專利名稱：異羥肟酸衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新型的可作為藥物使用的異羥肟酸化合物，這種藥物例如可抑制基質(zhì)金屬蛋白酶(例如膠原酶)和抑制TNF生成，特別是用于治療由于TNF-α過度產(chǎn)生或過度應(yīng)答所造成的疾病或情況。
腫瘤壞死因子(TNF)是一種首先以膜結(jié)合型的28kD前體形式產(chǎn)生的細胞素。然后由一種酶(TNF轉(zhuǎn)換酶)切下并以一種可溶性的、有活性的17KD形式釋放?？扇苄訲NF至少存在兩種形式，TNFα和TNFβ，其中TNFα似乎與臨床有更顯著的關(guān)系。TNFα被認為可介導(dǎo)炎癥和其他與敗血癥休克或急性感染相關(guān)的情況。TNFα長期過度刺激被認為在自身免疫性疾病和慢性炎癥情況，如關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化等中起重要作用。
已知異羥肟酸類的特定的基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑，特別是3-亞氨基-4-氧代-庚烷-1,7-二酸(7-N-羥基)二酰胺(還可以是1-N-,2-,5-，和6-取代類)可能是通過抑制TNF轉(zhuǎn)換酶，有介導(dǎo)TNFα產(chǎn)生的能力。這類化合物的已知代表已有總結(jié)和敘述，例如，在WO94/10990中。
現(xiàn)在令人吃驚地發(fā)現(xiàn)了一類新的異羥肟酸衍生物(“新型化合物”)，它們是有效的TNFα抑制劑并具有有利的藥物性質(zhì)，尤其是口服生物利用度。
新型化合物是3-亞氨基-4-氧代-6-(氧甲基)-庚烷-1,7-二酸(7-N-羥基)二酰胺。合適地，所述的6-氧甲基取代基是下文式Ⅱ中的取代基，例如，羥甲基或單-或多烷氧基甲基。如本領(lǐng)域已知，此新型化合物可以進一步在1-N-,2-，和5-位被取代，例如WO94/10990或本申請進一步所描述。例如，新型化合物可被甲基、吡啶基、或如下文所描述的式X-Y-或X’-Y-的取代基在1-N位取代，例如，3-亞氨基-4-氧代-6-(氧甲基)-庚烷-1,7-二酸(1-N-嗎啉代羰基烷基，7-N-羥基)二酰胺，并且能以游離形式或藥學允許的鹽形式存在。
新型化合物中特別優(yōu)選的一類是3-亞氨基-4-氧代-5-芳基-6-(氧甲基)-庚烷-1,7-二酸(7-N-羥基)二酰胺。如本文進一步描述，5-芳基取代基例如可以是其中5-芳基取代是可任選取代的苯基，通常是在4-位被(例如)羥基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、氨基、鹵素或氰基取代。這種5-芳基取代的新型化合物能以游離的或藥學允許的鹽形式存在。
優(yōu)選地，新型化合物如式Ⅰ
式Ⅰ其中R1為如式Ⅱ所示的取代基A-(O-(CR5H)n)m-O-CH2- 式Ⅱ其中n是1,2,3或4，優(yōu)選2；m是0,1,2或3；各R5獨立地是H,C1-10(可被羥基、C1-6烷氧基、氨基、C1-6烷基氨基、巰基、C1-6烷硫基或保護的羥基、氨基或巰基取代的)烷基，C2-6鏈烯基，C6-14(可被羥基、C1-6烷氧基、氨基、C1-6烷基氨基、鹵素或氰基取代的)芳基，或C6-14(芳基)C1-6烷基；優(yōu)選H、苯基、芐基或C1-5烷基；A是氫，C1-10烷基，C6-14芳基，C6-14芳基(C1-6烷基)，(C6-14芳基)羰基，或(C1-10烷基)羰基；優(yōu)選氫，C1-6；烷基(例如，甲基或環(huán)己基)，苯基或芐基；R2是C2-12烷基，C3-12鏈烯基，C3-7(可被羥基、C1-6烷氧基，氨基，或C1-6烷基氨基取代的)環(huán)烷基，C5-14芳基，或C5-14芳基(C1-6烷基)，此處芳基基團可被羥基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、氨基、鹵素或氰基取代；優(yōu)選苯基、4-甲基苯基、環(huán)己基或異丁基；R3是C1-10(可任選地被羥基或C1-6烷氧基氨基、C1-6烷基氨基、巰基、C1-6烷硫基或保護的羥基、氨基或巰基取代)烷基(例如，叔丁基或環(huán)己基甲基)，C6-14(可任選地被羥基、C6-14芳氧基或C1-6烷氧基、氨基、C1-6烷基氨基、鹵素、或氰基取代)芳基(例如芐基、對-甲氧基芐基、對-芐氧基芐基)，或吲哚基甲基(例如，2-吲哚基甲基)；優(yōu)選芐基或叔丁基；R4是甲基、吡啶基、或式X-Y-的取代基，此處X是嗎啉代、吡啶基或芳基(優(yōu)選嗎啉代)，和Y是C1-12烯基，其中至多4個亞甲基單元可任意地被-CO-,-NH-,-SO2-或-O-代替；例如甲基，2-吡啶基，嗎啉代羰基甲基，5-(嗎啉代)戊基或5-(嗎啉代羰基)戊基?！巴榛卑ㄖ辨?、環(huán)狀、或支鏈烷基；和“芳基”指包括一個或兩個芳香環(huán)的單價芳基基團，例如，苯基、芐基或甲苯基，以及包括雜環(huán)芳基，其含有一個或多個雜原子，例如N,O或S。
除非另有說明，此處所用的Halo或鹵素指F,Cl,Br或Ⅰ。
R1合適地是如式Ⅱ的取代基A-(O-(CH2)n)m-O-CH2- 式Ⅱ’其中A,n和m定義同上。另一種可選擇的具體實施方案中R1是如式Ⅱ”的取代基A-O-(CHR5-(CH2)n)m’-O-CH2-式Ⅱ”其中A,n和R5定義同上，m’為0,1或2。
當式Ⅰ中R4為如式X-Y-的取代基時，其優(yōu)選是式X’-Y-的取代基，其中X’是嗎啉代基，Y定義同上。在本發(fā)明的具體實施方案中，提供式Ⅰ的新型化合物，其中式Ⅱ中的n是3或4；或式Ⅱ中的R5不是H；或R2獨立地是C7-12烷基，C3-12鏈烯基，C3-7(可任意地被羥基、C1-6烷氧基、氨基、或C1-6烷基氨基取代)環(huán)烷基，C5-14芳基、或C5-14芳基(C1-6烷基)，其中芳基基團可任意地被羥基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、氨基、鹵素或氰基取代；優(yōu)選為苯基、4-甲基苯基、4-甲氧基苯基或環(huán)己基；或R3是C1-10(氨基、C1-6烷基氨基、巰基、C1-6烷硫基或保護的羥基、氨基或巰基取代的)烷基，C6-14(氨基、C1-6烷基氨基、鹵素、或氰基取的)芳基；或包含一個或多個雜原子，例如N,O或S的雜環(huán)芳基。
在本發(fā)明的進一步具體實施方案中提供如式Ⅰ’的新型化合物
其中R1’是如式Ⅱ的取代基A’-(O-(CH2)n’)m’-O-CH2- 式Ⅱ其中n’是整數(shù)1或2，優(yōu)選2；m’是整數(shù)0,1,2或3；A’是氫、C6-14芳基、C1-10烷基、(C6-14芳基)羰基或(C1-10烷基)羰基；(優(yōu)選C1-6烷基，例如，甲基或環(huán)己基)；R2’是C2-6烷基，優(yōu)選異丁基；R3’是C1-10(可任選地被羥基或C1-6烷氧基取代的)烷基(例如叔丁基或環(huán)己基甲基)，C6-14(可任選地被被羥基、C6-14芳氧基或C1-6烷氧基取代的)芳基(例如芐基，對-甲氧基芐基，對芐氧基芐基)，或吲哚甲基(例如，2-吲哚甲基)；優(yōu)選芐基或叔丁基；R4’是甲基、吡啶基或式X-Y-的取代基，其中X是嗎啉代、吡啶基或芳基(優(yōu)選嗎啉代)和Y是C1-12鏈烯基其中至多4個亞甲基(-CH2-)單元可任意被-CO-,-NH-,-SO2-或-O-代替；例如甲基、2-吡啶基、嗎啉代羰基甲基、5-(嗎啉代)戊基、或5-(嗎啉代羰基)戊基；其中R2為芳基的優(yōu)選的新型化合物是其中R1為如上定義的式Ⅱ’的取代基以及R2是苯基、4-甲基苯基或4-甲氧基苯基的化合物。
式Ⅰ的化合物中，尤其優(yōu)選的一類化合物是如下化合物(ⅰ)R1是式Ⅱ’或Ⅱ”(優(yōu)選式Ⅱ’)的取代基及式Ⅱ中的A是氫、C1-6烷基，例如甲基或環(huán)己基(例如，因此式Ⅰ的R1例如是羥甲基、環(huán)己氧基乙氧基甲基、甲氧基乙氧基乙氧基甲基或羥乙氧基甲基)或(C6-14芳基)羰基，例如苯甲?；?例如，因此式Ⅰ的R1例如是苯甲酰氧基甲基、苯甲酰氧基乙氧基乙基或苯甲酰氧基乙氧基甲基)；(ⅱ)式Ⅰ的R2是環(huán)己基、苯基、4-甲基苯基、4-甲氧基苯基或異丁基；(ⅲ)式Ⅰ的R3是芐基或叔丁基；和(ⅳ)式Ⅰ的R4是甲基或嗎啉代羰基(C1-6)烷基新型化合物能以游離形式或鹽形式存在，鹽形式也包含在本發(fā)明的范圍內(nèi)。例如，所述新型化合物的一些能以生理可接受的酸或堿加成鹽形式存在，例如，以鹽酸鹽、草酸鹽或富馬酸鹽形式存在。
新型化合物優(yōu)選為如式Ⅰa的構(gòu)型
式Ⅰa或如式Ⅰb的構(gòu)型
式Ⅰb最優(yōu)選如式Ⅰa的構(gòu)型。
因此本發(fā)明包括對映體混合物形式的新型化合物，例如外消旋混合物，盡管優(yōu)選純的或基本上純的對映體形式，例如其中包含至少90％，優(yōu)選95％和尤其至少98％的單個異構(gòu)體的新型化合物(例如包含少于10％，優(yōu)選少于5％，和尤其少于2％的另外的異構(gòu)體的新型化合物)。
另一方面，本發(fā)明提供式Ⅰ或下述式Ⅲ、Ⅳ或Ⅴ的中間體的新穎制備方法，其包括a)如上定義的式Ⅰ化合物的制備方法，它包括使式Ⅲ的化合物
其中R1,R2,R3和R4如上文定義，與羥胺(可選擇鹽形式或O-取代形式的羥胺，例如，羥胺鹽酸鹽)，回收式Ⅰ產(chǎn)物，如果需要可將產(chǎn)物進行脫保護或分離所需的非對映體異構(gòu)體；b)如上定義的式Ⅲ化合物的制備方法，它包括氧化式Ⅳ化合物的烯鍵
式-Ⅳ其中R1,R2,R3和R4如上文定義，例如，使用氧化催化劑例如氯化釕(Ⅲ)，以得到式Ⅲ的酸，如果需要，可分離所需的非對映體異構(gòu)體。
c)如上定義的式Ⅳ化合物的制備方法，它包括將式Ⅴ羧酸CH2=CH-CH(R1)-CH(R2)-COOH 式Ⅴ其中R1和R2如上文定義，和式Ⅵ的氨基酸酰胺反應(yīng)NH2-CH(R3)-CO-NH(R4) 式Ⅵ其中R3和R4如上文定義，得到相應(yīng)于式Ⅳ的酰胺，如果需要可分離所需的非對映體異構(gòu)體，和d)式Ⅴ化合物的制備方法，它包括將式ⅡⅣ的醇A”-(O-(CR5H)n)m-OH式 ⅡⅣ其中A”如上文式Ⅱ中A的定義，只是當A是氫時、A”是O-保護基團(例如形成易于斷裂的醚基，如，芐基)，其中R5、n和m如上述式Ⅱ中所定義，與二鹵代的烯烴(反式)，例如1,4-二溴丁-2-烯反應(yīng)，得到二取代的R1，鹵代-烯烴，例如R1-CH=CH-CH2-W(反式)，其中W為鹵素(例如溴)，然后與相應(yīng)于R2的羧酸反應(yīng)，例如，R2-CH2COOH，以得到酯，然后例如在有機堿(如二異丙氨基鋰)的存在下重排，給出如式Ⅴ化合物。
可選地，如果必要，上述方法中可以包括保護和脫保護步驟，以保持上述中間體和終產(chǎn)物的完整性。
本發(fā)明本身還包括如上文定義的式Ⅲ和Ⅳ的新型中間體。
如下文測試例所詳述，所述新型化合物是有效的TNFα釋放抑制劑，口服有活性，在其有效劑量范圍內(nèi)無細胞毒性。濃度在0.3-10nM范圍內(nèi)所述新型化合物還抑制膠原酶和基質(zhì)溶素。進一步實驗表明在大鼠LPS誘導(dǎo)TNFα釋放實驗中，當劑量小于10mg/kg時所述新型化合物有體內(nèi)口服活性，并且在此劑量表現(xiàn)出較好的耐受性。因此所述新型化合物具有如下藥學實用價值新型化合物可用于預(yù)防和治療由TNF，特別是TNFα介導(dǎo)的疾病或病理狀態(tài)，例如炎癥狀態(tài)、自身免疫性疾病、嚴重感染和器官或組織移植排斥反應(yīng)，例如處置受者的心臟、肺、心-肺聯(lián)合、肝、腎、胰、皮膚或角膜移植和抑制移植物抗宿主疾病，如在骨髓移植之后。
新型化合物尤其適用于治療、預(yù)防或改善自身免疫性疾病和炎癥狀況，尤其是包含自身免疫成分病因的炎癥狀況，如關(guān)節(jié)炎(例如風濕性關(guān)節(jié)炎、慢性進行性關(guān)節(jié)炎、變形性關(guān)節(jié)炎)和風濕病。所述新型化合物可能有效的特定自身免疫疾病包括自身免疫血液紊亂(包括如溶血性貧血、再生障礙性貧血、單純紅細胞貧血和特發(fā)性血小板減少癥)，系統(tǒng)性紅斑狼瘡、多軟骨炎、硬皮病、韋格納肉芽腫病、皮肌炎、慢性活動性肝炎、重癥肌無力、牛皮癬、史-約綜合癥、特發(fā)性腹瀉，自身免疫性腸炎(包括如潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩病)，內(nèi)分泌性眼病(endocrine ophthalmopathy)、格雷夫斯病、良性淋巴肉芽腫病、多發(fā)性硬化、原發(fā)性膽汁性肝硬化、幼年性糖尿病(Ⅰ型糖尿病)，色素層炎(前和后)，干燥性角膜結(jié)膜炎和春季干燥性角膜結(jié)膜炎、肺間質(zhì)纖維化、銀屑病關(guān)節(jié)炎和腎小球腎炎(有或無腎病綜合癥，如包括特發(fā)性腎病綜合癥或微小病變型腎病)。
本發(fā)明新型化合物還可用于治療、預(yù)防或改善哮喘、支氣管炎、肺塵癥、肺結(jié)核和其他氣道的梗阻性或炎癥病癥。
本發(fā)明新型化合物可用于處置不良的由TNF、尤其是TNFα介導(dǎo)的急性或超急性炎性反應(yīng)，例如，急性感染，例如敗血癥性休克(如內(nèi)毒素性休克和成人呼吸窘迫綜合癥)，腦膜炎，肺炎和嚴重燒傷；和用于治療惡病質(zhì)和與TNF病態(tài)釋放有關(guān)的消耗綜合癥，感染、癌癥或器官機能障礙的結(jié)果特別是與AIDS-相關(guān)的惡病質(zhì)，例如與HIV感染有關(guān)或HIV感染導(dǎo)致的惡病質(zhì)。
除通過抑制TNF轉(zhuǎn)換酶抑制TNF、特別是TNFα外，所述新型化合物還是基質(zhì)金屬蛋白酶如膠原酶、細胞溶素和白明蝕酶的抑制劑，因此可作為膠原酶或其他基質(zhì)金屬蛋白酶的抑制劑用于已知適應(yīng)征，如治療各種皮膚、骨和結(jié)締組織的病理狀況，如類風濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病、銀屑病關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)疏松、骨關(guān)節(jié)炎、牙周炎、齦炎和角膜潰瘍；治療心血管疾病，如動脈粥樣硬化、冠狀動脈血管成形術(shù)；用于抑制腫瘤細胞轉(zhuǎn)移和入侵和誘發(fā)腫瘤纖維化，例如用于癌癥的治療；和抑制神經(jīng)變性性紊亂，如阿爾茨海默氏癥。
當然，上述的適應(yīng)征中適當?shù)膭┝靠梢罁?jù)，如使用的特定新型化合物、治療對象、給藥方式和將治療的情況的本質(zhì)及嚴重程度，而變化。然而，就一般而言，由動物實驗得到滿意的日劑量為大約1至大約10mg/kg/天口服劑量。在較大的哺乳動物，如人，參考的日劑量是大約50至大約750mg新型化合物，口服一次或適當多次，劑量分為2-4次/天。
可以按任何傳統(tǒng)的途徑使用新型化合物，如口服，例如口服液、片劑或膠囊或經(jīng)腸道外，如注射液或懸浮液。通常優(yōu)選口服為系統(tǒng)的給藥方法，雖然對于某些適應(yīng)癥所述新型化合物也能以局部的或經(jīng)皮方式給藥，如透皮的軟膏或凝蝕等制劑，或能在眼部使用的軟膏、凝膠或滴眼液；或吸入劑，如治療哮喘?？诜倪m宜單位劑量形式包含，例如25-250mg新型化合物/單位劑量。
根據(jù)上文所述，本發(fā)明還提供進一步的一系列實施方案A．抑制可溶性TNF、特別是TNFα的生成或減少需要接受治療的受試者的炎癥(如哺乳動物，特別是人)的方法，此方法包括給予受試者有效劑量的新型化合物，或治療上述提及的任何狀況的方法，特別是治療炎癥或自身免疫性疾病或狀況的方法，如多發(fā)性硬化或類風濕性關(guān)節(jié)炎，或減輕上述的任何狀況的一個或多個癥狀的方法。B．新型化合物作為藥物的應(yīng)用，如作為免疫抑制劑或抗炎劑使用或用于預(yù)防、改善或治療上述的任何疾病或狀況，如自身免疫性或炎性疾病或狀況。C．藥物組合物，其包含新型化合物和藥學允許的稀釋劑或載體，如作為免疫抑制劑或抗炎劑使用或用于預(yù)防、改善或治療上述的任何疾病或狀況，如自身免疫性或炎性疾病或狀況。D．新型化合物在生產(chǎn)用于免疫抑制劑或抗炎劑或用于預(yù)防、改善或治療上述的任何疾病或狀況，如自身免疫性或炎性疾病或狀況的藥物中的應(yīng)用。
實施例1R-2-異-丁基-S-3-(2,5,8-三氧雜壬基)-琥珀酸-{1-[S-苯丙氨酸-1-甲基酰胺]-4-[N-羥基]}-二酰胺(式Ⅰ化合物，其中R1是2,5,8，-三氧雜壬基，R2是異丁基，R3是芐基，R4是甲基)a．反式-1,4-二溴-2-丁烯(CAS Reg.821-06-7)(50.00g)，二甘醇單甲醚(CAS Reg.111-77-3)(30.89g)，四丁基銨硫酸氫鹽(7.94g)(CAS Reg.32503-27-8)和50％氫氧化鈉水溶液(113.70ml)于二氯甲烷(200ml)中的溶液在室溫(r.t.)下攪拌16h。反應(yīng)混合物用水和醚稀釋，分離有機相，產(chǎn)物烯用色譜純化。b．步驟a中的反式-烯產(chǎn)物和DBU(1,8-二氮雜二環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯，CAS Reg.6674-22-2)(17.6ml)于二氯甲烷(200ml)中的溶液用異己酸(12.44g)處理。1小時后，加入無水碳酸鈉(18g)?；旌衔锓胖眠^夜。分離有機相，產(chǎn)物酯通過色譜純化。c．LDA(二異丙氨基鋰)四氫呋喃(400ml)溶液由二異丙基胺(22.65ml)和丁基鋰(1.6N)(99.89ml)在己烷中在-70℃制備。在相同溫度下加入在四氫呋喃(100ml)中的步驟b的產(chǎn)物(43.90g)溶液。30min后，加入三甲基氯硅烷(20.22ml)。溫度首先升至室溫然后回流過夜。混合物用乙醚稀釋。從有機相中去除非酸性產(chǎn)物以得到35.12g粗品酸，然后經(jīng)色譜純化得到30.70g純凈羧酸產(chǎn)物。d．步驟c的產(chǎn)物(10.50g),(L)L-苯丙氨酸-1-甲基酰胺(8.60g)(如優(yōu)選由市售的N-芐氧羰基(L)苯丙氨酸和甲胺在標準條件下反應(yīng)以制備甲基酰胺，接著在鈀存在下氫化以對氨基脫保護)和4-二甲氨基吡啶(4.89g)于二氯甲烷(120ml)中的溶液用EDCI(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽，CAS Reg.25952-53-8)(7.68g)和三乙胺(7.61ml)處理并保持過夜。加入乙醚，干燥和蒸發(fā)有機相。粗品(兩種異構(gòu)體的混合物)利用它們的相對極性用硅膠色譜法分離異構(gòu)體。e．步驟d的極性小的產(chǎn)物(5.30g)于四氯化碳(150ml)、乙腈(150ml)和水(20ml)中的溶液在劇烈攪拌下，用氯化釕(Ⅲ)水合物(0.49g)和過氧化氫合尿素鈉(sodium perhydrate)(15.16g)處理。2小時后加入乙醚并將pH調(diào)節(jié)到4。分離、干燥和蒸發(fā)有機相。用硅膠色譜純化殘留物以得到純酸。f．步驟e的產(chǎn)物(5g)，羥基芐基三唑(2.00g)和EDCI(2.51g)于DMF(N,N-二甲基甲酰胺)(20mD中的溶液在室溫下保持2.5h。然后加入鹽酸羥胺(1.90g)和N-甲基嗎啉(4.61ml)，混合物放置過夜。高真空50℃條件下蒸發(fā)溶劑。用RP18-硅膠柱通過HPLC純化殘余物以得到純異羥肟酸，產(chǎn)物為白色結(jié)晶性粉末。熔點195-197℃；旋光度[α]D20=-8.5°c=0.175甲醇溶液實施例2-17表Ⅰ中相應(yīng)于實施例2-17的化合物按照類似實施例1的方法制備。按照實施例1中步驟d所述方法，使實施例1中步驟c的產(chǎn)物與合適的氨基酸酰胺衍生物反應(yīng)。依照實施例1中步驟e和f的操作得到純異羥肟酸。實施例18-32用環(huán)己二醇替代二甘醇單甲醚，按照實施例1步驟a與反式-1,4-二溴-2-丁烯反應(yīng)。隨后的操作過程如實施例1中步驟b-f所述，可以得到表Ⅰ中實施例18-32的純異羥肟酸。實施例33-34用單芐基乙二醇或(2-芐基)乙二醇單芐基醚替代按照實施例1步驟a乙二醇單甲醚與反式-1,4-二溴-2-丁烯反應(yīng)。隨后的操作過程如實施例1中步驟b-f所述，以得到在R1有芐基保護的羥基的式Ⅰ的異羥肟酸。在有催化量的附著在硫酸鋇上的鈀的存在下氫化脫去芐基，由此在RP18-硅膠柱上經(jīng)HPLC純化后得到相應(yīng)的式Ⅰ的純化合物(見表Ⅰ)。實施例35-59用芐醇代替二甘醇單甲醚按實施例1步驟a與反式-1,4-二溴-2-丁烯反應(yīng)。接著進行如例1步驟b-f同樣的操作，并對起始原料進行合適的調(diào)整，定量等，以得到在R1具有芐氧甲基的式Ⅰ的羥肟酸。在催化量的附著在硫酸鋇上的鈀的存在下進行氫化，脫去芐基，在RP18硅膠上經(jīng)HPLC純化，得到表1中的實施例35-59純產(chǎn)物。
表1
表1的注釋Z=芐氧羰基c-hexyl=環(huán)己基1除非另外注明2所有結(jié)構(gòu)具有式Ⅰa的立體化學2式Ⅰa和式Ⅰb的1/1非對映異構(gòu)體混合物所有化合物均經(jīng)質(zhì)譜和質(zhì)子-NMR確認。表2總結(jié)了實施例1-59化合物的分析數(shù)據(jù)。
表Ⅱ
表2
表2的注釋ms=質(zhì)譜[M-H]*=[M-H]+，除非另外注明r.t.=在C18柱上的HPLC保留時間(分)A=溶劑A％,A乙腈(100％)B=溶劑B％,B水(88％)+乙腈(9.8％)+10％氫氧化四甲銨水溶液(2％)+85％磷酸水溶液(0.2％)m.p.=熔點，℃[α]D20=20℃下于甲醇中的旋光度測試實施例1抑制TNF釋放作用依照Hansell等的實驗方法(免疫學方法雜志(J.Imm.Methods),1991,145:105)取健康志愿者外周血用ficoll-泛影葡胺密度分離單核細胞，它在RPMI1640加10％FCS中的濃度為105細胞/孔。細胞與系列稀釋的受試化合物在37℃溫孵30min后加入IFNγ(100U/ml)和LPS(5μg/ml)，隨后繼續(xù)溫孵3h。在1400RPM條件下離心10min以中止溫孵反應(yīng)。用商業(yè)ELISA試劑盒(Innotest hTNFα，購自Innogenetics N.V.,Zwijnaarde,Belgium)測定上清液中的TNFα。新型化合物的受試濃度為0-10μM。在此測試中，式Ⅰ，特別是式Ⅰa的示例化合物，抑制TNF釋放的IC50是大約50nM至大約5μM。測試實施例2細胞毒性THP1細胞(5×104/孔)與IFNγ(100U/ml)和LPS(5μg/ml)以及有或無受試化合物在37℃共孵24h測定細胞毒性?；罴毎退兰毎陌俜致视帽壬ㄗx出并計算(MTT)，此法是測定活細胞線粒體脫氫酶，按照Mosman所述，免疫學方法雜志(J.Imm.Methods)(1983)65:55。受試化合物在濃度為10μM條件下顯示低于50％細胞毒性，說明新型化合物在足夠抑制TNF的濃度下無細胞毒性。測試實施例3膠原酶抑制作用按照Stein和Izquierdo-Martin所述，生物化學和生物物理進展(Arch.Biochem.Biophys.),308(1994)第274-277頁，用活性膠原酶和巰基肽MMP-底物測定膠原酶抑制作用。在加入于2-嗎啉代乙烷磺酸緩沖液中的底物和10mM CaCl2之前，受試化合物在pH6.5和25℃條件下與膠原酶共孵。在405nm下在40分鐘時間內(nèi)每固定時間間隔測定吸收度。以對照組以及有或無受試化合物存在下的膠原酶活性代表受試化合物的抑制活性。在低的nM濃度下如低于10nM，受試化合物顯示了顯著的劑量依賴膠原酶抑制作用。測試實施例4口服生物利用度前述實例的分析是通過測定各種已知濃度的特定受試化合物的活性來標準化和通常是測定口服后受試化合物的血漿藥物濃度。清醒大鼠的受試化合物口服劑量為10mg/kg?？诜?0,60,120和240min尾端取血液標本。用三氯乙酸提取血漿。用上述膠原酶抑制活性分析實驗檢驗提取物以估計血漿藥物濃度。新型化合物顯示良好的生物利用度，30分鐘后血漿濃度為300-5000nM,240分鐘后為50-500nM。由此，在可控制的口服劑量下如10mg/kg下，很容易獲得有效的血漿藥物濃度(如測度例1和3中所示)。此外，所得到的血漿水平遠低于細胞毒素水平，在此劑量下大鼠沒有表現(xiàn)出任何副作用。
權(quán)利要求
1．游離形式或藥學允許的鹽形式的3-亞氨基-4-氧代-6-(氧甲基)-庚烷-1,7-二酸(7-N-羥基)二酰胺。
2．游離形式或藥學允許的鹽形式的3-亞氨基-4-氧代-5-芳基-6-(氧甲基)-庚烷-1,7-二酸(7-N-羥基)二酰胺。
3．根據(jù)權(quán)利要求1的式Ⅰ化合物，包括其游離形式或藥學允許的鹽形式
其中R1為式Ⅱ的取代基A-(O-(CR5H)n)m-O-CH2- 式Ⅱ其中n是1,2,3或4；m是0,1,2或3；各R5獨立地是H,C1-10(可任選被羥基、C1-6烷氧基、氨基、C1-6烷基氨基、巰基、C1-6烷基巰基或受保護的羥基、氨基或巰基取代的)烷基，C2-6鏈烯基，C6-14(可任選被羥基、C1-6烷氧基、氨基、C1-6烷基氨基、鹵素或氰基取代的)芳基，或C6-14(芳基)C1-6烷基；A是氫，C1-10烷基，C6-14芳基，C6-14芳基(C1-6烷基)，(C6-14芳基)羰基，或(C1-10烷基)羰基；R2是C3-12烷基，C3-12鏈烯基，C3-7(可任選被羥基、C1-6烷氧基，氨基，或C1-6烷基氨基取代的)環(huán)烷基，C5-14芳基，或C5-14芳基(C1-6烷基)，此處芳基基團可任意地被羥基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、氨基、鹵素或氰基取代；R3是C1-10(可任選被羥基或C1-6烷氧基氨基、C1-6烷基氨基、巰基、C1-6烷基巰基或受保護的羥基、氨基或巰基取代的)烷基，C6-14(可任選被羥基、C6-14芳氧基或C1-6烷氧基、氨基、C1-6烷基氨基、鹵素、或氰基取代的)芳基，或吲哚甲基；R4是甲基、吡啶基、或如式X-Y-的取代基，其中X是嗎啉代、吡啶基或芳基，Y是C1-12亞烷基，其中至多4個亞甲基單元可任選地被-CO-,-NH-,-SO2-或-O-替換。
4．根據(jù)權(quán)利要求3的化合物，其中R1是式Ⅱ’的取代基A-(O-(CH2)n)m-O-CH2- 式Ⅱ’其中A,n和m如權(quán)利要求3中所定義。
5．根據(jù)權(quán)利要求3的化合物，其中R1是式Ⅱ”的取代基A-O-CHR5-(O-(CH2)n)m’-O-CH2- 式Ⅱ”其中A,n和R5如權(quán)利要求3中所定義，m’為0,1或2。
6．根據(jù)權(quán)利要求3,4或5的化合物，條件是當式Ⅱ中m是0時，式Ⅰ中R4是式X-Y-的取代基。
7．根據(jù)權(quán)利要求3的式Ⅰ化合物，其中分別地式Ⅱ中的n是3或4；或式Ⅱ中的R5不是H；或R2是C7-12烷基，C3-12鏈烯基，C3-7(可任選地被羥基、C1-6烷氧基、氨基、或C1-6烷基氨基取代的)環(huán)烷基，C5-14芳基，或C5-14芳基(C1-6烷基)，其中芳基基團可任選地被羥基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、氨基、鹵素或氰基取代；或R3是C1-10(氨基、C1-6烷基氨基、巰基、C1-6烷基巰基或保護的羥基、氨基或巰基取代的)烷基，C6-14(氨基、C1-6烷基氨基、鹵素或氰基取代的)芳基；或包含一個或多個雜原子，例如N,O或S的任何雜芳基。
8．根據(jù)權(quán)利要求3的式Ⅰ’化合物，包括其游離形式或藥學允許的鹽形式
其中R1’是式Ⅱ”’的取代基A’-(O-(CH2)n’)m’-O-CH2- 式Ⅱ其中n’是整數(shù)1或2，優(yōu)選2；m’是整數(shù)0,1,2或3；A’是氫、C6-14芳基、C1-10烷基、(C6-14芳基)羰基或(C1-10烷基)羰基；R2’是C2-6烷基；R3’是C1-10(可任選地被羥基或C1-6烷氧基取代的)烷基，C6-14(可任選地被羥基、C6-14芳氧基或C1-6烷氧基取代的)芳基，或吲哚甲基；R4’是甲基、吡啶基或如式X-Y-的取代基，其中X是嗎啉代、吡啶基或芳基，Y是C1-12亞烷基，其中至多4個亞甲基(-CH2-)單元可任選地被-CO-,-NH-,-SO2-或-O-替換。
9．根據(jù)權(quán)利要求3-7中任意一項的化合物，其中(ⅰ)R1是式Ⅱ’或Ⅱ”的取代基，式Ⅱ中的A是氫、C1-6烷基或(C6-14芳基)羰基；(ⅱ)式Ⅰ的R2是環(huán)己基、苯基、4-甲基苯基、4-甲氧基苯基或異丁基；(ⅲ)式Ⅰ的R3是芐基或叔丁基；和(ⅳ)式Ⅰ的R4是甲基或嗎啉代羰基(C1-6)烷基。
10．根據(jù)權(quán)利要求1-9中任意一項的化合物，其構(gòu)型如式Ⅰa所示
式Ⅰa
11．根據(jù)權(quán)利要求1-10中任一項并選自實施例1-59的化合物。
12．根據(jù)權(quán)利要求1-11中任一項的化合物作為藥物的用途。
13．治療炎癥或自身免疫性疾病或狀態(tài)的方法，它包括給予需要這種治療的對象以治療有效劑量的根據(jù)權(quán)利要求1-11中任何一項的化合物。
14．含有根據(jù)權(quán)利要求1-11中任一項的化合物的藥物組合物。
15．根據(jù)權(quán)利要求1-11中任一項的化合物在制備用于治療炎癥或自身免疫性疾病或狀態(tài)的藥物上的用途。
16．式Ⅲ的化合物
其中R1、R2、R3和R4如權(quán)利要求3中所定義。
17．式Ⅳ的化合物
其中R1、R2、R3和R4如權(quán)利要求3中所定義。
18．根據(jù)權(quán)利要求1-11中任何一項的化合物的制備方法，它包括使根據(jù)權(quán)利要求16的式Ⅲ化合物與羥胺反應(yīng)(可選擇以鹽或O-保護形式的羥胺)以及，如果需要的話，對所得到的產(chǎn)物脫保護。
全文摘要
如式Ⅰ的新型羥肟酸化合物,其中R
文檔編號C07C259/06GK1232447SQ97198511
公開日1999年10月20日 申請日期1997年9月30日 優(yōu)先權(quán)日1996年10月2日
發(fā)明者G·科提爾施, U尼尤曼 申請人:諾瓦提斯公司