專利名稱：一種鞘類脂糖苷化合物及其提取方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種從中國南海海綿Iotrochota ridley中分離、提取的新鞘類脂糖苷化合物。
海綿是一種低等的多細胞動物，種類繁多，分布極廣，以海產為主。自七十年代以來，人們已從海綿中發(fā)現(xiàn)了許多結構獨特的萜類、生物堿、大環(huán)內酯和糖苷等化合物。近幾年來，由于有效成分的分離、純化技術的顯著改進，尤其是600兆核磁共振儀等現(xiàn)代先進分析儀器的出現(xiàn)以及各種二維譜技術的迅猛發(fā)展，使海洋天然產物中的一些結構較復雜的化合物，特別是鞘類脂糖苷化合物的結構鑒定工作在九十年代才取得一些重要進展。經藥理試驗表明，鞘類脂糖苷化合物大多具有抗真菌和抗腫瘤等生理活性。因而，它們是一類具有廣闊應用前景的天然產物。本發(fā)明所涉及的化合物經IR、EIMS、FABMS、1HNMR、13CNMR、GCOSY、TOCSY、HMQC和HMBC等現(xiàn)代物理手段和化學方法確定結構如下
該化合物的化學名稱為1-(β-D-吡喃葡糖氧基)-3,4-二羥基-2-[(4′Z)-2′-羥基二十四碳烯酰胺基-4′]-十八烷。命名為Iotroridoside A,其物理常數(shù)如下νmaxKBr(cm-1):3363,2919,2850,2287,1629,1536,1465,1376,1168,1035,898,721,605；δ1H(C5D5N,TMS)ppm:8.54(1H,d,J=9Hz,NH),5.90(1H,dt,J=10.2,7.2Hz,H4’),5.60(1H,dt,J=10.8,7.2Hz,H5’),5.24(1H,m,H2),4.93(1H,d,J=8.4Hz,H1”),4.68(1H,dd,J=10.2,4.2Hz,H1a),4.62(1H,m,H2’),4.50(1H,dd,J=10.8,4.2Hz,H1b),4.45(1H,dd,J=12,2.4Hz,H6”a),4.31(1H,dd,J=12,5.4Hz,H6”b),4.27(1H,dd,J=12,4.8Hz,H3),4.19(1H,m,H4”),4.16(1H,m,H4),4.15(1H,m,H3”),3.97(1H,m,H2”),3.84(1H,m,H5”),3.00(1H,m,H3’a),2.82(1H,m,H3’b),2.22(1H,m,H5a),2.17(2H,m,H6’),1.88(2H,m,H5b,H6a),1.66(1H,m,H6b),1.42(2H,m,H7),1.35(2H,m,H7’),1.34～1.20(26CH2),1.25(H17,H23’),1.24(H16,H22’),0.86(6H,t,J=6.6Hz,18-CH3,24’-CH3)；δ13C(C5D5N,TMS)ppm:174.98(C1’),132.39(C5’),126.27(C4’),105.53(C1”),78.52(C3”),78.43(C5”),75.85(C3),75.13(C2”),72.57(C4”),72.48(C2’),71.51(C4),70.42(C1),72.57(C4”),72.48(C2’),71.51(C4),70.42(C1),62.65(C6”),51.80(C2),34.22(C5),33.56(C3’),32.14(C16,C22’),30.37～29.90(23CH2),29.70(C7),27.90(C6’),26.54(C6),22.94(C17,C23’),14.28(C18,C24’)；FABMS得分子量843,EIMS(m/z):568,490,458,406,370,356,328,307,265,225,179,145,123,111,97,83,70(100％),57,55,43該化合物的提取方法如下以中國南海海綿為原料，將曬干的海綿用酒精浸泡、抽提，將抽提物濃縮至漿狀物，然后將其分散在適量的水中，再以等量的乙酸乙酯和正丁醇依次萃取，將所獲得的正丁醇可溶物進行三次硅膠柱層析和兩次葡聚糖凝膠LH-20柱層析得白色粉狀物，即該化合物。
生理活性試驗表明，該化合物對小鼠L1210白血病細胞的細胞毒作用EC50值為80ng/ml。
本發(fā)明所述的化合物，不但具有新型雙鍵片段的酰胺骨架結構，而且具有極強的腫瘤細胞的細胞毒活性。因此，本發(fā)明所涉及的新化合物具有十分重要的理論價值和應用價值。
實施例一、分離提純中國南海海綿Iotrochota ridley，曬干(2.2g)切碎后用95％工業(yè)酒精(5kg)于室溫下浸泡提取三次，合并提取物并減壓濃縮至漿狀物，將此漿狀物均勻分散于500ml水中，分別用等量的乙酸乙酯和正丁醇萃取三次，正丁醇萃取物經減壓濃縮得黑色漿狀物23g。
上述漿狀物經硅膠(150g,Merk 70～230目)柱層析(φ=4.6×35cm)，以500ml不同比例的氯仿-甲醇(100％,90％,85％,80％,70％)梯度洗脫，獲得A、B、C、D、E五個初組分。C組分(1g)經兩次硅膠(80g,30g，青島海洋化工分廠，300～400目)柱層析(φ2.4×48,φ1.6×48，洗脫劑90％氯仿-甲醇)得粗產物45mg。將此粗產物再經二次葡聚糖凝膠LH-20(30％氯仿-甲醇)柱層析，得白色粉狀物29.6mg。二、結構鑒定1．紅外3363cm-1處的寬峰說明分子含羥基，1629、1536cm-1等處的中等偏弱吸收峰顯示分子可能含仲酰胺片段。
2．1HNMR、13CNMR(C5D5N,ppm)顯示分子含有一根鄰二取代雙鍵(δH5.90,dt,J=10.2,7.2Hz,δc126.7和δH5.60,dt,J=10.8,7.2Hz,δc132.39)，因兩烯氫間的偶合常數(shù)小于12Hz，故雙鍵的立體構型為順式。另有10個連氧或氮的亞甲基(或次甲基)及兩個甲基(δH0.86,6H,t,J=6.6Hz,δc14.28)。δH4.93(1H,d,J=8.4Hz)以及δc105.53是特征的葡萄糖異頭碳氫信號，暗示分子可能含葡糖環(huán)。δH8.54(1H,d,J=9Hz,NH)以及δc174.98(酰胺羰基)指明分子含有一個仲酰胺片段，恰與紅外提供的信息吻合。另外，δH1.34～1.20,δc30.37～29.90都有一個巨大的亞甲基信號峰，說明分子含一根或一根以上的長脂肪鏈。
3．GCOSY同核相關譜顯示分子有三個偶合體系①從異頭氫(1″)出發(fā)找偶合點可連接出一個六元糖環(huán)結構(1″→6″)，再由HMQC異核相關譜可找出其相應的δc值(105.53,75.13,78.52,72.57,78.43和62.65ppm)，將其δc值與文獻值對照，可知是β-D-吡喃葡糖環(huán)。②從仲酰胺氫出發(fā)可推導出一個植物鞘氨醇(phytosphingosine)片段(1→6)，同樣可由HMQC定出相應的δc值。③從雙鍵氫(4′,5′)出發(fā)可推出一不飽和脂肪長鏈(1′→mCH2)，其中有一連氧亞甲基，可能與酰胺羰基相連。HMBC指出，NH與C=O、C=O與H2′有2JCH遠程偶合，C1與H1″有3JCH遠程偶合，由此可將三個偶合體系連成一片，得到如下初步結構
上述結構與文獻報導的一些鞘類脂糖苷化合物類似，但結構上又有獨特的地方，即4′位有雙鍵，這是以前所沒出現(xiàn)過的，因此是新化合物。該化合物的TOCSY、HMBC等相關譜則進一步證實了這一結構，見表1。表1 Iotroridoside A的δ1H,δ13C,TOCSY和HMBC數(shù)據(jù)表
4．根據(jù)FABMS得分子量843，推算出m+n=25，同時由1HNMR的氫積分面積也可推得m+n=25，但m,n仍需進一步確定。我們應用如下化學方法解決了這一問題。
5．取樣品5mg，在6.5ml82％的甲醇水溶液(含1NHCl)中進行酸解反應。常壓下85℃左右回流12小時。產物用石油醚萃取三次(5ml×3)，合并石油醚層，用去離子水洗二遍，Na2SO4干燥，過夜。濃縮石油醚溶液，得產物3.5mg。TLC顯示此產物仍混有少量反應物，因此再對產物進行硅膠(10克，青島海洋化工分廠，300～400目)柱層析(φ1.2×43，洗脫劑80％石油醚-乙酸乙酯)得純產物2.0mg。作EIMS，得數(shù)據(jù)如下396(M+),378(M-H2O),337(M-COOCH3),304,139,125,111,103(γ裂解)，90(100％,β裂解)，83,69,57,55,43。由該質譜數(shù)據(jù)及實施例二(3)中所提供的信息綜合推得水解產物的結構式如下
6．因n=15，則m=25-15=10，由此我們便可確定該化合物的結構式如下
權利要求
1.一種鞘類脂糖苷化合物，其特征在于，該化合物的結構式為
化學名稱1-(β-D-吡喃葡糖氧基)-3,4-二羥基-2-[(4’Z)-2’-羥基二十四碳烯酰胺基-4’]-十八烷1-(β-D-glucopyranosyloxy)-3,4-dihydroxy-2-[(4’Z)-2’-hydroxytetracosene amido-4’]-octadecane英文名稱Iotroridoside A物理常數(shù)νmaxKBr(cm-1):3363,2919,2850,2287,1629,1536,1465,1376,1168,1035,898,721,605；δ1H(C5D5N,TMS)ppm:8.54(1H,d,J=9Hz,NH),5.90(1H,dt,J=10.2,7.2Hz,H4’),5.60(1H,dt,J=10.8,7.2Hz,H5’),5.24(1H,m,H2),4.93(1H,d,J=8.4Hz,H1”),4.68(1H,dd,J=10.2,4.2Hz,H1a),4.62(1H,m,H2’),4.50(1H,dd,J=10.8,4.2Hz,H1b),4.45(1H,dd,J=12,2.4Hz,H6”a),4.31(1H,dd,J=12,5.4Hz,H6”b),4.27(1H,dd,J=12,4.8Hz,H3),4.19(1H,m,H4”),4.16(1H,m,H4),4.15(1H,m,H3”),3.97(1H,m,H2”),3.84(1H,m,H5”),3.00(1H,m,H3’a),2.82(1H,m,H3’b),2.22(1H,m,H5a),2.17(2H,m,H6’),1.88(2H,m,H5b,H6a),1.66(1H,m,H6b),1.42(2H,m,H7),1.35(2H,m,H7’),1.34～1.20(26CH2),1.25(H17,H23’),1.24(H16,H22’),0.86(6H,t,J=6.6Hz,18-CH3,24’-CH3)；δ13C(C5D5N,TMS)ppm:174.98(C1’),132.39(C5’),126.27(C4’),105.53(C1”),78.52(C3”),78.43(C5”),75.85(C3),75.13(C2”),72.57(C4”),72.48(C2’),71.51(C4),70.42(C1),62.65(C6”),51.80(C2),34.22(C5),33.56(C3’),32.14(C16,C22’),30.37～29.90(23CH2),29.70(C7),27.90(C6’),26.54(C6),22.94(C17,C23’),14.28(C18,C24’)；FABMS得分子量843,EIMS(m/z):568,490,458,406,370,356,328,307,265,225,179,145,123,111,97,83,70(100％),57,55,43
2．一種專用于制造權利要求1中所述的化合物的方法，以中國南海海綿為原料，其特征在于將海綿用酒精浸泡抽提，將抽提物濃縮，并使其分散在水中，以等量的乙酸乙酯和正丁醇進行萃取，所得的正丁醇溶液經濃縮、三次硅膠柱層析和兩次葡聚糖凝膠LH-20柱層析，制得所述化合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從中國南海海綿Iotrochota ridley中提取、分離的新鞘類脂糖苷化合物。本發(fā)明所述化合物的化學名為:1－(β－D－吡喃葡糖氧基)－3,4－二羥基－2－[(4’Z)－2’－羥基二十四碳烯酰胺基－4’]－十八烷。命名為:IotroridosideA,其化合結構式如下:該化合物是以工業(yè)乙醇從中國南海海綿Iotrochota ridley中提取、濃縮,并以正丁醇等溶劑萃取,經硅膠柱層析和適當溶劑淋洗,再以葡聚糖凝膠柱層析得白色粉狀物。該化合物具有新型骨架結構,即其支鏈二十四碳烯酰胺基具有獨特的雙鍵片段,這是以往所獲得的此類天然產物所沒有的。同時該化合物還具有極強的腫瘤細胞毒活性。因此,具有良好的應用前景。
文檔編號C07H15/00GK1224724SQ9911604
公開日1999年8月4日 申請日期1999年2月3日 優(yōu)先權日1999年2月3日
發(fā)明者鄧松之, 田春雷, 肖定軍, 章勤 申請人:中國科學院廣州化學研究所