等的描述(Anticancer Res.,15:867-872；873-878(1995))得到并保持在無抗生素的RPMI1640培養(yǎng)基(Mediatech,Herndon,VA)中，該培養(yǎng)基中還添加了10％胎牛血清和2mM谷酰胺，并放置于37℃潮濕的二氧化碳孵育箱中。
將小鼠隨機分為有5只動物的進行初始研究的治療組和有16至20只動物的證明類似物效果的治療組。將每只動物作耳標(biāo)記并在整個實驗中用此標(biāo)記。在小鼠肩部通過s.c.(皮下)注射親代細(xì)胞系MV522接種，每次接種1千萬個細(xì)胞。s.c.埋植MV522細(xì)胞10天后，當(dāng)s.c.腫瘤約3×3mm大小時，給動物實驗所需藥物和劑量。由存活的中間值計算藥物對壽命的作用。
雖然MV522細(xì)胞通過轉(zhuǎn)移使小鼠死亡，原s.c.腫瘤在肩部生長在治療的第一天和此后一周內(nèi)受到監(jiān)視。以兩個垂直的直徑測量腫瘤大小。腫瘤重量按照式W=(寬度)2×長度/2)估算。用公式RW=Wt/Wi計算相對重量(RW)來對實驗組中開始治療時腫瘤大小的變化進行標(biāo)準(zhǔn)化，其中Wi是藥物治療開始時實驗動物的腫瘤重量，而Wt是隨后時間內(nèi)腫瘤的重量。給動物進行尸體解剖，檢查器官尋找轉(zhuǎn)移的證據(jù)。
通過Kaplan和Meir方法比較動物組之間的存活曲線。為了比較多個動物組之間的相對腫瘤重量，進行普通ANOVA，然后進行Tukey-Kramer多重比較后ANOVA分析(Kelner等，Anticancer Res.,867-872；873-878(1995))。概率值(p)小于0.05的具有統(tǒng)計學(xué)顯著性差異。
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類似物21似乎比HMAF更有效，特別是基于MTD未達(dá)到這一事實。類似物16、32和33也是有效的。高劑量的絲裂霉素C對腫瘤大小有作用。但是，該劑量帶來毒性，因為所有動物在31天內(nèi)最終死亡。
低劑量的絲裂霉素C基本不起作用。
本發(fā)明已參考多種特定和優(yōu)選實例和技術(shù)進行了描述。但是，應(yīng)理解在保持本發(fā)明精神和范圍的同時可作出很多變化和修改。
權(quán)利要求
1．下式的化合物或其藥用鹽
其中R1是(CH2)n-(X)-(Y)，其中n是0-4；X是O或S或N，而Y是CH2OC(O)(C1-C4)烷基，被1至2個OH或1至2個鹵原子任選取代的(C1-C8)烷基；單糖，CH2C(O)-O-(CH2)2-O-C(O)CH2SH,(CH2)2-O-(CH2)2W，其中W是鹵原子；-(C1-C8)烷基-O-(C1-C8)烷基；(C6-C10)芳基，(C6-C10)芳基(C1-C4)烷基或C(O)O(C6-C10)芳基，其中芳基部分被1至2個OH、鹵原子、(C1-C4)烷基或O(C1-C4)烷基任選取代；CH2CO2(C1-C4)烷基，-CH2CO2H,Si((C1-C4)烷基)3或氨基酸殘基；R3是H或(C1-C4)烷基；R4是SCH2CO2(C1-C4)烷基、S-(C6-C10)芳基，其中芳基被鹵原子、OH或(C1-C4)烷基任選取代，或者是H；R5是H、OH或不存在；R6是(C1-C4)烷基或不存在；R7是OH或O(Si((C1-C4)烷基)3，或R6和R7一起為亞乙二氧基；R8是(C1-C4)烷基，該烷基含有OH或鹵原子；由…代表的鍵可存在或不存在。
2．權(quán)利要求1所述的化合物，其中…表示的鍵存在，而R5不存在。
3．權(quán)利要求2所述的化合物，其中R3是甲基，R4是H,R6是甲基，R7是OH而R8是甲基。
4．權(quán)利要求3所述的化合物，其中X是O。
5．權(quán)利要求4所述的化合物，其中Y是CH2OC(O)甲基。
6．權(quán)利要求4所述的化合物，其中Y是(C1-C4)烷基。
7．權(quán)利要求6所述的化合物，其中Y是乙基。
8．權(quán)利要求4所述的化合物，其中Y是被2個OH取代的(C1-C8)烷基。
9．權(quán)利要求8所述的化合物，其中Y是-CH2CH(OH)CH2OH。
10．權(quán)利要求4所述的化合物，其中Y是果糖。
11．權(quán)利要求4所述的化合物，其中Y是-(CH2)2Br。
12．權(quán)利要求4所述的化合物，其中Y是-(CH2)2OH。
13．權(quán)利要求4所述的化合物，其中Y是-C(CH3)2-O-(C1-C4)烷基。
14．權(quán)利要求13所述的化合物，其中Y是-C(CH3)2-O-甲基。
15．權(quán)利要求4所述的化合物，其中Y是-C(O)-O-苯基。
16．權(quán)利要求3所述的化合物其中X是S。
17．權(quán)利要求16所述的化合物，其中Y是被OH或甲基取代的苯基。
18．權(quán)利要求16所述的化合物，其中Y是芐基。
19．權(quán)利要求16所述的化合物，其中Y是-CH2CO2CH3。
20．權(quán)利要求16所述的化合物，其中Y是-CH2CO2H。
21．權(quán)利要求16所述的化合物，其中Y是被2個OH取代的(C1-C8)烷基。
22．權(quán)利要求21所述的化合物，其中Y是-CH2CH(OH)CH2OH。
23．權(quán)利要求1所述的化合物，其中n是1,…表示的鍵不存在，X是S；Y是-CH2CO2CH3；R3是甲基；R4是S、-CO2CH3；R6是甲基而R7是OH。
24．權(quán)利要求23的化合物，其中R5是H。
25．權(quán)利要求23所述的化合物，其中R5是OH。
26．下式的化合物或其藥用鹽
其中R1是(CH2)n(Y)；n是0-4；Y是CHO、NO2、NH2、COOH、(C2-C4)鏈烯基-CHO、CH(O(C1-C4)烷基)2；環(huán)(C3-C6)烷基或5元雜芳基，其中含有一個或多個選自N、S或非過氧化物O雜原子，其中環(huán)烷基或雜芳基被1至2個(C1-C4)烷基、CHO、OH或鹵原子任選取代；R3是(C1-C4)烷基或H；R4是S、CH2CO2(C1-C4)烷基或H；R5是H、OH或不存在；R6是(C1-C4)烷基或不存在；R7是OH；R6和R7一起為亞乙二氧基；R8是(C1-C4)烷基，該烷基任選含有OH或鹵原子；由…代表的鍵可存在或不存在。
27．權(quán)利要求26所述的化合物，其中…表示的鍵存在。
28．權(quán)利要求27所述的化合物，其中R3是甲基；R4是H；R6是甲基；R7是OH而R8是甲基。
29．權(quán)利要求28所述的化合物，其中n是1。
30．權(quán)利要求29所述的化合物，其中Y是CHO。
31．權(quán)利要求29所述的化合物，其中Y是環(huán)己基。
32．權(quán)利要求28所述的化合物，其中n是2而Y是CHO。
33．權(quán)利要求28所述的化合物，其中n是O而Y是NO2。
34．下式的化合物或其藥用鹽
其中R1是(CH2)n(Y),n是2至4；Y是OH或OAc；而R2不存在；或R1-C-C-R2一起構(gòu)成5-7元環(huán)，該環(huán)任選含有一個或多個選自N、S或非過氧化物O雜原子，并任選被(C1-C4)烷基、OH或鹵原子取代；R3是H或(C1-C4)烷基；R4是H或CH2CO2(C1-C4)烷基；R5是H、OH或不存在；R6是(C1-C4)烷基或不存在；R7是OH；或R6和R7一起為亞乙二氧基；而由…代表的鍵可存在或不存在。
35．下式的化合物或其藥用鹽
其中R1是H；R3是(C1-C4)烷基或H；R4是CH2CO2(C1-C4)烷基或H；R5是H、OH或不存在；R6是H或不存在；R7是OH；或R6和R7一起為亞乙二氧基；而由…代表的鍵可存在或不存在。
36．權(quán)利要求35所述的化合物，其中R1、R3和R4是H，…表示的鍵存在；且R5不存在。
37．權(quán)利要求36所述的化合物，其中R6是H而R7是OH。
38．權(quán)利要求36所述的化合物，其中R6和R7是亞乙二氧基。
39．下式的化合物
40．式(Ⅱ)的化合物或其藥用鹽
其中R1是(C1-C4)烷基-Z，其中Z是OH或鹵原子，或者S-(C5-C12)芳基，其中芳基被OH、鹵原子或(C1-C4)烷基任選取代；R3是(C1-C4)烷基；R4是-S-(CH2)n-COOH，其中n是1至4；或-S-(C5-C12)芳基，其中芳基被OH、鹵原子或(C1-C4)烷基任選取代。
41．權(quán)利要求40所述的化合物，其中R3是甲基。
42．權(quán)利要求40所述的化合物，其中R1和R4是-S-苯基。
43．式(Ⅲ)的化合物
其中L是通過一個化合物的3、5或7位和另一個化合物的3或7位共價連接化合物A和B的連接劑；而R1和R1′獨立地為-(CH2)n-Z，其中n是1至4，而Z是鹵原子或OH；或不存在。
44．權(quán)利要求43所述的化合物，其中是-(CH2)m-O-(CH2)n-，其中m和n獨立地是1至4。
45．權(quán)利要求43所述的化合物，其中是-CH2-S-CH2C(O)-O-(CH2)2-O-C(O)CH2-S-CH2-。
46．權(quán)利要求43所述的化合物，其中A和B通過5位和3位連接。
47．權(quán)利要求43所述的化合物，其中A和B通過5位和7位連接。
48．式(Ⅲ)的化合物
其中L是-(CH2)m-O-(CH2)n-，其中m和n獨立地是1至4或-CH2-S-CH2C(O)-O-(CH2)2-O-C(O)CH2-S-CH2-，通過5位共價連接化合物A和B；而R1和R1′獨立地為-(CH2)n-Z，其中n是1至4，而Z是鹵原子或OH；或不存在。
49．一種藥物單位劑型，其中含有抑制腫瘤生長有效量的權(quán)利要求1、26、34、35、39、40、43或48所述的化合物和藥用載體。
50．權(quán)利要求49所述的藥物單位劑型，其中載體是液體載體。
51．權(quán)利要求50所述的藥物單位劑型，其中載體適于非腸道給藥。
52．權(quán)利要求51所述的藥物單位劑型，其中載體適于靜脈給藥。
53．權(quán)利要求49所述的藥物單位劑型，其中載體適于口服給藥。
54．權(quán)利要求53所述的藥物單位劑型是片劑或膠囊。
55．一種抑制需此治療的患者的腫瘤細(xì)胞生長的治療方法，包括使用治療量的權(quán)利要求1、26、34、35、39、40、43或48所述的化合物。
56．權(quán)利要求54所述的治療方法，其中患者是癌癥病人。
57．權(quán)利要求55所述的治療方法，其中該患者患有實體瘤。
全文摘要
本發(fā)明提供了通式(Ⅰ)的隱杯傘素類似物,其中R
文檔編號C07C35/37GK1230166SQ97197809
公開日1999年9月29日 申請日期1997年7月14日 優(yōu)先權(quán)日1996年7月18日
發(fā)明者T·C·麥莫爾里斯, M·J·克爾納 申請人:加州大學(xué)評議會