專利名稱：具有增強免疫和抗腫瘤活性的厚殼貽貝多糖mf4的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，是從海洋動物厚殼貽貝中分離到一種新的具有增強免疫和抗腫瘤活性的多糖MF4。
背景技術(shù)：
厚殼貽貝(Mytilus Coruscus)屬貽貝科(Mytilidae)貽貝屬(Mytilus)；為溫水性種，在我國主要分布在遼寧省的大連、小長山；山東省的青島、砣磯島、大欽島、蓬萊、煙臺、威海；浙江省的嵊泗列島、舟山群島、朱家尖、魚山群島、下大陳、南麂島；福建省的平譚、廈門、東山。貝殼較大，厚重，呈楔形；成體體長100-200mm左右，殼長度為或大于高度的2倍，約為寬度的2.5-3倍。殼前端較尖細，后端寬圓；殼表較粗糙，被有棕褐色或栗褐色的殼皮(王禎瑞，中國動物志.軟體動物門.雙殼綱貽貝目.第1版.北京.北京科學出版社，1997)貽貝貝肉肉質(zhì)含豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，是高級蛋白、維生素D的重要來源；文獻報道(劉志峰等，中國海洋藥物，2001，20(6)9)貽貝有抗動脈粥樣硬化，降血脂，抑制血小板的凝聚從而抑制血栓的形成，改善心肌氧和營養(yǎng)物質(zhì)的供應及保護實驗性心肌缺血，改善微循環(huán)和降血壓等功效，而對該種貽貝的活性成分未見報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明從生長于中國浙江海域的厚殼貽貝中提取分離到一種新的具有免疫增強作用和抗腫瘤作用的多糖，命名為MF4，經(jīng)理化性質(zhì)分析，其理化性質(zhì)為白色絮狀化合物，易溶于水和二甲基亞砜，相對分子量為113,000，主要由巖藻糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖組成，比例依次為15∶15∶26∶37；糖苷鍵的構(gòu)型為β構(gòu)型；糖苷鍵的類型為1-4糖苷鍵，1-2糖苷鍵和五碳糖1-3糖苷鍵，比例依次為80∶9∶2；而存在于分支點處的糖苷鍵為1-6糖苷鍵和脫氧六碳糖1-2糖苷鍵，比例為7∶10；端基糖除了六碳糖外，分子還含有部分脫氧六碳糖。
本發(fā)明厚殼貽貝多糖MF4的提取分離方法如下(1)提取將新鮮的厚殼貽貝貝肉洗凈、用攪拌機攪碎后，在3倍體積沸水中加熱提取4小時，提取液用2倍體積95％的乙醇沉淀，沉淀用乙醇、丙酮分別洗滌3次，用Savager法除蛋白2次(將沉淀與Savage試劑∶CHCl3-n-BuOH＝4∶1充分混勻，離心收集上清液，去除水與有機相之間的蛋白變性層)，收集水相，冷凍干燥，得厚殼貽貝多糖粗提物。
(2)分離上述多糖粗提物用DEAE-纖維素-52(Pharmacia公司)分離，依次用0.05、0.1、0.2、0.5、1.0mol/L的NaCl洗脫，收集0.5mol/L的洗脫部分，脫鹽濃縮，冷凍干燥，得MF部分；MF用葡聚糖凝膠Sephadex G-100(Pharmacia公司)分離，以0.05mol/L的NaCl洗脫，收集第一個洗脫峰，脫鹽濃縮，冷凍干燥；最后用HPLC處理，以0.1M磷酸鹽緩沖系統(tǒng)(含有14.2g/L Na2SO4及0.5g/LNaN3的0.1mol/L的NaH2PO4-Na2HPO4緩沖液)作為流動相，收集第一個洗脫峰，脫鹽濃縮，冷凍干燥，得到多糖MF4。
本發(fā)明厚殼貽貝多糖MF4理化性質(zhì)的分析方法及結(jié)果如下(1)HPGFC法純度的鑒定分析柱為TSK-G3000SWXL，7.8mm×30cm(Merck公司)，流動相為含有14.2g/L Na2SO4及0.5g/L NaN3的0.1mol/L的NaH2PO4-Na2HPO4緩沖液，進樣量50μl，流速為0.8ml/min，示差檢測。結(jié)果顯示多糖MF4呈單一的對稱峰，表明該樣品的均一性。
(2)HPGFC法相對分子量的測定條件同HPGFC法純度的鑒定一樣，以Dextran T10、T40、T70、T100、T120為標準分子量，測得各自的洗脫體積Ve，以葡萄糖T2000(Pharmacia公司)測得其外水體積Vo，葡萄糖測得柱的總體積Vt，以(Ve-Vo)/(Vt-Vo)對其分子量的對數(shù)作圖得標準曲線，再以同樣的條件及方法測得MF4洗脫體積，求出其相對分子量為113,000。
(3)紫外光譜MF4經(jīng)紫外掃描在250-280nm之間都無蛋白質(zhì)及核酸特征吸收峰。
(4)紅外光譜MF4紅外光譜顯示出多糖的特征吸收峰，3442cm-1(OH伸縮振動)，1650cm-1(酰胺基C＝O伸縮振動)，1137cm-1，995cm-1(這一寬峰為糖苷鍵的吸收峰以及羥基的變角振動)。
(5)1HNMR多糖質(zhì)子信號大多堆集δ4.0-5.51的狹小范圍內(nèi)，除端基質(zhì)子的信號在δ4.8-5.5較易解析外，其它H2-H6的信號均集中在δ4.0-4.8之間，解析困難。通常α-吡喃己糖端基質(zhì)子的δ值往往超過5.0，而β型的δ值則小于5.0。 MF4的H-1質(zhì)子信號不明顯，δ應為小于5.0，和其他H2-H6的質(zhì)子以及重水的信號相互重疊，故認為是β-吡喃己糖。
(6)組分分析MF4用1mol/L的H2SO4水解8小時后制成糖腈乙酸酯衍生物用于GC-MS分析，與標準品對照顯示其組成及比例為巖藻糖∶甘露糖∶葡萄糖∶半乳糖＝15∶15∶26∶37。硫酸咔唑法糖醛酸的定性反應呈陰性。
(7)糖苷鍵分析結(jié)果過碘酸氧化反應后加入酚酞指示劑呈現(xiàn)無色，說明無甲酸生成，從而判定其不含1-6糖苷鍵。Smith降解后進行糖腈乙?；疓C-MS分析，發(fā)現(xiàn)只有甘油和赤蘚醇存在，沒有單糖存在，說明含有1-4糖苷鍵和1-2糖苷鍵，而不含1-3糖苷鍵。多糖MF4甲基化后水解制成糖醇乙?；苌颎C-MS分析發(fā)現(xiàn)其含有1，5-二-O-乙酰基-6-脫O-2，3，4-三-O-甲基己糖醇，1，5-二-O-乙?；?2，3，4，6-四-O-甲基己糖醇，1，3，5-三-O-乙?；?2，4-二-O-甲基戊糖醇，1，2，4，5-四-O-乙?；?6-脫O-3-O-甲基己糖醇，1，2，5-三-O-乙酰基-3，4，6-三-O-甲基己糖醇，1，4，5-三-O-乙?；?2，3，6-三-O-甲基己糖醇，1，4，5，6-四-O-乙?；?2，3-二-O-甲基己糖醇，1，4，5-三-O-乙?；?2-乙酰胺基-3，6-二-O-甲基己糖醇，而且比例依次為8∶7∶1∶8∶7∶59∶6∶4，證實了過碘酸氧化和Smith降解分析結(jié)果，同時也說明該多糖糖苷鍵的類型為1-4糖苷鍵，1-2糖苷鍵和五碳糖1-3糖苷鍵，比例依次為80∶9∶2；而存在于分支點處的糖苷鍵為1-6糖苷鍵和脫氧六碳糖1-2糖苷鍵，比例為7∶10；端基糖除了六碳糖外，分子內(nèi)所含的部分脫氧六碳糖也處在端基糖的位置。
該多糖為首次從厚殼貽貝貝肉中提取分離到，命名為MF4。
本發(fā)明對多糖MF4進行了體外和體內(nèi)的免疫增強活性實驗，表明可明顯的促進NK細胞的活性和淋巴細胞的增殖，能提高免疫系統(tǒng)的功能。動物體內(nèi)試驗表明，對S180肉瘤和Lewis肺癌均有顯著的抑制作用。故可用于制備免疫增強劑或抗腫瘤藥物。
具體實施例方式下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作詳細的描述。
實施例1.制備厚殼貽貝多糖MF4選擇生長在浙江海域的厚殼貽貝新鮮貝肉16kg，洗凈、用攪拌機攪碎后，在3倍體積量沸水中加熱提取4小時，提取液用2倍體積95％的乙醇沉淀，沉淀用乙醇、丙酮分別洗滌3次，用Savager法除蛋白2次，冷凍干燥，得厚殼貽貝多糖粗提物。多糖粗提物用DEAE-纖維素-52分離，依次用0.05、0.1、0.2、0.5、1.0mol/L的NaCl洗脫，收集0.5mol/L的洗脫部分，冷凍干燥，得MF部分。MF用葡聚糖凝膠(Sephadex G-100)分離，以0.05mol/L的NaCl洗脫，收集第一個洗脫峰，最后用HPLC處理，以0.1M磷酸鹽緩沖液作為流動相，收集第一個洗脫峰，分離純化得到多糖MF4樣品217mg。
實施例2.厚殼貽貝多糖MF4體內(nèi)外增強免疫活性試驗1.T、B淋巴細胞增殖反應實驗按常規(guī)加入有絲分裂原刀豆蛋白A(ConA)5mg·L-1誘導T淋巴細胞增殖，加入有絲分裂原脂多糖(LPS)10mg·L-1誘導B淋巴細胞增殖，細胞的形態(tài)和代謝可發(fā)生一系列的變化，轉(zhuǎn)化為母細胞，并分化增殖。細胞內(nèi)蛋白質(zhì)和核酸的合成增加，并釋放出多種淋巴因子。用3H TdR摻入法定量測定樣品對細胞增殖的影響在培養(yǎng)液中加入3H TdR，使其參入到新合成的DNA中，可定量細胞內(nèi)DNA合成的強度，從而測定細胞的增殖，放射性核素參入法準確而客觀。用四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測樣品對細胞的毒性，活細胞內(nèi)線粒體脫氧酶能將MTT由黃色還原成藍色的甲肷，甲肷產(chǎn)量與活細胞成正比。用有機溶劑溶解甲肷后，可用酶標儀檢測光密度(OD)值。
結(jié)果詳見表1，表2表1 多糖MF4樣品對T淋巴細胞毒性實驗結(jié)果樣品名 濃度(mg·L-1)OD值(x±s) 細胞毒性陰性對照 5 0.395±0.001-多糖MF4 1 0.502±0.008無100.606±0.012無100 0.814±0.013無注實驗組的OD值如果大于對照品的OD值，就判斷樣品無毒性表2 多糖MF4對T、B淋巴細胞增殖反應結(jié)果T淋巴細胞 B淋巴細胞T淋巴細 B淋巴細濃度 ConA刺激 濃度LPS刺激樣品名胞綜合活胞綜合活(mg·L-1) CPM平均 (mg·L-1) CPM平均性評價(％)性評價(％)值(x±s) 值(x±s)陰性對照 1966±341 2013±184陽性對照 529450±1429 10 24409±1367多糖MF4 141715±2020 42 1 33820±16593910 41135±52640 10 43241±124577100 40935±2766 39 100 50974±3083109注測試體系體外(1)結(jié)果評定淋巴細胞的增殖采用被測樣品脈沖指數(shù)(CPM)值減去陽性對照孔的CPM值，除以陽性對照孔的CPM值乘以％。
(2)百分比前有負號代表樣品對T、B淋巴細胞有抑制作用(3)百分比前沒有負號代表樣品對T、B淋巴細胞有增強作用(4)淋巴細胞毒性的判斷為“有”或“無“(5)在無細胞毒的情況下，T、B淋巴細胞的增強/抑制的百分比在±15％以上，表示有作用(6)T淋巴細胞陽性對照為刀豆蛋白A(ConA)，B淋巴細胞陽性對照為脂多糖(LPS)上述實驗表明，MF4對T、B淋巴細胞均有明顯的增殖作用。
2.厚殼貽貝多糖MF4對荷Lewis肺癌瘤小鼠淋巴細胞轉(zhuǎn)化和NK細胞活性的實驗受試樣品精確稱取受試樣品MF4以生理鹽水稀釋，配制成所需濃度的各檔溶液，每鼠每天注射體積為0.5ml。
陽性對照品注射用環(huán)磷酰胺(CTX)，上海華聯(lián)制藥廠出品。云芝糖肽膠囊，上海新康制藥廠生產(chǎn)。
瘤源小鼠Lewis肺癌細胞和小鼠L929培養(yǎng)細胞均由上海醫(yī)藥工業(yè)研究院藥理室培養(yǎng)及體內(nèi)傳代維持。
實驗動物C57BL/6小鼠由上海中科院實驗動物中心提供，合格證號SCXK(滬)2003-0003。體重19-21g。性別雄性。動物數(shù)實驗組及陽性對照組每組6只小鼠，陰性對照為10只。
劑量設置5mg/kg/d。
給藥方案靜脈給藥，每天1次，連續(xù)10天。
實驗對照陰性對照給以與實驗組等體積的生理鹽水，給藥方案為靜脈給藥，每天1次，連續(xù)10天。陽性對照環(huán)磷酰胺(CTX)30mg/kg，腹腔給藥，每天1次，連續(xù)7天。參照樣品云芝多糖2g/kg，灌胃給藥，每天1次，連續(xù)10天。
(1)對荷Lewis肺癌C57BL/6小鼠的淋巴細胞增殖試驗取C57BL/6小鼠足趾皮下接種無菌制成的Lewis肺癌混懸液0.05ml/鼠(1×106個腫瘤細胞)。次日隨機分組，按實驗設計方案給藥，末次給藥后，次日解剖各組小鼠，無菌摘取脾臟，用100目篩網(wǎng)制備成單個脾細胞懸液，用含10％滅活小牛血清的RPM1640培養(yǎng)液調(diào)節(jié)細胞濃度為1×107個細胞/ml，將細胞懸液加入96孔細胞培養(yǎng)板，每孔100μl(1×106個細胞/孔)，再加入含ConA(5μg/ml)的培養(yǎng)液100μl，置37℃，5％CO2條件培養(yǎng)72小時后，輕輕吸取上清液100μl，加入MTT染色液(5mg/ml，20μl)，置37℃，5％CO2條件再培養(yǎng)2小時后加入消化液100μl，于次日測定各孔的OD值，按下列公式計算刺激指數(shù)刺激指數(shù)＝實驗組OD值/對照組OD值。
(2)對荷Lewis肺癌小鼠的NK細胞活性的測試取C57BL/6小鼠足趾皮下接種無菌制成的Lewis肺癌混懸液0.05ml/鼠(1×106個腫瘤細胞)。次日隨機分組，按實驗設計方案給藥，末次給藥后，次日解剖各組小鼠，無菌摘取脾臟，用100目篩網(wǎng)制備成單個脾細胞懸液，低滲除去紅細胞，將細胞懸液轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中37℃5％的CO2培養(yǎng)1小時后除去貼壁細胞，計數(shù)活細胞并用培養(yǎng)液調(diào)至3×106個細胞/ml，作為效應細胞。靶細胞去L929體外培養(yǎng)細胞常規(guī)培養(yǎng)24小時，以培養(yǎng)液調(diào)整細胞濃度為1.5×105個細胞/ml，使效靶細胞的比例為20∶1。取96孔培養(yǎng)板分別加入效應細胞和靶細胞，另設效應細胞和靶細胞對照，于37℃，5％CO2條件培養(yǎng)4小時后，加入MTT染色液，再培養(yǎng)2小時后加入消化液于次日測定各孔的OD值，按下列公式計算NK細胞的活性NK細胞毒％＝[靶細胞對照OD均值-(實驗組OD均值-效應細胞對照OD均值)]/靶細胞對照組OD均值×100％實驗結(jié)果詳見表3和表4表3 多糖MF4對荷Lewis肺癌小鼠(皮下接種)NK細胞活性影響組別 劑量 給藥方案動物數(shù) 動物體重 OD值*NK 活性(mg/kg/d)(只)始/終 (g)始/終 X±SD (％)MF45iv×7qd 6/620.3/23.9 0.397±0.14***55.57CTX30 ip×7qd 6/620.4/24.4 0.505±0.08 40.94云芝糖肽 2000 ig×10qd6/620.2/20.5 0.358±0.05***58.13陰性對照 相應溶劑 iv×7qd 10/10 20.4/24.7 0.517±0.04 39.53注實驗組與陰性對照組相比，***表示P值＜0.01*為實驗組OD均值-效應對照組OD均值云芝糖肽為陽性對照，CTX為腫瘤化療藥物環(huán)磷酰胺表4 MF4對荷Lewis肺癌C57BL/6小鼠(皮下接種)淋巴細胞轉(zhuǎn)化增值影響組別 劑量 給藥方案 動物數(shù) 動物體重 OD值*刺激指數(shù)(mg/kg/d) (只)始/終 (g)始/終 X±SDMF45iv×7qd 6/620.3/23.9 0.947±0.07***1.77CTX30 ip×7qd 6/620.4/24.4 0.463±0.05 0.87云芝糖肽 2000 ig×10qd 6/620.2/20.5 0.947±0.07***1.79陰性對照 相應溶劑 iv×7qd 10/10 20.4/24.7 0.535±0.06注實驗組與陰性對照組相比，***表示P值＜0.01上述實驗顯示，MF4對荷Lewis肺癌小鼠NK細胞活性和淋巴細胞轉(zhuǎn)化均有較大程度的提高和促進作用，與臨床使用的抗腫瘤藥物云芝糖肽具有同樣的增值效果，而化療藥物CTX對淋巴細胞的轉(zhuǎn)化則有明顯的抑制作用。
3.厚殼貽貝多糖MF4體內(nèi)抗腫瘤實驗實驗準備和設計受試樣品精確稱取受試樣品MF4以生理鹽水稀釋，配制成所需濃度的各檔溶液，每鼠每天注射體積為0.5ml。
陽性對照品注射用香菇多糖，南京振中生物工程有限公司出品。
瘤源小鼠肉瘤S-180培養(yǎng)細胞，小鼠Lewis肺癌體內(nèi)腫瘤模型；均由上海醫(yī)藥工業(yè)研究院藥理室培養(yǎng)及體內(nèi)傳代維持。
實驗動物C57BL/6小鼠由上海中科院實驗動物中心提供，合格證號SCXK(滬)2003-0003號。昆明小鼠由上海醫(yī)藥工業(yè)研究院動物組提供，合格證號滬合動證字第117號。體重19-21g。性別雌性。動物數(shù)實驗組及陽性對照組每組10只小鼠，陰性對照各為20只。
劑量設置高、中、低劑量組分別為12.5mg/kg，5mg/kg，2mg/kg給藥方案靜脈給藥，每天1次，連續(xù)15天。
實驗對照陰性對照給以與實驗組等體積的生理鹽水，給藥方案為靜脈給藥，每天1次，連續(xù)15天。陽性對照香菇多糖2mg/kg，靜脈給藥，每天1次，連續(xù)15天。
實驗步驟無菌條件下取對數(shù)生長的小鼠肉瘤S-180細胞，以生理鹽水稀釋成約7×106個/ml癌細胞勻漿，分別腋下皮下接種(0.2ml/鼠)，接種24小時后按實驗設計方案給藥，實驗結(jié)束時取各組腫瘤與陰性對照組對比，按下式計算各組的抑瘤率抑瘤率％＝[(陰性對照組腫瘤體積-給藥組腫瘤體積)/陰性對照組腫瘤體積]×100％對Lewis肺癌足趾接種的療效實驗無菌條件下取生長旺盛的Lewis肺癌瘤源，以生理鹽水為溶劑，采用勻漿法制備成約1×107個/ml細胞懸液，相應宿主每鼠足趾皮下接種0.05ml/鼠，次日按實驗設計方案給藥，兩周后處死動物，截取足趾稱重，按下式計算各組的抑瘤率抑瘤率％＝[(陰性對照組平均荷瘤足趾重-給藥組平均荷瘤足趾重)/(陰性對照組平均荷瘤足趾重-空白組平均足趾重)]×100％實驗結(jié)果MF4以高、中、低劑量組12.5mg/kg，5mg/kg，2mg/kg劑量iv×15qd方案，對小鼠S-180肉瘤腋下皮下接種的抑瘤率分別為61.19％，55.24％，39.16％，詳見表5；對小鼠Lewis肺癌足趾皮下接種的抑瘤率分別為49.34％，43.41％，34.73％，見表6。
表5 MF4多糖對昆明種小鼠肉瘤S-180(腋皮下接種)模型的療效樣品 劑量 給藥方案 動物數(shù)動物體重 瘤重抑瘤率(mg/kg/d) (只)始/終 (g)始/終 (g)X±SD(％)MF412.5 iv×15qd 10/10 19.5/26.3 1.11±0.17***61.19MF45 iv×15qd 10/10 19.8/26.9 1.28±0.19***55.24MF42 iv×15qd 10/10 19.3/27.1 1.74±0.17***39.16香菇多糖 2 iv×15qd 10/10 19.6/26.5 1.92±0.13***32.87陰性對照 相應溶劑 iv×15qd 20/20 19.4/27.9 2.86±0.26注實驗組與陰性對照組相比，***表示P值＜0.01表6 MF4多糖對昆明種小鼠Lewis肺癌(足趾皮下接種)模型的療效樣品 劑量給藥方案 動物數(shù)動物體重 瘤重(g) 抑瘤率(mg/kg/d) (只)始/終 (g)始/終 X±SD(％)MF4 12.5iv×15qd 10/10 20.9/25.6 0.461±0.09***49.34MF4 5 iv×15qd 10/10 20.4/26.1 0.515±0.09***43.41MF4 2 iv×15qd 10/10 20.5/25.9 0.594±0.12***34.73香菇多糖 2 iv×15qd 10/10 20.6/26.3 0.680±0.13 25.27CTX 30 ip×7qd10/10 20.6/24.2 0.024±0.02***97.36陰性對照 相應溶劑iv×15qd 20/20 20.6/26.5 0.91±0.14注實驗組與陰性對照組相比，***表示P值＜0.01結(jié)果表明，MF4靜脈給藥對小鼠Lewis肺癌及S-180肉瘤均具有明顯抗腫瘤療效，并顯示一定的量效關(guān)系，也與療程呈正相關(guān)。各實驗組動物實驗前后動物體重都有較明顯的增長，提示本發(fā)明的MF4毒性較小。與目前臨床使用的香菇多糖比較，在同等劑量下，MF4對腫瘤的抑制率明顯高于香菇多糖。因此，厚殼貽貝多糖MF4可用于制備新的免疫增強制劑或抗腫瘤藥物。本發(fā)明對開發(fā)利用中國的海洋生物資源開辟了新的途徑。
權(quán)利要求
1.一種厚殼貽貝多糖MF4，其特征為白色絮狀物，易溶于水和二甲基亞砜，相對分子量為113,000，主要由巖藻糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖組成，比例依次為15∶15∶26∶37；糖苷鍵的構(gòu)型為β構(gòu)型；糖苷鍵的類型為1-4糖苷鍵，1-2糖苷鍵和五碳糖1-3糖苷鍵，比例依次為80∶9∶2；而存在于分支點處的糖苷鍵為1-6糖苷鍵和脫氧六碳糖1-2糖苷鍵，比例為7∶10；端基糖包含六碳糖和部分脫氧六碳糖。
2.權(quán)利要求1所述的多糖MF4的制備方法，其具體步驟如下(1)提取將新鮮的厚殼貽貝貝肉洗凈、攪拌機攪碎后，在3倍體積沸水中加熱提取4小時，提取液用2倍體積95％的乙醇沉淀，沉淀用乙醇、丙酮分別洗滌2次，Savager法除蛋白2次，收集水相，冷凍干燥，得厚殼貽貝多糖粗提物；(2)分離上述多糖粗提物用水溶解通過DEAE-纖維素-52柱，依次用0.05、0.1、0.2、0.5、1.0mol/L的NaCl洗脫，收集0.5mol/L的洗脫部分，脫鹽濃縮，冷凍干燥，得MF部分；MF通過Sephadex G-100葡聚糖凝膠柱，以0.05mol/L的NaCl洗脫，收集第一個洗脫峰，脫鹽濃縮，冷凍干燥；最后用HPLC純化，以0.1M磷酸鹽緩沖系統(tǒng)(含有14.2g/L Na2SO4及0.5g/L NaN3的0.1mol/L的NaH2PO4-Na2HPO4緩沖液)作為流動相，收集第一個洗脫峰，脫鹽濃縮，冷凍干燥，得到多糖MF4。
3.權(quán)利要求1所述多糖MF4在制備增強免疫劑或抗腫瘤藥物中的應用。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體為從海洋動物厚殼貽貝中分離到的一種具有增強免疫和抗腫瘤活性的新的多糖成分MF4，其相對分子量為113,000。采用多種波譜手段(UV、IR、GC/MS文檔編號C08B37/00GK1583803SQ200410024958
公開日2005年2月23日 申請日期2004年6月7日 優(yōu)先權(quán)日2004年6月7日
發(fā)明者易楊華, 馬明華, 李玲, 劉寶姝 申請人:中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學