專利名稱：大黃素素分子印跡聚合物的制備及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明專利涉及的是一種醫(yī)藥化學(xué)工程技術(shù)領(lǐng)域的方法，具體涉及大黃素分子印
跡聚合物的制備及利用該聚合物為固相萃取劑分離、純化天然產(chǎn)物中的大黃素的方法。
背景技術(shù)：
大黃素屬于蒽醌類成分，現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，大黃素有廣譜抗菌、保肝利膽、抗 腫瘤、降血脂、止血活血、鎮(zhèn)痛消炎發(fā)、利尿、改善腎功能、提高免疫力等多方面作用。大黃素 對體外培養(yǎng)的癌細(xì)胞有不同強(qiáng)度的生長抑制作用，對懸浮型癌細(xì)胞生長的抑制作用較強(qiáng)， 并且具有選擇性抑制神經(jīng)外胚層腫瘤活性的作用，為一新型抗癌劑。 中藥在疾病治療中的作用越來越得到世界的認(rèn)可，其地位得到顯著的提升，但傳 統(tǒng)中藥的丸、散、膏、丹等多數(shù)劑型是由中藥浸取液不經(jīng)提取或僅經(jīng)過粗提取而制成的。隨 著時(shí)代發(fā)展和技術(shù)進(jìn)步，其弊端逐漸突出有效成分濃度很低，導(dǎo)致劑量很大，起效慢，吸收 和利用度不好，特別是對重病患者或不便口服的患者療效不佳；有效成分和雜質(zhì)混雜沒有 深度區(qū)分，療效不確切；傳統(tǒng)劑型富含糖類等可供微生物滋生的營養(yǎng)成分，在生產(chǎn)或使用過 程中容易被污染，達(dá)不到醫(yī)藥衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，很難長期保存；濃重的味道難以被西方國家的患者 所接受。 傳統(tǒng)的中藥有效成分提取存在著步驟復(fù)雜、能耗高、純度低、有機(jī)溶劑消耗量大等 問題，如果要達(dá)到進(jìn)一步純化的目的往往需要昂貴的儀器設(shè)備，而且費(fèi)用昂貴，因此更為有 效的中藥有效成分提取純化的新方法開發(fā)尤為重要。分子印跡技術(shù)是一種基于分子識(shí)別基 礎(chǔ)上的分子印跡聚合物的制備過程，得到的分子印跡聚合物內(nèi)部具有和模板目的分子互補(bǔ) 的空間結(jié)構(gòu)和功能基團(tuán)，具有記憶和識(shí)別功能，對模板目的分子有特異選擇性。分子印跡聚 合物具有選擇性好、耐酸堿、耐有機(jī)溶劑、可重復(fù)使用等特點(diǎn)，具有較廣泛應(yīng)用前景。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種制備大黃素分子印跡聚合物的方法，并提供一種利用 該聚合物作固相萃取固定相從中藥粗提物中分離、富集、純化大黃素的方法。本發(fā)明通過以 下的技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的，具體包括步驟如下
1 、大黃素分子印跡聚合物的制備 (1)將模板分子即大黃素、功能單體丙烯酰胺(AM)和交聯(lián)劑乙二醇二甲基丙烯酸 酯(EDMA)按照摩爾比為l : 3.5 4.5 : 20溶解在作為致孔劑的丙酮溶液中，加入引發(fā) 劑偶氮二異丁腈(AIBM); (2)超聲混勻10min，然后將溶液倒入一個(gè)試管中，密封，通氬氣(或氮?dú)?脫氧 15min，將密封好的試管放入56 60°C的水浴中，恒溫聚合24h得到塊狀聚合物；
(3)將制得的聚合物進(jìn)行研磨，過200目篩，得到粒徑為小于74ym顆粒。
(4)用甲醇醋酸(8 : 1 8 : 3)混合液為萃取劑，通過索式提取洗去模板分子
及沒有聚合的功能單體及交聯(lián)劑，以紫外光譜進(jìn)行檢查，然后用甲醇除去殘留的醋酸；
(5)將除去模板分子的聚合物在6(TC干燥24h，獲得大黃素的分子印跡聚合物。
(6)非印跡聚合物的制備方法，除不加入模板分子外，其余步驟同上。
2、固相萃取分離純化中藥粗提液中的大黃素 (1)稱取中藥虎杖或大黃5g，加人20X硫酸10mL，加人60X乙醇水6ml溶液，用超 聲波超聲45分鐘后，用150mL氯仿分三次萃取，將提取液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑后在真空干燥 箱中干燥，得到大黃素粗提物，備用。 (2)將上述得到的大黃素分子印跡聚合物采用干法裝柱填充到固相萃取柱中，用 甲醇溶液淋濕柱子后，上層加入少量的石英砂。 (3)將虎仗或大黃粗提物溶解于甲醇中，上樣后用氯仿淋洗固相萃取柱，用點(diǎn)板檢 查確定雜質(zhì)被完全洗脫除去后，用甲醇醋酸(8 : 2)洗脫保留在萃取柱中的大黃素，將洗 脫液收集并濃縮、干燥，即得到高純度的大黃素。 本發(fā)明制備的分子印跡聚合物具有多孔的表面結(jié)構(gòu)，對大黃素具有很好的識(shí)別性 能，作為固相萃取的填料，可用于中藥中大黃素成分的高效分離、富集及純化。
具體實(shí)施例方式
下面對本發(fā)明的實(shí)施例作詳細(xì)說明本實(shí)施例在以本發(fā)明技術(shù)方案為前提下進(jìn)行 實(shí)施，給出了詳細(xì)的實(shí)施方案和具體的操作過程，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于下述的實(shí)施 例。
實(shí)施例1 : 1、大黃素分子印記聚合物的制備 大黃素4mmo1，功能單體丙烯酰胺14mmo1和交聯(lián)劑EDMA 80mmo1混合，充分溶解 于32mL的致孔劑丙酮中，加入引發(fā)劑AIBN 260mg。將以上混合液倒入試管中，超聲振動(dòng)脫 氣10min，通氬氣脫氧15min，在氬氣保護(hù)下迅速封口。將密封好的試管放入56°C的水浴中 恒溫聚合24h。聚合完全后，得堅(jiān)固的棒狀固體聚合物。將聚合物研磨，過200目篩，將聚合 物放入索式提取器中，用甲醇乙酸=8 : 1的溶液洗脫除去模板分子和沒有聚合的功能 單體及交聯(lián)劑，再用甲醇洗去殘留乙酸，在6(TC下干燥24h，得到大黃素分子印跡聚合物。
2、固相萃取分離純化中藥粗提液中的大黃素 稱取中藥大黃5g，加人20X硫酸10mL，加人60X乙醇水6ml溶液，放入超聲波中 超聲45分鐘后，用150mL氯仿分三次萃取，將提取液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑后在真空干燥箱中 干燥，得到大黃粗提物。稱取1.2mg洗脫好的大黃素印跡聚合物，采用干法裝柱，加入甲醇 溶液淋濕固相萃取柱后，上層加入少量的石英砂。稱取大黃粗提物4mg，用lmL的甲醇潤濕 樣品，上樣，往柱中進(jìn)樣加壓，控制流速為0.8mL/min，用氯仿淋洗除去雜質(zhì)后(用點(diǎn)板檢 驗(yàn))，再用體積比為8 : 2的甲醇乙酸溶液洗脫保留在萃取柱上的大黃素(用點(diǎn)板檢驗(yàn))。 經(jīng)濃縮、干燥得到大黃素純品為161. 6 ii g。
實(shí)施例2 : 1、大黃素分子印記聚合物的制備 大黃素2mmo1 ，功能單體丙烯酰胺8mmo1和交聯(lián)劑EDMA 40mmo1混合，充分溶解于 16mL的丙酮中，加入引發(fā)劑AIBN 130mg。 將以上混合液倒入一個(gè)試管中，超聲振動(dòng)脫氣10min，通氬氣脫氧15min，在氬氣
4保護(hù)下迅速封口 。將密封好的試管放入60°C的水浴中恒溫聚合24h。將聚合得到的堅(jiān)固的
棒狀固體聚合物研磨，過200目篩，將聚合物放入索式提取器中，用甲醇乙酸=8 : 2的
溶液洗脫，萃取32h，萃取四次，每次8h，每次溶液用量為80mL，再用甲醇洗去殘留乙酸，在
6(TC下干燥24h，得到大黃素分子印跡聚合物。 2、固相萃取分離純化中藥粗提液中的大黃素 采用干法裝柱，稱取600mg洗脫好的大黃素印跡聚合物，裝入固相萃取柱中，加入 甲醇溶液淋濕固相萃取柱后，上層加入少量的石英砂。稱取2mg大黃粗提物，用lmL的甲醇 潤濕樣品，往柱中進(jìn)樣加壓，控制流速為0. 6mL/min，并依次用氯仿淋洗除去雜質(zhì)，再用體積 比為8 : 2的甲醇乙酸洗脫保留在萃取柱上的大黃素。經(jīng)濃縮、干燥得到大黃素純品為 84. 5 ii g。 實(shí)施例3 : 1、大黃素分子印記聚合物的制備 大黃素4mmo1 ，功能單體丙烯酰胺18mmo1和交聯(lián)劑EDMA 80mmo1混合，充分溶解于 32mL的致孔劑丙酮中，加入引發(fā)劑AIBN 260mg。將以上混合液倒入一個(gè)試管中，超聲振動(dòng) 脫氣10min，通氬氣脫氧15min，在氬氣保護(hù)下迅速封口。將密封好的試管放入58。C的水浴 中恒溫聚合24h。將聚合得到的堅(jiān)固的棒狀固體聚合物研磨，過200目篩，將聚合物放入索 式提取器中，用甲醇乙酸=8 : 3的溶液洗脫，萃取40h，萃取五次，每次8h，每次溶液用 量為160mL，再用甲醇洗去殘留乙酸，6(TC干燥24h，得到大黃素分子印跡聚合物。
2、固相萃取分離純化中藥粗提液中的大黃素 采用干法裝柱，稱取600mg洗脫好的大黃素印跡聚合物，裝入固相萃取柱中，加入 甲醇溶液淋濕固相萃取柱后，上層加入少量的石英砂。稱取2mg虎仗粗提物，用移液管移 取約lmL的甲醇，潤濕樣品，往柱中進(jìn)樣加壓，控制流速為0. 8mL/min，用氯仿淋洗除去雜質(zhì) 后，再用體積比為8 : 2的甲醇乙酸洗脫保留在萃取柱上的大黃素。經(jīng)濃縮、干燥得到大 黃素純品為47.3yg。
實(shí)施例4 : 1、大黃素分子印記聚合物的制備 大黃素lmmol，功能單體甲基丙烯酸4mmo1和交聯(lián)劑EDMA 20mmo1混合，充分溶解 于8mL的丙酮中，加入引發(fā)劑AIBN 65mg。將以上混合液倒入一個(gè)試管中，超聲振動(dòng)脫氣 10min，通氬氣脫氧15min，在氬氣保護(hù)下迅速封口 。將密封好的試管放入60°C的水浴中恒 溫聚合24h。聚合完全后，得堅(jiān)固的棒狀固體聚合物。將聚合物研磨，過200目篩，將聚合物 放入索式提取器中，用甲醇乙酸=8 : 2的溶液洗脫，萃取24h，萃取三次，每次8h，每次 溶液用量為40mL，再用甲醇洗去殘留乙酸，6(TC干燥24h，得到所要的分子印跡聚合物。
2、固相萃取分離純化中藥粗提液中的大黃素 (1)采用干法裝柱，稱取600mg洗脫好的大黃素印跡聚合物，裝入固相萃取柱中， 加入甲醇溶液淋濕固相萃取柱后，上層加入少量的石英砂。稱取lmg虎仗粗提物，用移液管 移取約lmL的甲醇，潤濕樣品，往柱中進(jìn)樣加壓，控制流速為0. 8mL/min，用氯仿淋洗除去雜 質(zhì)后，再用體積比為8 : 2的甲醇乙酸洗脫保留在萃取柱上的大黃素。經(jīng)濃縮、干燥得到 大黃素純品為24.9iig。


圖1大黃素分子印跡聚合物合成示意圖
圖2聚合物的表觀形態(tài)掃描電鏡圖
a、大黃素分子印跡聚合物 b、非印記聚合物
圖3分離得到大黃素的紫外可見光譜圖
圖4分離得到的大黃素的紅外光譜圖。
權(quán)利要求
本發(fā)明的目的在于提供一種制備大黃素分子印跡聚合物的方法，并提供利用該聚合物作固相萃取固定相從中藥粗提物中分離、富集、純化大黃素的方法。其特征在于，包括以下步驟(1)大黃素分子印跡聚合物的制備將模板分子大黃素、功能單體丙烯酰胺(AM)和交聯(lián)劑乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)按照摩爾比為1∶3.5～4.5∶20溶解在作為致孔劑的丙酮溶液中，加入引發(fā)劑偶氮二異丁腈(AIBM)；超聲混勻10min，然后將溶液倒入試管中，密封，通氬氣(或氮?dú)?脫氧15min，將密封好的試管放入56～60℃的水浴中，恒溫聚合24h得到塊狀聚合物；將制得的聚合物進(jìn)行研磨，過200目篩，得到粒徑為小于74μm顆粒；用甲醇∶醋酸(8∶1～8∶3)混合液為萃取劑，通過索式提取洗去模板分子及沒有聚合的功能單體及交聯(lián)劑，以紫外光譜進(jìn)行檢查，然后用甲醇除去殘留的醋酸；將除去模板分子的聚合物在60℃干燥24h，獲得大黃素的分子印跡聚合物。非印跡聚合物的制備方法，除不加入模板分子外，其余步驟同上。(2)固相萃取分離純化中藥粗提物中的大黃素稱取中藥虎杖或大黃5g，加入提取液，放入超聲波中超聲45分鐘后，用150mL氯仿分三次萃取，將提取液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑后在真空干燥箱中干燥，得到大黃素粗提物，備用；將上述得到的大黃素分子印跡聚合物采用干法裝柱填充到固相萃取柱中，用甲醇溶液淋濕柱子后，上層加入少量的石英砂；將虎仗或大黃粗提物溶解于甲醇中，上樣后用氯仿淋洗固相萃取柱，用點(diǎn)板檢查確定雜質(zhì)被完全洗脫除去后，用甲醇∶醋酸(8∶2)洗脫保留在萃取柱中的大黃素，將洗脫液收集并濃縮、干燥，即得到高純度的大黃素。
2. 根據(jù)權(quán)利要求l的要求，分子印跡聚合物制備采用的模板分子是大黃素。
3. 根據(jù)權(quán)利要求l的要求，分子印跡聚合物制備采用的功能單體是丙烯酰胺(AM)，用 量為每lmmol大黃素需20mmo1丙烯酰胺。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1的要求，分子印跡聚合物制備采用的交聯(lián)劑是乙二醇二甲基丙烯酸 酯(EDMA)，用量為每lmmol大黃素需3. 5 4. 5mmo1 EDMA。
5 根據(jù)權(quán)利要求1的要求，分子印跡聚合物制備采用的引發(fā)劑是偶氮二異丁腈 (AIBM)，用量為每lmmol大黃素需65mg偶氮二異丁腈。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1的要求，分子印跡聚合物制備采用的致孔劑是丙酮，用量為每lmmol 大黃素需8ml丙酮。
7. 根據(jù)權(quán)利要求l的要求，洗除聚合物中模板分子大黃素及沒有聚合的交聯(lián)劑、功能單體和引發(fā)劑采用的是甲醇醋酸(8 : i 8 : 3)混合液。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1的要求，超聲波提取5g中藥大黃或虎杖的溶劑采用的是20%硫酸 10mL和60%乙醇水6ml溶液。
9. 根據(jù)權(quán)利要求l的要求，固相萃取中采用氯仿作為淋洗液洗除中藥大黃及虎杖粗提 物中的雜質(zhì)。
10. 根據(jù)權(quán)利要求i的要求，固相萃取中采用甲醇醋酸(8 : 2)混合溶劑洗脫保留在 萃取柱中的大黃素。
全文摘要
本發(fā)明的目的是提供一種以大黃素為模板制備分子印跡聚合物的方法，并用以分離純化中藥中的大黃素，屬于化工分離技術(shù)領(lǐng)域，包括以下步驟(1)將大黃素、功能單體(丙烯酰胺)和交聯(lián)劑(乙二醇二甲基丙烯酸酯)按照摩爾比為1∶3～5∶20溶解在致孔劑丙酮溶液中；加入偶氮二異丁腈引發(fā)劑，在56～60℃引發(fā)聚合；聚合物經(jīng)研磨、過篩，并洗除模板分子及沒有聚合的功能單體、交聯(lián)劑、引發(fā)劑，得到大黃素分子印跡聚合物。(2)將大黃素分子印跡聚合物作為固相萃取固定相對中藥大黃粗提物和虎仗粗提物中大黃素成分進(jìn)行分離、純化。制備的分子印跡聚合物對大黃素具有很好的識(shí)別效果，能有效地去除雜質(zhì)，得到高純度的大黃素。
文檔編號(hào)C08F120/56GK101712731SQ200910129029
公開日2010年5月26日 申請日期2009年3月13日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月13日
發(fā)明者張俊杰, 李紅霞, 馬玉哲, 駱玉涵 申請人:河北理工大學(xué)