專利名稱：具有高水溶性的雷公藤內(nèi)酯前藥的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用作免疫抑制劑和抗炎劑的化合物。該化合物具有良好的水溶性并在體內(nèi)轉(zhuǎn)化為生物活性物質(zhì)。
參考文獻(xiàn)Ferrier,R.J.碳水化合物化學(xué)，Kennedy,J.F.,Ed.,Clarendon Press,Oxford 10(1990)。Garver,L.C.等，J.Am.Chem.Soc.104:867(1982)。Gleichmann,E.等，Immuno！.Today 5:324(1984)Hormi,O.E.O.和Nasman,J.H.,Syn.Commun.16:69(1986)。Kocienski,P.J.，保護(hù)基，Georg Thieme Verlag,Stuttgart(1994)。Komgold,R.和Sprent,J.,J.Exp.Med.1～:1687(1978)。Kupchan,S.M.等，J.Am.Chem.Soc.94:7194(1972)。Kupchan,S.M.等，美國(guó)專利3,005,108(1977)。Lipsky,P.E.等，美國(guó)專利5,294,443(1994)。Ma,P-C.等，J.Chin.Pharm.Sci 1:12(1992)。Mori,S.等，Tetrahedron 47(27):5051-5070(1991)。Morris,R.E.,Transplant Proc.23(6):2722-2724(1991)。Morris,RE.等，Transpiant Proc.L3(1):238-240(1991)。Murase,N.等，Transplantation 55:701(1993)。Ono和Lindsey,J.Thor.Cardiova′c.Surg.57(2):225-29(1969)。Pu,L.等，中國(guó)藥理學(xué)報(bào)11:76(1990)。Wang,J.和Morris,R.E.,Transplantation Proc.23:699(1991)。Yu等，Acta PharmaceuticaSinica 27(11):830-836(1992)。Zheng,J.等，中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào)13:391(1991)。Zheng,J.等，中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào)16:24 (1994)。
背景技術(shù)：
免疫抑制劑廣泛地應(yīng)用于治療自免疫疾病以及治療或預(yù)防移植排斥，包括治療移植物抗宿主疾病(GVHD)，這是一種移植的骨髓細(xì)胞攻擊受體細(xì)胞的疾病。普通的免疫抑制劑包括硫唑嘌呤、皮質(zhì)類固醇、環(huán)磷酰胺、氨甲蝶呤、6-巰基嘌呤、長(zhǎng)春新堿和環(huán)孢菌素A?？偠灾?，這些藥物中沒(méi)有一種是完全有效的，并且大多數(shù)受到嚴(yán)重毒性的限制。例如，環(huán)孢菌素A是一種廣泛應(yīng)用的藥物，對(duì)腎具有顯著的毒性。此外，有效治療所需的劑量使患者對(duì)機(jī)會(huì)性侵入物感染的敏感性增加。
已經(jīng)表明，從中藥植物Tripterygium wilfordii(TW)中分離的許多化合物具有免疫抑制活性。有代表性的化合物包括雷公藤內(nèi)酯、16-羥基雷公藤內(nèi)酯、雷酚內(nèi)酯、雷公藤羥內(nèi)酯和雷公藤氯內(nèi)酯醇，例如在Lipsky等(1994)和Zheng等(1991；1994)中所述。
無(wú)論如何，這些化合物的給藥和治療有效性受到其低水溶性的限制。該問(wèn)題是通過(guò)下述方法解決的在乙醇和聚乙氧基化蓖麻油(例如“CREMOPHOR ELTM”)的混合物中配制該化合物，然后在鹽水中稀釋供靜脈內(nèi)注射給藥。但是，該制劑具有很高的毒性，因?yàn)槿芙膺@些化合物需要高濃度的加溶劑。例如，在該制劑中，加溶劑(乙醇加“CREMOPHOR ELTM”)與雷公藤內(nèi)酯的比例通常在1000∶1或者更高的數(shù)量級(jí)，因?yàn)槔坠賰?nèi)酯的溶解度很差(Morris,1991；Morris等，1991)。懸浮液比溶液的劑量標(biāo)準(zhǔn)化更成問(wèn)題。
因此，需要提供具有較低毒性和改進(jìn)的水溶解度的免疫抑制化合物。理想的是，水溶液形式的該化合物表現(xiàn)出免疫抑制活性，或者可以在體內(nèi)轉(zhuǎn)化為免疫抑制形式。
當(dāng)結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明進(jìn)行下列詳細(xì)的描述時(shí)，本發(fā)明的這些和其他目的及特征將會(huì)變得更加清楚。
附圖的簡(jiǎn)要說(shuō)明

圖1表示結(jié)構(gòu)式Ⅰ的在內(nèi)酯環(huán)上衍生的雷公藤內(nèi)酯的制備；圖2A-2C表示結(jié)構(gòu)式Ⅰ的具體實(shí)例的舉例；圖3表示結(jié)構(gòu)式Ⅱ的雷公藤內(nèi)酯的內(nèi)酯環(huán)開環(huán)衍生物的制備；圖4A-4C表示結(jié)構(gòu)式Ⅱ的具體實(shí)例的舉例；圖5表示結(jié)構(gòu)式Ⅲ的雷公藤內(nèi)酯的環(huán)氧環(huán)開環(huán)衍生物的制備；圖6A-6C表示結(jié)構(gòu)式Ⅲ的具體實(shí)例的舉例。
發(fā)明詳述Ⅰ．定義除非另外指明，各術(shù)語(yǔ)具有下列含義。
“烷基”是指含有碳和氫的支鏈或直鏈全飽和開鏈一價(jià)基團(tuán)。烷基的實(shí)例是甲基、乙基、正丁基、叔丁基、正庚基和異丙基?！碍h(huán)烷基”是指含有碳和氫的完全飽和的環(huán)一價(jià)基團(tuán)，該基團(tuán)可以被烷基進(jìn)一步取代。環(huán)烷基的實(shí)例是環(huán)丙基、甲基環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、乙基環(huán)戊基和環(huán)己基?！暗图?jí)烷基”是指具有1-6個(gè)碳原子的烷基，例如甲基、乙基、正丁基、異丁基、異戊基、正戊基和異戊基。
“鏈烯基”是指含有碳和氫的一價(jià)或二價(jià)不飽和基團(tuán)，優(yōu)選單不飽和基團(tuán)，并且可以是環(huán)、支鏈或直鏈的?！暗图?jí)鏈烯基”是指具有1-4個(gè)碳原子的鏈烯基。
本發(fā)明所述“雷公藤內(nèi)酯衍生物”或“雷公藤內(nèi)酯類似物”是指以雷公藤內(nèi)酯為基礎(chǔ)的化合物、在母體化合物內(nèi)酯環(huán)或12,13-環(huán)氧基上衍生化的16-羥基雷公藤內(nèi)酯或雷公藤羥內(nèi)酯(2-羥基雷公藤內(nèi)酯)。
對(duì)于本發(fā)明公開的目的，使用下列位次編排方案對(duì)雷公藤內(nèi)酯和雷公藤內(nèi)酯類似物進(jìn)行命名 Ⅱ．雷公藤內(nèi)酯類似物此節(jié)描述了結(jié)構(gòu)式Ⅰ-Ⅲ以及下面描述的化合物的制備。衍生于具有疏水取代基的雷公藤內(nèi)酯的本發(fā)明化合物與非衍生的原始化合物相比具有更大的水溶性，并且可以在體內(nèi)有效地水解并轉(zhuǎn)化為該母體化合物。該化合物適于用作免疫抑制和抗炎應(yīng)用的前藥。盡管結(jié)構(gòu)式Ⅰ-Ⅲ中的每一個(gè)表示了在雷公藤內(nèi)酯核的一個(gè)位置進(jìn)行修飾的化合物，但是也包括具有多于一個(gè)修飾的化合物。 本發(fā)明化合物可以由從中藥植物Tripterygium wilfordii(TW)的根木質(zhì)部或其他已知來(lái)源得到的雷公藤內(nèi)酯制備。TW植物生長(zhǎng)于中國(guó)的福建省以及其他南方?。籘W植物原料通常是從中國(guó)得到的或者在美國(guó)經(jīng)商業(yè)渠道獲得。雷公藤內(nèi)酯及其某些衍生物(例如，雷公藤羥內(nèi)酯和16-羥基雷公藤內(nèi)酯)的制備方法是本領(lǐng)域已知的，并且描述于例如Kupchan等(1972,1977)；Lipsky等(1994)；Pu等(1990)和Ma等(1992)的文章中。
A．結(jié)構(gòu)式Ⅰ的化合物在結(jié)構(gòu)式Ⅰ的化合物中，OR1是可水解的親水基團(tuán)，例如羧酸酯、無(wú)機(jī)酯或者通過(guò)端基異構(gòu)體的氧與母體化合物連接的一-、二-或三糖。該羧酸或無(wú)機(jī)酯具有選自碳、硫、磷和硼的中心原子，并且有至少一個(gè)氧原子和至少一個(gè)-O-Y-Z基團(tuán)與中心原子相連。在該基團(tuán)中，Y表示支鏈或直鏈C1-C6烷基或鏈烯基鏈，Z表示氫、或者優(yōu)選表示選自下列的極性基團(tuán)酮基、醛基、羧酸基、羧酸酯基、羥基、烷氧基、聚醚基、硫羥基、烷硫基、氨基、烷氨基、氰基、硝基、硫酸根、硝酸根、磷酸根或5-至7-元雜環(huán)，雜環(huán)的環(huán)原子選自碳、氮、氧和硫，其中包括3-6個(gè)環(huán)碳原子。該雜環(huán)包括例如吡啶、吡咯烷、哌嗪和嗎啉。
所述無(wú)機(jī)酯的實(shí)例包括亞硫酸酯(-O-S(=O)-OR)、亞磺酸酯(-O-S(=O)-R)、硫酸酯(-O-S(=O)2-OR)、磺酸酯(-O-S(=O)2-R)、磷酸酯(-O-P(=O)R(OR)2)和硼酸酯(-O-B(OR)2)。
如果Z是陰離子例如羧酸根，則正電荷抗衡離子優(yōu)選為無(wú)機(jī)金屬例如Na+、K+或Mg2+，或者質(zhì)子化的有機(jī)胺例如氨丁三醇(三(羥甲基)氨基甲烷)。如果Z是堿性胺，則該化合物可以是具有負(fù)電荷抗衡離子例如氯、溴、碘、乙酸根、草酸根、馬來(lái)酸根、富馬酸根、甲磺酸根或甲苯磺酸根的質(zhì)子化的鹽。
優(yōu)選的是R1選自下列基團(tuán) 和 其中R2是低級(jí)烷基，R3是H或-(C=O)R,R是低級(jí)烷基，R4是H或低級(jí)烷基，n=0-4,m=1-2，并且X=CH2、O或NR2。取代基OR3是OH或O-(C=O)R，其中R是低級(jí)烷基，。
取代基的親水性使該化合物的水溶性增加，并且OR1的水解(例如體內(nèi)水解)使不飽和的雷公藤內(nèi)酯的內(nèi)酯(丁烯羥酸內(nèi)酯)再生。
可以如下制備結(jié)構(gòu)式Ⅰ的化合物通過(guò)不飽和內(nèi)酯(丁烯羥酸內(nèi)酯)與堿反應(yīng)生成烯醇鹽(或酯)，然后與親電試劑例如R1-X(其中X是可置換的離去基團(tuán))或者活化的?；噭?，例如酰氯、酸酐或羰基咪唑反應(yīng)以進(jìn)行烷基化(參見Hormi等和Garver等的文獻(xiàn))。參見例如圖1，其中將通過(guò)在無(wú)水THF中與氫化鈉反應(yīng)制備得到的丁烯羥酸內(nèi)酯用戊二酸酐?；?，得到羧酸端基的酯衍生物。值得注意的是，酰化反應(yīng)還可以在碳原子上發(fā)生，得到酮副產(chǎn)物。在此情況下，可以采用常規(guī)方法例如硅膠柱色譜分離產(chǎn)物。
末端的酸與氨丁三醇反應(yīng)得到圖2B所示的鹽。其他典型的結(jié)構(gòu)式Ⅰ類似物示于圖2A和2C中。
通過(guò)類似的丁烯羥酸內(nèi)酯與適當(dāng)活化的無(wú)機(jī)酸衍生物例如鹵化物或酸酐(如SO3)的堿催化反應(yīng)，制備無(wú)機(jī)酯衍生物。對(duì)于制備苷來(lái)說(shuō)，R1X是葡糖基鹵或其他活化的葡糖基衍生物。一種類型的該衍生物是乙酰亞胺酸(acetimidate)活化的苷，它可以通過(guò)適當(dāng)保護(hù)的葡糖基鹵與仲酰胺在Ag2O和堿存在下反應(yīng)進(jìn)行制備(參見例如Ferrier,in Kennedy,p.352)。在此類化合物以及下列結(jié)構(gòu)式Ⅱ和Ⅲ化合物的制備中，通常需要保護(hù)14位的羥基。因此，在這些結(jié)構(gòu)中的OR3基團(tuán)是羥基或者優(yōu)選-O(C=O)R，其中R是低級(jí)烷基。為了使制備簡(jiǎn)單，通常使用簡(jiǎn)單的酯例如乙?；?。
B．結(jié)構(gòu)式Ⅱ的化合物在另一具體實(shí)施方案中，雷公藤內(nèi)酯類似物是如上所示的結(jié)構(gòu)式Ⅱ的化合物?；鶊F(tuán)OR3如上所定義，并且優(yōu)選低級(jí)?；缫阴；；鶊F(tuán)OR5優(yōu)選為-O-Y-Z或-O-(C=O)-Y-Z，其中Y是支鏈或直鏈C1-C6烷基或鏈烯基鏈，并且Z是氫或者選自下列的極性基團(tuán)酮基、醛基、羧酸基、羧酸酯基、氨基、烷氨基、羥基、烷氧基、聚醚基、硫羥基、烷硫基、氰基、硝基、無(wú)機(jī)酯基、或5-至7-元雜環(huán)，雜環(huán)的環(huán)原子選自碳、氮、氧和硫，其中包括3-6個(gè)環(huán)碳原子。R5還可以是與端基異構(gòu)中心C14連接的一-、二-或三糖。
再者，如果Z是陰離子例如羧酸根，則正電荷抗衡離子優(yōu)選為無(wú)機(jī)金屬例如Na+、K+或Mg2+，或者質(zhì)子化的有機(jī)胺例如氨丁三醇。如果Z是堿性胺，則該化合物可以是具有負(fù)電荷抗衡離子例如氯、溴、碘、乙酸根、草酸根、馬來(lái)酸根、富馬酸根、甲磺酸根或甲苯磺酸根的質(zhì)子化的鹽。
優(yōu)選的是R5為下列基團(tuán) 和 其中R2是低級(jí)烷基，R3是-(C=O)R,R是低級(jí)烷基，R4是H或低級(jí)烷基，p=0-6,m=1-2,n=1-4，并且X=CH2、O或NR2。
這些化合物是通過(guò)用含羥基的化合物使雷公藤內(nèi)酯的內(nèi)酯環(huán)轉(zhuǎn)酯化制備的。優(yōu)選使用親水的醇(例如糖，或者圖3所示的取代雜環(huán))進(jìn)行轉(zhuǎn)酯化，以增加所得化合物的水溶性。打開內(nèi)酯環(huán)所產(chǎn)生的羥基例如與所示的酰氯反應(yīng)，得到可水解的基團(tuán)例如酯，該酯在體內(nèi)水解可以使醇再生。
典型的合成示于圖3中，在此合成中，雷公藤內(nèi)酯與1-(2-羥乙基)嗎啉在催化量的DMAP存在下進(jìn)行反應(yīng)。然后將生成的游離羥基以及游離的14-羥基酰化，得到最終化合物。其他實(shí)例示于圖4A-4C中。當(dāng)該化合物以前藥形式給藥時(shí)，酯基在體內(nèi)水解裂解，并且3位和4位的酯和醇反應(yīng)以生成雷公藤內(nèi)酯的內(nèi)酯環(huán)。
C．結(jié)構(gòu)式Ⅲ的化合物在另一具體實(shí)施方案中，雷公藤內(nèi)酯類似物是如上所示的結(jié)構(gòu)式Ⅲ的化合物，其中R6是選自下列的離去基團(tuán)烷基磺酸根、氟烷基磺酸根、芳基磺酸根、氟磺酸根、硝酸根、烷基磷酸根、烷基硼酸根、三烷基銨和二烷基锍。優(yōu)選的離去基團(tuán)是甲苯磺酸根、甲磺酸根、氟磺酸根、三氟甲磺酸根、硝酸根和烷基磷酸根或硼酸根、-OP(O)(OR4)2和-OB(OR4)2所示的基團(tuán)，其中R4是氫或低級(jí)烷基?；鶊F(tuán)OR3是-OH或-O-(C=O)-R，其中R是低級(jí)烷基。
如圖5所示，通過(guò)雷公藤內(nèi)酯12,13環(huán)氧基的堿催化開環(huán)制備這些化合物。如Yu等人所述，雷公藤內(nèi)酯的12,13環(huán)氧化物立體位阻小，并且比7,8和9,11環(huán)氧化物更易反應(yīng)。通過(guò)置換12-位離去基團(tuán)，環(huán)氧化物可以在體內(nèi)再生，恢復(fù)成雷公藤內(nèi)酯結(jié)構(gòu)。
在圖5所示的合成中，首先將C14羥基作為芐基醚保護(hù)，然后通過(guò)氫化將保護(hù)基除去。親核離子，通常是氫氧根離子，攻擊位阻小的環(huán)氧化物12位碳。然后將所得1,2-二醇的12-羥基轉(zhuǎn)化為離去基團(tuán)R6，此處為甲苯磺酸根。結(jié)構(gòu)式Ⅲ化合物的其他實(shí)例示于圖6A-6C中。
根據(jù)需要，可以將13-羥基(和14-羥基)轉(zhuǎn)化為可水解基團(tuán)，這樣該化合物在貯存時(shí)更穩(wěn)定，但是在體內(nèi)仍然會(huì)轉(zhuǎn)化(盡管更加緩慢)為環(huán)氧化物。由于13-羥基所連接的基團(tuán)是叔基并因此反應(yīng)緩慢，所以優(yōu)選使用沒(méi)有位阻的、活性?；瘎├缫阴Ｂ?。Ⅲ．治療組合物含有本發(fā)明雷公藤內(nèi)酯類似物的制劑可以是固體、半固體、凍干粉或液體劑型，例如片劑、膠囊、粉末、持續(xù)釋放的制劑、溶液、懸浮液、乳液、油膏、洗劑或氣霧劑，優(yōu)選適用于精確用量簡(jiǎn)單給藥的單位劑型。該組合物通常包括常規(guī)的可藥用載體或賦形劑，并且還可以包括其他藥物活性物質(zhì)、載體或輔劑。優(yōu)選的是，該組合物含有約0.5％-75％(重量)本發(fā)明的一種或多種化合物，余量由合適的可藥用賦形劑組成。對(duì)于口服給藥來(lái)說(shuō)，賦形劑包括藥用級(jí)的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、滑石、纖維素、葡萄糖、明膠、蔗糖、碳酸鎂等。如果需要，該組合物還可以含有少量的無(wú)毒助劑物質(zhì)例如潤(rùn)濕劑、乳化劑或緩沖劑。
該組合物可以經(jīng)口服、經(jīng)皮或者經(jīng)非腸道(例如靜脈內(nèi)、皮下、腹膜內(nèi)或肌內(nèi))給藥。對(duì)于口服液體制劑來(lái)說(shuō)，可以將該組合物制備成溶液、懸浮液、乳液或糖漿的形式，這些組合物可以以液體形式或者適用于在水或生理鹽水中水合的干燥形式提供。對(duì)于非腸道給藥來(lái)說(shuō)，可注射的非腸道給藥組合物通常在適宜的靜脈注射溶液、例如無(wú)菌生理鹽水溶液中含有雷公藤內(nèi)酯類似物。
通過(guò)將雷公藤內(nèi)酯類似物(約0.5％至約20％)以及任選的可藥用輔劑溶解或者分散于載體例如鹽水溶液、葡萄糖水溶液、甘油或乙醇中，形成溶液或者懸浮液，可以制備液體組合物。本發(fā)明的高水溶性化合物使它們特別適于以水溶液的形式、例如通過(guò)腹膜內(nèi)注射給藥。盡管優(yōu)選水溶液，但是本發(fā)明組合物也可以配制成在脂(例如，三甘油酯、磷脂或聚乙氧基化蓖麻油例如“CREMOPHOR ELTM”)中的懸浮液、脂質(zhì)體懸浮液或含水乳液的形式。
該化合物還可以經(jīng)吸入給藥，可以是固體或液體氣溶膠顆粒的形式，優(yōu)選可吸入的粒度。該顆粒小到一旦吸入即能通過(guò)口和喉、并且進(jìn)入支氣管和肺泡。通常，在約1至10微米、優(yōu)選小于約5微米的粒度是可吸入的。吸入給藥的液體組合物含有分散在含水載體例如無(wú)菌、無(wú)熱原鹽水溶液或無(wú)菌無(wú)熱原水中的活性物質(zhì)。如果需要，該組合物可以與推進(jìn)劑混合以有助于該組合物的噴霧并形成氣溶膠。
制備該劑型的方法是已知的，或者對(duì)于本領(lǐng)域?qū)I(yè)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見；例如參見Remington’s Pharmaceutical Sciences(第19版，Williams & Wilkins,1995)。該給藥組合物含有使患者有效免疫抑制藥物有效量的所選擇化合物。Ⅳ．治療應(yīng)用本發(fā)明組合物適用于已經(jīng)證明有效的雷公藤內(nèi)酯的應(yīng)用，特別是免疫抑制治療、治療自免疫疾病、預(yù)防移植物排斥或者治療或預(yù)防移植物抗宿主疾病(GVHD)。雷公藤內(nèi)酯以及本發(fā)明的類似物還適用于治療其它炎性疾病、例如創(chuàng)傷炎癥，以及男性生育力下降。
適于進(jìn)行免疫治療的通常的自免疫疾病包括氣喘、動(dòng)脈粥樣硬化、Ⅰ型糖尿病、多發(fā)性硬化、牛皮癬、全身性紅斑狼瘡(SLE)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和各種變應(yīng)性疾病。在自免疫疾病的治療中，以足以減輕癥狀和改善患者舒適性的劑量，給患者定期、例如1-2次/周服用該組合物。
給藥劑量?jī)?yōu)選為1-25mg/kg患者體重/天，較低的劑量?jī)?yōu)選經(jīng)非腸道給藥，較高的劑量?jī)?yōu)選經(jīng)口服給藥。按照本領(lǐng)域的已知方法，通過(guò)常規(guī)實(shí)驗(yàn)，可以確定最佳劑量。
通過(guò)使用本領(lǐng)域已知的、已經(jīng)建立的動(dòng)物模型，可以評(píng)價(jià)化合物的體內(nèi)免疫抑制活性。該分析可用于評(píng)價(jià)免疫抑制化合物的相對(duì)功效，并且可以用于估計(jì)免疫抑制治療用的適合劑量。這些分析包括例如Ono和Lindsey(1969)所述的完全特征化的同種移植物大鼠模型系統(tǒng)，其中移植的心臟與接受同種移植物動(dòng)物的腹部大血管相連，通過(guò)心臟在受體動(dòng)物中搏動(dòng)的能力測(cè)定移植心臟的生存能力。異種移植物模型的受體動(dòng)物為不同的種系，由Wang(1991)和Murase(1993)所述。評(píng)價(jià)抗GVHD功效的模型包括給正常F1小鼠注射父母的脾細(xì)胞；小鼠產(chǎn)生GVHD綜合征，其特征為脾大和免疫抑制(Korngold,1978；Gleichmann,1984)。由個(gè)體的脾制備單細(xì)胞懸浮液，在伴刀豆球蛋白存在或不存在下建立微孔(microwell)培養(yǎng)物，以達(dá)到致有絲分裂強(qiáng)烈反應(yīng)的程度。
對(duì)于移植排斥治療，該方法尤其包括治療心臟、腎、肝、細(xì)胞和骨髓移植物的排斥，并且還可用于治療GVHD。對(duì)于急性移植排斥，該治療通常在手術(shù)移植前或者手術(shù)移植后盡快從perioperatively開始，并且每天實(shí)施治療方案，進(jìn)行至少幾周的治療。在治療期間，例如，通過(guò)包含同種移植淋巴細(xì)胞的混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)，或者通過(guò)對(duì)移植組織進(jìn)行活組織檢查，可以定期對(duì)患者的免疫抑制水平進(jìn)行檢測(cè)。
此外，該組合物還可以長(zhǎng)期給藥以預(yù)防移植物排斥，或者治療急性晚期移植物排斥發(fā)作。如上所述，給藥劑量?jī)?yōu)選為1-25mg/kg患者體重/天，較低的劑量?jī)?yōu)選經(jīng)非腸道給藥，較高的劑量?jī)?yōu)選經(jīng)口服給藥。根據(jù)患者的反應(yīng)、治療的周期、以及患者抵抗感染的能力，該劑量可以適當(dāng)增加或者減少。
為了治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，該組合物可以經(jīng)靜脈內(nèi)注射或者可以直接注射到感染的關(guān)節(jié)中?？梢栽诨颊呒膊“Y狀發(fā)生后的幾周內(nèi)，以至少24小時(shí)的間隔對(duì)患者重復(fù)治療。
當(dāng)與另一種用于如上所述免疫抑制治療的免疫抑制藥物同時(shí)給藥時(shí)，該組合物還適于用作強(qiáng)化因子。因此，與僅僅施用該化合物相比，可以以實(shí)際上較低的量(例如標(biāo)準(zhǔn)劑量的20％至50％)施用常規(guī)的免疫抑制藥物，例如環(huán)孢菌素A、FK506、硫唑嘌呤、雷怕霉素、霉酚酸或糖皮質(zhì)激素?；蛘撸坠賰?nèi)酯類似物和免疫抑制藥物可以以大于預(yù)期的單獨(dú)使用該藥物和雷公藤內(nèi)酯類似物所得免疫抑制效果之和的量給藥。通常，免疫抑制藥物和強(qiáng)化因子以常規(guī)的時(shí)間間隔給藥至少2周。
實(shí)施例1合成18-戊二酰furanoid雷公藤內(nèi)酯類似物(圖1)和氨丁三醇鹽(圖2B)在惰性氣氛下，在-78℃，將在無(wú)水THF中的雷公藤內(nèi)酯(1當(dāng)量)滴加至略微過(guò)量的NaH在無(wú)水THF中的懸浮液中。約0.5小時(shí)后，滴加戊二醛(1當(dāng)量或略微過(guò)量)，攪拌該混合物并使其經(jīng)過(guò)約1小時(shí)恢復(fù)至室溫。將該混合物濃縮，溶解在乙醚中，用水和鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鎂干燥并濃縮。殘余物經(jīng)硅膠色譜純化。
向攪拌著的1當(dāng)量戊二酰酯在THF中的溶液中加入略微過(guò)量的氨丁三醇的甲醇溶液。使該溶液濃縮，回收鹽并真空干燥。
實(shí)施例2合成內(nèi)酯環(huán)開環(huán)的雷公藤內(nèi)酯類似物(圖3)在適度加熱下，在極性非質(zhì)子傳遞溶劑如THF中，將雷公藤內(nèi)酯、過(guò)量的(2-羥乙基)嗎啉和催化量的DMAP(二甲氨基吡啶)攪拌。反應(yīng)通過(guò)TLC監(jiān)測(cè)。一旦反應(yīng)完全，使反應(yīng)混合物冷卻，加入乙酸酐使14-和19-羥基乙酰化。減壓除去溶劑，將殘余物溶解在乙醚中，用水和碳酸氫鈉洗滌數(shù)次，用無(wú)水硫酸鎂干燥并濃縮。根據(jù)需要，將產(chǎn)物經(jīng)硅膠色譜純化。
實(shí)施例3合成12-甲苯磺酰氧基-13-羥基雷公藤內(nèi)酯(圖5)
首先通過(guò)將14-羥基轉(zhuǎn)化為芐基醚對(duì)其進(jìn)行保護(hù)。為了避免共軛內(nèi)酯的酸性氫與堿性試劑例如金屬氫化物反應(yīng)，在0℃和惰性氣氛下，將該化合物(1當(dāng)量)與BzBr(2.5當(dāng)量)在Ag2O(2當(dāng)量)存在下、在DMF中反應(yīng)(參見例如Mori等的文獻(xiàn))。在攪拌下使該混合物恢復(fù)至室溫，并攪拌約24小時(shí)。該混合物用乙醚稀釋，用水和鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鎂干燥并濃縮。根據(jù)需要，殘余物經(jīng)硅膠色譜純化。
然后將所得14-O-芐基雷公藤內(nèi)酯與氫氧化鈉在THF水溶液中加熱，將12,13-環(huán)氧化物轉(zhuǎn)化為二醇。將該溶液濃縮，殘余物溶解在乙醚中，并如上所述進(jìn)行處理。
將所得二醇(1當(dāng)量)溶解在二氯甲烷中，加入TsCl(1.5當(dāng)量)和三乙胺在相同溶劑中的溶液。經(jīng)TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)完全后，該混合物用水和鹽水洗滌，用無(wú)水硫酸鎂干燥并濃縮。殘余物經(jīng)硅膠色譜純化。
將所得芐基醚保護(hù)的甲苯磺酸酯溶解在無(wú)水THF中，加入5％Pd/C(約25mg/meq底物)，該混合物用H2吹掃(大氣壓)，并在室溫?cái)嚢柚敝镣耆摫Ｗo(hù)，約進(jìn)行2-3小時(shí)。然后將該溶液過(guò)濾并濃縮，得到所需產(chǎn)物。
權(quán)利要求
1．結(jié)構(gòu)式Ⅰ的化合物 其中OR1選自(ⅰ)具有選自碳、硫、磷、氮和硼的中心原子，并且有至少一個(gè)-Y-I或-O-Y-Z基團(tuán)與中心原子相連的羧酸酯、碳酸酯或無(wú)機(jī)酯，其中Y是支鏈或直鏈C1-C6烷基或鏈烯基，Z是氫或者選自下列的極性基團(tuán)酮基、醛基、羧酸基、羧酸酯基、羥基、烷氧基、聚醚基、硫羥基、烷硫基、氨基、氰基、硝基、硫酸根、硝酸根、磷酸根或5-至7-元雜環(huán)，雜環(huán)的環(huán)原子選自碳、氮、氧和硫，其中包括3-6個(gè)環(huán)碳原子，和(ⅱ)在端基異構(gòu)中心與C14連接的一-、二-或三糖；并且OR3是OH或O-(C=O)R，其中R是低級(jí)烷基。
2．權(quán)利要求1的化合物，其中R1選自基團(tuán)(ⅰ)。
3．權(quán)利要求2的化合物，其中R1選自 和 其中R2是低級(jí)烷基，R3是H或-(C=O)R，其中R是低級(jí)烷基，R4是H或低級(jí)烷基，n=1-4，m=1-2，并且X=CH2、O或NR2。
4．結(jié)構(gòu)式Ⅱ的化合物 其中OR5選自(ⅰ)-O-Y-Z或-O-(C=O)-Y-Z，其中Y是支鏈或直鏈C1-C6烷基或鏈烯基鏈，并且Z是氫或者選自下列的極性基團(tuán)酮基、醛基、羧酸基、羧酸酯基、氨基、烷氨基、羥基、烷氧基、聚醚基、硫羥基、烷硫基、氰基、硝基、無(wú)機(jī)酯基、或5-至7-元雜環(huán)，雜環(huán)的環(huán)原子選自碳、氮、氧和硫，其中包括3-6個(gè)環(huán)碳原子，和(ⅱ)在端基異構(gòu)中心與C14連接的一-、二-或三糖；并且OR3是O-(C=O)R，其中R是低級(jí)烷基。
5．權(quán)利要求4的化合物，其中R1選自基團(tuán)(ⅰ)。
6．權(quán)利要求5的化合物，其中R5選自 和 其中R2是低級(jí)烷基，R3是-(C=O)R，其中R是低級(jí)烷基，R4是H或低級(jí)烷基，P=0-6,n=1-4,m=1-2，并且X=CH2、O或NR2。
7．結(jié)構(gòu)式Ⅲ的化合物 其中R6是選自下列的離去基團(tuán)烷基磺酸根、氟烷基磺酸根、芳基磺酸根、氟磺酸根、硝酸根、烷基磷酸根、烷基硼酸根、三烷基銨和二烷基锍；并且OR3是-OH或-O-(C=O)-R，其中R是低級(jí)烷基。
8．權(quán)利要求7的化合物，其中OR6選自硝酸根、甲苯磺酸根、甲磺酸根、氟磺酸根、三氟甲磺酸根、-OP(O)(OR4)2和-OB(OR4)2，其中R4是氫或低級(jí)烷基。
全文摘要
本發(fā)明描述了適用于免疫抑制和抗炎治療的化合物。該化合物是具有改善的水溶性并且比母體化合物毒性低的可水解雷公藤內(nèi)酯類似物。
文檔編號(hào)C07F9/655GK1316997SQ99810578
公開日2001年10月10日 申請(qǐng)日期1999年9月2日 優(yōu)先權(quán)日1998年9月2日
發(fā)明者J·H·馬瑟 申請(qǐng)人:法瑪吉尼西斯公司