專利名稱:固定有引物層或引物、探針混合層的固相載具的制作方法
【專利摘要】本實(shí)用新型涉及PCR反應(yīng)特指聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的實(shí)驗(yàn)用具【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其是一種固定有引物層或引物、探針混合層的固相載具，固相載具上至少有一個(gè)PCR反應(yīng)管/孔，該P(yáng)CR反應(yīng)管/孔內(nèi)固定有一層反應(yīng)層。反應(yīng)層為固化的引物層或固化的引物、探針混合層。固相載具是指裝載有PCR反應(yīng)管/孔的固相載體。本實(shí)用新型的固相載具帶有引物層或引物、探針混合層，使用時(shí)只需加入酶混合液、滅菌水和模板，不需再加入PCR引物和探針，減輕勞動(dòng)負(fù)荷，減少工作量，降低了加孔的出錯(cuò)率；能很快完成實(shí)驗(yàn)操作，縮短檢測(cè)周期，提高了工作效率；由于PCR反應(yīng)所需的引物、探針已固定在PCR管內(nèi)，不再以液體形式存在，運(yùn)輸與儲(chǔ)存非常方便。
【專利說(shuō)明】固定有引物層或引物、探針混合層的固相載具

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實(shí)用新型涉及PCR反應(yīng)(Polymerase Chain React1n,聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，一種用于體外擴(kuò)增核酸片段的技術(shù))實(shí)驗(yàn)用具【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其是一種固定有引物層或引物、探針混合層的固相載具。

【背景技術(shù)】
[0002]PCR板是PCR試驗(yàn)或熒光定量PCR試驗(yàn)中常用的分子生物學(xué)耗材，分為48孔PCR板、96孔PCR板、384孔PCR板、8聯(lián)管和單孔PCR反應(yīng)管。PCR板的使用方法是通過(guò)加入PCR反應(yīng)引物、探針、酶混液(DNA聚合酶與緩沖液的混合液或DNA聚合酶、逆轉(zhuǎn)錄酶與緩沖液的混合液)、水和模板核酸片段，混合后放入PCR儀或?qū)崟r(shí)熒光定量PCR儀上進(jìn)行PCR反應(yīng)。這種方法的不足之處在于:1、檢測(cè)或擴(kuò)增同一個(gè)基因、進(jìn)行多個(gè)PCR反應(yīng)時(shí)，需要向多個(gè)PCR反應(yīng)管/孔內(nèi)重復(fù)加入相同的引物和探針；2、檢測(cè)或擴(kuò)增不同的基因、進(jìn)行多個(gè)PCR反應(yīng)時(shí)，需要向不同的PCR反應(yīng)管/孔內(nèi)加入不同的引物和探針。這樣，既耗費(fèi)實(shí)驗(yàn)人員時(shí)間，工作量大，工作效率低，又容易出錯(cuò)，引物或探針加錯(cuò)管(孔)位，從而直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的及時(shí)性、準(zhǔn)確性和重復(fù)性。例如:1、檢測(cè)60份標(biāo)本中的乙肝病毒基因，就需要重復(fù)60次向60個(gè)PCR反應(yīng)管/孔內(nèi)加入乙肝病毒基因的引物和探針，工作量大，耗時(shí)長(zhǎng)，工作效率低，實(shí)驗(yàn)人員也很辛苦；2、同時(shí)檢測(cè)30份標(biāo)本中的乙肝病毒基因和丙肝病毒基因，就需要重復(fù)30次向30個(gè)PCR反應(yīng)管/孔內(nèi)加入乙肝病毒基因的引物和探針，再重復(fù)30次向30個(gè)PCR反應(yīng)管/孔內(nèi)加入丙肝病毒基因的引物和探針，不僅工作量大，耗時(shí)長(zhǎng)，還有可能加錯(cuò)管(孔)位，得出錯(cuò)誤的結(jié)果。
實(shí)用新型內(nèi)容
[0003]為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本實(shí)用新型提供了一種固定有引物層或引物、探針混合層的固相載具。
[0004]本實(shí)用新型解決現(xiàn)有PCR技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案是:一種固定有引物層或引物、探針混合層的固相載具，包括固相載具，所述固相載具上設(shè)有至少一個(gè)PCR反應(yīng)管/孔，該P(yáng)CR反應(yīng)管/孔內(nèi)固定有一層反應(yīng)層。
[0005]根據(jù)本實(shí)用新型的另一個(gè)實(shí)施例，進(jìn)一步包括所述反應(yīng)層為固化的引物層或固化的引物探針混合層。
[0006]根據(jù)本實(shí)用新型的另一個(gè)實(shí)施例，進(jìn)一步包括所述固相載具為48孔PCR板、96孔PCR板、384孔PCR板、8聯(lián)管或單個(gè)PCR反應(yīng)管。
[0007]本實(shí)用新型的有益效果是:
[0008](I)本實(shí)用新型的固相載具帶有引物層或引物、探針混合層，使用時(shí)只需加入酶混合液(DNA聚合酶與緩沖液的混合液或DNA聚合酶、逆轉(zhuǎn)錄酶與緩沖液的混合液)、滅菌水和模板，減輕勞動(dòng)負(fù)荷，減少工作量，減少了加孔的出錯(cuò)率；
[0009](2)本實(shí)用新型的固相載具帶有引物層或引物、探針混合層，能很快完成實(shí)驗(yàn)操作，縮短檢測(cè)周期，大大提高了工作效率；
[0010](3)本實(shí)用新型的固相載具固定有引物層或引物、探針混合層，避免運(yùn)輸過(guò)程中因液體溢出導(dǎo)致污染，同時(shí)也因沒有液體存在而更方便運(yùn)輸與儲(chǔ)存。

【附圖說(shuō)明】

[0011]下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本實(shí)用新型進(jìn)一步說(shuō)明。
[0012]圖1是本實(shí)用新型固相載具裝載多個(gè)PCR反應(yīng)管/孔結(jié)構(gòu)示意圖。
[0013]圖2是本實(shí)用新型多管固相載具上單個(gè)PCR反應(yīng)管/孔的切面示意圖。
[0014]圖3是本實(shí)用新型固相載具裝載單個(gè)PCR反應(yīng)管結(jié)構(gòu)示意圖。
[0015]圖4是本實(shí)用新型單管固相載具裝載的單個(gè)PCR反應(yīng)管切面示意圖。
[0016]圖5是使用本實(shí)用新型固相載具檢測(cè)三種目標(biāo)基因的熒光定量PCR擴(kuò)增曲線示意圖。
[0017]圖中，1、固相載具，2、PCR反應(yīng)管/孔，3、引物層或引物、探針?lè)磻?yīng)層。

【具體實(shí)施方式】
[0018]一種固定有引物層或引物、探針混合層的固相載具，包括固相載具1，所述固相載具I上設(shè)有至少一個(gè)PCR反應(yīng)管/孔2，該P(yáng)CR反應(yīng)管/孔2內(nèi)固定有一層反應(yīng)層3，其中反應(yīng)層3為固化的引物層或固化的引物、探針混合層。固相載具I為48孔PCR板、96孔PCR板、384孔PCR板、8聯(lián)管或單個(gè)PCR反應(yīng)管等，只要能實(shí)現(xiàn)PCR反應(yīng)的固相載具均可，此處不應(yīng)當(dāng)受到限制。
[0019]如圖1、2所示，為本實(shí)用新型的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例，固相載具I為96孔PCR反應(yīng)板，其PCR反應(yīng)孔2內(nèi)固定有由引物、探針混合層組成的反應(yīng)層3。圖3、圖4為本實(shí)用新型另一實(shí)施例，單個(gè)PCR反應(yīng)管的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0020]本實(shí)施例中，反應(yīng)層3為引物、探針混合層，固定時(shí)，先將引物單溶、探針單溶，或引物、探針混合溶，溶解好后，分別加入到96孔PCR板的每一個(gè)孔中，短暫離心后將帶有引物、探針混合層的96孔PCR固相載具放入烘箱中，35°C -95°C放置5分鐘到3小時(shí)，將加入的液體水分蒸干，同時(shí)保留并固定引物、探針混合層。相同方法，固相載具內(nèi)可單獨(dú)固定有引物層。由于PCR反應(yīng)所需的引物、探針已固定在PCR孔內(nèi)，不再以液體形式存在，可以以任意形式很方便地放置于冰箱中，運(yùn)輸時(shí)只需打包即可，非常方便。而目前PCR反應(yīng)的引物與探針一般配置成液體，分別存放于冰箱內(nèi)，運(yùn)輸時(shí)要正置，小心存放，以防液體溢出，非常不便。
[0021]本實(shí)用新型固相載具使用時(shí)，只需將酶混合液(DNA聚合酶與緩沖液的混合液或DNA聚合酶、逆轉(zhuǎn)錄酶與緩沖液的混合液)、滅菌水和模板(病例樣本、陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照)按比例混勻后，加入至每個(gè)PCR孔中即可進(jìn)行PCR反應(yīng)，使用方便，減少了實(shí)驗(yàn)人員的工作量。由于PCR反應(yīng)所需的引物、探針已預(yù)先固定在PCR孔內(nèi)，實(shí)驗(yàn)人員不需再向PCR反應(yīng)孔內(nèi)加入引物和探針，大大縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間和檢測(cè)周期，減輕了實(shí)驗(yàn)人員的工作負(fù)擔(dān)，提高了工作效率。在本實(shí)施例中，如按一般的實(shí)驗(yàn)方法，用96孔PCR板單重反應(yīng)檢測(cè)32例樣本，每例樣本均檢測(cè)3種目標(biāo)基因，96個(gè)PCR反應(yīng)管/孔剛好用完。在實(shí)驗(yàn)時(shí)，需先離心引物和探針，耗時(shí)2分鐘；檢測(cè)3種目標(biāo)基因，需稀釋3條探針與6條引物(上游引物、下游引物)，約需時(shí)間5分鐘；取離心管做標(biāo)記，需要2分鐘；計(jì)算引物、探針用量，配制三種目標(biāo)基因引物、探針混合液約需10分鐘；將引物、探針混合液加入相應(yīng)的孔位，每個(gè)孔位需8秒鐘，加完96孔PCR板所需時(shí)間約13分鐘。這樣，完成一個(gè)96孔PCR板引物、探針的稀釋、配制和加入約需30多分鐘。而使用本實(shí)用新型固相載具，在實(shí)驗(yàn)時(shí)就可以節(jié)約這30多分鐘。這對(duì)有時(shí)間要求或檢測(cè)樣本量較大的實(shí)驗(yàn)來(lái)說(shuō)，非常重要。例如在三甲醫(yī)院檢驗(yàn)科，每天要檢測(cè)上百例的樣本，而且往往要求在半天內(nèi)出結(jié)果。檢驗(yàn)人員不僅工作量大，操作速度也要很快，工作壓力可想而知。如果使用本實(shí)用新型固相載具，就可以節(jié)約一個(gè)多小時(shí)的檢驗(yàn)時(shí)間，并且省去很多操作環(huán)節(jié)。特別地，由于省了很多工作，減少了檢驗(yàn)時(shí)間，檢驗(yàn)人員不用太過(guò)匆忙，實(shí)驗(yàn)操作會(huì)較為從容，這樣，檢驗(yàn)結(jié)果也會(huì)更為準(zhǔn)確。由于檢驗(yàn)所需的引物和探針已預(yù)先固定在固相載具內(nèi)，不會(huì)發(fā)生檢驗(yàn)人員因趕時(shí)間過(guò)于匆忙而將一種基因的引物和探針加錯(cuò)管位的問(wèn)題，因而本發(fā)明還能有效避免因加錯(cuò)孔位而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果出錯(cuò)的檢驗(yàn)事故。
[0022]綜上所述本實(shí)用新型使用方便，能大大減少實(shí)驗(yàn)人員的工作量、縮短檢測(cè)周期、提高工作效率、并且能有效降低實(shí)驗(yàn)的出錯(cuò)率。
【權(quán)利要求】
1.一種固定有引物層或引物、探針混合層的固相載具，包括固相載具(1)，其特征是，所述固相載具(I)上裝載至少一個(gè)PCR反應(yīng)管/孔(2)，該P(yáng)CR反應(yīng)管/孔(2)內(nèi)固定有一層反應(yīng)層(3)。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的固定有引物層或引物、探針混合層的固相載具，其特征是，所述反應(yīng)層(3)為固化的引物層或固化的引物、探針混合層。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的固定有引物層或引物、探針混合層的固相載具，其特征是，所述固相載具(I)為48孔PCR板、96孔PCR板、384孔PCR板、8聯(lián)管或單個(gè)PCR反應(yīng)管。
【文檔編號(hào)】C12M1-00GK204281754SQ201420595112
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