專利名稱：作為IgE調節(jié)劑的苯并咪唑衍生物的制作方法
背景技術：
本發(fā)明涉及對變應原反應的IgE的小分子抑制劑，該抑制劑適用于治療變態(tài)反應和/或氣喘或其中IgE為致病原的其他疾病。
在美國估計有一千萬人患有氣喘，占人口總數的約5％。氣喘在美國估計的花費超過六十億美元。約25％的請求急救的氣喘患者需要住院治療，氣喘的最大單項直接醫(yī)療開支是住院病人醫(yī)院服務(急救)，其花費大于160億美元。處方藥物治療的花費從1985年至1990年增加了54％，接近11億美元(Kelly,Pharmacotherapy 12:13S-21S(1997))。
根據國家流動醫(yī)療保護調查(National Ambulatory Medical CareSurvey)，氣喘占所有流動保護隨訪的1％，并且該疾病一直是兒童誤學的主要原因。盡管改進了對該疾病過程的理解并且有了更好的藥物，但是在這個國家和世界上氣喘的發(fā)病和死亡率持續(xù)升高(美國健康和人類服務部(U.S.Department of Health and Human Services)；1991，出版號91-3042)。因此，氣喘成為嚴重的公共健康問題。
氣喘發(fā)作發(fā)生的病理生理學過程基本上可以分為兩個階段，每個階段均有支氣管收縮現象，這引起喘鳴、胸部緊迫感和呼吸困難。首先，早期氣喘反應是由變應原、刺激物或運動引起的。變應原交聯的免疫球蛋白E(IgE)分子與肥大細胞上的受體結合，使它們釋放許多預先形成的炎性調節(jié)劑、包括組胺。其他的引發(fā)劑包括運動或吸入冷空氣、干空氣后呼吸道組織的滲透性改變。第二，晚期反應的特征在于活化的嗜曙紅細胞和其他炎性細胞浸潤到呼吸道組織中、上皮剝落(desquamonon)以及在呼吸道中有非常粘稠的粘液。炎性反應引起的損傷使呼吸道有易感性(“primed”)或敏感，因此需要較小的引發(fā)劑引起隨后的氣喘癥狀。
有許多緩解性治療氣喘的藥物；但是，它們的功效變化很大。短效β2-腎上腺素能興奮劑，特布他林和舒喘寧，長期以來是氣喘治療的支柱，主要在早期氣喘中作為支氣管擴張藥發(fā)揮作用。較新的長效β2-興奮劑，沙美特羅和福莫特羅，可以減少晚期反應的支氣管收縮成分。但是，由于β2-興奮劑不具有顯著的抗炎活性，它們對于支氣管的過度反應性沒有影響。
許多其他的藥物針對早期或晚期氣喘反應的各個具體方面。例如，抗組胺藥氯雷他定抑制早期組胺介導的炎性反應。一些較新的抗組胺藥，例如氮卓斯汀和酮替芬，都具有抗炎和減弱支氣管擴張作用，但是它們目前尚沒有確定的療效用于氣喘治療。磷酸二酯酶抑制劑，例如茶堿/黃嘌呤，可以減弱晚期炎性反應，但是沒有證據表明這些化合物降低支氣管的過度反應性?？鼓憠A能藥，例如用于急性氣喘以抑制嚴重支氣管收縮的溴化異丙托銨，對早期或晚期炎癥沒有作用，對支氣管過度反應性沒有作用，因此在慢性治療中基本上沒有作用。
皮質類固醇藥物，例如布地奈德，是最有效的抗炎劑。炎性介質釋放抑制劑，例如色甘酸和奈多羅米，通過穩(wěn)定肥大細胞發(fā)揮作用，從而抑制晚期炎性對變應原的反應。因此，色甘酸和奈多羅米以及皮質類固醇，均通過使炎性損傷對呼吸道的致敏作用減至最低、降低支氣管的過度反應性。不幸的是，這些抗炎劑不能產生支氣管擴張作用。
目前正開發(fā)幾種新的特別是抑制氣喘炎癥具體方面的藥物。例如，白三烯受體拮抗劑(ICI-204,219,accolate)專門抑制白三烯介導的作用。白三烯與呼吸道炎癥和支氣管收縮的發(fā)生有關。
因此，盡管目前有許多藥物可用治療氣喘，這些化合物主要是緩解癥狀和/或具有明顯的副作用。因此，非常需要針對起因、而不是各級癥狀的新的治療途徑。氣喘和變態(tài)反應同樣依賴于IgE介導的結果。事實上，已知過量IgE的產生通常是變態(tài)反應、特別是變應性氣喘的誘因(Duplantier andCheng,Ann.Rep.Med.Chem.29:73-81(1994))。因此，降低IgE水平的化合物可以有效地治療氣喘和變態(tài)反應的基礎起因。
目前沒有一種治療可以消除過量的循環(huán)IgE。假設降低血漿IgE可以減少變應性反應，這一假設近來已經由chimeric抗IgE抗體、CGP-51901和重組人源化單克隆抗體rhuMAB-E25的臨床試驗結果得以證實。實際上，三家公司，Tanox Biosystems,Inc.,Genentech Inc.和Novartis AG正在合作研制人源化的抗IgE抗體(Bio WorldToday,1997年2月26日，第2頁)，該抗體將用于通過中和過量的IgE治療變態(tài)反應和氣喘。Taxon已經成功地試驗了抗IgE抗體，CGP-51901，在Ⅱ期臨床試驗中該抗體使155名患者的變應性鼻炎的鼻部癥狀的嚴重程度減輕并使持續(xù)時間縮短(Scrip #2080,1995年11月24日，第26頁)。Genentech近來公開了其重組人源化單克隆抗體rhuMAB-E25對536名患者進行的Ⅱ/Ⅲ期臨床試驗的正結果(Bio WorldToday,1998年11月10日，第1頁)。經與安慰劑相比，注射施用抗體rhuMAB-E25(最高劑量每2-4周需要300毫克)使患者需要另外的“援救”藥物(抗組胺藥和減充血劑)的天數減少50％。計劃在2000年對該產品提出NDA申請。抗IgE試驗的正結果提示借助下調IgE的治療策略可能是非常有效的。
發(fā)明概述本發(fā)明公開了用于治療與IgE含量過量有關的疾病的有關化合物。本發(fā)明的IgE的苯并咪唑抑制劑用下列通式表示 X和Y獨立地選自H、烷基、烷氧基、芳基、取代芳基、羥基、鹵素、氨基、烷氨基、硝基、氰基、CF3、OCF3、CONH2、CONHR和NHCOR1。R選自H、CH3、C2H5、C3H7、C4H9、CH2Ph和CH2C6H4-F(p-)。R1和R2獨立地選自H、芳基、取代芳基、環(huán)芳基取代的環(huán)芳基、多環(huán)環(huán)芳基、芐基、取代芐基等。取代基是烷基、芳基、CF3、CH3、OCH3、OH、CN、COOR、COOH等。
本發(fā)明另一方面公開了用于治療變應性疾病的組合物，該組合物含有上面公開的IgE的二?；讲⑦溥蛞种苿┖椭辽僖环N其他的活性成分以及可藥用稀釋劑。其他的活性成分可以選自短效β2-腎上腺素能興奮劑例如特布他林和舒喘寧，長效β2-腎上腺素能興奮劑例如沙美特羅和福莫特羅，抗組胺藥例如氯雷他定、氮卓斯汀和酮替芬，磷酸二酯酶抑制劑，抗膽堿能藥、皮質類固醇、炎性介質釋放抑制劑和白三烯受體拮抗劑。
本發(fā)明另一方面公開了用于治療變應性疾病的對稱和不對稱二?；鸵货；讲⑦溥蚧衔铮ㄒ韵禄衔?
本發(fā)明另一方面公開了制備治療與IgE含量過多有關疾病的藥物的方法。所述化合物具有以下結構式 X和Y獨立地選自H、烷基、烷氧基、芳基、取代芳基、羥基、鹵素、氨基、烷氨基、硝基、氰基、CF3、OCF3、CONH2、CONHR和NHCOR1。R選自H、CH3、C2H5、C3H7、C4H9、CH2Ph和CH2C6H4-F(p-)。R1和R2獨立地選自H、芳基、取代芳基、環(huán)芳基取代的環(huán)芳基、多環(huán)環(huán)芳基、芐基、取代芐基等。取代基是烷基、芳基、CF3、CH3、OCH3、OH、CN、COOR、COOH等。
本發(fā)明另一方面公開了治療患有與IgE含量過多有關疾病的哺乳動物的方法。該方法包括給哺乳動物施用足以減少哺乳動物中IgE含量的化合物。所述化合物具有以下結構式 X和Y獨立地選自H、烷基、烷氧基、芳基、取代芳基、羥基、鹵素、氨基、烷氨基、硝基、氰基、CF3、OCF3、CONH2、CONHR和NHCOR1。R選自H、CH3、C2H5、C3H7、C4H9、CH2Ph和CH2C6H4-F(p-)。R1和R2獨立地選自H、芳基、取代芳基、環(huán)芳基取代的環(huán)芳基、多環(huán)環(huán)芳基、芐基、取代芐基、烷基、環(huán)烷基取代的環(huán)烷基、多環(huán)環(huán)烷基、稠環(huán)脂族基、環(huán)丙基、取代的環(huán)丙基、環(huán)丁基、取代的環(huán)丁基、環(huán)戊基、取代的環(huán)戊基、環(huán)己基、取代的環(huán)己基、環(huán)庚基、取代的環(huán)庚基、雙環(huán)庚基、雙環(huán)辛基、雙環(huán)壬基、取代的雙環(huán)炔基、金剛烷基、取代的金剛烷基等，其中R1和R2中至少一個是芳族基團。取代基是烷基、芳基、CF3、CH3、OCH3、OH、CN、COOR、COOH等。
在上述方法的變化形式中，可以將至少一種其他活性成分與本發(fā)明化合物聯合給藥。其他活性成分可以在可藥用稀釋劑中與所述化合物結合并共同對哺乳動物給藥。其他活性成分可以是選自特布他林和舒喘寧的短效β2-腎上腺素能興奮劑。在變化的方法中，其他活性成分可以是選自沙美特羅和福莫特羅的長效β2-腎上腺素能興奮劑，或是選自氯雷他定、氮卓斯汀和酮替芬的抗組胺藥。在另一變化的方法中，其他活性成分可以是磷酸二酯酶抑制劑、抗膽堿能藥、皮質類固醇、炎性介質釋放抑制劑或白三烯受體拮抗劑。
本發(fā)明化合物優(yōu)選以每公斤體重、每天約0.01mg至約100mg的劑量分多次劑量給藥，給藥時間是以規(guī)定的時間間隔至少連續(xù)2天。
參照以下的詳細說明可以更充分地理解本發(fā)明范圍內的其他變化形式。
優(yōu)選實施方案的詳細描述本發(fā)明涉及適用于治療變態(tài)反應和/或氣喘或任何其他其中IgE為致病原的疾病的小分子IgE抑制劑(合成和/或釋放)。通過在體外和體內分析中抑制IgE水平的能力確定本文公開的具體化合物。通過參照下述體外和體內分析，本領域專業(yè)人員可以了解臨床治療方案的演變和最佳化。體外分析該分析是從用體內抗原引發(fā)開始，在體外測量繼發(fā)的抗體反應?；镜姆桨敢延形墨I記載，并且下列參數范圍已經最佳化，這些參數包括引發(fā)的抗原劑量和引發(fā)的時間長度、體外培養(yǎng)的細胞數目，引起繼發(fā)性IgE(以及其他Ig的)體外應答的抗原濃度、使IgE體外應答最佳化的胎牛血清(FBS)批料、引發(fā)CD4+T細胞和半抗原特異性B細胞的重要性以及ELISA分析對IgE的特異性(Marcelletti和KatzCellular Immunology 135:471-489(1991)；該文獻結合在本文中作為參考)。
為此目的采用更高通過量分析的實際方案。腹膜內注射吸附在4mg明磯上的10μg DNP-KLH使BALB/cByj小鼠免疫，并在15天后處死。切除脾，并用組織研磨機勻漿化，洗滌兩次，保持在補充有10％FBS、100U/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素和0.0005％2-巰基乙醇的DEME中。在有或無DNP-KLH(10ng/ml)存在下對脾細胞進行培養(yǎng)(2-3百萬個細胞/ml，0.2ml/孔，-式四份，96孔板)。向含有抗原的脾細胞培養(yǎng)物中加入試驗化合物(2μg/ml和50ng/ml)，并在37℃和10％CO2氣氛下孵育8天。
8天后收集培養(yǎng)物上清液，并采用Marcelletti和Katz(見上文)所述修飾的特異性同位型選擇性ELISA分析法測量Ig。對該分析進行修飾以便于達到高通過率。通過用DNP-KLH涂覆過夜制備ELISA板。用牛血清白蛋白(BSA)阻斷后，將等分量的各培養(yǎng)基上清液稀釋(用含有BSA、疊氮化鈉和Tween 20的磷酸鹽緩沖的鹽水(PBS)稀釋為1∶4)，加入ELISA板中，并在4℃于加濕盒中孵育過夜。在用生物素標記的山羊抗鼠IgE(b-GAME)、AP-抗生蛋白鏈霉素和底物連續(xù)培養(yǎng)后，對IgE的含量進行定量。
類似地測定抗原特異性IgG1，不同的是將培養(yǎng)物上清液稀釋20倍，并用生物素標記的山羊抗鼠IgG1(b-GAMG1)代替b-GAME。在將培養(yǎng)物上清液稀釋20倍并用生物素標記的山羊抗鼠IgG2a(b-GAMG2a)孵育后，在涂覆有DNP-KLH的板上測量IgG2a。通過與標準曲線進行比較，測定各同位型的量。所有抗體的可檢測水平是約200-400pg/ml，并且在IgE的ELISA中，與其他Ig同位型的交叉活性小于0.001％。體內分析對體外分析(如上所述)中發(fā)現具有活性的化合物進行進一步的試驗，以測定其在體內的抑制IgE反應的活性。使小鼠接受低劑量的輻射，然后用載體免疫，用抗原致敏7天后，小鼠具有加強的IgE反應。在抗原致敏之前和之后立即施用試驗化合物，測量藥物抑制IgE反應的能力。對血清中IgE、IgG1和IgG2a的含量進行比較。
經過一晝夜引發(fā)后，用250rad照射雌性BLAB/cByj小鼠7天。兩小時后，腹膜內注射吸附在4mg明礬上的2μg KLH使小鼠免疫。6天后連續(xù)2-7天注射藥物，每天一次后兩次。通常，以在含有10％乙醇和0.25％甲基纖維素的鹽水中的懸浮液形式經腹膜內注射和口服管飼法給藥(150μl/注射)。每一治療組由5-6只小鼠組成。給藥的第二天，腹膜內注射吸附在4mg明磯上的2μg DNP-KLH，然后在早晨立即注射藥物。用DNP-KLH激發(fā)后的7-21天取小鼠的血。
通過ELISA測定抗原特異性IgE、IgG1和IgG2a抗體。以14,000rpm的轉速離心眶骨膜的榨取物10分鐘，上清液用鹽水稀釋5倍，并再次離心。通過4種稀釋液(一式三份)的ELISA測定每一榨取物的抗體濃度，并與標準曲線、抗DNP IgE(1∶100至1∶800)、抗DNP IgG1(1∶100至1∶800)和抗DNP IgG2a(1∶1600至1∶12800)進行比較。IgE的二酰基苯并咪唑抑制劑合成以下通式所包括的幾種化合物，并在體外和體內分析中評價其下調IgE的有效性。 X和Y獨立地選自H、烷基、烷氧基、芳基、取代芳基、羥基、鹵素、氨基、烷氨基、硝基、氰基、CF3、OCF3、CONH2、CONHR和NHCOR1。R選自H、CH3、C2H5、C3H7、C4H9、CH2Ph和CH2C6H4-F(p-)。R1和R2獨立地選自H、芳基、取代芳基、環(huán)芳基取代的環(huán)芳基、多環(huán)環(huán)芳基、芐基、取代芐基、烷基、環(huán)烷基取代的環(huán)烷基、多環(huán)環(huán)烷基、稠環(huán)脂族基、環(huán)丙基、取代的環(huán)丙基、環(huán)丁基、取代的環(huán)丁基、環(huán)戊基、取代的環(huán)戊基、環(huán)己基、取代的環(huán)己基、環(huán)庚基、取代的環(huán)庚基、雙環(huán)庚基、雙環(huán)辛基、雙環(huán)壬基、取代的雙環(huán)炔基、金剛烷基、取代的金剛烷基等，其中R1和R2中至少一個是芳族基團。取代基是烷基、芳基、CF3、CH3、OCH3、OH、CN、COOR、COOH等。組合庫的合成采用下列合成反應制備本發(fā)明的二?；讲⑦溥蚧衔?，其中所需酰氯選擇下表中提供的R1和R2基團。 3的合成將4-硝基-1,2-亞苯基二胺(10g,65.3mmol)和4-氨基苯甲酸(8.95g,65.3mmol)置于圓底燒瓶中，緩緩加入磷酰氯(95ml)。在回流下攪拌反應混合物。18小時后，使反應物冷卻，并在劇烈攪拌下，緩緩倒入于錐形瓶中的冰水混合物中。綠黃色的沉淀形成，然后將其過濾，并用大量的水洗滌。將殘余物干燥，得到16.9g所需的粗產物。質譜分析(正離子)表明存在產物3。
4的合成在閃爍管中，將苯并咪唑3(800mg,3.14mmol)溶于無水吡啶(5ml)中，緩緩加入所需的酰氯(1.1當量)。反應在60℃爐中進行。16小時后，將反應物冷卻至室溫，并加入去離子(DI)水。沉淀形成，濾出沉淀，用水洗滌并空氣干燥。水層用乙酸乙酯(6×50ml)萃取，用無水硫酸鈉干燥，真空除去溶劑，得到有色固體。通過正離子質譜，發(fā)現在最初的沉淀和有機層中存在所需的一酰化產物。因此，合并所得固體殘余物，并用于還原步驟中。
4的還原將粗產物一?；趸讲⑦溥?(1.22g,3.40mmol)溶于MeOH(20ml)中，加入最小量的THF使其完全溶解。加入催化量的10％Pd/C，使溶液脫氣，并在3.4 atm的氫氣壓力下攪拌4小時。一旦經TLC監(jiān)測反應完全，即將反應混合物經硅藻土過濾，減壓除去溶劑，得到979g粗殘余物。一般的有機分析使用帶有Gilson 170 Diode Array UV檢測儀和以PE Sciex API100LC MS為基礎的檢測儀的Gilson semi-prep HPLC得到HPLC/MS數據。用帶有Waters 490E UV檢測儀的Waters 600E記錄HPLC數據?；衔镉肅H3CN(含0.0035％TFA)和水(含有0.01TFA)洗脫。所有的HPLC均使用Thomson Instrument Company的Advantage C18 60A 5μ50mm×4.6mm柱。通過在以PE Sciex API 100LC MS為基礎的檢測儀上直接注射并電噴離子化得到質譜數據。用Merck 60F-254背面預涂鋁的板進行薄層色譜。在購自EM Scientific的Merck硅膠60(230-400目)上進行閃式色譜操作。對稱二酰胺的合成通常由2-(4-氨基苯基)-5-氨基苯并咪唑制備本發(fā)明的對稱二?；讲⑦溥蚧衔铮渲?-(4-氨基苯基)-5-氨基苯并咪唑是通過使2-(4-硝基苯基)-6-硝基苯并咪唑得到的。 2-(4-硝基苯基)-6-硝基苯并咪唑如下制備二硝基苯并咪唑將4-硝基亞苯基二胺(6.4g,41.83mmol)和4-硝基苯甲酸(7.86g,47mmol)的混合物溶于POCl3(250ml)中，并加熱回流2小時。將反應混合物冷卻，倒入冰中，攪拌30分鐘。將所得固體過濾，用甲醇和碳酸氫鈉洗滌以除去未反應的酸，干燥過夜，得到所需產物，為棕色固體(5.8g)。通過電噴質譜測定產物的性質(熔點＞300℃)。
如下制備2-(4-氨基苯基)-5-氨基苯并咪唑。將上述固體(75g)懸浮在THF(75ml)中，向其中加入Pd-C(Pd重量為10％)。用氫氣吹掃反應瓶，并在氫氣氛下(用球膽加氣)攪拌過夜。TLC和MS顯示仍然存在原料，因此使反應繼續(xù)進行過周末。TLC表明反應完全，反應物經硅藻土過濾，用甲醇洗滌。減壓除去溶劑，得到深棕色固體(0.37g)，該產物無需純化即可使用。 2-(4-氨基苯基)-5-氨基苯并咪唑或者，通過下述還原制備2-(4-氨基苯基)-5-氨基苯并咪唑將2-(4-硝基苯基)-6-硝基苯并咪唑(8.9g,31mmol)懸浮在濃鹽酸(100ml)中，向其中加入氯化亞錫(42.3g,180mmol)。將反應混合物加熱回流5小時。使該混合物冷卻至室溫，加入乙醇使所需產物的鹽酸鹽沉淀。將所得固體過濾，再溶于水中，并通過加入濃氫氧化銨使溶液堿化。將所得沉淀過濾，并真空干燥過夜，得到所需產物，為灰色固體(6.023g,26.9mmol,87％)。通過電噴質譜和HPLC測定產物的性質(熔點222-227℃)。
由2-(4-硝基苯基)-5-甲氧基苯并咪唑合成2-(4-氨基苯基)-5-甲氧基苯并咪唑，2-(4-硝基苯基)-5-甲氧基苯并咪唑的制備方法如下將1,2-二氨基-4-甲氧基苯(1.26g,10.0mmol)與4-硝基苯甲酸(1.67g,9.8mmol)混合，并溶于POCl3(10ml)中，加熱回流2.5小時。使反應混合物冷卻并小心地倒入冰中。濾出所得固體，用碳酸氫鈉洗滌，無需進一步純化即可使用。 2-(4-硝基苯基)-5-甲氧基苯并咪唑如下制備2-(4-氨基苯基)-5-甲氧基苯并咪唑在室溫下攪拌21小時，將1g上述硝基苯并咪唑溶于30％Na2S·9H2O(20ml)中。反應混合物用水稀釋，用乙酸乙酯萃取。合并的有機提取液用硫酸鈉干燥并真空濃縮。通過質譜測定產物的性質。 2-(4-氨基苯基)-5-甲氧基苯并咪唑由2-(4-硝基苯基)-5,6-二氯苯并咪唑合成2-(4-氨基苯基)-5,6-二氯苯并咪唑，2-(4-硝基苯基)-5,6-二氯苯并咪唑的制備方法如下1,2-二氨基-4,5-二氯苯(1.68g,10.0mmol)與4-硝基苯甲酸(1.58g,9.3mmol)混合，溶于POCl3(10ml)中，加熱回流2.5小時。使反應混合物冷卻并小心地倒入冰中。濾出所得固體，用碳酸氫鈉洗滌，無需進一步純化即可使用。 2-(4-硝基苯基)-5,6-二氯苯并咪唑如下制備2-(4-氨基苯基)-5,6-二氯苯并咪唑在室溫下攪拌21小時，將1g上述硝基苯并咪唑溶于30％Na2S·9H2O(20ml)中。反應混合物用水稀釋，用乙酸乙酯萃取。合并的有機提取液用硫酸鈉干燥并真空濃縮。通過質譜測定產物的性質。 2-(4-氨基苯基)-5,6-二氯苯并咪唑由2-(4-硝基苯基)-7-甲基苯并咪唑合成2-(4-氨基苯基)-7-甲基苯并咪唑，2-(4-硝基苯基)-7-甲基苯并咪唑的制備方法如下1,2-二氨基-3-甲基苯(1.24g,10.0mmol)與4-硝基苯甲酸(1.69g,9.8mol)混合，溶于POCl3(10ml)中，加熱回流2.5小時。使反應混合物冷卻并小心地倒入冰中。濾出所得固體，用碳酸氫鈉洗滌，無需進一步純化即可使用。 2-(4-硝基苯基)-7-甲基苯并咪唑如下合成2-(4-氨基苯基)-7-甲基苯并咪唑在室溫下攪拌4.5小時，將1g上述硝基苯并咪唑溶于20％Na2S·9H2O(20ml)中。反應混合物用水稀釋，用乙酸乙酯萃取。合并的有機提取液用硫酸鈉干燥并真空濃縮。通過質譜測定產物的性質。 2-(4-氨基苯基)-7-甲基苯并咪唑由2-(4-硝基苯基)-6-甲基苯并咪唑合成2-(4-氨基苯基)-6-甲基苯并咪唑，2-(4-硝基苯基)-6-甲基苯并咪唑的制備方法如下1,2-二氨基-4-甲基苯(1.24g,9.8mmol)與4-硝基苯甲酸(1.6g,9.9mmol)混合，并溶于POCl3(10ml)中，加熱回流2.5小時。使反應混合物冷卻并小心地倒入冰中。濾出所得固體，用碳酸氫鈉洗滌，無需進一步純化即可使用。 2-(4-硝基苯基)-6-甲基苯并咪唑如下合成2-(4-氨基苯基)-6-甲基苯并咪唑在室溫下攪拌4.5小時，將1g上述硝基苯并咪唑溶于30％Na2S·9H2O(20ml)中。反應混合物用水稀釋，用乙酸乙酯萃取。合并的有機提取液用硫酸鈉干燥并真空濃縮。通過質譜測定產物的性質。 2-(4-氨基苯基)-6-甲基苯并咪唑由2-(4-硝基苯基)-5,6-二甲基苯并咪唑合成2-(4-氨基苯基)-5,6-二甲基苯并咪唑，2-(4-硝基苯基)-5,6-二甲基苯并咪唑的制備方法如下1,2-二氨基-4,5-二甲基苯(1.38g,10.1mmol)與4-硝基苯甲酸(1.69g,9.9mmol)混合，并溶于POCl3(10ml)中，加熱回流2.5小時。使反應混合物冷卻并小心地倒入冰中。濾出所得固體，用碳酸氫鈉洗滌，無需進一步純化即可使用。 2-(4-硝基苯基)-5,6-二甲基苯并咪唑如下制備2-(4-氨基苯基)-5,6-二甲基苯并咪唑在室溫下攪拌4.5小時，將1g上述硝基苯并咪唑(31.1)溶于30％Na2S·9H2O(20ml)中。反應混合物用水稀釋，用乙酸乙酯萃取。合并的有機提取液用硫酸鈉干燥并真空濃縮。通過質譜測定產物的性質。 2-(4-氨基苯基)-5,6-二甲基苯并咪唑接下來通過下列一種方法完成對稱二酰胺的制備方法A將2-(4-氨基苯基)-6-氨基苯并咪唑(1mmol)懸浮于THF(5ml)中，向其中加入DIEA(2.5mmol)，并將混合物冷卻至-78℃。向上述冷卻的混合物中加入酰氯(2.5mmol)，并使其溫熱至室溫過夜。向反應物中加入水(2ml)，并用乙酸乙酯萃取。合并的有機提取液用碳酸氫鈉水溶液洗滌，并減壓濃縮。所得殘余物經硅膠(己烷/乙酸乙酯或甲醇/二氯甲烷)或反相HPLC(乙腈/水)純化。
方法B將2-(4-氨基苯基)-6-氨基苯并咪唑(1mmol)和DMAP(催化量的(cat.))溶于吡啶(5ml)中。向上述溶液中加入酰氯(2.5mmol)，并將反應物在60℃攪拌過夜。使反應物冷卻至室溫，加入水使產物沉淀。過濾收集所得固體，用己烷和水以及碳酸氫鈉水溶液洗滌。所得殘余物經硅膠(己烷/乙酸乙酯或甲醇/二氯甲烷)或反相HPLC(乙腈/水)純化。
方法C將2-(4-氨基苯基)-6-氨基苯并咪唑(1mmol)懸浮于THF(10ml)中，向其中加入在0.5ml水中的碳酸鉀(2.5mmol)，并將混合物冷卻至-78℃。向上述冷卻的混合物中加入酰氯(2.5mmol)，并使其溫熱至室溫過夜。向反應物中加入水(10ml)，并用乙酸乙酯萃取。合并的有機提取液用碳酸氫鈉水溶液洗滌，并減壓濃縮。所得殘余物經硅膠(己烷/乙酸乙酯或甲醇/二氯甲烷)或反相HPLC(乙腈/水)純化。
方法D將羧酸(2.2mmol)、EDC(2.2mmol)和DMAP(催化量的(cat.))溶于熱吡啶中。向上述溶液中加入2-(4-氨基苯基)-6-氨基苯并咪唑(1mmol)，并加熱至60℃過夜。使冷卻的反應混合物在水和乙酸乙酯之間分配。有機層用碳酸氫鈉洗滌，用硫酸鈉干燥并真空濃縮。所得殘余物經硅膠(己烷/乙酸乙酯或甲醇/二氯甲烷)或反相HPLC(乙腈/水)純化。二酰基苯并咪唑類化合物合成包括在所公開通式中的下列化合物，并對其抑制IgE的能力進行試驗。這些化合物如在上面的發(fā)明概述中所示。IgE下調活性在體外和體內分析中，對所有公開的化合物抑制IgE的能力進行試驗。在體外和體內試驗中它們均具有上述活性?；衔镌隗w外試驗中的活性(IC50)在約100pM至1nM的范圍內。在體內分析中，IC50的范圍是約100μg/kg體重/天至約10mg/kg體重/天。總的來說，二酰基苯并咪唑化合物比一?；讲⑦溥蚧衔锔鼮橛行?。IgE反應的抑制采用上述體外和體內分析測定本發(fā)明小分子的抑制活性。上述所有化合物均具有抑制IgE反應的活性。在體外分析中，Ⅰ-Ⅺ種化合物的50％抑制濃度為1pM至10μM。在體內分析中，當分多次劑量(如每天2-4次)、以至少連續(xù)2-7天給藥時，各化合物的有效濃度范圍是從小于約0.01mg/kg/天至約25mg/kg/天。因此，本發(fā)明的小分子抑制劑適用于降低抗原引起的IgE濃度增加，因此可用于治療IgE依賴過程、例如變態(tài)反應和尤其是變應性氣喘。治療方案有效治療具體的變態(tài)反應或疾病的IgE抑制劑化合物的量取決于疾病的性質，并且可以通過標準臨床技術確定。在給定狀態(tài)所用的準確劑量還將取決于所選擇的化合物以及疾病的嚴重程度，并且應該根據醫(yī)師的判斷和每個患者的情況決定。醫(yī)師根據患者IgE的水平與肺的標準指數和血液動力學的變化之間的劑量反應關系確定和調整合適的劑量。此外，本領域專業(yè)人員可以理解，按照本文所公開的體外和體內篩選方案、無需進行過多的實驗即可確定劑量范圍(參見例如，Hasegawa等，J.Med.Chem.40:395-407(1997)和Ohmori等，Int.J.Immunopharmacol.15:573-579(1993)；采用類似的體外和體內分析通過萘衍生物確定抑制IgE的劑量-反應關系；該文獻結合在本文中作為參考)。
最初，化合物的合適劑量通常為約0.001mg至約300mg/kg體重/天，分多次劑量給藥，更有效的是約0.01mg至約100mg/kg體重/天，分多次劑量給藥。所述化合物優(yōu)選以適合于下列途徑的藥物制劑形式系統(tǒng)給藥，所述途徑是例如口服、氣溶膠、靜脈內、皮下或任何其他可有效提供系統(tǒng)劑量活性化合物的途徑。藥物制劑的組合物是本領域公知的。優(yōu)選的治療方案包括定期給藥。此外，對于連續(xù)接觸變應原引發(fā)的變應性反應可以進行長期治療。對于單一變應原激發(fā)的動物，連續(xù)2-7天，每天一次或每天兩次給藥可以有效地抑制IgE反應。因此，優(yōu)選的方案是，以規(guī)定的時間間隔、至少連續(xù)2天施用該化合物。當然，治療方案、包括給藥頻率和治療時間可以由專業(yè)醫(yī)師根據變應原的性質、劑量、頻率和接觸變應原的時間以及標準臨床指數決定，并且可以根據需要進行調整，以最佳地下調IgE。
在本發(fā)明的一個具體實施方案中，可以將IgE抑制化合物與所公開的一種或多種其他小分子抑制劑聯合給藥，以產生最佳的患者IgE反應下調作用。再者，可以預見，一種或多種本發(fā)明化合物可以與已知的或以后發(fā)現的治療變態(tài)反應或氣喘的基礎起因以及急性癥狀的其他藥物聯合給藥。預期包括在本發(fā)明范圍內這種聯合治療包括將一種或多種小分子IgE抑制劑與一種或多種其他已知有效減輕至少一種所述疾病癥狀的成分混合。在變化的方式中，本文所公開的小分子IgE抑制劑可以與其他藥物分別給藥，但是應在同樣的病程中分別給藥，其中IgE抑制劑和緩解化合物根據其獨立的有效治療方案給藥。
權利要求
1．藥物組合物，含有下列化合物 其中X和Y獨立地選自H、烷基、烷氧基、芳基、取代芳基、羥基、鹵素、氨基、烷氨基、硝基、氰基、CF3、OCF3、CONH2、CONHR和NHCOR1；其中R選自H、CH3、C2H5、C3H7、C4H9、CH2Ph和CH2C6H4-F(p-)；并且其中R1和R2獨立地選自H、芳基、取代芳基、環(huán)芳基取代的環(huán)芳基、多環(huán)環(huán)芳基、芐基、取代芐基、烷基、環(huán)烷基取代的環(huán)烷基、多環(huán)環(huán)烷基、稠環(huán)脂族基、環(huán)丙基、取代的環(huán)丙基、環(huán)丁基、取代的環(huán)丁基、環(huán)戊基、取代的環(huán)戊基、環(huán)己基、取代的環(huán)己基、環(huán)庚基、取代的環(huán)庚基、雙環(huán)庚基、雙環(huán)辛基、雙環(huán)壬基、取代的雙環(huán)炔基、金剛烷基、取代的金剛烷基等，其中R1和R2中至少一個是芳族基團。
2．權利要求1的藥物組合物，其中R1和R2取代基選自烷基、芳基、CF3、CH3、OCH3、OH、CN、COOR和COOH。
3．權利要求2的藥物組合物，其中所述化合物選自
4．權利要求1-3中任一項的藥物組合物，用于治療與IgE過多有關的疾病。
5．權利要求4的藥物組合物，還含有至少一種其他的具有減輕至少一種與IgE過多有關疾病癥狀的成分。
6．權利要求5的藥物組合物，其中所述至少一種其他成分選自短效β2-腎上腺素能興奮劑、長效β2-腎上腺素能興奮劑、抗組胺藥、磷酸二酯酶抑制劑、抗膽堿能藥、皮質類固醇、炎性介質釋放抑制劑和白三烯受體拮抗劑。
7．權利要求1-3中任一項的藥物組合物在制備治療與IgE過多有關疾病的藥物中的應用。
全文摘要
本發(fā)明涉及二?；讲⑦溥蝾愃莆?它們是對變應原反應的IgE的抑制劑。這些化合物適用于治療變態(tài)反應和/或氣喘或其中IgE為致病原的其他疾病。
文檔編號C07D413/04GK1311679SQ99809105
公開日2001年9月5日 申請日期1999年5月21日 優(yōu)先權日1998年5月22日
發(fā)明者J·西爾卡, M·L·里查茲, M·G·坎貝爾, M·W·馬約爾 申請人:阿文尼爾藥品公司