專利名稱：一種通過可控接枝聚合制備糖基化有序多孔膜的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及有序多孔膜的制備方法，具體涉及一種通過可控接枝聚合 制備糖基化有序多孔膜的方法。
背景技術(shù)：
近年來，微米、亞微米及納米級(jí)有序多孔材料因其在催化劑負(fù)載、氣 體傳感器件、光電器件、細(xì)胞培養(yǎng)基材、分離或吸附介質(zhì)等諸多領(lǐng)域的應(yīng) 用前景而受到廣泛關(guān)注。目前已經(jīng)開發(fā)了 一系列制備有序多孔材料的方 法，如石板印刷法、刻蝕法、模板法、自組裝法以及水輔助法等，其中水 輔助法制備有序多孔膜具有工藝簡(jiǎn)單、實(shí)驗(yàn)條件溫和以及膜結(jié)構(gòu)規(guī)整可控 等優(yōu)點(diǎn)。
公開號(hào)為JP2002347107A的日本專利公開了 一種通過水輔助法制備 兩親性聚合物有序多孔膜的方法，該有序多孔膜可用作顯示器件；公開號(hào) 為CN1869109A的中國(guó)專利申請(qǐng)中公開了一種在剝離襯底上澆鑄聚合物 溶液，制備蜂窩狀有序多孔復(fù)合薄膜的方法，極大地提高了多孔膜的機(jī)械 性能。但是上述兩種有序多孔膜均不具有生物識(shí)別功能，限制了其在生物 醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用。
廣泛存在于自然界中的糖與生物分子(如蛋白質(zhì))的識(shí)別作用和生命 活動(dòng)息息相關(guān)，許多至關(guān)重要的生理過程如受精、免疫應(yīng)答、細(xì)胞生長(zhǎng)增 殖和分化等等都通過糖與蛋白質(zhì)的特異性識(shí)別作用來完成。糖基化有序多 孔膜兼具糖類的優(yōu)異生物相容性和特異性識(shí)別功能以及有序化表面，可廣 泛應(yīng)用于生物傳感器、細(xì)胞培養(yǎng)、蛋白質(zhì)選擇性吸附分離等領(lǐng)域。目前，糖基化有序多孔膜的制備方法局限于通過含糖聚合物高濕度下直接澆鑄
成月^ (參見J Nishida， et al. Preparation of self-organized micro-patterned polymer films having cell adhesive ligands， Polymer Journal, 2002， 34， 166-174)，這種方法制備的有序多孔膜的表面糖基分布和密度不可控。眾 所周知，糖與生物分子的識(shí)別作用極大地依賴于糖基的分布與密度，因此 現(xiàn)有方法不利于糖生物功能的實(shí)現(xiàn)，存在明顯不足。
公開號(hào)為CN101284914A的中國(guó)專利申請(qǐng)中公開了 一種糖基化有序 多孔膜的制備方法，是將含糖嵌段共聚物溶于溶劑中得到聚合物溶液，再 于相對(duì)濕度為50-90%,溫度為5 5(TC下澆鑄成膜，得到糖基化有序多 孔膜，可用于蛋白質(zhì)的檢測(cè)。該糖基化有序多孔膜雖然具有在特定區(qū)域內(nèi) 糖基高度富集的有序表面，能充分發(fā)揮糖基識(shí)別蛋白質(zhì)的集簇效應(yīng)，顯著 提高蛋白質(zhì)的檢測(cè)靈敏度，但不能根據(jù)需要控制有序多孔膜的表面糖基密 度。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了 一種通過可控接枝聚合制備糖基化有序多孔膜的方法， 所制備的有序多孔膜具有糖基分布及密度可控的特點(diǎn)，在蛋白質(zhì)檢測(cè)和細(xì) 胞培養(yǎng)等方面具有很好的應(yīng)用前景。
一種通過可控接枝聚合制備糖基化有序多孔膜的方法，包括以下步
驟
(1) 將含羥基的苯乙烯嵌段共聚物溶于二硫化碳中，得到重量百分 比為0.5 ~ 15%的聚合物溶液；
(2) 將步驟(1)得到的聚合物溶液在相對(duì)濕度為50~90%、溫度為 5 5(TC的環(huán)境中澆鑄成膜，得到孔徑為0.2~20微米的有序多孔膜；
(3) 將步驟(2)得到的有序多孔膜、正庚烷和三乙胺混合，0。C下 滴入溴異丁酰溴，反應(yīng)5~24小時(shí)，將有序多孔膜取出經(jīng)洗滌、干燥至恒
5重，得到表面固定化溴基團(tuán)的有序多孔膜；
其中，以面積為4cn^的有序多孔膜計(jì)，正庚烷的用量為5~50mL， 三乙胺的用量為0.5~5mL，溴異丁酰溴的用量為0.3~3mL;
(4)將步驟(3)得到的表面固定化溴基團(tuán)的有序多孔膜、曱醇、糖 烯單體、溴化亞銅、溴化銅和五甲基二乙基三胺在氮?dú)夥諊忻芊猓?5 ~ 5(TC水浴中進(jìn)行表面引發(fā)原子轉(zhuǎn)移自由基聚合反應(yīng)1-24小時(shí)，將膜取出 經(jīng)洗滌、千燥至恒重，得到糖基化有序多孔膜，糖基接枝率為5~50克/ 平方米膜；
其中，以面積為4cn^的有序多孔膜計(jì)，甲醇的用量為5~20mL，糖 烯單體的用量為0.1 ~2g,溴化亞銅的用量為5~25mg，溴化銅的用量為 0~5mg,五甲基二乙基三胺的用量為7 40^L。
所述含羥基的苯乙烯嵌段共聚物優(yōu)選苯乙烯/甲基丙烯酸羥乙酯嵌段 共聚物，其中曱基丙烯酸羥乙酯的摩爾百分含量為0.5 ~ 30%,嵌段共聚 物分子量為1 ~20萬。
以苯乙烯/甲基丙烯酸羥乙酯嵌段共聚物為基材，采用水輔助法成膜， 在水滴誘導(dǎo)作用下，親水嵌段曱基丙烯酸羥乙酯向孔周圍遷移，得到孔內(nèi) 羥基高密度富集的有序多孔 膜。
所述糖烯單體為帶有雙鍵的含糖單體，能夠通過表面引發(fā)原子轉(zhuǎn)移自 由基聚合實(shí)現(xiàn)在多孔膜表面的可控接枝；由于甲基丙烯酸類單體具有聚合 活性高、反應(yīng)速率快的優(yōu)點(diǎn)，故優(yōu)選曱基丙烯酸葡萄糖氧基乙酯、曱基丙 烯酸甘露糖氧基乙酯或曱基丙烯酸半乳糖氧基乙酯，其中不同種類的糖側(cè) 基可以實(shí)現(xiàn)對(duì)特定蛋白質(zhì)的選擇性識(shí)別作用。
由于接枝聚合的引發(fā)位點(diǎn)富集在膜孔內(nèi)部，所制備的含糖聚合物主要 分布在孔內(nèi)；多孔膜表面的糖基密度可以通過調(diào)節(jié)聚合時(shí)間、糖烯單體用 量及溴化銅用量進(jìn)行控制，聚合時(shí)間越長(zhǎng)，糖烯單體用量越多，溴化銅用 量越少，多孔膜表面的糖基密度越高。所述的糖基化有序多孔膜可用于蛋白質(zhì)分離檢測(cè)和細(xì)胞培養(yǎng)。
本發(fā)明中糖基接枝率采用如下稱重法計(jì)算
糖基接枝率用Y表示
<formula>formula see original document page 7</formula>
Y的單位為克/平方米，其中，Wo為表面固定化溴基團(tuán)的有序多孔 膜的重量，W,為得到的糖基化有序多孔膜的重量，S為表面固定化溴基團(tuán) 的有序多孔膜的面積。
本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)
與現(xiàn)有制備糖基化有序多孔膜的方法相比，本發(fā)明通過表面引發(fā)原子 轉(zhuǎn)移自由基聚合方法能夠?qū)崿F(xiàn)糖烯單體定向可控接枝聚合，得到含糖聚合 物鏈長(zhǎng)可控并富集在孔內(nèi)的有序多孔膜，采用的工藝設(shè)備簡(jiǎn)單，操作簡(jiǎn)便， 反應(yīng)條件溫和，得到的有序多孔膜的孔結(jié)構(gòu)規(guī)整，表面糖基分布及密度可控。
糖與蛋白質(zhì)之間存在一一對(duì)應(yīng)的識(shí)別能力，通過不同種類的糖烯單體 的接枝聚合制備的糖基化有序多孔膜，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)特定蛋白質(zhì)的選擇性吸 附和檢測(cè)；該糖基化有序多孔膜不僅可以為糖與蛋白質(zhì)相互作用的研究提 供一個(gè)良好的載體，同時(shí)還能作為細(xì)胞培養(yǎng)材料。
本發(fā)明適用于制備多種糖的糖基化有序多孔膜，在蛋白質(zhì)分離檢測(cè)和 細(xì)胞培養(yǎng)等方面具有良好的應(yīng)用前景。


圖1為實(shí)施例2中苯乙烯/甲基丙烯酸羥乙酯嵌段共聚物有序多孔膜的 掃描電鏡照片；
圖2為實(shí)施例2中接枝曱基丙烯酸甘露糖氧基乙酯的糖基化有序多孔 膜的掃描電鏡照片；
圖3為實(shí)施例3中接枝甲基丙烯酸半乳糖氧基乙酯的糖基化有序多孔膜的掃描電鏡照片。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1
將嵌段共聚物分子量為1萬、曱基丙烯酸羥乙酯的摩爾百分含量為
0.5%的苯乙烯/曱基丙烯酸羥乙酯嵌段共聚物溶于二硫化碳，配成重量百 分濃度為15%的聚合物溶液。
取0.1mL上述聚合物溶液涂覆到清潔玻璃表面，在相對(duì)濕度50%、 5 。C下成膜，獲得面積約為4cr^的有序多孔膜；用掃描電子顯微鏡觀察該 有序多孔膜，微孔直徑為0,2微米。
將上述有序多孔膜、5 mL正庚烷和0.5 mL三乙胺置于燒瓶中，O'C下 滴入0.3 mL溴異丁酰溴，反應(yīng)5小時(shí)，將有序多孔膜取出用曱醇和水洗 滌3次，干燥至恒重，得到表面固定化溴基團(tuán)的有序多孔膜。
然后將上述表面固定化溴基團(tuán)的有序多孔膜、5 mL曱醇、0.1 g曱基 丙烯酸葡萄糖氧基乙酯、5mg溴化亞銅、5mg溴化銅和7^L五曱基二乙 基三胺置于燒^f瓦，通氮?dú)?5分鐘，密封，25'C水浴中進(jìn)行表面引發(fā)原子 轉(zhuǎn)移自由基聚合反應(yīng)1小時(shí)，將膜取出依次用曱醇和去離子水洗滌3次， 干燥至恒重，得到糖基化有序多孔膜，糖基接枝率為5克/平方米膜。
實(shí)施例2
將嵌段共聚物分子量為20萬、曱基丙烯酸羥乙酯的摩爾百分含量為 10%的苯乙烯/曱基丙烯酸羥乙酯嵌段共聚物溶于二石克化碳，配成重量百分 濃度為5%的聚合物溶液。
取O.lmL上述聚合物溶液涂覆到清潔玻璃表面，在相對(duì)濕度90%、 50 。C下成膜，獲得面積約為4cn^的有序多孔膜；用掃描電子顯微鏡觀察該 有序多孔膜，微孔直徑為2.5微米。將上述有序多孔膜、50mL正庚烷和5mL三乙胺置于燒瓶中，O'C下 滴入3mL溴異丁酰溴，反應(yīng)12小時(shí)，將有序多孔膜取出用甲醇和水洗滌 3次，干燥至恒重，得到表面固定化溴基團(tuán)的有序多孔膜。
然后將上述表面固定化溴基團(tuán)的有序多孔膜、10mL曱醇、2g曱基丙 烯酸甘露糖氧基乙酯、5mg溴化亞銅和40nL五曱基二乙基三胺置于燒瓶， 通氮?dú)?5分鐘，密封，40。C水浴中進(jìn)行表面引發(fā)原子轉(zhuǎn)移自由基聚合反 應(yīng)24小時(shí)，將膜取出依次用甲醇和去離子水洗滌3次，千燥至恒重，得 到糖基化有序多孔膜，糖基接枝率為50克/平方米膜。
實(shí)施例3
將嵌段共聚物分子量為5萬、曱基丙烯酸羥乙酯的摩爾百分含量為 10%的苯乙烯/曱基丙烯酸羥乙酯嵌段共聚物溶于二硫化碳，配成重量百分 濃度為5%的聚合物溶液。
取O.lmL上述聚合物溶液涂覆到清潔玻璃表面，在相對(duì)濕度卯％、 50 'C下成膜，獲得面積約為4cn^的有序多孔膜；用掃描電子顯^鼓鏡觀察該 有序多孔膜，微孔直徑為2.5微米。
將上述有序多孔膜、20 mL正庚烷和1.5 mL三乙胺置于燒瓶中，0°C 下滴入lmL溴異丁酰溴，反應(yīng)24小時(shí)，將有序多孔膜取出用曱醇和水洗 滌3次，干燥至恒重，得到表面固定化溴基團(tuán)的有序多孔膜。
然后將上述表面固定化溴基團(tuán)的有序多孔膜、20mL甲醇、lg甲基丙 烯酸半乳糖氧基乙酯、25mg溴化亞銅、5mg溴化銅和40nL五曱基二乙 基三胺置于燒瓶，通氮?dú)?5分鐘，密封，25。C水浴中進(jìn)行表面引發(fā)原子 轉(zhuǎn)移自由基聚合反應(yīng)24小時(shí)，將膜取出依次用甲醇和去離子水洗滌3次， 干燥至恒重，得到糖基化有序多孔膜，糖基接枝率為20克/平方米膜。實(shí)施例4
將嵌段共聚物分子量為1萬、曱基丙烯酸羥乙酯的摩爾百分含量為 0.5%的苯乙烯/曱基丙烯酸羥乙酯嵌段共聚物溶于二硫化碳，配成重量百 分濃度為5%的聚合物溶液。
取0.1mL上述聚合物溶液涂覆到清潔玻璃表面，在相對(duì)濕度90%、 25 。C下成膜，獲得面積約為4cr^的有序多孔膜；用掃描電子顯微鏡觀察該 有序多孔膜，微孔直徑為2微米。
將上述有序多孔膜、50mL正庚烷和3mL三乙胺置于燒瓶中，O'C下 滴入1.5mL溴異丁酰溴，反應(yīng)24小時(shí)，將有序多孔膜取出用曱醇和水洗 滌3次，干燥至恒重，得到表面固定化溴基團(tuán)的有序多孔膜。
然后將上述表面固定化溴基團(tuán)的有序多孔膜、5mL曱醇、2g曱基丙 烯酸葡萄糖氧基乙酯、25mg溴化亞銅、1 mg溴化銅和40^L五曱基二乙 基三胺置于燒瓶，通氮?dú)?5分鐘，密封，25。C水浴中進(jìn)行表面引發(fā)原子 轉(zhuǎn)移自由基聚合反應(yīng)10小時(shí)，將膜取出依次用曱醇和去離子水洗滌3次， 干燥至恒重，得到糖基化有序多孔膜，糖基接枝率為42克/平方米膜。
實(shí)施例5
將嵌段共聚物分子量為2萬、甲基丙烯酸羥乙酯的摩爾百分含量為 30%的苯乙烯/曱基丙烯酸羥乙酯嵌段共聚物溶于二硫化碳，配成重量百分 濃度為5%的聚合物溶液。
取O.lmL上述聚合物溶液涂覆到清潔玻璃表面，在相對(duì)濕度90%、 25 t:下成膜，獲得面積約為4cri^的有序多孔膜；用掃描電子顯微鏡觀察該 有序多孔膜，微孔直徑為2.5微米。
將上述有序多孔膜、5mL正庚烷和lmL三乙胺置于燒瓶中，0。C下滴 入0.6mL溴異丁酰溴，反應(yīng)24小時(shí)，將有序多孔膜取出用曱醇和水洗滌 3次，干燥至恒重，得到表面固定化溴基團(tuán)的有序多孔膜。然后將上述表面固定化溴基團(tuán)的有序多孔膜、5mL曱醇、2g甲基丙 烯酸甘露糖氧基乙酯、20mg溴化亞銅、3mg溴化銅和40pL五曱基二乙 基三胺置于燒瓶，通氮?dú)?5分鐘，密封，25。C水浴中進(jìn)行表面引發(fā)原子 轉(zhuǎn)移自由基聚合反應(yīng)2小時(shí)，將膜取出依次用曱醇和去離子水洗滌3次， 干燥至恒重，得到糖基化有序多孔膜，糖基接枝率為35克/平方米膜。
實(shí)施例6
將嵌段共聚物分子量為5萬、甲基丙烯酸羥乙酯的摩爾百分含量為 10%的苯乙烯/甲基丙烯酸羥乙酯嵌段共聚物溶于二硫化碳，配成重量百分 濃度為5%的聚合物溶液。
取O.lmL上述聚合物溶液涂覆到清潔玻璃表面，在相對(duì)濕度70%、 25 。C下成膜，獲得面積約為4cn^的有序多孔膜；用掃描電子顯微鏡觀察該 有序多孔膜，微孔直徑為2.8微米。
將上述有序多孔膜、10mL正庚烷和lmL三乙胺置于燒瓶中，0。C下 滴入0.6mL溴異丁酰溴，反應(yīng)24小時(shí)，將有序多孔膜取出用甲醇和水洗 滌3次，干燥至恒重，得到表面固定化溴基團(tuán)的有序多孔膜。
然后將上述表面固定化溴基團(tuán)的有序多孔膜、5mL甲醇、0.5g甲基丙 烯酸半乳糖氧基乙酯、5mg溴化亞銅、3mg溴化銅和25pL五曱基二乙基 三胺置于燒并瓦，通氮?dú)?5分鐘，密封，25。C水浴中進(jìn)行表面引發(fā)原子轉(zhuǎn) 移自由基聚合反應(yīng)24小時(shí)，將膜取出依次用曱醇和去離子水洗滌3次， 干燥至恒重，得到糖基化有序多孔膜，糖基接枝率為25克/平方米膜。
應(yīng)用例1
將實(shí)施例1制備的面積約為4cm2的葡萄糖糖基化有序多孔膜浸入 lmL花生凝聚素/熒光標(biāo)記伴刀豆球蛋白(PNA/FL-ConA)溶液中，其中 花生凝聚素的濃度為(Ug/L,伴刀豆球蛋白的濃度為0.1g/L， 25。C下恒溫IO分鐘，取出葡萄糖糖基化有序多孔膜，測(cè)得熒光強(qiáng)度相對(duì)值為28;將 實(shí)施例1制備的葡萄糖糖基化有序多孔膜浸入lmL熒光標(biāo)記花生凝聚素/ 伴刀豆球蛋白(FL-PNA/ConA)溶液中，其中花生凝聚素的濃度為0.1g/L, 伴刀豆球蛋白的濃度為0.1 g/L, 25。C下恒溫10分鐘，取出葡萄糖糖基化 有序多孔膜，測(cè)得熒光強(qiáng)度相對(duì)值為4。
熒光強(qiáng)度的差別說明葡萄糖糖基化多孔膜可檢測(cè)溶液中的伴刀豆球 蛋白。
應(yīng)用例2
將實(shí)施例2制備的面積約為4cm2的甘露糖糖基化有序多孔膜浸入 lmL荒麻毒蛋白/焚光標(biāo)記苦參凝聚素(RCA/FL-SFA)溶液中，其中蓖麻 毒蛋白的濃度為0.1g/L,苦參凝聚素的濃度為(Ug/L,25。C下恒溫IO分鐘， 取出甘露糖糖基化有序多孔膜，測(cè)得熒光強(qiáng)度相對(duì)值為150;將實(shí)施例2 制備的甘露糖糖基化有序多孔膜浸入lmL熒光標(biāo)記蓖麻毒蛋白/苦參凝聚 素(FL-RCA/SFA)溶液中，其中蓖麻毒蛋白的濃度為0.1g/L,苦參凝聚 素的濃度為0.1g/L， 25。C下恒溫10分鐘，取出甘露糖糖基化有序多孔膜， 測(cè)得焚光強(qiáng)度相對(duì)值為6。
熒光強(qiáng)度的差別說明甘露糖糖基化有序多孔膜可檢測(cè)溶液中的苦參 凝聚素。
應(yīng)用例3
將實(shí)施例3制備的面積約為4cm2的半乳糖糖基化有序多孔膜浸入 lmL扁豆凝聚素/焚光標(biāo)記蓖麻毒蛋白(LCA/FL-RCA)溶液中，其中扁豆 凝聚素的濃度為0.1g/L,蓖麻毒蛋白的濃度為0.1g/L，25。C下恒溫IO分鐘， 取出半乳糖糖基化有序多孔膜，測(cè)得熒光強(qiáng)度相對(duì)值為55;將實(shí)施例3 制備的半乳糖糖基化有序多孔膜浸入lmL熒光標(biāo)記扁豆凝聚素/蓖麻毒蛋白(FL-LCA/RCA)溶液中，其中扁豆凝聚素的濃度為O.lg/L,蓖麻毒蛋 白的濃度為0.1g/L， 25。C下恒溫10分鐘，取出半乳糖糖基化有序多孔膜， 測(cè)得熒光強(qiáng)度相對(duì)值為7。
熒光強(qiáng)度的差別說明半乳糖糖基化有序多孔膜可檢測(cè)溶液中的蓖麻 毒蛋白。
應(yīng)用例4
將實(shí)施例4制備的面積約為4cm2的葡萄糖糖基化有序多孔膜浸入 lmL花生凝聚素/熒光標(biāo)記伴刀豆球蛋白(PNA/FL-ConA)溶液中，其中 花生凝聚素的濃度為O.lg/L,伴刀豆球蛋白的濃度為0.1g/L， 25。C下恒溫 IO分鐘，取出葡萄糖糖基化有序多孔膜，測(cè)得熒光強(qiáng)度相對(duì)值為88;將 實(shí)施例4制備的葡萄糖糖基化有序多孔膜浸入lmL熒光標(biāo)記花生凝聚素/ 伴刀豆球蛋白(FL-PNA/ConA)溶液中，其中花生凝聚素的濃度為0.1g/L， 伴刀豆球蛋白的濃度為O.lg/L, 25。C下恒溫10分鐘，取出葡萄糖糖基化 有序多孔膜，測(cè)得熒光強(qiáng)度相對(duì)值為4。
熒光強(qiáng)度的差別說明葡萄糖糖基化有序多孔膜可檢測(cè)溶液中的伴刀 豆球蛋白。
應(yīng)用例5
將實(shí)施例5制備的面積約為4cm2的甘露糖糖基化有序多孔膜浸入 lmL蓖麻毒蛋白/熒光標(biāo)記苦參凝聚素(RCA/FL-SFA)溶液中，其中蓖麻 毒蛋白的濃度為0.1g/L，苦參凝聚素的濃度為0.1g/L，25。C下恒溫IO分鐘， 取出甘露糖糖基化有序多孔膜，測(cè)得熒光強(qiáng)度相對(duì)值為78;將實(shí)施例5 制備的甘露糖糖基化有序多孔膜浸入lmL熒光標(biāo)記蓖麻毒蛋白/苦參凝聚 素(FL-RCA/SFA)溶液中，其中蓖麻毒蛋白的濃度為0.1g/L，苦參凝聚 素的濃度為0.1g/L， 25。C下恒溫10分鐘，取出甘露糖糖基化有序多孔膜，測(cè)得熒光強(qiáng)度相對(duì)值為6。
熒光強(qiáng)度的差別說明甘露糖糖基化有序多孔膜可檢測(cè)溶液中的苦參
應(yīng)用例6
將實(shí)施例6制備的面積約為4cm2的半乳糖糖基化有序多孔膜浸入 lmL扁豆凝聚素/熒光標(biāo)記蓖麻毒蛋白(LCA/FL-RCA)溶液中，其中扁豆 凝聚素的濃度為0.1g/L,蓖麻毒蛋白的濃度為0.1g/L，25。C下恒溫IO分鐘， 取出半乳糖糖基化有序多孔膜，測(cè)得熒光強(qiáng)度相對(duì)值為65;將實(shí)施例6 制備的半乳糖糖基化有序多孔膜浸入lmL熒光標(biāo)記扁豆凝聚素/蓖麻毒蛋 白(FL-LCA/RCA)溶液中，其中扁豆凝聚素的濃度為O.lg/L,蓖麻毒蛋 白的濃度為0.1g/L， 25。C下恒溫10分鐘，取出半乳糖糖基化有序多孔膜， 測(cè)得焚光強(qiáng)度相對(duì)值為5。
熒光強(qiáng)度的差別說明半乳糖糖基化有序多孔膜可檢測(cè)溶液中的蓖麻 毒蛋白。
權(quán)利要求
1、一種通過可控接枝聚合制備糖基化有序多孔膜的方法，包括以下步驟(1)將含羥基的苯乙烯嵌段共聚物溶于二硫化碳中，得到重量百分比為0.5～15％的聚合物溶液；(2)將步驟(1)得到的聚合物溶液在相對(duì)濕度為50～90％、溫度為5～50℃的環(huán)境中澆鑄成膜，得到孔徑為0.2～20微米的有序多孔膜；(3)將步驟(2)得到的有序多孔膜、正庚烷和三乙胺混合，0℃下滴入溴異丁酰溴，反應(yīng)5～24小時(shí)，將有序多孔膜取出經(jīng)洗滌、干燥至恒重，得到表面固定化溴基團(tuán)的有序多孔膜；其中，以面積為4cm2的有序多孔膜計(jì)，正庚烷的用量為5～50mL，三乙胺的用量為0.5～5mL，溴異丁酰溴的用量為0.3～3mL；(4)將步驟(3)得到的表面固定化溴基團(tuán)的有序多孔膜、甲醇、糖烯單體、溴化亞銅、溴化銅和五甲基二乙基三胺在氮?dú)夥諊忻芊猓?5～50℃水浴中進(jìn)行表面引發(fā)原子轉(zhuǎn)移自由基聚合反應(yīng)1～24小時(shí)，將膜取出經(jīng)洗滌、干燥至恒重，得到糖基化有序多孔膜，糖基接枝率為5～50克/平方米膜；其中，以面積為4cm2的有序多孔膜計(jì)，甲醇的用量為5～20mL，糖烯單體的用量為0.1～2g，溴化亞銅的用量為5～25mg，溴化銅的用量為0～5mg，五甲基二乙基三胺的用量為7～40μL。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述的含羥基的苯乙 烯嵌段共聚物為苯乙烯/曱基丙烯酸羥乙酯嵌段共聚物；其中，曱基丙烯酸 羥乙酯的摩爾百分含量為0.5~30%,嵌段共聚物分子量為1~20萬。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述的糖烯單體為甲 基丙烯酸葡萄糖氧基乙酯、曱基丙烯酸甘露糖氧基乙酯或曱基丙烯酸半乳糖氧基乙酯。
4、根據(jù)權(quán)利要求1 3任一項(xiàng)所述的方法制備的糖基化有序多孔膜在 蛋白質(zhì)檢測(cè)中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種通過可控接枝聚合制備糖基化有序多孔膜的方法，以含羥基的苯乙烯嵌段共聚物為基材，采用水輔助法制備有序多孔膜，通過表面引發(fā)原子轉(zhuǎn)移自由基聚合反應(yīng)，在催化劑存在下引發(fā)表面原子轉(zhuǎn)移自由基接枝聚合，得到糖基化有序多孔膜。本發(fā)明方法簡(jiǎn)單、工藝條件溫和、生產(chǎn)成本低，所制備的糖基化有序多孔膜具有糖基分布及密度可控的特點(diǎn)，可用于蛋白質(zhì)檢測(cè)和細(xì)胞培養(yǎng)等領(lǐng)域。
文檔編號(hào)C08J9/00GK101555324SQ20091009880
公開日2009年10月14日 申請(qǐng)日期2009年5月18日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月18日
發(fā)明者萬靈書, 徐志康, 柯蓓蓓 申請(qǐng)人:浙江大學(xué)