專利名稱：：一種沙蒿多糖磷酸酯的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種多糖磷酸酯的制備方法，尤其是涉及一種沙蒿多糖磷酸酯的制備方法。
背景技術(shù)：
：糖類物質(zhì)是自然界存在的一大類具有廣譜化學(xué)結(jié)構(gòu)和生物學(xué)功能的有機(jī)化合物，在體內(nèi)具有重要的和復(fù)雜的生理作用活性。研究發(fā)現(xiàn)，多糖所具備的生物活性與其化學(xué)結(jié)構(gòu)有極為密切的關(guān)系。影響多糖生物學(xué)活性的結(jié)構(gòu)因素包括分子量、所帶的官能團(tuán)、多糖的主鏈性質(zhì)(糖單元組成和糖苷鍵類型)、支鏈的類型、單糖連接方式以及多糖分子的高級結(jié)構(gòu)如空間構(gòu)象等多糖中的官能團(tuán)的種類或有無對其生物活性有極大的影響。因此，為了提高多糖的生物活性，多糖的分子修飾和結(jié)構(gòu)改造具有重要意義。沙蒿多糖具有高粘度、高保水性、非水溶性、分散性好、成膜性能穩(wěn)定粘著力強(qiáng)等特點(diǎn)，因此作為穩(wěn)定劑，增稠劑，成膜劑等應(yīng)用于食品工業(yè)，化學(xué)工業(yè)，石油工業(yè)等領(lǐng)域，在作為減肥食品，糖尿病患者的食品而被應(yīng)用。專利ZL200510002228.5于2006年8月2日授權(quán)了一種天然生物多糖，可用于治療化學(xué)性糖尿病，降低血糖，顯著減緩糖尿病引起的體重下降，并能減少糖尿病對肝、腎的損傷，降低血液中谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、尿素氮的含量。專利CN1073181A于1993年6月16日公開了一種多糖磷酸酯(即淀粉磷酸酯或魔芋精粉磷酸酯)的制備方法，即將淀粉或魔芋與濃度50%以上的磷酸鹽在10016(TC下反應(yīng)制備多糖磷酸酯，此法制備的磷酸酯酯化取代度約為0.02。專利ZL91108384.7于1994年12月28日授權(quán)了一種制備4-去甲基表鬼臼毒葡糖苷的磷酸酯衍生物的制備方法，即表鬼臼毒甲醛糖苷懸浮于千燥乙腈加熱溶解，冷卻至室溫加入N,N-二異丙基乙基胺，然后冷卻至(TC迅速加入磷酰氯或二苯基氯代磷酸酯，之后慢慢升至室溫反應(yīng)63小時(shí)處理得到4-去甲基表鬼臼毒葡糖苷的磷酸酯衍生物。文獻(xiàn)"香菇多糖磷酸化修飾工藝條件的研究"(《食品與發(fā)酵工業(yè)》，2007，33(12)，6467)2007年在《食品與發(fā)酵工業(yè)》第12期報(bào)道了香菇多糖磷酸酯化的方法，即用混合磷酸鹽試劑和香菇多糖在一定溫度下進(jìn)行磷酸化反應(yīng)，此法隨著溫度的升高，導(dǎo)致多糖結(jié)構(gòu)嚴(yán)重破壞，糖鏈斷裂，分子量減小。以上專利或文獻(xiàn)中提到的磷酸化方法存在著反應(yīng)時(shí)間長，磷含量普遍低等缺陷；且多用于淀粉磷酸酯的制備，其反應(yīng)副產(chǎn)物多，對多糖結(jié)構(gòu)破壞嚴(yán)重，反應(yīng)過程復(fù)雜等缺點(diǎn)，無法達(dá)到增加或改變活性的目的，因此，采用不同的方法制備不同取代度多糖磷酸酯是十分必要的。目前國內(nèi)外專利均未涉及以沙蒿多糖為原料的磷酸化多糖的制備方法。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種沙蒿多糖磷酸酯的制備方法；該方法是以天然植物多糖-沙蒿多糖為原料，采用三氯氧磷對沙蒿多糖進(jìn)行磷酸化，反應(yīng)時(shí)間短，磷含量高，產(chǎn)品得率高，反應(yīng)副產(chǎn)物少，對多糖結(jié)構(gòu)破壞小。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明一種沙蒿多糖磷酸酯的制備方法，包括如下步驟，1)將沙蒿多糖放入反應(yīng)器中，加入無水甲酰胺和無水吡啶，攪拌均勻，得到懸浮液A;2)將三氯氧磷滴加到無水吡啶中，得到液體B;3)將步驟2)得到的液體B全部滴加到懸浮液A中反應(yīng)，得反應(yīng)液C;4)將反應(yīng)液C用氫氧化鈉調(diào)節(jié)至pH二7，裝入截流量為800014000Da的透析袋中，通自來水透析，再用去離子水透析；將透析袋內(nèi)溶液減壓濃縮，在濃縮液中加入乙醇，室溫下靜置，離心，收集下層沉淀物，冷凍干燥，得到沙蒿多糖磷酸酯。進(jìn)一步地，所述步驟1)的具體步驟如下稱取0.0020.005g的純度在90%以上的沙蒿多糖放入反應(yīng)器中，加入無水甲酰胺1025ml，室溫下攪拌2535min之后加入1025ml無水吡啶，攪拌510min，得懸濁液A。進(jìn)一步地，所述步驟2)的具體步驟如下取1020ml無水枇啶置于反應(yīng)器中，滴加三氯氧磷，通氮?dú)獗Ｗo(hù)，攪拌，冰鹽浴下反應(yīng)3060min，得到液體B;所述三氯氧磷與吡啶的體積比為20:110:1。進(jìn)一步地，所述步驟3)的具體步驟如下冰鹽浴下將步驟2)得到的液體B全部滴加到懸濁液A中，控制滴速為0.5ml/minlml/min，在06(TC下攪拌反應(yīng)l5h，得物質(zhì)C。進(jìn)一步地，所述步驟4)的具體步驟如下將物質(zhì)C用0。C的12mol/ml的氫氧化鈉中和至pH=7，裝入截流分子量為800012000道爾頓的透析袋中，自來水透析2436小時(shí)，去離子水透析3648小時(shí)；透析袋內(nèi)液體在60。C、0.060.08MPa下減壓濃縮至原體積的1/301/50，在濃縮液中加入乙醇，所述乙醇含量占總體積的7080%，沉淀，在-60-50。C、125Pa下的條件下冷凍干燥2436小時(shí)，得到沙蒿多糖磷酸酯。下表給出了本發(fā)明的實(shí)施例和用磷酸鹽的對比例的數(shù)據(jù)比較<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>本發(fā)明是以天然植物多糖-沙蒿多糖為原料，采用三氯氧磷對沙蒿多糖進(jìn)行磷酸化，反應(yīng)時(shí)間短，磷含量高，產(chǎn)品得率高，反應(yīng)副產(chǎn)物少，對多糖結(jié)構(gòu)破壞小。下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的具體實(shí)施方式作進(jìn)一步詳細(xì)的說明。圖1為沙蒿多糖及其磷酸酯的紅外光譜。具體實(shí)施例方式為了更好地理解本發(fā)明，下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步闡明本發(fā)明的內(nèi)容，但本發(fā)明的內(nèi)容不限于下面的實(shí)施例。實(shí)施例l一種沙蒿多糖磷酸酯的制備方法，包括如下步驟1)稱取0.002g的純度在90%以上的沙蒿多糖放入反應(yīng)器中，加入無水甲酰胺10ml，室溫下攪拌25min之后加入10ml無水吡啶，攪拌5min得懸濁液A;2)量取20ml無水吡啶加入反應(yīng)器中，滴加三氯氧磷，通氮?dú)獗Ｗo(hù)，通過磁力攪拌器進(jìn)行攪拌，冰鹽浴下反應(yīng)30min，得到液體B;所述三氯氧磷與吡啶的體積比為20:1;3):冰鹽浴下將步驟2)得到的液體B全部滴加到懸濁液A中，控制滴速為0.5ml/min，之后在(TC下攪拌反應(yīng)5h，得物質(zhì)C;4):將物質(zhì)C用Ot:的lraol/ml的氫氧化鈉中和至pH-7，裝入截流分子量為800012000道爾頓的透析袋中，自來水透析36小時(shí)，去離子水透析36小時(shí)；透析袋內(nèi)液體在6(TC、0.06MPa下減壓濃縮至原體積的1/30，在濃縮液中加入乙醇，所述乙醇含量占總體積的80%，沉淀，在-6(TC、1Pa下的條件下冷凍干燥24小時(shí)，得到沙蒿多糖磷酸酯，磷含量為5.51%。參見圖1所示，為沙蒿多糖及其磷酸酯的紅外光譜。通過沙蒿多糖及其磷酸酯的紅外光譜對比我們可以看出沙蒿多糖磷酸酯除了多糖母體特征吸收峰外,還增加了1267.91cm—工處是P-0的伸縮振動(dòng)；904.4cm—工處為P-0-C伸縮振動(dòng)，這些是磷酸鍵的特征吸收峰。同時(shí)，沙蒿多糖磷酸酯在2931cm1、1053cn^附近的羥基吸收峰有所降低，表明部分羥基已被酯化，以上充分說明多糖已形成磷酸酯。實(shí)施例2一種沙蒿多糖磷酸酯的制備方法，包括如下步驟1)稱取0.003g的純度在90%以上的沙蒿多糖放入反應(yīng)器中，加入無水甲酰胺15ml，室溫下攪拌30min之后加入15ml無水吡啶，攪拌8min得懸濁液A;2)量取20ml無水吡啶加入反應(yīng)器中，滴加三氯氧磷，通氮?dú)獗Ｗo(hù)，通過磁力攪拌器進(jìn)行攪拌，冰鹽浴下反應(yīng)40min，得到液體B。所述三氯氧磷與吡啶的體積比為20:1.5;3)冰鹽浴下將步驟2)得到的液體B全部滴加到懸濁液A中，控制滴速為0.8ml/min，之后在6(TC下攪拌反應(yīng)4h，得物質(zhì)C。4):將物質(zhì)C用0。C的2mol/ml的氫氧化鈉中和至pH=7，裝入截流量為800012000道爾頓的透析袋中，自來水透析24小時(shí)，去離子水透析48小時(shí)。透析袋內(nèi)液體在6(TC、0.07MPa下減壓濃縮至原體積1/40，在濃縮液中加入乙醇，所述乙醇含量占總體積的75%，沉淀，在-55t、10Pa下的條件下冷凍干燥30小時(shí)，得到沙蒿多糖磷酸酯，磷含量為8.67%。實(shí)施例3一種沙蒿多糖磷酸酯的制備方法，包括如下步驟1)稱取0.005g的純度在90%以上的沙蒿多糖放入反應(yīng)器中，加入無水甲酰胺25ml，室溫下攪拌35min之后加入25ml無水吡啶，攪拌10min得懸濁液A;2)量取20ml無水吡啶加入反應(yīng)器中，滴加三氯氧磷，通氮?dú)獗Ｗo(hù)，通過磁力攪拌器進(jìn)行攪拌，冰鹽浴下反應(yīng)60min，得到液體B。所述三氯氧磷與吡啶的體積比為20:2;3)冰鹽浴下將步驟2得到的液體B全部滴加到懸濁液A中，控制滴速為1ml/min，之后在4(TC下攪拌反應(yīng)3h，得物質(zhì)C;4)將物質(zhì)C用Ot:的2.5mol/ml的氫氧化鈉中和至pH二7，裝入截流分子量為800012000道爾頓的透析袋中，流水透析30小時(shí)，去離子水透析42小時(shí)。透析袋內(nèi)液體在6(TC、0.08MPa下減壓濃縮至原體積的1/50，在濃縮液中加入乙醇，所述乙醇含量占總體積的70%，沉淀，在-5(TC、25Pa下的條件下冷凍干燥36小時(shí)，得到沙蒿多糖磷酸酯，磷含量為11.54%。比較例本發(fā)明一種沙蒿多糖磷酸酯的制備方法，包括如下步驟1)稱取0.005g沙蒿多糖加入10ml蒸餾水于5(TC下充分溶解，得溶解液A;2)向溶解液A中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為5%三聚磷酸鈉和2%三偏磷酸鈉的混合試劑30ml于8(TC下反應(yīng)12h，得反應(yīng)液B;3)將反應(yīng)液B裝入截流分子量為800012000道爾頓的透析袋中，流水透析24小時(shí)，去離子水透析48小時(shí)；透析袋內(nèi)液體在6(TC、0.08MPa下減壓濃縮至原體積的1/50，在濃縮液中加入乙醇，所述乙醇含量占總體積的70%，沉淀，在-5(TC、25Pa下的條件下冷凍干燥36小時(shí)，得到沙蒿多糖磷酸酯，磷含量為2.54%。顯然，本發(fā)明的上述實(shí)施例僅僅是為清楚地說明本發(fā)明所作的舉例，而并非是對本發(fā)明的實(shí)施方式的限定。對于所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在上述說明的基礎(chǔ)上還可以做出其它不同形式的變化或變動(dòng)。這里無法對所有的實(shí)施方式予以窮舉。凡是屬于本發(fā)明的技術(shù)方案所引伸出的顯而易見的變化或變動(dòng)仍處于本發(fā)明的保護(hù)范圍之列。權(quán)利要求1、一種沙蒿多糖磷酸酯的制備方法，其特征在于，包括如下步驟1)將沙蒿多糖放入反應(yīng)器中，加入無水甲酰胺和無水吡啶，攪拌均勻，得到懸浮液A；2)將三氯氧磷滴加到無水吡啶中，得到液體B；3)將步驟2)得到的液體B全部滴加到懸浮液A中反應(yīng)，得反應(yīng)液C；4)將反應(yīng)液C用氫氧化鈉調(diào)節(jié)至pH＝7，裝入截流量為8000～14000Da的透析袋中，通自來水透析，再用去離子水透析；將透析袋內(nèi)溶液減壓濃縮，在濃縮液中加入乙醇，室溫下靜置，離心，收集下層沉淀物，冷凍干燥，得到沙蒿多糖磷酸酯。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種沙蒿多糖磷酸酯的制備方法，其特征在于所述步驟l)的具體步驟如下稱取0.0020.005§的純度在90%以上的沙蒿多糖放入反應(yīng)器中，加入無水甲酰胺1025ml，室溫下攪拌2535min之后加入1025ml無水吡啶，攪拌510min，得懸濁液A。3、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種沙蒿多糖磷酸酯的制備方法，其特征在于所述步驟2)的具體步驟如下取1020ml無水吡啶置于反應(yīng)器中，滴加三氯氧磷，通氮?dú)獗Ｗo(hù)，攪拌，冰鹽浴下反應(yīng)3060min，得到液體B;所述三氯氧磷與吡啶的體積比為20:110:1。4、根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種沙蒿多糖磷酸酯的制備方法，其特征在于所述步驟3)的具體步驟如下冰鹽浴下將步驟2)得到的液體B全部滴加到懸濁液A中，控制滴速為0.5ml/minlml/min，在06(TC下攪拌反應(yīng)15h，得物質(zhì)C。5、根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種沙蒿多糖磷酸酯的制備方法，其特征在于所述步驟4)的具體步驟如下將物質(zhì)C用0。C的12mol/ml的氫氧化鈉中和至pH二7，裝入截流分子量為800012000道爾頓的透析袋中，自流水透析2436小時(shí)，去離子水透析3648小時(shí)；透析袋內(nèi)液體在60。C、0.060.08MPa下減壓濃縮至原體積的1/301/50，在濃縮液中加入乙醇，所述乙醇含量占總體積的7080%，沉淀，在-60-50。C、125Pa下的條件下冷凍干燥2436小時(shí)，得到沙蒿多糖磷酸酯。全文摘要一種沙蒿多糖磷酸酯的制備方法，包括如下步驟1)將沙蒿多糖放入反應(yīng)器中，加入無水甲酰胺和無水吡啶，攪拌均勻，得到懸浮液A；2)將三氯氧磷滴加到吡啶中，得到液體B；3)將步驟2)得到的液體B全部滴加到懸浮液A中反應(yīng)，得反應(yīng)液C；4)將反應(yīng)液C用氫氧化鈉調(diào)節(jié)至pH＝7，裝入截流量為8000～14000Da的透析袋中，通自來水透析，再用去離子水透析；將透析袋內(nèi)溶液減壓濃縮，在濃縮液中加入乙醇，室溫下靜置，離心，收集下層沉淀物，冷凍干燥，得到沙蒿多糖磷酸酯。本發(fā)明是以天然植物多糖-沙蒿多糖為原料，采用三氯氧磷對沙蒿多糖進(jìn)行磷酸化，反應(yīng)時(shí)間短，磷含量高，產(chǎn)品得率高，反應(yīng)副產(chǎn)物少，對多糖結(jié)構(gòu)破壞小。文檔編號C08B37/00GK101619109SQ20091016138公開日2010年1月6日申請日期2009年8月12日優(yōu)先權(quán)日2009年8月12日發(fā)明者吳秀琴,健姚,繼張,楊云云,梁俊玉,王云普,王俊龍,王小芳,趙保堂,馬君義申請人:西北師范大學(xué)