專利名稱：從竹葉中提取黃酮類化合物浸膏或粉劑的生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從植物中提取黃酮類化合物的生產(chǎn)方法，尤其是從從竹葉中提取黃酮類化合物浸膏或粉劑的生產(chǎn)方法。
生物黃酮廣泛存在于植物界，是許多中草藥的有效成分。除了從銀杏葉、法國松樹皮、日本杜仲中提取黃酮類制劑以外，葛根、甘草、山楂、茶葉、柿葉、馬尾松針及松實、桂皮、合歡皮、枸杞根皮莖葉、石斛、蟲草、首烏、桔皮、五味子、棗、花生殼、稻根、茄桿等內(nèi)含的生物黃酮均具有開發(fā)價值。以當(dāng)今生產(chǎn)和使用規(guī)模最大的銀杏黃酮為例，其生產(chǎn)工藝大致為以下3種類型(1)水蒸汽蒸餾法將銀杏葉干燥、粉碎后，100～120℃水蒸汽蒸餾，蒸餾液冷卻后，用非極性大孔樹脂(或其他吸附劑)吸附，然后用乙醇洗脫，蒸干即得粉狀結(jié)晶。該方法設(shè)備簡單，但提取率低，現(xiàn)已很少采用。
(2)有機(jī)溶劑萃取這是目前國內(nèi)外使用最廣泛的方法，其提取工藝的專利也較多[從銀杏葉中提取黃酮類化合物的方法，李兆龍，中草藥，1992，14(6):5-6]，可歸納為兩種形式。一種是制備粗提物把銀杏葉干燥、粉碎后用有機(jī)溶劑(如乙醇或丙酮)提取，過濾、減壓濃縮回收溶劑后，即得銀杏浸膏。這種方法生產(chǎn)設(shè)備簡單，產(chǎn)品得率高(約12～14％)，但含大量的雜質(zhì)，通常呈棕黑色，制品的總黃酮含量為7～10％。另一種是制備精提物這類方法通常在粗提物的基礎(chǔ)上進(jìn)一步精制，常用的精制方法有液～液萃取(例如用二氯甲烷、氯仿、石油醚或苯脫脂；或用丁酮、丙酮-丁酮或乙酸乙酯萃取)，沉淀法(用氨水或氫氧化鉛沉淀)和吸附～解析法(用大孔樹脂、硅藻土或硅膠等吸附劑吸附，乙醇洗脫)。再通過無水硫酸鈉干燥、過濾、減壓蒸餾除去溶劑后，即可得精提物。一般為黃褐色粉末，得率約1～3％，總黃酮含量約為20～26％。
(3)超臨界流體萃取近10年來，用該技術(shù)提取天然植物中的藥用有效成分越來越受到關(guān)注，它和上述工藝相比，具有提取效率高、無溶劑殘留、活性成分不易被分解和破壞等優(yōu)點。歐洲專利EP0308675(1988)報道了用超臨界CO2提取銀杏葉中有效成分的方法，國內(nèi)近年來也在這方面做了不少工作，但大多處在實驗室研究階段，未見有工業(yè)化應(yīng)用的報道。
竹子是禾本科(Poaceae)竹亞科(Bambusoideae)多年生常綠植物，是一種大眾化的藥、食兩用植物。竹子在東南亞廣為分布，我國是世界竹子的中心產(chǎn)區(qū)之一，現(xiàn)有竹種300多種，竹林面積6000多萬畝。竹子的醫(yī)療保健作用早已為我國勞動人民所認(rèn)識，《本草求真》曰“竹葉據(jù)書載，涼心緩脾、清痰止渴，為治上焦風(fēng)邪煩熱、咳逆喘促、嘔噦吐血、一切中風(fēng)驚癇等癥，無非因其輕能解上、辛能散郁、甘能緩脾、涼能入心、寒能療熱故耳”。淡竹葉和淡竹瀝就是中醫(yī)一味傳統(tǒng)的清熱解毒藥。竹子全身是寶，是當(dāng)今世界最具有使用價值的植物之一。但在竹子的綜合利用中，竹葉的研究和開發(fā)明顯滯后，除極少量的藥用和食用以外，基本上處于原始狀態(tài)。近年來，發(fā)明人對竹葉的有效成分及其生物活性進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，發(fā)現(xiàn)竹葉中含有豐富的黃酮等酚性化合物、蒽醌類化合物、萜類內(nèi)酯、免疫活性多糖、特種氨基酸(δ-羥基賴氨酸)和錳、鋅、鐵、硒等微量元素，其中黃酮類化合物是其主要的功能成分。竹葉所含的黃酮類化合物基本上皆是黃酮糖苷，相當(dāng)部分是碳苷黃酮，如葒草苷木糖苷、異葒草苷、4’-甲氧基-牡荊苷等。
研究表明，竹葉提取物(Ebl)具有優(yōu)良的抗自由基、抗氧化和抗衰老活性。大量的研究表明，Ebl具有很強(qiáng)的清除活性氧自由基和阻斷亞硝化反應(yīng)的能力；能顯著誘導(dǎo)老齡小鼠內(nèi)源性抗氧化酶系(SOD和GSH-Px)的活力、抑制脂質(zhì)過氧化和清除過氧化產(chǎn)物；能顯著增強(qiáng)小鼠的抗疲勞和抗應(yīng)激能力；Ebl能顯著降低大鼠血甘油三酯和總膽固醇的濃度，增加HDL-膽固醇濃度、降低LDL-膽固醇濃度，抑制大鼠體重的增加。動物試驗的結(jié)果表明，Ebl降低血脂與誘導(dǎo)內(nèi)源性SOD活力的作用與銀杏葉提取物(Egb)相同，抑制脂質(zhì)過氧化和誘導(dǎo)GSH-Px活力的作用明顯優(yōu)于Egb。此外，尚未從竹葉中檢出有害成分或抗?fàn)I養(yǎng)因子。急性毒性試驗表明，Ebl經(jīng)口的LD50＞10g/kg體重，可視為實際無毒；Ames試驗表明，Ebl無致突變性。所以說，Ebl是一種安全高效的生物黃酮保健因子，可廣泛應(yīng)用于功能性食品和多種老年退行性疾病的防治。
本發(fā)明的目的在于利用我國資源十分豐富、且尚未得到有效開發(fā)利用的竹葉，提供一種工藝簡便、提取率高，過程易控制、無污染、適合于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)的從竹葉中提取黃酮類化合物浸膏或粉劑的生產(chǎn)方法。
從竹葉中提取黃酮類化合物浸膏或粉劑的生產(chǎn)方法，其特征是以竹葉為原料，將竹葉洗凈、烘干、破碎，用較低濃度(20-40％，體積百分濃度)的低級醇(甲醇或乙醇)為溶劑，以1∶10-15的固液比(重量百分比)熱回流提取1-2小時，提取液濃縮后物理去雜，再用中級醇(丁醇或戊醇)液-液萃取，萃取液減壓濃縮回收溶劑后，加少量水轉(zhuǎn)溶，成黃酮類化合物浸膏，或再經(jīng)真空或噴霧干燥，即制得黃酮類化合物粉劑。
本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的竹葉→洗凈→烘干→破碎→乙醇～水溶液熱回流提取→過濾→減壓濃縮→靜止絮凝→分離去雜→正丁醇分步萃取→減壓濃縮回收溶劑→熱水轉(zhuǎn)溶→減壓濃縮→(浸膏)→真空或噴霧干燥→竹葉黃酮粉劑該發(fā)明的技術(shù)要點是根據(jù)竹葉黃酮類化合物的組成特點和理化特性(良好的親水性和熱穩(wěn)定性)、采用乙醇水溶液一次性熱回流提??；根據(jù)雜質(zhì)在一定條件下的絮凝和沉淀特性，用物理方法分離去雜；然后用正丁醇分步萃取，回收溶劑，經(jīng)水轉(zhuǎn)溶后得浸膏，再干燥即得粉劑。工藝簡捷，易于控制；設(shè)備投入少，分離效果好，提取率高；無有機(jī)溶劑殘留，成品質(zhì)量好；整個過程不使用有毒、有害試劑和強(qiáng)酸強(qiáng)堿，基本上無“三廢”排放，不構(gòu)成環(huán)境污染。本發(fā)明工藝適用于連續(xù)大批量生產(chǎn)。
本發(fā)明使長期廢棄的竹葉得到了深度開發(fā)，既實現(xiàn)了竹子的整株利用，由為社會提供了一種來源廣闊、優(yōu)質(zhì)廉價的生物黃酮新資源，對人類的衰老、腫瘤和心血管病等退型性疾病的預(yù)防和治療具有重要意義。
竹葉總黃酮制備的工藝要點如下(1)竹葉原料可以是散生竹或叢生竹的干青葉，以剛竹屬的種類(如毛金竹、桂竹、毛竹、哺雞竹、早園竹、高節(jié)竹、紫竹、斑竹等)為佳，理想的采收期是秋冬季(9～12月)。
(2)一次性熱回流提取。取干青葉的碎片，用1∶10～15料液比、20～40％濃度的乙醇溶液)熱回流提取1～2hr，周期短、設(shè)備占用率低、提取較完全。鑒于竹葉原料的廣泛性和低廉的價格，該一次性提取法是最經(jīng)濟(jì)、合理的方法。
(3)物理法去雜。竹葉提取液濃縮到1∶1體積左右(即1kg干葉得1kg左右的濃縮液)，在自然降溫的靜止過程中，內(nèi)含的大分子雜質(zhì)和部分多酚類成分發(fā)生絮凝，自然沉降，用離心分離、壓濾或真空抽濾的方法除去，具有良好的澄清效果。該物理去雜法較之常規(guī)的醇沉或其他化學(xué)方法澄清，大大節(jié)省了生產(chǎn)成本，并且避免了化學(xué)試劑對提取物質(zhì)量可能帶來的不良影響。
(4)竹葉黃酮的精制采用正丁醇液～液萃取法。由于正丁醇對竹葉黃酮糖甙有很好的溶解性和選擇性，加之其沸點較高、在室溫下不易揮發(fā)，比重小、易于分離和回收，且無毒、無害。用正丁醇進(jìn)行有效次數(shù)的萃取，黃酮提取率高，成品色澤金黃。
(5)正丁醇萃取液經(jīng)過減壓濃縮、回收溶劑后，提取物再用少量的熱水轉(zhuǎn)溶成黃酮類化合物浸膏，再經(jīng)真空干燥或噴霧干燥即得黃酮類化合物粉劑。
用本發(fā)明的技術(shù)制備的竹葉黃酮類化合物粉劑為黃色粉末或黃色結(jié)晶顆粒，帶有明顯的竹葉芳香，總黃酮含量在24～30％，絕大部分是黃酮糖苷，其中含相當(dāng)數(shù)量的碳苷黃酮，如葒草苷木糖苷、異葒草苷和4’-甲氧基-牡荊苷等。其他成分還有植物酚酸、蒽醌、萜類內(nèi)酯、含氮化合物、可溶性糖和礦物質(zhì)等。
實施例1毛金竹(Phyllostachy nigra var.henonis(Bean)Stapf exRendle)的干青葉1kg，用破碎機(jī)破碎成10目左右的粗片后放入20L的提取罐中，加入30％的乙醇12kg，浸泡1hr，加熱回流1.5hr。粗提液(約10kg)經(jīng)過濾后入真空濃縮器中減壓濃縮(同時回收溶劑)，濃縮至體積為1L左右時出料，靜止8hr，真空抽濾去除雜質(zhì)，清液用同體積的正丁醇萃取三次(正丁醇預(yù)先用水飽和，40～50℃保溫萃取、每次攪拌0.5～1hr)，合并正丁醇相入真空濃縮器中減壓濃縮回收溶劑，提取物用熱水轉(zhuǎn)溶，減壓濃縮至一定濃度后成浸膏，或再經(jīng)噴霧干燥得25g黃色粉末，其總黃酮含量為28％實施例2:2kg桂竹(Phyllostachy bambusoides Sieb.Et Zucc)的干青葉，破碎成10目左右的粗片放入50L的提取罐中，加入35％的乙醇30kg，浸泡0.5hr，加熱回流1hr，提取液過濾后放入儲罐中，用真空濃縮器分批濃縮至最終體積約為2L，靜止6hr，離心分離去除雜質(zhì)，清液用2倍體積的正丁醇萃取2次，合并正丁醇相，減壓濃縮回收溶劑，提取物經(jīng)熱水轉(zhuǎn)溶后，減壓濃縮至比重大于1.12后成浸膏，或再經(jīng)真空干燥得45g黃色粉末，總黃酮含量為27.6％。
權(quán)利要求
1.從竹葉中提取黃酮類化合物浸膏或粉劑的生產(chǎn)方法，其特征是以竹葉為原料，將竹葉洗凈、烘干、破碎，用較低濃度(20-40％，體積百分濃度)的低級醇(甲醇或乙醇)為溶劑，以1∶10-15的固液比(重量百分比)熱回流提取1-2小時，提取液濃縮后物理去雜，再用中級醇(丁醇或戊醇)液-液萃取，萃取液減壓濃縮回收溶劑后，加少量水轉(zhuǎn)溶，成黃酮類化合物浸膏，或再經(jīng)真空或噴霧干燥，即制得黃酮類化合物粉劑。
全文摘要
本發(fā)明屬于一種從植物中提取黃酮類化合物,尤其是從竹葉中提取黃酮類化合物浸膏或粉劑的生產(chǎn)方法。以竹葉為原料,通過提取、濃縮、分離、精制、或再干燥所得的產(chǎn)品,含有大量的竹葉黃酮糖苷,及植物酚酸、蒽醌類、萜類內(nèi)酯等化合物。該制劑具有優(yōu)良的抗自由基、抗氧化、抗衰老和降血脂等作用,并帶有典型的竹子芳香,可廣泛地應(yīng)用于各種老年功能性食品和醫(yī)藥保健品。該制劑是用低濃度的低級醇為溶劑熱回流提取,用中級醇液～液萃取進(jìn)行精制。生產(chǎn)過程安全、簡便,無污染,易于控制,適于大規(guī)模的工業(yè)化生產(chǎn),同時還具有黃酮提取率高、純度好等特點。
文檔編號C07D311/30GK1228968SQ9810456
公開日1999年9月22日 申請日期1998年3月17日 優(yōu)先權(quán)日1998年3月17日
發(fā)明者張英 申請人:浙江農(nóng)業(yè)大學(xué)