專利名稱：一種多糖亞硒酸酯的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及硒化多糖技術(shù)領(lǐng)域，具體地，涉及一種多糖亞竭酸酯 的制備方法。
背景技術(shù)：
多糖是生物體內(nèi)除蛋白質(zhì)和核酸外又一類重要的生物大分子，具 有抗感染、肺瘤防治、病毒性肝炎、類風(fēng)濕癥和艾滋病等免疫損傷或 免疫缺損癥和抗氧化等多方面功能和生物活性，近年來(lái)受到人們的普 遍重視。近年來(lái)，有關(guān)多糖的分子修飾研究已有大的進(jìn)展。在多糖的 分子修飾中，利用糖殘基上的羥基、羧基和氨基等基團(tuán)，運(yùn)用化學(xué)方 法進(jìn)行修飾，有可能提高多糖的活性。這里，多糖的分子修飾的化學(xué) 方法包括石克酸化、羧甲基化、硒酸化和磷酸酯化等。
另外，硒是人和動(dòng)物生命活動(dòng)過程中必需的微量元素，人體缺硒
會(huì)造成致命的缺硒綜合癥，如克山病，大骨節(jié)病和白內(nèi)障等40多種 疾病，均與人體的硒含量有關(guān)。近代研究還表明，竭可以刺激免疫3求 蛋白的生成，具有抗氧化和抗癌作用。但是，攝入硒過量也會(huì)引起白 內(nèi)障、脫發(fā)和脫甲等中毒綜合癥?？梢酝ㄟ^常規(guī)的補(bǔ)硒形式，通過攝 耳又無(wú)才幾竭和生物活性竭進(jìn)^f亍補(bǔ)硒。亞石西酸鈉也是一種補(bǔ)石西的藥物，但_ 亞硒酸鈉同時(shí)是一種無(wú)機(jī)鹽，給藥量不易控制，有效吸收性差。
在申請(qǐng)?zhí)枮?0114699.8的專利申請(qǐng)中，提供了一種殼聚糖亞硒酸 鹽及其制備方法，該殼聚糖亞硒酸鹽是用殼聚糖與亞硒酸反應(yīng)所得， 反應(yīng)所得產(chǎn)物中勵(lì)的含量為0 26%;采用不同分子量的殼聚糖與亞硒酸反應(yīng)，可以制備不同分子量的殼聚糖亞硒酸鹽，反應(yīng)所得產(chǎn)物依其 分子量大小、以及結(jié)合的亞硒酸的多少，而具有不同的水溶性。這種 殼聚糖亞硒酸鹽毒性低、易被吸收，可以作為補(bǔ)硒制劑，用于醫(yī)藥、 保健品、化妝品和農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域。
另夕卜，在申請(qǐng)?zhí)枮?00610045482.8的專利申請(qǐng)中，^是供了一種多 糖亞竭酸酯的制法及其應(yīng)用，該多糖亞硒酸酯由多#唐或多糖復(fù)合物和 硒化試劑反應(yīng)制得，其中，硒化試劑可以是卣氧化硒或者含有卣氧硒 結(jié)構(gòu)的化合物，硒化試劑與多糖中羥基基團(tuán)的投料摩爾比為1: 0.1 20;制得的多糖亞硒酸酯可以用于抗癌藥物和抗氧化藥物的制備。 這里，多糖亞硒酸酯的含硒量較高。
百合多糖和鎖陽(yáng)多糖是一類天然的多糖高聚物，其中，百合來(lái)源 于蘭外l百合(Z ,7,'"w d"v/(i// ww/co/or Sa/,;s^.)干丈喿肉質(zhì)#卑葉，')"生p未 甘寒，具有養(yǎng)陰清肺和清心安神的功效?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，蘭州百 合具有抗癌、抗疲勞、耐缺氧和止咳等作用，中藥蘭州百合中含有皂 苷、生物堿、多糖、磷脂、蛋白質(zhì)、氨基酸、維生素、淀粉和大量微 量元素等化學(xué)成分。目前，蘭州百合多糖的研究尚處于起步階段，但 因其良好的應(yīng)用前景，近年逐漸引起越來(lái)越多的關(guān)注。
在申請(qǐng)?zhí)枮閆L200610041681.1的專利申請(qǐng)中，提供了一種抗疲 勞蘭州百合多糖的制備方法，以天然蘭州百合鱗莖為原料，經(jīng)過提取、 脫蛋白、分離和柱層析處理，制備出具有抗疲勞作用的新的天然蘭州 百合多糖；該天然蘭州百合多糖具有抗疲勞效果好和無(wú)毒副作用的優(yōu) 點(diǎn)。
另外，在申請(qǐng)?zhí)枮閆L200810097243.6的專利申請(qǐng)中，4是供了一 種增強(qiáng)免疫力的百合多糖的制備方法，以天然蘭州百合鱗莖為原料，
5經(jīng)過提取、純化、分離、脫蛋白等步驟制備出一種增強(qiáng)免疫力的天然
多糖；該天然蘭州百合多糖與其它增強(qiáng)免疫產(chǎn)品相比，具有生產(chǎn)工藝
簡(jiǎn)單，使用方便，且特色優(yōu)勢(shì)明顯，資源儲(chǔ)量充足。
鎖陽(yáng)又名不老藥，在傳統(tǒng)蒙藥中是重要的補(bǔ)益壯陽(yáng)的品種，鎖陽(yáng) 中活性總多糖中性單糖組成均為半乳糖、葡萄糖、阿拉伯糖、鼠李糖、
甘露糖和核糖等；屬多年生肉質(zhì)寄生草本，是鎖陽(yáng)科植物鎖陽(yáng) (Cy"owon.ww 7 wpr )的干燥肉質(zhì)莖；'〖生甘溫，具有#卜腎
陽(yáng)、益精血和潤(rùn)腸通便之功能；臨床用于骨蒸潮熱、腿膝痿弱無(wú)力和 腸燥便秘等。糖尿病小鼠實(shí)驗(yàn)表明，使用鎖陽(yáng)多糖3周左右時(shí)，糖尿 病小鼠的血糖值明顯降低，肝糖原含量顯著升高，各項(xiàng)血液生化指標(biāo) 谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、尿素氮和肌酐都明顯降低，說明鎖陽(yáng)多糖 可以改善糖尿病小鼠的肝腎功能，使肝、腎和心各器官SOD活性提 高，MDA含量降低，從而表明鎖陽(yáng)多糖可以提高糖尿病小鼠肝臟和 腎臟抗氧化能力。
在申請(qǐng)?zhí)枮?00510055385.2的專利申請(qǐng)中，提供了 一種復(fù)方鎖陽(yáng) 滴丸及其制備方法，該復(fù)方鎖陽(yáng)滴丸以含有鎖陽(yáng)、枸杞子和五味子的 三味中藥活性成份的提取物為原料，與可藥用基質(zhì)一起制備而成；該 復(fù)方鎖陽(yáng)滴丸具有補(bǔ)肝腎、益精血、強(qiáng)筋骨作用，用于腰膝痿軟和腸 燥便秘等病癥治療的藥物組合物，該復(fù)方鎖陽(yáng)滴丸具有生物利用度 高、藥物含量高、藥效快、服用方便和價(jià)格低廉的優(yōu)點(diǎn)。
在上述多糖與亞竭酸的制劑中，多^f唐亞石西酸酯的竭含量有限；并 且，由于多糖結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性，不同的多糖其亞硒酸酯的制備方法不同， 因此，針對(duì)某種特定多糖建立一種合適的亞硒酸酯化的方法是十分必 要的。在現(xiàn)有技術(shù)中，尚未見到以蘭州百合多糖或鎖陽(yáng)多糖為原料、制備多糖亞硒酸酯的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對(duì)上述問題，提出 一種多糖亞硒酸酯的制備 方法，以實(shí)現(xiàn)含硒量高和藥效好的優(yōu)點(diǎn)。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種多糖亞硒酸酯的制備方法，
包^r步驟a、按多糖硝酸4g: 100ml的配比關(guān)系，將所述多糖與對(duì)應(yīng) 的硝酸溶液混合，在室溫下攪拌，使所述多糖溶脹，得到多糖硝酸溶液； b、在所述多糖硝酸溶液中，加入亞硒酸鈉和氯化錫，在溫度為60 80。C的 水浴中攪拌，酯化反應(yīng)6~14小時(shí)后，冷卻至室溫，在壓強(qiáng)為0.07~0.08Mpa 時(shí)進(jìn)行抽濾處理和一次離心處理，得到一次上清液；c、將所述一次上清 液裝入透析袋中，依次進(jìn)行流水透析處理和蒸餾水透析處理后，減壓濃縮 至原體積的1/40 1/20，得到濃縮液；d、對(duì)所述濃縮液進(jìn)行醇沉處理和二 次離心處理，得到下沉沉淀；再對(duì)所述沉淀進(jìn)行冷凍干燥處理，得到所述 多糖亞竭酸酯。
其中，所述多糖為蘭州百合多糖或鎖陽(yáng)多糖。 進(jìn)一步的，在步驟a中，所述硝酸溶液的體積濃度為0.3 0.8%。 進(jìn)一步的，在步驟b中，在所述抽濾處理和所述一次離心處理之間， 還包括以下步驟使用無(wú)水碳酸鈉，將所述抽濾處理所得濾液的PH值調(diào) 至5 6。
更進(jìn)一步的，在步驟b中，所述亞硒酸鈉和所述氯化錫的重量比為 1丄675 3.35,所述氯化錫為催化劑。
進(jìn)一步的，在步驟c中，當(dāng)在所述透析袋中加入抗壞血酸、所述透析 袋中液體的紅色消失時(shí)，所述蒸餾水透析處理完成。
更進(jìn)一步的，在步驟c中，所述流水透析處理的時(shí)間為36~48小時(shí)； 所述減壓濃縮處理的溫度為50~60°C、壓強(qiáng)條件為0.07 0.08Mpa;所述透析袋的截留分子量為8000 12000道爾頓。
進(jìn)一步的，在步驟d中，所述醇沉處理具體包括在所述濃縮液中加 入乙醇，在室溫下靜置20~30小時(shí)；其中，所述乙醇的體積占所述濃縮液 和所述乙醇總體積的75~80%。
更進(jìn)一步的，在步-紫b和d中，所述一次和二次離心處理的溫度為 15 2(TC、轉(zhuǎn)速為4000 4500轉(zhuǎn)/分鐘，所述冷凍干燥處理的溫度為-6(TC ~ -50°C、時(shí)間為36 48小時(shí)。
本發(fā)明各實(shí)施例的多糖亞硒酸酯的制備方法，以蘭州百合多糖或 鎖陽(yáng)多糖為主料，以硝酸和亞竭酸鈉為輔料，以氯化錫為催化劑，按 多糖硝酸二lg: 100ml的配比關(guān)系，將蘭州百合多糖或鎖陽(yáng)多糖與對(duì)應(yīng) 的硝酸溶液混合，在室溫下攪拌過夜，使蘭州百合多糖或鎖陽(yáng)多糖溶脹； 在得到的多糖硝酸溶液中，加入亞竭酸鈉和氯化錫，在溫度為60 80。C的 水浴中攪拌，酯化反應(yīng)6 14小時(shí)后，冷卻至室溫，在壓強(qiáng)為0.07 0.08Mpa 時(shí)進(jìn)行抽濾處理和一次離心處理；將得到的一次上清液裝入透析袋中，依 次進(jìn)行流水透析處理和蒸餾水透析處理后，減壓濃縮至原體積的 1/40~1/20;對(duì)得到的濃縮液進(jìn)行醇沉處理和二次離心處理，得到下沉沉淀； 再對(duì)該沉淀進(jìn)行冷凍干燥處理，可以制得蘭州百合多糖或鎖陽(yáng)多糖亞硒酸 酯，該蘭州百合多糖或鎖陽(yáng)多糖具有含硒量高和藥性好的優(yōu)點(diǎn)。
總之，本發(fā)明以含有天然植物蘭州百合或鎖陽(yáng)的提取物、即蘭州百合
多糖或鎖陽(yáng)多糖為原料，首次在硝酸-氯化錫的催化作用下，利用利用亞 硒酸鈉對(duì)蘭州百合多糖或鎖陽(yáng)多糖進(jìn)行分子修飾，合成了蘭州百合多 糖亞硒酸酯或鎖陽(yáng)多糖亞磁酸酯，該反應(yīng)條件可控，重復(fù)性高，溶解 性好，市場(chǎng)前景好；另外，在分子結(jié)構(gòu)中引入亞硒酸根，其中硒是正 四寸介，竭是處于中間fh態(tài)，既可以一皮氧化也可以被還原，可見，利用 本發(fā)明所述制備方法，制得的多糖亞硒酸酯在人體內(nèi)具有潛在的生物活性。
本發(fā)明的其它特征和優(yōu)點(diǎn)將在隨后的說明書中闡述，并且，部分 地從說明書中變得顯而易見，或者通過實(shí)施本發(fā)明而了解。本發(fā)明的 目的和其他優(yōu)點(diǎn)可通過在所寫的說明書、權(quán)利要求書、以及附圖中所 特別指出的結(jié)構(gòu)來(lái)實(shí)現(xiàn)和獲得。
下面通過附圖和實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案做進(jìn) 一 步的詳細(xì)描述。


附圖用來(lái)提供對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步理解，并且構(gòu)成說明書的 一部 分，與本發(fā)明的實(shí)施例一起用于解釋本發(fā)明，并不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的限
制。在附圖中
圖1為根據(jù)本發(fā)明多糖亞硒酸酯的制備方法中蘭州百合多糖及其 亞竭酸酯的紫外光i普?qǐng)D2為根據(jù)本發(fā)明多糖亞硒酸酯的制備方法中鎖陽(yáng)多糖及其亞硒 酸酯的紫外光譜圖3為根據(jù)本發(fā)明多糖亞硒酸酯的制備方法中蘭州百合多糖及其 亞硒酸酯的紅外光譜圖4為根據(jù)本發(fā)明多糖亞硒酸酯的制備方法中鎖陽(yáng)多糖及其亞竭 酸酯的紅外光譜圖。
結(jié)合附圖，本發(fā)明實(shí)施例中附圖標(biāo)記如下
Al-蘭州百合多糖；Bl-蘭州百合多糖亞硒酸酯；A2-鎖陽(yáng)多糖； B2-鎖陽(yáng)多糖亞硒酸酯。
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具體實(shí)施例方式
以下結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例進(jìn)行說明，應(yīng)當(dāng)理解，此處 所描述的優(yōu)選實(shí)施例僅用于說明和解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
本發(fā)明的基本思想是以蘭州百合多糖或鎖陽(yáng)多糖、即含有蘭州 百合或鎖陽(yáng)中藥活性成份的提取物為原料，在體積濃度為0.3 0.8%的 硝酸溶液中攪拌過夜，使其溶脹，得到蘭州百合多糖或鎖陽(yáng)多糖的硝 酸溶液，置于室溫條件下備用；將得到的蘭州百合多糖或鎖陽(yáng)多糖的 硝酸溶液、與亞竭酸鈉和氯化錫的混合物、在60 80。C的水溶液中攪 拌6 14小時(shí)后，冷卻至室溫，進(jìn)行過濾，并采用無(wú)水碳酸鈉、將過 濾得到的濾液的PH值調(diào)整到5 6,再進(jìn)行離心處理；將離心處理得 到的上清液進(jìn)行透析，用乙醇進(jìn)行沉淀，在室溫下靜止后，進(jìn)行二次 離心處理，將二次離心得到的下沉沉淀進(jìn)行冷凍干燥，得到純化的蘭 州百合多糖亞竭酸酯或鎖陽(yáng)多糖亞硒酸酯。
在圖l-圖4中，Al表示蘭州百合多糖，Bl表示蘭州百合多糖亞硒 酸酯；A2表示鎖陽(yáng)多糖，B2表示鎖陽(yáng)多糖亞竭酸酯。
由圖1和圖2對(duì)比可知，圖1中蘭州百合多糖亞硒酸酯B1和圖2中 鎖陽(yáng)多糖亞硒酸酯B2在 ^334nm處有吸收峰，與硒在5^335nm的吸收 峰的文獻(xiàn)資料基本吻合；在圖3中，340Ocm"左右的-OH吸收峰，2928 cm" 左右的C-H伸縮振動(dòng)峰、以及1400-1200 cm"的C-H變角振動(dòng)峰都是糖類的 化合物的特征吸收峰，由圖3和圖4對(duì)比可知，蘭州百合多糖亞硒酸酯除了 多糖母體特征吸收峰外，還增加了870.05cm"處的吸收峰，為亞硒酸酯中 Se二O的伸縮振動(dòng)，這是亞硒酸酯的特征吸收峰；同時(shí)，蘭州百合多糖亞石西 酸酯在2928cm"附近的羥基吸收峰有所降低，表明部分羥基被酯化，可見 多糖已形成亞硒酸酯；在圖4中，通過鎖陽(yáng)多糖和鎖陽(yáng)多糖亞硒酸酯的紅外光譜對(duì)比分析，可以看出鎖陽(yáng)多糖亞硒酸酯除了多糖母體特征吸收峰保
留外，還增力口 了 871.65 cm"處的吸收，為亞硒酸酯中SeK)的伸縮振動(dòng)，這 是亞硒酸酯的特征吸收峰，通過紫外光譜和紅外光譜充分說明鎖陽(yáng)多糖已 形成鎖陽(yáng)多糖亞硒酸酯。 實(shí)施例一
根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例，提供了一種多糖亞硒酸酯的制備方法。在本 實(shí)施例中，該多糖為蘭州百合多糖，該蘭州百合多糖亞硒酸酯的制備 方法包括
步驟l:溶脹處理將l.Og蘭州百合多糖加入100ml體積濃度為 0.3%竭酸溶液中，在室溫下攪拌過夜，使其充分溶脹，得到蘭州百合 多糖硝酸溶液，；故置在室溫下備用；
步驟2:酯化反應(yīng)在步驟1得到的蘭州百合多糖硝酸溶液中， 加入亞硒酸鈉和氯化錫的混合物2.145g,在60。C的水浴中攪拌反應(yīng)6 小時(shí)后，冷卻至室溫、在0.07Mpa下抽濾；
使用無(wú)水碳酸鈉、將抽濾后的濾液的PH值調(diào)至5后，進(jìn)行一次 離心處理，得到一次上清液；這里，亞硒酸鈉與氯化錫的質(zhì)量比例為 1:1.675;
步驟3:純化將步驟2得到的一次上清液，裝入截留量為 8000 12000道爾頓的透析袋中，流水透析36小時(shí)后，進(jìn)4亍蒸餾水透 析，直至透析袋中的液體加入抗壞血酸時(shí)紅色消失時(shí)，停止蒸餾水透 析，并在50。C、 0.07Mpa下，將透析袋內(nèi)的液體減壓濃縮至原體積的 1/20;
步驟4:在步驟3得到的濃縮液中加入乙醇，使乙醇的體積占濃 縮液和乙醇總體積的75%，在室溫下靜置20小時(shí)進(jìn)行醇沉，之后以溫度為15°C、 4000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速進(jìn)行二次離心處理；
將二次離心處理得到的下沉沉淀在-5(TC、 1Pa的條件下冷凍干燥
36小時(shí)，得到純化的蘭州百合多糖亞硒酸酯。
經(jīng)上述步驟1至步驟4，可以制得蘭州百合多糖亞硒酸酯，經(jīng)
ICP-AES檢測(cè)知，該蘭州百合多糖亞硒酸酯中的硒含量為2508
mg/kg。
在本實(shí)施例中，流水透析指使用自來(lái)水進(jìn)行透析，且水是流動(dòng)的， 就是說在透析過程中需不斷更換新水；蒸餾水透析指使用蒸餾水進(jìn)行 透析。
實(shí)施例二
在本實(shí)施例中，蘭州百合多糖亞竭酸酯的制備方法包括
步驟1:溶脹處理將l.Og蘭州百合多糖加入100ml體積濃度為 0.8%硝酸溶液中，在室溫下攪拌過夜，使其充分溶脹，得到蘭州百合 多糖硝酸溶液，放置在室溫下備用；
步驟2:酯化反應(yīng)在步驟1得到的蘭州百合多糖硝酸溶液中， 加入亞硒酸鈉和氯化錫的混合物2.748g，在70。C的水浴中攪拌反應(yīng) IO小時(shí)后，冷卻至室溫、在0.075Mpa下抽濾；
使用無(wú)水碳酸鈉、將抽濾后的濾液的PH值調(diào)至5.5后，進(jìn)行一 次離心處理，得到一次上清液；這里，亞硒酸鈉與氯化錫的質(zhì)量比例 為1:2.146;
步驟3:純化將步驟2得到的一次上清液，裝入截留量為 8000 12000道爾頓的透析袋中，流水透析44小時(shí)后，進(jìn)4亍蒸餾水透 析，直至透析袋中的液體加入抗壞血酸時(shí)紅色消失時(shí)，停止蒸餾水透 析，并在55。C、 0.075Mpa下，將透析袋內(nèi)的液體減壓濃縮至原體積的1/30;
步驟4:在步驟3得到的濃縮液中加入乙醇，使乙醇的體積占濃 縮液和乙醇總體積的77.5%,在室溫下靜置25小時(shí)進(jìn)行醇沉，之后 以溫度為18°C, 4200轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速進(jìn)行二次離心處理；
將二次離心處理得到的下沉沉淀在-55。C、 3Pa的條件下冷凍干燥 40小時(shí)，得到純化的蘭州百合多糖亞硒酸酯。
經(jīng)上述步驟1至步驟4，可以制得蘭州百合多糖亞硒酸酯，經(jīng) ICP-AES檢測(cè)知，該蘭州百合多糖亞硒酸酯中的硒含量為5617 mg/kg。
實(shí)施例三
在本實(shí)施例中，蘭州百合多糖亞竭酸酯的制備方法包括
步驟l:溶脹處理將l.Og蘭州百合多糖加入100ml體積濃度為 0.5%硝酸溶液中，在室溫下攪拌過夜，使其充分溶脹，得到蘭州百合 多糖硝酸溶液，；故置在室溫下備用；
步驟2:酯化反應(yīng)在步驟1得到的蘭州百合多糖硝酸溶液中， 加入亞硒酸鈉和氯化錫的混合物3.350g，在80。C的水浴中攪拌反應(yīng) 14小時(shí)后，冷卻至室溫、在0.08Mpa下^由濾；
使用無(wú)水碳酸鈉、將抽濾后的濾液的PH值調(diào)至6后，進(jìn)行一次 離心處理，得到一次上清液；這里，亞硒酸鈉與氯化錫的質(zhì)量比例為 1:2.616;
步驟3:純化將步驟2得到的一次上清液，裝入截留量為 8000 12000道爾頓的透析袋中，流水透才斤48小時(shí)后，進(jìn)4亍蒸餾水透 析，直至透析袋中的液體加入抗壞血酸時(shí)紅色消失時(shí)，停止蒸餾水透 析，并在60。C、 0.08Mpa下，將透析袋內(nèi)的液體減壓濃縮至原體積的
13步驟4:在步驟3得到的濃縮液中加入乙醇，使乙醇的體積占濃 縮液和乙醇總體積的80%,在室溫下靜置30小時(shí)進(jìn)行醇沉，之后以 溫度為20°C, 4500轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速進(jìn)行二次離心處理；
將二次離心處理得到的下沉沉淀在-60。C、 5Pa的條件下冷凍干燥 48小時(shí)，得到純化的蘭州百合多糖亞硒酸酯。
經(jīng)上述步驟1至步驟4，可以制得蘭州百合多糖亞硒酸酯，經(jīng) ICP-AES檢測(cè)知，該蘭州百合多糖亞硒酸酯中的硒含量為9431 mg/kg。
實(shí)施例4
在本實(shí)施例中，提供了一種多糖亞硒酸酯的制備方法，該多糖為 鎖陽(yáng)多糖，該鎖陽(yáng)多糖的制備方法包括
步驟1:溶脹處理將l.Og鎖陽(yáng)多糖加入100ml體積濃度為0.8% 硝酸溶液中，在室溫下攪拌過夜，使其充分溶脹，得到鎖陽(yáng)多糖硝酸 溶液，；故置在室溫下備用；
步驟2:酯化反應(yīng)在步驟1得到的鎖陽(yáng)多糖硝酸溶液中，加入 亞石西酸鈉和氯化錫的混合物2.145g,在60。C的水浴中〗覺拌反應(yīng)14小 時(shí)后，冷卻至室溫、在0.07Mpa下抽濾；
使用無(wú)水碳酸鈉、將抽濾后的濾液的PH值調(diào)至5后，進(jìn)行一次 離心處理，得到一次上清液；這里，亞硒酸鈉與氯化錫的質(zhì)量比例為 1:1.675;
步驟3:純化將步驟2得到的一次上清液，裝入截留量為 8000 12000道爾頓的透析袋中，流水透析36小時(shí)后，進(jìn)行蒸餾水透 析，直至透析袋中的液體加入抗壞血酸時(shí)紅色消失時(shí)，停止蒸餾水透析，并在50。C、 0.07Mpa下，將透析袋內(nèi)的液體減壓濃縮至原體積的 1/20;
步驟4:在步驟3得到的濃縮液中加入乙醇，使乙醇的體積占濃 縮液和乙醇總體積的75%，在室溫下靜置20小時(shí)進(jìn)行醇沉，之后以 溫度為15°C, 4000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速進(jìn)行二次離心處理；
將二次離心處理得到的下沉沉淀在-50。C、 2Pa的條件下冷凍干燥 36小時(shí)，得到純化的鎖陽(yáng)多糖亞石西酸酯。
經(jīng)上述步驟1至步驟4,可以制得鎖陽(yáng)多糖亞硒酸酯，經(jīng)ICP-AES 檢測(cè)知，該鎖陽(yáng)多糖亞硒酸酯中的硒含量為2678 mg/kg。
實(shí)施例5
在本實(shí)施例中，鎖陽(yáng)多^f唐亞石西酸酯的制備方法包4舌
步驟1:溶脹處理將l.Og鎖陽(yáng)多糖加入100ml體積濃度為0.5% 硝酸溶液中，在室溫下攪拌過夜，使其充分溶脹，得到鎖陽(yáng)多糖硝酸 溶液，；故置在室溫下備用；
步驟2:酯化反應(yīng)在步驟1得到的鎖陽(yáng)多糖硝酸溶液中，加入 亞硒酸鈉和氯化錫的混合物2.748g,在70。C的水浴中攪拌反應(yīng)10小 時(shí)后，冷卻至室溫、在0.075Mpa下抽濾；
使用無(wú)水碳酸鈉、將抽濾后的濾液的PH值調(diào)至5.5后，進(jìn)行一 次離心處理，得到一次上清液；這里，亞硒酸鈉與氯化錫的質(zhì)量比例 為1:2.146;
步驟3:純化將步驟2得到的一次上清液，裝入截留量為 8000 12000道爾頓的透析袋中，流水透析44小時(shí)后，進(jìn)行蒸餾水透 析，直至透析袋中的液體加入抗壞血酸時(shí)紅色消失時(shí)，停止蒸餾水透 析，并在55。C、 0.075Mpa下，將透析袋內(nèi)的液體減壓濃縮至原體積的1/30;
步驟4:在步驟3得到的濃縮液中加入乙醇，使乙醇的體積占濃 縮液和乙醇總體積的77.5%,在室溫下靜置25小時(shí)進(jìn)行醇沉，之后 以溫度為18°C, 4200轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速進(jìn)行二次離心處理；
將二次離心處理得到的下沉沉淀在-55。C、 4Pa的條件下冷凍干燥 40小時(shí)，得到純化的鎖陽(yáng)多糖亞硒酸酯。
經(jīng)上述步驟1至步驟4,可以制得鎖陽(yáng)多糖亞硒酸酯，經(jīng)ICP-AES 檢測(cè)知，該鎖陽(yáng)多糖亞硒酸酯中的硒含量為3761 mg/kg。
實(shí)施例6
在本實(shí)施例中，鎖陽(yáng)多糖亞硒酸酯的制備方法包括
步驟1:溶脹處理將l.Og鎖陽(yáng)多糖加入100ml體積濃度為0.3% 硝酸溶液中，在室溫下攪拌過夜，使其充分溶脹，得到鎖陽(yáng)多糖硝酸 溶液，放置在室溫下備用；
步驟2:酯化反應(yīng)在步驟1得到的鎖陽(yáng)多糖硝酸溶液中，加入 亞竭酸鈉和氯化錫的混合物3.350g,在60。C的水浴中攪拌反應(yīng)6小時(shí) 后，冷卻至室溫、在0.08Mpa下抽濾；
使用無(wú)水碳酸鈉、將抽濾后的濾液的PH值調(diào)至6后，進(jìn)行一次 離心處理，得到一次上清液；這里，亞硒酸鈉與氯化錫的質(zhì)量比例為 1:2.616;
步驟3:純化將步驟2得到的一次上清液，裝入截留量為 8000 12000道爾頓的透析袋中，流水透析48小時(shí)后，進(jìn)4亍蒸餾水透 析，直至透析袋中的液體加入抗壞血酸時(shí)紅色消失時(shí)，停止蒸餾水透 析，并在60。C、 0.08Mpa下，將透析袋內(nèi)的液體減壓濃縮至原體積的 1/40;
16步驟4:在步驟3得到的濃縮液中加入乙醇，使乙醇的體積占濃 縮液和乙醇總體積的75%，在室溫下靜置20小時(shí)進(jìn)行醇沉，之后以 溫度為20°C, 4500轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速進(jìn)行二次離心處理；
將二次離心處理得到的下沉沉淀在-6(TC、 5Pa的條件下冷凍干燥 48小時(shí)，得到純化的鎖陽(yáng)多糖亞硒酸酯。
經(jīng)上述步驟1至步驟4,可以制得鎖陽(yáng)多糖亞硒酸酯，經(jīng)ICP-AES ;險(xiǎn)測(cè)知，該鎖陽(yáng)多4唐亞石西酸酯中的石西含量為7859mg/kg。
本發(fā)明上述各實(shí)施例，以蘭州百合多糖或鎖陽(yáng)多糖為原料，利用 硝酸-氯化錫法，高效、快速的制備天然植物多糖亞硒酸酯；具體的， 以天然植物多糖蘭州百合或鎖陽(yáng)多糖為原料，首次在硝酸~氯化錫的 催化作用下，利用亞硒酸鈉對(duì)蘭州百合多糖或鎖陽(yáng)多糖進(jìn)行分子修 飾，合成了蘭州百合多糖亞硒酸酯或鎖陽(yáng)多糖亞貓酸酯。反應(yīng)條件可 控，重復(fù)性高，溶解性好，市場(chǎng)前景好；在分子結(jié)構(gòu)中引入亞硒酸 根，其中竭是正四價(jià)，竭是處于中間價(jià)態(tài)，既可以被氧化也可以被還 原，因此本發(fā)明的多糖亞硒酸酯在人體內(nèi)具有潛在的生物活性。
最后應(yīng)說明的是以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例而已，并不 用于限制本發(fā)明，盡管參照前述實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說明， 對(duì)于本領(lǐng)域的^支術(shù)人員來(lái)說，其依然可以對(duì)前述各實(shí)施例所記載的4支 術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對(duì)其中部分技術(shù)特征進(jìn)行等同替換。凡在本發(fā) 明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包 含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種多糖亞硒酸酯的制備方法，其特征在于，包括如下步驟a、按多糖重量∶硝酸體積＝1g∶100ml的配比關(guān)系，將所述多糖與對(duì)應(yīng)的硝酸溶液混合，在室溫下攪拌，使所述多糖溶脹，得到多糖硝酸溶液；b、在所述多糖硝酸溶液中，加入亞硒酸鈉和氯化錫，在溫度為60～80℃的水浴中攪拌，酯化反應(yīng)6～14小時(shí)后，冷卻至室溫，在壓強(qiáng)為0.07～0.08Mpa時(shí)進(jìn)行抽濾處理和一次離心處理，得到一次上清液；c、將所述一次上清液裝入透析袋中，依次進(jìn)行流水透析處理和蒸餾水透析處理后，減壓濃縮至原體積的1/40～1/20，得到濃縮液；d、對(duì)所述濃縮液進(jìn)行醇沉處理和二次離心處理，得到下沉沉淀；再對(duì)所述沉淀進(jìn)行冷凍干燥處理，得到所述多糖亞硒酸酯。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的多糖亞硒酸酯的制備方法，其特征在于， 所述多糖為蘭州百合多糖。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的多糖亞硒酸酯的制備方法，其特征在于， 所述多糖為鎖陽(yáng)多糖。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的多糖亞硒酸酯的制備方法，其特 征在于，在步驟a中，所述硝酸溶液的體積濃度為0.3 0.8%。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的多糖亞硒酸酯的制備方法，其特 征在于，在步驟b中，在所述抽濾處理和所述一次離心處理之間，還包括 以下步驟使用無(wú)水碳酸鈉，將所述抽濾處理所得濾液的PH值調(diào)至5~6。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的多糖亞硒酸酯的制備方法，其特 征在于，在步驟b中，所述亞硒酸鈉和所述氯化錫的重量比為1: 1.675 3.35。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的多糖亞硒酸酯的制備方法，其特 征在于，在步驟c中，當(dāng)在所述透析袋中加入抗壞血酸、所述透析袋中液 體的紅色消失時(shí)，所述蒸餾水透析處理完成。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的多糖亞硒酸酯的制備方法，其特征在于，在步驟c中，所述流水透析處理的時(shí)間為36~48小時(shí)；所述減壓濃縮處理的溫度為50~60°C、壓強(qiáng)條件為0.07 0.08Mpa; 所述透析袋的截留分子量為8000 12000道爾頓。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的多糖亞硒酸酯的制備方法，其特 征在于，在步驟d中，所述醇沉處理具體包括在所述濃縮液中加入乙醇，在室溫下靜置20 30小時(shí)；其中，所述乙 醇的體積占所述濃縮液和所述乙醇總體積的75~80%。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的多糖亞硒酸酯的制備方法，其 特征在于，在步驟b和d中，所述一次和二次離心處理的溫度為15 20°C、 轉(zhuǎn)速為4000 4500轉(zhuǎn)/分鐘，所述冷凍干燥處理的溫度為-60。C ~-50°C、壓 強(qiáng)為l-5Pa、時(shí)間為36 48小時(shí)。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種多糖亞硒酸酯的制備方法，包括步驟將多糖與硝酸溶液混合，在室溫下攪拌，使所述多糖溶脹；在得到的多糖硝酸溶液中，加入亞硒酸鈉和氯化錫，在溫度為60～80℃的水浴中攪拌反應(yīng)6～14小時(shí)后，冷卻至室溫，在壓強(qiáng)為0.07～0.08MPa時(shí)進(jìn)行抽濾處理和一次離心處理；將得到的一次上清液裝入透析袋中，依次進(jìn)行流水透析處理和蒸餾水透析處理后，減壓濃縮至原體積的1/40～1/20；對(duì)得到的濃縮液進(jìn)行醇沉處理和二次離心處理，得到下沉沉淀；再對(duì)所述沉淀進(jìn)行冷凍干燥處理，得到所述多糖亞硒酸酯。本發(fā)明所述方法，具有反應(yīng)條件可控和重復(fù)性高的優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)C08B37/00GK101560267SQ20091014357
公開日2009年10月21日 申請(qǐng)日期2009年6月4日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月4日
發(fā)明者劉忠旺, 建 姚, 繼 張, 張興晶, 張玉媛, 楊玉萍, 梁俊玉, 王云普, 王風(fēng)霞, 舒何晶, 馬君義 申請(qǐng)人:西北師范大學(xué)