專利名稱：一種n－煙?；鶜す烟羌捌渲苽涞闹谱鞣椒?br> 技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及殼寡糖，具體地說是一種N-煙?；鶜す烟羌捌渲苽洹?br> 背景技術(shù)：
殼寡糖，學(xué)名為β-(1，4)-2-脫氧-2-氨基葡萄寡糖。是一種難得又有著特殊理化性質(zhì)和優(yōu)良生物活性的動物性寡糖。他所具有的降血糖、降血酯，降膽固醇，增強(qiáng)免疫功能，抑制腫瘤和抗疲勞、延緩衰老，抑菌，抗病毒等作用，已應(yīng)用于醫(yī)藥、保健食品、化妝品、農(nóng)業(yè)等方面。煙酸及煙酸環(huán)己醇酯和煙酸生育酚酯是用于治療高血壓癥和動脈硬化癥的藥物，但存在引起消化道障礙的副作用缺點(diǎn)，因而限制了其臨床應(yīng)用。有人將煙?；釉诎被咸烟欠肿又械腘原子上(見文獻(xiàn)1 Chinese Journal ofChemistry，2005，23，190-193)，以減少其毒性。與文獻(xiàn)1不同的是本發(fā)明將煙?；釉跉す烟欠肿渔湹腘原子上，前者是單糖的衍生物，后者是殼寡糖的衍生物，屬高分子范疇；前者是化合物，后者既可是混合物，也可是化合物；兩者都有較好的水溶性，后者較前者具有更好的生物相溶性和更好的食療、醫(yī)療作用(見文獻(xiàn)2，中華醫(yī)學(xué)研究雜志，2005.Vol.5.No.8.729-732；3食品科學(xué)，2003.Vol.24.No.8.250-248；)更能減少其毒副作用和清除體內(nèi)有害物質(zhì)。殼寡糖及其衍生物比氨基葡萄糖對受損心肌細(xì)胞和組織有顯具的保護(hù)作用，前者還有抑制心肌細(xì)胞凋亡的現(xiàn)象(見文獻(xiàn)3高技術(shù)通訊.2005.Vol.15.No.11.96-100)，本發(fā)明的物質(zhì)有望能發(fā)揮殼寡糖與煙酸的協(xié)同作用，使其生物活性及對人體的有益功能得到進(jìn)一步改善和加強(qiáng)，從而篩選出具有高效、低毒的用于一類新藥、新食品添加劑、保健食品和生物農(nóng)藥等的重要原料。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種N-煙?；鶜す烟羌捌渲苽洌黄渚哂薪笛?、降血糖，降膽固醇，增強(qiáng)免疫功能，抑制腫瘤和抗疲勞、延緩衰老，抑菌，抗病毒等作用；可作為某些醫(yī)藥、保健食品、化妝品和生物農(nóng)藥的重要原料。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為一種N-煙?；鶜す烟?，其為混合組份，均分子量為800-6000，N-煙酰取代度為30％-100％，混合組份的脫乙酰度為50％～100％；其組成成份的結(jié)構(gòu)通式如下，
其中，R為 或CH3，n＝0-30。
所述N-煙酰基殼寡糖的的制備氨解法1)煙酸對硝基苯酯的制備A.取煙酸溶于有機(jī)溶劑中，加對硝基苯酚，攪拌，滴加二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)溶于有機(jī)溶劑的溶液，滴完后在60-70℃下加熱條件下反應(yīng)2～6h，過濾，濾液傾入冰水中，析出白色固體，過濾，重結(jié)晶，得到煙酸對硝基苯酯；其中有機(jī)溶劑為N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、吡啶、二甲亞砜或二氯甲烷，其中二環(huán)己基碳二亞胺、硝基苯酚和煙酸的摩爾比為1-1.5∶1-2∶1，重結(jié)晶過程可采用無水乙醇、甲醇、氯仿、二氯甲烷或丙酮；或B.于冰浴下，向盛煙酸的反應(yīng)瓶中滴加過量的二氯亞砜制得煙酰氯，減壓蒸餾去除多余的二氯亞砜，向反應(yīng)瓶中滴入5-20滴的無水丙酮、二甲亞砜、二氯甲烷、DMF或氯仿，強(qiáng)烈攪拌，先后滴加無水三乙胺和對硝基苯酚的無水丙酮、二甲亞砜、二氯甲烷、DMF或氯仿溶液，反應(yīng)2-8h，過濾，濾液傾入冰水中，析出晶體，過濾，用重量濃度1-60％Na2CO3、NaHCO3、K2CO3或KHCO3溶液洗滌，重結(jié)晶，得煙酸對硝基苯硝；煙酸、三乙胺和對硝基苯酚的摩爾比為1∶0.5-1.5∶0.5-1.5，重結(jié)晶過程可采用無水乙醇、甲醇、氯仿、二氯甲烷或丙酮；2)酯的氨解取煙酸對硝基苯酯溶于有機(jī)溶劑中，有機(jī)溶劑為N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、吡啶、二甲亞砜或二氯甲烷；加殼寡糖，按殼寡糖中氨基葡萄糖殘基計(jì)算，煙酸對硝基苯酯與寡糖的摩爾比為1-2∶1，在60-70℃下反應(yīng)2-10小時(shí)，向反應(yīng)液加入其體積1-8倍的乙醚、丙酮、乙醇、甲醇、或0-1.5摩爾/升NaOH的乙醇或甲醇溶液，產(chǎn)生大量黃色沉淀，抽濾，濾餅用無水丙酮、乙醚、乙醇或甲醇洗1-5次，得黃色粉末，真空干燥，得到N-煙?；鶜す烟欠勰┕腆w。
該法的優(yōu)點(diǎn)利用了氨基與羥基的活性差異，酯的氨解優(yōu)先發(fā)生，而無須保護(hù)，對比文獻(xiàn)1(Chinese Journal of Chemistry，2005，23，190-193)，減少了合成步驟，提高了產(chǎn)量；相對酰氯法不產(chǎn)生氯化氫氣體，因而保護(hù)環(huán)境，生產(chǎn)安全；反應(yīng)條件溫和，甚至常溫下也可進(jìn)行，不用強(qiáng)腐蝕性(如酰氯)為原料；副產(chǎn)物易于分離。
酰氯法1)煙酰氯的制備于冰浴下，向盛煙酸的反應(yīng)瓶中滴加過量的二氯亞砜制得煙酰氯，減壓蒸餾去除多余的二氯亞砜；2)在氫氧化鈉、碳酸鉀、氫氧化鉀、碳酸鈉或三乙胺存在下，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將煙酰氯的有機(jī)溶液滴入重量濃度2-12％的殼寡糖水溶液中，，溫度為-10℃～10℃，反應(yīng)0.5-3h，向反應(yīng)液加入其體積1-8倍的乙醚、丙酮、乙醇、甲醇、或0-1.5摩爾/升NaOH的乙醇或甲醇溶液，產(chǎn)生大量黃色沉淀，抽濾，濾餅用無水丙酮、乙醚、乙醇或甲醇洗1-5次，得黃色粉末，真空干燥，得到N-煙?；鶜す烟欠勰┕腆w。
所述有機(jī)溶劑為N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、吡啶、二甲亞砜或二氯甲烷。
本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)本發(fā)明公開了一種N-煙?；鶜す烟茄苌?，可為單組分的殼寡糖衍生物，也可為混合組分的殼寡糖衍生物。既可由煙酸對硝基苯酯的氨解，也可由煙酰氯的氨解得到。無須保護(hù)，合成步驟少，不會破壞殼寡糖的主鏈，提高了產(chǎn)量；反應(yīng)條件溫和；生產(chǎn)安全；產(chǎn)物易于分離。產(chǎn)物為淺黃色或黃色粉末固體。用核磁共振光譜測定其取代度為70％(不包括原來的已?；?以上。室溫下水中溶解度為8-10g/100g。
本化合物結(jié)構(gòu)上以殼寡糖為主體，在每個(gè)結(jié)構(gòu)單元上接上煙酸分子。煙酰類化合物本身就有降血脂、降血糖和植物誘導(dǎo)抗病活性。本化合物既具有殼寡糖本身具有的一系列生物活性，如降血酯、降血糖，降膽固醇，增強(qiáng)免疫功能，抑制腫瘤和抗疲勞、延緩衰老、抑菌、抗病毒等作用，引入煙?；?，在降血脂、降血糖、降膽固醇和植物誘導(dǎo)抗病等功能得到大大增強(qiáng)?？勺鳛槟承┽t(yī)藥、保健食品、化妝品和生物農(nóng)藥的重要原料。


圖1為N-煙酰殼寡糖誘導(dǎo)抗病毒病斑數(shù)示意圖；圖2為N-?；瘹す烟钦T導(dǎo)煙草抗病毒效果圖。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施實(shí)例對本發(fā)明做進(jìn)一步說明實(shí)施例1N-煙?；鶜す烟堑闹苽?氨解法)取1.23g煙酸溶于N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中(溶劑也可為吡啶，二甲亞砜，二氯甲烷等)，加2.7g對硝基苯酚，攪拌，加入0.1g二甲胺基吡啶，滴加2.06g二環(huán)己基碳二亞胺溶于5mLDMF的溶液，滴完后在60-70℃下加熱條件下反應(yīng)2～6h，過濾，濾液傾入冰水中，析出白色晶體，過濾，用無水乙醇重結(jié)晶，得到煙酸對硝基苯酯1.0g，煙酸對硝基苯酯還可按下面方法制備向盛有用0.8g煙酸制的煙酰氯的干燥反應(yīng)瓶中于冰浴下加入適量無水丙酮，強(qiáng)烈攪拌，先后滴加無水三乙胺10mL和1.0g對硝基苯酚的20mL丙酮溶液，反應(yīng)4h，過濾，濾液傾入冰水中，析出晶體，過濾，用5％Na2CO3溶液洗，在無水乙醇中重結(jié)晶，得煙酸對硝基苯硝0.5g。
酯的氨解取煙酸對硝基苯酯0.8g(3.2mmol)溶于30mL無水二甲亞砜中，加殼寡糖0.6g(3.1mmol)(酯與寡糖的摩爾比為1～2∶1(按殼寡糖中氨基葡萄糖殘基計(jì)算)，在60-70℃下反應(yīng)4小時(shí)，向反應(yīng)液加入乙醚/丙酮溶液50～100mL(1∶1，v/v)，產(chǎn)生大量黃色沉淀，抽濾，濾餅用無水丙酮洗3次，得黃色粉末，真空干燥，得到N-煙?；鶜す烟?.5g，粉末固體。
紫外(UVλmax nm)229.240.320；紅外光譜(KBr)主要吸收峰(IRυ，cm-1)3580～3390(OH，NH)；2939；2860(CH+CH2)；1680(amide-I band)；1651(amide-II band)；1593(C-N in pyridinering)1116，1054，1033(C-O)，891(β，C-H)。1H-NMR(CD3SOCD3)δ2.90-3.01(m，1H，H-2)，3.37-3.42(m，1H，H-5)，3.54-3.59(m，2H，H-6，H-6′)，3.65-3.71(m，1H，H-3)，3.78-3.83(m，1H，H-4)，4.40-4.49(m，2H，2OH)，6.40-6.48(1H，NH)，7.40-7.48(m，J1，2＝7.8Hz，1H，β-H-1)，8.18-8.25(m，J＝7.8Hz，1H，H-9)，8.29-8..37(d，J10，9＝7.5Hz，1H，H-10)，8.58-8.67(d，J8，9＝3.6Hz，1H，H-8)，8.90-8.95(S，1H，H-7)證實(shí)該目標(biāo)物的存在。用核磁共振法測定取代度為71％。
實(shí)施例2N-煙?；鶜す烟堑闹苽?酰氯法)煙酰氯的制備將10mLSOCl2加入裝有HCl氣體吸收裝置的反應(yīng)瓶中，在-10～5℃與氮?dú)獗Ｗo(hù)下向其中加入1.67g煙酸，攪拌，滴入數(shù)滴無水DMF，在油浴中緩慢升溫到90℃，回流3h后，減壓蒸去過量的SOCl2，得黃色固體物質(zhì)煙酰氯，產(chǎn)率80％，可不經(jīng)分離往下反應(yīng)。
取3.0g煙酸制備的煙酰氯溶解在50mL DMF中；另取K2CO32g溶解在20mL水中，加入殼寡糖(COS)1.6g攪拌使其充分溶解，在氮?dú)獗Ｗo(hù)和低溫(-10℃～5℃)下將其酰氯溶液緩慢滴加在殼寡糖(COS)溶液中，滴完后再反應(yīng)1.5h。往反應(yīng)液里加入適量無水丙酮(或異丙醇)，產(chǎn)生大量黃色沉淀，抽濾，濾餅用丙酮洗滌兩次，得到黃色粉末，真空干燥。得煙?；鶜す烟钱a(chǎn)品1.8g。粉末固體。用紫外，紅外和核磁光譜測定，其數(shù)據(jù)與實(shí)例1完全相同或基本相同。用核磁共振法測定取代度為71％，室溫下水中溶解度8.2g/100g。
應(yīng)用例1.N-煙?；鶜す烟菍煵菡T導(dǎo)抗性實(shí)驗(yàn)N-煙?；鶜す烟菍MV誘導(dǎo)抗性的濃度(ppm)分別為1、25、50和100。
TMV接種實(shí)驗(yàn)采用各個(gè)濃度的N-?；瘹す烟撬芤簩φ隉煵萑~面噴霧，清水為對照，處理1天后接種病毒。接種后每天觀察，記錄第一批病斑出現(xiàn)得時(shí)間和數(shù)目，計(jì)算病斑抑制率。結(jié)果為病斑全部產(chǎn)生后的統(tǒng)計(jì)數(shù)。采用t檢驗(yàn)法進(jìn)行數(shù)據(jù)顯著分析；病斑抑制率＝(對照葉斑平均數(shù)—處理葉斑平均數(shù))/對照葉斑平均數(shù)×100％。
結(jié)果如圖1和2所示，從圖可以看出，N-煙酰殼寡糖對煙草具有較好的誘導(dǎo)抗病性。最好的誘抗效果濃度為25ppm，抑制率為53.23％?？勺鳛樾碌恼T抗類生物農(nóng)藥應(yīng)用。
權(quán)利要求
1.一種N-煙酰基殼寡糖，其特征在于其為混合組份，均分子量為800-6000，混合組份的脫乙酰度為50％～100％，N-煙酰取代度為30％-100％；其組成成份的結(jié)構(gòu)通式如下， 其中，R為 或CH3，n＝0-30。
2.一種權(quán)利要求1所述N-煙酰基殼寡糖的制備方法，其特征在于氨解法1)煙酸對硝基苯酯的制備A.取煙酸溶于有機(jī)溶劑中，加對硝基苯酚，攪拌，加如一定量二甲胺基吡啶，滴加二環(huán)己基碳二亞胺和和溶于有機(jī)溶劑的溶液，滴完后在60-70℃下加熱條件下反應(yīng)2～6h，過濾，濾液傾入冰水中，析出白色固體，過濾，重結(jié)晶，得到煙酸對硝基苯酯；其中有機(jī)溶劑為N，N-二甲基甲酰胺、吡啶、二甲亞砜或二氯甲烷，其中二環(huán)己基碳二亞胺、硝基苯酚和煙酸的摩爾比為1-1.5∶1-2∶1，重結(jié)晶過程可采用無水乙醇、甲醇、氯仿、二氯甲烷或丙酮；或B.于冰浴下，向盛煙酸的反應(yīng)瓶中滴加過量的二氯亞砜制得煙酰氯，減壓蒸餾去除多余的二氯亞砜，向反應(yīng)瓶中滴入5-20滴的無水丙酮、二甲亞砜、二氯甲烷、DMF或氯仿，強(qiáng)烈攪拌，先后滴加無水三乙胺和對硝基苯酚的無水丙酮、二甲亞砜、二氯甲烷、DMF或氯仿溶液，反應(yīng)2-8h，過濾，濾液傾入冰水中，析出晶體，過濾，用重量濃度1-60％Na2CO3、NaHCO3、K2CO3或KHCO3溶液洗滌，重結(jié)晶，得煙酸對硝基苯酯；煙酸、三乙胺和對硝基苯酚的摩爾比為1∶0.5-1.5∶0.5-1.5，重結(jié)晶過程可采用無水乙醇、甲醇、氯仿、二氯甲烷或丙酮；2)酯的氨解取煙酸對硝基苯酯溶于有機(jī)溶劑中，有機(jī)溶劑為N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、吡啶、二甲亞砜或二氯甲烷；加殼寡糖，按殼寡糖中氨基葡萄糖殘基計(jì)算，煙酸對硝基苯酯與寡糖的摩爾比為1-2∶1，在60-70℃下反應(yīng)2-10小時(shí)，向反應(yīng)液加入其體積1-8倍的乙醚、丙酮、乙醇、甲醇、或0-1.5摩爾/升NaOH的乙醇或甲醇溶液，產(chǎn)生大量黃色沉淀，抽濾，濾餅用無水丙酮、乙醚、乙醇或甲醇洗1-5次，得黃色粉末，真空干燥，得到N-煙?；鶜す烟欠勰┕腆w。
3.一種權(quán)利要求1所述N-煙?；鶜す烟堑闹苽浞椒?，其特征在于酰氯法1)煙酰氯的制備于冰浴下，向盛煙酸的反應(yīng)瓶中滴加過量的二氯亞砜制得煙酰氯，減壓蒸餾去除多余的二氯亞砜；2)在氫氧化鈉、碳酸鉀、氫氧化鉀、碳酸鈉或三乙胺存在下，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將煙酰氯的有機(jī)溶液滴入重量濃度2-12％的殼寡糖水溶液中，溫度為-10℃～10℃，反應(yīng)0.5-3h，向反應(yīng)液加入其體積1-8倍的乙醚、丙酮、乙醇、甲醇、或0-1.5摩爾/升NaOH的乙醇或甲醇溶液，產(chǎn)生大量黃色沉淀，抽濾，濾餅用無水丙酮、乙醚、乙醇或甲醇洗1-5次，得黃色粉末，真空干燥，得到N-煙?；鶜す烟欠勰┕腆w。
4.按照權(quán)利要求3所述N-煙?；鶜す烟堑牡闹苽浞椒?，其特征在于所述有機(jī)溶劑為N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、吡啶、二甲亞砜或二氯甲烷。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種N－煙?；鶜す烟?，其特征在于其為混合組份，均分子量為800－6000，混合組份的脫乙酰度為50％～100％；N－煙酰取代度為30％－100％，其組成成份的結(jié)構(gòu)通式如上。其具有降血脂、降血糖，降膽固醇，增強(qiáng)免疫功能，抑制腫瘤和抗疲勞，延緩衰老，抑菌，抗病毒等作用?？勺鳛槟承┽t(yī)藥、保健食品、化妝品和生物農(nóng)藥的重要原料。
文檔編號C08B37/08GK101054397SQ20071001112
公開日2007年10月17日 申請日期2007年4月27日 優(yōu)先權(quán)日2007年4月27日
發(fā)明者杜昱光, 劉啟順, 郭振楚, 白雪芳 申請人:大連中科格萊克生物科技有限公司