專利名稱：交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒及其制備方法及其使用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種磁導(dǎo)靶向載體材料及其制備方法及其使用，具體涉及一種交聯(lián)葡
聚糖磁性復(fù)合微粒及其制備方法及其使用。
背景技術(shù)：
磁性高分子微球是廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的一種多功能材料。這一類材料不 但具有高分子微粒的諸多特性，同時被賦予磁特性，能在外加磁場的作用下，使其與其它組 分迅速分離，或通過磁場誘導(dǎo)進行定向或運動。所需實驗條件簡單，操作簡便，費用低廉， 因此在細胞分離、分類、免疫測定、固定化酶、耙向藥物、DNA的分離、核酸雜交等諸多領(lǐng)域 具有廣泛的應(yīng)用前景。這些磁性微粒以氧化鐵為核心，外包葡聚糖、白蛋白、殼聚糖、聚乙 二醇、環(huán)糊精、聚乳酸等高分子，其中葡聚糖磁性復(fù)合微粒在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中有著廣闊的應(yīng)用前 景。葡聚糖(dextran)，又名右旋糖苷，是具有線狀主鏈的一類多糖，主要由1，6-a-D-吡 喃糖苷連接在一起。作為一種水溶性多糖，葡聚糖具有良好的生物相容性，在體內(nèi)可被降解 成葡萄糖單體，無毒，無害；同時葡聚糖具有較高的反應(yīng)活性，易于和多種生物活性物質(zhì)反 應(yīng)，且價格低廉容易獲得。經(jīng)葡聚糖包被的磁性納米顆粒，既可以通過羥基基團連接具有生 物活性的物質(zhì)，又能通過布朗運動保持其在溶液中的穩(wěn)定性。目前，葡聚糖磁性復(fù)合微粒 的研究已有不少報道，如華中科技大學(xué)的王國斌等人利用化學(xué)共沉淀法合成了葡聚糖磁性 復(fù)合微粒(中國專利公開號CN101062416A)，但從該專利的SEM圖可看出，該磁性微粒以 橢圓形居多，且有一些不規(guī)則形狀的微粒存在，同時磁性微粒的飽和磁化強度較低，這表明 它的磁響應(yīng)性不好；Tao，K.等利用共沉淀法(2006， 290， 70-76， Colloidsand Surfaces A: Physicochem. Eng. Aspects)，在通氮的條件下，合成了葡聚糖_四氧化三鐵簇，并且給出了 理論結(jié)構(gòu)模型，但是所得到的微粒的磁響應(yīng)性較低，限制該微粒的應(yīng)用；軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院的 諶志強等人也是利用化學(xué)共沉淀法合成了葡聚糖磁性微粒，飽和磁化強度也很低；上海工 業(yè)研究院的徐偉等人制備了葡聚糖凝膠(中國專利公開號CN1868577A)，該專利是以無機 固體微粒為致孔劑，并結(jié)合了常規(guī)的油水兩相法，加入交聯(lián)劑，使葡聚糖發(fā)生交聯(lián)，再加入 酸，溶解掉其中的無機固體微粒，所得即為葡聚糖凝膠。該專利中制備葡聚糖凝膠的方法對 本發(fā)明中葡聚糖的交聯(lián)有一定參考意義。Xia，Z.F.等人(2005， 293， 182-186， Journal of Magnetism and Magnetic Materials)利用超聲共沉淀法合成了葡聚糖_四氧化三鐵復(fù)合 微粒，并且給出了葡聚糖與四氧化三鐵的用量對磁性的影響，這對本發(fā)明也有一定的參考 意義，但是所得磁粒的磁性也較差。目前所報道的葡聚糖磁性復(fù)合微粒的制備方法不能得 到磁響應(yīng)性強、包載量大、對藥物可進行緩釋作用的磁性復(fù)合微粒。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的 為了解決背景技術(shù)中存在的上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種具有載藥量大、磁 響應(yīng)性強的交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒及其制備方法及其使用，并將其應(yīng)用在腫瘤靶向治療
4中。本發(fā)明在超聲法所制得的葡聚糖磁性復(fù)合微粒的基礎(chǔ)上，加入交聯(lián)劑，使復(fù)合微粒表面 的葡聚糖發(fā)生交聯(lián)，因而形成了交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒，具有強的磁響應(yīng)性，載藥量大， 能夠高度濃集抗癌藥物的特點，能夠通過磁場的定位和藥物的緩釋作用于靶向細胞。
本發(fā)明的技術(shù)方案 交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒，其特殊之處在于該復(fù)合微粒包括磁性納米顆粒和具
有交聯(lián)結(jié)構(gòu)的葡聚糖，所述的磁性納米顆粒分散在具有交聯(lián)結(jié)構(gòu)的葡聚糖中。 上述交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒的粒徑范圍為0. 3 - 5 ii m ，其中優(yōu)選粒徑范圍為
1_3 ii m。 上述磁性納米顆粒的成分是(Fe203) jFe304)h或1^6204，其中r為0 l，M為Zn、 Mn或Co，磁性納米顆粒的粒徑范圍為5-30nm ;所述的葡聚糖是具有線狀主鏈的一類多糖， 主要由1，6-a-D-吡喃糖苷連接在一起，其化學(xué)式為(CeHA)n，其分子量為5000-140000。 當(dāng)分子量確定時n值即可確定。 制備該交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒的方法，其特殊之處在于包括以下步驟
步驟1)配制葡聚糖溶液 取超純水和堿溶液加入到葡聚糖中，配制成濃度為20 100mg/ml的葡聚糖溶液。
步驟2)合成葡聚糖磁性復(fù)合微粒 將磁性納米顆粒和堿溶液加入到步驟1)制得的葡聚糖溶液中得到混合體系，并 保持體系中的堿濃度同步驟1)所得葡聚糖溶液的堿濃度一致，將該混合體系邊反應(yīng)邊攪 拌，合成葡聚糖磁性復(fù)合微粒。
步驟3)合成交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒 在步驟2)制得的葡聚糖磁性復(fù)合微粒中加入堿溶液制得混合液，使該混合液的 堿濃度達到1 4M，充分攪拌，加入交聯(lián)劑，水浴反應(yīng)，邊反應(yīng)邊攪拌，反應(yīng)結(jié)束后，磁性分 離或離心，得到中性的交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒。 上述步驟3)中交聯(lián)劑的加入方式為將交聯(lián)劑分成多次加入；或使用恒壓滴液漏 斗使其在不小于一小時內(nèi)加完。 上述交聯(lián)劑可以是用異丙醇或乙醇以體積比1 : 1 3 : l稀釋的。
上述步驟1) 、2)中堿溶液的濃度為0. 5-5M，步驟1)中可通過超聲加速溶解，超聲 時間為2 15min為宜；步驟2)中的磁性納米顆粒的質(zhì)量按照與步驟1)中葡聚糖的質(zhì)量 比l : 0. 5 1 : 10加入，攪拌速度為200 500rpm，通過超聲反應(yīng)，反應(yīng)溫度為2(TC 4(TC，反應(yīng)時間為3 8h為宜，步驟3)中所加堿溶液的濃度大于該混合液的堿濃度，使混 合液的堿濃度調(diào)節(jié)到1.5-3M，交聯(lián)劑的用量按照葡聚糖和交聯(lián)劑的質(zhì)量比1 : 20 1 : 40 加入，水浴溫度為50°C 8(TC，水浴反應(yīng)時間為8 30h，攪拌速度為600 1200rpm。
上述葡聚糖是具有線狀主鏈的一類多糖，主要由1，6-a-D-吡喃糖苷連接在一 起，其分子量為5000-140000，磁性納米顆粒是具有以下化學(xué)組成(Fe203)jFe304)h或 MFe204的粒徑范圍在5 30nm的顆粒，其中r為0 1， M為Zn、Mn或Co，磁性納米顆粒是 通過化學(xué)共沉淀法或微乳液法等方法合成的，分散在水或與水互溶體系中。交聯(lián)劑為環(huán)氧 氯丙烷，堿溶液是氨水、NaOH或KOH水溶液。 該交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒的使用方法，其特殊之處在于包括以下步驟
步驟l)載藥
①取交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒懸液于離心管中，磁性分離，去上清；
②加入交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒用量的10 25%抗癌藥物溶液，混勻，置于搖 床，在2(TC 4(TC條件下恒溫振蕩，制得載抗癌藥物的交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒；
③將制得的載抗癌藥物的交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒在4°C的條件下保存；
步驟2)釋藥 ①取載抗癌藥物的交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒于離心管中，磁性分離，棄去上清； ②加入緩釋液，在36°C 3『C條件下恒溫振蕩，在特定的時間點，分別取出適量
溶有抗癌藥物的緩釋液，再用與取出量相同的緩釋液補充，繼續(xù)進行緩釋。 上述步驟1)中交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒的用量是按照抗癌藥物與交聯(lián)葡聚糖磁
性復(fù)合微粒的質(zhì)量比為1 : 4 1 : IO，振蕩轉(zhuǎn)速為180 220rpm，紫外-可見吸收光譜
監(jiān)測溶液中抗癌藥物的濃度不在發(fā)生變化，即達到載藥平衡；步驟2)中載抗癌藥物的交聯(lián)
葡聚糖磁性復(fù)合微粒與緩釋液的質(zhì)量比為i : 3 1 : 10，振蕩溫度為37t:，振蕩轉(zhuǎn)速為
180 220rpm，振蕩時間為7 10天。 上述抗癌藥物為阿霉素、柔紅霉素、5-氟尿嘧啶、紫杉醇、洛鉑、博萊霉素多西他 賽、吉西他賓、異長春花堿、羥基喜樹堿等。 上述緩釋液是生理鹽水、超純水、磷酸緩沖液、血清、細胞培養(yǎng)液等。
本發(fā)明的優(yōu)點 1、該交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒由于把磁性復(fù)合微粒表面的葡聚糖交聯(lián)，故實現(xiàn)了 對藥物的緩釋作用，是一種包載量大，穩(wěn)定性好的靶向制劑。 2、該交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒磁響應(yīng)性好，可以在磁場的作用下，固定到特定的 部位，進行腫瘤靶向治療； 3、該交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒的粒徑分布均勻，大小可控，并且具有交聯(lián)結(jié)構(gòu)，在 空氣和各種溶劑中長期保持了穩(wěn)定性； 4、該交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒制備方法簡單，成本低廉，有利于推廣。 5、該交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒可作為磁性納米藥物載體應(yīng)用在腫瘤的靶向治療中。


圖1是交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒結(jié)構(gòu)示意圖 圖2是交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒合成路線的示意圖 圖3是交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒的粒徑分布圖 圖4是交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒的磁滯回線圖 圖5是交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒載藥量與載藥時間關(guān)系圖 圖6是載阿霉素交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒的體外釋藥曲線圖
具體實施例方式
本發(fā)明交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒包括磁性納米顆粒和具有交聯(lián)結(jié)構(gòu)的葡聚糖，磁 性納米顆粒分散在交聯(lián)結(jié)構(gòu)的葡聚糖中。 交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒的粒徑范圍為0. 3-5iim，其中優(yōu)選粒徑范圍為1-3 y m
磁性納米顆粒的成分是(Fe203)r(Fe304) &或MFe204，其中r為0 1， M為Zn、 Mn 或Co，磁性納米顆粒的粒徑范圍為5-30nm ;所述的葡聚糖是具有線狀主鏈的一類多糖，主 要由1，6-a-D-吡喃糖苷連接在一起，其化學(xué)式為(Qft05)n，其分子量為5000-140000。當(dāng) 分子量確定時n值即確定。 該交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒的制備方法的化學(xué)反應(yīng)式為
<formula>formula see original document page 7</formula> 該交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒的制備方法，包括以下步驟
步驟1)配制葡聚糖溶液 取超純水和堿溶液加入到葡聚糖中，配制成濃度范圍為20 100mg/ml的葡聚糖 溶液。 步驟2)合成葡聚糖磁性復(fù)合微粒 將磁性納米顆粒和堿溶液加入到上述步驟1)制得的葡聚糖溶液中得到混合體 系，并保持體系中的堿濃度同步驟1)所得葡聚糖溶液的堿濃度一致，將該混合體系邊反應(yīng) 邊攪拌，合成葡聚糖磁性復(fù)合微粒。
步驟3)合成交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒 在步驟2)制得的葡聚糖磁性復(fù)合微粒中加入堿溶液制得混合液，使該混合液的 堿濃度達到1 4M，充分攪拌，加入交聯(lián)劑，水浴反應(yīng)，邊反應(yīng)邊攪拌，反應(yīng)結(jié)束后，磁性分 離或離心，得到中性的交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒。 其中步驟3)中交聯(lián)劑的加入方式為將交聯(lián)劑分多次加入，或使用恒壓滴液漏斗 使其在不小于一小時內(nèi)加完。 交聯(lián)劑可以是用異丙醇或乙醇以體積比1 : l至3 : l稀釋的。
步驟1) 、2)中堿溶液的濃度為0. 5-5M，步驟1)中可通過超聲加速溶解，超聲時 間以2 15min為宜；步驟2)中的磁性納米顆粒的質(zhì)量按照與步驟1)中葡聚糖的質(zhì)量比 1 : 0. 5 1 : 10加入，攪拌速度為200 500rpm，通過超聲反應(yīng)，反應(yīng)溫度為20。C 4(rC， 反應(yīng)時間為3 8h為宜，步驟3)中所加堿溶液的濃度大于該混合液的堿濃度，使混合液的 堿濃度調(diào)節(jié)到1.5-3M，交聯(lián)劑的用量按照葡聚糖和交聯(lián)劑的質(zhì)量比1 : 20 1 : 40加入， 水浴溫度為50°C 80。C，水浴反應(yīng)時間為8 30h，攪拌速度為600 1200rpm為宜。
其中葡聚糖是具有線狀主鏈的一類多糖，主要由1，6-a-D-吡喃糖苷連接在一 起，其分子量為5000-140000 ，磁性納米顆粒是具有以下化學(xué)組成(Fe203) r (Fe304) ^或 MFe204的粒徑范圍在5 30nm的顆粒，其中r為0 1， M為Zn、Mn或Co，該磁性納米顆粒 表面含有羥基，能夠分散在水中或與水互溶體系中，磁性納米顆粒是通過化學(xué)共沉淀法或 微乳液法等方法合成的，交聯(lián)劑為環(huán)氧氯丙烷，堿溶液可以是氨水、NaOH或KOH水溶液。
該交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒的使用方法，包括以下步驟
步驟1)載藥 ①取交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒懸液于離心管中，磁性分離，去上清； ②加入交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒用量的10 25%抗癌藥物溶液，混勻，置于搖床，在20°C 4(TC條件下恒溫振蕩，制得載抗癌藥物的交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒；
③將制得的載抗癌藥物的交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒在4°C的條件下保存；
步驟2)釋藥 ①取載抗癌藥物的交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒于離心管中，磁性分離，棄去上清； ②加入緩釋液，在36°C 3『C條件下恒溫振蕩，在特定的時間點，分別取出適量
溶有抗癌藥物的緩釋液，再用與取出量相同的緩釋液補充，繼續(xù)進行緩釋。 上述步驟1)中交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒的用量是按照抗癌藥物與交聯(lián)葡聚糖磁
性復(fù)合微粒的質(zhì)量比為1 : 4 1 : 10加入的，振蕩轉(zhuǎn)速為180 220rpm，紫外-可見吸
收光譜監(jiān)測溶液中抗癌藥物的濃度不在發(fā)生變化，即達到載藥平衡；步驟2)中載抗癌藥物
的交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒與緩釋液的質(zhì)量比為i : 3 1 : 10，振蕩溫度為37t:，振蕩
轉(zhuǎn)速為180 220rpm，振蕩時間為7 IO天為宜。 抗癌藥物可以用阿霉素、柔紅霉素、5-氟尿嘧啶、紫杉醇、洛鉑、博萊霉素多西他 賽、吉西他賓、異長春花堿、羥基喜樹堿。 緩釋液是生理鹽水、超純水、磷酸緩沖液、血清、細胞培養(yǎng)液。
本發(fā)明交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒的制備方法實施例
具體實施例1 將2g葡聚糖-40加入250ml圓底燒瓶中，再加入10ml的超純水和10ml 1M NaOH， 超聲溶解。再加入磁性納米顆粒400mg(固體物含量約20mg/ml)于250ml圓底燒瓶中，加 入等體積的1M NaOH，控制攪拌速度400rpm，反應(yīng)溫度26°C ，超聲反應(yīng)4h。加入NaOH調(diào)節(jié) 體系中堿濃度為3M，再加入用異丙醇1 : l稀釋的環(huán)氧氯丙烷，環(huán)氧氯丙烷的量為24ml，采 用恒壓滴液漏斗在lh內(nèi)加完。升溫至6(TC，控制攪拌速度為900rpm，繼續(xù)反應(yīng)12h。反應(yīng) 結(jié)束后，通過磁性分離、離心等使體系達到中性，得到交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒。經(jīng)激光粒 度散射儀檢測其粒徑為1-3 ii m左右，參見圖3 ;飽和磁化強度大于40emu/g，參見圖4。
具體實施例2 加入10ml的超純水和10ml 1. 3M NaOH，在將2g葡聚糖-20加入250ml圓底燒瓶 中，超聲溶解。再加入磁性納米顆粒400mg(固體物含量約20mg/ml)于250ml圓底燒瓶中， 加入等體積的1. 3M NaOH，控制攪拌速度300rpm，反應(yīng)溫度28°C ，超聲反應(yīng)6h。加入NaOH調(diào) 節(jié)體系中堿濃度為2M。再加入用異丙醇2 : l稀釋的環(huán)氧氯丙烷，環(huán)氧氯丙烷的量為48ml， 采用恒壓滴液漏斗在1. 5h內(nèi)加完。升溫至7(TC，控制攪拌速度為1200rpm，繼續(xù)反應(yīng)28h。 反應(yīng)結(jié)束后，通過磁性分離、離心等使體系達到中性，得到交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒。經(jīng)激 光粒度散射儀檢測其粒徑為1-3 y m左右，參見圖3 ;飽和磁化強度大于40emu/g，參見圖4。
具體實施例3 將2g葡聚糖-30加入250ml圓底燒瓶中，在加入10ml的超純水和10mllM NaOH， 超聲溶解。再加入磁性納米顆粒400mg(固體物含量約20mg/ml)于250ml圓底燒瓶中，加 入等體積的1M NaOH，控制攪拌速度500rpm，反應(yīng)溫度27°C ，超聲反應(yīng)8h。加入NaOH調(diào)節(jié) 體系中堿濃度為3M，再加入用乙醇3 : l稀釋的環(huán)氧氯丙烷，環(huán)氧氯丙烷的量為60ml，將交 聯(lián)劑平均分成三份加入。升溫至6(TC，控制攪拌速度為1000rpm，繼續(xù)反應(yīng)20h，反應(yīng)結(jié)束 后，通過磁性分離、離心等使體系達到中性，得到交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒。經(jīng)激光粒度散 射儀檢測其粒徑為1-3 ii m左右，參見圖3 ;飽和磁化強度大于40emu/g，參見圖4。
具體實施例4 將2g葡聚糖-70加入250ml圓底燒瓶中，在加入10ml的超純水和10ml 1. 5M NaOH，超聲溶解。再加入磁性納米顆粒400mg(固體物含量約20mg/ml)于250ml圓底燒瓶 中，加入等體積的1.5M Na0H，控制攪拌速度300rpm，反應(yīng)溫度25t:，超聲反應(yīng)8h。加入 NaOH調(diào)節(jié)體系中堿濃度為1.5M，再加入用乙醇l : 1稀釋的環(huán)氧氯丙烷，環(huán)氧氯丙烷的量 為40ml。將交聯(lián)劑平均分成三份加入。升溫至6(TC，控制攪拌速度為1000rpm，繼續(xù)反應(yīng) 15h。反應(yīng)結(jié)束后，通過磁性分離、離心等使體系達到中性，得到交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒。 經(jīng)激光粒度散射儀檢測其粒徑為1-3 ii m左右，參見圖3 ;飽和磁化強度大于40emu/g，參見 圖4。 具體實施例5 將2g葡聚糖-40加入250ml圓底燒瓶中，在加入10ml的超純水和10ml氨水，超 聲溶解，再加入磁性納米顆粒400mg(固體物含量約20mg/ml)于250ml圓底燒瓶中，加入等 體積的氨水，控制攪拌速度400rpm，反應(yīng)溫度25°C ，超聲反應(yīng)6h。加入氨水使溶液中的堿濃 度為1. 5M，再加入體積為36ml的環(huán)氧氯丙烷，將交聯(lián)劑平均分成兩份加入。升溫至60°C， 控制攪拌速度為1000rpm，繼續(xù)反應(yīng)20h。反應(yīng)結(jié)束后，通過磁性分離、離心等使體系達到中 性，得到交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒。經(jīng)激光粒度散射儀檢測其粒徑為l-3ym左右，參見圖 3 ;飽和磁化強度大于40emu/g，參見圖4。 本發(fā)明交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒的使用方法，以所用藥物為阿霉素為例。 取5mg交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒(固體物含量約為15mg/ml)于5ml離心管中，
在磁性分離器上移取上清棄去，加入lmg阿霉素溶液(阿霉素濃度為lmg/ml)，在25t:下，
180rpm振蕩72h，達到載藥平衡，4t:保存。所得為載阿霉素的交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒。通
過紫外分光光度計測的溶液中剩余的阿霉素，再利用下面兩個公式計算得出載藥量，包封
率，所得載藥量為11%，參見圖5 ;包封率為82%。
載藥量=飾o叆-幼字飾o遠x 載藥復(fù)合磁?？偭?br> 包封率=總的DO)(量-游離的IX))(量 。 總的DOX量 將載阿霉素的交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒放置于內(nèi)置有15ml pH為7. 4的PBS緩沖 溶液的50ml的離心管中，放入37t:的恒溫振蕩器上以180rpm的轉(zhuǎn)速持續(xù)振蕩8天。在特 定時間內(nèi)取出0. 5ml溶有阿霉素的緩釋液，用0. 5ml新鮮的PBS緩沖溶液補充。利用熒光 分光光度計測定阿霉素在PBS中釋放的累積量，所得累積釋藥百分率為91%，沒有突釋現(xiàn) 象，緩釋效果好，參見圖6。其累計百分比計算公式如下
一 iCiVi+cnv 累積釋藥百分率(％) =^±~^~~^~xioo%
W.D 式中Ci、Cn為釋放介質(zhì)中藥物濃度，Vi為取出介質(zhì)體積，V為溶出介質(zhì)的總體積， W為微粒重量，D為微粒中藥物含量。
9
權(quán)利要求
交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒，其特征在于該復(fù)合微粒包括磁性納米顆粒和具有交聯(lián)結(jié)構(gòu)的葡聚糖，所述的磁性納米顆粒分散在具有交聯(lián)結(jié)構(gòu)的葡聚糖中。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒，其特征在于所述的交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒的粒徑范圍為0. 3-5 m。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒，其特征在于所述的交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒的粒徑范圍l-3iim。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒，其特征在于所述的磁性 納米顆粒的成分是(Fe203) r (Fe304)卜r或MFe204 ，其中r為0 l，M為Zn、Mn或Co，磁性納米顆 粒的粒徑范圍為5-30nm;所述的葡聚糖是具有線狀主鏈的一類多糖，主要由l，6_a-D-吡 喃糖苷連接在一起，其化學(xué)式為(CeHsO》n，其分子量為5000-140000。
5. —種制備如權(quán)利要求1所述的交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒的方法，其特征在于包括 以下步驟步驟1)配制葡聚糖溶液取超純水和堿溶液加入到葡聚糖中，配制成濃度為20-100mg/ml的葡聚糖溶液； 步驟2)合成葡聚糖磁性復(fù)合微粒取磁性納米顆粒溶液和堿溶液加入到步驟1)制得的葡聚糖溶液中得到混合體系，并 保持體系中的堿濃度同步驟1)所得葡聚糖溶液的堿濃度一致，將該混合體系邊反應(yīng)邊攪 拌，合成葡聚糖磁性復(fù)合微粒；步驟3)合成交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒在步驟2)制得的葡聚糖磁性復(fù)合微粒中加入堿溶液制得混合液，使該混合液的堿濃 度達到1 4M，充分攪拌，加入交聯(lián)劑，水浴反應(yīng)，邊反應(yīng)邊攪拌，反應(yīng)結(jié)束后，磁性分離或 離心，得到中性的交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒的制備方法，其特征在于步驟3) 中交聯(lián)劑的加入方式為將交聯(lián)劑多次加入，或使用恒壓滴液漏斗使其在不小于一小時內(nèi) 加完。
7. 根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒的制備方法，其特征在于所 述的交聯(lián)劑可以是用異丙醇或乙醇以體積比1:1 3:l稀釋的。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒的制備方法，其特征在于步驟l)、 2)中堿溶液的濃度為0. 5-5M，步驟1)中可通過超聲加速溶解，超聲時間為2 15min ;步驟2)中的磁性納米顆粒與步驟i)的葡聚糖的質(zhì)量比為i : o.5 i : 10，攪拌速度為200 500rpm，通過超聲反應(yīng)，反應(yīng)溫度為20°C 40°C ，反應(yīng)時間為3 8h，步驟3)中所加堿溶 液的濃度大于該混合液的堿濃度，使混合液的堿濃度調(diào)節(jié)到1. 5-3M，交聯(lián)劑的用量按照葡 聚糖和交聯(lián)劑的質(zhì)量比l : 20 1 : 40加入，水浴溫度為5(TC 8(TC，水浴反應(yīng)時間為 8 30h，攪拌速度為600 1200rpm。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒的制備方法，其特征在于所述的 葡聚糖是具有線狀主鏈的一類多糖，主要由1， 6- a -D-吡喃糖苷連接在一起，其分子量為 5000-140000 ;所述的磁性納米顆粒是具有以下化學(xué)組成(Fe203)r(Fe304)h或MFeA的粒 徑范圍在5 30nm的顆粒，其中r為0 l，M為Zn、Mn或Co，所述的磁性納米顆粒表面含 有羥基，能夠分散在水中或與水互溶體系中，所述的磁性納米顆粒是通過化學(xué)共沉淀法或微乳液法等方法合成的；所述的交聯(lián)劑為環(huán)氧氯丙烷；所述的堿溶液是氨水、NaOH或KOH水溶液。
10. —種如權(quán)利要求1所述的交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒的使用方法，其特征在于包括 以下步驟步驟1)載藥① 取交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒懸液于離心管中，磁性分離，去上清；② 加入交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒用量的10 25%抗癌藥物溶液，混勻，置于搖床，在 20°C 4(TC條件下恒溫振蕩，制得載抗癌藥物的交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒；③ 將制得的載抗癌藥物的交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒在4t:的條件下保存；步驟2)釋藥① 取載抗癌藥物的交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒于離心管中，磁性分離，棄去上清；② 加入緩釋液，在36t: 38t:條件下恒溫振蕩，在特定的時間點，分別取出適量溶有抗癌藥物的緩釋液，再用與取出量相同的緩釋液補充，繼續(xù)進行緩釋。
11. 根據(jù)權(quán)利要求IO所述的交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒的使用方法，其特征在于所述 的步驟1)中交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒的用量是按照抗癌藥物與交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒 的質(zhì)量比為1 : 4 1 : IO加入的，振蕩轉(zhuǎn)速為180 220rpm，紫外-可見吸收光譜監(jiān)測 溶液中抗癌藥物的濃度不再發(fā)生變化，即達到載藥平衡；步驟2)中載抗癌藥物的交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒與緩釋液的質(zhì)量比為i : 3 i : 10，振蕩溫度為37t:，振蕩轉(zhuǎn)速為i80 220rpm，振蕩時間為7 10天。
12. 根據(jù)權(quán)利要求11所述的交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒的使用方法，其特征在于所述 的抗癌藥物為阿霉素、柔紅霉素、5-氟尿嘧啶、紫杉醇、洛鉑、博萊霉素、多西他賽、吉西他 賓、異長春花堿、羥基喜樹堿。
13. 根據(jù)權(quán)利要求12所述的交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒的使用方法，其特征在于所述 緩釋液是生理鹽水、超純水、磷酸緩沖液、血清、細胞培養(yǎng)液。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒及其制備方法及其使用，該復(fù)合微粒包括磁性納米顆粒和具有交聯(lián)結(jié)構(gòu)的葡聚糖，其中磁性納米顆粒分散在具有交聯(lián)結(jié)構(gòu)的葡聚糖中。該復(fù)合微粒的制備方法為配制葡聚糖溶液、合成葡聚糖磁性復(fù)合微粒、合成交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒。該復(fù)合微粒的使用步驟制載抗癌藥物的交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒、在其中加入緩釋液釋藥。本發(fā)明解決了現(xiàn)有葡聚糖磁性復(fù)合微粒的磁響應(yīng)性弱、包載量小的技術(shù)問題，所制備的交聯(lián)葡聚糖磁性復(fù)合微粒具有強的磁響應(yīng)性，載藥量大，能夠高度濃集抗癌藥物的特點，能夠通過磁場的定位和藥物的緩釋作用于靶向細胞。
文檔編號C08K3/24GK101759882SQ20081023646
公開日2010年6月30日 申請日期2008年12月25日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月25日
發(fā)明者劉艷紅, 崔亞麗, 彭明麗, 李珂, 陳超 申請人:陜西北美基因股份有限公司