專利名稱:微生物培養(yǎng)和檢測(cè)的設(shè)備和方法
本發(fā)明是關(guān)于微生物培養(yǎng)和檢測(cè)的設(shè)備和方法，更具體地說是適用于活動(dòng)細(xì)菌，例如沙門氏菌、凱普勒菌屬、李司忒氏菌屬、弧菌屬、氣單胞菌屬、埃希氏桿菌屬的菌種、菌株和血清型的裝置和方法。
上述這些活動(dòng)細(xì)菌，由于其對(duì)人和動(dòng)物的病原特性，在食品衛(wèi)生，環(huán)境衛(wèi)生和污染的監(jiān)視，以及用作臨床試樣等方面，是特別重要的主體。
現(xiàn)有的方法，特別是對(duì)在食品試樣中沙門氏菌污染所用的檢測(cè)方法，既耗時(shí)又費(fèi)力。
一種用于沙門氏細(xì)菌污染(如在食品試樣中)的標(biāo)準(zhǔn)的檢測(cè)方法，包括如下步驟(a)在225毫升含有如細(xì)菌學(xué)胨的“預(yù)濃縮”或“復(fù)蘇”(resuscitation)介質(zhì)中分散25克食品或其它物料的試樣，培育多達(dá)一天的時(shí)間(如在37℃下，培育18-24小時(shí));
(b)把原始培養(yǎng)液再培養(yǎng)在每一種由一種或多種不同形式(例如二種)構(gòu)成的“選擇性濃縮介質(zhì)”中，以抑制與存在的沙門氏菌有關(guān)的其它微生物的生長(zhǎng)，通過培育使這些濃縮培養(yǎng)液生長(zhǎng)，以得到可以顯示的沙門氏菌(如果存在);(最少的可顯示的菌的含量可以在很大范圍內(nèi)變化，若不存在其它污染，則為大約每毫升1000個(gè)微生物，在有其它微生物嚴(yán)重污染的情況下，每毫升大約有一百萬以上的微生物或者更多);
(c)用所得的濃縮培養(yǎng)液，在一組選擇性不同的固體生長(zhǎng)介質(zhì)上接種，通常在瓊脂上接種，在皿上識(shí)別出沙門氏菌落(如果在初始的試樣中存在);
(d)對(duì)任意臨時(shí)識(shí)別為沙門氏菌的菌落至少進(jìn)行生物化學(xué)和/或免疫學(xué)(凝集)檢測(cè)，以進(jìn)一步證實(shí)或推翻這種識(shí)別。
整個(gè)過程大約一周。
近來，發(fā)展了一種改進(jìn)的免疫學(xué)的檢測(cè)方法，它可取代標(biāo)準(zhǔn)方法中的步驟(c)和(d)，稍微縮短了整個(gè)時(shí)間。
現(xiàn)有技術(shù)中還有一種辦法，即通過一個(gè)選擇性的移動(dòng)系統(tǒng)用以隔絕沙門氏菌(PFStuart和HPivnick(1965)，應(yīng)用微生物學(xué)13(3)PP365-372)，這種技術(shù)是利用u形管中“半固體”膠體介質(zhì)，在u形管的一側(cè)，接種后將得到細(xì)菌，在其另一側(cè)，在半固體膠體的表面用一取自預(yù)濃縮培養(yǎng)液的樣品作為接種體。
另一種依據(jù)待測(cè)微生物活動(dòng)性的技術(shù)如美國(guó)專利USP 4563418(生物控制有限公司)所述，該專利描述了一種“活動(dòng)免疫固定方法”(motilityimmunoimmobilisation)，用來檢測(cè)活動(dòng)的微生物，如沙門氏菌。它還公開了一移動(dòng)容器，其每端開孔，一個(gè)蓋子蓋在每端的開孔上，它包含一種膠凝的移動(dòng)介質(zhì)。采用這種系統(tǒng)時(shí)，在(容器)一端通過置入抗血清來固定與膠凝介質(zhì)相接觸的沙門氏菌，在其另一端，置入含有趨藥性誘引劑(如L-絲氨酸)的選擇性濃縮介質(zhì)和微生物接種體，所說的接種體來自先有的與膠體介質(zhì)相接觸的選擇性濃縮培養(yǎng)液。培育之后陽(yáng)性結(jié)果由靠近抗血清加入處的管子那端的一部分固定細(xì)菌來指示。
另外有關(guān)(包括移動(dòng)濃縮的內(nèi)容)沙門氏菌的檢測(cè)的回顧與說明最近已經(jīng)出版，可見JM De Smedt，RF Bolderdijk，HFRappld和DLautenschlaeger(1986)《食品保護(hù)》，卷49(7)PP510-514，其中提到，轉(zhuǎn)移由預(yù)濃縮培養(yǎng)液得到的接種體，以便在含有Rappaport-Vassiliadis肉湯的半固體瓊脂表面上形成斑點(diǎn)經(jīng)過24小時(shí)培育之后，在遷移后的細(xì)菌顯現(xiàn)生長(zhǎng)的區(qū)域邊緣采集試樣，進(jìn)行再培養(yǎng)，以檢測(cè)沙門氏菌的存在。
美國(guó)專利USP3704204(Armour和CO)描述了一用于沙門氏菌的快速檢測(cè)法，舉例為用一個(gè)位于介質(zhì)表面上方大約1吋或半?yún)嫉挠靡宜徙U飽和的棉墩，在營(yíng)養(yǎng)基中培育肉骨樣品，營(yíng)養(yǎng)基中含有選擇性抑制劑，如膽汁鹽，脫氧膽酸鹽，氧化鋰和吖啶衍生物(吖啶黃素)在經(jīng)過24小時(shí)培育之后，棉墩發(fā)黑，這視為陽(yáng)性(可疑)結(jié)果。據(jù)報(bào)導(dǎo)，采用這種方法，盡管沒有錯(cuò)誤的陰性反應(yīng)，但有許多錯(cuò)的陽(yáng)性反應(yīng)。
雖經(jīng)這些努力，但如何以簡(jiǎn)便的方式，縮短活動(dòng)細(xì)菌檢測(cè)所需的時(shí)間，特別是在較早的培養(yǎng)階段上，仍存在著問題。
本發(fā)明的目的之一，就是為活動(dòng)細(xì)菌提供檢測(cè)裝置和方法，它能使由單個(gè)容器內(nèi)的樣品培養(yǎng)液所獲得的檢測(cè)結(jié)果，具有較高的可靠性。
本發(fā)明的另一個(gè)目的，是提供簡(jiǎn)便的活動(dòng)細(xì)菌選擇性濃縮培養(yǎng)和檢測(cè)的裝置和方法，以簡(jiǎn)化和/或減少操作者對(duì)樣品和培養(yǎng)液的處理。
一方面，本發(fā)明提供了一種選擇性培養(yǎng)活動(dòng)細(xì)菌的方法，包括的步驟是(a)制備一種懷疑含有活動(dòng)細(xì)菌的物料的細(xì)菌學(xué)培育樣品;
(b)將上述物料放入含有適宜于活動(dòng)細(xì)菌復(fù)蘇和生長(zhǎng)的液體營(yíng)養(yǎng)基的培養(yǎng)容器中;
(c)提供一種載體，它部份地浸入上述的液體營(yíng)養(yǎng)基中，并且凸出在上述液體營(yíng)養(yǎng)基表面以上，上述載體含有支持營(yíng)養(yǎng)介質(zhì)，它們選自適合于活動(dòng)細(xì)菌細(xì)菌學(xué)的選擇性生長(zhǎng)和指示的介質(zhì)，上述載體在上述的液體營(yíng)養(yǎng)基表面以下有一個(gè)開孔，以使在上述容器中的液體介質(zhì)和上述載體中的支持介質(zhì)之間保持接觸，從而使得活動(dòng)細(xì)菌在培養(yǎng)期間可以從上述的液體中遷移到上述的支持介質(zhì)中。
(d)培育上述的試樣和上述的營(yíng)養(yǎng)基，以使在上述液體介質(zhì)中的試樣里存在的任何活動(dòng)細(xì)菌生長(zhǎng)，并且使活動(dòng)細(xì)菌在培養(yǎng)期間遷移入上述的支持介質(zhì)中，并在其中使活動(dòng)細(xì)菌生長(zhǎng)。
在幾個(gè)方法的實(shí)施例中，上述載體在上述液體營(yíng)養(yǎng)基表面以上同樣有一個(gè)開孔，上述支持營(yíng)養(yǎng)介質(zhì)可有一轉(zhuǎn)移表面，以使在活動(dòng)細(xì)菌遷移入支持介質(zhì)、生長(zhǎng)并通過以后，便于轉(zhuǎn)移含上述細(xì)菌的試樣。上述方法還可包括另一步驟，即在上述細(xì)菌生長(zhǎng)之后，把它們從支持介質(zhì)的轉(zhuǎn)移表面轉(zhuǎn)移入和轉(zhuǎn)移過上述支持介質(zhì)。
另一方面，本發(fā)明提供了一種選擇性培養(yǎng)活動(dòng)細(xì)菌的設(shè)備，它包括(a)一含有適合于活動(dòng)細(xì)菌復(fù)蘇和生長(zhǎng)的液體營(yíng)養(yǎng)基的培養(yǎng)容器;
(b)一種載體，它部份地浸入上述液體營(yíng)養(yǎng)基中，又凸出在上述液體營(yíng)養(yǎng)基的表面上，上述載體含有支持性營(yíng)養(yǎng)介質(zhì)，它們選自適合于活動(dòng)細(xì)菌細(xì)菌學(xué)的選擇性生長(zhǎng)和指示的介質(zhì)，上述載體在上述液體營(yíng)養(yǎng)基表面以下有一個(gè)開孔，以便于在容器中的液體介質(zhì)和在載體中的支持介質(zhì)保持接觸，從而使得活動(dòng)細(xì)菌在培養(yǎng)期間可從上述液體遷移入上述支持介質(zhì)中。
這樣，本發(fā)明可以實(shí)現(xiàn)微生物，如活動(dòng)細(xì)菌的培養(yǎng)、選擇、濃縮，在許多實(shí)施例中，還包括了檢測(cè)。發(fā)明可以利用已知類型的適合于待測(cè)的微生物復(fù)蘇和生長(zhǎng)的液體介質(zhì)，它包括用干組分經(jīng)水或用適宜的基本介質(zhì)再水化以形成這種介質(zhì)。類似地，也可以利用已知類型的適合于待測(cè)的微生物選擇的支持性選擇濃縮介質(zhì)和/或適合于待測(cè)的微生物指示其存在和生長(zhǎng)的指示劑，以及其它改進(jìn)形式，還包括干制劑，它經(jīng)水或用適宜的基本介質(zhì)再水化后，即形成這種支持介質(zhì)。
本發(fā)明還提供了一些支持介質(zhì)載體，它們具有如下所述的特征，用在下面所述的培養(yǎng)步驟中。
在采用本發(fā)明時(shí)，培養(yǎng)容器和支持介質(zhì)應(yīng)這樣設(shè)置，使得選擇性濃縮和/或指示介質(zhì)在與復(fù)蘇和生長(zhǎng)介質(zhì)相接觸的一個(gè)區(qū)域或容器中，從而在使用時(shí)，待測(cè)微生物在培養(yǎng)過程中，可以生長(zhǎng)或選先移入濃縮介質(zhì)，不要求通過人工接種轉(zhuǎn)移。
在本說明書中，“支持介質(zhì)”的含意是指一種與膠體或固體原料相伴(如分散)的液體生長(zhǎng)介質(zhì)，這種介質(zhì)達(dá)到了這種程度，即它基本上不存在對(duì)流，但不能阻止活動(dòng)微生物在其內(nèi)的遷移，也不能阻止(在合適的情況下)非活動(dòng)微生物生長(zhǎng)通過。這種條件是能夠提供的，例如通過含有凝固劑的介質(zhì)，或依靠一種由固體網(wǎng)狀物或骨架支撐的液體介質(zhì)，達(dá)到基本沒有對(duì)流的程度。非限制性的支持介質(zhì)的實(shí)例如稀薄的明膠材料如“Sloppy”膠體，它是一種公知的用于濃縮活動(dòng)細(xì)菌的材料，又如纖維狀的傳導(dǎo)材料，例如過濾紙、尼龍或聚酰胺或聚酯過濾器，特別如褶形過濾器，它具有很狹窄的含有液體或半固體膠體的軸向通道，在該通道內(nèi)，微生物可以生長(zhǎng)，或者微生物因它們自身的活動(dòng)特性能夠遷移，或一種多孔聚合物過濾器。
人們知道，選擇性介質(zhì)和濃縮介質(zhì)可用作為培養(yǎng)基，它含有選擇性的抑制劑，用以阻止或減少除待測(cè)微生物外的大部分其他微生物的生長(zhǎng)，最差的情況是只有輕微的抑制，而較優(yōu)選的是對(duì)所需微生物的生長(zhǎng)呈中性或起刺激作用。這種試劑的實(shí)例和其劑量在現(xiàn)有技術(shù)中已屬公知，不屬于本發(fā)明的內(nèi)容。在存在沙門氏菌的情況下，已知的選擇性試劑包括膽汁鹽，吖啶衍生物和如下文說明的其他特定介質(zhì)組分，如，染料如鉆石綠。
本發(fā)明所用的液體復(fù)蘇/生長(zhǎng)介質(zhì)可以不含選擇性抑制劑。對(duì)于沙門氏菌檢測(cè)，用選擇性抑制劑如孔雀綠是有益的。在大多數(shù)情況下，復(fù)蘇/生長(zhǎng)介質(zhì)應(yīng)不含趨藥性誘引劑，從而如果需要，可有效地在支持介質(zhì)中包含公知的趨藥性誘引劑，例如L-絲氨酸，以增強(qiáng)活動(dòng)微生物從液體復(fù)蘇介質(zhì)(自動(dòng))轉(zhuǎn)移入支持性選擇介質(zhì)和/或指示介質(zhì)的能力。
本發(fā)明能夠使加到培養(yǎng)裝置的食品或其它試樣，在一個(gè)培育階段后，得到一種待測(cè)微生物(如果存在)的濃縮培養(yǎng)液。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)之一是它提供了一種培養(yǎng)裝置，它能在與食品樣品接種的單個(gè)培養(yǎng)裝置內(nèi)，獲得適當(dāng)稠密的和濃縮的活動(dòng)細(xì)菌(如沙門氏菌)菌種的培養(yǎng)液。
按照本發(fā)明，還提供了一種用于微生物例如細(xì)菌，特別是活動(dòng)細(xì)菌的選擇性濃縮培養(yǎng)方法，包括把懷疑含有上述微生物的浸軟食品或其它試樣接種到適合待測(cè)微生物復(fù)蘇和生長(zhǎng)的液體介質(zhì)中，然后使上述微生物(如果存在)在上述的液體介質(zhì)中復(fù)蘇和生長(zhǎng)，其中上述的液體介質(zhì)培育時(shí)又與上述微生物的支持選擇性濃縮介質(zhì)相接觸，從而使得任何上述微生物(如果存在)在培育期間能生長(zhǎng)和遷移入選擇性介質(zhì)中，在上述培育結(jié)束后，得到上述微生物(如果上述樣品中存在)的濃縮培養(yǎng)液。
按照本發(fā)明，還提供了用于如上所述的選擇性濃縮培養(yǎng)的物料，物料包括一系列成品試劑和包含干試劑的載體，載體用水或基本介質(zhì)再水化，得到如上所述載有支持介質(zhì)的裝置和插入件。這些物料最好被分布在密封的干燥無菌袋中，使用時(shí)啟封并再水化。
根據(jù)本發(fā)明裝置的一個(gè)實(shí)施例，半固體或者其他支持選擇性濃縮和/或指示介質(zhì)，被支持在第二個(gè)容器，或培養(yǎng)容器的第二區(qū)域中，使得在選擇性濃縮介質(zhì)和/或指示介質(zhì)中的濃縮培養(yǎng)試樣，在培養(yǎng)周期結(jié)束時(shí)，可以方便地取出。
在第二容器中的選擇濃縮介質(zhì)和/或指示介質(zhì)，如果需要，可以通過一支持隔板與第一容器的液體介質(zhì)分開，所說的隔板例如篩網(wǎng)、過濾器或多孔膜，或者其它能使活動(dòng)細(xì)菌通過的隔板。適宜的孔徑至少大約5-10微米-大孔是容許的和有利的。適宜的多孔聚合物材料例如由Porex工業(yè)技術(shù)公司出售的“Porex”牌(商標(biāo))，目前這種材料優(yōu)選的是“Porex”Cat·X4898高級(jí)親水DBS多孔聚合物，孔的尺寸15-45微米，板厚1/8吋，并切割成適當(dāng)大小的園盤。
在一種簡(jiǎn)便的實(shí)施例中，液體介質(zhì)有一個(gè)區(qū)域同半固體選擇濃縮介質(zhì)或指示介質(zhì)相接觸，通過在半固體濃縮介質(zhì)中所含膠體輕微的脫水收縮作用獲得一方便的取樣點(diǎn)，從而能夠經(jīng)由第二容器或第二容器區(qū)域取樣孔取樣。它能以液體形式引出濃縮培養(yǎng)試樣，可優(yōu)選用在半固體培養(yǎng)液的取樣上。
如果需要，按照本發(fā)明的設(shè)備能提供二個(gè)以上的培養(yǎng)介質(zhì)區(qū)域，串聯(lián)設(shè)置，從而使得活動(dòng)細(xì)菌在從液體介質(zhì)的接種區(qū)域遷移到取樣點(diǎn)時(shí)，必須跨過二個(gè)以上的培養(yǎng)介質(zhì)區(qū)域。這種設(shè)置能集合在一起，例如采用一個(gè)含有支持選擇性濃縮和/或指示介質(zhì)的第二管。這種管可在它的頂部和底部開孔，浸入液體復(fù)蘇培養(yǎng)介質(zhì)中，在管的下端，使液體介質(zhì)同在管內(nèi)的支持介質(zhì)之間經(jīng)由大孔膜或者過濾器或其它可被微生物穿過的隔板實(shí)現(xiàn)液相接觸，并含有一系列濃縮介質(zhì)的膠體或其它支持層，其中設(shè)有一取樣點(diǎn)，它同管子上部開孔或其他簡(jiǎn)便的取樣點(diǎn)相鄰近。
按照本發(fā)明，裝置可這樣使用(a)把一懷疑含有活動(dòng)細(xì)菌的樣品接種到液體培養(yǎng)介質(zhì)區(qū)域中，但不能到濃縮介質(zhì)區(qū)域，(這可以這樣做到例如通過把樣品粉碎或分散到液體培養(yǎng)介質(zhì)中)(b)培育培養(yǎng)介質(zhì)以使活動(dòng)細(xì)菌(如果存在)繁殖并遷移入濃縮介質(zhì)區(qū)域，(c)從一個(gè)或其中之一個(gè)濃縮介質(zhì)區(qū)域取樣，取出含有活動(dòng)細(xì)菌(如果在接種體內(nèi)存在)的濃縮培養(yǎng)液樣品。
按照本發(fā)明設(shè)備的另一個(gè)實(shí)施例，它包括二個(gè)或二個(gè)以上并聯(lián)設(shè)置的半固體或支持選擇和/或指示介質(zhì)的區(qū)域，從而使得微生物，如待測(cè)的活動(dòng)細(xì)菌，可從液體介質(zhì)的接種區(qū)域生長(zhǎng)或遷移入每一個(gè)平行的區(qū)域，每個(gè)區(qū)域含一種或多種半固體或支持選擇和/或指示介質(zhì)。這可如下實(shí)現(xiàn)，例如將第二管浸入液體培養(yǎng)介質(zhì)，在液體介質(zhì)和支持介質(zhì)之間經(jīng)由大孔膜、過濾器和其它隔板在每個(gè)管下端保持接觸，另設(shè)置一個(gè)取樣點(diǎn)，它和每個(gè)管上部開孔相鄰。
這些實(shí)施例帶來的優(yōu)點(diǎn)是，在單個(gè)培養(yǎng)容器中，可以同時(shí)載有適合于活動(dòng)細(xì)菌的二種或二種以上的選擇濃縮介質(zhì)和/或指示介質(zhì)，在許多情況下，經(jīng)過初始接種后，就不再需要人工處理。
然后，濃縮培養(yǎng)的樣品，可用適當(dāng)?shù)姆椒?，來檢測(cè)微生物如活動(dòng)細(xì)菌的存在。這些方法例如微生物培養(yǎng)、生物化學(xué)、免疫學(xué)或者顯微檢測(cè)方法。
本發(fā)明優(yōu)選的材料及其相應(yīng)的設(shè)備包括一個(gè)管狀載體，管狀載體二端的每一端均開孔，裝載支持選擇性濃縮介質(zhì)，或者經(jīng)再水化后可形成上述介質(zhì)的干物質(zhì)。不論支持介質(zhì)是呈膠體或液體形式，都可依靠適宜的多孔擋板把它們截留在管狀載體內(nèi)，以使微生物可以通過。當(dāng)為液體介質(zhì)時(shí)，擋板可以是紙或塑料材料的緊密褶形過濾器，這種過濾器有非常狹窄的軸向通道，可基本上阻止對(duì)流，但可使待測(cè)的微生物生長(zhǎng)或移動(dòng)通過?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，可以使用如過濾嘴香煙的濾嘴那樣的普通褶形過濾器。
管狀載體較方便地是采用圓柱體，但這不是主要的，也能采用其它斷面形狀。管狀載體包括任意的頂部或底部開孔，或頂部與其它設(shè)備材料相通的形式，活動(dòng)細(xì)菌可在載體內(nèi)遷移，以用于進(jìn)一步檢測(cè)。在一個(gè)合適的實(shí)施例中，管狀材料是不透水的塑料制品，包含有一個(gè)或一組相類似的或不同的選擇性濃縮區(qū)域，或選用對(duì)待測(cè)微生物有鑒別性的介質(zhì)區(qū)域，串聯(lián)設(shè)置，從而使微生物培養(yǎng)液必須從管狀載體的一端，依次穿過每一個(gè)區(qū)域而到達(dá)另一端。
優(yōu)選地，管狀載體在其遠(yuǎn)離用作與復(fù)蘇介質(zhì)相接觸的開孔端的另一開孔端處，載有游離液體或多孔材料，通過該端，游離液體樣品可以很容易提取出來，作為濃縮培養(yǎng)液試樣，用于附加的鑒別或培養(yǎng)步驟(如果需要)中(例如可通過擠壓試管)。如果在管狀載體中有一種以上支持介質(zhì)，則為一個(gè)或多個(gè)其頂部不通孔的隔室提供一個(gè)通道是有用的，該通道可釋放如代謝氣體或再水化時(shí)的空氣。
以下將非限制性地舉例說明目前較優(yōu)選的，用于本文所述設(shè)備的介質(zhì)(a)介質(zhì)1(用作在培育管中沙門氏菌的復(fù)蘇和生長(zhǎng)的適宜的介質(zhì))，由足夠量的等分的干粉構(gòu)成，它們?cè)谖諢o菌水后，可得225毫升如下的組合物酪蛋白胰酶解胨(Oxoid L42)10克/升;氯化鈉5克/升;磷酸氫二鈉3.5克/升;孔雀綠(Merck細(xì)菌學(xué)級(jí))40毫克/升，形成這種介質(zhì)后，pH值約7.2。
介質(zhì)1優(yōu)選用作檢測(cè)這樣的樣品，即它們被懷疑除了與沙門氏菌有關(guān)外，很少或沒有被其它微生物污染。如它可用于牛奶和雞蛋產(chǎn)品如奶粉和蛋粉的檢測(cè)。
一種選用的介質(zhì)1a另含40毫克/升新生霉素和4克/升(無抗菌素)脫脂奶粉。在另一該選用介質(zhì)的改進(jìn)型中，主要從清晰度考慮，用3.0克/升酪蛋白代替奶粉。這種選用的介質(zhì)優(yōu)選用于懷疑有大量的非沙門氏菌污染的產(chǎn)品，如肉類產(chǎn)品中。
(b)介質(zhì)2(LID)(適合于活動(dòng)沙門氏菌的生長(zhǎng)和傳遞的選擇性支持介質(zhì)和指示劑)為一種干粉組合物，經(jīng)再水化后可得到一種高粘性的含下列組分的介質(zhì)，稱為“Wet”濕含量(克/升)細(xì)菌學(xué)胨(Oxoid L37) 10酵母提取液(Oxoid L21) 6葡萄糖 2L-賴氨酸 20檸檬酸鐵銨 1硫代硫酸鈉 0.08藻酸鈉(工業(yè)藻酸鹽/Kelco藻酸鈉二甲基甲酰胺)(或者-優(yōu)選地-用3.75克/升黃原酸樹膠代替藻酸鹽)10
濕含量(克/升)L-絲氨酸 1脫氧膽鈉 5-(最終pH值為6.7)介質(zhì)2可以干粉形式等分配入載體管下部腔室。
現(xiàn)有的一種優(yōu)選的介質(zhì)2(LID)的改進(jìn)型，是用3.75克/升黃原酸樹膠(Xanthan gum)和1.25克/升乳糖代替藻酸鈉。
(c)介質(zhì)3(改進(jìn)的RV基于Rappaport-Vassiliadis介質(zhì))是選用的適合于活動(dòng)的沙門氏菌的，帶指示劑的選擇性支持介質(zhì)。它含有適當(dāng)?shù)母煞?，再水化后得到高粘度的下列組分的介質(zhì)、稱為“Wet”濕含量(克/升)大豆胨，中性的(Oxoid L44) 5氯化鈉 8磷酸二氫鉀 1.6氯化鎂(無水) 18.7藻酸鈉(工業(yè)藻酸鈉/Kelco藻酸鈉二甲基甲酰胺) 12.5絲氨酸 1孔雀綠(細(xì)菌學(xué)級(jí)) 0.04-(最終pH值約為5.2)介質(zhì)3同樣可望用于管狀載體的下部腔室。
(d)介質(zhì)4(BGD)(鉆石綠脫氧膽指示介質(zhì))
濕含量(克/升)凝乳酶粉(Oxoid) 5細(xì)菌學(xué)胨(Oxoid) 10酵母提取液(Oxoid L21) 3乳糖 10蔗糖 10磷酸氫二鈉 1磷酸二氫鈉 0.6酚紅 0.09鉆石綠 0.0047L-絲氨酸 1脫氧膽酸鈉 5藻酸鈉(藻酸鈉二甲基甲酰胺)(或者-優(yōu)選地-用3.75克/升黃原酸樹膠代替藻酸鹽)10-(最終pH值約6.9)介質(zhì)4可望用于管狀載體的上部。
(e)介質(zhì)5(LICNR)(賴氨酸鐵胱氨酸中性紅指示介質(zhì))濕含量(克/升)L-單氫氯化賴氨酸 8L-二氫氯化賴氨酸 2胰酶解胨(Oxoid L42) 5酵母提取液(Oxoid L21) 3乳糖 5葡萄糖 1水楊苷 1
濕含量(克/升)檸檬酸鐵胺 0.5硫代硫酸鈉 0.1L-胱氨酸 0.1L-絲氨酸 1藻酸鈉(藻酸鈉二甲基甲酰胺) 7.5-10中性紅 0.025-(最終pH值約6.2)這種介質(zhì)也可望用于在管狀載體的上部。
在使用這些介質(zhì)的一種有效的方式中，第一選擇指示管含有二個(gè)隔室，在下隔室中有介質(zhì)LID，在上隔室中有介質(zhì)BGD。第二個(gè)選擇指示管和第一個(gè)平行設(shè)置，具有類似的結(jié)構(gòu)，在其下隔室中，有改性的RV介質(zhì)，在上隔室中有LICNR介質(zhì)。
通常，這些介質(zhì)的實(shí)施例的共性特征是一種或多種選擇/指示介質(zhì)被(較弱地)凝固，并含有一種趨藥性的有效量的絲氨酸或者其它細(xì)菌學(xué)趨藥性的誘引劑，而復(fù)蘇/生長(zhǎng)介質(zhì)是液體，不含任何附加的絲氨酸或其它誘引劑。
本發(fā)明的實(shí)施例將參照附圖作進(jìn)一步的描述，而本發(fā)明并不僅僅限于這些實(shí)例。
提供的附圖如下(不按比例)圖1，2，3，4，5是按照本發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施例。
圖1是按照本發(fā)明的實(shí)施例之細(xì)菌學(xué)檢測(cè)裝置單元系統(tǒng)的透視圖。
圖2是圖1系統(tǒng)檢測(cè)裝置的局部透視圖。
圖3是圖2裝置水平剖視的平面圖。
圖4是圖2裝置側(cè)視圖，圖5是如圖1所示的管狀載體的結(jié)構(gòu)示意圖。
圖6是按照本發(fā)明一個(gè)選擇性實(shí)施例的培養(yǎng)設(shè)備剖視圖。圖7是另一個(gè)選擇性培養(yǎng)設(shè)備的正視圖。
圖8是內(nèi)含有待再水化的干燥的圓柱形支承體的無菌密封袋的剖面圖，它可成為圖6或圖7所示設(shè)備的一部分。
圖9和10是大致如前各圖所示的安裝在一浮動(dòng)架中的管狀載體的透視圖和垂直剖視圖。
圖11是用于所述的培養(yǎng)方法的改進(jìn)的管狀載體的實(shí)施例之透視圖。
除有特別指出者外，本說明書所涉及的培養(yǎng)介質(zhì)及其組分均記載在Oxoid指南(Oxoid有限公司出版，Wade Road，Basingstoke，Hampshire，RG24OPW，UK(1982年第5版)和它修訂的附錄中。
參照?qǐng)D1，一呈金屬線框狀的托架1，支持檢測(cè)裝置2，檢測(cè)裝置2有一個(gè)頂蓋，外表面由熱成型塑料構(gòu)成，托架1可以支持像檢測(cè)裝置2那樣的一組裝置，在本例中為一排。
圖2表示如圖1的檢測(cè)裝置2的局部透視圖。檢測(cè)裝置2包括一個(gè)熱成型塑料盆體3，它包括整體折緣4和一個(gè)內(nèi)部可移動(dòng)的塑料蓋5，塑料蓋5位于在盆體3中的凸緣6上，凸緣6用來支持蓋5。在本實(shí)施例中，塑料體3具有基本上透明的側(cè)壁，事實(shí)上，塑料體3全部是由基本上透明的塑料材料構(gòu)成。裝置體3的下部7(在蓋5和凸緣6以下)作為以下所描述的微生物生長(zhǎng)介質(zhì)和檢測(cè)樣品的培育室，在一種有效的構(gòu)形中，裝置2的尺寸能在蓋5以下容納大約250毫升的液體和樣品(同封頭容積一起)。
在裝置體3的側(cè)壁內(nèi)設(shè)置定位槽8，接受和容納支持微生物介質(zhì)的載體。圖2表示有4個(gè)定位槽8，這些槽8采用半圓形凹槽形狀，用來支持和接受像圖2所示載體9那樣的管狀載體。管狀載體9配置在圖2裝置內(nèi)，通過盆體3撓性的側(cè)壁內(nèi)的定位槽8和像內(nèi)蓋5中凹槽10那樣的半圓形凹槽的聯(lián)合作用而固定。盆體3和蓋5由于輕微可撓，故可比較容易地插入和移動(dòng)像9那樣的管狀載體，在每個(gè)盆體3里最多能容納4個(gè)載體。
盆體3，折緣4，內(nèi)蓋5詳細(xì)的結(jié)構(gòu)如圖3，4所示。
管狀載體9的結(jié)構(gòu)如圖5所示。
每個(gè)管狀載體9(例如聚苯乙烯制成，有些可撓性)有一個(gè)敞開的頂部和敞開底部11，至少有2個(gè)多孔隔板12，13(如在本文描述的由Porex DBS親水多孔聚合物板)將其內(nèi)部分隔成一組隔室14，15。最上部的隔室15可以敞開或用另一個(gè)多孔隔板蓋上。當(dāng)然這些隔板被設(shè)置成能使載體按本文所述方式使用，即當(dāng)它們被浸入液體介質(zhì)時(shí)，液體介質(zhì)能同在載體內(nèi)含有的介質(zhì)相接觸。為了這個(gè)目的，低部隔板通常設(shè)置在管子底部或者靠近管子底部。
聚苯乙烯管9和它的配件的合適尺寸如下內(nèi)徑約9mm下室容量(例如用于選擇性介質(zhì))約1毫升，高度和上部介質(zhì)容量約8mm和0.6毫升，管子全高約65mm。
每個(gè)上述的隔室內(nèi)容納的是對(duì)活動(dòng)細(xì)菌有選擇性的和/或能指示其中活動(dòng)細(xì)菌的生長(zhǎng)的培養(yǎng)介質(zhì)。
合適的介質(zhì)如上文所述。絲氨酸是一種特別有效的介質(zhì)組分，因?yàn)樗菇橘|(zhì)對(duì)某些活動(dòng)細(xì)菌，如沙門氏菌和埃希氏桿菌屬表現(xiàn)為趨藥性誘引。
作隔板的材料可用Porex技術(shù)有限公司的Porex(商標(biāo))多孔聚合物，特別是用大約1/8吋厚的親水性的DBS聚合物板，切割成約1-3毫米，優(yōu)選大于2毫米厚的圓盤。在使用干介質(zhì)并由與水相接觸再水化時(shí)，最好在聚合物圓盤的下側(cè)提供一層薄薄的憎水材料涂層(例如“Repelcote”商標(biāo))。介質(zhì)以干粉形態(tài)裝入隔室里，經(jīng)再水化后形成凝膠?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，在某些特定情況下，上述介質(zhì)中的乳糖和藻酸組分(或如目前優(yōu)選的黃原酸和乳糖組分)，與多孔圓盤憎水的下表面一起，促進(jìn)了水平滑地向上移動(dòng)，從而得到連續(xù)的膠體介質(zhì)，介質(zhì)經(jīng)管子內(nèi)的充滿含水液體的多孔隔板相互聯(lián)結(jié)。
管子通常由干粉介質(zhì)組分構(gòu)成并且是無菌密封的，例如采用X射線照射鋪箔密封。
設(shè)備可按下述使用。
培育用的樣品的制備可方便地這樣實(shí)現(xiàn)借助于-Stomacher(商標(biāo))均化裝置(Seward，Surgical，VAC House，Blackfriars Road，倫敦SEI)(或其它如USP，3819158/GB1402538描述)，把樣品分散到介質(zhì)中。
使用的試樣和介質(zhì)的合適比例大約為25克比225毫升。(然而，在各種情況下，若使用大量的物料，把幾種(如多到10種)樣品組合和混合在一起，又如每種試樣各25克，作為單個(gè)的有效試樣，按本文所述方法檢測(cè)，也在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。當(dāng)然，如果這一組合試樣結(jié)果為陽(yáng)性，則對(duì)每一種樣品來源便均有懷疑，故需作進(jìn)一步的檢測(cè))。
試樣和液體營(yíng)養(yǎng)基，可與一種或多種含有如上描述的合適介質(zhì)的管狀載體一起，放進(jìn)培養(yǎng)容器中，支持介質(zhì)同在培養(yǎng)容器中的介質(zhì)相接觸。管狀載體最好這樣放置;使它們的下端浸沒在液體營(yíng)養(yǎng)基液面以下，而它們的上端凸出在液面以上。
在培育之后，例如在37℃，或高達(dá)41.5℃，經(jīng)過18-24小時(shí)，或按需要可延長(zhǎng)至長(zhǎng)達(dá)48小時(shí)，沙門氏菌的存在可通過如下途徑指示如含有賴氨酸鐵肉湯的任意區(qū)域黑化，和/或鉆石綠指示劑肉湯顏色變紅，或如在所選用的指示劑介質(zhì)(如本文所選用的)的情況下，已知的相對(duì)應(yīng)的顏色變化。
如果因證實(shí)培養(yǎng)和/或檢測(cè)需要，濃縮的沙門氏菌培養(yǎng)試樣可從開口的頂9移出，如果必要，可輕微地?cái)D壓含有支持介質(zhì)的撓性管以從凝膠或其它形式的支持介質(zhì)擠出培養(yǎng)液。如果需要，培養(yǎng)裝置可以延長(zhǎng)培育。
在一合適的培養(yǎng)周期之后，如果需要，可以移出在管狀載體中支持介質(zhì)上表面處的適宜的液體試樣液滴，以作為活動(dòng)細(xì)菌的濃縮試樣。通常，當(dāng)設(shè)立了一組培養(yǎng)容器來檢測(cè)多個(gè)樣品時(shí)，只是在那些指示劑陽(yáng)性反應(yīng)的試樣才有必要移出樣品進(jìn)行進(jìn)一步的測(cè)定。為進(jìn)一步檢測(cè)，采用某些裝置，使它與含有選擇性/指示介質(zhì)管狀載體頂部相通，這些也是在本發(fā)明所包括的范圍之內(nèi)。
參照?qǐng)D6，它表示一種選用的裝置，包括一個(gè)培養(yǎng)瓶1，在培養(yǎng)瓶1內(nèi)含有細(xì)菌學(xué)胨-水介質(zhì)2作為復(fù)蘇和生長(zhǎng)介質(zhì)，在復(fù)蘇和生長(zhǎng)介質(zhì)內(nèi)含分散的一定量的要檢測(cè)微生物的食品和其它物料。該例是用于檢測(cè)沙門氏菌污染的試樣，在這種情況下，試樣的制備和培養(yǎng)如圖1-5所述。
培養(yǎng)瓶1還包括一個(gè)載體插入件3，插入件3提供一個(gè)由瓶1形成的培養(yǎng)容器的第二區(qū)域，第二區(qū)域被固定到培養(yǎng)容器有關(guān)的瓶口上，在這個(gè)實(shí)施例中，插入件3載有一種或多種選擇濃縮和/或指示介質(zhì)，它對(duì)呈被支持形態(tài)的沙門氏菌有選擇性，即微生物可以遷移入載體插入件3和其中的介質(zhì)，并能通過其中的營(yíng)養(yǎng)基被選擇性濃縮和/或指示。與此同時(shí)，其它微生物的通過或生長(zhǎng)則受到限制。
載體插入件3包括一個(gè)撓性的不透水的塑料管4，懸掛和安裝于培養(yǎng)瓶1的瓶頸5上，用一個(gè)多孔的細(xì)菌柱塞6封住，管4有敞開的頂部和底端，同時(shí)在該實(shí)施例中，在液面以上有一組側(cè)向孔以允許空氣排出。
在管4內(nèi)有三個(gè)介質(zhì)區(qū)，每個(gè)區(qū)通過一種緊密的褶形過濾器支持，這種濾器類似于過濾咀香煙的濾咀形式。褶形過濾器有軸向的狹窄通道，它基本上與管4軸線相平行。三個(gè)褶形過濾器7，8，9的每一個(gè)在管4內(nèi)形成一個(gè)支持柱塞。過濾器互相靠在一起或幾乎靠在一起。過濾器7，9如下所述是用介質(zhì)浸漬的紙過濾器。過濾器8是紙的或者塑料材料的，它所含有的液體，是在管4部件裝備有用水或用營(yíng)養(yǎng)基從干燥的浸漬狀態(tài)經(jīng)再水化的過濾器7，8，9時(shí)，在其內(nèi)部所流動(dòng)的介質(zhì)組分。
在該例中，柱塞7可用組分從其干料浸漬態(tài)再水化形成賴氨酸鐵肉湯(通常包括在這種肉湯中的瓊脂，黃原酸或者其他凝固組分可以存在，也可以不要)。柱塞9可用組分從其干料再水化，得到鉆石綠指示劑肉湯。凝固組分可以存在，也可以不要。
管4和在其中的過濾器柱塞7，8，9在使用之前可通過在無菌蒸餾水中浸濕5分鐘而再水化。然后無菌轉(zhuǎn)移并插入到圖1所示的瓶1的位置。
采用本裝置后，與采用了本發(fā)明的其他裝置和方法的例子一樣，意味著當(dāng)有一系列可疑的樣品時(shí)，一組顯示陽(yáng)性反應(yīng)的瓶(可能較少所需要的再培養(yǎng)或附加檢測(cè)操作可以減少。該裝置像許多本發(fā)明的選用形式那樣，同樣可快速地獲得培養(yǎng)檢測(cè)結(jié)果。
參照?qǐng)D7(不按比例)，除了如下所述者外，與圖1所示設(shè)置類似。
在瓶1的適當(dāng)位置有一個(gè)撓性塑料袋21，主要由二層在它們的邊緣22處熱封而成，袋中含有適合于微生物的復(fù)蘇和生長(zhǎng)的培養(yǎng)介質(zhì)。折邊23蓋在由袋的后片和前片23a的上邊緣形成的孔上。在使用中，通過二個(gè)掛鉤24，25以及一在二個(gè)掛鉤之間延伸的剛性支座把袋掛住。一個(gè)熱封接縫26把袋分成主隔室和安放及支持不能透液的撓性塑料管4的側(cè)袋27，4的頂部和底部是敞開的，用以支持基本如圖6所述的選擇性濃縮和/或指示介質(zhì)。對(duì)于培養(yǎng)介質(zhì)，側(cè)袋27在下部與主隔室相通，由于接縫26沒有完全延伸到袋底，培養(yǎng)介質(zhì)表面如圖示28。
管4及其所含物料，除了它包括5個(gè)柱塞之外，類似于圖6所述。柱塞是由壓緊的褶形過濾材料構(gòu)成的。
最下部的柱塞用組分從其干浸漬制劑再水化，以得到加倍的賴氨酸鐵肉湯(不包括必要的凝固組分)，這樣，即使一部分肉湯被濾到大量的生長(zhǎng)和復(fù)蘇介質(zhì)中，仍可獲得足夠的顏色反應(yīng)。中部柱塞含有的組分可得到原量的賴氨酸鐵肉湯，最上部柱塞含有(在再水化之前)的組分能得到鉆石綠指示劑肉湯。在一種適合的實(shí)施例中，五個(gè)柱塞的總長(zhǎng)度大約是2吋，而它們的直徑大約是1/4吋。
該裝置的使用如圖7所示，在細(xì)節(jié)上可以作必要修改。
參照?qǐng)D8，它表示本發(fā)明實(shí)施例的一種無菌密封的干燥容器。該容器是由一種塑料外殼31構(gòu)成，包含有脫水材料構(gòu)成的管4，管內(nèi)含如上所述的支持介質(zhì)。干燥的柱塞(例如紙)在其成褶和壓緊之前的制備為根據(jù)柱塞材料的要求，干燥一定量的可形成如上介質(zhì)的物料。例如在60℃的真空中。這種材料在干燥、成褶、裝填于管4中，密封在外殼31內(nèi)之后，可用伽瑪射線以0.5Mrade(KGrays)照射進(jìn)行滅菌處理。如果要求的話，在每個(gè)外殼31中能夠裝填多個(gè)插入件，如果適宜，同時(shí)可放入一定量的干燥劑。
圖6-8所述管狀插入件的一種較重要的變化形式是可采用以明膠支持的由多孔，如圖1-5所述的大孔隔板限制的半固體介質(zhì)。它們可按照?qǐng)D8描述的那樣干燥裝填。
一種適宜的插入件(在附圖中沒有表示)，含有凝膠物質(zhì)，其組分為Oxoid(商標(biāo))的含有膽脂酸鈉(0.2克%)，脫氫膽脂酸鈉(0.6克%)，新生霉素(0.04克%)和黃原酸(0.4克%)的硫化鉍肉湯。這種混合物可選擇性培養(yǎng)沙門氏菌，在陽(yáng)性結(jié)果下變黑。明膠依靠固定在管子下端斷面上的多孔膜過濾器截留在管內(nèi)。當(dāng)然這種膜也可以用在褶形過濾器支持的實(shí)施例中。
在這種情況中的用于沙門氏菌又一選用的實(shí)施例為，一種裝置，它含有呈凝膠狀態(tài)的選擇性濃縮介質(zhì)，能同復(fù)蘇和生長(zhǎng)介質(zhì)液相接觸，包括一個(gè)敞開的熱成型塑料管，在它下部開口處直徑大約1吋，在它頂端開口處，直徑逐漸變狹窄，大約1/4吋，整個(gè)高度大約1吋。
底部開孔邊緣用粘合劑通過細(xì)密的尼龍篩網(wǎng)膜密封。用于該例和另外的實(shí)例的適宜篩網(wǎng)孔徑是10微米，每厘米190目，由42微米直徑的尼龍線編織而成的篩網(wǎng)，篩網(wǎng)透水率是80升/平方米/秒。(這種篩網(wǎng)可以商購(gòu)，為Simonyl HD10商標(biāo))。該裝置可被支撐或浮動(dòng)在復(fù)蘇/生長(zhǎng)介質(zhì)表面上，它包含有如前所述的選擇性濃縮介質(zhì)。上部孔可被用作取樣點(diǎn)。
在圖9和圖10中表示的是另外一些把管狀載體放入如前所述的復(fù)蘇培養(yǎng)介質(zhì)中適當(dāng)位置的布置。在圖9和圖10布置中，二個(gè)管狀載體91，(基本上如前述各圖所示)，作為一可移動(dòng)推力件，裝配入浮動(dòng)架92上的孔中。架92包括一個(gè)平臺(tái)93，平臺(tái)上有孔用來插入管91，優(yōu)選平臺(tái)93的材料是白色的塑料板(剛性)，以便很容易地觀察在管91內(nèi)的介質(zhì)狀況。固定在平臺(tái)93周圍和下方的是充滿空氣或泡沫或其它浮動(dòng)材料的浮動(dòng)裙座94。如果裙座依靠空氣浮動(dòng)則為氣密式。每個(gè)載體管包含一個(gè)由多孔親水聚合物制成的下隔板(95)和上隔板(96)，下部為選擇性支持介質(zhì)97，上部為指示劑支持介質(zhì)98。在培養(yǎng)周期結(jié)束時(shí)，試樣能從上部介質(zhì)的上表面99移出。
在使用當(dāng)中，在管子中介質(zhì)能夠通過與水接觸再水化，管子用推力將其裝配進(jìn)浮動(dòng)平臺(tái)93的孔中。然后，該裝置在檢測(cè)和培育時(shí)，浮動(dòng)在與樣品接種的復(fù)蘇介質(zhì)中。這種布置使得可以很大地改變培養(yǎng)容器的外形和尺寸，以適應(yīng)各種規(guī)模的復(fù)蘇培養(yǎng)。
一種改進(jìn)的用于本發(fā)明所述的培養(yǎng)方法的管狀載體的實(shí)施例如圖11所示。一種注射模成型塑料管111設(shè)有如上所述的多孔親水聚合物制成的下隔板112和上隔板113，形成下隔室114和上隔室115。在使用中，上述隔室114和115分別含有選擇性和指示介質(zhì)。通常如前所述，管狀載體在114和115中含有干組分，無菌密封包裝分布。下隔室114與上方的隔板113相連，另與管111的壁內(nèi)所形成的側(cè)孔116-117相通。側(cè)孔116-117向上延伸越過隔室115，并且再開孔進(jìn)入管111的主孔道，形成隔室114的通道。管的通道在使用之前是閉塞的，這是由在隔室115以上活塞118同管111密合實(shí)現(xiàn)的。按照這個(gè)實(shí)施例，通過手柄119向上移動(dòng)活塞118，使再水化的水能夠通過下隔板112快速抽上，以水化在114和115中的凝膠介質(zhì)。活塞18在使用之后，完全抽出并棄之。所形成的經(jīng)再水化的管狀載體能與如上所述的簡(jiǎn)單的管狀載體相類似的方法采用，而通常，是簡(jiǎn)單地將載體浸入水中實(shí)現(xiàn)再水化。按照本發(fā)明的這種布置，能夠快速地建立濃縮培養(yǎng)。在使用中，通道116-117因能排泄代謝氣體，改善了微生物從下部到上部隔室轉(zhuǎn)移的穩(wěn)定性。
其它的微生物，只要用適當(dāng)?shù)奶娲橘|(zhì)，按照本發(fā)明所指出的使用支持濃縮和/或指示介質(zhì)與復(fù)蘇/生長(zhǎng)介質(zhì)保持接觸的辦法，也可以在培養(yǎng)中復(fù)蘇和濃縮。例如彎曲桿菌屬，可利用在圖6和圖8中表示的較新型的插入件柱塞7，其中含有“普雷斯頓”選擇性介質(zhì)組分(如果需要可以省去瓊脂，或者由另一選用的凝固劑例如含有乳糖的黃原酸取代)以及柱塞9，其中含有一種適宜的已知指示介質(zhì)，進(jìn)行濃縮和檢測(cè)。
對(duì)復(fù)蘇/生長(zhǎng)介質(zhì)可作的一種有效的改進(jìn)是加入少量的消泡劑，如在225毫升介質(zhì)中加入0.2毫升的戊醇。
雖然不是必需，但在本發(fā)明的范圍內(nèi)，也可以分出一部分接種有樣品如經(jīng)過一段時(shí)間培育的復(fù)蘇/生長(zhǎng)介質(zhì)，并僅用整個(gè)培養(yǎng)液的一部分與支持生長(zhǎng)介質(zhì)接觸。這樣，權(quán)利要求
1中的步驟(C)或可在分離出一部分培養(yǎng)液之后進(jìn)行，然后使剩余物與支持介質(zhì)接觸，以便進(jìn)行與之接觸的進(jìn)一步的培育和培養(yǎng)。步驟(D)可以修正以僅培育一部分的培養(yǎng)液，該培養(yǎng)液由樣品和復(fù)蘇/生長(zhǎng)介質(zhì)培育而得，從而使得活動(dòng)細(xì)菌可以遷移入支持介質(zhì)中。在該方法的改進(jìn)型中，盡管不是必需，但可以用進(jìn)一部的介質(zhì)來稀釋所分離出的那部分復(fù)蘇/生長(zhǎng)介質(zhì)培養(yǎng)液。
目前，本發(fā)明人優(yōu)選的用于沙門氏菌檢測(cè)的支持介質(zhì)，是如上所述的在一個(gè)管中的改進(jìn)的RV介質(zhì)(下部-直接與復(fù)蘇/生長(zhǎng)培養(yǎng)液接觸)和LICNR介質(zhì)(上部-與RV介質(zhì)接觸)的混合。如果需要，管子的下部可以被掩蓋住以使管子上部的指示反應(yīng)更加醒目。
在采用圖11的改進(jìn)柱塞的方法以再水化支持介質(zhì)管的場(chǎng)合，就不需要再用上述在其他情況下有幫助的“防護(hù)涂覆”而成的防水涂層。再者，若在管狀載體中的支持介質(zhì)已被再水化，如用無菌水再水化，則有時(shí)劇烈攪拌它們將有幫助，如用“Whirlimxer”(商標(biāo))攪拌。
若把一組或多個(gè)類似管4的插入件及其所含的物料或其它選擇性濃縮介質(zhì)，插入一單個(gè)的接種有待測(cè)樣品的復(fù)蘇和生長(zhǎng)介質(zhì)的試樣中，也屬于本發(fā)明的范圍。
按這種辦法，幾種可能的微生物能夠同時(shí)例如在一個(gè)瓶中進(jìn)行檢測(cè)。
本發(fā)明容許專業(yè)人員在顯而易見的地方作許多的改進(jìn)和變化，現(xiàn)在所公開的內(nèi)容，還包括本發(fā)明說明書、附圖和權(quán)利要求
中描述的各個(gè)特征的組合及其二次組合。
權(quán)利要求
1.一種用于選擇性地培養(yǎng)活動(dòng)細(xì)菌的方法，包括如下步驟(a).制備一種懷疑含有活動(dòng)細(xì)菌的物料之細(xì)菌學(xué)培育樣品；(b).把上述物料放入含有適合于活動(dòng)細(xì)菌復(fù)蘇和生長(zhǎng)的液體營(yíng)養(yǎng)基的培養(yǎng)容器中；(c).提供至少一種載體，它部分浸入上述的液體營(yíng)養(yǎng)基中，但凸出于上述液體營(yíng)養(yǎng)基表面以上，上述載體內(nèi)含有由適宜介質(zhì)得來的支持營(yíng)養(yǎng)基，所說的適宜介質(zhì)適合于活動(dòng)細(xì)菌的細(xì)菌學(xué)選擇生長(zhǎng)和指示，上述載體在上述液體營(yíng)養(yǎng)基表面以下有一個(gè)開孔，以使在上述容器中的液體介質(zhì)與由上述載體載有的支持介質(zhì)保持接觸，從而使得在培養(yǎng)期間上述的活動(dòng)細(xì)菌可從上述的液體遷移入上述的支持介質(zhì)中；(d).培育上述樣品和上述的營(yíng)養(yǎng)基，使得在上述液體介質(zhì)中的上述試樣里存在的任何活動(dòng)細(xì)菌生長(zhǎng)，在培養(yǎng)期間上述活動(dòng)細(xì)菌遷移入上述的支持介質(zhì)中，并在其中使上述活動(dòng)細(xì)菌生長(zhǎng)。
2.按照權(quán)利要求
1的方法，其特征是上述載體在上述營(yíng)養(yǎng)基的表面以上還有一個(gè)開孔，上述支持營(yíng)養(yǎng)基有一個(gè)轉(zhuǎn)移表面以用于上述細(xì)菌在它們遷移入上述的支持介質(zhì)、生長(zhǎng)和移出之后試樣的轉(zhuǎn)移，上述的方法還包括把上述活動(dòng)細(xì)菌在生長(zhǎng)之后，從上述支持介質(zhì)的轉(zhuǎn)移表面，轉(zhuǎn)移入和轉(zhuǎn)移通過上述的支持介質(zhì)。
3.按照權(quán)利要求
1的方法，其特征是采用一至少有二種支持介質(zhì)串聯(lián)的載體，第一種支持介質(zhì)同上述的液體介質(zhì)相接觸，使第二種支持介質(zhì)同第一種支持介質(zhì)相接觸，從而使得活動(dòng)細(xì)菌在培養(yǎng)期間，可從液體介質(zhì)連續(xù)地遷移通過上述的第一和第二支持介質(zhì)。
4.按照權(quán)利要求
3的方法，其特征是采用一種載體，它含有與上述液體相接觸的，適合于待培養(yǎng)細(xì)菌的選擇性支持介質(zhì)，并含有與上述選擇性介質(zhì)相串聯(lián)接觸的，適合于待培養(yǎng)細(xì)菌的指示介質(zhì)。
5.按照權(quán)利要求
4的方法，其特征是采用選擇從凝膠賴氨酸-鐵介質(zhì)和改進(jìn)的凝膠Rappaport-Vassiliadis介質(zhì)得來的選擇性介質(zhì)，選擇從鉆石綠脫氧膽介質(zhì)和賴氨酸-鐵-胱氨酸中性紅介質(zhì)得來的指示介質(zhì)，以適用于選擇性濃縮培養(yǎng)和指示沙門氏菌。
6.按照權(quán)利要求
1的方法，其特征是采用一種以上載體，每種載體都載有支持選擇性和/或指示介質(zhì)，它與上述的液體營(yíng)養(yǎng)基相接觸。
7.用于選擇性地培養(yǎng)活動(dòng)細(xì)菌的設(shè)備，包括(a).一含有液體營(yíng)養(yǎng)基的培養(yǎng)容器，以用于活動(dòng)細(xì)菌的復(fù)蘇和生長(zhǎng);(b).一載體，它部分浸入上述的液體營(yíng)養(yǎng)基中并凸出于上述液體營(yíng)養(yǎng)基的表面以上，上述載體含有從適宜的介質(zhì)得來的支持營(yíng)養(yǎng)基，適宜的介質(zhì)是指適合于細(xì)菌學(xué)地選擇性生長(zhǎng)和指示活動(dòng)細(xì)菌的介質(zhì)，上述載體在液體營(yíng)養(yǎng)基的表面以下有一個(gè)開孔，以用于在上述容器中液體介質(zhì)和在上述載體中的支持介質(zhì)之間保持接觸，從而使上述活動(dòng)細(xì)菌在培養(yǎng)期間從上述液體遷移進(jìn)入上述的支持介質(zhì)。
8.按照權(quán)利要求
7的設(shè)備，其特征是上述載體包括由多孔支持物或打孔隔板隔開的二個(gè)隔室，上述的二個(gè)隔室含有第一種和第二種選擇性和/或指示介質(zhì)。
9.按照權(quán)利要求
8的設(shè)備，其特征是上述的隔板包括孔的尺寸大于10微米的多孔聚合物，以使活動(dòng)細(xì)菌可從其中通過。
10.按照權(quán)利要求
7的設(shè)備，其特征是介質(zhì)是一種凝膠介質(zhì)。
11.按照權(quán)利要求
10的設(shè)備，其特征是上述介質(zhì)呈無菌密封包裝的干組分形式，它可經(jīng)再水化形成適合于培養(yǎng)的介質(zhì)狀態(tài)。
12.按照權(quán)利要求
7的設(shè)備，其特征是上述的培養(yǎng)容器包括選自支座、固定件和浮臺(tái)的裝置，以便固定上述的載體，從而在使用中使載體部分地浸入上述的液體培養(yǎng)介質(zhì)中。
13.按照權(quán)利要求
9和11的設(shè)備，其特征是上述的載體是管狀，有一個(gè)活動(dòng)的注射活塞，可在管內(nèi)抽上含水液體用以上述干組分的再水化，在管上有一個(gè)通道，用以在培養(yǎng)期間釋放出上述第一隔室(底部)的氣體。
14.一種細(xì)菌學(xué)的載體，包含有至少一種適合于活動(dòng)細(xì)菌選擇性濃縮培養(yǎng)的營(yíng)養(yǎng)物料，上述的載體包括一個(gè)管，有一個(gè)第一開孔和與第一開孔隔開的第二開孔，所含的物料在與上述的第一開孔相鄰處形成一支持介質(zhì)，上述的介質(zhì)選自適合于活動(dòng)細(xì)菌細(xì)菌學(xué)的選擇性生長(zhǎng)和指示的介質(zhì)，上述的管和支持介質(zhì)以這樣設(shè)置，使得上述的載體能夠部分地浸入液體營(yíng)養(yǎng)基中，并且凸出在上述液體營(yíng)養(yǎng)基的表面以上，液體營(yíng)養(yǎng)基同載體內(nèi)的支持介質(zhì)保持接觸，從而使得活動(dòng)細(xì)菌在上述細(xì)菌的培養(yǎng)期間，可從上述的液體遷移進(jìn)入上述的支持介質(zhì)中。
15.按照權(quán)利要求
14的一種細(xì)菌學(xué)載體，其特征是上述的支持介質(zhì)是與多孔的或打孔隔板保持接觸的支持介質(zhì)，所述的隔板鄰近上述的第一開孔。
16.按照權(quán)利要求
15的一種細(xì)菌學(xué)載體，它包含至少二種支持介質(zhì)物料，每一種選自適合于活動(dòng)細(xì)菌細(xì)菌學(xué)地選擇性生長(zhǎng)和指示的介質(zhì)，第一種上述介質(zhì)是與上述的第一開孔相鄰的多孔的或者打孔隔板保持接觸的支持介質(zhì)，第二種上述介質(zhì)是一種與位于第一種介質(zhì)和第二開孔之間的第二多孔或打孔隔板保持接觸的支持介質(zhì)。
17.用于活動(dòng)微生物選擇性濃縮培養(yǎng)和檢測(cè)的方法和設(shè)備，其特征是由說明書，附圖和權(quán)利要求
的幾個(gè)特征中的一個(gè)或多個(gè)特征。
專利摘要
用于選擇性地培養(yǎng)活動(dòng)細(xì)菌，例如沙門氏菌、凱普勒菌屬的方法，步驟如下
文檔編號(hào)C12M1/28GK87106707SQ87106707
公開日1988年5月11日 申請(qǐng)日期1987年8月28日
發(fā)明者羅伊·霍爾布魯克 申請(qǐng)人:尤尼利弗公司導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan