專利名稱：膦酸酯－核苷酸化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新型膦酸酯-核苷酸化合物，尤其涉及具有抗病毒活性的、用作醫(yī)藥的膦酸酯-核苷酸化合物、其鹽類、水合物或其溶劑合物。
背景技術(shù)：
感染性病毒疾病在醫(yī)學(xué)上被認(rèn)為是重要問題，為了治療這類疾病，要開發(fā)具有抗病毒活性但對(duì)正常細(xì)胞系的生長(zhǎng)無(wú)抑制作用的藥物。例如，膦酸酯-核苷酸類是現(xiàn)今進(jìn)行活躍研究的選擇性抗病毒藥物。具體的有，9-(2-膦酰甲氧基)乙基腺嘌呤(PMEA)、9-(2-膦酰甲氧基)乙基-2,6-二氨基嘌呤(PMDAP)等報(bào)導(dǎo)對(duì)單純型皰疹1型和2型(HSV-1和HSV-2)、人免疫缺陷病毒(HIV)、人乙型肝炎病毒(HBV)是有效的(橫田等Antimicrob.AgentsChemother.,35,394(1991)；Votruba et al.,Mol.Pharmacol.,32,524(1987))。
然而，這些已知的膦酸酯-核苷酸可顯示出以機(jī)體骨髓細(xì)胞生長(zhǎng)受到抑制為代表的毒性和誘變作用，因而有安全性問題(AntiviralResearch,16,77(1991))，而且這類化合物口服不能吸收(De Clercqet al.,Antimicrob.Agents Chemother.,33,185(1989))，為發(fā)揮藥效而達(dá)到必要的血藥濃度，只限于靜脈和肌肉注射等非經(jīng)口給藥。非經(jīng)口給藥對(duì)于非住院患者的治療是困難的，這對(duì)于需長(zhǎng)期治療的艾滋病或乙型肝炎病毒疾病不是個(gè)好方法。
另一方面，本發(fā)明者在以前發(fā)現(xiàn)膦酸酯-核苷酸特定的酯顯示有很高的口服吸收性能(EP 632048號(hào))，但尚未實(shí)用化。
發(fā)明的公開本發(fā)明所提供的新型化合物顯示出高的抗病毒活性，且與以前提出的化合物相比，對(duì)機(jī)體有良好的安全性，同時(shí)，具有很高的口服吸收性。
本
發(fā)明內(nèi)容
是關(guān)于下面通式(Ⅰ)所示的膦酸酯核苷酸化合物、其鹽、水合物以及溶劑合物，和含這種化合物的藥物組合物及抗病毒藥。
通式Ⅰ中，R1為C1-C6烷基或C7-C10芳烷基；R2和R3各自獨(dú)立代表氫原子(但R2及R3不能同時(shí)是氫)，C1-C22烷基，酰氧甲基，酰硫乙基，或由一個(gè)或一個(gè)以上的鹵原子取代的乙基；R4為氫原子，C1-C4烷基，C1-C4羥烷基，或一個(gè)或一個(gè)以上的鹵原子取代的C1-C4烷基；X為碳或氮原子。
本發(fā)明的最佳方案于上面通式(Ⅰ)所示的膦酸酯核苷酸衍生物中，R1代表的C1C6烷基中，例如有甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、正己基等。
R1代表的C7-C10芳烷基中，例如有芐基、苯乙基、苯丙基、苯丁基等。
本發(fā)明中R1優(yōu)選的基團(tuán)為C1-C6烷基或芐基，更優(yōu)選的化合物R1為C1-C6烷基。
R2和R3代表的C1-C22烷基，例如有甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基、十五烷基、十六烷基、十七烷基、十八烷基、十九烷基、二十烷基、二十一烷基、二十二烷基，等等。
R2和R3為酰氧甲基時(shí)，例如有乙酰氧甲基、丙酰氧甲基、丁酰氧甲基、異丁酰氧甲基、戊酰氧甲基、異戊酰氧甲基、新戊酰氧甲基等。
R2和R3為酰硫乙基時(shí)，例如有乙酰硫乙基、丙酰硫乙基、丁酰硫乙基、異丁酰硫乙基、戊酰硫乙基、異戊酰硫乙基、新戊酰硫乙基等。
R2和R3為1個(gè)或1個(gè)以上的鹵原子取代的乙基時(shí)，鹵素可為氟、氯、溴、碘原子。1個(gè)或1個(gè)以上的鹵原子取代的乙基有1-氟乙基、2-氟乙基、1-氯乙基、2-氯乙基、2-溴乙基、2,2-二氟乙基、2,2-二氯乙基、2,2-二溴乙基、2,2,2-三氟乙基、2,2,2-三氯乙基、2,2,2-三溴乙基等，優(yōu)選的取代位置是在乙基的2-位，優(yōu)選的鹵原子為氟原子。
R2和R3優(yōu)選為至少一個(gè)是由一個(gè)或一個(gè)以上的鹵原子取代的乙基，尤其優(yōu)選為2,2,2-三氟乙基。
R4為C1-C4烷基中，例如為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基等。
R4為C1-C4羥烷基中，例如為羥甲基、1-羥乙基、2-羥乙基、1-羥丙基、2-羥丙基、3-羥丙基、1-羥丁基、2-羥丁基、3羥丁基、4-羥丁基等。
R4為由一個(gè)或一個(gè)以上鹵原子取代的C1-C4烷基中，例如鹵原子為氟、氯等原子，C1-C4烷基為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基等。由一個(gè)或一個(gè)以上鹵原子取代的C1-C4烷基有氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氟乙基、氯乙基、氟丙基、氯丙基、氟丁基、氯丁基等。
本發(fā)明中優(yōu)選R4為氫原子的化合物。
本發(fā)明中優(yōu)選X為碳原子的化合物。
上述通式(Ⅰ)所示的本發(fā)明膦酸酯核苷酸化合物可以形成藥用鹽。例如當(dāng)有酸性基團(tuán)存在時(shí)，這種鹽的具體實(shí)例有鋰鹽、鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽、鈣鹽等金屬鹽，銨鹽、甲胺鹽、二甲胺鹽、三甲胺鹽、二環(huán)己胺鹽等胺鹽；當(dāng)有堿性基團(tuán)存在時(shí)，可形成鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、磷酸鹽等無(wú)機(jī)酸鹽，或形成例如甲磺酸鹽、苯磺酸鹽、對(duì)甲苯磺酸鹽、乙酸鹽、丙酸鹽、酒石酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、蘋果酸鹽、草酸鹽、琥珀酸鹽、檸檬酸鹽、苯甲酸鹽、杏仁酸鹽、桂皮酸鹽、乳酸鹽等有機(jī)酸鹽。
上述通式(Ⅰ)表示的本發(fā)明的膦酸酯核苷酸化合物或其鹽，可以以水合物或溶劑合物形式存在，本發(fā)明也包括了這些水合物和溶劑合物。形成溶劑合物的溶劑例如有甲醇，乙醇，異丙醇，丙酮，乙酸乙酯，二氯甲烷等。
本發(fā)明化合物的具體實(shí)例列于表1中。表中Me代表甲基，Et為乙基，n-Pr為正丙基，i-Pr為異丙基，n-Bu為正丁基，i-Bu為異丁基，s-Bu為仲丁基，t-Bu為叔丁基，n-Pen為正戊基，n-Hex為正己基，等等。
化合物2-氨基-9-[2-(膦酰甲氧基)乙基]-6-烷硫基嘌呤，其為膦酸根部分可離解的本發(fā)明化合物的類似物，已由美國(guó)健康與人類服務(wù)部申請(qǐng)為專利(US-7683432)。但該專利中未記載抗病毒作用的具體數(shù)據(jù)，而且也沒有該化合物的合成實(shí)施例及物理常數(shù)。如同后面試驗(yàn)例2所述，本發(fā)明化合物與上述的化合物比較，具有優(yōu)異的經(jīng)口吸收性和在肝臟中特異地聚集的特點(diǎn)。
表-1
表-1(續(xù))
<p>表-1(續(xù)
<p>表-1(續(xù))
<p>表-1(續(xù))
表-1(續(xù))<
<p>表-1(續(xù))
表-1(續(xù))
<p>表-1(續(xù))
<p>表-1(續(xù))<
<p>表-1(續(xù))
<p>表-1(續(xù))
<p>表-1(續(xù))<
>
表-1(續(xù))
表-1(續(xù))
<p>表-1(續(xù))
<p>表-1(續(xù))<
<p>表-1(續(xù))
表-1(續(xù))
<p>表-1(續(xù))
<p>表-1(續(xù))
表-1(續(xù))
表-1(續(xù))
表-1(續(xù))
表-1(續(xù))
表-1(續(xù))
表-1(續(xù))
表-1(續(xù))
表-1(續(xù))
表-1(續(xù))
表-1(續(xù))
表-1(續(xù))
表-1(續(xù))
表-1(續(xù))
表-1(續(xù))
本發(fā)明化合物的制法中，通式(Ⅰ)化合物的R2和R3為C1-C22烷基或由1個(gè)或1個(gè)以上鹵原子取代的乙基，且R2=R3的化合物，例如可由下記的路線(1)或(2)加以合成。
反應(yīng)路線(1)
(式中R1,R4及X的定義同前所述，R5為C1-C22烷基或是由1個(gè)或1個(gè)以上的鹵素取代的乙基，W為鹵原子、對(duì)甲苯磺酰氧基、甲磺酰氧基或三氟甲磺酰氧基等離去基團(tuán))。
首先，上述通式(Ⅱ)的化合物與通式(Ⅲ)化合物于10～250℃、優(yōu)選為130～180℃溫度下，反應(yīng)0.1～20小時(shí)，優(yōu)選反應(yīng)3～6小時(shí)。
反應(yīng)得到的通式(Ⅳ)化合物必要時(shí)可用通常的分離純化手段例如蒸餾，吸附或分配色譜等分離純化之。通式(Ⅳ)化合物按照上述分離純化后或不必純化直接進(jìn)行下步反應(yīng)。
繼之，通式(Ⅳ)化合物與通式(Ⅴ)化合物，在堿的存在下，例如碳酸鈉，碳酸鉀，碳酸銫，氫化鈉，氫化鉀，三乙胺，二氮雜雙環(huán)十一碳烯等，于適當(dāng)?shù)娜軇┤缫译?，四氫呋喃，二甲基亞砜，二甲基甲酰胺，甲基吡咯烷酮中，?0～200℃，優(yōu)選為50～150℃溫度下反應(yīng)0.1～100小時(shí)，優(yōu)選為5～20小時(shí)，得到通式(Ⅰ′)化合物。通式(Ⅰ′)化合物為通式(Ⅰ)中R2與R3為C1-C22烷基或是由一個(gè)或一個(gè)以上鹵原子取代的乙基，且R2=R3的化合物。
這里，作為反應(yīng)路線(1)的原料的上述通式(Ⅱ)、(Ⅲ)和(Ⅳ)化合物的來源并沒有限定，它們可以作為試劑買到，也可用已知方法加以合成。上述通式(Ⅴ)化合物可由下述的通式(Ⅵ)化合物與通式(Ⅷ)化合物或其鹽在乙腈、二甲基亞砜等適當(dāng)溶劑中于50～100℃溫度范圍內(nèi)加熱生成。
上述的通式(Ⅰ′)化合物也可由下述方法制備。反應(yīng)路線(2)
式中R1,R4,R5,X和W的定義同前所述。
由反應(yīng)路線(1)得到的通式(Ⅳ)化合物與通式(Ⅵ)化合物在乙腈、四氫呋喃、二甲基亞砜、二甲基甲酰胺、甲基吡咯烷酮等適當(dāng)?shù)娜軇┲?，在堿的存在下，例如碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸銫、氫化鈉、氫化鉀、三乙胺、二氮雜雙環(huán)十一碳烯等，于10～200℃，優(yōu)選為50～150℃溫度下，加熱0.1～100小時(shí)，優(yōu)選為5～20小時(shí)，得到上述的通式(Ⅶ)化合物。然后將通式(Ⅶ)化合物與通式(Ⅷ)表示的硫醇或其鹽(例如鈉鹽、鉀鹽、鋰鹽、三乙胺鹽等)，置于適當(dāng)?shù)娜軇┲欣缫译妗⑺臍溥秽?、二甲基亞砜、二甲基甲酰胺、甲基吡咯烷酮等，如果必要，在適當(dāng)?shù)娜?jí)胺存在下，于10～200℃，優(yōu)選為70～120℃，反應(yīng)0.1～100小時(shí)，優(yōu)選為5～12小時(shí)，得到上述的通式(Ⅰ′)化合物。
這里，作為反應(yīng)路線(2)的原料的上述通式(Ⅵ)的化合物，其來源并沒有限定，它們可以作為試劑買到，或者用已知的方法加以合成。
上述通式(Ⅰ′)化合物也可用下述方法制備。反應(yīng)路線(3)
式中R1、R4、R5、X及W的定義同前，Y為氯、溴、碘等鹵原子，或甲磺酰氧基或?qū)妆交酋Ｑ趸?br>
反應(yīng)路線(1)得到的上述通式(Ⅳ)化合物和通式(Ⅸ)化合物在適當(dāng)?shù)娜軇┤缫译?、四氫呋喃、二甲基亞砜、二甲基甲酰胺、甲基吡咯烷酮等中，在堿的存在下，例如碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸銫、氫化鈉、氫化鉀、三乙胺、二氮雜雙環(huán)十一碳烯等，于10～200℃，優(yōu)選為50～150℃、反應(yīng)時(shí)間0.1～100小時(shí)，優(yōu)選為5～20小時(shí)，得到上述通式(Ⅹ)化合物。然后，上述通式(Ⅹ)化合物與上述通式(Ⅺ)所示的鹵代烷、甲磺酰烷酯或?qū)妆交撬嵬轷?，于堿的存在下如碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸銫、氫化鈉、氫化鉀、三乙胺、二氮雜雙環(huán)十一碳烯等，于適當(dāng)?shù)娜軇┤缫译?、四氫呋喃、二甲基亞砜、二甲基甲酰胺、甲基吡咯烷酮等中，?0～200℃，優(yōu)選為50～150℃，反應(yīng)0.1～100小時(shí)，優(yōu)選為1～20小時(shí)，得到上述通式(Ⅰ′)化合物。
此外，上述通式(Ⅹ)化合物也可由下述方法制備。
式中R4、R5及X的定義同前。
反應(yīng)路線(2)得到的通式(Ⅶ)化合物在硫脲等的存在下，于適當(dāng)?shù)娜軇┤缫译?、四氫呋喃、二甲基亞砜、二甲基甲酰胺、甲基吡咯烷酮、乙醇、甲醇?,2,2-三氟乙醇等中，于10～200℃，優(yōu)選為50～150℃，反應(yīng)0.1～100小時(shí)，優(yōu)選為0.25～4小時(shí)，得到上述通式(Ⅹ)化合物。
這里，作為反應(yīng)路線(3)的原料的通式(Ⅸ)化合物的來源無(wú)特殊限定，可作為試劑買到，或用已知方法加以合成。
將通式(Ⅰ′)化合物進(jìn)一步反應(yīng)，可得到具有R5為通式(Ⅰ′)以外取代基的通式(Ⅰ)化合物。
通式(Ⅰ)化合物中R3為氫、C1-C22烷基、酰硫乙基、或由一個(gè)或一個(gè)以上的鹵原子取代的乙基，R2為C1-C4烷基，或由一個(gè)或一個(gè)以上鹵原子取代的乙基的化合物是這樣制備的將上述通式(Ⅰ′)化合物與下述通式(Ⅻ)表示的化合物R6OH(Ⅻ)(R6為氫原子、C1-C4烷基、酰硫乙基或由一個(gè)或一個(gè)以上的鹵原子取代的乙基)，在無(wú)溶劑或有適當(dāng)?shù)娜軇┤绾鹊娜軇┒燃淄?、吡啶、乙腈、四氫呋喃、二甲基亞砜、二甲基甲酰胺、甲基吡咯烷酮等溶劑中，如果必要，在?duì)甲苯磺酸、甲磺酸、鹽酸、磷酸等酸的存在下，于10～100℃，優(yōu)選為20～30℃范圍內(nèi)反應(yīng)0.1～100小時(shí)，優(yōu)選為5～12小時(shí)。
式中R1,R4,R5,R6和X的定義同前。
通式(Ⅰ)中R2和R3各自獨(dú)立為C1-C22烷基、酰硫乙基或由1個(gè)或1個(gè)以上鹵原子取代的乙基的化合物由下述方法制備
式中R1,R4和X的定義同前，R7或R8各自獨(dú)立為氫原子，C1-C22烷基，酰硫乙基或由1個(gè)或1個(gè)以上鹵原子取代的乙基。
首先，將(Ⅰ′)水解得到的通式(Ⅰ_)化合物與三甲硅烷基二乙胺溶解于適當(dāng)溶劑中，例如二氯甲烷，二氯乙烷，氯仿等含氯溶劑中，于室溫下反應(yīng)1小時(shí)左右。此時(shí)所用的三甲硅烷基二乙胺用量與通式(Ⅰ_)化合物的摩爾比為2(或更多)∶1。
然后將反應(yīng)液濃縮至干，將殘留物溶于適當(dāng)溶劑，例如二氯甲烷等含氯溶劑，加入相當(dāng)于通式(Ⅰ_)化合物2倍摩爾量或更多的草酰氯，在催化量的二甲基甲酰胺存在和冰冷下反應(yīng)1小時(shí)，再于室溫下反應(yīng)1小時(shí)。
這樣得到的通式(ⅩⅢ)化合物蒸去溶劑后，不必精制，于適當(dāng)溶劑例如二氯甲烷等含氯溶劑、吡啶、乙腈、四氫呋喃、二甲基亞砜、二甲基甲酰胺、甲基吡咯烷酮等中，與通式(ⅩⅣ)化合物和/或通式(ⅩⅤ)化合物于10～100℃，優(yōu)選為20～30℃，溫度范圍內(nèi)反應(yīng)0.1～100小時(shí)優(yōu)選為5～12小時(shí)，得到通式(ⅩⅥ)化合物，它是通式(Ⅰ)化合物中R2和R3各自獨(dú)立為氫、C1-C22烷基、酰硫乙基或由一個(gè)或一個(gè)以上鹵原子取代的乙基所代表的化合物。
此外，作為上述反應(yīng)原料的通式(Ⅰ_)化合物雖可由通式(Ⅰ′)化合物經(jīng)水解得到，但更可高效率地由通式(Ⅳ)中R5為C1-C4烷基的化合物得到通式(Ⅰ′)化合物，然后，與三乙基碘硅烷或三甲基溴硅烷等反應(yīng)而得到。
通式(Ⅰ)化合物的R2和R3均為酰氧甲基的化合物，或者一個(gè)是酰氧甲基，另一個(gè)是氫原子的化合物其制法是將上述通式(Ⅰ_)化合物與通式(ⅩⅦ)表示的酰氧甲基鹵，R9Y(ⅩⅦ)(R9為酰氧甲基，Y為氯、溴、碘等鹵原子)，于適當(dāng)溶劑如乙腈、四氫呋喃、二甲基亞砜、二甲基甲酰胺、甲基吡咯烷酮等中，在堿的存在下，例如碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸銫、氫化鈉、氫化鉀、三乙胺、吡啶、二氮雜雙環(huán)十一碳烯、N,N′-二氯己基4-嗎啉羧基脒等，于0～200℃，優(yōu)選為10～100℃，反應(yīng)1～300小時(shí)，優(yōu)選為10～200小時(shí)。
R2和R3均為酰氧甲基時(shí)，通式(Ⅰ_)化合物對(duì)通式(ⅩⅦ)化合物的摩爾比為2∶1，或者若一個(gè)基團(tuán)是酰氧甲基時(shí)，可用等摩爾量。
此外，當(dāng)R2和R3之一是酰氧甲基，另一個(gè)是C1-C22烷基、酰硫乙基或由1個(gè)或一個(gè)以上鹵原子取代的乙基時(shí)，其制法是首先制備化合物(Ⅰ″)，其中R2和R3之一是C1-C22烷基，酰硫乙基，或由一個(gè)或一個(gè)以上的鹵原子取代的乙基，另一個(gè)是氫原子(但R6為氫原子)，然后按照上述的方法使所得化合物與通式(ⅩⅦ)化合物反應(yīng)。
得到的通式(Ⅰ)化合物，必要時(shí)用通常核苷酸分離純化的手段，例如重結(jié)晶、吸附、離子交換或分配色譜等選擇適宜方法自反應(yīng)液中分離純化之。
如同下面試驗(yàn)例所述，本發(fā)明化合物可以作為抗病毒藥物，并且也有其它離解性膦酸酯核苷酸類似物所呈現(xiàn)的抗腫瘤活性。作為靶點(diǎn)的病毒類型無(wú)特殊的限定，被處理病毒的具體實(shí)例包括人免疫缺陷病毒，流感病毒，丙肝病毒等和RNA病毒如單純皰疹病毒Ⅰ,Ⅱ型，巨細(xì)胞病毒，水痘帶狀皰疹病毒，乙肝病毒等，優(yōu)選是對(duì)乙肝病毒。
本發(fā)明化合物作為醫(yī)藥品可以單獨(dú)應(yīng)用，或與藥用載體組成藥物組合物而應(yīng)用。其組成取決于化合物的溶解度、化學(xué)性質(zhì)、給藥途徑、劑量方式等。例如口服劑型有顆粒劑、微粉劑、散劑、片劑、濃糖漿劑、軟膠囊劑、糖錠劑、糖漿劑、乳劑、軟明膠膠囊劑、凝膠劑、糊劑、懸濁劑、脂質(zhì)體等；作為注射劑可以靜脈注射，肌肉注射或皮下注射，也可用粉針劑，用時(shí)配制成注射液。
藥用載體用于經(jīng)口、經(jīng)腸、非經(jīng)腸或局部用藥時(shí)，可用有機(jī)或無(wú)機(jī)固體或液體載體。制備固體劑型所用的固體載體例如有乳糖、蔗糖、淀粉、滑石粉、纖維素、糊精、高嶺土、碳酸鈣、瓊脂、果膠、硬脂酸、硬脂酸鎂、卵磷脂、氯化鈉等?？诜靡后w劑型所用的液體載體例如有甘油、花生油、聚乙烯吡咯烷酮、橄欖油、乙醇、苯甲醇、丙二醇、生理鹽水、水等。在制備制劑時(shí)除上述載體外，還可加入輔料，例如濕潤(rùn)劑、懸浮劑、增甜劑、香料、色素或防腐劑。而液體劑型置于膠囊內(nèi)時(shí)，膠囊要用可吸附物質(zhì)如用明膠制成。
非經(jīng)口給藥的注射劑所用的溶劑或懸浮劑可用例如水、丙二醇、聚乙二醇、苯甲醇、油酸乙酯、卵磷脂等。
本發(fā)明化合物特別是前述的通式(Ⅰ′)表示的酯類衍生物，如下述的試驗(yàn)例所述具有很高的口服吸收性，這正符合以口服劑型給藥的要求。上述各種制劑可按常規(guī)方法制備。
臨床用量，成人口服本發(fā)明化合物一般是每日1～500mg/kg，優(yōu)選為5～50mg/kg，根據(jù)年齡、病情、癥狀，是否同時(shí)用其它藥而適當(dāng)增減。每日服用1次或分成2次或多次，或者間隔用藥。
注射用藥，成人每日量為0.1～50mg/kg，優(yōu)選為0.1～5mg/kg。
實(shí)施例下面對(duì)本發(fā)明以實(shí)施例形式加以具體地說明，但并不限制本發(fā)明范圍。實(shí)施例1 制備2-氨基-9-[2-[雙(2,2,2-三氟乙基)膦酰甲氧基]乙基]-6-乙基硫代嘌呤(表1，化合物No.2)2-氯乙基氯甲醚87g(670mmol)和亞磷酸三(2,2,2-三氟乙酯)200g(610mmol)于160℃加熱反應(yīng)7小時(shí)，定量地生成2-[雙(2,2,2-三氟乙基)膦酰甲氧基]乙基氯化物。
2-[雙-(2,2,2-三氟乙基)膦酰甲氧基]乙基氯化物206g溶解于甲乙酮2000ml中，加入碘化鈉270g，加熱回流8小時(shí)，反應(yīng)畢，冷卻至室溫，濃縮至干，剩余物溶解于氯仿/己烷中，硅膠柱吸附，用氯仿/己烷洗脫，得到定量的2-[雙-(2,2,2-三氟乙基)膦酰甲氧基]乙基碘化物。
2-氨基-6-氯嘌呤15.0g(88mmol)懸浮于二甲基甲酰胺360ml，與1,8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯13.9ml(93mmol)于80℃反應(yīng)1小時(shí)，然后加入上述的2-[雙-(2,2,2-三氟乙基)膦酰甲氧基]乙基碘化物23.8ml于反應(yīng)液中，于100℃反應(yīng)5小時(shí)。反應(yīng)畢，冷卻至室溫，濃縮至干，剩余物溶解于氯仿，硅膠柱吸附，用5％甲醇-氯仿洗脫，得到2-氨基-9-[2-[雙(2,2,2-三氟乙基)膦酰甲氧基]乙基]-6-氯嘌呤23.3g(56％)。
于含2-氨基9-[2-[雙(2,2,2-三氟乙基)膦酰甲氧基]乙基]-6-氯嘌呤47.1g的二甲基甲酰胺溶液400ml中，加入乙硫醇鈉8.0g，于80℃攪拌30分鐘。反應(yīng)混合物冷卻至室溫，濃縮至干。剩余物溶解于氯仿中，硅膠柱吸附，用0.4％～1.2％甲醇-氯仿洗脫，得到2-氨基-9-[2[雙(2,2,2-三氟乙基)膦酰甲氧基]乙基]-6-乙硫基嘌呤14.3g(30％)。
UV:λmax=248,322(0.01N-HCl/CH3OH)λmax=245,309(0.01N-NaOH/CH3OH)1H-NMR(CDCl3,δ):1.41(t,J=7.3Hz,3H),3.30(q,J=7.4Hz,2H),3.88-3.98(m,4H),4.20-4.48(m,6H),4.88(bs,2H),7.68(s,1H)實(shí)施例2 制備2-氨基-9-[2-[雙(2,2,2-三氟乙基)膦酰甲氧基]乙基]-6-甲硫嘌呤(表1,化合物No.1)按照實(shí)施例1同樣的方法，只是用甲硫醇鈉代替乙硫醇鈉，得到本標(biāo)題化合物。
UV:λmax=248,322(0.01N-HCl/CH3OH)λmax=245,309(0.01N-NaOH/CH3OH)1H-NMR(CDCl3,δ):2.64(s,3H),3.88-4.00(m,4H),4.27(t,J=5.0Hz,2H),4.37(septet,J=8.3Hz,4H),4.89(s,2H),7.69(s,1H)實(shí)施例3 制備9-[2-[雙(2,2,2-三氟乙基)膦酰甲氧基]乙基]-6-芐硫基鳥嘌呤(表1，化合物No.481)按照實(shí)施例1同樣的方法，只是用芐硫醇和三乙胺代替乙硫醇鈉，得到本標(biāo)題化合物。
UV:λmax=248,322(0.01N-HCl/CH3OH)λmax=245,309(0.01N-NaOH/CH3OH)1H-NMR(CDCl3,δ):3.86-3.96(m,4H),4.20-4.48(m,6H),4.57(s,2H),4.91(bs,2H),7.20-7.50(m,5H),7.68(s,1H)實(shí)施例4 制備2-氨基-9-[2-[雙(2,2,2-三氟乙基)膦酰甲氧基]乙基]-6-正丁硫基嘌呤(表1，化合物No.5)按照實(shí)施例1同樣的方法，只是用正丁硫醇和三乙胺代替乙硫醇鈉，得到本標(biāo)題化合物。
UV:λmax=248,322(0.01N-HCl/CH3OH)λmax=245,309(0.01N-NaOH/CH3OH)1H-NMR(CDCl3,δ):0.95(t,J=7.3Hz,3H),1.40-1.60(m,2H),1.68-1.84(m,2H),3.30(t,J=7.1Hz,2H),3.84-4.05(m,4H),4.18-4.50(m,6H),4.88(s,2H),7.68(s,1H)實(shí)施例5 制備2-氨基-9-[2-[雙(2,2,2-三氟乙基)膦酰甲氧基]乙基]-6-異丁硫基嘌呤(表1，化合物No.6)按照實(shí)施例1同樣的方法，只是用異丁硫醇和三乙胺代替乙硫醇鈉，得到本標(biāo)題化合物。
UV:λmax=248,322(0.01N-HCl/CH3OH)λmax=245,309(0.01N-NaOH/CH3OH)1H-NMR(CDCl3,δ):1.06(d,J=6.7Hz,6H),2.00(apparent septet,J=6.7Hz,1H),3.22(d,J=6.8Hz,2H),3.84-4.03(m,4H),4.20-4.47(m,6H),4.86(s,2H),7.68(s,1H)實(shí)施例6 制備2-氨基-9-[ 2-[雙(2,2,2-三氟乙基)膦酰甲氧基]乙基]-6-正己硫基嘌呤(表1，化合物No.10)按照實(shí)施例1同樣的方法只是用正己硫醇和三乙胺代替乙硫醇鈉，得到本標(biāo)題化合物。
UV:λmax=248,322(0.01N-HCl/CH3OH)λmax=245,309(0.01N-NaOH/CH3OH)1H-NMR(CDCl3,δ):0.89(t,J=6.9Hz,3H),1.22-1.58(m,6H),1.67-1.82(m,2H),3.29(t,J=7.2Hz,2H),3.86-4.00(m,4H),4.20-4.48(m,6H),4.86(bs,2H),7.68(s,1H)實(shí)施例7 制備2-氨基-9-[2-[雙(2,2,2-三氟乙基)膦酰甲氧基]乙基]-6-正丙硫基嘌呤(表1，化合物No.3)按照實(shí)施例1同樣的方法，只是將正丙硫醇和三乙胺代替乙硫醇鈉，得到本標(biāo)題化合物。
UV:λmax=248,322(0.01N-HCl/CH3OH)λmax=245,309(0.01N-NaOH/CH3OH)1H-NMR(CDCl3,δ):1.06(t,J=7.2Hz,3H),1.78(q,J=7.2Hz,2H),3.28(t,J=7.0Hz,2H),3.84-3.98(m,4H),4.23-4.45(m,6H),4.87(bs,2H),7.68(s,1H)實(shí)施例8 制備2-氨基-9-[2-[雙(2,2,2-三氟乙基)膦酰甲氧基]乙基]-6-異丙硫基嘌呤(表1，化合物No.4)按照實(shí)施例1同樣的方法，只是用異丙硫醇和三乙胺代替乙硫醇鈉，得到本標(biāo)題化合物。
UV:λmax=248,322(0.01N-HCl/CH3OH)λmax=245,309(0.01N-NaOH/CH3OH)1H-NMR(CDCl3,δ):1.45(d,J=6.9Hz,6H),3.86-3.98(m,4H),4.20-4.46(m,7H),4.86(bs,2H),7.67(s,1H)實(shí)施例9 制備2-氨基-9-[2-[鈉(2,2,2-三氟乙基)膦酰甲氧基]乙基]-6-乙硫基嘌呤將2-氨基-9-[2-[雙(2,2,2-三氟乙基)膦酰甲氧基]乙基]-6-乙硫基嘌呤334mg溶解于THF2.6ml，向其中加1N氫氧化鈉水溶液0.71ml，于室溫下攪拌3小時(shí)，凍干，得本標(biāo)題化合物257mg(89％)。
UV:λmax=248,322(0.01N-HCl/CH3OH)λmax=245,309(0.01N-NaOH/CH3OH)1H-NMR(D2O,δ):1.38(t,J=7.4Hz,3H),3.26(q,J=7.4Hz,2H),3.69(q,J=8.8Hz,2H),3.85-4.07(m,4H),4.31(t,J=5.0Hz,2H),7.99(s,1H)實(shí)施例10 制備2-氨基-9-[2-[雙(2,2,2-三氟乙基)膦酰甲氧基]乙基]-6-乙硫基嘌呤二鹽酸鹽(表1，化合物No.2)向2-氨基-9-[2-[雙(2,2,2-三氟乙基)膦酰甲氧基]乙基]-6-乙硫基嘌呤763mg與8ml乙酸乙酯的溶液中，滴加入飽和HCl/乙酸乙酯溶液2ml，室溫?cái)嚢?0分鐘。減壓濃縮，析出的結(jié)晶用乙酸乙酯洗滌，干燥后得本標(biāo)題化合物747mg(99％)。
UV:λmax=248,322(0.01N-HCl/CH3OH)λmax=245,309(0.01N-NaOH/CH3OH)1H-NMR(DMSO-d6,δ):1.32(t,J=7.3Hz,3H),3.30(q,J=7.3Hz,2H),3.80-3.94(m,2H),4.13(d,J=7.9Hz,2H),4.22-4.30(m,2H),4.53-4.77(m,4H),8.21(s,1H)實(shí)施例11 制備2-氨基-9-[2-(二乙基膦酰甲氧基)乙基]-6-乙硫基嘌呤按照實(shí)施例1同樣的方法，只是用亞磷酸三乙酯代替磷酸2,2,2-三氟乙酯，得到本標(biāo)題化合物。
1H-NMR(CDCl3,δ):1.30(t,J=7.0Hz,3H),1.42(t,J=7.4Hz,3H),3.31(q,J=7.5Hz,2H),3.77(d,J=8.3Hz,2H),3.89(t,J=5.0Hz,2H),4.09(quintet,J=7.4Hz,4H),4.26(t,J=5.0Hz,2H),4.87(bs,2H),7.75(s,1H)試驗(yàn)例1 對(duì)乙肝病毒(HBV)增殖的抑制作用按照皆知的方法(K.Ueda等，Virology,169:213-216(1989))，測(cè)定化合物對(duì)HBV增殖的抑制作用。
含HB611細(xì)胞(產(chǎn)生HBV的重組人肝癌細(xì)胞)2×104個(gè)，于含10％胎牛血清，鏈霉素(100μg/ml)，青霉素(100IU/ml)及Geneticin(商品名，Life Technologits公司制抗生素)(0.2mg/ml)的DulbeccoME培養(yǎng)基中于37℃濕孵。在第2日和第5日將培養(yǎng)基交換后，在培養(yǎng)了第8日、第11日和14日換成含有受試化合物的最終濃度為0.005～100μM的培養(yǎng)基后，培養(yǎng)17日后，回收細(xì)胞的DNA。測(cè)定細(xì)胞內(nèi)HBV-DNA量(用Southern Blot法)，計(jì)算抑制50％細(xì)胞內(nèi)HBV-DNA合成的化合物濃度。也計(jì)算引起50％HB611細(xì)胞死亡所需的每種化合物的濃度。作為對(duì)照物，用公認(rèn)的化合物PMEA及PMEA的二新戊酰氧甲酯(參考例1)及公布于EP632048中的公認(rèn)的化合物9-[2-[雙(2,2,2-三氟乙基)膦酰甲氧基]乙基]-2-氨基-6-對(duì)甲苯硫基嘌呤(參考例2)作同樣的試驗(yàn)，結(jié)果列于表2。表2中化合物編號(hào)No.與表1的編號(hào)相同。
表2
試驗(yàn)例2 小鼠口服受試化合物后由肝勻漿制備的低分子量部分對(duì)HBV增殖的抑制作用每組三只小鼠一次經(jīng)口給受試物0.2g/kg，給藥后自門靜脈作肝灌注1小時(shí)，然后做肝切除。加入等重于切除肝的生理鹽水，并勻漿，然后，用超濾膜制備均漿的低于5000分子量的低分子量部分樣品。
HB611細(xì)胞2×104個(gè)，在含10％胎牛血清、鏈霉素(100μg/ml)，青霉素(100IU/ml)及Geneticin(0.2mg/ml)的Dulbecco ME培養(yǎng)基中于37℃濕孵。培養(yǎng)的第2日及第5日交換培養(yǎng)基后，于第8日、11日及14日后換成含有1％上述低分子量部分樣品的培養(yǎng)基，培養(yǎng)17日后回收細(xì)胞中的DNA。用Southern Blot法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)HBV-DNA含量，計(jì)算出細(xì)胞內(nèi)HBV-DNA合成的抑制作用。作為對(duì)照，同時(shí)測(cè)定公開于US-7683432中的有代表性的化合物2-氨基-9-(2-膦酰甲氧乙基)-6-正丙硫基嘌呤(參考例-3)的作用。
表3
工業(yè)利用性本發(fā)明的膦酸酯-核苷酸衍生物具有優(yōu)良的抗病毒活性，和顯示高口服吸收性，此外，還有在肝臟細(xì)胞中良好的分布，預(yù)期會(huì)成為有用的藥物。
權(quán)利要求
1．通式(Ⅰ)表示的膦酸酯-核苷酸化合物、其鹽、其水合物及其溶劑合物，
式中，R1為C1-C6烷基或C7-C10芳烷基；R2及R3各自獨(dú)立為氫原子(但R2和R3不能同時(shí)是氫)，C1-C22烷基，酰氧甲基，酰硫乙基或由1個(gè)或1個(gè)以上的鹵原子取代的乙基；R4為氫原子，C1-C4烷基，C1-C4羥烷基，或由1個(gè)或1個(gè)以上鹵原子取代的C1-C4烷基；X為碳或氮原子。
2．權(quán)利要求1的化合物，其特征是，R1為C1-C6烷基，R2和R3各自獨(dú)立為由1個(gè)或1個(gè)以上的鹵原子取代的乙基。
3．權(quán)利要求1的化合物，其特征是，R1是C1-C6烷基，R2和R3各自獨(dú)立為2,2,2-三氟乙基。
4．含有權(quán)利要求1-3中任一化合物及藥用載體的藥物組合物。
5．含有權(quán)利要求1-3中任一化合物的抗病毒藥物。
全文摘要
由下式表示的膦酸酯—核苷酸化合物,其鹽、其水合物及其溶劑合物,以及含有這些化合物的藥品,式中R
文檔編號(hào)C07F9/6561GK1232466SQ97198592
公開日1999年10月20日 申請(qǐng)日期1997年8月12日 優(yōu)先權(quán)日1996年8月13日
發(fā)明者姥澤賢, 關(guān)谷浩一, 高嶋秀昭, 上田直子, 湯淺聰, 神谷直洋 申請(qǐng)人:三菱化學(xué)株式會(huì)社