專利名稱：一種驢皮膠原的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于膠原的制備技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種驢皮膠原的制備方法。
背景技術(shù)：
膠原是動(dòng)物體內(nèi)含量最多、分布最廣的一類蛋白質(zhì)家族，廣泛存在于從低等脊椎 動(dòng)物到哺乳動(dòng)物的一切組織中；具有其他合成材料無法比擬的生物相容性、可生物降解性 以及生物活性?，F(xiàn)已至少發(fā)現(xiàn)了 30余種膠原鏈的編碼基因，可以形成16種以上的膠原分 子。根據(jù)它們?cè)隗w內(nèi)的分布和功能特點(diǎn)，目前將膠原分成間質(zhì)膠原、基底膜膠原和細(xì)胞外周 膠原，間質(zhì)型膠原分子占整個(gè)機(jī)體膠原的絕大部分，包括I型、II型、III型膠原分子，其主要 分布于皮膚、肌腱等組織；基底膜膠原通常是指IV型膠原.其主要分布于基底膜；細(xì)胞周膠 原通常中指V型膠原，在結(jié)締組織中大量存在。近年來，養(yǎng)驢慢慢受到畜牧業(yè)人士的關(guān)注，因?yàn)?，不僅驢肉本身具有較高的經(jīng)濟(jì)使 用價(jià)值，驢皮還具有很高的藥用價(jià)值，具有天然的補(bǔ)血、止血作用，是制作阿膠的主要原料。驢皮生皮料是極其復(fù)雜的物質(zhì)，基本上是由蛋白質(zhì)和非蛋白質(zhì)兩大組分組成，其 中，蛋白質(zhì)占鮮皮的30% 35%。新剝下來的生皮pH值為6. 8 7. 8，在存放過程中隨皮料 的逐漸變質(zhì)，PH值亦隨之變化。組成生皮的蛋白質(zhì)種類很多，皮料蛋白質(zhì)分為纖維蛋白(結(jié) 構(gòu)蛋白)、非纖維蛋白(非結(jié)構(gòu)蛋白)和酶等。纖維蛋白由膠原、角朊、彈性硬朊組成。膠原約 占生皮總量(除皮下層)的29%，約占全部蛋白質(zhì)總量的88%。目前，驢皮的應(yīng)用主要是作為熬制阿膠的重要原料。根據(jù)中國藥典2005年版一部 的記載，阿膠的制法如下
將驢皮(馬科動(dòng)物驢EquusasinusL.的干燥皮或鮮皮)浸泡去毛，切塊洗凈，分次水煎， 小組過，合并濾液，濃縮(可分別加入適量的黃酒、冰糖和豆油)至稠膏狀，冷凝，切塊，晾干， 即得。上述簡(jiǎn)單的熬制方法，沒有針對(duì)驢皮中所含膠原成分的特性進(jìn)行選擇性提取和精 制，使阿膠中除含膠原外，還含有部分水解產(chǎn)生的賴氨酸、精氨酸、組氨酸等多種氨基酸，以 及鈣、硫等成分；并且阿膠的水溶性差，只能烊化服用，也不能作為化妝品等使用，其使用受 到較大限制。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的主要目的是針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的對(duì)驢皮的應(yīng)用僅限于熬制阿膠， 而阿膠中成分復(fù)雜、水溶性差，除作為口服藥物外其它應(yīng)用受到較大限制等問題，提供一種 驢皮膠原的制備方法，以驢皮為原料，通過特定的提取和精制方法，得到水溶性好的驢皮膠 原，不僅保留生物活性，與人肌體、皮膚同源性及相容性，并且具有生物可降解性和低抗原 性等特點(diǎn)，能被水以任性比例稀釋，可用于制備外科植入物和組織工程醫(yī)療產(chǎn)品，開發(fā)醫(yī) 藥、醫(yī)學(xué)試劑、及保健品等。為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下一種驢皮膠原的制備方法，包括下述主要步驟 (1)脫毛、脫脂
以檢驗(yàn)、檢疫合格的鮮驢皮為原料，采用常規(guī)方法脫毛、脫脂后，再用水洗至中性，0°C 以下冷凍保存?zhèn)溆茫?br> 由于膠原在常溫及高溫條件下容易變性失活，因而需要冷凍保存。(2)碎皮、堿液浸泡
取上述步驟(1)處理后備用的驢皮解凍，碎皮成20-40目的顆粒，加入pH為7. 5-9. 5 (可優(yōu)選為7. 5-9. 0)的氫氧化鈉溶液，其加入量按照驢皮顆粒質(zhì)量氫氧化鈉溶液體積 =lg (8-12)ml計(jì)算，浸泡軟化48-96h ；用去離子水沖洗至pH為6. 0-7. 0，得到中性驢皮顆 粒；
發(fā)明人通過大量試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，由于驢皮的表皮結(jié)構(gòu)緊密，不容易軟化，需要先將其碎成一 定細(xì)度的小顆粒，才有利于后續(xù)的軟化處理，發(fā)明人通過大量試驗(yàn)證實(shí)，當(dāng)顆粒粗于20目 時(shí)，由于顆粒太粗，加入堿液后浸泡處理超過96h也難以全部軟化；理論上，碎皮的顆粒越 細(xì)越有利于軟化，但由于鮮驢皮的理化特性，又很難將其碎成超過40目的更細(xì)的顆粒，因 此，綜合考慮，以20-40目為好；
進(jìn)一步的，將碎至20-40目的驢皮顆粒放入適宜pH值的堿液中進(jìn)行浸泡處理，可軟化 膠質(zhì)，有利于提高后續(xù)步驟酶解的效率，但PH值過低或過高都不利于軟化效果，大量試驗(yàn) 證實(shí)，以pH為7. 5-9. 5的氫氧化鈉溶液較好；而浸泡時(shí)間的選擇，則與驢皮顆粒的細(xì)度及堿 液的pH值等密切相關(guān)，互相影響，在驢皮顆粒為20-40目、pH為7. 5-9. 5范圍內(nèi)，浸泡時(shí)間 通常在48-96h內(nèi)可獲得理想的軟化效果；
通過本步驟特定條件的碎皮、堿液浸泡處理，可有效軟化驢皮中的膠質(zhì)，為后續(xù)酶解等 步驟有效提取驢皮膠原提供必要的保證。(3)低溫酶解
取上述步驟(2)處理后的中性驢皮顆粒，加入pH為4. 3-6. 5 (可優(yōu)選為4. 5-6. 0)的 鹽酸溶液，其加入量按照中性驢皮顆粒質(zhì)量鹽酸溶液體積=lg: (45-50)ml計(jì)算，再加入 8-10UI (UI是酶活力國際單位，指在特定條件下，1分鐘內(nèi)轉(zhuǎn)化1微摩爾底物，或者底物中 1微摩爾有關(guān)基團(tuán)所需的酶量；在胃蛋白酶的活力測(cè)定中是指在37°C 士0. 5°C，每分鐘能 催化水解血紅蛋白生成lymol酪氨酸所需的胃蛋白酶量)的胃蛋白酶，低溫(10°C以下)放 置3-4d，攪拌和靜置間隔處理，攪拌的總時(shí)間與靜置的總時(shí)間比約為1: (1. 5-2. 5)，得到含 有驢皮膠原的初液；
本步驟通過在鹽酸溶液中、胃蛋白酶作用下低溫酶解處理，使驢皮中的膠原充分溶解 到溶液中，有利于后續(xù)步驟有效的提取驢皮膠原。(4)提取、純化
將上述步驟(3)得到的初液離心，取得上清液，加入NaCl，充分?jǐn)嚢?，使驢皮膠原從溶 液中析出、沉淀，靜置8-16小時(shí)，取沉淀，用去離子水洗滌1-2次，得到酸溶性驢皮膠原沉 淀；
本步驟通過離心處理，將酶解后溶于溶液中的膠原提取出來，并進(jìn)一步通過鹽析處理， 使驢皮膠原從溶液中析出沉淀，而其它雜質(zhì)則保留在溶液中被除去，從而達(dá)到純化驢皮膠 原的目的；但該步驟得到的是酸溶性的膠原，不宜直接與皮膚接觸，發(fā)明人通過大量試驗(yàn)研究發(fā) 現(xiàn)，通過特定的改性手段，可使之變?yōu)樗苄缘哪z原，從而滿足多種應(yīng)用的需要。(5)改性
將上述步驟(4)得到的酸溶性驢皮膠原沉淀用0. 2-1. 0M (可優(yōu)選為0. 4-0. 6M)的醋 酸溶液溶解，其用量按照酸溶性驢皮膠原沉淀質(zhì)量醋酸溶液體積=lg: (45-50)ml倍量計(jì) 算；測(cè)定蛋白質(zhì)含量，加入丙酮(C3H60)作為改性劑，其加入量按照蛋白質(zhì)質(zhì)量丙酮體積 =lg (10-15)ml計(jì)算，在4-8°C下，用氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液pH為10-12，反應(yīng)5_9h，再用HC1調(diào) 節(jié)pH為4. 0-4. 2，析出沉淀，靜置8-16小時(shí)；取沉淀，甩干，用pH為4. 0-4. 2的鹽酸溶液洗 滌1-3次，得到改性后的驢皮膠原產(chǎn)品，即可。本步驟通過在堿性條件下、以丙酮作為改性劑對(duì)驢皮膠原進(jìn)行改性，可有效除去 酸溶性驢皮膠原中的端肽，成為水溶性的改性驢皮膠原，為I型活性膠原；由于僅僅只是去 除了端肽，蛋白的三股螺旋結(jié)構(gòu)并沒有被破壞，故仍然能保留其原有的生物活性。同時(shí)，本 步驟中將改性靜置后的沉淀進(jìn)行甩干處理也是非常必要的，可有效除去溶解于醋酸溶液中 的非纖維蛋白等雜質(zhì)，以提高產(chǎn)品中改性驢皮膠原的純度。發(fā)明人通過大量對(duì)比試驗(yàn)，從眾多理論上可用作蛋白改性劑的物質(zhì)中進(jìn)行篩選， 發(fā)現(xiàn)以丙酮對(duì)前述步驟(4)所得酸溶性驢皮膠原進(jìn)行改性，可獲得理想的水溶性膠原，并且 還具有一些其它改性劑所不能兼具的特點(diǎn)，如生物活性、與人肌體、皮膚的相容性、低抗原 性、生物可降解性等。本發(fā)明中用到的各種溶液，在未作特別說明時(shí)，均是指水溶液。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是
本發(fā)明方法以鮮驢皮為原料，通過特定組合的工藝步驟及參數(shù)條件進(jìn)行提取和精制處 理得到酸溶性膠原，再采用丙酮在堿性條件下對(duì)酸溶性膠原進(jìn)行改性，得到水溶性的驢皮 膠原產(chǎn)品，該水溶性的驢皮膠原具有下述特點(diǎn)
(1)改性后的膠原的三股螺旋結(jié)構(gòu)并沒有被破壞，仍然保留其原有的生物活性；
(2)產(chǎn)品中主要成分為分子量約300KD左右的I型活性膠原，水溶性好，能被水以任意 比例稀釋；
(3)來源于脊椎動(dòng)物的膠原與人肌體、皮膚具有良好的同源性和相容性，其分子量和結(jié) 構(gòu)相似；涂于皮膚后可快速溶入表皮；
(4)該膠原的變性溫度約為36.5°C，經(jīng)人肌體、皮膚吸收后，在人體正常體溫和體內(nèi)膠 原酶的作用下，可生物降解為小分子多肽、單肽，又可在其他酶的作用下繼續(xù)分解成二十余 種氨基酸，易被吸收，繼續(xù)發(fā)揮營養(yǎng)作用；
(5)通過測(cè)定，與改性前有端肽的膠原相比，改性后無端肽的膠原與膠原抗原的結(jié)合力 差，具有低抗原性。因此，這種保留了生物活性、且具有水溶性好、與人肌體、皮膚同源性及相容性好、 生物可降解性和低抗原性等特點(diǎn)的活性驢皮膠原產(chǎn)品，可用于制備外科植入物和組織工程 醫(yī)療產(chǎn)品，開發(fā)醫(yī)藥、醫(yī)學(xué)試劑、及保健品等。


圖1是本發(fā)明實(shí)施例1中步驟(4)所得的酸溶性驢皮膠原、步驟(5)所得的水溶性 膠原分別與膠原抗體的結(jié)合曲線圖；圖1中，a是步驟(4)所得的酸溶性驢皮膠原與膠原抗 體的結(jié)合曲線，b是步驟(5)所得的水溶性膠原與膠原抗體的結(jié)合曲線。圖2是本發(fā)明實(shí)施例1所得膠原隨溫度變化的變性曲線圖。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明的上述發(fā)明內(nèi)容作進(jìn)一步的詳細(xì)描述。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于下述實(shí)施例。在不脫離本發(fā)明上 述技術(shù)思想情況下，根據(jù)本領(lǐng)域普通技術(shù)知識(shí)和慣用手段，做出各種替換和變更，均應(yīng)包括 在本發(fā)明的范圍內(nèi)。實(shí)施例1
本實(shí)施例驢皮膠原通過包括下述步驟的方法制備
(1)脫毛、脫脂
以檢驗(yàn)、檢疫合格的鮮驢皮為原料，脫毛、脫脂后，用水洗至中性，o°c以下冷凍保存?zhèn)?br> 用；
(2)碎皮、堿液浸泡
取上述步驟(1)處理后備用的驢皮解凍，碎皮成20-40目的顆粒，取500g驢皮顆粒，加 入pH為7. 5的氫氧化鈉溶液6000ml，浸泡軟化96h ；用去離子水沖洗至pH約為6. 0，得到 中性驢皮顆粒；
(3)低溫酶解
取上述步驟(2)處理后的中性驢皮顆粒200g，加入pH為6. 5的鹽酸溶液9000ml，再加 入8UI的胃蛋白酶，10°C以下低溫放置3d，攪拌和靜置間隔處理，攪拌的總時(shí)間與靜置的總 時(shí)間比為1:2. 5，得到含有驢皮膠原的初液；
(4)提取、純化
將上述步驟(3)得到的初液離心，取得上清液，加入NaCl，充分?jǐn)嚢?，使驢皮膠原從溶 液中析出、沉淀，靜置8小時(shí)，取沉淀，用去離子水洗滌1次，得到酸溶性驢皮膠原沉淀；
(5)改性
取上述步驟(4)得到的酸溶性驢皮膠原沉淀10g，用1. 0M的醋酸溶液400ml溶解，測(cè)定 蛋白質(zhì)含量(為6. 9mg/ml)，加入丙酮約27600ml作為改性劑，在約4°C，用氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶 液pH為10. 0，反應(yīng)9h，再用HC1調(diào)節(jié)pH為4. 0，析出沉淀，靜置16小時(shí)；取沉淀，甩干，用 pH為4. 0的鹽酸溶液洗滌3次，得到改性后的驢皮膠原產(chǎn)品，即可。發(fā)明人委托四川醫(yī)療器械生物材料和制品檢驗(yàn)中心對(duì)上述實(shí)施例得到的改性驢 皮膠原產(chǎn)品進(jìn)行檢驗(yàn)，檢驗(yàn)報(bào)告顯示在電泳圖中有a、0、Y的對(duì)應(yīng)色帶，分子量分別為 100KD、200KD 和 300KD。進(jìn)一步的水溶性、抗原性、與人肌體、皮膚的相容性等測(cè)試顯示該產(chǎn)品能被水以 任意比例稀釋，水溶性好；與膠原抗原的結(jié)合力差，在膠原與膠原抗體的結(jié)合曲線圖(如圖 1所示)中幾乎為一直線，具有低抗原性；涂于人肌體、皮膚后迅速溶入表皮，與人肌體、皮膚 相容性好；在36. 5°C左右變性降解而粘度降低(如圖2所示)。
實(shí)施例2
本實(shí)施例驢皮膠原通過包括下述步驟的方法制備
(1)脫毛、脫脂
以檢驗(yàn)、檢疫合格的鮮驢皮為原料，脫毛、脫脂后，用水洗至中性，o°c以下冷凍保存?zhèn)?br> 用；
(2)碎皮、堿液浸泡
取上述步驟(1)處理后備用的驢皮解凍，碎皮成20-40目的顆粒，取500g驢皮顆粒，加 入pH為9. 5的氫氧化鈉溶液4000ml，浸泡軟化48h ；用去離子水沖洗至pH約為7. 0，得到 中性驢皮顆粒；
(3)低溫酶解
取上述步驟(2)處理后的中性驢皮顆粒200g，加入pH為4. 3的鹽酸溶液10000ml，再 加入10UI的胃蛋白酶，10°C以下低溫放置4d，攪拌和靜置間隔處理，攪拌的總時(shí)間與靜置 的總時(shí)間比為1:1. 5，得到含有驢皮膠原的初液；
(4)提取、純化
將上述步驟(3)得到的初液離心，取得上清液，加入NaCl，充分?jǐn)嚢瑁贵H皮膠原從溶 液中析出、沉淀，靜置16小時(shí)，取沉淀，用去離子水洗滌2次，得到酸溶性驢皮膠原沉淀；
(5)改性
取上述步驟(4)得到的酸溶性驢皮膠原沉淀10g，用0. 2M的醋酸溶液500ml溶解，測(cè)定 蛋白質(zhì)含量(為4. lmg/ml)，加入丙酮約30750ml作為改性劑，在約8°C，用氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶 液pH為12. 0，反應(yīng)5h，再用HC1調(diào)節(jié)pH為4. 2，析出沉淀，靜置8小時(shí)；取沉淀，甩干，用pH 為4. 2的鹽酸溶液洗滌2次，得到改性后的驢皮膠原產(chǎn)品，即可。實(shí)施例3
本實(shí)施例驢皮膠原通過包括下述步驟的方法制備
(1)脫毛、脫脂
以檢驗(yàn)、檢疫合格的鮮驢皮為原料，脫毛、脫脂后，用水洗至中性，o°c以下冷凍保存?zhèn)?br> 用；
(2)碎皮、堿液浸泡
取上述步驟(1)處理后備用的驢皮解凍，碎皮成20-40目的顆粒，取500g驢皮顆粒，加 入pH為8. 0的氫氧化鈉溶液5000ml，浸泡軟化72h ；用去離子水沖洗至pH約為6. 5，得到 中性驢皮顆粒；
(3)低溫酶解
取上述步驟(2)處理后的中性驢皮顆粒200g，加入pH為4. 5的鹽酸溶液9500ml，再加 入8UI的胃蛋白酶，10°C以下低溫放置3d，攪拌和靜置間隔處理，攪拌的總時(shí)間與靜置的總 時(shí)間比為1:2，得到含有驢皮膠原的初液；
(4)提取、純化
將上述步驟(3)得到的初液離心，取得上清液，加入NaCl，充分?jǐn)嚢?，使驢皮膠原從溶 液中析出、沉淀，靜置12小時(shí)，取沉淀，用去離子水洗滌2次，得到酸溶性驢皮膠原沉淀；
(5)改性
取上述步驟(4)得到的酸溶性驢皮膠原沉淀10g，用0. 4M的醋酸溶液460ml溶解，測(cè)定蛋白質(zhì)含量(為7. 5mg/ml)，加入丙酮約41400ml作為改性劑，在約6°C，用氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶 液pH為11. 0，反應(yīng)6h，再用HC1調(diào)節(jié)pH為4. 2，析出沉淀，靜置12小時(shí)；取沉淀，甩干，用 PH為4. 2的鹽酸溶液洗滌2次，得到改性后的驢皮膠原產(chǎn)品，即可。實(shí)施例4
本實(shí)施例驢皮膠原通過包括下述步驟的方法制備
(1)脫毛、脫脂
以檢驗(yàn)、檢疫合格的鮮驢皮為原料，脫毛、脫脂后，用水洗至中性，o°c以下冷凍保存?zhèn)?br> 用；
(2)碎皮、堿液浸泡
取上述步驟(1)處理后備用的驢皮解凍，碎皮成20-40目的顆粒，取500g驢皮顆粒，加 入pH為9. 0的氫氧化鈉溶液5500ml，浸泡軟化60h ；用去離子水沖洗至pH約為6. 8，得到 中性驢皮顆粒；
(3)低溫酶解
取上述步驟(2)處理后的中性驢皮顆粒200g，加入pH為6.0的鹽酸溶液9800ml，再加 入9UI的胃蛋白酶，10°C以下低溫放置4d，攪拌和靜置間隔處理，攪拌的總時(shí)間與靜置的總 時(shí)間比為1:2，得到含有驢皮膠原的初液；
(4)提取、純化
將上述步驟(3)得到的初液離心，取得上清液，加入NaCl，充分?jǐn)嚢?，使驢皮膠原從溶 液中析出、沉淀，靜置12小時(shí)，取沉淀，用去離子水洗滌1次，得到酸溶性驢皮膠原沉淀；
(5)改性
取上述步驟(4)得到的酸溶性驢皮膠原沉淀10g，用0. 6M的醋酸溶液480ml溶解，測(cè)定 蛋白質(zhì)含量(為5. 2mg/ml)，加入丙酮約25000ml作為改性劑，在約4°C，用氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶 液pH為11. 0，反應(yīng)7h，再用HC1調(diào)節(jié)pH為4. 1，析出沉淀，靜置14小時(shí)；取沉淀，甩干，用 pH為4. 1的鹽酸溶液洗滌1次，得到改性后的驢皮膠原產(chǎn)品，即可。發(fā)明人委托同一單位對(duì)上述各實(shí)施例得到的改性驢皮膠原產(chǎn)品進(jìn)行電泳測(cè)試、及 水溶性、抗原性、與人肌體、皮膚的相容性等測(cè)試，結(jié)果均與實(shí)施例1所得的原產(chǎn)品的測(cè)試 結(jié)果相似。
權(quán)利要求
一種驢皮膠原的制備方法，包括下述步驟(1)脫毛、脫脂以檢驗(yàn)、檢疫合格的鮮驢皮為原料，脫毛、脫脂后，用水洗至中性，0℃以下冷凍保存?zhèn)溆茫?2)碎皮、堿液浸泡取上述步驟(1)處理后備用的驢皮解凍，碎皮成20-40目的顆粒，加入pH為7.5-9.5的氫氧化鈉溶液，其加入量按照驢皮顆粒質(zhì)量:氫氧化鈉溶液體積=1g:(8-12)ml 計(jì)算，浸泡軟化48-96h；用去離子水沖洗至pH為6.0-7.0，得到中性驢皮顆粒；(3)低溫酶解取上述步驟(2)處理后的中性驢皮顆粒，加入pH為4.3-6.5的鹽酸溶液，其加入量按照中性驢皮顆粒質(zhì)量:鹽酸溶液體積=1g:(45-50)ml計(jì)算，再加入8-10UI的胃蛋白酶，10℃以下低溫放置3-4d，攪拌和靜置間隔處理，攪拌的總時(shí)間與靜置的總時(shí)間比為1:(1.5-2.5)，得到含有驢皮膠原的初液；(4)提取、純化將上述步驟(3)得到的初液離心，取得上清液，加入NaCl，充分?jǐn)嚢?，使驢皮膠原從溶液中析出、沉淀，靜置8-16小時(shí)，取沉淀，用去離子水洗滌1-2次，得到酸溶性驢皮膠原沉淀；(5)改性將上述步驟(4)得到的酸溶性驢皮膠原沉淀用0.2-1.0M的醋酸溶液溶解，其用量按照酸溶性驢皮膠原沉淀質(zhì)量:醋酸溶液體積=1g:(45-50)ml倍量計(jì)算；測(cè)定蛋白質(zhì)含量，加入丙酮作為改性劑，其加入量按照蛋白質(zhì)質(zhì)量:丙酮體積=1g:(10-15)ml計(jì)算；在4-8℃下，用氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液 pH為10.0-12.0，反應(yīng)5-9h，再用HCl調(diào)節(jié)pH為4.0-4.2，析出沉淀，靜置8-16小時(shí)；取沉淀，甩干，用pH為4.0-4.2的鹽酸溶液洗滌1-3次，得到改性后的驢皮膠原產(chǎn)品，即可。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述的步驟(2)中加入的氫氧化鈉溶液pH為7. 5-9. 0。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述的步驟(3)中加入的鹽酸溶液pH為4. 5-6. 0。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述的步驟(5)中，用0. 4-0. 6M的醋酸溶液溶解酸溶性驢皮膠原沉淀。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種驢皮膠原的制備方法，以鮮驢皮為原料，通過脫毛、脫脂，碎皮、堿液浸泡，低溫酶解，提取、純化，改性等步驟，得到改性后的驢皮膠原產(chǎn)品。通過該方法得到的驢皮膠原產(chǎn)品，不僅保留了三股螺旋結(jié)構(gòu)而具有生物活性，與人肌體、皮膚同源性及相容性，并且具有生物可降解性和低抗原性等特點(diǎn)，能被水以任性比例稀釋，可用于制備外科植入物和組織工程醫(yī)療產(chǎn)品，開發(fā)醫(yī)藥、醫(yī)學(xué)試劑、及保健品等。
文檔編號(hào)C08H1/06GK101851339SQ20101017632
公開日2010年10月6日 申請(qǐng)日期2010年5月19日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月19日
發(fā)明者廖知恒, 李國英, 楊信誠, 陳麗, 雷小林 申請(qǐng)人:成都新際生物活性膠原開發(fā)有限公司