專利名稱：抗癌劑的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及以具有抗癌作用、誘導細胞凋亡作用的特定化合物作有效成分的藥物制劑。
現(xiàn)有技術以前，臨床治療中使用的藥物有烷化劑、代謝抑制劑、植物的生物堿等抗癌劑、抗生素、免疫促進劑、免疫調節(jié)劑等多種，但是這些藥物治療還不能說是很成熟。
其中，已有報告指出由天然物得到的前列腺素中，具有環(huán)戊烯酮環(huán)的前列腺素A及J類通過抑制DNA的合成，有可能成為高安全性抗癌制劑，并已經合成了其各種衍生物(參照特開昭62-96438號公報)。
例外，近年來關于細胞組織的死亡，被稱為細胞凋亡(apoptosis；自然死亡或細胞自滅)的方式受到了矚目。
這種細胞凋亡與病理上的細胞壞死不同，它被認為是最初就已編入細胞自身基因的死亡。也就是說，任何外部的或內部的原因可以成為導火索，通過激活編碼細胞凋亡的基因生物合成程控死亡蛋白質，另外有時也可以激活在細胞內以非活性形式存在的程控死亡蛋白質?？梢哉J為是這樣生成的程控死亡蛋白質引起細胞自身分解，從而導致死亡。在所要求的組織、細胞中如果能夠出現(xiàn)這種細胞凋亡，就有可能使不需要的或有害的細胞自然從生物體中排出，這是一個極具深遠意義的發(fā)現(xiàn)。
發(fā)明所要解決的課題本發(fā)明的目的在于提供一種以5元環(huán)上具有α，β-不飽和羰基的化合物為有效成分的抗癌劑及細胞凋亡誘發(fā)劑。解決課題的手段本發(fā)明者們?yōu)閷崿F(xiàn)上述目的進行了悉心的研究，結果發(fā)現(xiàn)了具有抗癌作用、誘導細胞凋亡作用的化合物，從而完成了本發(fā)明。
本發(fā)明的第1個發(fā)明涉及以下式〔I〕所示4-環(huán)戊烯(cyclopentene)-1，3-二酮(dione)和/或下式〔II〕所示4-羥基(hydroxy)-2-環(huán)戊烯酮(cyclopentenone)為有效成分的抗癌劑。
本發(fā)明的第2個發(fā)明涉及以上式〔I〕所示4-環(huán)戊烯-1，3-二酮和/或上式〔II〕所示4-羥基-2-環(huán)戊烯酮為有效成分的細胞凋亡誘發(fā)劑。發(fā)明的實施方式下面，具體的說明本發(fā)明。
本發(fā)明中所使用的式〔I〕表示的4-環(huán)戊烯-1，3-二酮、式〔II〕表示的4-羥基-2-環(huán)戊烯酮都是公知化合物，可以采用公知方法來制備，另外也可以使用市售化合物。
4-環(huán)戊烯-1，3-二酮可以按照de Puy，G.H.等的方法[《美國化學會志》J.Am.Chem.Soc.，第82卷，第631頁，第2909頁(1960)]、Mirinov，V.A.等的方法[《化學文摘》Chemical Abstracts，第73卷，18178e(1973)]、或Kirschke等的方法[《實用化學雜志》J.Prakt.Chem.，第317卷，第807頁(1975)]合成，也可以使用市售品，例如Aldrich公司的產品(16，168-3)。
4-羥基-2-環(huán)戊烯酮可以用氯化鈰(III)或硼氫化鈉還原4-環(huán)戊烯-1，3-二酮得到。作為公知的合成方法，例如Tanaka，T.等的方法[《四面體》Tetrahedron，第32卷，第1713頁(1976)]、Nara，M.等的方法[《四面體》Tetrahedron，第36卷，第3161頁(1980)]、和Gill，M.等的方法[《澳大利亞化學雜志》Aust.J.Chem.，第34卷，第2587頁(1981)]。也可以使用4-羥基-2-環(huán)戊烯酮的(R)-體、(S)-體及其混合物中的任何一種。
4-環(huán)戊烯-1，3-二酮、4-羥基-2-環(huán)戊烯酮對于人前骨髓性白血病細胞HL-60、人急性成淋巴性白血病細胞MOLT-3、肺癌細胞A-549、SV40轉化肺細胞WI-38VA13、肝癌細胞Hep G2、結腸癌細胞HCT 116、人結腸癌細胞SW480、人結腸癌細胞WiDr、胃癌細胞AGS、骨髓瘤細胞等癌細胞具有抑制細胞增殖作用和抗癌活性，可以使用這些化合物作為抗癌劑的有效成分。另外，這些化合物對這些癌細胞具有誘導細胞凋亡的作用。本發(fā)明所用化合物的抑制癌細胞增殖的作用機理對本發(fā)明并不起限制作用，其作用機理也包括例如對癌細胞的細胞凋亡誘導作用、拓撲異構酶抑制作用。
本發(fā)明的抗癌劑以具有抗癌作用的4-環(huán)戊烯-1，3-二酮和/或4-羥基-2-環(huán)戊烯酮為有效成分，可以將其與公知的藥用載體組合制成制劑。一般制造抗癌制劑時，這些化合物中至少有一種與可藥用的液體或固體載體配合，而且必要時可以加入溶劑、分散劑、乳化劑、緩沖劑、穩(wěn)定劑、賦形劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑等，制成片劑、顆粒劑、散劑、粉末劑、膠囊劑等固體制劑；常用液體制劑、混懸劑、乳劑等液體制劑。另外，也可以制成干燥品，在使用前加入適當載體可以使之成為液態(tài)。
醫(yī)藥用載體可以根據上述給藥形式和劑型進行選擇，口服時，可以使用例如淀粉、乳糖、白糖、甘露醇、羧甲基纖維素、玉米淀粉、無機鹽等。另外，配制口服制劑時還可以添加粘合劑、崩解劑、表面活性劑、潤滑劑、流動促進劑、矯味劑、著色劑、香料等。
另一方面，配制非口服制劑時，可以按照常規(guī)方法通過將本發(fā)明的有效成分4-環(huán)戊烯-1，3-二酮和/或4-羥基-2-環(huán)戊烯酮溶解乃至懸濁于稀釋劑中，所述稀釋劑例如注射用蒸餾水、生理鹽水、葡萄糖水溶液、注射用植物油、芝麻油、花生油、大豆油、玉米油、丙二醇、聚乙二醇等，必要時加入殺菌劑、穩(wěn)定劑、等滲劑、止痛劑等來進行配制。
本發(fā)明的抗癌劑可以通過與制劑形態(tài)相應的適當給藥途徑給藥。給藥的方法也沒有特別的限定，可以內用、外用和注射。注射劑可以在靜脈、肌肉內、皮下、皮內等給藥，外用制劑也包括栓劑等。
抗癌劑的給藥量可以根據其制劑形態(tài)、給藥方法、使用目的及使用患者的年齡、體重、癥狀適當設置，沒有一定的量，但一般的說，制劑中含有的4-環(huán)戊烯-1，3-二酮和/或4-羥基-2-環(huán)戊烯酮的量為成人每日0.1μg～5mg/kg。當然由于給藥量根據各種條件而變化，有時比上述給藥量少的量就足夠了，有時必須超出該范圍。本發(fā)明的藥物可以直接口服給藥，此外也可以添加到任意的飲食品中使之進行日常的攝取。
本發(fā)明的細胞凋亡誘發(fā)劑，以具有細胞凋亡誘導性的4-環(huán)戊烯-1，3-二酮和/或4-羥基-2-環(huán)戊烯酮為有效成分，可以按照上述抗癌劑將其制成制劑，也可以按照抗癌劑的方法給藥。
細胞凋亡誘發(fā)劑的給藥量可以根據其制劑形態(tài)、給藥方法、使用目的及使用患者的年齡、體重、癥狀而適當設置，沒有一定的量，但一般制劑中含有的4-環(huán)戊烯-1，3-二酮和/或4-羥基-2-環(huán)戊烯酮的量為成人每日0.1μg～2mg/kg。當然由于給藥量根據各種條件而變化，有時比上述給藥量少的量就足夠了，有時必須超出該范圍。本發(fā)明的藥物可以直接口服給藥，此外也可以添加到任意的飲食品中使之進行日常的攝取。
本發(fā)明的細胞凋亡誘發(fā)劑可以使程控死亡蛋白質引起的細胞凋亡出現(xiàn)在所要求的組織、細胞中，使不需要的或有害的細胞自然從生物體中排除成為可能，是極其有價值的東西。
也就是說，本發(fā)明的細胞凋亡誘發(fā)劑對排除自身免疫疾病患者的自身反應性淋巴細胞、癌細胞、病毒感染細胞等有效，通過使細胞凋亡出現(xiàn)在所要求的組織、細胞中，能夠使不需要或有害的細胞自然從生物體中排除。本發(fā)明的細胞凋亡誘發(fā)劑對于例如全身性紅斑狼瘡、免疫介導性腎小球腎炎、多發(fā)性硬化癥、膠原病等自身免疫疾病、風濕病等疾病有效。
本發(fā)明的細胞凋亡誘發(fā)劑可以用于細胞凋亡誘發(fā)方法。也就是說，通過使用4-環(huán)戊烯-1，3-二酮和/或4-羥基-2-環(huán)戊烯酮作為有效成分可以誘發(fā)細胞凋亡，該方法對于細胞凋亡誘發(fā)機理的闡明和細胞凋亡誘發(fā)劑、細胞凋亡誘發(fā)抑制劑的篩選等是有用的。
另外，4-環(huán)戊烯-1，3-二酮、4-羥基-2-環(huán)戊烯酮具有拓撲異構酶抑制作用。這些化合物均是具有α，β-不飽和羰基的化合物。本發(fā)明者進一步對具有α，β-不飽和羰基的化合物的拓撲異構酶抑制作用進行了研究，發(fā)現(xiàn)具有α，β-不飽和羰基的化合物對于拓撲異構酶具有很強的抑制作用。也就是說，按照本發(fā)明還可以提供一種所含有效成分為具有α，β-不飽和羰基的化合物的拓撲異構酶抑制劑。對于該拓撲異構酶抑制劑所使用的具有α，β-不飽和羰基的化合物沒有特別限定，除4-環(huán)戊烯-1，3-二酮、4-羥基-2-環(huán)戊烯酮之外，例如還有馬來酰亞胺、4，5-二羥基-2-環(huán)戊烯-1-酮、下式〔III〕所示4-叔丁基環(huán)戊烯酮醚等。
上述拓撲異構酶抑制劑以具有α，β-不飽和羰基的化合物作為有效成分，可以按照上述抗癌劑將其制成制劑，并按照抗癌劑的方法給藥。上述拓撲異構酶抑制劑可以特異地抑制對于正常細胞僅在分裂期內短時間表達，但由于細胞癌變在整個細胞周期內高度表達的拓撲異構酶II，作為對拓撲異構酶II選擇性高的抑制劑是有用的。另外，作為通過對拓撲異構酶的特異抑制作用抗癌的抗癌劑也是有用的。另外，使用該拓撲異構酶抑制劑的拓撲異構酶抑制方法對于生物化學研究和抗癌劑的篩選等是有用的。
本發(fā)明所使用的4-環(huán)戊烯-1，3-二酮、4-羥基-2-環(huán)戊烯酮是具有抗癌作用、抑制癌細胞增殖作用、抑制異常細胞增殖作用、誘發(fā)細胞凋亡作用、拓撲異構酶抑制作用、滑膜細胞抑制作用等多種生理活性的化合物，作為以這些化合物為有效成分的藥用制劑，除抗癌劑、細胞凋亡誘發(fā)劑、拓撲異構酶抑制劑之外，還可以提供癌細胞增殖抑制劑、異常細胞增殖抑制劑、滑膜細胞抑制劑等。
本發(fā)明所使用的4-環(huán)戊烯-1，3-二酮、4-羥基-2-環(huán)戊烯酮具有癌細胞增殖抑制作用、細胞凋亡誘發(fā)作用，含有、稀釋或添加有選自這些化合物中至少一種的食品或飲料作為抗癌性、細胞凋亡誘發(fā)性食品或飲料是有用的。
本發(fā)明的食品或飲料的制備方法沒有特別的限定，可以采用烹調、加工以及通常所使用的食品或飲料的制備方法進行制備，制得的食品或飲料中只要含有具有抗癌作用、細胞凋亡誘發(fā)作用的4-環(huán)戊烯-1，3-二酮和/或4-羥基-2-環(huán)戊烯酮即可。
本發(fā)明所使用的4-環(huán)戊烯-1，3-二酮即使給小鼠一次口服10mg/kg也沒有死亡例。另外4-羥基-2-環(huán)戊烯酮即使給小鼠一次口服100mg/kg也沒有死亡例。而且4，5-二羥基-2-環(huán)戊烯-1-酮、4-叔丁基環(huán)戊烯酮醚即使分別給小鼠口服100mg/kg也沒有死亡例。
實施例以下結合實施例更具體地說明本發(fā)明，但本發(fā)明不受這些實施例的任何限定。實施例1(1)分別在96孔微滴定板的各孔中加入4-環(huán)戊烯-1，3-二酮或4-羥基-2-環(huán)戊烯酮的250mM、125mM、62.5mM、31.3mM、15.6mM、7.81mM、3.91mM、1.95mM、977μM、488μM、244μM、122μM、61.0μM、30.5μM或15.3μM溶液(70％乙醇水溶液中)以及作為對照的70％乙醇水溶液10μl，風干。將前骨髓性白血病細胞株HL-60(ATCC CCL-240)懸浮于含有在56℃處理30分鐘后得到的胎牛血清(JRH公司生產)10％的RPMI1640培養(yǎng)基(BioWhittaker公司生產)中，使之達到1×105個/ml，在上述微滴定板的各孔中分別加入100μl，在5％CO2存在下37℃培養(yǎng)48小時。加入5mg/ml的3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑鎓溴化物(MTT，Sigma公司生產)磷酸鹽緩沖食鹽水溶液10μl，再繼續(xù)培養(yǎng)4小時后，用顯微鏡觀察細胞的生長狀態(tài)。另外，加入含有0.04N HCl的2-丙醇100μl，充分攪拌，在590nm處測定吸光度。
結果添加30.5μM 4-環(huán)戊烯-1，3-二酮的部分(終濃度3.05μM)、添加122μM 4-羥基-2-環(huán)戊烯酮的部分(終濃度12.2μM)可以完全抑制細胞的增殖，另外可見細胞凋亡小體的形成。在添加更高濃度的部分見不到細胞增殖，以低濃度添加的部分與添加對照用70％乙醇水溶液的部分可見同等的細胞增殖。
(2)將使用含有10％胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基在37℃培養(yǎng)的HL-60(ATCC CCL-240)懸濁于RPMI1640培養(yǎng)基中，使之達到2.5×105個/ml。
對于該懸濁液5ml，分別加入0.05mM、0.5mM、5mM、50mM的4-環(huán)戊烯-1，3-二酮；0.05mM、0.5mM、5mM、50mM的4-羥基-2-環(huán)戊烯酮的70％乙醇水溶液10μl，在37℃、5％二氧化碳存在下培養(yǎng)24小時。
在光學顯微鏡下觀察培養(yǎng)細胞，對于添加最終濃度為1μM以上4-環(huán)戊烯-1，3-二酮、最終濃度為10μM以上4-羥基-2-環(huán)戊烯酮的培養(yǎng)細胞，分別確認其核的聚集、細胞的縮小、細胞凋亡小體的形成。另外，對于添加對照用70％乙醇水溶液10μl的培養(yǎng)細胞，確認未出現(xiàn)上述現(xiàn)象。
然后，使用與上述相同的方法培養(yǎng)24小時和48小時得到的細胞，按照細胞工學分冊實驗方案叢書細胞凋亡實驗方案(秀潤社)129-130頁記載的方法使用FACScan進行凋亡細胞測定，按照Biomanual UP叢書最新細胞凋亡試驗法(羊土社)61-63頁記載的方法對DNA的斷裂進行解析。結果確認添加最終濃度1μM以上4-環(huán)戊烯-1，3-二酮、最終濃度10μM以上4-羥基-2-環(huán)戊烯酮的培養(yǎng)細胞出現(xiàn)細胞凋亡，添加1μM 4-環(huán)戊烯-1，3-二酮、10μM 4-羥基-2-環(huán)戊烯酮的培養(yǎng)細胞出現(xiàn)DNA斷裂。另外，確認添加對照用70％乙醇水溶液10μl的培養(yǎng)細胞未出現(xiàn)這些現(xiàn)象。
(3)將一部分采用與實施例1-(2)相同的方法培養(yǎng)24小時后得到的細胞作為試樣，用0.4％臺盼藍染色后，用光學顯微鏡觀察，測定未被染色的活細胞與染成藍色的死細胞數(shù)，求出生存率達到50％時4-環(huán)戊烯-1，3-二酮和4-羥基-2-環(huán)戊烯酮的濃度(生存率50μM)，如表1所示。表1
由上述可知，4-環(huán)戊烯-1，3-二酮和4-羥基-2-環(huán)戊烯酮在上述濃度下可以顯示出癌細胞增殖抑制作用和細胞凋亡誘發(fā)作用。實施例2(1)將10g D-葡萄糖醛酸(Sigma公司生產G 5269)溶解于1升水中，在121℃加熱4小時后減壓濃縮到約10ml。在其中加入乙酸丁酯∶乙酸∶水＝3∶2∶2混合液的上層液40ml，混合后離心，將得到的上清液減壓濃縮到約10ml。
將上述提取液用層析用硅膠BW-300SP(2×28cm，富士Silisia化學公司生產)進行柱層析分析，以乙酸丁酯∶乙酸∶水＝3∶2∶2的上層作為洗脫液，用壓縮機施加0.2kg/cm3的壓力，采用每分鐘5ml的流速進行洗脫。進行分部洗脫使1流分為10ml，取各流分的1部分采用薄層色譜法分析，61號至80號的流分中含有高純度的4，5-二羥基-2-環(huán)戊烯-1-酮。合并這些組分，減壓濃縮后用40ml氯仿萃取，將萃取液減壓濃縮得到4，5-二羥基-2-環(huán)戊烯-1-酮100mg。
(2)將44mg 4，5-二羥基-2-環(huán)戊烯-1-酮與287mg叔丁基(t-butyl)2，2，2-三氯亞氨透乙酸酯(trichloroacetimidate)(Aldrich公司生產，36，478-9)在氫氣流下溶解于2.5ml二氯甲烷。在攪拌的同時向其中緩慢加入28μl/ml三氟化硼二乙醚配合物二氯甲烷溶液1ml。在室溫下攪拌8小時后，減壓濃縮，用氯仿∶甲醇＝19∶1作為展開溶劑，通過硅膠薄層層析法對4-叔丁基環(huán)戊烯酮醚進行精制。4-叔丁基環(huán)戊烯酮醚的Rf值為0.35，收率為9.2％。
(3)作為具有α，β-不飽和羰基的化合物，使用4-環(huán)戊烯-1，3-二酮、4-羥基-2-環(huán)戊烯酮、馬來酰亞胺(Aldrich公司產品12，958-5)、4，5-二羥基-2-環(huán)戊烯-1-酮、4-叔丁基環(huán)戊烯酮醚，如下所述測定拓撲異構酶抑制活性。
(i)將拓撲異構酶II〔TopoGEN公司生產，2單位/μl〕2μl、10倍濃度緩沖液〔0.5M Tris-HCl(pH8.0)、1.2M KCl、0.1M MgCl2，5mM三磷酸腺苷、5mM二硫蘇糖醇〕2μl、0.1％牛血清白蛋白(寶酒造社生產)2μl、蒸餾水11μl以及用對照用蒸餾水或水調制成各種濃度的4-環(huán)戊烯-1，3-二酮、4-羥基-2-環(huán)戊烯酮、馬來酰亞胺、4，5-二羥基-2-環(huán)戊烯-1-酮、4-叔丁基環(huán)戊烯酮醚2μl分別混合后，加入0.2μg/μl pBR322 DNA(寶酒造社生產)1μl，在37℃使之反應。反應30分鐘后，加入1％十二烷基硫酸鈉、50％甘油、0.02％溴酚藍水溶液2μl，停止反應。
將上述反應液20μl加入到用瓊脂糖L03(寶酒造社生產)和TAE緩沖液〔40mM Tris、5mM乙酸鈉、1mM乙二胺四乙酸二鈉鹽(EDTA)；用醋酸調節(jié)到pH7.8〕制成的1％瓊脂糖凝膠中，在TAE緩沖液中進行電泳。電泳后用1μg/ml溴化乙錠水溶液浸泡凝膠，紫外線照射觀察DNA電泳圖。另外，在添加水的對照組中DNA完全由超螺旋型轉變?yōu)樗沙谛?，但如果可以抑制拓撲異構酶的活性則可以部分或完全抑制其由超螺旋型向松弛型轉變。
結果在添加水的對照組中DNA完全由超螺旋型轉變?yōu)樗沙谛停?0μM以上4-環(huán)戊烯-1，3-二酮、100μM以上4-羥基-2-環(huán)戊烯酮、1μM以上馬來酰亞胺、50μM以上4，5-二羥基-2-環(huán)戊烯-1-酮、500μM以上4-叔丁基環(huán)戊烯酮醚可以部分或完全抑制DNA由超螺旋型向松弛型轉變，確認了具有α，β不飽和羰基的化合物的拓撲異構酶II抑制活性。
(ii)采用與實施例2-(3)-(i)相同的方法測定各化合物對拓撲異構酶I的抑制活性。但是，用拓撲異構酶I〔TopoGEN公司生產，0.01單位/μl〕代替拓撲異構酶II，10倍濃度緩沖液使用100mM Tris-HCl(pH7.9)、10mM EDTA、1mM亞精胺、50％甘油。
結果添加水的對照組中DNA完全由超螺旋型轉變?yōu)樗沙谛?，?000μM以上4-環(huán)戊烯-1，3-二酮、1000μM以上4，5-二羥基-2-環(huán)戊烯-1-酮、1000μM以上馬來酰亞胺可以部分抑制DNA由超螺旋型向松弛型轉變，確認了其拓撲異構酶I抑制活性。
以上說明具有α，β-不飽和羰基的化合物對于正常細胞僅在分裂期短時間表達，而對于由于細胞癌變在整個細胞周期內高度表達的拓撲異構酶II具有特異的抑制活性。實施例3將小鼠實體瘤MethA(2×106細胞/小鼠)移植到8周齡的雌性BALB/c小鼠(體重約20g)的背部皮下。之后，連續(xù)5天繼續(xù)在相同部位分別皮下注射4-羥基-2-環(huán)戊烯酮(0.3mg/kg/日、1mg/kg/日)、4-環(huán)戊烯-1，3-二酮(0.03mg/kg/日、0.1mg/kg/日)。對于對照組同樣皮下注射生理鹽水。測量癌細胞移植后第7天小鼠背部形成的癌組織的長徑和短徑，通過長徑×(短徑)2/2計算出腫瘤大小(mm3)。另外，試驗是按照每組8只進行的。
結果如表2所示。如表2所示4-羥基-2-環(huán)戊烯酮和4-戊烯-1，3-二酮具有抗癌活性。表2<
>實施例4注射劑(1)將4-環(huán)戊烯-1，3-二酮以0.1％的濃度加入到生理鹽水(日本藥典收載)中，制成注射劑。
(2)分別將4-羥基-2-環(huán)戊烯酮和甘草酸以0.2％和0.5％的濃度加入到生理鹽水中(與上述相同)，制成注射劑。實施例5(1)制備含有4-羥基-2-環(huán)戊烯酮1mg和微晶纖維素適量的片劑，包上糖衣，制成片劑。
(2)制備含有4-環(huán)戊烯-1，3-二酮0.1mg、甘草酸二鉀10mg和微晶纖維素適量的片劑，包上糖衣，制成片劑。
發(fā)明的效果按照本發(fā)明可以提供一種選自4-環(huán)戊烯-1，3-二酮、4-羥基-2-環(huán)戊烯酮的具有抗癌作用、細胞凋亡誘發(fā)作用的藥劑。另外，含有、添加和/或稀釋有這些化合物的食品或飲料作為抗癌性、細胞凋亡誘發(fā)性食品或飲料是有用的。
而且，通過使用含有該化合物的細胞凋亡誘發(fā)劑，使細胞凋亡誘發(fā)機理的研究、細胞凋亡誘發(fā)抑制劑的開發(fā)稱為可能。本發(fā)明的藥劑可以用于細胞凋亡誘發(fā)方法，在該用途方面也是有用的。
而且按照本發(fā)明可以提供一種含有的有效成分為具有α，β-不飽和羰基的化合物的拓撲異構酶II特異性抑制劑，該抑制劑作為抗癌劑也是有用的，另外本發(fā)明所提供的用具有α，β-不飽和羰基的化合物作為有效成分的拓撲異構酶抑制方法對于生物化學研究或抗癌劑的篩選等也是有用的。
權利要求
1.抗癌劑，以下式〔I〕所示4-環(huán)戊烯-1，3-二酮和/或下式〔II〕所示4-羥基-2-環(huán)戊烯酮為有效成分。
2.細胞凋亡誘發(fā)劑，以下式〔I〕所示4-環(huán)戊烯-1，3-二酮和/或下式〔II〕所示4-羥基-2-環(huán)戊烯酮為有效成分。
全文摘要
以下式(Ⅰ)所示4－環(huán)戊烯－1,3－二酮和/或下式(Ⅱ)所示4－羥基－2－環(huán)戊烯酮為有效成分的抗癌劑。
文檔編號C07C45/71GK1261272SQ98806458
公開日2000年7月26日 申請日期1998年7月16日 優(yōu)先權日1997年7月25日
發(fā)明者小林英二, 小山信人, 加藤郁之進 申請人:寶酒造株式會社