專利名稱：依諾肝素及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明公開了一種名為依諾肝素的生化制品及其制備方法. 本制備方法屬一種生化藥品的制備方法。
背景技術(shù)：
依諾肝素是一種抗凝和抗血栓藥物，是低分子量肝素鈉的 衍生物.依諾肝素以豬小腸黏膜肝素為原料，通過肝素的季銨化、醋化，最 終通過在堿溶液中e—消除得到，依諾肝素的制備方法較多，但目前常用的 制備方法有以下兩種
方法一在肝素的酸性水溶液中加入節(jié)索氣銨水溶液，得到的沉淀水 洗后其空干燥得肝素的季銨鹽。將肝素季銨鹽、對(duì)氣氣芐在N， N—二甲基 甲酰胺(DMF)中常溫酯化48小時(shí)后得到肝素4一氯芐酯，肝素4一氯芐酯 在堿性條件下P —消除生成依諾肝素.
方法二使用硫酸皮膚素小于2X的肝素的酸性水溶液與芐索氯銨反應(yīng) 生成肝素季銨鹽，將此肝素季銨鹽、氯化芐在二氯甲烷中一定溫度下酶化 12 ~ 48小時(shí)得肝素芐酯，肝素芐醋在堿性條件下P —消除生成依諾肝素。
方法一使用普通肝素作為原料，在制備過程中使用了毒性、刺激性較大 的對(duì)氣氯芐、有機(jī)溶劑N,N—二甲基甲酰胺，同時(shí)酯化的工藝時(shí)間長(zhǎng)。方法 二對(duì)選取特定的肝素作為原料，在制備過程中避免了毒性較大的試劑，有機(jī) 溶射使用量較小，酯化時(shí)間相對(duì)方法一有所減少。但也存在著產(chǎn)品質(zhì)量不穩(wěn) 定、加工成本高、收率比較低等缺陷。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是公開了一種依諾肝素及其制備方法，它能有
效地克服以上加工工藝所帶來的缺陷，降低生產(chǎn)成本，提髙產(chǎn)品質(zhì)量。本發(fā)
明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的.依諾肝素及其制備方法是常溫下將肝素鈉溶于7 ~ U倍水中，調(diào)pH至7. 0-9.0;將2 ~ 3倍肝素鈉量的節(jié)索氯銨溶于3 ~ 7倍 水中并攪拌均勻，將肝素鈉水溶液加到芐索氯銨水溶液中充分反應(yīng)后，真空 抽濾，真空度>0. 08MPa，固體用水?dāng)嚢柘礈旌蟪闉V，重復(fù)兩次，固體于45~ 601C,用20~30小時(shí)烘干，得鈉鹽形式的肝素季銨鹽。將肝素季銨鹽溶于 3~7倍的二氯甲烷中，加入1~4倍氣化節(jié)，將反應(yīng)液置于20~451!水溶液 中，反應(yīng)20~30小時(shí)后取出，加入l倍總反應(yīng)體積的1(H4醋酸鈉甲醇溶液， 抽濾，固體用甲酵攪拌洗滌后抽濾，固體洗至抽濾液遇水不變色，固體于 45 ~ 601C烘干，得鈉鹽形式的肝素節(jié)醋，將肝素節(jié)酶溶于15 ~ 25倍0.1N的 氫氧化鈉55 70X:的水溶液中，攪拌反應(yīng)15~60分鐘，冷卻至室溫，稀鹽 酸調(diào)pH至中性，加入15X的氯化鈉，溶解后膜濾，以2倍量的甲醇析出沉 淀，抽濾，洗滌，固體于45 - 601C烘干，得依諾肝素粗品。將上述依諾肝 素粗品溶于7~11倍水中，調(diào)pH至8.0 11.0，加熱至30~55"，加過氧 化氫的量為水溶液的l i~2、調(diào)pH至8.0~11.0，反應(yīng)0.5~3小時(shí)，調(diào) pH至7.0-8.0,加入10 4氣化鈉，溶解后膜濾，以2倍量的甲酵析出沉淀， 抽濾，洗滌后烘干，得依諾肝素精品。本發(fā)明符合歐洲藥典質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，收率 與國(guó)外相當(dāng)，制劑質(zhì)量與目前巿場(chǎng)銷售的進(jìn)口同類產(chǎn)品相比質(zhì)量好,價(jià)格低。


圖l是本發(fā)明工藝流程具體實(shí)施例方式本發(fā)明依諾肝素及其制備方法是常溫下將肝素鈉溶于 7~11倍水中，調(diào)pH至7.(H9.0;將2 ~ 3倍肝素鈉量的節(jié)索氯銨溶于3 ~
7倍水并攪拌均勻，將肝素鈉水溶液加到芐索氯銨水溶液中充分反應(yīng)后，真 空抽濾，真空度^0.08MPa，固體再用水?dāng)嚢柘礈旌蟪闉V，重復(fù)兩次，固體 于45~60匸，用20~30小時(shí)烘干，得鈉鹽形式的肝素季銨鹽。將肝素季銨 鹽溶于3~7倍的二氯甲烷中，加入1~4倍氣化節(jié)，將反應(yīng)液置于20-45 C水溶歡中，反應(yīng)20 30小時(shí)后取出，加入l倍總反應(yīng)體積的10%醋酸鈉 甲醇溶液，抽濾，固體再用甲酵攪拌洗滌后抽濾，固體洗至抽濾液遇水不變 色，固體于45 601C烘干，得鈉鹽形式的肝素芐酯。將肝素芐酯溶于15-25倍0.1N的氬氧化鈉55 701C的水溶液中，攪拌反應(yīng)15~60分鐘，冷卻 至室溫，稀鹽酸調(diào)PH至中性，加入15X的氯化鈉，溶解后膜濾，以2倍量 的甲酵析出沉淀，抽濾，洗滌，固體于45 601C烘干，得依諾肝素粗品。 將粗品溶于7~11倍水中，調(diào)pH至8.0 11.0，加熱至30 55t;，加過氧 化氫的量為水溶液的156~294，調(diào)pH至8. 0~11. 0，反應(yīng)0.5~3小時(shí)，調(diào) pH至7.0 8.0，加入10X氯化鈉，溶解后膜濾，以2倍量的甲酵析出沉淀， 抽濾，洗滌后烘干，得依諾肝素精品。
具體實(shí)施時(shí)，例一常溫下將60 g肝素鈉溶于600ml水中，調(diào)pH至 8. 0，將上述肝素鈉水溶液加入到已配制好的15% 1000ffll節(jié)索氯銨水溶液中
充分反應(yīng)后，有沉淀析出，真空抽濾，水?dāng)嚢柘礈旌螅腆w50"C烘千，得 鈉鹽形式的肝素季銨鹽162.4 g。將上述固體溶于800ml二氯甲烷中，加入 氣化芐162. 4ml，室溫條件下放置24小時(shí)，加入1倍i IOX醣酸鈉甲醇溶液， 抽濾，甲醇攪拌洗滌后，固體501C烘干，得固體50 g，為肝素節(jié)酯。將肝 素芐瞎溶于750ml 0.1N的氫氧化鈉溶液中，加熱至60t:，攪拌反應(yīng)60分 鐘，冷卻至室溫，稀鹽酸調(diào)至中性，加入112.5g的氟化鈉，以2倍量的甲 酵析出沉淀，抽濾，洗滌，固體于501C烘干，得依諾肝素粗品26 g.將依 諾肝素粗品溶于200ml水中，調(diào)pH至9.0，加熱至301C，加過氧化氫的量 為水溶液的1.5%，調(diào)pH至9. 0，反應(yīng)1小時(shí)后，調(diào)pH至7.5，加入10X氯 化鈉，以2倍i的甲醇析出沉淀，抽濾，洗滌，固體于501C烘干，得依諾 肝素精品25 g。
檢測(cè)結(jié)果A"mm-15. 6，抗XaIU: 105.6， IIa: 25.1.抗XalU/IIa: 4.2。 分子量平均4148， 2000~ 8000: 77.1 %， 〈 2000: 16.5 %。其余各項(xiàng)指 標(biāo)符合歐洲藥典質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
例二常溫下將60 g肝素鈉溶于480ml水中，調(diào)pH至8. 0，將上述肝 素鈉水溶液加入到已配制好的25% 480ml節(jié)索氯銨水溶液中充分反應(yīng)后，有 沉淀析出，真空抽濾，水?dāng)嚢柘礈旌螅腆w501C烘干，得鈉鹽形式的肝素 季銨鹽155 g。將上述固體溶于465ml二氯甲烷中，加入氯化節(jié)310ml， 45 t:條件下放置24小時(shí)，加入1倍量10 4醋酸鈉甲酵溶液，抽濾，甲醇攪拌 洗滌后，面體5(TC烘千，得面體58 g，為肝素笮酯。將肝素窄醋溶于H50ml O.IN的氫氧化鈉溶液中，加熱至70iC，攪拌反應(yīng)15分鐘，冷至室溫，稀鹽 酸調(diào)至中性，加入217.5g的氯化鈉，以2倍量的甲醇析出沉淀，抽濾，洗 滌，畫體于501C烘干，得依諾肝素粗品30 g。將依諾肝素粗品溶于330 ml 水中，調(diào)pH至9.0，預(yù)熱至30t:，加過氧化氫的量為水溶液的1.554，調(diào)pH 至9.0,反應(yīng)1小時(shí)后，調(diào)pH至7.5，加入10%氯化鈉，以2倍量的甲醇析 出沉淀，抽濾，洗滌，501C烘干，得依諾肝素精品27.2 g。
檢測(cè)結(jié)果A231nm=16.8，抗XaIU: 101.4， IIa: 22.3,抗XalU/IIa: 4.5。分子量平均4076' 2000 ~ 8000: 75. 1 %, 〈 2000: 14. 0%。其余各
項(xiàng)指標(biāo)符合歐洲藥典質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
權(quán)利要求
1.一種依諾肝素的制備方法，包括將肝素鈉為原料，通過季銨化、酯化反應(yīng)，再通過堿溶液中β-消除后膜濾、干燥得到依諾肝素，其特征在于常溫下將肝素鈉溶于7～11倍水中，調(diào)pH至7.0～9.0；將2～3倍肝素鈉量的芐索氯銨溶于3～7倍水中并攪拌均勻，將肝素鈉水溶液加到芐索氯銨水溶液中充分反應(yīng)后，真空抽濾，真空度≥0.08MPa，固體用水?dāng)嚢柘礈旌蟪闉V，重復(fù)兩次，固體于45～60℃，用20～30小時(shí)烘干，得鈉鹽形式的肝素季銨鹽；將肝素季銨鹽溶于3～7倍的二氯甲烷中，加入1～4倍氯化芐，將反應(yīng)液置于20～45℃水溶液中，反應(yīng)20～30小時(shí)后取出，加入1倍總反應(yīng)體積的10％醋酸鈉甲醇溶液，抽濾，固體用甲醇攪拌洗滌后抽濾，固體洗至抽濾液遇水不變色，固體于45～60℃烘干，得鈉鹽形式的肝素芐酯；將肝素芐酯溶于15～25倍0.1N的氫氧化鈉55～70℃的水溶液中，攪拌反應(yīng)15～60分鐘，冷卻至室溫，稀鹽酸調(diào)pH至中性，加入15％的氯化鈉，溶解后膜濾，以2倍量的甲醇析出沉淀，抽濾，洗滌，固體于45～60℃烘干，得依諾肝素粗品；將上述依諾肝素粗品溶于7～11倍水中，調(diào)pH至8.0～11.0，加熱至30～55℃，加過氧化氫的量為水溶液的1％～2％，調(diào)pH至8.0～11.0，反應(yīng)0.5～3小時(shí)，調(diào)pH至7.0～8.0，加入10％氯化鈉，溶解后膜濾，以2倍量的甲醇析出沉淀，抽濾，洗滌后烘干，得依諾肝素精品。
全文摘要
本發(fā)明為一種依諾肝素及其制備方法，特征是常溫下將肝素鈉溶于水，芐索氯銨溶于水并攪拌均勻，再將肝素鈉水溶液加到芐索氯銨水溶液中充分反應(yīng)后，真空抽濾，固體用水?dāng)嚢柘礈旌蟪闉V，烘干，得肝素季銨鹽；將肝素季銨鹽溶于二氯甲烷中，加氯化芐充分反應(yīng)后，加醋酸鈉甲醇溶液沉淀，抽濾，固體用甲醇攪拌洗滌后抽濾，烘干，得肝素芐酯；將肝素芐酯溶于0.1N氫氧化鈉的水溶液中，攪拌，加入氯化鈉，溶解后膜濾，再加入甲醇析出沉淀，抽濾，洗滌，固體烘干，得依諾肝素鈉粗品；將依諾肝素鈉粗品溶于水中，加過氧化氫反應(yīng)結(jié)束后，加入氯化鈉，溶解后膜濾，再加入甲醇析出沉淀，抽濾，洗滌，固體烘干，得依諾肝素鈉精品。本發(fā)明能有效地降低生產(chǎn)成本，提高產(chǎn)品質(zhì)量。
文檔編號(hào)C08B37/10GK101165071SQ20061009695
公開日2008年4月23日 申請(qǐng)日期2006年10月20日 優(yōu)先權(quán)日2006年10月20日
發(fā)明者史解矛, 夏旭東, 秦蘇東 申請(qǐng)人:江蘇江山制藥有限公司