專利名稱：：在水相中制備殼聚糖納米顆粒的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及殼聚糖納米顆粒的制造，特別涉及一種在水相中制備殼聚糖納米顆粒的方法。
背景技術(shù)：
：納米技術(shù)在現(xiàn)今醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用著重于醫(yī)學(xué)預(yù)防、診斷、藥物輸送和疾病治療的相關(guān)研究。納米顆?？勺鳛樗幬镙斔拖到y(tǒng)的載體，其具備諸多優(yōu)點(diǎn)，例如提高藥物在腸胃道的穩(wěn)定性，改善口服藥物的吸收性和生物利用率，減少藥物的使用劑量，因而降低因使用高劑量藥物而產(chǎn)生的副作用，以及專一性地投藥。然而，基于生物使用安全性考慮，諸如材料來(lái)源和所使用的試劑等因素往往限制納米顆粒的應(yīng)用范圍。殼聚糖是目前公認(rèn)安全性極高(LD5。>4g/kg)的藥物載體。殼聚糖通常制成微球體。例如，CN1698900揭示一種殼聚糖載藥微球的制備方法，其特征在于將親水性藥物溶于殼聚糖的醋酸-醋酸鈉緩沖溶液中，用壓力通過(guò)微孔膜將水相壓入油相中，得到尺寸均一的乳滴，然后用二步驟固化法對(duì)乳滴進(jìn)行交聯(lián)固化。前述"二步驟固化法"是指使用離子型膠凝劑(例如三磷酸鹽(TPP))使殼聚糖發(fā)生分子鏈聚集成團(tuán)，然后利用化學(xué)交聯(lián)劑使其交聯(lián)固化。這種方法并不能制得納米級(jí)的殼聚糖顆粒。由于殼聚糖與相鄰分子以及諸如乳酸等有機(jī)酸之間會(huì)產(chǎn)生強(qiáng)的氫鍵，故難以溶解于水中。因此殼聚糖在水相中的溶解度即為決定其應(yīng)用范圍能否擴(kuò)大的一項(xiàng)重要因素。已知可在特定反應(yīng)條件下和在有機(jī)相中使殼聚糖與酸酐進(jìn)行?；饔?，產(chǎn)生具有不同去?；潭鹊臍ぞ厶?，從而控制殼聚糖的水溶性。此外，所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員也建議制備殼聚糖的納米顆粒。US2005/0226938Al揭示一種由殼聚糖制備經(jīng)交聯(lián)的核心以及核-殼型納米顆粒聚合物的方法，所述方法是使殼聚糖與至少一種其上具有至少兩個(gè)羧酸基的羧酸反應(yīng)，優(yōu)選地使用碳二酰亞胺(carbodiimide)作為反應(yīng)活化劑。US2006/0013885Al揭示一種用于輸送抗癌藥物的水溶性殼聚糖納米顆粒以及其制備方法，所述方法是使殼聚糖分子與甲基聚(乙二醇)對(duì)-氮基苯基碳酸酯鏈接，成為兩性分子鏈，進(jìn)而自組裝形成殼聚糖納米顆粒。JP2006241321揭示一種制備殼聚糖納米顆粒的方法，所述方法包含將殼聚糖溶解于一種水性酸溶液中，以獲得殼聚糖的水性酸溶液，并且將此殼聚糖的水性酸溶液加到一種堿性水溶液中，例如，3N的氫氧化鈉水溶液。CN1686560揭示一種殼聚糖季銨鹽納米粒子的制備方法，其是通過(guò)使殼聚糖和環(huán)氧丙烷-三甲基-氯化胺反應(yīng)以制備殼聚糖季銨鹽，然后將此殼聚糖季銨鹽、待包埋的藥物以及三聚磷酸鈉混合并進(jìn)行交聯(lián)，而獲得殼聚糖季銨鹽納米粒子。US4,996,307揭示一種水溶性乙?；瘹ぞ厶堑闹苽浞椒?，所述方法包括將呈任意共聚物形式且具有至少70%去乙?；潭鹊乃苄詺ぞ厶侨芙庥谝环N水性酸溶液中，以水或者例如甲醇的水可混溶性溶劑稀釋所述溶液，然后添加例如酸酐的乙?；瘎┲了鋈芤褐校援a(chǎn)生乙?；磻?yīng)。根據(jù)此專利的實(shí)施例，進(jìn)行上述乙酰化反應(yīng)時(shí)，添加甲醇、乙醇或異丙醇等有機(jī)溶劑作為有機(jī)相。JP2000256403揭示一種部分乙?；瘹ぞ厶穷w粒的制備方法，所述方法包括將殼聚糖溶解于一種水性酸溶液中，將此溶液分散在一種制粒用溶劑中，攪拌前述分散相使之形成顆粒。此外，經(jīng)由在甲苯或異丙醇的有機(jī)相中進(jìn)行乙?；饔?，形成經(jīng)乙酰化的殼聚糖，加入堿并且加熱，使所得產(chǎn)物部分乙酰化，最后通過(guò)交聯(lián)作用使產(chǎn)物穩(wěn)定。JP62079201揭示一種多孔性圓粒狀N-乙?；瘹ぞ厶堑闹苽浞椒ǎ龇椒ò▽⒌头肿恿康臍ぞ厶侨芙庥谝环N水性酸溶液中，將此溶液滴入一種堿性溶液中，使殼聚糖溶液產(chǎn)生凝集作用，進(jìn)而形成所述多孔性圓粒狀N-乙?；瘹ぞ厶?。前述乙?；饔檬窃诶缂状蓟虮降扔袡C(jī)相中進(jìn)行。CN1367183揭示一種類玻尿酸殼聚糖的制備方法，所述方法包括使殼聚糖進(jìn)行乙酰化作用，然后進(jìn)行選擇性氧化作用，以獲得具有類似玻尿酸的結(jié)構(gòu)的殼聚糖。前述乙?；饔檬窃诶缂状嫉挠袡C(jī)相中進(jìn)行。此外，平野繁廣(ShigehiroHirano)和山口龍二(RyujiYamaguchi)于1976年發(fā)表于生物聚合物(BIOPOLYMERS)第15版第1685至1691頁(yè)中、標(biāo)題為"N-乙?；z甲殼素的多水合物(N-AcetylationGel:APoIyhydrateofChitin)"的文獻(xiàn)(以下稱"1976年文獻(xiàn)")中，比較了殼聚糖醋酸溶液分別在甲醇相和水相中進(jìn)行乙酰化作用所產(chǎn)生凝膠之間的差異。此1976年文獻(xiàn)主要在探討殼聚糖經(jīng)過(guò)乙酰化后所產(chǎn)生的膠化現(xiàn)象，并且進(jìn)一步探討所形成的膠體的基本物理性質(zhì)，例如可溶解于何種溶劑中和相關(guān)溶解度如何。但此1976年文獻(xiàn)僅教示在水相中添加一定量的醋酸酐可以使得殼聚糖由于乙?；饔枚仕z化，其所產(chǎn)生的膠體顆粒往往過(guò)大，甚至凝集成團(tuán)。此1976年文獻(xiàn)的操作條件無(wú)法制得殼聚糖納米顆粒。另外的相關(guān)文獻(xiàn)還包括李東元(Dong-WonLee)等人于2004年發(fā)表于"碳水化合物聚合物(Cflr&o/j)^rakPoZyme"),58(2004)"中、標(biāo)題為"酰基化殼聚糖納米顆粒的物理化學(xué)性質(zhì)和血液相容性(Physicochemicalpropertiesandbloodcompatibilityofacylatedchitosannanoparticles)"的文獻(xiàn)，以及，頗特若阿(A.Portero)等人于2002年發(fā)表于"微膠囊化(Af/CiOC4尸S(/Z^77OA0，19(2002)"中、標(biāo)題為"用于抗微生物劑至胃粘膜的控釋給藥的重乙?；瘹ぞ厶俏⑶蝮w(Reacetylatedchitosanmicrospheresforcontrolleddeliveryofanti-microbialagentstothegastricmucosa)"的文獻(xiàn)。其全文以弓l用的方式并入本專利案的說(shuō)明書中。上述已知?dú)ぞ厶穷w粒的制備方法分別具有一或多種以下缺點(diǎn)(1)未能制得納米級(jí)殼聚糖顆粒，(2)涉及繁瑣的化學(xué)修飾步驟，耗時(shí)又耗費(fèi)人力，(3)制造過(guò)程中使用的有機(jī)溶劑會(huì)殘留于所制得的殼聚糖顆粒中，因此，即使能夠制得納米級(jí)殼聚糖顆粒，其對(duì)于醫(yī)療應(yīng)用的安全性仍令人擔(dān)憂。目前仍需要一種能夠制備具有良好生物相容性又符合醫(yī)療應(yīng)用的安全性考慮的納米級(jí)殼聚糖顆粒的方法。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供一種滿足上述需求的納米級(jí)殼聚糖顆粒的制備方法，其是在水相中進(jìn)行殼聚糖溶液的化學(xué)性修飾，使殼聚糖分子鏈接成為兩性分子鏈，進(jìn)而于物理性分散力的作用下自組裝成為殼聚糖納米顆粒。本發(fā)明是在殼聚糖經(jīng)由乙?；揎椂a(chǎn)生膠體的過(guò)程中通過(guò)控制殼聚糖和醋酸酐的濃度并通過(guò)物理性分散而獲得納米級(jí)的殼聚糖顆粒，此可避免如同前述1976年文獻(xiàn)般產(chǎn)生大團(tuán)塊膠體。具體而言，本發(fā)明提供一種在水相中制備殼聚糖納米顆粒的方法，其包含以下步驟(a)提供濃度為約0.05w/v呢至約1w/v呢的殼聚糖溶液，(b)將水和醋酸酐依序加入所述殼聚糖溶液中，以進(jìn)行乙酰化作用，其中，以整體溶液的體積計(jì)，所述醋酸酐的濃度為約10v/v呢至約30v/v%,和(c)使步驟(b)的溶液進(jìn)行物理性分散。在步驟(a)中所使用的殼聚糖是指P-[1—4]-2-氨基-2-脫氧-D-葡萄吡喃糖，通常具有10-1,000kDa的分子量以及介于70呢與90%之間的去乙酰化程度。殼聚糖可由任何已知來(lái)源獲得，包括但不限于軟體動(dòng)物(例如烏賊)、昆蟲外殼、藻類、甲殼類動(dòng)物和真菌。甲殼類動(dòng)物殼聚糖優(yōu)選為蝦或蟹殼殼聚糖，真菌殼聚糖優(yōu)選為Mz'HYmeAm's殼聚糖。根據(jù)本發(fā)明的殼聚糖溶液是指將殼聚糖溶解于溶劑后所形成的溶液，其中所述溶劑可為任何已知可用于溶解殼聚糖的溶劑，其包括但不限于醋酸水溶液、甲酸、丙酸、蘋果酸、琥珀酸和乳酸，其中優(yōu)選為約1v/v呢的醋酸水溶液；且殼聚糖溶液的濃度優(yōu)選為約0.05w/v呢至約0.6w/v%，更優(yōu)選為約0.1w/v免至約0.3w/v%。在步驟(b)中所使用的無(wú)水醋酸酐可通過(guò)商業(yè)行為購(gòu)得。以整體溶液的體積計(jì)，所述醋酸酐的濃度為約10v/v免至約30v/v%，優(yōu)選為約12.5v/v免至約25v/v%，更優(yōu)選為約17.5v/v呢至約25v/v%。本發(fā)明中的乙?；饔檬侵笇ぞ厶堑陌被c醋酸酐的羧基形成乙酰基的反應(yīng)，其可于任何所屬領(lǐng)域已知的適當(dāng)溫度下進(jìn)行。在步驟(c)中所述的物理性分散是指以物理方式使溶液分子產(chǎn)生分散作用的處理，其可使用任何所屬領(lǐng)域已知的方式進(jìn)行，其包括但不限于以振蕩器(Shaker)、液體噴灑器(SpraySparger)、機(jī)械式攪拌和超聲波震蕩處理。如利用攪拌方式進(jìn)行物理性分散時(shí)，可將磁石加入所述來(lái)自步驟(b)的溶液中，并且以適當(dāng)攪拌速率攪拌一段超過(guò)約24小時(shí)的時(shí)間。攪拌速率取決于所反應(yīng)的溶液體積大小，可為例如約150rpm至約1500rpm，優(yōu)選為約175rpm至約1300rpm。如利用超聲波震蕩進(jìn)行物理性分散時(shí)，根據(jù)本發(fā)明的一項(xiàng)優(yōu)選實(shí)施例，是利用超聲波振蕩器(聲波與材料公司(Sonic&MaterialsInc.)型號(hào)VC134,功率130W，容量115V，50/60Hz)在下列條件下進(jìn)行震蕩時(shí)間為約5分鐘，脈沖間距為約4秒，且在震蕩完畢后立即將溶液移入冰浴中。步驟(c)的物理性分散可于任何所屬領(lǐng)域已知的適當(dāng)溫度下進(jìn)行，例如約20。C至約40。C，使用機(jī)械式攪拌(如磁石攪拌)進(jìn)行物理性分散，優(yōu)選地在約37。C下進(jìn)行，如利用超聲波震蕩進(jìn)行物理性分散，優(yōu)選地在室溫下進(jìn)行。根據(jù)本發(fā)明方法獲得的殼聚糖納米顆?？删哂屑s100nm至約500nm的平均粒徑，優(yōu)選地為約100nm至約300nm，最優(yōu)選地為約100nm至約200nm。本發(fā)明方法可于溫和條件下獲得殼聚糖納米顆粒，而無(wú)須使用有機(jī)溶劑或者繁瑣的化學(xué)性修飾步驟，其操作方式相當(dāng)簡(jiǎn)單。由于本發(fā)明方法全程在水相中進(jìn)行，故可避免常規(guī)殼聚糖顆粒中有機(jī)溶劑殘留的問(wèn)題。根據(jù)本發(fā)明方法獲得的殼聚糖納米顆粒更符合醫(yī)療應(yīng)用的安全性考慮，并且具有良好生物相容性。具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例用于對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明，而非用來(lái)限制本發(fā)明的范圍。任何本發(fā)明所屬
技術(shù)領(lǐng)域：
的技術(shù)人員可輕易達(dá)成的修正和改變均包括于本案說(shuō)明書揭示內(nèi)容和所附權(quán)利要求書之內(nèi)。實(shí)施例1殼聚糖納米顆粒的制備(磁石攪拌)(I)使用從不同來(lái)源獲得并且具有不同平均分子量的殼聚糖分別將秤重好的0.2g的獲自蝦蟹殼(購(gòu)自臺(tái)灣世展公司(ShinEraTechnologyCo.,Ltd))和真菌(購(gòu)自財(cái)團(tuán)法人食品工業(yè)發(fā)展研究所的Acri加mKCo〃a!'謹(jǐn)"e"w、菌株)并且具有不同分子量的殼聚糖，加入預(yù)先配制的1v/v呢醋酸水溶液中，以使其溶解，然后將其定量至100mL，并且取10mL上述殼聚糖溶液進(jìn)行后續(xù)反應(yīng)。在所述10mL殼聚糖溶液中，先加入5mLMilliQ純水，再加入5mL100免醋酸酑(即純水:醋酸酐的體積比=1:1)，以進(jìn)行乙?；饔谩４朔磻?yīng)中，總反應(yīng)溶液體積為20mL，以所述整體反應(yīng)溶液的體積計(jì)，所述醋酸酐的濃度為25Wv%。將磁石加入上述溶液中，于37。C下，以1300rpm的攪拌速率攪拌一段超過(guò)24小時(shí)的時(shí)間后，獲得殼聚糖納米顆粒的水溶液。以納米粒度儀分析其中的殼聚糖納米顆粒，結(jié)果如表l所示，其平均粒徑范圍為195~326表1<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注CC代表獲自蝦蟹殼的殼聚糖，F(xiàn)C代表獲自真菌的殼聚糖，數(shù)字部分代表平均分子量(kDa)(II)使用不同的殼聚糖濃度和醋酸酐濃度中心混成設(shè)計(jì)(CentralCompositeDesign(CCD))實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)條件是根據(jù)Design-Expert6.0.2軟件設(shè)計(jì)。首先，依據(jù)此軟件所給的實(shí)驗(yàn)條件以小容器進(jìn)行搖瓶試驗(yàn)(shakertest),然后將試驗(yàn)結(jié)果輸入此軟件原本設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)表的結(jié)果欄位中，經(jīng)由軟件分析，便可得到許多探討實(shí)驗(yàn)變量的具體結(jié)論。本發(fā)明在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中使用的CCD設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)?zāi)苡谝淮螌?shí)驗(yàn)中同時(shí)探討所需的多個(gè)實(shí)驗(yàn)變量(而不像傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)一次只能探討一個(gè)變量)，再依據(jù)Design-Expert6.0.2軟件所規(guī)劃出來(lái)探討多變因子，需要實(shí)驗(yàn)的反應(yīng)條件和組數(shù)，實(shí)驗(yàn)者即依軟件所設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行搖瓶試驗(yàn)，將搖瓶實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)再輸入回軟件原先規(guī)劃實(shí)驗(yàn)組數(shù)中，待填寫的結(jié)果欄位。經(jīng)由軟件統(tǒng)計(jì)分析，將可以了解各單一變量分別對(duì)于實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響程度，或者也能探討兩兩變量之間交互作用對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。(1)本實(shí)例中選擇獲自蝦蟹殼(購(gòu)自臺(tái)灣世展公司(ShinEraTechnologyCo.，Ltd))并且分子量為95kDa的殼聚糖(CC95)進(jìn)行上述CCD設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)。分別將秤重好的0.050.35g上述殼聚糖加入預(yù)先配制的1v/v免醋酸水溶液中，以使其溶解，然后將其定量至100mL,并且取5mL上述殼聚糖溶液進(jìn)行后續(xù)反應(yīng)。在所述5mL殼聚糖溶液中，先加入2.5mLMilliQ純水，再加入2.5mL100%醋酸酐(即純水:醋酸酐的體積比=1:1)，以進(jìn)行乙酰化作用。此反應(yīng)中，總反應(yīng)溶液體積為10mL，以所述整體反應(yīng)溶液的體積計(jì)，所述醋酸酐的濃度為25v/v%。在上述(I)中所描述的相同條件下進(jìn)行乙酰化作用。結(jié)果證實(shí)在上述條件下可制得殼聚糖納米顆粒的水溶液。以納米粒度儀分析其中的殼聚糖納米顆粒，結(jié)果如表2所示，其平均粒徑范圍為189~298nmo表2<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>(2)本實(shí)例中選擇獲自真菌(購(gòu)自財(cái)團(tuán)法人食品工業(yè)發(fā)展研究所的m!Va"e"s"菌株)并且平均分子量為24kDa的殼聚糖(FC24)進(jìn)行上述CCD設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)。分別將秤重好的0.4g與0.6g上述殼聚糖加入預(yù)先配制的1v/v免醋酸水溶液中，以使其溶解，然后將其定量至lOOmL，并且取5mL上述殼聚糖溶液進(jìn)行后續(xù)反應(yīng)。在所述5mL殼聚糖溶液中，先加入2.5mLMilliQ純水，再加入2.5mL100%醋酸酐(即純水:醋酸酐的體積比=1:1)，以進(jìn)行乙?；饔?。此反應(yīng)中，總反應(yīng)溶液體積為10mL，以所述整體反應(yīng)溶液的體積計(jì)，所述醋酸酐的濃度為25v/v%。將磁石加入上述溶液中，于37°C下以175rpm的攪拌速率攪拌超過(guò)24小時(shí)的時(shí)間后，獲得殼聚糖納米顆粒的水溶液。以納米粒度儀分析其中的殼聚糖納米顆粒，結(jié)果如表3所示，其平均粒徑范圍為196~206iim。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>表2以及3的結(jié)果證實(shí)，根據(jù)本發(fā)明方法，反應(yīng)濃度為O.lw/v%~0.6w/v免的殼聚糖，可制得殼聚糖納米顆粒。(3)接續(xù)上述實(shí)驗(yàn)方式，將秤重好的0.2g殼聚糖(CC95)加入預(yù)先配制的1v/v%醋酸水溶液中，以使其溶解，然后將其定量至lOOmL,并且取5mL上述殼聚糖溶液進(jìn)行后續(xù)反應(yīng)。在所述5mL殼聚糖溶液中，先加入不同反應(yīng)體積MilliQ純水，再加入100%醋酸酐，以進(jìn)行乙?；饔?。此反應(yīng)中，總反應(yīng)溶液體積為10mL，以所述整體反應(yīng)溶液的體積計(jì)，醋酸酐的濃度分別為17.5v/v呢和25v/v%。在上述(2)中所描述的相同條件下進(jìn)行乙酰化作用并獲得殼聚糖納米顆粒的水溶液。以納米粒度儀分析其中的殼聚糖納米顆粒，結(jié)果如表4所示，其平均粒徑范圍為170~245nm。因此在本發(fā)明方法中，在醋酸酐的濃度為17.5v/v%~25v/v呢的條件下可制得殼聚糖納米顆粒。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>實(shí)施例2殼聚糖納米顆粒的制備(超聲波震蕩)(I)使用從不同來(lái)源獲得并且具有不同平均分子量的殼聚糖分別將秤重好的0.2g獲自蝦蟹殼(購(gòu)自臺(tái)灣世展公司(ShinEraTechnologyCo.，Ltd))和真菌(購(gòu)自財(cái)團(tuán)法人食品工業(yè)發(fā)展研究所的A"!'朋mKcor加'vra"e"j"菌株)且具有不同分子量的殼聚糖加入預(yù)先配制的1v/v免醋酸水溶液中，以使其溶解，然后將其定量至100mL，并且取3.6mL上述殼聚糖溶液進(jìn)行后續(xù)反應(yīng)。在所述3.6mL殼聚糖溶液中，先加入不同反應(yīng)體積MilliQ純水，再加入100%醋酸酐(純水:醋酸酐的體積比分別為1:2，2:3和1:1)，以進(jìn)行乙酰化作用。此反應(yīng)中，總反應(yīng)溶液體積為7.2mL，以所述整體反應(yīng)溶液的體積計(jì)，所述醋酸酐的濃度分別為16.67v/v%、20v/v呢和25v/v%。在反應(yīng)過(guò)程中，同時(shí)利用超聲波振蕩器(聲波與材料公司(Sonic&MaterialsInc.)型號(hào)VC134)在輸出功率為15W且脈沖間距為4秒的條件下于室溫下震蕩5分鐘(震蕩器被置入反應(yīng)裝置(試管)中)，以獲得殼聚糖納米顆粒的水溶液，震蕩完畢后立即將溶液移入冰浴中。以納米粒度儀分析其中的殼聚糖納米顆粒，結(jié)果如表5所示，其平均粒徑范圍為138~213nm。表5<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>注表5的樣本編號(hào)中，F(xiàn)C代表獲自真菌的殼聚糖，CC代表獲自蝦蟹殼的殼聚糖，數(shù)字部分代表平均分子量(kDa)由表5的結(jié)果可知，根據(jù)本發(fā)明方法，使用從不同來(lái)源獲得并且具有不同平均分子量的殼聚糖(例如奸蟹殼殼聚糖和真菌殼聚糖)，在添加使醋酸酐的濃度為16.67v/v%~25v/v呢的條件下，通過(guò)超聲波振蕩，可獲得平均粒徑范圍為138~213nm的殼聚糖納米顆粒。(II)使用不同的醋酸酐最終濃度選擇獲自真菌(購(gòu)自財(cái)團(tuán)法人食品工業(yè)發(fā)展研究所的4"/"omwcor菌株)并且平均分子量為340kDa的殼聚糖(FC340)進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)。將秤重為0.2g的上述殼聚糖分別加入預(yù)先配制的1v/v呢醋酸水溶液中，以使其溶解，然后將其定量至100mL，并且取2mL上述殼聚糖溶液進(jìn)行后續(xù)反應(yīng)。在所述2mL殼聚糖溶液中，先加入不同反應(yīng)體積MilliQ純水，再加入100%醋酸酐(純水:醋酸酐的體積比分別為l:l，3:5，1:3)，以進(jìn)行乙酰化作用。此反應(yīng)中，總反應(yīng)溶液體積為4mL，以所述整體反應(yīng)溶液的體積計(jì)，所述醋酸酐的濃度分別為25v/v%、18.75v/v呢和12.5v/v%。同時(shí)以如實(shí)施例2的(I)中所描述的相同方式通過(guò)超聲波振蕩器進(jìn)行反應(yīng)，以獲得殼聚糖納米顆粒的水溶液。以納米粒度儀分析其中的殼聚糖納米顆粒，結(jié)果如表6所示，其平均粒徑范圍為153~170nm。表6<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>由表6的結(jié)果可知，根據(jù)本發(fā)明方法，使用真菌殼聚糖(FC340)，在使醋酸酐的濃度分別為12.5v/v%、18.75v/v呢和25v/v呢的條件下，通過(guò)超聲波振蕩，可獲得平均粒徑范圍為153~170nm的殼聚糖納米顆粒。綜合上述實(shí)施例l和2的結(jié)果可知，使用獲自不同來(lái)源并且具有不同平均分子量的殼聚糖(例如獲自蝦蟹殼的殼聚糖和獲自真菌的殼聚糖)，在使醋酸酐的濃度為12.5v/v%~25v/v呢的條件下，通過(guò)物理性分散(例如攪拌或超聲波振蕩)，確可獲得殼聚糖納米顆粒。權(quán)利要求1.一種在水相中制備殼聚糖納米顆粒的方法，其包含以下步驟(a)提供濃度為約0.05w/v％至約1w/v％的殼聚糖溶液，(b)將水和醋酸酐依序加入所述殼聚糖溶液中，以進(jìn)行乙酰化作用，其中，以整體溶液的體積計(jì)，醋酸酐的濃度為約10v/v％至約30v/v％，和(c)使步驟(b)的溶液進(jìn)行物理性分散。2.如權(quán)利要求l所述的方法，其中所述殼聚糖獲自甲殼類或真菌。3.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述殼聚糖溶液是將殼聚糖溶解于1v/v免的醋酸水溶液后所形成的溶液。4.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述殼聚糖溶液的濃度為約0.05w/v免至約0.6w/v%。5.如權(quán)利要求4所述的方法，其中所述殼聚糖溶液的濃度為約0.1w/v呢至約0.3w/v%。6.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述醋酸酐的濃度為約12.5v/v呢至約25v/v%。7.如權(quán)利要求6所述的方法，其中所述醋酸酐的濃度為約17.5v/v免至約25v/v%。8.如權(quán)利要求1所述的方法，其中步驟(c)的物理性分散是以機(jī)械式攪拌或超聲波震蕩的方式進(jìn)行。9.如權(quán)利要求8所述的方法，其中所述物理性分散是以機(jī)械式攪拌的方式進(jìn)行，其是通過(guò)將磁石加入所述來(lái)自步驟(b)的溶液中，并且以約150rpm至約1500rpm的攪拌速率于約37°C下攪拌一段超過(guò)24小時(shí)的時(shí)間而進(jìn)行。10.如權(quán)利要求8所述的方法，其中所述物理性分散是以超聲波震蕩的方式于室溫下進(jìn)行。11.如權(quán)利要求1所述的方法，其中步驟(c)的物理性分散是在約20°C至約40°C下進(jìn)行。12.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述殼聚糖納米顆粒具有約100nm至約500nm的平均粒徑。13.如權(quán)利要求12所述的方法，其中所述殼聚糖納米顆粒具有約100nm至約300nm的平均粒徑。14.如權(quán)利要求13所述的方法，其中所述殼聚糖納米顆粒具有約100nm至約200nm的平均粒徑。全文摘要本發(fā)明提供一種在水相中制備殼聚糖納米顆粒的方法，其包含以下步驟(a)提供濃度為約0.05w/v％至約1w/v％的殼聚糖溶液，(b)將水和醋酸酐依序加入所述殼聚糖溶液中，以進(jìn)行乙?；饔茫渲?，以整體溶液的體積計(jì)，醋酸酐的濃度為約10v/v％至約30v/v％，和(c)使步驟(b)的溶液進(jìn)行物理性分散。文檔編號(hào)C08J3/12GK101633739SQ20081013207公開日2010年1月27日申請(qǐng)日期2008年7月24日優(yōu)先權(quán)日2008年7月24日發(fā)明者梁克明,陳慶源,陳彥霖,陳美惠申請(qǐng)人:財(cái)團(tuán)法人食品工業(yè)發(fā)展研究所