專利名稱：樹脂成型體的制造方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及作為蛋白質(zhì)和/或肽處理用特別合適的樹脂成型體的制造方法。

背景技術(shù)：
近年來，作為后基因組研究，蛋白質(zhì)組分析研究(蛋白質(zhì)組學(xué))開始受到關(guān)注。由于一般認(rèn)為作為基因產(chǎn)物的蛋白質(zhì)比基因更直接地與疾病的病理相聯(lián)系，因此人們期待系統(tǒng)地研究蛋白質(zhì)的蛋白質(zhì)組分析的研究成果能在診斷和治療中廣泛應(yīng)用。
蛋白質(zhì)組分析迅速發(fā)展起來，多是因?yàn)樵诩夹g(shù)上能夠通過質(zhì)譜儀(massspectrometerMS)能夠進(jìn)行高速結(jié)構(gòu)分析。由于MALDI-TOF-MS(基質(zhì)輔助激光解吸附電離飛行時間質(zhì)譜，matrix assisted laser desorptionionization time-of-flight mass spectrometry)等實(shí)用化，因而能夠進(jìn)行多肽的高通量超微量分析，可以鑒定過去檢測不到的微量蛋白質(zhì)，從而成為探索疾病相關(guān)因素的強(qiáng)有力工具。
被認(rèn)為是病理的生物標(biāo)記、病因相關(guān)因素的肽激素、白介素、細(xì)胞因子等生理活性蛋白質(zhì)大多僅以極微量(＜ng/mL)存在。其含量比與白蛋白等的高分子量的高含量成分相比，實(shí)際為納(10-9)～皮可(10-12)水平。在蛋白質(zhì)的大小方面，蛋白質(zhì)所有種類的70％以上的分子量為60kDa以下，上述極微量的生物標(biāo)記蛋白質(zhì)幾乎任一種均包括在上述范圍中。
但是，在處理蛋白質(zhì)時，蛋白質(zhì)向生物化學(xué)領(lǐng)域中尤其常用的各種分析器具的樹脂基材表面的非特異性吸附是常見的問題。因?yàn)檫@種向基體表面的非特異性吸附，不僅會引起因蛋白質(zhì)的減少而造成的分析結(jié)果的偏差，而且會引起作為分析對象蛋白質(zhì)損失這樣的重大問題，所以必須防止非特異性吸附。一般來說，由非特異性吸附造成的蛋白質(zhì)減少率依存于溶液中的蛋白質(zhì)的總濃度，蛋白質(zhì)的總濃度越低，蛋白質(zhì)的減少率越大。特別是如上所述在蛋白質(zhì)組分析中利用質(zhì)量分析來分析病因相關(guān)的微量成分的情況下，現(xiàn)有的前處理裝置還沒有進(jìn)行抑制非特異性吸附的處理。由此，排除妨礙檢測的成分而得到的分級液中的蛋白質(zhì)的總濃度極低，微量生物標(biāo)記蛋白質(zhì)的非特異性吸附所造成的減少、損失成為問題。
針對這樣的蛋白質(zhì)、肽附著所造成損失的問題，大體劃分有兩種對策。一種是在生物體成分溶液中添加抑制吸附的化合物的方法，另一種是對樹脂基材表面進(jìn)行生物體成分非吸附處理。作為前者的代表性方法，有添加封閉劑的方法。封閉劑使用白蛋白、酪蛋白的溶液，是通過競爭吸附來抑制有用生物體成分吸附的方法。為了競爭吸附，一般使封閉劑的濃度高于有用生物體成分的濃度。因此，在分析用途中，存在封閉劑妨礙分析，即使少量添加也使生物體成分結(jié)構(gòu)變化的危險性。除了封閉之外，還有添加表面活性劑、無機(jī)鹽類、有機(jī)溶劑的方法，它們也與封閉劑同樣，妨礙分析體系、伴隨生物體成分結(jié)構(gòu)變化的變性成為問題。
另一方面，作為基材表面的非吸附處理，一般是基材表面的親水化處理。親水化處理有幾種方法。例如，專利文獻(xiàn)1中記載了通過涂布處理向基材中導(dǎo)入親水性化合物、例如2-甲基丙烯酰氧乙基磷酰膽堿共聚物(以下簡記為MPC)的方法。另外，專利文獻(xiàn)2～6中記載了通過接枝處理導(dǎo)入親水性化合物的方法。還有如反應(yīng)離子刻蝕處理、等離子體處理、離化團(tuán)粒束處理那樣，直接在基材表面生成親水性官能團(tuán)的方法。
然而，在現(xiàn)有的基材表面處理中，進(jìn)行了該處理的基材在與高濃度的蛋白質(zhì)、肽的溶液接觸的情況下，可確認(rèn)抑制生物體成分吸附的效果，但在與含有低濃度的生物體成分的溶液接觸的情況下，依然發(fā)生由吸附造成的生物體成分減少、損失，課題解決尚不是可稱為充分的水平。
進(jìn)而，利用親水性高分子進(jìn)行涂層處理的方法，在將被處理的基體材料進(jìn)一步與使用了親水性的高分子溶液的溶劑接觸時，可能涂層剝離等而造成親水性下降。另外，在分析、分離等的處理裝置中，可能溶出的親水性高分子會成為以后的分析妨礙因素。
就利用親水性高分子接枝來進(jìn)行親水化而言，親水性與接枝量成比例地提高，但是存在如果處理的親水性高分子溶液的濃度變高，則親水性高分子彼此三維地交聯(lián)，因而親水性高分子的運(yùn)動性降低，從而抑制生物體成分附著的效果降低的問題。進(jìn)而，專利文獻(xiàn)6所記載的方法在低鹽濃度、更容易發(fā)生蛋白質(zhì)吸附的條件下不能發(fā)揮充分的效果。
另外，反應(yīng)離子刻蝕處理、等離子體處理和離化團(tuán)粒束處理能夠簡便地將基材的外表面、板狀基材的一面等親水化，但難以將作為等離子體、離化團(tuán)粒束的陰影的部分親水化。因此，不適于將形成了復(fù)雜形狀的成型體通過1次處理親水化。另外，基材的生物體成分的吸附特性依存于與生物體成分接觸的部分的表面狀態(tài)。一般來說，表面的親水性越高，以及被固定在表面的親水性分子的運(yùn)動性越高，就越能抑制生物體成分吸附在基材表面。一般認(rèn)為運(yùn)動性高的親水性分子是通過其分子運(yùn)動來排除蛋白質(zhì)、血小板等生物體成分的。通過反應(yīng)離子刻蝕處理、等離子體處理和離化團(tuán)粒束處理而進(jìn)行的親水化，是通過在基材表面生成羥基等親水性官能團(tuán)來進(jìn)行的，即與通過在基材表面導(dǎo)入親水性高分子的基體材料而進(jìn)行的親水化相比，親水性分子的運(yùn)動性較低。因此，抑制生物體成分附著的效果較低，故而不優(yōu)選。進(jìn)而，因?yàn)樘幚碇杏袝r形成高溫，所以有時基材變性，因此不優(yōu)選。
這樣，由于沒有確立蛋白質(zhì)或肽的吸附抑制處理的技術(shù)，因此吸附少的樹脂成型體尚未面世。
專利文獻(xiàn)1特表2002-542163號公報 專利文獻(xiàn)2特開2003-130882號公報 專利文獻(xiàn)3特開昭58-40323號公報 專利文獻(xiàn)4日本專利第3297707號公報 專利文獻(xiàn)5特開昭61-225653號公報 專利文獻(xiàn)6國際公開第06/025352號小冊子

發(fā)明內(nèi)容
如上所述，在臨床蛋白質(zhì)組分析等操作極微量的生物體物質(zhì)的領(lǐng)域中，存在由于蛋白質(zhì)或肽對成型體表面的非特異性吸附而損失蛋白質(zhì)、從而不能進(jìn)行穩(wěn)定的處理、分析等問題。為了進(jìn)行穩(wěn)定的處理、分析，必須抑制蛋白質(zhì)在基材表面的非特異性吸附，本發(fā)明的課題是提供針對尤其在本領(lǐng)域中經(jīng)常使用的聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯、聚碳酸酯、聚氯乙烯等樹脂成型體的吸附抑制技術(shù)。
為了解決上述課題，本發(fā)明采用以下的任一種方法。
(1)一種樹脂成型體的制造方法，具有使樹脂成型體與非離子性表面活性劑的水溶液接觸的工序、和對與所述水溶液接液后的樹脂成型體照射放射線的工序，所述水溶液中的所述表面活性劑的濃度范圍，為該表面活性劑在25℃下的臨界膠束濃度的0.05倍～500倍。
(2)如上述(1)所述的樹脂成型體的制造方法，所述水溶液是含有濃度為50毫摩爾/L～300毫摩爾/L的水溶性無機(jī)鹽類的水溶液。
(3)如上述(1)或(2)所述的樹脂成型體的制造方法，所述表面活性劑是式1所示的化合物， R1-(OR2)n-OR3(式1) 上式中，R1表示碳原子數(shù)1～30的直鏈或支鏈的烷基、烯基、炔基，或R4-A-，其中，R4表示碳原子數(shù)1～18的直鏈或支鏈的烷基、烯基或炔基，A表示亞苯基；R2表示碳原子數(shù)2或3的亞烷基；R3表示H、CH3或CH2CH3；n表示1～100的數(shù)。
(4)如上述(3)所述的樹脂成型體的制造方法，R2的碳原子數(shù)為2。
(5)如上述(3)或(4)所述的樹脂成型體的制造方法，n的數(shù)為5～80。
(6)如上述(3)～(5)的任一項(xiàng)所述的樹脂成型體的制造方法，R1的碳原子數(shù)為5～25。
(7)如上述(3)～(6)的任一項(xiàng)所述的樹脂成型體的制造方法，R1是R4-A-，R4的碳原子數(shù)為7～10。
(8)如上述(1)～(7)的任一項(xiàng)所述的樹脂成型體的制造方法，所述表面活性劑的HLB為10以上。
根據(jù)本發(fā)明，能夠獲得表面不易吸附生物體成分、尤其是蛋白質(zhì)和肽的樹脂成型體。而且，通過該樹脂成型體，能夠減少作為分析目標(biāo)的蛋白質(zhì)等損失。

具體實(shí)施例方式 根據(jù)本發(fā)明制造的樹脂成型體，適合在蛋白質(zhì)和/或肽的處理中使用。這里所謂處理，意味著尤其在生物化學(xué)、生物學(xué)、分析化學(xué)、農(nóng)林水產(chǎn)業(yè)、食品、醫(yī)學(xué)、藥學(xué)等領(lǐng)域進(jìn)行的，處理蛋白質(zhì)和/或肽的操作，并不僅限于含有蛋白質(zhì)和/或肽、或同時含有它們的溶液的保管、保存、采取、分裝，還包括反應(yīng)、分析、分離、純化、濃縮、干燥等操作。因此，對成型體的形狀不特別限制，可以根據(jù)目標(biāo)、用途而制成線、中空纖維、纖維、針織物、膜、平板膜、中空纖維膜、粒子、管、棒、容器等。
對樹脂的種類不特別限制，可以從聚乙烯、聚丙烯、聚氯乙烯、聚偏1，1-二氯乙烯、聚苯乙烯、聚乙酸乙烯酯、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸甲酯、聚丙烯腈、聚異戊二烯、聚丁二烯等乙烯基系聚合物或丙烯酸系聚合物，尼龍等聚酰胺系聚合物，聚酰亞胺系聚合物，聚氨酯系聚合物，聚對苯二甲酸乙二酯、聚對苯二甲酸丁二酯、聚乳酸、聚乙二醇酸等聚酯系聚合物，聚四氟乙烯、聚偏1，1-二氟乙烯、全氟聚合物等氟系聚合物，聚碳酸酯、聚苯醚、聚苯硫醚、聚砜、聚醚砜、聚醚醚酮、硅樹脂、天然橡膠、纖維素、乙酸纖維素等中適當(dāng)選擇。另外，還可以是由上述聚合物形成共聚物、混合有上述聚合物的樹脂。
在本發(fā)明中，對樹脂的重均分子量、數(shù)均分子量、分子量的多分散性、結(jié)晶性不特別限制，只要能夠成型就可以。成型體既可以是僅由樹脂構(gòu)成的成型體，也可以是樹脂定位于表面的成型體。
如上所述的樹脂成型體，例如可在蛋白質(zhì)處理中使用，蛋白質(zhì)在水中溶解時，親水性結(jié)構(gòu)域(domain)存在蛋白質(zhì)分子的表面，疏水性結(jié)構(gòu)域存在蛋白質(zhì)分子的內(nèi)部。而且，一般認(rèn)為蛋白質(zhì)一與疏水性基材接觸，內(nèi)部的疏水性結(jié)構(gòu)域就露出表面，從而通過疏水性相互作用而吸附在基材上。因此，為了抑制蛋白質(zhì)吸附，將基材表面親水化是有效的。
因此，在本發(fā)明中，使如上所述的樹脂成型體與非離子性表面活性劑的水溶液進(jìn)行接液，從而使該表面活性劑物理化學(xué)地吸附在該樹脂成型體表面。此外，本發(fā)明中所謂接液，是指使該表面活性劑的水溶液與樹脂成型體的表面接觸。對接液的方法不特別限制，包括將樹脂成型體浸漬在該水溶液中的方法、將該水溶液在成型體上進(jìn)行噴霧的方法等，從能夠均勻地處理等方面出發(fā)，優(yōu)選將樹脂成型體浸漬在該水溶液中的方法。
在本發(fā)明中，非離子性表面活性劑必須在1～100℃的溫度范圍內(nèi)是水溶性的。表面活性劑只要不在水溶液中生成沉淀即可，也可以作為膠束、核糖體等納米球或微球而溶解。
作為非離子性表面活性劑，可以例示式1所示的有機(jī)化合物。
R1-(OR2)n-OR3(式1) 上式中，R1表示碳原子數(shù)1～30的直鏈或支鏈的烷基、烯基、炔基，或R4-A-，其中，R4表示碳原子數(shù)1～18的直鏈或支鏈的烷基、烯基或炔基，A表示亞苯基；R2表示碳原子數(shù)2或3的亞烷基；R3表示H、CH3或CH2CH3；n表示1～100的數(shù)。
這些非離子性表面活性劑，通過制成水溶液與樹脂成型體接觸，從而介由疏水性的R1鏈段而吸附在該樹脂成型體的表面，另一方面利用親水性的聚氧化烯鏈段(OR2)n將該表面親水化。另外，因?yàn)榫垩趸╂湺?OR2)n在蛋白質(zhì)溶液中是伸展的，所以除了發(fā)揮親水化的效果之外，還通過親水性高分子鏈的微觀布朗運(yùn)動而發(fā)揮排除體積效果。因此，本發(fā)明所得的樹脂成型體能夠發(fā)揮抑制蛋白質(zhì)吸附的效果。
蛋白質(zhì)、肽等的非吸附性，依存于在放射線照射之前物理化學(xué)地吸附、通過照射放射線而被化學(xué)地固定的非離子性表面活性劑的量。因此，在接液的工序中，適當(dāng)控制該非離子性表面活性劑的吸附量是重要的。
HLB(親水親油平衡)是決定表面活性劑的吸附量的因素之一。這里所謂HLB，可以用格里芬(Griffin)法如下所述那樣從化學(xué)結(jié)構(gòu)理論地計算出。此外，下述式中所謂水溶性化合物的親水性部分，是指式(1)的情況下的(OR2)n-OR3的鏈段。
HLB理論值＝20×(Wp/Ws) Wp水溶性化合物的親水性部分的分子量 Ws水溶性化合物的分子量 HLB理論值如果過低，則親水性不足而對水的溶解性降低，如果過高，則親油性不足而對樹脂成型體表面的吸附性降低。因此，HLB優(yōu)選為10～20的范圍，尤其最優(yōu)選為12～19的范圍。
另外，式1所示的非離子性表面活性劑，通過親水性的聚氧化烯鏈段與疏水性的R1鏈段的平衡，來確定對水的溶解性和在水中的溶解狀態(tài)。R1的化學(xué)結(jié)構(gòu)只要是碳原子數(shù)為1～30的直鏈或支鏈的烷基、烯基、炔基或R4-A-(其中，R4是碳原子數(shù)1～18直鏈或支鏈的烷基、烯基或炔基，A是亞苯基)即可，不特別限制，但如果碳原子數(shù)少，則與樹脂表面的相互作用減弱，如果碳原子數(shù)多，則在室溫下水溶性降低。因此，R1的碳原子數(shù)優(yōu)選為5～25。另外，在R1是R4-A-的情況下，除了上述原因之外，從易于獲得的方面出發(fā)，優(yōu)選R4的碳原子數(shù)為7～10。
因?yàn)榫垩趸╂湺蔚木酆隙热绻^短，則在室溫下的水溶性降低，如果過長，則與樹脂表面的相互作用減弱，所以n優(yōu)選為1～100。其中作為上限優(yōu)選為80以下，更優(yōu)選為50以下。另一方面，下限更優(yōu)選為5以上。
聚氧化烯鏈段的亞烷基鏈R2的碳原子數(shù)為2或3，聚氧化烯是聚氧乙烯或聚氧丙烯。特別是從與水的親合性高等方面出發(fā)，優(yōu)選聚氧乙烯。
作為聚氧化烯鏈的末端的R3是H基、CH3基或CH2CH3基，最優(yōu)選親水性最高的H基。
在上述式1中的R1是R4-A-的情況下，R4與聚氧化烯鏈段可以在亞苯基A的任何位置結(jié)合，從穩(wěn)定性高，容易合成等方面出發(fā)，最優(yōu)選是1，4位的對位取代物。對亞苯基A上未結(jié)合R1和聚氧化烯鏈段的位置，只要不改變水溶性，就可以被其它取代基取代。
作為式1所示的非離子性表面活性劑的具體例子，可列舉Triton X-45，Triton X-100，Triton X-114，Triton X-165，Triton X-200，Triton X-305，Triton X-405，Triton X-705，Triton N-60，Triton N-101，Triton N-111，Triton N-150，聚氧乙烯(8)辛基苯基醚，聚氧乙烯(9)辛基苯基醚，聚氧乙烯(10)辛基苯基醚，聚氧乙烯(5)壬基苯基醚，聚氧乙烯(10)壬基苯基醚，聚氧乙烯(15)壬基苯基醚，聚氧乙烯(20)壬基苯基醚。此外，它們是式1中的R1為R4-A-、R4的碳原子數(shù)為8或9、聚氧化烯鏈段(OR2)n中的重復(fù)數(shù)n為10～70、聚氧化烯鏈段中的亞烷基鏈R2的碳原子數(shù)為2、R3為H的化合物。另外，R4與聚氧化烯鏈段相對于亞苯基結(jié)合在1，4位的對位上。
另外，作為其它非離子性表面活性劑的具體例子，可列舉Brij30、Brij35、Brij56、Brij58、Brij78、Brij97、Brij98、聚氧乙烯(6)癸基醚，聚氧乙烯(9)癸基醚，聚氧乙烯(12)癸基醚，聚氧乙烯(20)十六烷基醚，聚氧乙烯(10)十二烷基醚，聚氧乙烯(23)十二烷基醚，聚氧乙烯(7)油基醚，聚氧乙烯(10)油基醚，聚氧乙烯(20)油基醚，聚氧乙烯(50)油基醚，聚氧乙烯(4)十八烷基醚，聚氧乙烯(20)十八烷基醚。此外，它們是式1中R1的碳原子數(shù)為10～18，聚氧化烯鏈段(OR2)n中的重復(fù)數(shù)n為6～23，聚氧化烯鏈段中的亞烷基鏈R2的碳原子數(shù)為2，R3為H的化合物。
這樣的非離子性表面活性劑吸附在樹脂表面時，如果水溶液中的濃度過低，則專門發(fā)揮吸附抑制效果的絕對量不足，如果過高，則過量的表面活性劑積累在表面，不僅容易降低自由基與表面結(jié)合的反應(yīng)效率，聚氧化烯鏈段的排除體積效果也難以有效地發(fā)揮作用。因此，水溶液中的濃度優(yōu)選為該非離子性表面活性劑的臨界膠束濃度的0.05倍～500倍的范圍，尤其最優(yōu)選為0.1倍～200倍范圍。
對這里所謂臨界膠束濃度，可以例如以下那樣地進(jìn)行評價。
[測定條件] 測定裝置CBVP-A3，協(xié)和界面科學(xué)株式會社制(或者，只要是在相同條件下得到相同結(jié)果的裝置即可) 試驗(yàn)室溫度25℃ 試驗(yàn)室濕度60％ 板鉑板 在該條件下測定表面張力，將所得的表面張力相對于水溶性非離子性表面活性劑的濃度(對數(shù)濃度)繪圖，在該圖中，求出表面張力為一定的最低濃度(臨界膠束濃度)。
另外，由于相同原因，該水溶性非離子性表面活性劑的濃度優(yōu)選為0.001重量％～1重量％，尤其最優(yōu)選為0.01重量％～1重量％。
進(jìn)而，在本發(fā)明的制造方法中，由于使用放射線而使水溶性非離子性表面活性劑與樹脂成型體表面結(jié)合，因而優(yōu)選該表面活性劑的水溶液中共存有水溶性無機(jī)鹽類。水溶性無機(jī)鹽類具有增強(qiáng)上述表面活性劑與樹脂成型體表面的疏水性相互作用的效果。對水溶性無機(jī)鹽類不特別限制，優(yōu)選使用鋰、鈉、鉀、鈣、鎂、銨、鐵、鋅的鹽酸鹽、硫酸鹽、碳酸鹽、磷酸鹽等。對水溶性無機(jī)鹽類的濃度不特別限制，但如果過低，則增強(qiáng)該表面活性劑與樹脂成型體表面的疏水性相互作用的效果降低，如果過高，則使得該表面活性劑的溶解性降低。因此，相對于水溶液，水溶性無機(jī)鹽類的濃度優(yōu)選為50毫摩爾/L～300毫摩爾/L，最優(yōu)選為100毫摩爾/L～300毫摩爾/L。
接下來，在本發(fā)明中，使如上所述吸附在樹脂成型體表面的非離子性表面活性劑與該樹脂成型體表面化學(xué)地結(jié)合。使用放射線來進(jìn)行結(jié)合。即，通過對與上述的水溶液接液之后的樹脂成型體表面照射放射線，從而使樹脂成型體與上述表面活性劑結(jié)合。通過放射線的能量，在水中生成活性的羥自由基，該自由基拔出樹脂或該水溶性非離子性表面活性劑的氫而產(chǎn)生新的自由基，使自由基反應(yīng)連續(xù)地進(jìn)行，從而在樹脂成型體表面發(fā)生結(jié)合。
作為放射線，可以使用α射線、β射線、γ射線、X射線、紫外線、電子束等。特別是近年來從簡便性的觀點(diǎn)出發(fā)，γ射線等電磁波射線、電子束多在滅菌等中被采用，因而優(yōu)選使用。從與表面結(jié)合的效率和防止樹脂基材劣化的方面考慮，優(yōu)選在放射線量為0.01千戈瑞(kGy)～100千戈瑞的范圍進(jìn)行，最優(yōu)選在0.1千戈瑞～50千戈瑞的范圍、特別是0.5～40千戈瑞的范圍內(nèi)進(jìn)行。
通過這些工序，非離子性表面活性劑通過共價鍵而與樹脂成型體表面化學(xué)地結(jié)合。因此，可獲得具有表面活性劑不溶出、吸附抑制效果持續(xù)等特征的表面。
與樹脂成型體的表面結(jié)合的上述表面活性劑可通過化學(xué)結(jié)構(gòu)分析來檢測。這是利用相對于成型體表面僅由樹脂構(gòu)成，該表面活性劑具有聚氧亞烷基的方法。例如，通過TOF-SIMS(飛行時間二次離子質(zhì)譜)，可以檢測聚氧亞烷基特有的離子片段(ion fragment)。另外，在該表面活性劑有亞苯基基的情況下，ATR-IR譜的1100～1300cm-1的來自碳-氧鍵的信號是在聚丙烯、聚苯乙烯等樹脂中不會出現(xiàn)的特有信號。
實(shí)施例 以下通過實(shí)驗(yàn)例詳細(xì)說明本發(fā)明，但是本發(fā)明的范圍并不受這些實(shí)驗(yàn)例限制。
<使用β2-微球蛋白評價吸附性能的方法> 關(guān)于蛋白質(zhì)對基材表面的吸附評價，對于在人β2-微球蛋白(SIGMA銷售，Cat.No.M4890)(以下，簡記為β2-MG)溶液中進(jìn)行吸附試驗(yàn)的情況進(jìn)行說明。
使用調(diào)整成β2-MG為500ng/ml，人血清白蛋白(SIGMA銷售，Cat.No.A1653)(以下，簡記為HSA)為500ng/ml的25毫摩爾/L的碳酸氫銨水溶液(pH 8.2)作為蛋白質(zhì)溶液(以下，稱為蛋白質(zhì)溶液A)。因?yàn)榈鞍踪|(zhì)溶液A中的蛋白質(zhì)也會吸附在調(diào)制時使用的容器上，所以在調(diào)制蛋白質(zhì)溶液時使用的容器，使用預(yù)先用牛血清白蛋白(ナカライテスク銷售，Cat.No.01863-35)(以下，簡記為BSA)封閉后的容器。通過將離心管(Greiner Bio-One GmbH制，CELLSTAR TUBES，15mL)在1％的BSA的磷酸緩沖生理鹽水(以下，簡記為PBS)溶液中放置30分鐘，然后將該離心管用PBS洗滌3次，再用蒸餾水洗滌3次，從而進(jìn)行容器的封閉操作。將用這樣封閉后的離心管調(diào)制的蛋白質(zhì)溶液A如以下那樣地在吸附實(shí)驗(yàn)中使用。
在作為樹脂成型體的試管中加入100μl蛋白質(zhì)溶液A，在26℃放置1小時。1小時之后采集試管內(nèi)的蛋白質(zhì)溶液，用1％的BSA的PBS溶液稀釋至10倍，使用該稀釋后的溶液測定β2-MG濃度(c)。對于分裝入樹脂試管之前的蛋白質(zhì)溶液A，也測定β2-MG濃度(b)。
利用β2-MG測定試劑盒(Kit)(和光純藥工業(yè)銷售グラザイムβ2-microgloblin EIA TEST，Code.305-11011)，按照試劑盒附帶的手冊來測定β2-MG濃度(b)。對附帶手冊的一部分進(jìn)行改良，最初反應(yīng)時使用以1％的BSA的PBS溶液預(yù)先封閉了30分鐘的反應(yīng)容器。蛋白質(zhì)的吸附率(a)由下式計算出，將吸附率為50％以下的情況作為非吸附表面。
(a)＝((b)-(c))/(b)×100 (a)塑料試管的蛋白質(zhì)吸附率(％) (b)蛋白質(zhì)溶液A中的β2-MG濃度(ng/mL) (c)在試管中評價1小時之后樣品溶液中的β2-MG量(ng/mL) <臨界膠束濃度的測定方法> [測定條件] 測定裝置CBVP-A3(協(xié)和界面科學(xué)株式會社制) 試驗(yàn)室溫度25℃ 試驗(yàn)室濕度60％ 板鉑板 在容器中加入非離子性表面活性劑的水溶液，按照CBVP-A3的附帶手冊測定表面張力。對于各種濃度的非離子性表面活性劑，同樣地測定表面張力，將各表面張力值相對于非離子性表面活性劑的濃度(對數(shù)濃度)繪圖，通過求出表面張力為一定的最低濃度，從而求得非離子表面活性劑的臨界膠束濃度。
實(shí)驗(yàn)例1 在濃度為0.001、0.01、0.1和1％的TritonX-100(和光純藥銷售，Cat No.168-11805)水溶液100ml中，各浸漬5支樹脂制試管(BECTONDICKINSON制“5ml Polypropylene Round-Bottom Tube(5ml聚丙烯圓底管)”)，照射γ射線。γ射線的吸收劑量為25千戈瑞。將試管從水溶液中取出，用500ml流水洗滌3次，然后在室溫下風(fēng)干。將這些試管中各個濃度的各3支進(jìn)行人β2-MG吸附試驗(yàn)，求得吸附率的平均值。將條件示于表1，將結(jié)果示于2。
實(shí)驗(yàn)例2 在濃度為0.0001、0.001、0.001、0.01和0.1％的聚氧乙烯(10)壬基苯基醚(和光純藥銷售，Cat No.320-33722)水溶液100ml中，各浸漬5支樹脂制試管(BECTON DICKINSON制“5ml Polypropylene Round-BottomTube”)，與實(shí)驗(yàn)例1同樣地進(jìn)行處理，并進(jìn)行人β2-MG吸附試驗(yàn)。將條件示于表1，將結(jié)果示于表2。
實(shí)驗(yàn)例3 在濃度為0.001、0.01、0.1和1％的TritonX-100(和光純藥銷售，Cat No.168-11805)水溶液100ml中，各浸漬5支樹脂制試管(BECTONDICKINSON制“5ml Polystyrene Round-Bottom Tube(5ml聚苯乙烯圓底管)”)，與實(shí)驗(yàn)例1同樣地進(jìn)行處理，并進(jìn)行人β2-MG吸附試驗(yàn)。將條件示于表1，將結(jié)果示于表2。
實(shí)驗(yàn)例4 在濃度為0.001、0.01、0.1、1、2和5％的TritonX-705(SIGMA銷售，Cat No.X70570-100ML)水溶液100ml中，各浸漬5支樹脂制試管(BECTON DICKINSON制“5ml Polystyrene Round-Bottom Tube“)，與實(shí)驗(yàn)例1同樣地進(jìn)行處理，并進(jìn)行人β2-MG吸附試驗(yàn)。將條件示于表1，將結(jié)果示于表2。
實(shí)驗(yàn)例5 在濃度為0.0001、0.001、0.01、0.1和1％的TritonX-405(SIGMA銷售，Cat No.X405-100ML)水溶液100ml中，各浸漬5支樹脂制試管(BECTON DICKINSON制“5ml Polystyrene Round-Bottom Tube”)，與實(shí)驗(yàn)例1同樣地進(jìn)行處理，并進(jìn)行人β2-MG吸附試驗(yàn)。將條件示于表1，將結(jié)果示于表2。
實(shí)驗(yàn)例6 在濃度為0.01、0.1、1、2和5％的TritonX-45(SIGMA銷售，Cat No.X45-100ML)水溶液100ml中，各浸漬5支樹脂制試管(BECTONDICKINSON制“5ml Polystyrene Round-Bottom Tube”)，與實(shí)驗(yàn)例1同樣地進(jìn)行處理，并進(jìn)行人β2-MG吸附試驗(yàn)。將條件示于表1，將結(jié)果示于表2。
實(shí)驗(yàn)例7 在濃度為0.0001、0.001、0.01、0.1和1％的Brij58(SIGMA銷售，Cat No.P5884-100G)水溶液100ml中，各浸漬5支樹脂制試管(BECTONDICKINSON制“5ml Polystyrene Round-Bottom Tube”)，與實(shí)驗(yàn)例1同樣地進(jìn)行處理，并進(jìn)行人β2-MG吸附試驗(yàn)。將條件示于表1，將結(jié)果示于表2。
實(shí)驗(yàn)例8 在濃度為0.0001、0.001、0.01和0.1％的Brij58(SIGMA銷售，Cat No.P5884-100G)水溶液100ml中，各浸漬5支樹脂制試管(BECTONDICKINSON制“5ml Polypropylene Round-Bottom Tube”)，與實(shí)驗(yàn)例1同樣地進(jìn)行處理，并進(jìn)行人β2-MG吸附試驗(yàn)。將條件示于表1，將結(jié)果示于表2。
實(shí)驗(yàn)例9 在含有100、200和300毫摩爾/L的氯化鈉的0.1％TritonX-100(和光純藥銷售，Cat No.168-11805)水溶液100ml中，各浸漬5支樹脂制試管(BECTON DICKINSON制“5ml Polystyrene Round-Bottom Tube”)，與實(shí)驗(yàn)例1同樣地進(jìn)行處理，并進(jìn)行人β2-MG吸附試驗(yàn)。將條件示于表1，將結(jié)果示于表2。
實(shí)驗(yàn)例10 在含有100、200和300毫摩爾/L的氯化鈉的0.1％TritonX-305(SIGMA銷售，Cat No.X305-500ML)水溶液100ml中，各浸漬5支樹脂制試管(BECTON DICKINSON制“5ml Polystyrene Round-Bottom Tube”)，與實(shí)驗(yàn)例1同樣地進(jìn)行處理，并進(jìn)行人β2-MG吸附試驗(yàn)。將條件示于表1，將結(jié)果示于表2。
實(shí)驗(yàn)例11 因?yàn)橐{(diào)制TritonX-15(SIGMA銷售，Cat No.X15-500ML)的水溶液但未溶解，所以不能與實(shí)驗(yàn)例1同樣地對樹脂試管進(jìn)行γ射線處理。
實(shí)驗(yàn)例12 將5支樹脂制試管(BECTON DICKINSON制“5ml PolypropyleneRound-Bottom Tube”)浸漬在0.01％TritonX-100水溶液100ml中。在不照射γ射線的情況下，將試管與實(shí)驗(yàn)例1的照射γ射線之后的后處理同樣地進(jìn)行處理。將這些試管中的3支進(jìn)行人β2-MG吸附試驗(yàn)，求得吸附率的平均值。將條件示于表1，將結(jié)果示于表2。
實(shí)驗(yàn)例13 將5支樹脂制試管(BECTON DICKINSON制“5ml PolystyreneRound-Bottom Tube”)浸漬在0.01％TritonX-100水溶液100ml中，在不照射γ射線的情況下，將試管與實(shí)驗(yàn)例1的照射γ射線之后的后處理同樣地進(jìn)行處理。將這些試管中的3支進(jìn)行人β2-MG吸附試驗(yàn)，求得吸附率的平均值。將條件示于表1，將結(jié)果示于表2。
實(shí)驗(yàn)例14 按照專利文獻(xiàn)6所述的方法，將5支樹脂制試管(BECTONDICKINSON制“5ml Polypropylene Round-Bottom Tube”)浸漬在不存在臨界膠束濃度的聚乙烯醇(ポバ一ル205、クラレ制)的0.1％水溶液100ml中，照射γ射線。γ射線的吸收劑量為25千戈瑞。將試管從聚乙烯醇水溶液中取出，用500ml流水洗滌，在70℃的烘箱中干燥1小時。將這些試管中的3支進(jìn)行人β2-MG吸附試驗(yàn)，求得吸附率的平均值。將條件示于表1，將結(jié)果示于表2。
實(shí)驗(yàn)例15 按照專利文獻(xiàn)6所述的方法，將5支樹脂制試管(BECTONDICKINSON制“5ml Polystyrene Round-Bottom Tube”)浸漬在不存在臨界膠束濃度的聚乙烯醇(ポバ一ル205、クラレ制)的0.1％水溶液100ml中，照射γ射線。γ射線的吸收劑量為25千戈瑞。將試管從聚乙烯醇水溶液中取出，用500ml流水洗滌，在70℃的烘箱中干燥1小時。將這些試管中的3支進(jìn)行人β2-MG吸附試驗(yàn)，求得吸附率的平均值。將條件示于表1，將結(jié)果示于表2。
實(shí)驗(yàn)例16 將5支樹脂制試管(BECTON DICKINSON制“5ml PolypropyleneRound-Bottom Tube”)用500ml流水洗滌，在室溫下風(fēng)干。將這些試管中的3支進(jìn)行人β2-MG吸附試驗(yàn)，求得吸附率的平均值。將條件示于表1，將結(jié)果示于表2。
實(shí)驗(yàn)例17 將5支樹脂制試管(BECTON DICKINSON制“5ml PolystyreneRound-Bottom Tube”)用500ml流水洗滌，在室溫下風(fēng)干。將這些試管中的3支進(jìn)行人β2-MG吸附試驗(yàn)，求得吸附率的平均值。將條件示于表1，將結(jié)果示于表2。
[表1]
[表2]
如從表1、2可明確那樣，對人β2-MG吸附試驗(yàn)的結(jié)果，本發(fā)明的情況與比較例相比，人β2-MG吸附量少，對抑制微量生物體成分吸附、高效率地回收是有效的。
工業(yè)可利用性 本發(fā)明的制造方法，在處理、分析微量蛋白質(zhì)和/或肽等時防止吸附損失的意義上是非常有用的，特別是如果在蛋白質(zhì)組分析等中使用，則對醫(yī)學(xué)、特別是發(fā)現(xiàn)人類疾病有幫助。
權(quán)利要求
1.一種樹脂成型體的制造方法，具有使樹脂成型體與非離子性表面活性劑的水溶液接觸的工序、和對與所述水溶液接液后的樹脂成型體照射放射線的工序，所述水溶液中的所述表面活性劑的濃度范圍，為該表面活性劑在25℃下的臨界膠束濃度的0.05倍～500倍。
2.如權(quán)利要求1所述的樹脂成型體的制造方法，所述水溶液是含有濃度為50毫摩爾/L～300毫摩爾/L的水溶性無機(jī)鹽類的水溶液。
3.如權(quán)利要求1或2所述的樹脂成型體的制造方法，所述表面活性劑是式1所示的化合物，
R1-(OR2)n-OR3(式1)
上式中，R1表示碳原子數(shù)1～30的直鏈或支鏈的烷基、烯基、炔基，或R4-A-，其中，R4表示碳原子數(shù)1～18的直鏈或支鏈的烷基、烯基或炔基，A表示亞苯基；R2表示碳原子數(shù)2或3的亞烷基；R3表示H、CH3或CH2CH3；n表示1～100的數(shù)。
4.如權(quán)利要求3所述的樹脂成型體的制造方法，R2的碳原子數(shù)為2。
5.如權(quán)利要求3或4所述的樹脂成型體的制造方法，n的數(shù)為5～80。
6.如權(quán)利要求3～5的任一項(xiàng)所述的樹脂成型體的制造方法，R1的碳原子數(shù)為5～25。
7.如權(quán)利要求3～6的任一項(xiàng)所述的樹脂成型體的制造方法，R1是R4-A-，R4的碳原子數(shù)為7～10。
8.如權(quán)利要求1～7的任一項(xiàng)所述的樹脂成型體的制造方法，所述表面活性劑的HLB為10以上。
全文摘要
為了防止蛋白質(zhì)、肽等吸附在樹脂成型體上，使樹脂成型體與非離子性表面活性劑的水溶液接觸，然后，在對該樹脂成型體照射放射線的同時，使所述水溶液中的所述表面活性劑的濃度范圍，為該表面活性劑在25℃的臨界膠束濃度的0.05倍～500倍。
文檔編號C08J7/00GK101583655SQ20088000237
公開日2009年11月18日 申請日期2008年2月19日 優(yōu)先權(quán)日2007年2月20日
發(fā)明者棚橋一裕, 伊藤明彥, 菅谷博之 申請人:東麗株式會社